EA039422B1

EA039422B1 - Способ прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата при инфицировании герпесвирусной инфекцией

Info

Publication number: EA039422B1
Application number: EA201900456A
Authority: EA
Inventors: Болдукыз Толгонбаевна Джумабаева; Дмитрий Сергеевич Тихомиров; Татьяна Алексеевна Туполева; Людмила Семёновна Бирюкова
Priority date: 2019-09-27
Filing date: 2019-09-27
Publication date: 2022-01-26
Also published as: EA201900456A1

Abstract

Изобретение относится к медицине, диагностике в трансплантологии, а именно к способам прогнозирования инфекционных осложнений после трансплантации почки. Описан способ прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата при инфицировании герпесвирусной инфекцией методом полимеразной цепной реакции в моче пациента. При концентрации вирусной ДНК менее 2500 коп/мл констатируют наличие латентной вирусной инфекции у реципиента почечного трансплантата и отсутствие нарушения функции трансплантата. При концентрации вирусной ДНК, равной или более 2500 коп/мл, констатируют наличие активной вирусной инфекции у реципиента почечного трансплантата и нарушение функции трансплантата, требующей специфической противовирусной терапии.

Description

Изобретение относится к медицине, диагностике в трансплантологии, а именно к способам прогнозирования инфекционных осложнений после трансплантации почки.

Известен патент США № 6605602, в котором, в частности, описан способ выявления риска поражения почки ВК (полиомавирус человека 1) вирусом методом полимеразной цепной реакции гена ВК вируса в моче пациента после трансплантации почки.

После трансплантации почки инфекционные осложнения у пациентов являются одним из серьезных осложнений. Среди инфекционных осложнений преимущественно выделяют герпесвирусную инфекцию, которая является причиной инфицирования и удаления трансплантата.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, - разработка действенного и простого способа прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата при инфицировании герпесвирусами более точного и безопасного для пациента.

Поставленная задача решается путём применения разработанного способа, заключающегося в определении концентрации ДНК герпесвируса в моче пациента методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При концентрации ДНК герпесвируса менее 2500 коп/мл констатируют наличие латентного вирусного фактора у реципиента, который не сопровождается клиническим проявлением вирусной инфекции и нарушением функции трансплантата. При концентрации ДНК герпесвируса равной или более 2500 коп/мл констатируют наличие активной вирусной инфекции у реципиента и нарушение функции трансплантата, что требует назначения противовирусной терапии.

Представленный способ прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата при инфицировании герпесвирусной инфекцией подтверждён следующими исследованиями.

Исследовано 32 пациента (мужчин - 21, женщин - 11) с хронической болезнью почек в терминальной стадии (ХБПС5). Медиана возраста составила 43 года.

Методом ПЦР в режиме реального времени определяли концентрацию ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), вируса Эпштейна-Барра (ВЭБ) и вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) в периферической крови и моче реципиента через 1, 2, 4, 6 месяцев и через 1 год после трансплантации почки (ТАП). Наименьшей концентрацией вирусной ДНК в периферической крови и моче считалась менее 500 коп. Концентрация вирусной ДНК более 2500 коп считалась высокой.

На фоне иммуносупрессивной терапии у реципиентов почечного трансплантата преимущественно первые два месяца после ТАП выявлялись маркеры герпесвирусной инфекции, последующие 4 и 6 месяцев, через 1 год - значительно реже. Однако нарушение функции трансплантата наблюдалось не во всех выявленных случаях.

При концентрации ДНК менее 500 коп/10⁵ клеток в крови и менее 500 коп/мл в моче ЦМВ у 8 реципиентов, ВЭБ у 10 и ВГЧ-6 у 13 не отмечалось нарушение функции трансплантата (табл. 1).

У 9 реципиентов почечного трансплантата с ЦМВ, у 6 - с ВЭБ, у 2 - с ВГЧ-6 выявлена высокая концентрация вирусной ДНК в моче более 2500 коп/мл, что сопровождалось нарушением функции трансплантата и указывало на инфицирование трансплантата (табл. 2). При этом в крови у этих пациентов вирусная ДНК либо вообще не была выявлена, либо её концентрация находилась в пределах минимальных значений - менее 500 коп/10⁵ клеток.

Таким образом, при инфицировании почечного трансплантата прежде всего повышается концентрация герпесвирусов в моче, при этом в крови их концентрация может оставаться на низком уровне. Выявлена корреляция между уровнем концентрации ДНК герпесвирусов (ЦМВ, ВЭБ, ВГЧ-6) в моче и нарушением функции трансплантата. При низкой вирусной нагрузке не отмечается нарушения функции трансплантата, а при высокой вирусной нагрузке более 2500 коп/мл в моче наблюдается дисфункция трансплантата.

Таблица 1. Низкая концентрация вирусной ДНК у реципиентов почечного трансплантата

	Концентрация вирусной ДНК, после трансплантации почки, через:
	1 мес	2 мес	4 мес	6 мес	1 год	Дисфункция трансплантата
	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча
Цитомегаловирус
г	н	н	н	н	н	н	500	н	н	500	нет

- 1 039422

м	н	н	н	н	н	н	500	н	н	н	нет
3	500	н	н	н	н	н	н	н	н	н	нет
Б	500	н	н	н	500	500	н	н	н	н	нет
Ст	500	н	500	н	н	н	н	н	н	н	нет
Ш	500	н	н	н	н	н	н	н	н	н	нет
Ал	500	500	500	500	н	н	н	н	н	н	нет
Ш	500	н	н	н	н	н	н	н	н	н	нет
Вирус С	Эпштейна - Барр
М	500	н	н	н	н	н	н	н	н	н	нет
3	500	н	н	н	н	н	500	н	н	н	нет
п	н	н	500	н	н	н	н	н	н	н	нет
м	н	н	500	н	н	н	н	н	н	н	нет
л	500	н	500	н	н	500	500	н	н	н	нет
Б	500	н	н	н	н	н	н	н	н	н	нет
И	н	н	н	н	500	н	н	н	н	н	нет
А	н	500	н	500	н	н	н	н	н	н	нет
Щ	500	нет	500	н	500	н	500	н	н	н	нет
д	н	н	н	н	500	н	н	н	н	н	нет
Вирус герпеса человека 6 типа
А	н	500	н	н	н	н	н	н	н	500	нет
Ш	н	500	н	500	н	500	н	500	н	н	нет
Т	н	н	н	500	н	500	н	500	н	500	нет
М	н	500	н	500	н	500	н	600	н	н	нет
С	н	500	н	н	н	500	н	н	н	н	нет
Шл	н	500	н	500	н	500	н	н	н	н	нет
Б	н	н	н	н	н	н	н	н	н	800	нет
А	н	500	н	500	н	н	н	н	н	н	нет
0	н	1500	н	н	н	700	н	500	н	н	нет
Ш	н	н	н	500	н	н	н	500	н	500	нет
Ст	н	700	н	500	н	н	н	н	н	н	нет
А	н	500	н	500	н	н	н	500	н	н	нет
Л	н	500	н	н	н	н	н	н	н	н	нет

Примечание: н - ДНК вируса не обнаружена.

- 2 039422

Таблица 2. Высокая концентрация вирусной ДНК у реципиентов почечного трансплантата

	Высокая концентрация вирусной ДНК, после трансплантации почки, через	Дисфункция
	1 мес	2 мес	4 мес	6 мес	1 год	трансплантата
	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча	кровь	моча
Цитомегаловирус
Зин	500	н	н	15000	н	н	н	н	н	н	да
Ш	500	500	н	8700	н	1200	н	500	н	500	да
С	н	н	н	н	н	н	н	19600	н	500	да
Т	500	2500	500	н	н	н	н	н	н	н	да
м	500	н	н	н	н	500	н	9000	н	н	да
с	500	500	500	9500	500	500	н	н	н	н	да
т	500	500	н	5000	н	н	н	н	н	н	да
л	н	н	500	2700	н	н	н	н	н	н	да
Ст	500	н	н	9100	н	н	н	н	н	н	да
Вирус Эпштейна -Барр
Ш	500	н	1000	н	н	5100	н	н	н	н	да
Ст	500	280000	н	н	н	н	н	н	н	н	да
К	н	н	н	1854500	н	н	н	н	н	н	да
А	н	н	н	н	н	н	н	3060	н	н	да
Т	500	9000	н	н	н	н	н	н	н	н	да
Ст Р	н	5000	н	9100	н	н	н	н	н	н	да
Вирус герпеса человека 6 типа
И	н	500	н	500	н	5100	н	500	н	н	да
К	н	н	н	3400	н	3400	н	н	н	н	да

Примечание: н - ДНК вируса не обнаружена.

Таким образом, разработанный способ прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата при инфицировании герпесвирусной инфекцией путём определения концентрации вирусной ДНК методом полимеразной цепной реакции в моче пациента более точный по сравнению с существующим методом полимеразной цепной реакции в плазме крови пациента.

В патенте на изобретение США № 6605602 описан способ определения ВК вируса, который является представителем полиомавирусов и не относится к герпесвирусам. Так же в нём не раскрыта концентрация ДНК вируса, определяющая тип и стадии инфицирования трансплантата. Вышеперечисленное позволяет оценивать представленный способ как соответствующий критерию патентоспособности новизна.

ВК вирус локализируется в эпителии канальцев почек. При инфицировании ВК вирусом наблюдается поражение собирательных трубочек, дистальных канальцев и петли Г енле, что делает естественным выявление ДНК ВК вируса методом ПЦР в моче реципиента почечного трансплантата. ВК вирус практически не поражает эндотелиальные, гладкомышечные и интерстициальные клетки, что служит критерием дифференциальной диагностики с герпесвирусной инфекцией. ЦМВ поражает эндотелиальные клетки, ВЭБ преимущественно локализируется в CD21-позитивных лимфоцитах, а ВГЧ-6 преимущественно в Т-лимфоцитах. При герпесвирусной инфекции поражается интерстиций (межканальцевая ткань и клубочки почки) почки. Поэтому повышение концентрации маркеров ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-6 первоначально в моче у реципиента почечного трансплантата не очевидны для специалистов, что позволяет судить о соответствии заявляемого способа критерию патентоспособности изобретательский уровень.

Claims

Способ прогнозирования нарушения функции почечного трансплантата путем определения концентрации ДНК герпесвируса методом полимеразной цепной реакции в моче реципиента, при котором при

- 3 039422 концентрации вирусной ДНК менее 2500 коп/мл констатируют наличие латентной вирусной инфекции у реципиента почечного трансплантата и отсутствие нарушения функции трансплантата, а при концентрации вирусной ДНК равной или более 2500 коп/мл констатируют наличие активной вирусной инфекции у реципиента почечного трансплантата и нарушение функции трансплантата, требующей специфической противовирусной терапии.

-4 Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2