EA043588B1 - A MEDICINE CONTAINING RECOMBINANT MISTLETE LECTINS FOR THE TREATMENT OF BRAIN TUMORS - Google Patents
A MEDICINE CONTAINING RECOMBINANT MISTLETE LECTINS FOR THE TREATMENT OF BRAIN TUMORS Download PDFInfo
- Publication number
- EA043588B1 EA043588B1 EA201891722 EA043588B1 EA 043588 B1 EA043588 B1 EA 043588B1 EA 201891722 EA201891722 EA 201891722 EA 043588 B1 EA043588 B1 EA 043588B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- mistletoe
- cells
- brain tumor
- treatment
- lectins
- Prior art date
Links
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 title claims description 67
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 title claims description 67
- 239000002523 lectin Substances 0.000 title claims description 67
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 title claims description 32
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 claims description 81
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 claims description 81
- 241000221012 Viscum Species 0.000 claims description 81
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 24
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 16
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 claims description 12
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 10
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 8
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 201000005746 Pituitary adenoma Diseases 0.000 claims 2
- 206010061538 Pituitary tumour benign Diseases 0.000 claims 2
- 208000021310 pituitary gland adenoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000030266 primary brain neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 21
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 108010045913 viscum album peptide Proteins 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 7
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- 241000221013 Viscum album Species 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- DMOXQGWDIIINKU-ZBXWUJIGSA-N 76822-96-3 Chemical compound N([C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DMOXQGWDIIINKU-ZBXWUJIGSA-N 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 108010001657 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily K Proteins 0.000 description 3
- 102000000812 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily K Human genes 0.000 description 3
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 108010049518 viscotoxin Proteins 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000191291 Abies alba Species 0.000 description 2
- 235000004507 Abies alba Nutrition 0.000 description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 2
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002095 anti-migrative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 208000024055 brain glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 201000011609 brain glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 2
- 201000007983 brain glioma Diseases 0.000 description 2
- 201000007980 brain meningioma Diseases 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 2
- 108010022050 mistletoe lectin I Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-fluorophenyl)methyl]piperazine Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1CN1CCNCC1 OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014081 Abies amabilis Nutrition 0.000 description 1
- 235000017894 Abies grandis Nutrition 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 206010060999 Benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000004139 Choroid Plexus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000009025 Endorphins Human genes 0.000 description 1
- 108010049140 Endorphins Proteins 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000761839 Homo sapiens Breast cancer metastasis-suppressor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000761835 Homo sapiens Breast cancer metastasis-suppressor 1-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101001027925 Homo sapiens Metastasis-associated protein MTA1 Proteins 0.000 description 1
- 101001028019 Homo sapiens Metastasis-associated protein MTA2 Proteins 0.000 description 1
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102100037511 Metastasis-associated protein MTA2 Human genes 0.000 description 1
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 101000582927 Photorhabdus laumondii subsp. laumondii (strain DSM 15139 / CIP 105565 / TT01) Lectin A Proteins 0.000 description 1
- 108010020221 Phytolacca americana lectin B Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 108010005173 SERPIN-B5 Proteins 0.000 description 1
- 102100030333 Serpin B5 Human genes 0.000 description 1
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101150042088 UL16 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000030883 malignant astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 206010061311 nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010073131 oligoastrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002046 pro-migratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 108010038196 saccharide-binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229940074545 sodium dihydrogen phosphate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Description
Изобретение относится к лекарственному средству и/или фармацевтической композиции, содержащей рекомбинантные лектины омелы для лечения опухолей головного мозга, в частности, первичных опухолей головного мозга, глиом, глиобластом, менингиом и аденом гипофиза, и их использованию.The invention relates to a medicinal product and/or pharmaceutical composition containing recombinant mistletoe lectins for the treatment of brain tumors, in particular primary brain tumors, gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas, and their use.
Первичные опухоли головного мозга, такие как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза, происходят из нейроэпителия, ганглиозных клеток, мозговых оболочек, эпиневрия, общей глии или нейроглии и гипофиза или эктопических внутричерепных тканей (герминативно-клеточные опухоли или опухоли мальформаций), и их причины связаны главным образом с генетическими и гормональными факторами, онкогенными вирусами и экзогенными канцерогенами. Речь идет о локализованных в головном мозге, истинных опухолях центральной нервной системы (ЦНС) различной дифференциации, а также их подвидов, таких как, в частности: астроцитарные опухоли, олигодендроглиома, глиома смешанного типа (олигоастроцитома), эпендимома, опухоли Хороидного сплетения, ретинобластома.Primary brain tumors, such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas, originate from neuroepithelium, ganglion cells, meninges, epineurium, common glia or neuroglia and pituitary gland or ectopic intracranial tissues (germ cell tumors or malformation tumors), and their the causes are associated mainly with genetic and hormonal factors, oncogenic viruses and exogenous carcinogens. We are talking about true tumors of the central nervous system (CNS) of various differentiation localized in the brain, as well as their subtypes, such as, in particular: astrocytic tumors, oligodendroglioma, mixed type glioma (oligoastrocytoma), ependymoma, choroid plexus tumors, retinoblastoma.
Классификации ВОЗ опухолей по степени соответствует степени злокачественности: I степень (доброкачественная опухоль/доброкачественное новообразование), II степень (полудоброкачественная опухоль; период послеоперационной выживаемости составляет 3-5 лет), III степень (полузлокачественная, период послеоперационной выживаемости составляет 2-3 года), IV степень (злокачественная; период послеоперационной выживаемости составляет 6-15 месяцев); частота возникновения: доля от общего числа или первичных опухолей головного мозга во всех случаях онкологических заболеваний составляет: 7-9% (Kleihues, P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W., Rorke, L. B., Reifenberger, G., Burger, P. C., and Cavenee, W.K. (2002). The WHO classification of tumors of the nervous system. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 3, 215-225).The WHO classification of tumors by degree corresponds to the degree of malignancy: degree I (benign tumor/benign neoplasm), degree II (semi-benign tumor; postoperative survival period is 3-5 years), degree III (semi-malignant, postoperative survival period is 2-3 years), IV degree (malignant; postoperative survival period is 6-15 months); incidence: the proportion of total or primary brain tumors in all cases of cancer is: 7-9% (Kleihues, P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W., Rorke, L. B., Reifenberger, G., Burger, P. C., and Cavenee, W. K. (2002). The WHO classification of tumors of the nervous system. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 3, 215-225).
Глиома представляет собой гистологический диагноз, характеризуемый (гигантоцитными) (олиго-) астроцитомами, олигодендроглиомами, глиомами смешанного типа, глиобластомами, и дифференцируется в зависимости от развития, такого как, в частности, изоморфное, анапластическое, поликистозное.Glioma is a histological diagnosis characterized by (giantocyte) (oligo-) astrocytomas, oligodendrogliomas, mixed type gliomas, glioblastomas, and is differentiated depending on the development, such as isomorphic, anaplastic, polycystic, among others.
Кроме того, можно прогнозировать подгруппы глиом на основании потери гетерозиготности (Smith, J.S., and Jenkins, R. B. (2000) Genetic alterations in adult diffuse glioma: occurrence, significance, and prognostic implications. Front Biosci. 5, 213-231), которая приводит к потере генов-супрессоров опухолей (Tews, B., Felsberg, J., Hartmann, C., Kunitz, A., Hahn, M., Toedt, G., Neben, K., Hummerich, L., von Deimling, A., Reifenberger, G., and Lichter, P. (2006) Identification of novel oligodendroglioma-associated candidate tumor suppressor genes in 1p36 and 19q13 using microarray-based expression profiling. Int J Cancer. 119, 792-800).In addition, it is possible to predict subgroups of gliomas based on loss of heterozygosity (Smith, J.S., and Jenkins, R.B. (2000) Genetic alterations in adult diffuse glioma: occurrence, significance, and prognostic implications. Front Biosci. 5, 213-231), which leads to to the loss of tumor suppressor genes (Tews, B., Felsberg, J., Hartmann, C., Kunitz, A., Hahn, M., Toedt, G., Neben, K., Hummerich, L., von Deimling, A., Reifenberger, G., and Lichter, P. (2006) Identification of novel oligodendroglioma-associated candidate tumor suppressor genes at 1p36 and 19q13 using microarray-based expression profiling (Int J Cancer. 119, 792-800).
В частности, глиобластомы (ГБМ) относятся к числу наиболее злокачественных опухолей головного мозга. Медианная выживаемость пациентов с ГБМ, даже при лучших терапевтических условиях, составляет лишь около 12-15 месяцев. Естественные киллеры (ЕК) клетки как компоненты врожденной иммунной системы играют важную роль в уничтожении раковых клеток. Клетки ГБМ разрабатывают стратегии, позволяющие им избегать этого уничтожения и заключающиеся в том, что они содействуют снижению экспрессии белков, необходимых для взаимодействия с ЕК-клетками, так называемых белков Danger/Stranger главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), последовательности родственной полипептиду класса I ГКГС (MIC)-A и -B или UL16-связывающих белков (ULBP) 1, 2, 3, более специфично с помощью опосредуемой TGF-β иммуносупрессии. С этой целью сверхэкспрессия TGF-β является существенной особенностью ГБМ, и у пациентов с глиомой могут быть обнаружены высокие уровни концентрации TGF-β в цереброспинальной жидкости, что коррелирует с развитием опухоли (Kjellman C, Olofsson SP, Hansson O et al.: Expression of TGF-beta isoforms, TGF-beta receptors, and SMAD molecules at different stages of human glioma. Int J Cancer 2000; 89: 251-258). Кроме того, TGF-β ответственен за снижение экспрессии ГКГС, усиление дифференциации неактивированных клеток среди регуляторых Tклеток, блокирование созревания дендритных клеток и индуцирование некроза клеток касательно ЕК- и T-клеток (Eisele G, Wischhusen J, Mittelbronn M et al.: TGF-beta and metalloproteinases differentially suppress NKG2D ligand surface expression on malignant glioma cells. Brain 2006; 129: 2416-2425, Platten M, Wick W, Weller M: Malignant glioma biology: role for TGF-beta in growth, motility, angiogenesis, and immune escape. Microsc Res Tech2001; 52: 401-410).In particular, glioblastomas (GBM) are among the most malignant brain tumors. The median survival of patients with GBM, even under the best therapeutic conditions, is only about 12-15 months. Natural killer (NK) cells, as components of the innate immune system, play an important role in the destruction of cancer cells. GBM cells develop strategies to avoid this destruction by reducing the expression of proteins required for interaction with NK cells, the so-called Danger/Stranger proteins of the major histocompatibility complex (MHC), a sequence related to the MHC class I polypeptide ( MIC)-A and -B or UL16-binding proteins (ULBP) 1, 2, 3, more specifically by TGF-β-mediated immunosuppression. To this end, overexpression of TGF-β is a significant feature of GBM, and patients with glioma may exhibit high levels of TGF-β concentration in the cerebrospinal fluid, which correlates with tumor development (Kjellman C, Olofsson SP, Hansson O et al.: Expression of TGF-beta isoforms, TGF-beta receptors, and SMAD molecules at different stages of human glioma. Int J Cancer 2000; 89: 251-258). In addition, TGF-β is responsible for reducing MHC expression, enhancing the differentiation of non-activated cells among regulatory T cells, blocking the maturation of dendritic cells and inducing cell necrosis of NK and T cells (Eisele G, Wischhusen J, Mittelbronn M et al.: TGF-β beta and metalloproteinases differentially suppress NKG2D ligand surface expression on malignant glioma cells. Brain 2006;129:2416–2425, Platten M, Wick W, Weller M: Malignant glioma biology: role for TGF-beta in growth, motility, angiogenesis, and immunity escape. Microsc Res Tech2001;52:401-410).
Поэтому существует большая потребность в предоставлении лекарственного средства для лечения и профилактики опухолей головного мозга, в частности, первичных опухолей головного мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза.Therefore, there is a great need to provide a medicament for the treatment and prevention of brain tumors, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas.
Экстракты омелы использовали в терапевтических целях на протяжении многих веков. В частности, с разной степенью успеха препараты омелы использовали при лечении рака (Bocci V 1993 J Biol Regulators and Homeostatic Agents 7(1): 1-6; Gabius H-J, Gabius S, Joshi S et al. 1993 Planta Med 60: 2-7; Gabius HJ & Gabius S 1994 PZ 139: 9-16; Ganguly C & Das S 1994 Chemotherapy 40: 272-278, Hajto T, Hostanska K, Gabius H_J 1989 Cancer Res 49: 4803-4808, Hajto T, Hostanska K, Frei K et al. 1990 Cancer Res. 50: 33223326). Оказалось, что терапевтические эффекты опосредуются, в частности, с помощью так называемых лектинов омелы (вискумин, агглютинин омелы белой (Viscum album Agglutinine, VAA)). При этом в дополнение к цитотоксическому эффекту лектинам омелы также приписывают неспецифическую иммунную стимуляцию, положительные эффекты которой используются для лечения онкологических пациентов. Различные исследования с лектинами омелы in vitro (Hajto et al., 1990 (см. выше); Mannel D N, Beck- 1 043588 er H, Gundt A et al. 1991 Cancer Immunol Immunother 33: 177-182; Beuth J, Ko K L, Tunggal L et al. 1993 Drug Res 43: 166-169) и in vivo (Hajto T 1986 Oncology 43 suppl 1: 51-65; Hajto et al., 1989 (см. выше), Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1991 In Vivo 5: 29-32; Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1992 J Clin Invest 70: 658-661), а также клинические исследования (Beuth et al., 1992 (см. выше)) продемонстрировали повышенное высвобождение воспалительных цитокинов (ФНО-альфа, IL-1, IL-6) и активацию клеточных компонентов иммунной системы (TH-клетки, ЕК-клетки, B- и T-лимфоциты) (Braedel-Ruoff S: Immunomodulatory effects of Viscum album extracts on natural killer cells: review of clinical trials. Forsch Komplementmed 2010; 17: 63-73, Gren A: Effects of Iscador preparations on the reactivity of mouse immune system. Neuro Endocrinol Lett 2009; 30: 530-534, Lee CH, Kim JK, Kim HY et al.: Immunomodulating effects of Korean mistletoe lectin in vitro and in vivo. Int Immunopharmacol 2009; 9: 1555-1561, Nikolai G, Friedl P, Werner M et al: Effect of a mistletoe extract (Iscador QuFrF) on viability and migratory behavior of human peripheral CD4+ and CD8+ T lymphocytes in three-dimensional collagen lattices. In Vitro Cell Dev Biol Anim 1997; 33: 710-716).Mistletoe extracts have been used for therapeutic purposes for many centuries. In particular, mistletoe preparations have been used in the treatment of cancer with varying degrees of success (Bocci V 1993 J Biol Regulators and Homeostatic Agents 7(1): 1-6; Gabius H-J, Gabius S, Joshi S et al. 1993 Planta Med 60: 2- 7; Gabius HJ & Gabius S 1994 PZ 139: 9-16; Ganguly C & Das S 1994 Chemotherapy 40: 272-278, Hajto T, Hostanska K, Gabius H_J 1989 Cancer Res 49: 4803-4808, Hajto T, Hostanska K , Frei K et al 1990 Cancer Res 50: 33223326). It turned out that the therapeutic effects are mediated, in particular, by the so-called mistletoe lectins (viscumin, white mistletoe agglutinin (Viscum album Agglutinine, VAA)). However, in addition to the cytotoxic effect, mistletoe lectins are also credited with non-specific immune stimulation, the positive effects of which are used to treat cancer patients. Various in vitro studies with mistletoe lectins (Hajto et al., 1990 (see above); Mannel D N, Beck- 1 043588 er H, Gundt A et al. 1991 Cancer Immunol Immunother 33: 177-182; Beuth J, Ko K L , Tunggal L et al. 1993 Drug Res 43: 166-169) and in vivo (Hajto T 1986 Oncology 43 suppl 1: 51-65; Hajto et al., 1989 (see above), Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1991 In Vivo 5: 29-32; Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1992 J Clin Invest 70: 658-661), as well as clinical studies (Beuth et al., 1992 (see above )) demonstrated increased release of inflammatory cytokines (TNF-alpha, IL-1, IL-6) and activation of cellular components of the immune system (TH cells, NK cells, B and T lymphocytes) (Bredel-Ruoff S: Immunomodulatory effects of Viscum album extracts on natural killer cells: review of clinical trials. Forsch Komplementmed 2010; 17: 63-73, Gren A: Effects of Iscador preparations on the reactivity of mouse immune system. Neuro Endocrinol Lett 2009; 30: 530-534, Lee CH, Kim JK, Kim HY et al.: Immunomodulating effects of Korean mistletoe lectin in vitro and in vivo. Int Immunopharmacol 2009; 9: 1555-1561, Nikolai G, Friedl P, Werner M et al: Effect of a mistletoe extract (Iscador QuFrF) on viability and migratory behavior of human peripheral CD4+ and CD8+ T lymphocytes in three-dimensional collagen lattices. In Vitro Cell Dev Biol Anim 1997; 33: 710-716).
Благодаря анализу экстракта омелы до настоящего времени можно было определить три лектина омелы (ML-I, ML-II, ML-III) с различными молекулярными массами и специфичностью связывания сахаров. Была возможность продемонстрировать, что иммуностимулирующий эффект экстракта омелы обусловлен ML-I. Лектин ML-I состоит из двух гликозилированных цепей A и B (MLA или MLB). Цепь A отвечает за ферментативную дезактивацию рибосом (Endo Y, Tsurugi K & Franz H 1988 FEBS Lett 231: 378-380), а цепь B участвует в связывании углеводов. Обе цепи связаны друг с другом дисульфидными связями. Полученные в результате мономеры лектинов омелы могут собираться в димеры с образованием нековалентных связей.Through the analysis of mistletoe extract, it has so far been possible to identify three mistletoe lectins (ML-I, ML-II, ML-III) with different molecular weights and sugar binding specificities. It was possible to demonstrate that the immunostimulatory effect of mistletoe extract is due to ML-I. Lectin ML-I consists of two glycosylated chains A and B (MLA or MLB). Chain A is responsible for enzymatic deactivation of ribosomes (Endo Y, Tsurugi K & Franz H 1988 FEBS Lett 231: 378-380), and chain B is involved in carbohydrate binding. Both chains are linked to each other by disulfide bonds. The resulting mistletoe lectin monomers can assemble into dimers to form non-covalent bonds.
Возможно получать биологически активный лектин омелы предпочтительно рекомбинантным способом. EP 0751221 описывает получение полипептидов лектина омелы в чистом виде как структурно однородного вещества, при этом можно получить происходящие из нуклеотидных последовательностей гена рекомбинантные высокочистые одинарные цепи (цепь A, цепь B) лектина омелы, которые могут быть заново ассоциированы, и таким образом получить рекомбинантный голопротеин лектина омелы, который является однородным в отношениии его белковой химии, ферментативном и структурном отношениях, так называемый авискумин (Aviscuminum). В соответствии с EP 0751221, рекомбинантный полипептид лектина омелы является пригодным как в качестве голопротеина, так и в качестве частичной цепи и в виде субфрагментов в терапевтических целях и в соответствии с данным изобретением.It is possible to obtain the biologically active mistletoe lectin, preferably by a recombinant method. EP 0751221 describes the production of mistletoe lectin polypeptides in pure form as a structurally homogeneous substance, whereby it is possible to obtain recombinant high-purity single chains (chain A, chain B) of mistletoe lectin, derived from the nucleotide sequences of the gene, which can be re-associated, and thus obtain a recombinant holoprotein mistletoe lectin, which is homogeneous in its protein chemistry, enzymatic and structural relationships, the so-called Aviscuminum. According to EP 0751221, the recombinant mistletoe lectin polypeptide is useful both as a holoprotein and as a partial chain and in the form of subfragments for therapeutic purposes and in accordance with the present invention.
Кроме того, в WO 2012104355 A1 описан противовирусный эффект рекомбинантных лектинов омелы. В WO 2012136857 A1 раскрыто лечение меланомы, в частности, злокачественной меланомы также в виде метастатической опухоли, с помощью рекомбинантных лектинов омелы.In addition, WO 2012104355 A1 describes the antiviral effect of recombinant mistletoe lectins. WO 2012136857 A1 discloses the treatment of melanoma, in particular malignant melanoma also in the form of a metastatic tumor, using recombinant mistletoe lectins.
До сих пор рекомбинантные лектины омелы использовали предпочтительно при лечении онкологических заболеваний. Тем не менее, применение рекомбинантных лектинов омелы при лечении опухоли головного мозга, в частности, первичных опухолей головного мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза, не описано в известном уровне техники.Until now, recombinant mistletoe lectins have been used preferentially in the treatment of cancer. However, the use of recombinant mistletoe lectins in the treatment of brain tumors, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas, has not been described in the prior art.
В известном уровне техники Podlech et al. (Podlech O, Harter PN, Mittelbronn M et al.: Fermented mistletoe extract as a multimodal antitumoral agent in gliomas. Evid Based Complement Alternat Med 2012: 501796) описывает использование ISCADOR -полученного путем ферментации экстракта омелы - в качестве ингибитора роста для ГБМ и делает вывод о противоопухолевой пригодности ISCADOR в лечении ГБМ.In the prior art, Podlech et al. (Podlech O, Harter PN, Mittelbronn M et al.: Fermented mistletoe extract as a multimodal antitumoral agent in gliomas. Evid Based Complement Alternat Med 2012: 501796) describes the use of ISCADOR - a fermented mistletoe extract - as a growth inhibitor for GBM and concludes the antitumor utility of ISCADOR in the treatment of GBM.
Lenartz (Lenartz et al., Immunoprotective Activity of the Galactoside-Specific lectin from misletoe after Tumor Destructive Theraly in Glioma Patients, Anticancer Research 16: 3799-3802 (1996)) сообщает об экстракте омелы (ML-1) для лечения пациентов с глиомой, причем экстракты омелы обладают специфическим гликозилированием.Lenartz et al., Immunoprotective Activity of the Galactoside-Specific lectin from misletoe after Tumor Destructive Theraly in Glioma Patients, Anticancer Research 16: 3799-3802 (1996) reports mistletoe extract (ML-1) for the treatment of patients with glioma , and mistletoe extracts have specific glycosylation.
Лектины омелы растительного происхождения, описанные в известном уровне техники, -будь то полученные из произведенных потем ферментации или из произведенных не путем ферментации экстрактов омелы -неоднородны (Soler MH, Stoeva S, Schwamborn C et al. 1996 FEBS Letter 399: 153-157, Soler HS, Stoeva S, Voelter W 1998 Biochem Biophys Res Comm 246: 596-601) и отличаются один от другого неоднородно в отношении их эффекта (EP 1051495 B1), а также сами по себе не эффективны в качестве активного вещества или в качестве иммуномодулятора. Поэтому лектин омелы, полученный, например, из омелы корейской (Viscum album colaratum), следует в действительности причислять к белкам RIP II, однако они имеют значительные структурные отличия по структуре и конформации от обсуждаемых в данном документе рекомбинантных лектинов омелы (Kang TB, Song SK, Yoon TJ et al. 2007 J Biochem Mol Biol 40(6): 959-965). Особенно невыгодным является то, что невозможно точно регулировать дозу и что лектины омелы, полученные из растительных экстрактов, полученных путем ферментации или не путем ферментации, имеют примеси. К тому же лектины омелы, полученные из растительных экстрактов, полученных путем ферментации или не путем ферментации, имеют различия в гликозилировании, которое влияет на эффективность (особенно кинетику и т.д.). Кроме того, при приготовлении каждой новой партии экстракта омелы получают продукт, не идентичный предыдущей партии, с иным содержанием составляющих его веществ, включая гликозилированные лектины омелы.Plant-derived mistletoe lectins described in the prior art, whether derived from fermented or non-fermented mistletoe extracts, are heterogeneous (Soler MH, Stoeva S, Schwamborn C et al. 1996 FEBS Letter 399: 153-157, Soler HS, Stoeva S, Voelter W 1998 Biochem Biophys Res Comm 246: 596-601) and differ from each other heterogeneously with respect to their effect (EP 1051495 B1), and are also not effective in themselves as an active substance or as an immunomodulator . Therefore, mistletoe lectin derived from, for example, Korean mistletoe (Viscum album colaratum) should in fact be classified as RIP II proteins, but they have significant structural differences in structure and conformation from the recombinant mistletoe lectins discussed herein (Kang TB, Song SK , Yoon TJ et al 2007 J Biochem Mol Biol 40(6): 959-965). Particularly disadvantageous is that it is impossible to precisely regulate the dose and that mistletoe lectins obtained from plant extracts, whether fermented or not, have impurities. Additionally, mistletoe lectins derived from fermented or non-fermented plant extracts have differences in glycosylation, which affects potency (especially kinetics, etc.). In addition, when preparing each new batch of mistletoe extract, a product is obtained that is not identical to the previous batch, with a different content of its constituent substances, including glycosylated mistletoe lectins.
- 2 043588- 2 043588
Рекомбинантные лектины омелы в соответствии с данным изобретением предпочтительно не имеют такого гликозилирования, являются абсолютно чистыми и могут быть получены воспроизводимым способом.The recombinant mistletoe lectins of the present invention preferably do not have such glycosylation, are completely pure and can be produced in a reproducible manner.
В настоящее время было неожиданно продемонстрировано, что рекомбинантные лектины омелы обладают не только указанными преимуществами, такими как более высокая воспроизводимость, однородность и регулируемая дозировка, но и улучшенной цитотоксичностью клеток ЕК через маркер поверхности клеток ЕК NKG2D по отношению к растительному или ферментативному экстракту омелы из известного уровня техники, и поэтому они особенно пригодны для лечения опухоли головного мозга, глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза. Кроме того, рекомбинантные лектины омелы демонстрируют специфический и предпочтительный антимигрирующий эффект по отношению к клеткам опухоли головного мозга.It has now been unexpectedly demonstrated that recombinant mistletoe lectins have not only the stated advantages of higher reproducibility, uniformity and controlled dosage, but also improved NK cell cytotoxicity through the NK cell surface marker NKG2D towards plant or enzymatic mistletoe extract from the known prior art and are therefore particularly suitable for the treatment of brain tumors, gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas. In addition, recombinant mistletoe lectins exhibit specific and preferential antimigratory effects against brain tumor cells.
Клетки естественные киллеры (ЕК) в качестве компонентов врожденной иммунной системы играют важную роль в уничтожении раковых клеток. Для обеспечения уничтожения опухолевых клеток ЕКклетками необходим контакт между ЕК-клеткамии опухолевыми клетками. При этом важную роль играет NKG2D-рецептор на ЕК-клетках и поверхностные белки, необходимые для активации (NKp30, NKp44, NKp46). В примерах воздействие рекомбинантных лектинов омелы сравнивают со воздействием ферментированного экстракта омелы ISCADOR Q на взаимодействие ЕК-клеток с клеткой ГБМ LNT-229-Luc.Natural killer (NK) cells, as components of the innate immune system, play an important role in the destruction of cancer cells. To ensure the destruction of tumor cells by NK cells, contact between NK cells and tumor cells is necessary. In this case, the NKG2D receptor on NK cells and surface proteins necessary for activation (NKp30, NKp44, NKp46) play an important role. In the examples, the effects of recombinant mistletoe lectins are compared with the effects of fermented mistletoe extract ISCADOR Q on NK cell interactions with the LNT-229-Luc GBM cell.
Таким образом, целью данного изобретения является предоставление лекарственного средства и фармацевтического препарата для лечения опухоли головного мозга, в частности первичных опухолей головного мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза.Thus, the object of the present invention is to provide a medicament and pharmaceutical preparation for the treatment of a brain tumor, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas.
Указанной цели достигают путем предоставления лекарственного средства, а также фармацевтической композиции, содержащей эти рекомбинантные лектины омелы для лечения рака головного мозга, в частности, первичных опухолей головного мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза.This objective is achieved by providing a medicament as well as a pharmaceutical composition containing these recombinant mistletoe lectins for the treatment of brain cancer, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas.
Лекарственное средство в соответствии с изобретением предпочтительно содержит цепь A лектина омелы (MLA) или цепь B лектина омелы (MLB), по отдельности или совместно, также в форме димеров (см., например, EP 0 751 221 или EP 1 051 495).The medicinal product according to the invention preferably contains mistletoe lectin A chain (MLA) or mistletoe lectin B chain (MLB), individually or together, also in the form of dimers (see, for example, EP 0 751 221 or EP 1 051 495).
Рекомбинантный полипептид лектина омелы цепи A лектина омелы содержит следующие последовательности: SEQ ID NO. 1-3, включая их изоформы или их функциональный фрагмент.The recombinant mistletoe lectin chain A polypeptide of mistletoe lectin contains the following sequences: SEQ ID NO. 1-3, including their isoforms or a functional fragment thereof.
Рекомбинантный полипептид лектина омелы цепи В лектина омелы содержит следующие последовательности: SEQ ID NO. 4-12, включая их изоформы или их функциональный фрагмент (в дальнейшем обобщенно называемые рекомбинантными лектинами омелы).The recombinant mistletoe lectin chain B mistletoe lectin polypeptide contains the following sequences: SEQ ID NO. 4-12, including their isoforms or a functional fragment thereof (hereinafter collectively referred to as recombinant mistletoe lectins).
Кроме того, рекомбинантный лектин омелы в соответствии с изобретением предпочтительно представляет собой гетеродимер, состоящий из последовательностей SEQ ID NO. 1 и SEQ ID NO. 4, см., например, EP 0 751 221 (так называемый авискумин).Moreover, the recombinant mistletoe lectin according to the invention is preferably a heterodimer consisting of the sequences of SEQ ID NO. 1 and SEQ ID NO. 4, see for example EP 0 751 221 (so-called aviscumin).
В контексте данного изобретения термин функциональный фрагмент определяет фрагменты указанных полипептидов, имеющие ту же биологическую функцию, что и указанный выше полипептид с соответствующей аминокислотной последовательностью.In the context of this invention, the term functional fragment defines fragments of said polypeptides having the same biological function as the above polypeptide with the corresponding amino acid sequence.
В этом контексте термин та же биологическая функция описывает, например, что фрагменты или производные полипептидов индуцируют в клетке такие же сигналы, что и указанные пептиды. Примерами фрагментов являются пептидные участки с определенными функциями. Та же биологическая функция также включает цитотоксичность, иммунную стимуляцию (как нативной, так и адаптивной иммунной системы), стимуляцию высвобождения цитокинов, антигенность, индукцию экспрессии или активацию поверхностных маркеров, индукцию апоптоза или стимуляцию эндорфинов.In this context, the term same biological function describes, for example, that fragments or derivatives of polypeptides induce the same signals in the cell as the specified peptides. Examples of fragments are peptide regions with specific functions. The same biological function also includes cytotoxicity, immune stimulation (both native and adaptive immune systems), stimulation of cytokine release, antigenicity, induction of expression or activation of surface markers, induction of apoptosis, or stimulation of endorphins.
Под биологической активностью рекомбинантного лектина омелы подразумевается любая биологическая активность из диапазона видов общей биологической активности рекомбинантного лектина омелы. Такой функцией является, например, фармакологический эффект рекомбинантного лектина омелы.By biological activity of recombinant mistletoe lectin is meant any biological activity from the range of general biological activities of recombinant mistletoe lectin. Such a function is, for example, the pharmacological effect of recombinant mistletoe lectin.
Исследования мономеров ML-I выявили 25 различных изоформ, обусловленных различными комбинациями разнообразных цепей A и B, а также различными состояниями гликозилирования цепей.Studies of ML-I monomers have identified 25 different isoforms, resulting from different combinations of diverse A and B chains, as well as different glycosylation states of the chains.
Поэтому для данного изобретения принимается во внимание полипептид лектина омелы или его фрагмент, который содержит вариабельность последовательности различных цепей MLA и MLB в последовательностях SEQ ID NO. 1-12 в соответствии с изобретением.Therefore, the present invention takes into account a mistletoe lectin polypeptide or fragment thereof that contains sequence variability of different MLA and MLB chains in the sequences of SEQ ID NO. 1-12 in accordance with the invention.
Лекарственное средство в соответствии с изобретением предпочтительно содержит рекомбинантный полипептид лектина омелы, имеющий последовательности SEQ ID NO. 1-12, или его функциональный фрагмент или любую их комбинацию.The medicament according to the invention preferably contains a recombinant mistletoe lectin polypeptide having the sequence SEQ ID NO. 1-12, or a functional fragment thereof, or any combination thereof.
Кроме того, предпочтительно, чтобы использование рекомбинантных лектинов омелы в соответствии с изобретением осуществлялось в тех группах пациентов, которые не реагируют на противоопухолевые препараты в рамках стандартного лечения или включают в себя случаи отсутствия реагирования на лечение или неэффективности лечения.It is further preferred that the use of recombinant mistletoe lectins according to the invention be used in patient populations that do not respond to anticancer drugs as part of standard treatment or include cases of treatment failure or non-response.
Таким образом, данное изобретение охватывает таких пациентов или группы пациентов со случаями отсутствия реагирования на лечение или неэффективности лечения в отношении лечения опухолиThus, the present invention covers such patients or groups of patients with cases of non-response or treatment failure in relation to tumor treatment
- 3 043588 головного мозга, в частности первичных опухолей мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза, в случае которых стандартное лечение опухолей не является успешным.- 3 043588 brain, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas, in which standard tumor treatment is not successful.
Термин опухоль головного мозга в соответствии с данным изобретением включает первичные опухоли головного мозга, такие как глиомы, менингиомы и аденомы гипофиза, происходящие из нейроэпителия, ганглиозных клеток, мозговых оболочек, эпиневрия, общей глии или нейроглии и гипофиза или эктопических внутричерепных тканей (герминативно-клеточные опухоли или опухоли мальформаций), и их причины связаны главным образом с генетическими и гормональными факторами, онкогенными вирусами и экзогенными канцерогенами.The term brain tumor in accordance with this invention includes primary brain tumors such as gliomas, meningiomas and pituitary adenomas originating from neuroepithelium, ganglion cells, meninges, epineurium, common glia or neuroglia and pituitary gland or ectopic intracranial tissues (germ cell tumors or malformation tumors), and their causes are associated mainly with genetic and hormonal factors, oncogenic viruses and exogenous carcinogens.
Тем не менее предпочтительным вариантом реализации в соответствии с данным изобретением является лечение глиом (см., например, характеристику показаний в Pschyrembel®, 2 66. Auflage 2014, De Gruyter Verlag, Berlin).However, a preferred embodiment according to the present invention is the treatment of gliomas (see, for example, the characteristics of the indications in Pschyrembel®, 2 66. Auflage 2014, De Gruyter Verlag, Berlin).
Данное изобретение также относится к лекарственному средству для лечения опухоли головного мозга, в частности, первичных опухолей головного мозга, таких как глиомы, глиобластомы, менингиомы и аденомы гипофиза, рекомбинантный полипептид лектина омелы которого необязательно включает фармацевтически приемлемый носитель с образованием фармацевтической композиции. Примеры особенно пригодных фармакологически приемлемых носителей известны специалистам в данной области лечения опухолей и включают забуференные растворы хлористого натрия (физрастворы), воду, в частности, различные виды очистительных средств, стерильные растворы и т.д. Лекарственные средства, содержащие такие носители, могут быть приготовлены с помощью известных традиционных способов. Эти лекарственные средства могут вводиться индивидууму в подходящей дозе. Введение может быть локальным, пероральным или парентеральным, например, производиться внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно, локально, интраназально, интрабронхиально или внутрикожно, или через катетер в определенном месте артерии. Тип дозировки определяется лечащим врачом в соответствии с клиническими факторами. Специалистам в данной области техники известно, что тип дозировки зависит от различных факторов, таких как, например, размер тела или вес, площадь поверхности тела, возраст, пол или общее состояние здоровья пациента, а также от конкретного средства для введения, продолжительности и способа введения и других лекарственных средств, которые могут вводиться параллельно.This invention also relates to a medicament for the treatment of a brain tumor, in particular primary brain tumors such as gliomas, glioblastomas, meningiomas and pituitary adenomas, the recombinant mistletoe lectin polypeptide of which optionally includes a pharmaceutically acceptable carrier to form a pharmaceutical composition. Examples of particularly suitable pharmacologically acceptable carriers are known to those skilled in the art of treating tumors and include buffered sodium chloride solutions (saline solutions), water, in particular various types of cleansers, sterile solutions, etc. Medicines containing such carriers can be prepared using known conventional methods. These drugs can be administered to the individual at a suitable dose. Administration may be local, oral or parenteral, for example intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, intramuscular, topical, intranasal, intrabronchial or intradermal, or through a catheter at a specific arterial site. The type of dosage is determined by the attending physician in accordance with clinical factors. Those skilled in the art will recognize that the type of dosage depends on various factors, such as, for example, body size or weight, body surface area, age, sex, or general health of the patient, as well as the specific vehicle of administration, duration, and route of administration. and other drugs that can be administered in parallel.
Фармацевтическую композицию, содержащую рекомбинантные полипептиды лектина омелы в соответствии с данным изобретением, могут вводить локально или системно.A pharmaceutical composition containing recombinant mistletoe lectin polypeptides according to the present invention may be administered locally or systemically.
Предпочтительной оказалась дозировка лектинов омелы в соответствии с изобретением для применения к человеку в диапазоне от 2 до 10 нг/кг (масса тела). Особенно предпочтительной является дозировка в диапазоне от 3 до 7 нг/кг. Предпочтительно вводимое количество составляет 5 нг/кг массы тела. Предпочтительная дозировка для человека, не связанная с массой тела, составляет 350 нг.The preferred dosage of the mistletoe lectins according to the invention for use in humans is in the range of 2 to 10 ng/kg (body weight). Particularly preferred is a dosage in the range of 3 to 7 ng/kg. Preferably, the amount administered is 5 ng/kg body weight. The preferred dosage for humans, not related to body weight, is 350 ng.
Лекарственное средство в соответствии с изобретением вводят в течение по меньшей мере 8 недель с частотой от 1 раза в день до 1 раза в неделю. Предпочтительно лекарственное средство вводят 2-3 раза в неделю, особенно предпочтительно - 2 раза в неделю.The medicinal product in accordance with the invention is administered for at least 8 weeks with a frequency of 1 time per day to 1 time per week. Preferably, the drug is administered 2-3 times a week, especially preferably 2 times a week.
Таким образом, данное изобретение относится к способу дозировки рекомбинантных лектинов омелы в соответствии с изобретением или лекарственного средства в соответствии с изобретением, причем дозировка составляет от 2 до 10 нг/кг (массы тела). В частности, данное изобретение относится к способу дозировки рекомбинантных лектинов омелы в соответствии с изобретением или лекарственного средства в соответствии с изобретением, причем пациенту вводят дозу, составляющую 200-500 нг, в частности, 350 нг, и по меньшей мере 1 раз в неделю.Thus, the present invention relates to a method of dosing recombinant mistletoe lectins according to the invention or a medicinal product according to the invention, the dosage being from 2 to 10 ng/kg (body weight). In particular, the present invention relates to a method for dosing recombinant mistletoe lectins according to the invention or a medicinal product according to the invention, the patient being administered a dose of 200-500 ng, in particular 350 ng, and at least once a week.
Следующие примеры и фигуры приведены для иллюстрации изобретения, а не для ограничения данного изобретения этими примерами.The following examples and figures are provided to illustrate the invention and not to limit the present invention to these examples.
Примеры и фигуры.Examples and figures.
Пример 1. Композиции лекарственного средства.Example 1. Drug compositions.
Раствор для инъекций: 1 мл ампула, содержащая раствор для инъекций, составляющий от 0,5 до 1,0 мл; авискумин 200-500 нг; дигидрат моногидрофосфата натрия 2,8-5,6 мг; дигидрат дигидрофосфата натрия 0,078-0,155 мг; хлористый натрий 3,3-6,7 мг; эфир полиоксиэтиленсорбитана (полисорбат) 0,1 мг; глутаминовая кислота 0,1 мг; вода для инъекций от 0,5 до 1,0 мл а.д.Solution for injection: 1 ml ampoule containing solution for injection ranging from 0.5 to 1.0 ml; aviscumin 200-500 ng; sodium monohydrogen phosphate dihydrate 2.8-5.6 mg; sodium dihydrogen phosphate dihydrate 0.078-0.155 mg; sodium chloride 3.3-6.7 mg; polyoxyethylene sorbitan ether (polysorbate) 0.1 mg; glutamic acid 0.1 mg; water for injection from 0.5 to 1.0 ml ad.
Пример 2. Композиции лекарственного средства.Example 2. Drug compositions.
Порошок для приготовления раствора для инъекций, стеклянная 2R колба, содержащая: авискумин 200-500 нг; трегалозу 40,0 мг; хлористый натрий 1,0 мг; трис(гидроксиметил)аминометан (TRIS) 0,6 мг; эфир полиоксиэтиленсорбитана (полисорбат) 0,1 мг; соляная кислота для регулирования значения pH; для введения посредством инъекций порошок растворяют в 0,5 или 1,0 мл воды.Powder for the preparation of solution for injection, glass 2R flask containing: aviscumin 200-500 ng; trehalose 40.0 mg; sodium chloride 1.0 mg; tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS) 0.6 mg; polyoxyethylene sorbitan ether (polysorbate) 0.1 mg; hydrochloric acid to adjust the pH value; for injection, the powder is dissolved in 0.5 or 1.0 ml of water.
Пример 3.Example 3.
Методика: клетки LNT-22 9-Luc растут в среде DMEM (Sigma, Тауфкирхен, Германия), дополненной 10%-й фетальной сывороткой теленка и пенициллином/стрептомицином в увлажненной атмосфере, насыщенной 5%-м CO2.Procedure: LNT-22 9-Luc cells are grown in DMEM (Sigma, Taufkirchen, Germany) supplemented with 10% fetal calf serum and penicillin/streptomycin in a humidified atmosphere saturated with 5% CO 2 .
Для выделения ЕК-клеток PBMC получают из крови здоровых доноров и кокультивируют с облученными фидерными клетками RPMI 8866 (ATCC, США) в среде RPMI (Sigma, Тауфкирхен, Германия) для получения популяций поликлональных ЕК-клеток. ЕК-клетки очищают на > 98% с помощью набораTo isolate NK cells, PBMC are obtained from the blood of healthy donors and cocultured with irradiated RPMI 8866 feeder cells (ATCC, USA) in RPMI medium (Sigma, Taufkirchen, Germany) to obtain populations of polyclonal NK cells. NK cells purified >98% with kit
- 4 043588 для выделения ЕК-клеток (Miltenyi Biotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Их литическую активность по отношению к клеткам ГБМ определяют путем измерения активности люциферазы. Для деактивации активности ЕК-клеток, ЕК-клетки предварительно инкубируют с антителами к NKG2D (BioLegend, Фель, Германия) за 30 минут до их 4-часовой кокультивации (эффекторные клетки/лептоциты 20: 1) с клетками ГБМ. Клетки ГБМ, в свою очередь, предварительно обрабатывают в течение 24 ч с помощью авискумина или ISCADOR Q до их кокультивации с ЕК-клетками и промывают перед использованием в кокультуре.- 4 043588 for the isolation of NK cells (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany). Their lytic activity towards GBM cells is determined by measuring luciferase activity. To deactivate NK cell activity, NK cells were preincubated with anti-NKG2D antibodies (BioLegend, Fehl, Germany) for 30 minutes before their 4-hour coculture (effector cells/leptocytes 20:1) with GBM cells. GBM cells are in turn pretreated for 24 h with Aviscumin or ISCADOR Q prior to coculture with NK cells and washed before use in coculture.
Результат. Авискумин влияет на воздействие ЕК-клеток на клетки ГБМ за счет усиления взаимодействия их NKG2D-рецептора с клеткой-мишенью.Result. Aviscumin influences the effect of NK cells on GBM cells by enhancing the interaction of their NKG2D receptor with the target cell.
Блокада NKG2D-рецептора с помощью антитела ведет, как и ожидалось, к снижению на 52% опосредованного ЕК-клетками лизиса в контрольной группе (среда); авискумин частично противодействует воздействию антитела: поэтому опосредованный ЕК-клетками лизис ингибируется антителом только на 38%. Сравнение с ферментированным экстрактом омелы ISCADOR Q в этих условиях невозможно, так как при концентрации того же лектина о мелы, равной 8 нг/мл, клетки ГБМ без воздействия ЕК-клеток лизируются намного сильнее, чем в случае опосредованной контрольной группы. По-видимому, другие составные вещества ферментированного экстракта являются непосредственно цитотоксичными (см. табл.). __________________________________________________________________________Blockade of the NKG2D receptor with an antibody leads, as expected, to a 52% reduction in NK cell-mediated lysis in the control group (medium); Aviscumin partially counteracts the effects of the antibody: therefore, NK cell-mediated lysis is only inhibited by 38% by the antibody. Comparison with fermented mistletoe extract ISCADOR Q is not possible under these conditions, since at a concentration of the same mistletoe lectin of 8 ng/ml, GBM cells without NK cell exposure lyse much more strongly than in the case of the indirect control group. Apparently, other constituents of the fermented extract are directly cytotoxic (see table). __________________________________________________________________________
Согласно Podlech, ISCADOR Q (200 мг) разбавляют в 2000 раз (100 мг/мл) для проведения экспериментов по инкубации. Экстракт, в частности, содержит различные лектины омелы, содержание которых в используемой партии составляет 15,050 микрограмма лектина омелы на мл. Это означает, что в экспериментах по инкубации концентрация лектина омелы составляет 7,5 нанограмма лектинов на мл. Концентрация 7,5 нанограмма лектинов на мл приводит к ингибированию роста почти на 20-30% в клетках глиомы LNT-229 и SMA560 через 48 ч.According to Podlech, ISCADOR Q (200 mg) is diluted 2000 times (100 mg/ml) for incubation experiments. The extract in particular contains various mistletoe lectins, the content of which in the batch used is 15,050 micrograms of mistletoe lectin per ml. This means that in incubation experiments the mistletoe lectin concentration is 7.5 nanograms of lectins per ml. A concentration of 7.5 nanograms of lectins per ml resulted in almost 20-30% growth inhibition in LNT-229 and SMA560 glioma cells after 48 hours.
Кроме того, ISCADOR Q содержит, в частности, различные цитотоксические вискотоксины, содержание которых дано в используемой партии на уровне 364 мкг вискотоксина на мл. Это означает, что концентрация вискотоксина составляет 182 нанограмма вискотоксинов на мл инкубационного раствора.In addition, ISCADOR Q contains, in particular, various cytotoxic viscotoxins, the content of which is given in the batch used at 364 µg viscotoxin per ml. This means that the viscotoxin concentration is 182 nanograms of viscotoxin per ml of incubation solution.
Поэтому при использовании ISCADOR неясно, какое из многочисленных составляющих веществ ингибирует рост клеток глиомы LNT-229 и SMA560.Therefore, when using ISCADOR, it is unclear which of the numerous constituent substances inhibits the growth of LNT-229 and SMA560 glioma cells.
Авискумин рекомбинантного лектина омелы ингибирует рост различных клеток опухоли головного мозга на 100% в диапазоне концентраций от 0,4 до 11 нг/мл, и, таким образом, как ингибитор клеток опухоли головного мозга является в >10 раз более мощным, чем ISCADOR Q. Если необходимо приписать эффект ISCADOR Q содержащимся в нем лектинам омелы, тогда, необходимо предположить наличие противодействующих лектину омелы ингредиентов в ферментированном экстракте.Recombinant mistletoe lectin aviscumin inhibits the growth of various brain tumor cells by 100% over a concentration range of 0.4 to 11 ng/mL, and is thus >10 times more potent as a brain tumor cell inhibitor than ISCADOR Q. If the effect of ISCADOR Q is to be attributed to the mistletoe lectins it contains, then the presence of mistletoe lectin counteracting ingredients in the fermented extract must be assumed.
Цитотоксическими являются также другие варьирующие составные вещества экстрактов омелы (см. Eggenschwiler J, von BL, Stritt B, Pruntsch D, Ramos M, Urech K, Rist L, Simoes-Wust AP, Viviani A; Mistletoe lectin is not the only cytotoxic component in fermented preparations of Viscum album from white fir (Abies pectinata). BMC Complement Altern Med 2007, 7:14).Various other constituents of mistletoe extracts are also cytotoxic (see Eggenschwiler J, von BL, Stritt B, Pruntsch D, Ramos M, Urech K, Rist L, Simoes-Wust AP, Viviani A; Mistletoe lectin is not the only cytotoxic component in fermented preparations of Viscum album from white fir (Abies pectinata). BMC Complement Altern Med 2007, 7:14).
Пример 4.Example 4.
Клеточную линию злокачественной глиомы человека LNT-229 инкубировали в течение 24 ч с содержащим лектины омелы экстрактом Iscador Qu, авискумином и нативным лектином омелы I. Используемые концентрации соответствовали 8 нг ML-I/мл. Через 24 ч клетки промывали, чтобы удалить активные вещества, и соответственно наносили 20000 клеток в камере миграции клеток (камере Бойдена) на верхний слой поликарбонатной мембраны, которая является проницаемой для клеток из-за своих 8 мм пор и которая разделяет камеру на верхний и нижний отсеки. Клетки мигрируют через мембрану в зависимости от их адгезивных свойств (содержание промиграционных или антимиграционных белков) и либо прилипают к нижней стороне мембраны, либо попадают в буфер, расположенный в нижнем отсеке.The human malignant glioma cell line LNT-229 was incubated for 24 hours with mistletoe lectin-containing Iscador Qu extract, aviscumin, and native mistletoe lectin I. The concentrations used corresponded to 8 ng ML-I/ml. After 24 h, the cells were washed to remove the active substances and accordingly 20,000 cells were applied in a cell migration chamber (Boyden chamber) on the top layer of a polycarbonate membrane, which is permeable to cells due to its 8 mm pores and which divides the chamber into upper and lower compartments. Cells migrate through the membrane depending on their adhesive properties (content of pro-migratory or anti-migratory proteins) and either adhere to the underside of the membrane or enter a buffer located in the lower compartment.
В конце эксперимента мембрана, на которой окрашиваются и подсчитываются прилипшие клетки, может быть удалена. Разница между общим количеством клеток и количеством прилипших клеток пред- 5 043588 ставляет собой число мигрировавших клеток. Результаты показаны на фиг. 1.At the end of the experiment, the membrane on which adherent cells are stained and counted can be removed. The difference between the total number of cells and the number of adherent cells represents the number of migrated cells. The results are shown in Fig. 1.
По сравнению с необработанной контрольной группой, количество мигрирующих клеток уменьшается за счет эффекта лектина омелы. Антитела к лектинам омелы отменяют эффект.Compared to the untreated control group, the number of migrating cells was reduced due to the effect of mistletoe lectin. Antibodies to mistletoe lectins reverse the effect.
Сильный анти-миграционный эффект достигается за счет авискумина (см. выше) (p<0,001).A strong anti-migration effect is achieved by aviscumin (see above) (p<0.001).
Эти данные, согласно которым авискумин демонстрирует самый сильный эффект, можно объяснить конкретной снижением экспрессии про-миграционных генов MTA1 и MTA2 и повышением экспрессии антимиграционных генов BRMS1 и SERPINB5. В отличие от других препаратов лектина омелы, эти гены могут испытывать снижение или повышение экспрессии только за счет авискумина (см. сравнительную теплокарту на фиг. 2).These data, according to which aviscumin demonstrates the strongest effect, can be explained by a specific decrease in the expression of the pro-migration genes MTA1 and MTA2 and an increase in the expression of the anti-migration genes BRMS1 and SERPINB5. Unlike other mistletoe lectin preparations, these genes can be downregulated or upregulated by aviscumin alone (see comparative heat map in Fig. 2).
Claims (13)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16155735.0 | 2016-02-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA043588B1 true EA043588B1 (en) | 2023-06-02 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6054889B2 (en) | Use of low dose IL-2 for the treatment of autoimmune related disorders or inflammatory disorders | |
| CN105848667B (en) | Peptide having angiogenesis inhibitory activity and composition comprising the same | |
| KR20150053753A (en) | Compositions containing hc-ha/ptx3 complexes and methods of use thereof | |
| Samara et al. | Prothymosin alpha and immune responses: are we close to potential clinical applications? | |
| EP3927365B1 (en) | Cd80 extracellular domain-fc fusion proteins for treating pd-l1 negative tumors | |
| JP2022065088A (en) | Diagnosis of immune activation using clever-1, tnf-alpha, and hla-dr binding agents | |
| Hiscox et al. | Inhibition of cancer cell motility and invasion by interleukin-12 | |
| CA2856329A1 (en) | Compositions and methods for treating glioma | |
| US20250025559A1 (en) | Irf-4 engineered t cells and uses thereof in treating cancer | |
| US20170029531A1 (en) | Inhibition of lactate dehydrogenase 5 (ldh-5) binding, incorporation, internalization and/or endocytosis to immune cells | |
| EA043588B1 (en) | A MEDICINE CONTAINING RECOMBINANT MISTLETE LECTINS FOR THE TREATMENT OF BRAIN TUMORS | |
| Tian et al. | TRIM59: A membrane protein expressed on Bacillus Calmette-Guérin-activated macrophages that induces apoptosis of fibrosarcoma cells by direct contact | |
| US10722553B2 (en) | Medicament containing recombinant mistletoe lectins for the treatment of brain tumors | |
| AU2020391280B2 (en) | Composition for anticancer treatment, comprising NK cells and fusion protein which comprises IL-2 protein and CD80 protein | |
| KR101748120B1 (en) | Compositions comprising nanoparticle-protein complex based on vitreous as an active ingredient for inhibiting angiogenesis, and uses thereof | |
| KR102352715B1 (en) | Method for promoting proliferation or mass culture of antigen-specific CD8+ T cell using IL-21 | |
| EP3964226A1 (en) | Composition for preventing or treating graft-versus-host disease comprising tlr5 agonist derived from flagellin as effective component | |
| CN116615441A (en) | Multifunctional and multivalent interleukin-TGF-beta receptor fusion polypeptides | |
| Kikuchi et al. | Effects of tumor necrosis factor α, interferon α and interferon γ on non-lymphoid leukemia cell lines: Growth inhibition, differentiation induction and drug sensitivity modulation | |
| WO2022008890A1 (en) | Cancer treatment | |
| KR20230100970A (en) | Composition for culturing NK cells comprising IF1 and uses thereof | |
| Bonavida | Molecular Mechanism of Natural Killer Cell-Mediated Cytotoxicity | |
| CN117624379A (en) | An artificial protein and its application | |
| KR101699567B1 (en) | A composition for preventing or treating an immunological disease comprising an expression or activity inhibitor of JunB as an active ingredient | |
| CN109908326A (en) | People's beta-alexin 1 is promoting the application in NK cell killing activity |