EA033824B1

EA033824B1 - Фармацевтические продукты и устойчивые жидкие композиции антител к il-17

Info

Publication number: EA033824B1
Application number: EA201791422A
Authority: EA
Inventors: Susanne Joerg; Kathrin Serno-Schersch
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2014-12-22
Filing date: 2015-12-21
Publication date: 2019-11-29
Also published as: AU2015370522B2; ES2976305T3; KR20230173742A; US20240173404A1; PE20170952A1; SI3237001T1; CN114452381A; TW201641104A; US20170368174A1; JP6770974B2; US20240415961A1; CN113876947A; LT3237001T; IL252141A0; PL3237001T3; EP3237001B1; IL252141B; FI3237001T3; DK3237001T3; EP4372005A3

Abstract

Изобретение относится к фармацевтическим продуктам и устойчивым жидким композициям антител к IL-17 и их антигенсвязывающих фрагментов, например AIN457 (секукинумабу), и способам получения таких фармацевтических продуктов и композиций. Изобретение также относится к применению таких фармацевтических продуктов и жидких композиций (например, как части набора с инструкциями по применению) для лечения различных IL-17-опосредуемых расстройств (например, аутоиммунных расстройств, таких как псориаз, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит и ревматоидный артрит).

Description

Родственные заявки

Настоящая заявка притязает на приоритет предварительной заявки на патент США № 62/095210, поданной 22 декабря 2014, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.

Область техники

Настоящее раскрытие относится к фармацевтическим продуктам, включая устойчивые жидкие фармацевтические композиции антител к IL-17 и их антигенсвязывающих фрагментов, например, AIN457 (секукинумаб), и способам получения таких фармацевтических продуктов и жидких фармацевтических композиций.

Предпосылки создания изобретения

IL-17A является основным лимфокином недавно определенного подмножества воспалительных Тклеток, которое является основным при некоторых аутоиммунных и воспалительных процессах. Нейтрализация IL-17A предполагается для лечения патофизиологии, лежащей в основе иммунноопосредованного заболевания, и, как следствие, обеспечения облегчения симптомов. Секукинумаб (AIN457) является высокоаффинным полностью человеческим моноклональным антителом, которое ингибирует активность IL-17A, которое оценивается как возможное лечение для пациентов с различными аутоиммунными заболеваниями, например, ревматоидным артритом, анкилозирующим спондилитом, псориатическим артритом, диабетом, астмой, хроническим бляшечным псориазом и рассеянным склерозом. Некоторые исследования фазы II и фазы III показали, что секукинумаб превосходит плацебо при достижении PASI 75 при лечении хронического бляшечного псориаза (например, секукинумаб 3x150 мг и 3x75 мг - оба варианта превосходят плацебо при достижении PASI 75 на 12 неделе (81,5 и 57,1%, соответственно против 9,1%) в исследовании CAIN457A2220. Секукинумаб в настоящее время используют в глобальных исследованиях фазы III для лечения хронического бляшечного псориаза, и снова показано превосходство над плацебо и недавно также над этанерцептом.

Международная заявка на патент РСТ/ЕР2011/069476 относится к лиофилизованным композициям секукинумаба на основе сахарозы, которые восстанавливают 1 мл воды непосредственно перед применением. Однако в РСТ/ЕР2011/069476 не раскрывается готовый к применению фармацевтический продукт или жидкая фармацевтическая композиция секукинумаба, имеющая длительную устойчивость. Действительно, предельная устойчивость белков в жидких композициях часто не допускает длительного хранения при комнатной температуре или в условиях холодильника. Кроме того, в растворе могут происходить различные физические и химические взаимодействия (агрегация [ковалентная и нековалентная], деамидирование, окисление, клиппинг, изомеризация, денатурирование), ведущие к повышению уровней деградации продукта и/или утрате биоактивности. Коммерческая готовая к применению жидкая композиция антител должна обеспечивать достаточную физическую и химическую устойчивость антител во время транспортировки и обращения для гарантии того, что заявленные дозировка и безопасность являются соответствующими, когда молекулу вводят пациенту. Конкретно приемлемая жидкая композиция антител должна усиливать и минимизировать разрушение белков, в особенности, агрегацию белков, для того, чтобы избежать тяжелых иммуногенных реакций. Кроме того, композиция также должна иметь приемлемую осмоляльность и величину pH для подкожного введения и иметь низкую вязкость как необходимое предварительное условие для изготовления (смешивание, фильтрация, наполнение) и возможности использования шприца. Сбалансирование таких многочисленных требований является затруднительным, делая получение коммерчески ценной водной биофармацевтической композиции технически сомнительным.

Несмотря на технические сложности, описанные выше, авторы успешно разработали новые и благоприятные готовые к применению фармацевтические продукты и жидкие фармацевтические композиции антител к IL-17 и их антигенсвязывающих фрагментов, раскрытые в настоящем описании, например, секукинумаба.

Сущность раскрытия

Раскрытие относится к фармацевтическим продуктам, которые включают контейнер (например, ручку, шприц, флакон, автоинжектор), имеющий свободное пространство с менее 12% кислорода (например, менее примерно 10% кислорода, менее примерно 8% кислорода, менее примерно 6% кислорода и т.д.) и жидкую композицию, размещенную в контейнере. Жидкая композиция не является восстановленной из лиофилизата, а представляет собой готовую к применению композицию, и вообще включает по меньшей мере одно из раскрытых антител к IL-17 или их антигенсвязывающих фрагментов (например, секукинумаб), буфер, поверхностно-активное вещество, метионин и стабилизатор, а также их субкомбинации. Авторы изобретения определили, что комбинированное применение определенных стабилизаторов с низким уровнем кислорода в свободном пространстве контейнера вносит существенный вклад в длительную устойчивость жидкого фармацевтического продукта и предотвращает окисление антитела к IL-17 (например, секукинумаба), включенного в композицию. Такие жидкие композиции имеют превосходные свойства, например, после 13 месяцев хранения при 25°C образование агрегатов, измеренное SEC, <3,5% в случае 2,5 мМ метионина, <3,0% в случае 5 мМ и<2,2% в случае 20 мМ метио- 1 033824 нина в метионинсодержащих композициях; и после 13 месяцев хранения при 25°C деградация продуктов согласно ОФ-ВЭЖХ (сумма вариантов перед главным пиком) <39,4% в случае 2,5 мМ, <37,8% в случае 5 мМ и<34,5% в случае 20 мМ метионина в метионинсодержащих композициях.

Соответственно, в настоящем описании раскрываются фармацевтические продукты, включающие контейнер, имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве менее примерно 12%, и жидкую композицию, имеющую pH примерно 5,2 - примерно 6,2, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция включает примерно 20 мг/мл примерно 175 мг/мл секукинумаба и примерно 2,5 - примерно 20 мМ

L-метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

Также в настоящем описании раскрываются фармацевтические продукты, включающие контейнер, имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве менее примерно 6%, и жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция включает примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл антитела к IL-17, раскрытого в настоящем описании (например, секукинумаба), примерно 10 мМ - примерно 30 мМ гистидина, pH 5,8, примерно 200 мМ - примерно 225 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80 и примерно 2,5 мМ примерно 20 мМ метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

Также в настоящем описании раскрываются способы уменьшения окисления секукинумаба, включающие получение жидкой композиции, имеющей pH примерно 5,2 - примерно 6,2, и включающей примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл антитела к IL-17, раскрытого в настоящем описании (например, секукинумаба), и примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ метионина, причем указанная жидкая композиция размещена в контейнере, имеющем свободное пространство; и доведение содержания кислорода в свободном пространстве до уровня менее или равного примерно 12%.

Также в настоящем описании раскрываются жидкие фармацевтические композиции, включающие примерно 25 мг/мл примерно 150 мг/мл антитела к IL-17, раскрытого в настоящем описании (например, секукинумаба), примерно 10 мМ - примерно 30 мМ буфера (например, гистидина), pH 5,8, примерно 200 мМ примерно 225 мМ стабилизатора (например, трегалозы, примерно 0,02% поверхностно-активного вещества (например, полисорбата 80) и примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ метионина.

Раскрытие также относится к применению таких фармацевтических продуктов и устойчивых жидких композиций для лечения различных IL-17-опосредуемых расстройств (например, аутоиммунных расстройств, таких как псориаз, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит и ревматоидный артрит) и наборам, содержащим такие фармацевтические продукты и устойчивые жидкие композиции.

В последующем описании и прилагаемой формуле изобретения описываются дополнительные композиции, продукты, способы, схемы применения, применения и наборы. Другие особенности, преимущества и аспекты настоящего раскрытия станут очевидны для специалистов в данной области техники из последующего описания и прилагаемой формулы изобретения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1A-D показывает влияние различных антиокислительных стабилизаторов на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце: параметр оценивает субвидимые частицы 1 мкм в режиме светотени (частицы/мл) через 8 недель при 5°C (А), часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%) через 8 недель при 25°C (В), DP-SEC (%) через 8 недель при 40°C (С), AP-SEC (%) через 8 недель при 40°C (D).

Фиг. 2 показывает влияние концентрации L-метионина на устойчивость раствора 25 мг/мл секукинумаба при хранении при 25°C: часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%). Серая штриховая линия: подбор прямой для данных 10 мМ L-метионина/содержание кислорода в свободном пространстве 5%; черная штриховая линия: подбор прямой для данных 0 мМ L-метионина/содержание кислорода в свободном пространстве 5%.

Фиг. 3 показывает влияние L-метионина, трегалозы и полисорбата 80 на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце, хранившейся в течение 6 месяцев при 25°C: часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%).

Фиг. 4, А и В, показывает влияние концентрации L-метионина на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце, хранившейся при 5°C: AP-SEC (%) (А) и часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%) (В), в присутствии 5 мМ и 0 мМ L-метионина.

Фиг. 5 показывает влияние концентрации L-метионина на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце через 30 месяцев при 5°C и 13 месяцев при 25°C: AP-SEC (%) (А) и часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%) (В).

Фиг. 6, А и В, показывает влияние концентрации L-метионина на устойчивость жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе (содержание кислорода в свободном пространстве 10%) после 3 месяцев хранения при 40°C по AP-SEC (%) (А) и сумму примесей по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) (%) (В).

- 2 033824

Фиг. 7 показывает влияние содержания кислорода в свободном пространстве на жидкость со 150 мг/мл секукинумаба в шприце, хранившейся при 25°C: AP-SEC (%).

Фиг. 8, A-D, показывает влияние содержания кислорода в свободном пространстве и заполненного объема на AP-SEC (%) в жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце после хранения при 25°C (A, B) и 5°C (C, D). Заполненный объем для A и C составляет 0,5 мл. Заполненный объем для B и D составляет 1,0 мл.

Фиг. 9 показывает влияние содержания кислорода в свободном пространстве и заполненного объема на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце через 6 месяцев при 5°C и 25°C: чистота по ОФ-ВЭЖХ.

Фиг. 10 показывает влияние концентрации L-метионина и содержания кислорода в свободном пространстве на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце через 6 месяцев хранения при 25°C (А) : AP-SEC (%).

Фиг. 11 показывает влияние продувки азотом и концентрации L-метионина на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце: часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%).

Фиг. 12, А и В, показывает влияние pH на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце после 4 недель хранения при 40°C (А) : оценки по шкале/2 (влияние повышения pH на 0,3 единицы) на устойчивость части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (изменение, %) (А) и AP-SEC (изменение, %) (В).

Фиг. 13, A-D, показывает влияние pH на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце после хранения при 5°C: мутность (NTU) (А), чистота по SEC (%) (В); кислотные варианты по СЕХ (%) (С), AP-SEC (%) (D).

Фиг. 14 показывает влияние стабилизатора на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце после 8 недель хранения при 25°C: параметр оценивает AP-SEC.

Фиг. 15 показывает влияние поверхностно-активного вещества на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце после встряхивания. Параметр оценивает субвидимые частицы>1 мкм в режиме светотени (частицы/мл).

Фиг. 16, A-D, показывает влияние типа буфера на устойчивость жидкости со 150 мг/мл секукинумаба в шприце: параметр оценивает AP-SEC (%) после стресса замораживание-оттаивание (A), AP-SEC (%) после напряжения при встряхивании (В), часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (%) после 8 недель хранения при 25°C (С), DP-SEC (%) после напряжения при встряхивании (D).

Подробное описание раскрытия

Термин включающий охватывает включающий в себя, а также состоящий из, например, композиция, включающая X, может состоять исключительно из X или может включать в себя что-то дополнительное, например, X+Y.

Термин примерно в отношении числовой величины х означает +/- 10%, если контекст не предписывает иное.

Термином ежемесячно обозначаются примерно каждые 4 недели (например, каждые 4 недели), которые составляют примерно каждые 28 дней (например, каждые 28 дней).

Термин антитело при упоминании в настоящем описании включает целые антитела и любой антигенсвязывающий фрагмент или их отдельные цепи. Встречающееся в природе антитело представляет собой гликопротеин, включающий по меньшей мере две тяжелые (Н) и две легкие (L) цепи, взаимосвязанные дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь включает вариабельный участок тяжелой цепи (в настоящем описании сокращенно V_H) и константный участок тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь включает вариабельный участок легкой цепи (в настоящем описании сокращенно V_L) и константный участок легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена CL. Участки V_H и V_L могут быть дополнительно подразделены на участки гипервариабельности, называемые гипервариабельными участками или определяющими комплементарность участками (CDR), перемежающиеся с участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками (FR). Каждый V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные участки антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями реципиента или факторами, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (C1g) классической системы комплемента. В некоторых воплощениях раскрытых способов, схем, наборов, процессов, применений и композиций используют антитело к IL-17 или рецептору IL-17, предпочтительно, антитело к IL-17, например, секукинумаб.

Термин изолированное антитело, используемый в настоящем описании, относится к антителу, которое по существу свободно от других антител, имеющих другую антигенную специфичность (например, изолированное антитело, которое специфически связывает IL-17, по существу свободно от антител, которые специфически связывают другие антигены иные, чем IL-17). Термины моноклональное антитело или композиция моноклональных антител, используемые в настоящем описании, относятся к препарату молекул антител одного молекулярного состава. Термин человеческое антитело, используемый в

- 3 033824 настоящем описании, предназначен для включения антител, имеющих вариабельные участки, в которых как каркасный, так и CDR участки происходят от последовательностей человеческого происхождения.

Человеческое антитело необязательно продуцируется человеком, человеческой тканью или человеческой клеткой. Человеческие антитела по раскрытию могут включать аминокислотные остатки, некодированные человеческими последовательностями (например, мутации, введенные неспецифическим или сайтнаправленным мутагенезом in vitro, присоединением N-нуклеотида по стыкам in vitro во время рекомбинации генов антитела или путем соматической мутации in vivo). В некоторых воплощениях раскрытых способов, схем, наборов, процессов, применений и композиций антитело к IL-17 представляет собой человеческое антитело, изолированное антитело и/или моноклональное антитело.

Термин антигенсвязывающий фрагмент антитела, используемый в настоящем описании, относится к фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, IL-17). Показано, что антигенсвязывающая функция может выполняться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином антигенсвязывающий фрагмент антитела, включают фрагмент Fab, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов V_L, V_H, CL и CH1; фрагмент F(ab)2, двухвалентный фрагмент, состоящий из двух фрагментов Fab, соединенных дисульфидным мостиком в шарнирном участке; фрагмент Fd, состоящий из V_H и доменов CH1; фрагмент Fv, состоящий из доменов V_L и V_H одного плеча антитела; фрагмент dAb (Ward et al., 1989, Nature, 341: 541-546), который состоит из домена V_H; и изолированный CDR. Примеры антигенсвязывающих сайтов включают CDR секукинумаба, указанные в SEQ ID NO: 1-6 и 11-13 (таблица 1), предпочтительно, CDR3 тяжелой цепи. Кроме того, хотя два домена фрагмента Fv V_L и V_H кодированы отдельными генами, их можно соединить с использованием рекомбинантных методов синтетическим линкером, который позволяет им образовать одну белковую цепь, в которой пара участков VL и VH образует одновалентные молекулы (известные как одноцепочечные Fv (scFv); см., например, Bird et al., 1988, Science, 242: 423-426; и Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci., 85: 5879-5883). Предполагается, что такие одноцепочечные антитела также охватываются термином антитело. Одноцепочечные антитела и антигенсвязывающие фрагменты получают с использованием обычных методов, известных специалистам в данной области техники. В некоторых воплощениях раскрытых способов, схем, наборов, процессов, применений и композиций используют одноцепочечное антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела против IL-17 (например, секукинумаб) или рецептора IL-17.

Термин фармацевтический продукт обозначает контейнер (например, ручку, шприц, мешок, насос и т.д.), с фармацевтической композицией, размещенной внутри указанного контейнера. Контейнером обозначают любое средство для содержания жидкой фармацевтической композиции, например, ручку, шприц, флакон, автоинжектор, пэтч и т.д.. Каждый контейнер имеет свободное пространство, т.е., область в контейнере, которая не содержит жидкую фармацевтическую композицию. Такое свободное пространство содержит газ, например, смесь кислорода и других газов, обычно присутствующих в воздухе. Уровень кислорода в свободном пространстве можно регулировать, например, путем введения инертного газа (например, азота, аргона и т.д.) в свободное пространство вместо кислорода. Этого можно достичь активно, например, путем продувки, или пассивно, например, помещая контейнер в систему и удаляя кислород (например, в вакууме, и т.д.). Продувка, например, с использованием инертного газа, предпочтительно азота, может происходить перед загрузкой композиции в контейнер, во время заполнения или перед и во время установки пробки. Используемый в настоящем описании термин содержание кислорода в свободном пространстве относится к процентному содержанию кислорода, находящегося в свободном пространстве данного контейнера.

Устойчивая композиция представляет собой композицию, в которой белок по существу сохраняет свою устойчивость (например, физическую, химическую и/или биологическую активность) после хранения. В технике доступны различные аналитические методы измерения устойчивости белков, и их обзор приводится в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991), и Jones A., Adv. Drug Delivery Rev., 10:29-90 (1993). Устойчивость можно измерить при выбранной температуре для выбранного периода времени. Устойчивая жидкая композиция антител представляет собой жидкую композицию антител с отсутствием существенных изменений, наблюдаемых при температуре хранения в холодильнике (2-8°C) в течение по меньшей мере 6 месяцев, 12 месяцев, предпочтительно 2 лет и предпочтительнее 3 лет; или при комнатной температуре (23-27°C) в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев и предпочтительнее 1 года; или в жестких условиях (~40°C) в течение по меньшей мере 1 месяца, предпочтительно 3 месяцев и предпочтительнее 6 месяцев. Можно использовать различные критерии устойчивости, например, разложение не более 10%, предпочтительно 5% мономера антитела (например, при измерении чистоты по SEC, чистоты по ОФ-ВЭЖХ, чистоты по СЕХ, чистоты по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) и т.д.). С другой стороны, устойчивость можно установить, если раствор остается прозрачным или слегка опалесцирующим при визуальном анализе или используя нефелометрию. С другой стороны, устойчивость можно установить, если концентрация, pH и осмоляльность композиции имеют не более +/-10% вариацию в течение заданного периода времени, например, по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев и предпочтительнее 1 года. С другой стороны, устойчивость можно установить, если эффективность (например, измеренная

- 4 033824 по биологической активности при ингибировании или СЕХ анализе и т.д.) находится в пределах 70-130% (например, составляет по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 76%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 95%), предпочтительно 80120% от контроля в течение заданного периода времени, например, по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев и предпочтительнее 1 года. С другой стороны, устойчивость можно установить, если наблюдают не более 10%, предпочтительно 5% клиппинга антитела (например, при измерении DPSDS, и т.д.) в течение заданного периода времени, например, по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев и предпочтительнее 1 года. С другой стороны, устойчивость можно установить, если образуется не более 10%, предпочтительно 5% агрегатов (например, при измерении АР-SEC, и т.д.) в течение заданного периода времени, например, по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев и предпочтительнее 1 года. С другой стороны, устойчивость можно установить, если после 13 месяцев хранения при 25°C образование агрегатов при измерении SEC составляет < примерно 3,5%, < примерно 3,0% или < примерно 2,2%. С другой стороны, устойчивость можно установить, если после 13 месяцев хранения при 25°C образование продуктов разложения (при измерении ОФ-ВЭЖХ (вид перед главным пиком)) составляет < примерно 39,4%, < примерно 37,8% или < примерно 34,5%.

Антитело сохраняет свою физическую устойчивость в фармацевтической композиции, если не наблюдают существенного увеличения агрегации, осаждения и/или денатурации после визуальной проверки цвета и/или прозрачности (мутности) или при измерении рассеяния УФ-света, эксклюзионной хроматографией (SEC) и динамического рассеяния света (DLS). Кроме того, не должна существенно изменяться конформация белка, например, при оценке флуоресцентной спектороскопией (определяет третичную структуру белка) или FTIR-спектроскопией (определяет вторичную структуру белка).

Антитело сохраняет свою химическую устойчивость в фармацевтической композиции, если не наблюдают существенного химического изменения. Химическую устойчивость можно оценить путем детекции и количественной оценки химически измененных форм белка. Процессы разложения, которые обычно изменяют химическую структуру белка, включают гидролиз или клиппинг (оценивают такими методами, как эксклюзионная хроматография [SEC] и SDS-PAGE), окисление (оценивают такими методами, как картирование пептидов в сочетании с масс-спектрометрией или MALDI/TOF/MS), деамидирование (оценивают такими методами, как катионообменная хроматография (СЕХ), капиллярное изоэлектрическое фокусирование, картирование пептидов, определение изоаспарагиновой кислоты) и изомеризация (оценивают такими методами, как измерение содержания изоаспарагиновой кислоты, картирование пептидов и т.д.).

Антитело сохраняет свою биологическую активность в фармацевтической композиции, если биологическая активность белка/антитела в заданное время находится в предварительно установленном интервале биологической активности, представленной на момент изготовления фармацевтической композиции.

Биологическую активность антитела можно определить, например, анализом связывания антигена ELISA, анализом эффективности (например, оценивая способность антитела к IL-17 (например, секукинумаба) связывать IL-17 и ингибировать высвобождение IL-17 из хондроцитов) или дериватизацией цистеамина по СЕХ.

Используемый в настоящем описании термин чистота по 0Ф-ВЭЖХ относится к процентному содержанию главного пика согласно ОФ-ВЭЖХ и может быть использован для оценки устойчивости секукинумаба. ОФ-ВЭЖХ используют для разделения секукинумаба и его вариантов согласно их гидрофобности. Часть перед главным пиком ОФ-ВЭЖХ представляет собой сумму, в процентах, пиков элюирования перед главным пиком, которые могут содержать фрагментированные, изомеризованные и окисленные виды антитела.

Используемый в настоящем описании термин чистота по СЕХ относится к проценту главного пика согласно СЕХ и может быть использован для оценки устойчивости антитела секукинумаба. СЕХ используют для оценки гетерогенности заряда секукинумаба путем измерения процента кислотных и щелочных вариантов.

Используемый в настоящем описании термин чистота по SEC относится к проценту мономера при SEC и может быть использован для оценки устойчивости секукинумаба. SEC используют для отделения мономерного секукинумаба от агрегатов и фрагментов согласно их размеру в условиях отсутствия денатурации. Сумму пиков элюирования перед главным пиком приводят как процент продуктов агрегации (АР-SEC), сумму пиков элюирования после главного пика приводят как процент продуктов разложения (DP-SEC).

Используемый в настоящем описании термин чистота по СЕ-SDS относится к проценту интактного антитела согласно CE-SDS и может быть использован для оценки устойчивости секукинумаба. CESDS используют для отделения побочных продуктов и продуктов разложения от интактного секукинумаба согласно их молекулярному размеру в невосстановливающих условиях. Сумму пиков, отделенных от главного пика, приводят как процент примесей.

Словосочетание жидкая фармацевтическая композиция, используемое в настоящем описании, от

- 5 033824 носится к водной композиции, которая не является восстановленной из лиофилизата, и которая содержит по меньшей мере одно антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент (например, секукинумаб) и по меньшей мере один дополнительный эксципиент (например, буфер). Жидкая фармацевтическая композиция может включать дополнительные эксципиенты (стабилизаторы, поверхностно-активные вещества) и дополнительные активные ингредиенты. Такой тип препарата также называют препаратом, готовым к применению.

Используемый в настоящем описании термин лиофилизат относится к высушенным (например, высушенным вымораживанием) фармацевтическим композициям, в значительной степени лишенным воды. Методы лиофилизации антител хорошо известны в технике, см., например, Rey & May (2004), Freeze-Drying/Lyophilization of Pharmaceutical & Biological Products, ISBN 0824748689. Лиофилизаты восстанавливают для получения водных композиций, как правило, для немедленного применения (например, в течение 1-10 дней), так как восстановленные лиофилизаты имеют склонность к ограниченному сроку годности.

Термин высокая концентрация относится к композиции, содержащей больше 50 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. В предпочтительных воплощениях жидкая композиция высокой концентрации содержит > примерно 50 мг/мл, > примерно 75 мг/мл, > примерно 100 мг/мл, > примерно 125 мг/мл, > примерно 150 мг/мл, > примерно 175 мг/мл, > примерно 200 мг/мл или > примерно 225 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

Термин IL-17 относится к IL-17A, прежде известному как CTLA8, и включает IL-17A дикого типа от различных видов (например, человека, мыши и обезьяны), полиморфные варианты !Б-17А и функциональные эквиваленты IL-17A. Функциональные эквиваленты IL-17A согласно настоящему раскрытию предпочтительно имеют по меньшей мере примерно 65, 75, 85, 95, 96, 97, 98 или даже 99% общую идентичность последовательностей с IL-17A дикого типа (например, IL-17A человека) и, по существу, сохраняют способность индуцировать продуцирование IL-6 дермальными фибробластами человека.

Предполагается, что термин K_D относится к степени диссоциации взаимодействия определенное антитело-антиген. Предполагается, что термин K_D, используемый в настоящем описании, относится к константе диссоциации, которую получают из отношения K_d к K_a (т.е., K_d/K_a) и выражают в виде молярной концентрации (М). Величины KD для антител можно определить способами, хорошо установленными в технике. Способом определения K_D антитела является использование поверхностного плазмонного резонанса или использование биосенсорной системы, такой как система Biacore®. В некоторых воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент связывает человеческий IL-17 с K_Dпримерно 100-259 пМ (при измерении с помощью Biacore®).

Термин аффинность относится к силе взаимодействия между антителом и антигеном в отдельных антигенных сайтах. В пределах каждого антигенного сайта вариабельный участок плеча антитела взаимодействует через слабые нековалентные силы с антигеном во многих сайтах; чем сильнее взаимодействия, тем больше аффинность. В технике известны стандартные анализы для оценки аффинности связывания антител с IL-17 различных видов, включая, например, ELISA, вестерн-блоттинг и RIA. Кинетику связывания (например, аффинность связывания) антител также можно оценить стандартными анализами, известными в технике, такими как анализ Biacore®.

Используемые в настоящем описании термины субъект и пациент включают любого человека или любое животное, не являющееся человеком. Термин животное, не являющееся человеком включает всех позвоночных, например, млекопитающих и немлекопитающих, таких как приматы, не являющиеся людьми, овца, собаки, кошки, лошади, коровы, куры, амфибии, рептилии и т.д.

Антитело, которое ингибирует одно или несколько таких функциональных свойств IL-17 (например, биохимическую, иммунохимическую, клеточную, физиологическую или другую биологическую активность или подобное) по определению согласно методологиям, известным в технике и описанным в настоящем описании, следует понимать как связанное со статистически значимым снижением определенной активности относительно активности, наблюдаемой в отсутствие антитела (или когда присутствует контрольное антитело с иррелевантной специфичностью). Антитело, которое ингибирует активность IL-17, вызывает статистически значимое снижение активности, например, по меньшей мере на примерно 10% измеряемого параметра, по меньшей мере на 50, 80 или 90%, и в некоторых воплощениях раскрытых способов, применений, процессов, наборов и композиций используемое антитело к IL-17 может ингибировать свыше 95, 98 или 99% функциональной активности IL-17.

Ингибирование IL-6 при использовании в настоящем описании относится к способности антитела к IL-17 (например, секукинумаба) снижать получение IL-6 из хондроцитов.

Биологическую активность антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, можно измерить, основываясь на его способности ингибировать индуцируемое IL-17 высвобождение IL-6 из иммортализованной клеточной линии хондроцитов человека, например, C-20M.4. Коротко, в первый день анализа клетки C-20M.4 высевают в 96-луночные планшеты, оставляют для присоединения и затем инкубируют в течение ночи в присутствии фиксированной сверхмаксимальной концентрации IL-17 (например, примерно 20-200 нг/мл, например, примерно 80 нг/мл, в культуральной сре

- 6 033824 де) и различных концентраций антитела (например, примерно 0,01 мкг/мл - примерно 4 мкг/мл, например, примерно 0,5 мкг/мл - примерно 2 мкг/мл, в аналитическом планшете). Включают TNF-альфа, который облегчает получение IL-6, индуцируемое IL-17 (например, примерно 0,01 нг/мл - примерно 1 нг/мл, например, примерно 0,5 нг/мл в культуральной среде), для расширения динамического интервала анализа. На второй день определяют количественно ELISA концентрацию IL-6 в клеточных супернатантах. Количество IL-6 в клеточных супернатантах обратно пропорционально активности антитела к IL-17, присутствующего в образце. Биологическую активность испытываемого образца антитела определяют количественно путем сравнения способности ингибировать IL-17-зависимое высвобождение IL-6 с такой способностью эталонного антитела. Образцы и эталон нормализуют на основании содержания белка. Относительную эффективность высвобождения вычисляют с использованием параллельного линейного анализа согласно Европейской фармакопеи. Конечные результаты выражают в виде относительной эффективности (в процентах) образца по сравнению с эталоном.

Термин производное, если не указано иное, используют для определения вариантов аминокислотной последовательности и ковалентных модификаций (например, при пегилировании, деаминировании, гидроксилировании, фосфорилировании, метилировании и т.д.) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, согласно настоящему раскрытию, например, обусловленной последовательности (например, вариабельного домена). Функциональное производное включает молекулу, имеющую количественную биологическую активность, общую с раскрытыми антителами к IL-17 или их антигенсвязывающими фрагментами. Функциональное производное включает фрагменты и пептидные аналоги антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании. Фрагменты включают участки в пределах последовательности полипептида по настоящему раскрытию, например, обусловленной последовательности. Функциональные производные антител к IL17 или их антигенсвязывающих фрагментов, раскрытые в настоящем описании (например, функциональные производные секукинумаба), предпочтительно включают V_H и/или V_L домены, которые имеют по меньшей мере примерно 65, 75, 85, 95, 96, 97, 98 или даже 99% общую идентичность с V_H и/или V_L последовательностями связывающих IL-17 молекул, раскрытых в настоящем описании (например, последовательностями V_H и/или V_L из таблицы 1), и по существу сохраняют способность связывать IL-17 человека или, например, ингибировать образование IL-6 индуцируемыми IL-17 дермальными фибробластами человека.

Словосочетание по существу идентичный означает, что соответствующая аминокислотная или нуклеотидная последовательность (например, домен V_H или V_L) будет идентична или иметь несущественные отличия (например, через консервативные замены аминокислот) в сравнении с определенной эталонной последовательностью. Несущественные отличия включают незначительные аминокислотные замены, такие как 1 или 2 замены в 5 аминокислотной последовательности обусловленного участка (например, домена VH или VL). В случае антител второе антитело имеет такую же специфичность и имеет по меньшей мере на 50% такую же аффинность. Последовательности по существу идентичные (например, по меньшей мере с 85% идентичностью последовательностей) последовательностям, раскрытым в настоящем описании, также являются частью настоящей заявки. В некоторых воплощениях идентичность последовательностей производного антитела к IL-17 (например, производного секукинумаба, например, антитела, биологически подобного секукинумабу) может составлять примерно 90% или больше, например 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или больше, относительно раскрытых последовательностей.

Идентичность в отношении нативного полипептида и его функционального производного определяется в настоящем описании как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые являются идентичными с остатками соответствующего нативного полипептида, после выравнивания последовательностей и введения брешей, при необходимости, для достижения максимальной процентной идентичности и без рассмотрения консервативных замен как части идентичности последовательностей. Ни наращивания по N- или C-концам, ни вставки не должны истолковываться как уменьшающие идентичность. Методы и компьютерные программы для выравнивания хорошо известны. Процентную идентичность можно определить с помощью стандартных алгоритмов выравнивания, например, Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), описнного Altshul et al. ((1990) J. Mol. Biol., 215: 403 410); алгоритмов Needleman et al. ((1970) J. Mol. Biol., 48: 444 453); или алгоритма Meyers et al. ((1988) Comput. Appl. Biosci., 4: 11 17). Набор параметров может представлять собой матрицу для подсчета Blosum 62 со штрафом за брешь 12, со штрафом за удлинение бреши 4 и со штрафом за сдвиг рамки бреши 5. Процентную идентичность между двумя аминокислотными или нуклеотидными последовательностями также можно определить с использованием алгоритма Е. Meyers and W. Miller ((1989), CABIOS, 4:11-17), который включен в программу ALIGN (версия 2.0), с использованием таблицы весов замен остатков РАМ120, штрафа за удлинение бреши 12 и штрафа за брешь 4.

Термин аминокислота(ы) относится ко всем встречающимся в природе L-a-аминокислотам, например, и включает D-аминокислоты. Словосочетание вариант аминокислотной последовательности относится к молекулам с некоторыми отличиями в их аминокислотных последовательностях по сравнению с последовательностями по настоящему раскрытию. Варианты аминокислотной последовательности полипептида по настоящему раскрытию, например, обусловленной последовательности, еще имеют спо

- 7 033824 собность связывать IL-17 человека или, например, ингибировать образование IL-6, вызываемое IL-17 в дермальных фибробластах человека. Варианты аминокислотной последовательности включают варианты с заменой (варианты, которые имеют по меньшей мере один удаленный аминокислотный остаток и другую аминокислоту, встроенную на его место в той же позиции в полипептиде по настоящему раскрытию), варианты со вставкой (варианты с одной или несколькими аминокислотами, встроенными непосредственно рядом с аминокислотой в определенной позиции в полипептиде по настоящему раскрытию) и делеционные варианты (варианты с одной или несколькими удаленными аминокислотами в полипептиде по настоящему раскрытию).

Термин фармацевтически приемлемый обозначает нетоксичный материал, который не влияет на эффективность биологической активности активного(ых) ингредиента(ов).

Термин введение в отношении соединения, например, молекулы, связывающей IL-17, или другого агента, используют в связи с доставкой такого соединения пациенту любым путем.

Используемое в настоящем описании словосочетание терапевтически эффективное количество относится к количеству антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, которое является эффективным после введения одной или нескольких доз пациенту (такому как человек) для лечения, предупреждения, предотвращения начала, излечивания, отсрочки, уменьшения тяжести, облегчения по меньшей мере одного симптома расстройства или рецидивирующего расстройства или пролонгирования продолжительности существования пациента долее ожидаемого в отсутствие такого лечения. При применении к отдельному активному ингредиенту (например, антителу к IL-17, например, секукинумабу), вводимому одному, термин относится к такому отдельному ингредиенту. При применении к комбинации термин относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые приводят к терапевтическому эффекту, вводятся ли они в комбинации, периодически или одновременно.

Термин лечение или лечить относится как к профилактическому или превентивному, так и к куративному или модифицирующему заболевание лечению, включая лечение пациента в опасности приобретения заболевания или при подозрении в приобретении заболевания, а также пациентов, которые болеют или которым поставлен диагноз как страдающим от заболевания или болезненного состояния, и включает подавление клинического рецидива. Лечение может назначаться пациенту, имеющему болезненное расстройство, или который в конечном счете может приобрести расстройство, для того, чтобы предотвратить, вылечить, отсрочить начало, уменьшить тяжесть или облегчить один или несколько симптомов расстройства или рецидивирующего расстройства, или для того, чтобы пролонгировать продолжительность существования пациента долее ожидаемого в отсутствие такого лечения.

Словосочетание средства введения используют для указания на доступный инструмент введения лекарственного средства пациенту, включая, но не ограничиваясь перечисленным, предварительно заполняемый шприц, флакон и шприц, ручку-инжектор, автоинжектор, i.v. капельницу и мешок, насос, пэтч-насос и т.д.. С такими предметами пациент может сам вводить лекарственное средство (т.е., вводить лекарственное средство самостоятельно), или лекарственное средство может вводить врач. Типично дозировки, заданные в мг/кг, вводят i.v. путем, и дозировки, заданные в мг, вводят i.m. или s.c. инъекциями. В некоторых воплощениях раскрытых способов, наборов, схем и применений антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, доставляют пациенту i.v. путем. В некоторых воплощениях раскрытых способов, наборов, схем и применений антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, доставляют пациенту s.c. путем.

Антитела к IL-17 и их антигенсвязывающие фрагменты

Раскрытые фармацевтические продукты, композиции, жидкие композиции, схемы, процессы, применения, способы и наборы содержат или используют антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент.

В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), включающий гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CGR3, причем указанный CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, указанный CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и указанный CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает по меньшей мере один вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), включающий гипервариабельные участки CDR1', CDR2' и CGR3', причем указанный CDR1' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, указанный CDR2' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и указанный CDR3' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), включающий гипервариабельные участки CDR1-х, CDR2-x и CGR3-x, причем указанный CDR1-x имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, указанный CDR2-x имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и указанный CDR3-x имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.

В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секуки

- 8 033824 нумаб, включает по меньшей мере один V_H домен иммуноглобулина и по меньшей мере один V_L домен иммуноглобулина, причем a) V_H домен иммуноглобулина включает (например, по порядку) i) гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CGR3, причем указанный CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, указанный CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и указанный CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; или ii) гипервариабельные участки CDR1-x, CDR2-X и CGR3-X, причем указанный CDR1-X имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, указанный CDR2-X имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и указанный CDR3-X имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и b) домен V_L иммуноглобулина включает (например, по порядку) гипервариабельные участки CDR1', CDR2' и CGR3', причем указанный CDR1' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, указанный CDR2' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и указанный CDR3' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.

В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает a) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 8; b) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VL), включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 10; c) домен V_H иммуноглобулина, включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 8, и домен V_L иммуноглобулина, включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 10; d) домен V_H иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3; e) домен V_L иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; f) домен V_H иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13; g) домен V_H иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, и домен VL иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; или h) домен V_H иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13, и домен V_L иммуноглобулина, включающий гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6.

Для облегчения обращения к аминокислотным последовательностям гипервариабельных участков моноклонального антитела секукинумаба ниже приводится таблица 1 на основании определения по Кабату и рентгеноструктурного анализа и использования подхода Хотиа и сотрудников.

Таблица 1. Аминокислотные последовательности гипервариабельных участков моноклональных антител секукинумаба

Легкая цепь
CDR1'	Кабат	R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A (SEQ ID NO: 4)
	Хотиа	R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A (SEQ ID NO: 4)
CDR2'	Кабат	G-A-S-S-R-A-T (SEQ ID NO: 5)
	Хотиа	G-A-S-S-R-A-T (SEQ ID NO: 5)
CDR2'	Кабат	Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T (SEQ ID NO: 6)
	Хотиа	Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T (SEQ ID NO: 6)
Тяжелая цепь
CDR1	Кабат	N-Y-W-M-N (SEQ ID NO: 1)
CDR1-	Хотиа	G-F-T-F-S-N-Y-W-M-N (SEQ ID NO: 11)
CDR2	Кабат	A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S-V-K-G (SEQ ID NO: 2)
CDR2-	Хотиа	A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y (SEQ ID NO: 12)
CDR3	Кабат	D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L (SEQ ID NO: 3)
CDR3-	Хотиа	C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L- W-G (SEQ ID NO: 13)

В предпочтительных воплощениях домены константного участка также включают домены кон- 9 033824 стантного участка человека, например, как описано в Sequences of Proteins of Immunological Interest,

Rabat E.A. et al, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of

Health. ДНК, кодирующая VL секукинумаба, представлена в SEQ ID NO: 9. ДНК, кодирующая VH секукинумаба, представлена в SEQ ID NO: 7.

В некоторых воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 10. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 8. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 10 и три CDR SEQ ID NO: 8. CDR SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10 согласно определению как Кабата, так и Хотиа можно найти в табл. 1.

В некоторых воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает легкую цепь SEQ ID NO: 14. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает тяжелую цепь SEQ ID NO: 15. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает легкую цепь SEQ ID NO: 14 и тяжелую цепь SEQ ID NO: 15. В некоторых воплощениях антитело к IL17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 14. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 15. В других воплощениях антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, включает три CDR SEQ ID NO: 14 и три CDR SEQ ID NO: 15. CDR SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 17 согласно определению как Кабата, так и Хотиа можно найти в таблице 1.

Гипервариабельные участки могут ассоциироваться с любым видом каркасных участков, хотя предпочтительно имеют человеческое происхождение. Подходящие каркасные участки описаны в Rabat E.A. et al., цит. выше. Предпочтительным каркасом тяжелой цепи является каркас тяжелой цепи человека, например, каркас антитела секукинумаба. Он состоит, по порядку, из, например, участков FR1 (аминокислоты 1-30 SeQ ID NO: 8), FR2 (аминокислоты 36-49 SEQ ID nO: 8), FR3 (аминокислоты 67-98 SEQ ID NO: 8) и FR4 (аминокислоты 117-127 SEQ ID NO: 8). Принимая во внимание гипервариабельные участки секукинумаба, определенные рентгеноструктурным анализом, другой предпочтительный каркас тяжелой цепи состоит, по порядку, из участков FR1-x (аминокислоты 1-25 SEQ ID NO: 8), FR2-x (аминокислоты 36-49 SEQ ID NO: 8), FR3-x (аминокислоты 61-95 SEQ ID NO: 8) и FR4-X (аминокислоты 119127 SEQ ID NO: 8). Подобным образом, каркас легкой цепи состоит, по порядку, из участков FR1' (аминокислоты 1-23 SEQ ID NO: 10), FR2' (аминокислоты 36-50 SEQ ID NO: 10), FR3' (аминокислоты 58-89 SEQ ID NO: 10) и FR4' (аминокислоты 99-109 SEQ ID NO: 10).

В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, выбирают из человеческого антитела к IL-17, которое включает по меньшей мере а) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которые включают вариабельный домен, включающий, по порядку, гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3 и константную часть или ее фрагмент тяжелой цепи человека, причем указанный CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, указанный CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и указанный CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; и b) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которые включают вариабельный домен, включающий, по порядку, гипервариабельные участки CDR1', CDR2' и CDR3' и константную часть или ее фрагмент легкой цепи человека, причем указанный CDR1' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, указанный CDR2' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и указанный CDR3' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.

В одном воплощении антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, выбирают из одноцепочечной связывающей молекулы, которая включает антигенсвязывающий сайт, включающий a) первый домен, включающий, по порядку, гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанный CDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, указанный CDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и указанный CDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; b) второй домен, включающий, по порядку, гипервариабельные участки CDR1', CDR2' и CDR3', причем указанный CDR1' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, указанный CDR2' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и указанный CDR3' имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и c) пептидный линкер, который соединяет или N-конец первого домена и C-конец второго домена или C-конец первого домена и Nконец второго домена.

С другой стороны, антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, для применения в раскрытых способах может включать производное молекул, установленных в настоящем описании последовательностью (например, пегилированную версию секукинумаба). С другой стороны, V_H или V_L домен антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, для применения в раскрытых способах может иметь V_H и V_L домены, которые, по существу, идентичны V_H и V_L доменам, установленным в настоящем описании (например, доменам, определенным

- 10 033824 в SEQ ID NO: 8 и 10). Человеческое антитело к IL-17, раскрытое в настоящем описании, может включать тяжелую цепь, которая, по существу, идентична тяжелой цепи, установленной как SEQ ID NO: 15, и/или легкую цепь, которая, по существу, идентична легкой цепи, установленной как SEQ ID NO: 14. Человеческое антитело к IL-17, раскрытое в настоящем описании, может включать тяжелую цепь, которая включает SEQ ID NO: 15, и легкую цепь, которая включает SEQ ID NO: 14. Человеческое антитело к IL17, раскрытое в настоящем описании, может включать а) одну тяжелую цепь, которая включает вариабельный домен, имеющий аминокислотную последовательность, по существу, идентичную последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, и константную часть тяжелой цепи человека; и b) одну легкую цепь, которая включает вариабельный домен, имеющий аминокислотную последовательность, по существу, идентичную последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, и константную часть легкой цепи человека. С другой стороны, антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, для применения в раскрытых способах может представлять собой вариант аминокислотной последовательности эталонных молекул, представленных в настоящем описании. Во всех таких случаях производного и вариантов антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, способны ингибировать активность примерно 1 нМ (=30 нг/мл) человеческого IL-17 при концентрации указанной молекулы примерно 50 нМ или меньше, примерно 20 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше, примерно 2 нМ или меньше или предпочтительнее примерно 1 нМ или меньше на 50%, причем указанную ингибирующую активность измеряют по продуцированию IL-6, индуцированному hu-IL-17 в дермальных фибробластах человека.

Ингибирование связывания IL-17 с его рецептором можно удобно проверить в различных анализах, включая такие анализы, как описанные в W0 2006/013107. Термин в той же степени означает, что эталон и дериватизированные молекулы проявляют, по статистике, по существу идентичную активность ингибирования IL-17 в одном из анализов, упомянутых в настоящем описании (см. пример 1 W0 2006/013107). Например, в таком анализе, как описанный в примере 1 в W0 2006/013107, антитело к IL17 или его антигенсвязывающий фрагмент, раскрытые в настоящем описании, типично имеют IC₅₀ для ингибирования человеческого IL-17 в отношении продуцирования IL-6, индуцированного человеческим IL-17 в дермальных фибробластах человека, которые ниже примерно 10 нМ, предпочтительнее, примерно 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или примерно 1 нМ, предпочтительно, по существу такие же, как IC₅₀ соответствующей эталонной молекулы. С другой стороны, используемый анализ может представлять собой анализ конкурентного ингибирования связывания IL-17 растворимыми рецепторами IL-17 (например, конструкции R человеческого IL-17/Fc из примера 1 в WO 2006/013107) и антителами к IL-17 или их антигенсвязывающими фрагментами по раскрытию.

Раскрытие также включает антитела к IL-17 или их антигенсвязывающие фрагменты, например, секукинумаб, в которых один или несколько аминокислотных остатков V_H или V_L домена, типично только несколько (например, 1-10), заменены относительно V_H или V_L домена, представленного как SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 10; например, за счет мутации, например, сайтнаправленного мутагенеза, соответствующих ДНК последовательностей. Раскрытие включает ДНК последовательности, кодирующие такие измененные антитела к IL-17.

Раскрытие также включает антитела к IL-17 или их антигенсвязывающие фрагменты, например, секукинумаб, которые имеют специфичность связывания в отношении человеческого IL-17, в частности, антитела к IL-17, способные ингибировать связывание IL-17 с его рецептором, и антитела к IL-17, способные ингибировать активность 1 нМ (=30 нг/мл) человеческого IL-17 при концентрации указанной молекулы примерно 50 нМ или меньше, примерно 20 нМ или меньше, примерно 10 нМ или меньше, примерно 5 нМ или меньше, примерно 2 нМ или меньше или предпочтительнее примерно 1 нМ или меньше на 50% (причем указанную ингибирующую активность измеряют по продуцированию IL-6, индуцированному hu-IL-17 в дермальных фибробластах человека).

В некоторых воплощениях антитело к IL-17, например, секукинумаб, связывается с эпитопом зрелого человеческого IL-17, включающего Leu74, Tyr85, His86, Met87, Asn88, Val124, Thr125, Pro126, Ile127, Val128, His129 на одной цепи и Tyr43, Tyr44, Arg46, Ala79, Asp80 на другой цепи. Схема нумерации остатков, используемая для определения таких эпитопов, основана на остатке, представляющем собой первую аминокислоту зрелого белка (т.е., IL-17A, утратившего N-концевой сигнальный пептид в 23 аминокислоты и начинающегося с глицина). Последовательность незрелого IL-17A представлена в списке Swiss-Prot Q16552. В некоторых воплощениях антитело к IL-17 имеет K_D примерно 10 0-200 пМ, например, при измерении с помощью Biacore®. В некоторых воплощениях антитело к IL-17 имеет IC₅₀примерно 0,4 нМ для нейтрализации in vitro биологической активности примерно 0,67 нМ человеческого IL-17A. В некоторых воплощениях абсолютная биодоступность введенного подкожно (s.c.) антитела к IL-17 имеет интервал примерно 60 - примерно 80%, например, примерно 76%. В некоторых воплощениях антитело к IL-17, такое как секукинумаб, имеет время полувыведения примерно 4 недели (например, примерно 23 - примерно 35 дней, примерно 23 - примерно 30 дней, например, примерно 30 дней). В некоторых воплощениях антитело к IL-17, такое как секукинумаб, имеет T_max примерно 7-8 дней.

Особенно предпочтительные антитела к IL-17 или их антигенсвязывающие фрагменты, такие как секукинумаб, для применения в раскрытых способах, применениях, наборах и т.д. представляют собой

- 11 033824 человеческие антитела, в особенности, секукинумаб, как описано в примерах 1 и 2 WO 2006/013107 (US 7807155, полностью включенного в настоящее описание в качестве ссылки). Секукинумаб представляет собой рекомбинантное высокоаффинное полноразмерное антитело против человеческого интерлейкина 17А (IL-17A, IL-17) изотипа Igd/каппа, которое в настоящее время проходит клинические испытания для лечения иммуноопосредованных воспалительных состояний. Секукинумаб (см., например, WO 2006/013107 и WO 2007/117749) имеет весьма высокую аффинность в отношении IL-17, т.е., KD примерно 10 0-200 пМ (например, при измерении Biacore®) и IC₅₀ для нейтрализации in vitro биологической активности примерно 0,67 нМ человеческого IL-17A примерно 0,4 нМ. Таким образом, секукинумаб ингибирует антиген в молярном отношении примерно 1:1. Такая высокая аффинность связывания делает антитело секукинумаб особенно подходящим для терапевтических применений. Кроме того, установлено, что секукинумаб имеет очень высокий период полувыведения, т.е., примерно 4 недели, что допускает длительные периоды между введением - исключительное свойство при лечении хронических пожизненных расстройств, таких как псориаз.

Фармацевтические продукты, включающие антитела к IL-17 или их антигенсвязывающие фрагменты

Раскрытие в широком смысле относится к фармацевтическому продукту, включающему контейнер, имеющий свободное пространство с менее примерно 12% кислорода в свободном пространстве и жидкую композицию, размещенную в контейнере, причем указанная жидкая композиция включает вышеописанные антитела к IL-17 или их антигенсвязывающие фрагменты, например, секукинумаб.

Контейнеры

В фармацевтических продуктах по раскрытию используют первичную упаковку, т.е., контейнеры, для хранения, транспортировки и сохранения раскрытых жидких композиций. Фармацевтически приемлемые контейнеры для применения как части раскрытых фармацевтических продуктов включают шприцы (например, доступные от Becton Dickinson, Nuova Ompi, и др.), закрываемые пробками флаконы, картриджи, автоинжекторы, пэтч-насосы и ручки-инжекторы.

Кислород в свободном пространстве

Авторы изобретения определили, что устойчивость антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента (например, секукинумаба) в раскрытой жилкой композиции может быть повышена путем включения определенного стабилизатора (например, метионина), с замещением в то же время кислорода в свободном пространстве фармацевтического продукта инертным газом (например, аргоном, гелием, азотом), предпочтительно N2. Конкретно, авторы изобретения определили, что фармацевтические продукты, имеющие контейнер, который очищали от кислорода, т.е., имеющий менее примерно 12% кислорода в свободном пространстве, имеет улучшенную устойчивость относительно неочищенных продуктов, например, при измерении методом SEC и ОФ-ВЭЖХ.

Изменения содержания кислорода в свободном пространстве с использованием продувки (например, продувки азотом) можно достичь во время стадии наполнения или во время стадии закупорки (или той и другой). Очистки (например, продувки азотом) можно достичь путем активного введения инертного газа (например, с использованием иглы) или во время закупоривания.

В некоторых воплощениях содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 12% (например, менее примерно 10%, менее примерно 8%, менее примерно 6% и т.д.). В некоторых воплощениях содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 6%. Содержание кислорода в свободном пространстве можно контролировать с помощью лазерной абсорбционной спектроскопии или тушения флуоресценции или газовой хроматографии. Следует иметь в виду, что содержание кислорода в свободном пространстве данного контейнера может возрастать со временем, например, из-за просачивания. Таким образом, используемое в настоящем описании словосочетание содержание кислорода в свободном пространстве относится к начальному уровню кислорода в свободном пространстве контейнера после закрытия (например, закупоривания) продукта.

Жидкие композиции

Жидкая композиция по раскрытию включает по меньшей мере одно из антител к IL-17 или один из их антигенсвязывающих фрагментов (например, секукинумаба), которые описаны выше, и по меньшей мере один дополнительный эксципиент, например, буфер, поверхностно-активное вещество и стабилизатор(ы) и т.д.. В некоторых воплощениях жидкая композиция включает по меньшей мере два дополнительных эксципиента, например, буфер и стабилизатор. В некоторых воплощениях жидкая композиция включает буфер, по меньшей мере один стабилизатор и поверхностно-активное вещество.

Как правило, фармацевтическая композиция будет составлена с эксципиентами, которые совместимы с предполагаемым путем введения (например, пероральные композиции, как правило, включают инертный разбавитель или съедобный носитель). Примеры путей введения включают парентеральный (например, внутривенный), интрадермальный, подкожный, пероральный (например, через рот или путем ингаляции), трансдермальный (топический), трансмукозальный и ректальный пути. Жидкие композиции антител по настоящему раскрытию подходят для парентерального введения, такого как внутривенная, внутримышечная, интраперитонеальная или подкожная инъекция, и особенно подходят для подкожной инъекции.

- 12 033824

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 86% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере примерно 76% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев (предпочтительно по меньшей мере примерно 76%) и/или по меньшей мере примерно 60% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев. В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 84% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 77% чистоту по СЕХ после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере примерно 62% чистоту по СЕХ после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере примерно 50% чистоту по СЕХ после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев. В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 73% чистоту по СЕХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 98% чистоту по SEC после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере примерно 96% чистоту по SEC после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере примерно 94% чистоту по SEC после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев. В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 97% чистоту по SEC после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 97% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере примерно 95% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере примерно 94% (предпочтительно по меньшей мере 92%) чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев. В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 97% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет менее примерно 0,57% примесей по CE-SDS (в условиях восстановления) после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, менее примерно 1,1% примесей по CE-SDS (в условиях восстановления) после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или менее примерно 1,9% примесей по CE-SDS (в условиях восстановления) после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев. В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет менее примерно 0,91% примесей по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

В некоторых воплощениях жидкая композиция по раскрытию сохраняет по меньшей мере примерно 88% относительной биологической активности - ингибирования высвобождения IL-6 из хондроцитов C-20/A4 после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев, по меньшей мере примерно 94% относительной биологической активности - ингибирования высвобождения IL-6 из хондроцитов после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере примерно 8 5% относительной биологической активности - ингибирования высвобождения IL-6 из хондроцитов после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев.

Концентрация антител

Антитело к IL-17 или его антигенсвязывающие фрагменты (например, секукинумаб), используемые в раскрытых жидких композициях, описаны выше. Предпочтительная композиция включает секукинумаб. Авторы изобретения установили, что по меньшей мере в пределах интервала от примерно 25 мг/мл до примерно 150 мг/мл концентрация антител не оказывает существенного влияния на устойчивость композиции. Поэтому в некоторых воплощениях антитела в жидкой композиции присутствуют в концентрации по меньшей мере 25 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл). В некоторых воплощениях концентрация антител в жидкой композиции является высокой концентрацией - по меньшей мере примерно 25 мг/мл, по меньшей мере примерно 50 мг/мл, по меньшей мере примерно 75 мг/мл, по меньшей мере примерно 100 мг/мл или по меньшей мере примерно 150 мг/мл. В некоторых воплощениях концентрация антител в жидкой композиции является высокой концентрацией: примерно 25 мг/мл примерно 150 мг/мл. В одном воплощении концентрация секукинумаба в жидкой композиции составляет примерно 25 мг/мл. В одном воплощении концентрация секукинумаба в жидкой композиции составляет примерно 150 мг/мл.

Буферы и pH

Подходящие буферирующие агенты для применения с раскрытыми жидкими композициями включают, но не ограничиваются перечисленным, глюконатный буфер, гистидиновый буфер, цитратный буфер, фосфатный [например, натриевый или калиевый] буфер, сукцинатный [например, натриевый] буфер, ацетатный буфер, трис-буфер, глицин, аргинин и их комбинации. Авторы изобретения установили, что сукцинатный или ацетатный буфер не оказывает благоприятного влияния на устойчивость жидкой композиции секукинумаба. Цитратный буфер оценен как благоприятный в композициях с учетом про- 13 033824 дуктов разложения по SEC и кислотной СЕХ и продуктов агрегации по ОФ-ВЭЖХ. В целом гистидиновый буфер показывает преимущества по продуктам агрегации и разложения по SEC, кислотной СЕХ и

RP-B. Таким образом, гистидиновый буфер является предпочтительным буфером для раскрытых устойчивых жидких композиций секукинумаба.

Гистидиновый буфер (например, в концентрации примерно 5 мМ - примерно 50 мМ, например, примерно 20 мМ - примерно 50 мМ, например, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ) является особенно применимым. В одном воплощении устойчивая жидкая композиция включает примерно 20 мМ - примерно 50 мМ гистидинового буфера. В жидкой композиции pH может находиться в интервале 4,0-8,0, причем типичным является pH в интервале примерно 5,5 - примерно 7,4, например, примерно 5,2 - примерно 6,2, примерно 5,2 - примерно 5,8, например, составлять примерно 5,2, примерно 5,3, примерно 5,4, примерно 5,5, примерно 5,6, примерно 5,7, примерно 5,8, примерно 5,9, примерно 6, примерно 6,2, примерно 6,4, примерно 6,6, примерно 6,7, примерно 6,8, примерно 6,9, примерно 7,0, примерно 7,1, примерно 7,2, примерно 7,3, примерно 7,4. Авторы изобретения установили, что при возрастании pH от 5,2 до 5,8 наблюдается положительная тенденция в устойчивости (SEC-AP, DLS, SEC-DP, ALP-DP, СЕХ щелочная, ОФ-ВЭЖХ). В целом испытания показывают, что идеальным pH композиции для раскрытых жидких композиций является 5,8. Так, в одном воплощении pH устойчивой жидкой композиции антител составляет примерно 5,8.

Поверхностно-активные вещества

Походящие поверхностно-активные вещества для применения с раскрытыми жидкими композициями включают, но не ограничиваются перечисленным, неионогенные поверхностно-активные вещества, ионогенные поверхностно-активные вещества, цвиттерионные поверхностно-активные вещества и их комбинации. Типичные поверхностно-активные вещества для применения с изобретением включают, но не ограничиваются перечисленным, эфиры жирных кислот сорбитана (например, сорбитанмонокаприлат, сорбитанмонолаурат, сорбитанмонопальмитат), сорбитантриолеат, эфиры жирных кислот и глицерина (например, монокаприлат глицерина, мономиристат глицерина, моностеарат глицерина), полиглицериновые эфиры жирных кислот (например, декаглицерилмоностеарат, декаглицерилдистеарат, декаглицерилмонолинолеат), полиоксиэтиленсорбитановые эфиры жирных кислот (например, полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат, полиоксиэтиленсорбитанмоностеарат, полиоксиэтиленсорбитанмонопальмитат, полиоксиэтиленсорбитантриолеат, полиоксиэтиленсорбитантристеарат), полиоксиэтиленсорбитоловые эфиры жирных кислот (например, полиоксиэтиленсорбитолтристеарат, полиоксиэтиленсорбитолтриолеат), полиоксиэтиленглицериновые эфиры жирных кислот (например, полиоксиэтиленглицерилмоностеарат), полиэтиленгликолевые эфиры жирных кислот (например, полиэтиленгликольдистеарат), полиоксиэтиленалкиловые эфиры (например, полиоксиэтиленлауриловый эфир), полиоксиэтилен-полиоксипропиленалкиловые эфиры (например, полиоксиэтилен-полиоксипропиленгликоль, полиоксиэтилен-полиоксипропиленпропиловый эфир, полиоксиэтилен-полиоксипропиленцетиловый эфир), полиоксиэтилен-полиоксипропиленалкилфениловые эфиры (например, полиоксиэтилен-полиоксипропиленнонилфениловый эфир), полиоксиэтиленгидрированное касторовое масло (например, полиоксиэтиленкасторовое масло, полиоксиэтиленгидрированное касторовое масло), полиоксиэтилированные производные пчелиного воска (например, полиоксиэтиленсорбитоловый пчелиный воск), полиоксиэтилированные производные ланолина (например, полиоксиэтиленланолин) и полиоксиэтиленамиды жирных кислот (например, полиоксиэтиленамид стеариновой кислоты), (С10С18)алкилсульфаты (например, цетилсульфат натрия, лаурилсульфат натрия, олеилсульфат натрия), сульфат простого полиоксиэтилен(С10-С18)алкилэфира с добавленными в среднем 2-4 молями этиленоксидных звеньев (например, полиоксиэтиленлаурилсульфат натрия) и соли (С1-С18)алкилсульфосукцинатных эфиров (например, натрийлаурилсульфосукцинатного эфира), и природные поверхностноактивные вещества, такие как лецитин, глицерофосфолипид, сфингофосфолипиды (например, сфингомиелин) и эфиры сахарозы и С12-С18 жирных кислот. Композиция может включать одно или несколько таких поверхностно-активных веществ. Предпочтительными поверхностно-активными веществами являются полоксамер (например, полоксамер 188) или полиоксиэтиленсорбитановые эфиры жирных кислот, например, полисорбат 20, 40, 60 или 80. Полисорбат 80 (твин 80) (например, в концентрации примерно 0,01-0,1% (мас./об.), например, примерно 0,01% - примерно 0,04% (мас./об.), например, примерно 0,01%, примерно 0,02%, примерно 0,04%, примерно 0,06%, примерно 0,08%, примерно 0,1%) является особенно применимым. В одном воплощении устойчивая жидкая композиция включает примерно 0,02% (мас./об.) полисорбата 80. В одном воплощении устойчивая жидкая композиция включает примерно 0,02% (мас./об.) полисорбата 20.

Авторы изобретения установили, что имеет место существенное увеличение мутности, а также увеличение количества видимых частиц в жидкой композиции, лишенной поверхностно-активного вещества. Однако не отмечено преимущество полоксамера 188 по сравнению с полисорбатом 20 и 80, за исключением возрастания в ALP-DP и RP. Полисорбат 20 и 80 показывают сравнимую эффективность в предупреждении увеличения мутности, субвидимых и видимых частиц. Таким образом, полисорбат 20 и 80 являются предпочтительными поверхностно-активными веществами для применения в раскрытых жид- 14 033824 ких композициях.

Ст абилизаторы

Стабилизаторы способствуют предотвращению окисления и агрегации белков в фармацевтических композициях, в частности, жидких фармацевтических композициях, которые имеют более короткий срок хранения из-за склонности белков окисляться и/или образовывать агрегаты в водных растворах. Можно использовать различные аналитические методы для оценки устойчивости данной композиции, например, можно использовать ОФ-ВЭЖХ для оценки уровня продуктов окисления (перед главными пиками) в жидких композициях, раскрытых в настоящем описании, в то время как SEC можно использовать для анализа уровня агрегации в жидких композициях, раскрытых в настоящем описании.

Подходящие стабилизаторы для применения в раскрытых жидких композициях включают ионные и неионные стабилизаторы (и их комбинации), например, сахара, глицин, хлорид натрия, аргинин, ЭДТК, аскорбат натрия, цистеин, бисульфат натрия, цитрат натрия, метионин и бензиловый спирт. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция будет содержать по меньшей мере один стабилизатор из группы 1 (например, сахара [например, трегалозу, маннит], аминокислоты [например, глицин, аргинин] и хлорид натрия). В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция будет содержать по меньшей мере один стабилизатор из группы 2 (ЭДТК, аскорбат натрия, цистеин, бисульфат натрия, цитрат натрия, метионин и бензиловый спирт). Стабилизаторы группы 2 имеют склонность обладать антиокислительными свойствами, которые могут уменьшить окисление остатков в антителах к IL17. В предпочтительных воплощениях жидкая фармацевтическая композиция будет содержать два стабилизатора -один из группы 1 и один из группы 2.

В случае стабилизатора группы 1 предпочтительны неионные стабилизаторы. Подходящие неионные стабилизаторы включают моносахариды, дисахариды и трисахариды, например, трегалозу, раффинозу, мальтозу, сорбит или маннит. Сахар может представлять собой сахарный спирт или аминосахар. Концентрация стабилизатора группы 1 может составлять примерно 175 мМ - примерно 350 мМ, например, примерно 200 мМ - примерно 300 мМ, например, примерно 250 мМ - примерно 270 мМ, например, примерно 180 мМ - примерно 300 мМ, примерно 200 мМ - примерно 225 мМ, примерно 175 мМ, примерно 180 мМ, примерно 185 мМ, примерно 190 мМ, примерно 195 мМ, примерно 200 мМ, примерно 225 мМ, примерно 250 мМ, примерно 270 мМ, примерно 275 мМ, примерно 300 мМ. Особенно применимы маннит в концентрации примерно 200 мМ - примерно 300 мМ (например, примерно 250 мМ - примерно 270 мМ), трегалоза в концентрации примерно 180 мМ - примерно 300 мМ, например, примерно 200 мМ - примерно 225 мМ, хлорид натрия в концентрации примерно 130 мМ - примерно 150 мМ, аргинин в концентрации примерно 160 мМ, глицин в концентрации примерно 270 мМ.

Авторы изобретения установили, что глицин как стабилизатор (группа 1) является несколько более выгодным согласно SEC-AP и DLS, но отмечают возрастание количества почти всех продуктов разложения. NaCl как стабилизатор (группа 1) ведет к возрастанию количества продуктов разложения и агрегации согласно SEC и щелочным вариантам СЕХ. Трегалоза и маннит действуют как сравнимые благоприятные стабилизаторы, что подтверждают почти все методы анализа, но маннит показывает несколько меньшее действие (SEC-AP, DLS) плюс меньшую растворимость в воде по сравнению с трегалозой. Таким образом, трегалоза является предпочтительным стабилизатором группы 1 из-за положительного действия на продукты разложения. В одном воплощении жидкая композиция включает примерно 200 мМ примерно 225 мМ трегалозы. В одном воплощении жидкая композиция включает примерно 200 мМ трегалозы. В одном воплощении жидкая композиция включает примерно 225 мМ трегалозы.

Авторы изобретения установили, что имеется существенное влияние группы 2 на устойчивость жидких композиций секукинумаба. Авторы изобретения в экспериментах показали, что если стабилизатор группы 2 не используют, показатели (SEC-AP, DLS, мутность, RP-B) хуже по сравнению с композициями, содержащими стабилизатор группы 2. Тетранатрий ЭДТК и цистеин показывают возрастание агрегации и продукта разложения в соответствующих методах анализа. Добавление цистеина как стабилизатора группы 2 приводит к мутной композиции после нагрузки замораживание-оттаивание и осаждению при хранении в пределах 4 недель при 40°C. Однако авторы изобретения определили, что метионин является выгодным во всех композициях невзирая на метод анализа. Поэтому в случае стабилизатора группы 2 предпочтительным является метионин, который также имеет антиокислительные свойства. Концентрация стабилизатора группы 2 (например, метионина) может составлять по меньшей мере примерно 2,5 мМ, например, примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ, например, по меньшей мере примерно 2,5 мМ, по меньшей мере примерно 5 мМ, по меньшей мере примерно 10 мМ, по меньшей мере примерно 20 мМ (например, примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ). В предпочтительных воплощениях жидкая фармацевтическая композиция будет содержать и по меньшей мере один стабилизатор из группы 1 и метионин. В некоторых воплощениях раскрытые жидкие композиции включают примерно 5 мМ метионина.

Другие эксципиенты

Жидкие композиции антител по раскрытию могут включать дополнительные эксципиенты, например, дополнительные буферы, соли (например, хлорид натрия, сукцинат натрия, сульфат натрия, хлорид калия, хлорид магния, сульфат магния и хлорид кальция), дополнительные стабилизаторы, модификатор

- 15 033824 тоничности (например, соли и аминокислоты [например, пролин, аланин, L-аргинин, аспарагин, Lаспарагиновую кислоту, глицин, серии, лизин и гистидин|). глицерин, альбумин, спирты, консерванты, дополнительные поверхностно-активные вещества, антиоксиданты и т.д.. Основательное обсуждение таких дополнительных фармацевтических ингредиентов доступно в Gennaro (2000), Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th edition, ISBN: 0683306472.

Дополнительные активные ингредиенты

Фармацевтические продукты и устойчивые жидкие композиции по раскрытию могут содержать, кроме антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, один или несколько других активных агентов (например, средств против псориаза, средств против артрита, средств против анкилозирующего спондилита, средств против ревматоидного артрита). Такие дополнительные факторы и/или агенты можно включать в фармацевтическую композицию для получения синергичного действия с антителами к IL-17 или их антигенсвязывающими фрагментами или минимизации побочного действия, вызываемого антителами к IL-17 или их антигенсвязывающими фрагментами, например, секукинумабом.

Примеры средств против псориаза, которые могут быть включены в препарат совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, включают циклоспорин, метотрексат, микофенолата мофетил, микофеноловую кислоту, сульфазалазин, 6-тиогуанин, фумараты (например, диметилфумарат и эфиры фумаровой кислоты), азатиоприн, кортикостероиды, лефлуномид, такролимус, Т-клеточные блокаторы (такие как амевив® (алефацепт) и раптива® (эфализумаб), блокаторы фактора некроза опухоли альфа (TNF-альфа) (такие как энбрел® (этанерцепт), хумира® (адалимумаб), ремикад® (инфликсимаб) и симпон® (голимумаб)) и блокаторы интерлейкина 12/23 (такие как стелара® (устекинумаб), тазоцитиниб и бриакинумаб.

Другие средства против псориаза, которые для лечения псориаза могут быть включены в препарат совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, включают апремиласт, мометазон, воклоспорин, кетоконазол, Neuroskin Forte, рекомбинантный человеческий интерлейкин-10, МК3222, тофацитиниб, VX-795, MED-I545, флуфеназина деканоат, ацетаминофен, бимосиамоза крем, доксициклин, ванкомицин, AbGn168, витамин D3, RO5310074, флударабин, кальципотриол и гидрокортизон (LEO 80190), Focetria (моновалентая вакцина, усиленная MF59), вектор для генной терапии tgAAC94, капсаицин, Psirelax, АВТ-874 (анти-Ш-12), IDEC-114, MEDI-522, LE29102, BMS 587101, CD 2027, CRx191, 8-метоксипсорален или 5-метоксипсорален, бициллин L-A, LY2525623, INCB018424, LY2439821, СЕР-701, CC-10004, цертолизумаб (CZP), GW786034 (пазопаниб), комплекс доксициклин-куркуминоиды C3, NYC 0462, RG3421, hOKT3-гамма-1(Ala-Ala), BT061, теплизумаб, хондроитина сульфат, CNTO 1275, моноклональное антитело к субъединицам IL-12p40 и IL-23 р40, BMS-582949, MK0873, MEDI-507, M518101, АВТ-874, AMG 827, AN2728, AMG 714, AMG 139, РТН (1-34), пенка U0267, CNTO 1275, QRX-101, CNTO 1959, LEO 22811, имквимод, CTLA4Ig, водоросль Dunaliella Bardawil, пиоглитазон, пимекролимус, ранибизумаб, зидовудин CDP870 (цертолизумаб пэгол), онерсепт (r-hTBP-1), ACT-128800, 4,4-диметилбензизо-2Н-селеназин, CRx-191, CRx-197, доксеркальциферол, LAS 41004, WBI-1001, такролимус, RAD001, рапамицин, розиглитазон, пиоглитазон, АВТ-874, аминоптерин, AN2728, CD2027, АСТ128800, мометазона фуроат, СТ 327, клобетазол+LCD, ВТТ1023, Е6201, топический витамин В12, IP10.C8, BFH772, LEO 22811, флуфеназин, ММ-093, клобекс, SCH 527123, CF101, SRT2104, BIRT2584, СС10004, тетратиомолибдат, СР-690,550, U0267, ASP015K, VB-201, ацитретин (также называемый U0279), RWJ-445380, клобетазола пропионат, ботулиновый токсин типа А, алефацет, эрлотиниб, ВСТ194, рофлумиласт, CNTO 1275, галобетазол, ILV-094, CTA018 крем, COL-121, MEDI-507, AEB071.

Другие средства против псориаза, которые могут быть включены в препарат совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, включают антагонисты IL-6, антагонисты CD20, антагонисты CTLA4, антагонисты IL-17, антагонисты IL-8, антагонисты IL-21, антагонисты IL-22, антагонисты VGEF, антагонисты CXCL, антагонисты ММР, антагонисты дефенсина, антагонисты IL-1-бета и антагонисты IL-23 (например, ловушки рецепторов, антагонистические антитела и т.д.).

Предпочтительными средствами против псориаза, которые могут быть включены в препарат совместно с секукинумабом, являются DMARD (например, МТХ и циклоспорин), антагонисты IL-12/-23 (например, устекинумаб), антагонисты CTLA-4 (например, CTLA4-Ig) и антагонисты TNF-альфа.

Коротко говоря, средствами против ревматоидного артрита, псориатического артрита и анкилозирующего спондилита, которые могут быть включены в препарат совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, могут являться, inter alia, иммуносупрессивное средство, DMARD, лекарственное средство для устранения боли, стероид, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокина, анаболик костной ткани, антирезорбционное средство и их комбинации. Характерные средства включают циклоспорин, ретиноиды, кортикостероиды, производные пропионовой кислоты, производные уксусной кислоты, производные еноловых кислот, производные фенаминовой кислоты, ингибиторы Cox-2, люмиракоксиб, ибупрофен, холинсалицилат магния, фенопрофен, салсалат, дифунизал, толметин, кетопрофен, флурбипрофен, оксапрозин, индометацин, сулиндак, этодолак, кеторолак, набуметон, напроксен, вальдекоксиб, эторикоксиб, МК0966; рофекоксиб, ацетами- 16 033824 нофен, колекоксиб, диклофенак, трамадол, пироксикам, мелоксикам, теноксикам, дроксикам, лорноксикам, изоксикам, мефанаминовая кислота, меклофенаминовая кислота, флуфенаминовая кислота, толфенаминовая кислота, парекоксиб, аспирин, фирококсиб, метотрексат (МТХ), противомалярийные лекарственные средства (например, гидрохлорохин и хлорохин), сульфасалазин, лефлуномид, азатиоприн, соли золота, миноциклин, циклофосфамид, D-пеницилламин, ауранофин, такролимус, миокризин, хлорамбуцил, антагонисты TNF-альфа (например, антагонисты TNF-альфа или антагонисты рецептора TNFальфа), например, аналимумаб (хумира®), этанерцепт (энбрел®), инфликсимаб (ремикад®; ТА-650), цертолизумаб пэгол (цимзия®; CDP870), голимумаб (симпони®; CNTO148), анакинра (кинерет®), ритуксимаб (ритуксан®; матера®), абатацепт (оренсия®), тоцилизумаб (роактерма/актерма®), антагонисты интегрина (тизабри® (натализумаб)), антагонисты IL-1 (ACZ885 (иларис)), антагонисты CD4, антагонисты IL-23, антагонисты IL-20, антагонисты IL-6, антагонисты BLyS (например, атацицепт, бенлиста®/лимфостат-В® (белимумаб)), ингибиторы р38, антагонисты CD20 (окрелизумаб, офатумумаб, (арзерра®)), антагонисты интерферона-гамма (фонтолизумаб), преднизолон, преднизон, дексаметазон, кортизол, кортизон, гидрокортизон, метилпреднизолон, бетаметазон, триамцинолон, беклометазон, флудрокортизон, дезоксикартикостерон, альдостерон, SB-681323, Rob 803, AZD5672, AD 452, SMP 114, HZT501, CP-195,543, доксициклин, ванкомицин, CRx-102, AMG108, пиоглитазон, SBI-087, SCIO-469, Cura100, онкоксин+виузид, TwHF, PF-04171327, AZD5672, метоксален, ARRY-438162, витамин D - эргокальциферол, милнацепран, паклитаксел, GW406381, розиглитазон, SC12267 (4SC-101); LY2439821, ВТТ1023, ERB-041, ERB-041, KB003, CF101, ADL5859, МР-435, ILV-094, GSK706769, GW856553, ASK8007, MOR103, НЕ3286, СР-690,550 (тазоцитиниб), REGN88 (SAR153191), TRU-015, BMS-582949, SBI-087, LY2127399, E-551S-551, Н-551, GSK3152314A, RWJ-445380, такролимус (програф®), RAD001, рапамун, рапамицин, фостаматиниб, фентанил, ХОМА 052, CNTO 136, JNJ 38518168, иматиниб, ATN-103, ISIS 104838, фолиевая кислота, фолат, TNFa kinoid, ММ-093, коллаген типа II, VX-509, AMG 827 70, мазитиниб (АВ1010), LY2127399, SB-681323, MK0663, NNC 0151-0000-0000, ATN-103, ССХ 354-С, САМ3001, LX3305, цетрореликс, MDX-1342, TMI-005, МК0873, CDP870, траниласт, CF101, микофеноловая кислота (и ее эфиры), VX-702, GLPG0259, SB-681323, BG9924, ART621, LX3305, Т-614, динатрий фостаматиниба (R935788), CCI-779, ARRY-371797, CDP6038, AMG719, BMS-582949, GW856553, СН-4051, СЕ-224,535, GSK1827771, GW274150, BG9924, PLX3397, TAK-783, INCB028050, LY2127399, LY3009104, R788, куркумин (лонгвида™), розувастатин, PRO283698, AMG 714, MTRX1011A, маравирок, MEDI-522, МКОббЗ, STA 5326 мезилат, СЕ-224,535, AMG108, BG00012 (BG-12; Biogen), рамиприл, VX-702, CRx-102, LY2189102, SBI-087, SB-681323, CDP870, милнаципран, PD 0360324, РН-797804, АК106-001616, PG760564, PLA-695, MK0812, ALD518, кобипростон, соматропин, вектор генной терапии tgAAC94, MK0359, GW856553, эзомепразол, эверолимус, трастузумаб, анаболики для костной ткани и антирезорбционные средства (например, РТН, биофосфонаты (например, золедроновая кислота), ингибиторы JAK1 и JAK2, ингибиторы pan JAK, например, тетрациклический пиридон 6 (P6), 325, PF-956980, антагонисты склеростина (например, раскрытые в WO09047356, WO2000/32773, WO2006102070, US20080227138, US20100028335, US 20030229041, WO2005003158, WO2009039175 WO2009079471, WO03106657, WO2006119062, WO08115732, WO2005/014650, WO2005/003158, WO2006/119107, WO2008/061013, WO2008/133722, WO2008/115732, US7592429, US7879322, US7744874, полностью включенных в настоящее описание в качестве ссылок [предпочтительные антитела против склеростина и их антигенсвязывающие части для применения в раскрытых способах, фармацевтических композициях, наборах и применениях описаны в WO09047356 (соответствует US7879322), WO06119107 (соответствует US7872106 и US 7592429) и WO08115732 (соответствует US7744874]), денозумаб, антагонисты IL-6, антагонисты CD20, антагонисты CTLA4, антагонисты IL-8, антагонисты IL-21, антагонисты IL-22, антагонисты интегрина (тизабри® (натализумаб)), антагонисты VGEF, антагонисты CXCL, антагонисты ММР, антагонисты дефензина, антагонисты IL-1 (в том числе, антагонисты IL-1-бета) и антагонисты IL-23 (например, ловушки рецепторов, антагонистические антитела и т.д.). Предпочтительные средства против ревматоидного артрита, которые можно включать в препараты совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, являются DMARD, такие как метотрексат, и антагонисты TNF-альфа. Предпочтительные средства против анкилозирующего спондилита, которые можно включать в препараты совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, являются NSAID, DMARDS, такие как сульфасалазин, и антагонисты TNF-альфа. Предпочтительные средства против псориатического артрита, которые можно включать в препараты совместно с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб, являются DMARDS, такие как циклоспорин, блокаторы CTLA-4 (например, CLTA4-Ig), алефацепт и антагонисты TNF-альфа.

Специалист в данной области техники сможет выделить соответствующие дозировки указанных выше средств для совместной композиции с раскрытыми антителами к IL-17, такими как секукинумаб.

В настоящем описании раскрыты устойчивые жидкие фармацевтические композиции, включающие примерно 20 мг/мл примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба), примерно 10 мМ - примерно 30 мМ буфера (например, гистидина), pH 5,2 - примерно 6,0, пример- 17 033824 но 200 мМ - примерно 225 мМ стабилизатора (например, трегалозы), примерно 0,02% поверхностноактивного вещества (например, полисорбата 80) и примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ метионина.

В некоторых воплощениях концентрация метионина в жидкой фармацевтической композиции раскрытого фармацевтического продукта составляет примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ, предпочтительно, примерно 5 мМ. В некоторых воплощениях pH жидкой фармацевтической композиции составляет примерно 5,8. В некоторых воплощениях концентрация секукинумаба в раскрытой композиции составляет примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает буфер, выбранный из группы, включающей гистидиновый буфер, цитратный буфер, ацетатный буфер и сукцинатный буфер. В некоторых воплощениях в жидкой фармацевтической композиции используют гистидиновый буфер в концентрации примерно 20 мМ. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает поверхностноактивное вещество, выбранное из полисорбата и полоксамера. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция дополнительно включает поверхностно-активное вещество, выбранное из полисорбата 80, полисорбата 20 и полоксамера 188. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает полисорбат 80 в концентрации примерно 0,01% (мас./об.) -примерно 0,04% (мас./об.), предпочтительно примерно 0,02% (мас./об.). В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает полисорбат 20 в концентрации примерно 0,02% (мас./об.). В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает стабилизатор, выбранный из группы, включающей маннит, хлорид натрия, трегалозу, аргинин.НС1 и глицин. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция включает трегалозу в концентрации примерно 180 мМ - примерно 300 мМ, предпочтительно, примерно 200 мМ или примерно 225 мМ.

В настоящем описании раскрыты фармацевтические продукты, включающие контейнер, имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 12%, и жидкую фармацевтическую композицию, имеющую pH примерно 5,2 - примерно 6,2, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция включает примерно 20 мг/мл примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба); и примерно 2,5 примерно 20 мМ L-метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

В некоторых воплощениях концентрация метионина в жидкой фармацевтической композиции раскрытого фармацевтического продукта составляет примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ, предпочтительно, примерно 5 мМ. В некоторых воплощениях содержание кислорода в свободном пространстве раскрытого фармацевтического продукта составляет менее примерно 10%, например, менее примерно 8%, предпочтительно менее примерно 6%. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта имеет pH примерно 5,8. В некоторых воплощениях концентрация секукинумаба в жидкой фармацевтической композиции раскрытого фармацевтического продукта составляет примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта дополнительно включает буфер, выбранный из группы, включающей гистидиновый буфер, цитратный буфер, ацетатный буфер и сукцинатный буфер. В некоторых воплощениях в жидкой фармацевтической композиции раскрытого фармацевтического продукта используют буфер в концентрации примерно 10 мМ примерно 30 мМ. В некоторых воплощениях в жидкой фармацевтической композиции раскрытого фармацевтического продукта используют гистидиновый буфер в концентрации примерно 20 мМ. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта дополнительно включает поверхностно-активное вещество, выбранное из группы, включающей полисорбат и полоксамер. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта дополнительно включает поверхностно-активное вещество, выбранное из полисорбата 80, полисорбата 20 и полоксамера 188. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта включает полисорбат 80 в концентрации примерно 0,01% (мас./об.) -примерно 0,04% (мас./об.), предпочтительно примерно 0,02% (мас./об.). В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта включает полисорбат 20 в концентрации примерно 0,02% (мас./об.). В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта дополнительно включает стабилизатор, выбранный из группы, включающей маннит, хлорид натрия, трегалозу, аргинин.НС1 и глицин. В некоторых воплощениях жидкая фармацевтическая композиция раскрытого фармацевтического продукта дополнительно включает трегалозу в концентрации примерно 180 мМ - примерно 300 мМ, предпочтительно, примерно 200 мМ или примерно 225 мМ. В некоторых воплощениях контейнер раскрытого фармацевтического продукта представляет собой картридж, шприц, ручку или флакон.

В настоящем описании раскрыты фармацевтические продукты, включающие контейнер, имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 6%, и жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция включает примерно 20 мг/мл - примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл

- 18 033824

- примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба), примерно 10 мМ - примерно 30 мМ гистидина, pH 5,8, примерно 200 мМ - примерно 225 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80 и примерно 2,5 - примерно мМ метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

В некоторых воплощениях фармацевтический продукт включает примерно 25 мг/мл секукинумаба и примерно 225 мМ трегалозы. В некоторых воплощениях фармацевтический продукт включает примерно 150 мг/мл секукинумаба и примерно 200 мМ трегалозы. В некоторых воплощениях контейнер раскрытого фармацевтического продукта представляет собой картридж, шприц, ручку или флакон.

В некоторых воплощениях фармацевтический продукт имеет достаточное количество антагониста IL-17 для доставки по меньшей мере примерно 75 мг - примерно 300 мг антагониста IL-17 (например, антитела к IL-17, например, секукинумаба) на стандартную дозу. В некоторых воплощениях фармацевтический продукт имеет достаточное количество антагониста IL-17 (например, антитела к IL-17, например, секукинумаба) для доставки по меньшей мере примерно 10 мг/кг на стандартную дозу. В некоторых воплощениях фармацевтический продукт получен в дозировке для возможности внутривенной доставки примерно 10 мг/кг антагониста IL-17 (например, антитела к IL-17, например, секукинумаба) на стандартную дозу. В некоторых воплощениях фармацевтический продукт получен в дозировке для возможности подкожной доставки примерно 75 мг - примерно 300 мг антагониста IL-17 (например, антитела к IL-17, например, секукинумаба) на стандартную дозу.

Способы получения жидких композиций и фармацевтических продуктов

В настоящем описании также описываются способы получения фармацевтических продуктов и жидких композиций по раскрытию. Эти способы способствуют снижению окисления раскрытых антител к IL-17. Коротко, жидкую композицию получают путем объединения нужных эксципиентов (например, стабилизатора группы 1 (например, трегалозы), стабилизатора группы 2 (метионина), поверхностноактивного вещества (например, PS80), буфера (например, гистидина)) с антителом к IL-17 или его антигенсвязывающим фрагментом (например, секукинумабом) в нужной концентрации (например, примерно 25 - примерно 150 мг/мл секукинумаба, примерно 20 мМ гистидина, pH 5,8, примерно 200 мМ - примерно 225 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80 и примерно 2,5 мМ -примерно 20 мМ метионина) и pH (например, примерно 5,8). Затем такую жидкую композицию помещают в выбранный контейнер (например, флакон, шприц, картридж [например, для применения в автоинжекторе]). Содержание кислорода в свободном пространстве доводят до нужного уровня (например, менее примерно 12%, менее 10%, менее примерно 8%, менее примерно 6% и т.д.), что можно осуществить до заполнения контейнера жидкой композицией, во время заполнения контейнера жидкой композицией или во время закупорки/герметического закрытия контейнера.

В настоящем описании раскрываются способы уменьшения окисления секукинумаба, включающие получение жидкой композиции, имеющей pH примерно 5,2 - примерно 6,2 и включающей примерно 25 примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба), и примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ метионина; причем указанную жидкую композицию размещают в контейнере, имеющем свободное пространство, и доводят содержание кислорода в свободном пространстве до уровня, равного или меньше примерно 12%.

В некоторых воплощениях раскрытых способов регулирование на стадии с) выполняют путем продувки свободного пространства с использованием инертного газа. В некоторых воплощениях раскрытых способов инертным газом является азот или аргон. В некоторых воплощениях раскрытых способов концентрация метионина в жидкой композиции составляет примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ, предпочтительно примерно 5 мМ. В некоторых воплощениях раскрытых способов содержание кислорода в свободном пространстве регулируют до менее примерно 10%, например, до менее примерно 8%, предпочтительно до менее примерно 6%. В некоторых воплощениях раскрытых способов жидкая композиция имеет pH примерно 5,8. В некоторых воплощениях раскрытых способов концентрация секукинумаба в жидкой композиции составляет примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл. В некоторых воплощениях раскрытых способов контейнер представляет собой картридж, шприц, ручку или флакон.

Способы применения фармацевтических продуктов и жидких композиций

Раскрытые фармацевтические продукты и жидкие композиции будут применяться для лечения пациентов, например, имеющих аутоиммунные заболевания (например, псориаз, ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит, псориатический артрит и т.д.). Соответствующая дозировка конечно будет изменяться в зависимости от, например, используемых определенных антител к IL-17 или их антигенсвязывающих фрагментов, например, секукинумаба, реципиента, способа введения и характера и тяжести состояния, от которого лечат, и от характера предшествующего лечения, которому подвергался пациент. В конечном итоге лечащий врач будет решать вопрос о количестве антител к IL-17, которое нужно для лечения каждого отдельного пациента. В некоторых воплощениях лечащий врач может назначить низкие дозы антитела к IL-17 и наблюдать за реакцией пациента. В других воплощениях начальная(ые) доза(ы)

- 19 033824 антитела к IL-17, вводимая(ые) пациенту, является(ются) высокой(ими) и затем снижается(ются) до появления признаков рецидива. Более высокие дозы антитела к IL-17 можно вводить до получения оптимального терапевтического эффекта для пациента, и дозировку, как правило, дополнительно не повышают.

Хронометраж дозирования обычно измеряют со дня первой дозы активного соединения (например, секукинумаба), который также называют линией отсчета. Однако лечащие врачи используют различные условные обозначения, как видно ниже в табл. 2.

Таблица 2. Обычные условные обозначения для схемы дозирования

Неделя	0/1	1/2	2/3	3/4	4/5	5/6	6/7	7/8	8/9	И тд
1-ый день	0/1	7/8	14/1 5	21/2 2	28/2 9	35/3 6	42/4 3	49/5 0	56/5 7	и тд

Элементы, выделенные жирным шрифтом, относятся к условным обозначениям, используемым в настоящем описании.

Примечательно, что некоторые лечащие врачи могут неделю ноль называть неделей 1, в то время как некоторые лечащие врачи могут день ноль называть днем один. Таким образом, возможно, что различные специалисты будут определять, например, дозу, которую дают в течение недели 3/в день 21, в течение недели 3/в день 22, в течение недели 4/в день 21, в течение недели 4/в день 22, хотя это относится к одной и той же схеме применения доз. Сообразно первая неделя дозирования в настоящем описании будет обозначаться как неделя 0, в то время как первый день дозирования будет обозначаться как день 1. Однако специалисту в данной области техники следует иметь в виду, что условное обозначение используется просто для согласованности и не должно рассматриваться как ограничение, т.е., еженедельное дозирование является предоставлением еженедельной дозы антител к IL-17 или их антигенсвзывающих фрагментов, например, секукинумаба, несмотря на обозначение врача определенной недели как недели 1 или недели 2. Как пример обозначения с использованием условия, определенного в настоящем описании, пять доз секукинумаба, вводимых еженедельно, можно предоставить во время недели О (например, примерно в день 1), во время недели 1 (например, примерно в день 8), во время недели 2 (например, примерно в день 15), во время недели 3 (например, примерно в день 22) и во время недели 4 (например, примерно в день 29). Следует иметь в виду, что необходимая доза не предоставляется в какой-то точный момент времени, например, доза может быть предоставлена приблизительно в день 29, например, в день 24 - день 34, например, день 30, до тех пор, пока она предоставляется в соответствующую неделю.

В некоторых воплощениях в раскрытых способах и применениях используют начальную (иногда называемую индуктивной) схему, которая длится 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель. В некоторых воплощениях в начальной схеме применяют дозирование во время недель 0, 1, 2 и 3. В других воплощениях в начальной схеме применяют дозирование во время недель 0, 1, 2, 3, 4, 8 и 12. В некоторых воплощениях начальная схема включает введение нескольких (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, предпочтительно 4 или 5) доз примерно в 150 мг - 300 мг, например, примерно четыре или пять доз в 150 мг или 300 мг (предпочтительно пять доз в примерно 150 мг - примерно 300 мг) антитела к IL-17, например, секукинумаба. В других воплощениях начальные дозы доставляют еженедельно, каждые две недели, каждую вторую неделю или ежемесячно [каждые 4 недели], предпочтительно еженедельно. В некоторых воплощениях 150 мг или 300 мг антитела к IL-17, например, секукинумаба, вводят подкожной инъекцией с начальным дозированием в недели 0, 1, 2 и 3.

В поддерживающей схеме доза может предоставляться каждый месяц (что также называется ежемесячным дозированием) (т.е., каждые 4 недели, т.е., примерно каждые 28 дней), каждые два месяца (т.е., каждые 8 недель, т.е., примерно каждые 56 дней) или каждые три месяца (т.е., каждые 12 недель, т.е., примерно каждые 84 дня). В некоторых воплощениях поддерживающая схема начинается после недели 12. В некоторых воплощениях поддерживающая схема начинается после недели 3. Первая доза в поддерживающей схеме будет вводиться на дату, обычно измеряемую от конечной дозы индуктивной схемы. Таким образом, например, есди конечная доза индуктивной схемы предоставляется во время недели 12, тогда первая доза как часть ежемесячной [каждые 4 недели] поддерживающей схемы будет доставляться во время недели 16, первая доза как часть поддерживающей схемы каждые два месяца будет доставляться во время недели 20, первая доза как часть поддерживающей схемы каждые три месяца будет доставляться во время недели 24 и т.д.. В некоторых воплощениях поддерживающая схема включает введение дозы антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, еженедельно, каждые две недели, ежемесячно [каждые 4 недели], каждый второй месяц, ежеквартально, два раза в год или ежегодно. В некоторых воплощениях в поддерживающей схеме используют ежемесячное дозирование (каждые 4 недели). В некоторых воплощениях первую дозу поддерживающей схемы доставляют во время недели 4 или во время недели 16. В некоторых воплощениях поддерживающая схема включает введение дозы антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, в примерно 150 мг - 300 мг, например, примерно 150 мг или примерно 300 мг.

Доставка антитела к IL-17, такого как секукинумаб, на протяжении схемы нагрузки, индуктивной

- 20 033824 схемы и/или поддерживающей схемы может происходить подкожным путем, например, доставка дозировок в примерно 75 мг - примерно 300 мг (например, примерно 50 мг, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 125 мг, примерно 150 мг, примерно 175 мг, примерно 200 мг, примерно 225 мг, примерно 250 мг, примерно 275 мг, примерно 300 мг, примерно 325 мг), внутривенным путем, например, доставка дозировок в примерно 1 мг/кг - примерно 50 мг/кг (например, примерно 1 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 30 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 50 мг/кг, и т.д.) или любым другим путем введения (например, внутримышечным, i.m.). В предпочтительных воплощениях дозу антитела к IL-17 доставляют s.o.

В предпочтительных воплощениях пациенту вводят дозу примерно 150 мг - примерно 300 мг (например, примерно 150 мг или примерно 300 мг) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, подкожной инъекцией, с начальным дозированием в недели 0, 1, 2 и 3, затем по поддерживающей схеме ежемесячно, начиная с недели 4. По такой схеме дозирование происходит каждую из недель 0, 1, 2, 3, 4, 8, 12, 16, 20 и т.д. Доза в 300 мг также может даваться как две подкожные инъекции по 150 мг.

В настоящем описании раскрываются способы лечения аутоиммунного заболевания (например, псориаза, ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита), включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, дозы в примерно 150 мг - примерно 300 мг (например, примерно 150 мг или примерно 300 мг) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, подкожной инъекцией, с начальным дозированием в недели 0, 1, 2 и 3, затем по поддерживающей схеме ежемесячно, начиная с недели 4, причем антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент, например, секукинумаб, предоставляются как часть фармацевтической композиции, включающей примерно 20 мг/мл - примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, например, секукинумаба, буфер, имеющий pH примерно 5,2 - примерно 6,2, и примерно 2,5 - примерно 20 мМ метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

В настоящем описании раскрывается применение антитела к IL-17 (например, секукинумаба) для изготовления лекарственного средства для лечения аутоиммунного заболевания (например, псориаза, ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита) у пациента, причем лекарственное средство получают как включающее контейнеры, причем каждый контейнер имеет свободное пространство с содержанием кислорода менее примерно 12% (например, менее примерно 10%, менее примерно 8%, менее примерно 7%, менее примерно 6%, и т.д.) и жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в контейнере, причем указанная композиция включает примерно 20 мг/мл - примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба), причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата.

Наборы, включающие фармацевтические продукты и жидкие композиции

Раскрытие также охватывает наборы для лечения различных аутоиммунных заболеваний (например, псориаза). Такие наборы вообще включают по меньшей мере один из раскрытых фармацевтических продуктов или жидких композиций и инструкции по применению. Инструкции будут раскрывать соответствующие методы предоставления устойчивой жидкой композиции пациенту как части схемы дозирования. Такие наборы также могут включать дополнительные агенты (описанные выше) для лечения аутоиммунных заболеваний, например, псориаза, для доставки в комбинации (т.е. одновременно или последовательно [до или после]) с включенной жидкой композицией.

В настоящем описании раскрываются наборы для лечения пациента с аутоиммунным заболеванием (например, псориазом), включающие а) контейнер, имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 12% (например, менее примерно 10%, менее примерно 8%, менее примерно 7%, менее примерно 6%, и т.д.), b) жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция включает i) примерно 20 мг/мл примерно 175 мг/мл (например, примерно 25 мг/мл - примерно 150 мг/мл) антитела к IL-17 или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытых в настоящем описании (например, секукинумаба), ii) буфер, имеющий pH примерно 5,2 - примерно 6,2, и iii) примерно 2,5-20 мМ метионина, причем жидкая фармацевтическая композиция не является восстановленной из лиофилизата, и с) инструкции по введению жидкой фармацевтической композиции пациенту. В некоторых воплощениях контейнер представляет собой ручку, предварительно заполняемый шприц, автоинжектор или флакон.

Общие положения

В некоторых воплощениях раскрытия антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент выбирают из группы, включающей а) антитело к IL-17, которое связывается с эпитопом IL-17, включающим Leu74, Tyr85, His86, Met87, Asn88, Val124, Thr125, Pro126, Ile127, Val128, His129; b) антитело к IL17, которое связывается с эпитопом Tyr43, Tyr44, Arg46, Ala79, Asp80; с) антитело к IL-17, которое связывается с эпитопом гомодимера IL-17, имеющим две цепи зрелого белка IL-17, причем указанный эпитоп включает Leu74, Tyr85, His86, Met87, Asn88, Val124, Thr125, Pro126, Ile127, Val128, His129 в одной цепи и Tyr43, Tyr44, Arg46, Ala79, Asp80 в другой цепи; d) антитело к IL-17, которое связывается с эпи

- 21 033824 топом гомодимера IL-17, имеющим две цепи зрелого белка IL-17, причем указанный эпитоп включает Leu74, Tyr85, His86, Met87, Asn88, Val124, Thr125, Pro126, Ile127, Val128, His129 в одной цепи и Tyr43, Tyr44, Arg46, Ala79, Asp80 в другой цепи, причем связывающая IL-17 молекула имеет KD примерно 100 примерно 200 пМ (например, при измерении Biacore®), и причем связывающая IL-17 молекула имеет период полувыведения in vivo примерно 23 - примерно 30 дней; и е) антитело к IL-17, которое включает антитело, выбранное из группы, включающей i) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 8; ii) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 10; iii) домен иммуноглобулина V_H, включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 8, и домен иммуноглобулина V_L, включающий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 10; iv) домен иммуноглобулина V_H, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3; v) домен иммуноглобулина V_L, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; vi) домен иммуноглобулина VH, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13; vii) домен иммуноглобулина V_H, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, и домен иммуноглобулина V_L, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; и viii) домен иммуноглобулина V_H, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13, и домен иммуноглобулина V_L, включающий, по порядку, гипервариабельные участки, представленные как SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; ix) тяжелую цепь иммуноглобулина, включающую аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 15 (с C-концевым лизином или без него); х) легкую цепь иммуноглобулина, включающую аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 14; xi) тяжелую цепь иммуноглобулина, включающую аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 15 (с C-концевым лизином или без него), и легкую цепь иммуноглобулина, включающую аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 14. В некоторых воплощениях раскрытия антитело к IL-17 или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой человеческое антитело, предпочтительно, секукинумаб.

Детали одного или нескольких воплощений раскрытия приводятся в приведенном выше описании. Хотя любые способы и материалы, схожие или равноценные раскрытым в настоящем описании, можно использовать в практике или проверке настоящего раскрытия, теперь описываются предпочтительные способы и материалы. Другие особенности, цели и преимущества раскрытия будут очевидны из описания и из формулы изобретения. В описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают формы множественного числа, если контекст четко не диктует иное. Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют те же значения, какие им обычно придают специалисты в данной области техники, к которым относится настоящее раскрытие. Все патенты и публикации, цитированные в настоящем описании, включены в него в качестве ссылок. Следующие далее примеры представлены для того, чтобы полнее пояснить предпочтительные воплощения раскрытия. Эти примеры никоим образом не следует рассматривать как ограничивающие объем раскрытого беспокоящего вопроса, определенный прилагаемой формулой изобретения.

Примеры

Понятно, что примеры и воплощения, описанные в настоящем описании, приводятся только в целях пояснения, и что специалистами в данной области техники будут предполагаться различные модификации и изменения в таком свете, и они должны входить в сущность и сферу действия настоящей заявки и объем прилагаемой формулы изобретения.

В этих примерах описывается разработка устойчивых жидких композиций секукинумаба. Результаты показывают, что pH композиции и выбор стабилизатора группы 2 оказывают большое влияние на устойчивость жидкой композиции. Результаты также показывают последствия содержания кислорода в свободном пространстве как влияющие на устойчивость жидкой композиции. Концентрация антител, выбор поверхностно-активного вещества, выбор стабилизатора 1 группы и выбор буферной системы имеют меньшее влияние на устойчивость. Поэтому, принимая во внимание переменные, имеющие большее воздействие на устойчивость, раскрытые фармацевтические продукты включают контейнер (например, PFS или флакон), имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 12%, и жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция имеет pH примерно 5,2 - примерно 6,2 и включает секукинумаб в концентрации примерно 20 мг/мл - примерно 175 мг/мл и примерно 2,5 - примерно 20 мМ L-метионина. Принимая во внимание переменные, имеющие как большое, так и небольшое воздействие на устойчивость, раскрытые фармацевтические продукты включают контейнер (например, PFS или флакон), имеющий свободное пространство, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее примерно 12%, и жидкую фармацевтическую композицию, размещенную в указанном контейнере, причем указанная композиция имеет pH примерно 5,2 - примерно 6,2 и включает секукину- 22 033824 маб, буфер, поверхностно-активное вещество, стабилизатор и примерно 2,5 - примерно 20 мМ Lметионина.

На основании результатов, раскрытых ниже, предпочтительная жидкая композиция включает примерно 25 мг/мл - примерно 165 мг/мл секукинумаба, примерно 185 мМ - примерно 225 мМ трегалозы, примерно 0,01% - примерно 0,03% полисорбата 80, примерно 2,5 мМ - примерно 20 мМ L-метионина и примерно 10-30 мМ гистидинового буфера (например, примерно 20 мМ гистидинового буфера) с pH примерно 5,8.

Предпочтительная жидкая композиция I включает примерно 150 мг/мл секукинумаба, примерно 200 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80, примерно 5 мМ L-метионина и примерно 20 мМ гистидинового буфера с pH примерно 5,8. Предпочтительный фармацевтический продукт I включает вышеуказанную жидкую композицию I, размещенную в предварительно заполняемом шприце (PFS).

Другая предпочтительная жидкая композиция II включает примерно 25 мг/мл секукинумаба, примерно 225 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80, примерно 5 мМ L-метионина и примерно 20 мМ гистидинового буфера с pH примерно 5,8. Предпочтительный фармацевтический продукт II включает вышеуказанную жидкую композицию I, размещенную во флаконе.

Таблица 3. Аббревиатуры, используемые в примерах

Аб бревиа тура	Определение
CE-SDS	Капиллярный электрофорез (додецилсульфат натрия)
СЕХ	Катионообменная хроматография
Cys-CEX	Катионообменная хроматография с использованием цистамина
DLS	Динамическое рассеяние света
DoE	План эксперимента
ВЭЖХ	Высокоэффективная жидкостная хроматография
LLS	Рассеяние лазерного света
RH	Относительная влажность
ОФ-ВЭЖХ	Высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой
SDS-PAGE	Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия
SEC	Эксклюзионная хроматография
AP-SEC	Продукты агрегации по SEC
DP-SEC	Продукты разложения по SEC

Таблица 4. Аналитические исследования, используемые в примерах

Методы анализа

УФ: анализ белка по поглощению УФ

SEC: чистота по SEC, АР-SEC, DP-SEC

SDS-PAGE: чистота по SDS-PAGE (в невосстанавливающих условиях), чистота по SDS-PAGE (в условиях восстанавления), примеси по SDS-PAGE (в условиях восстанавления)

CE-SDS: чистота по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях), примеси по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях)

LLS: средняя молекулярная масса по LLS

DLS: полидисперсность по DLS, гидродинамический радиус по DLS Мутность

Субвидимые частицы в режиме светотени

Видимые частицы

ОФ-ВЭЖХ: чистота по ОФ-ВЭЖХ и часть перед главным пиком по

ОФ-ВЭЖХ

СЕХ: чистота по СЕХ, кислотные варианты по СЕХ, щелочные варианты по СЕХ

Цвет

Активность по Cys-CEX

Свободные SH-группы (проба Элмана)

Биологическая активность

1.1. Часть I. Подробный анализ переменных с большим влиянием на устойчивость состояния жид-

- 23 033824 кости с секукинумабом (кислород в свободном пространстве, pH и L-метионин).

1.1.1. Пример 1. L-Метионин.

Влияние некоторых антиокислительных стабилизаторов на устойчивость секукинумаба характеризуют с использованием широкого набора аналитических методов.

В начале исследования оценивают ряд антиокислительных стабилизаторов, включая тетранатрий ЭДТК, аскорбат натрия, цистеин, бисульфит натрия и цитрат натрия. Хотя ни один их них не стабилизирует адекватно молекулу, небольшой стабилизирующий эффект на продукты агрегации по SEC виден у тетранатрия ЭДТК и цитрата натрия по сравнению с композициями, не содержащими антиокислительные стабилизаторы (данные не приводятся).

В дальнейших исследованиях оценивают стабилизаторы цистеин, тетранатрий ЭДТК и L-метионин в концентрации 10 мМ и сравнивают с отсутствием стабилизатора с использованием секукинумаба в концентрации 150 мг/мл при подходе DoE. Композиции наливают в

PFS и помещают на 2 месяца для исследования устойчивости в условиях длительного хранения (5°C), ускоренного хранения (25°C) и хранения в стрессовых условиях (40°C), и оценивают в отношении физической устойчивости (АР-SEC, DLS, мутность, видимые и субвидимые частицы в режиме светотени), химической устойчивости (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) и индикаторов биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы). Кроме того, к композициям, налитым в 2-мл флаконы, применяют нагрузку замораживание-оттаивание (5 циклов от -20°C до комнатной температуры) и встряхивания (150 об/мин в течение одной недели).

Находят, что L-метионин является лучшим стабилизатором группы 2 для секукинумаба. Это показывают более высокие уровни чистоты при измерении чистоты СЕХ и чистоты по ОФ-ВЭЖХ, и более низкие уровни мутности и числа видимых частиц. Существенно лучшая устойчивость отмечена в присутствии L-метионина по сравнению с композициями без стабилизатора. Композиции с L-метионином имеют более низкие уровни АР-SEC, более последовательные результаты DLS, более низкую мутность и меньшее количество частей перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ после 8 недель хранения в условиях ускоренного испытания при 25°C и 40°C. ЭДТК не выгодна из-за возрастаний при АР-SEC, DLS, щелочных вариантов по СЕХ и части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ. Цистеин ведет к возрастанию количества почти всех продуктов агрегации и разложения, как показывают различные аналитические методы.

Фиг. 1 показывает выбранные признаки качества после хранения в различных условиях. Наблюдают, что только L-метионин оказывает сообразное стабилизирующее действие на секукинумаб. Стабилизирующее действие особенно наблюдается на части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (фигура 1В) и АР-SEC (фигура ID). Дополнительные действия также наблюдают на мутность и гидродинамический радиус по DLS. Действие различных концентраций на качественные признаки секукинумаба оценивают в последующих исследованиях.

Фиг. 2 отображает изменение части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ во время хранения при 25°C при концентрации секукинумаба 25 мг/мл, концентрации трегалозы 225 мМ и концентрации полисорбата 80 0,02% в гистидиновом буфере, pH 5,8, в присутствии и в отсутствие L-метионина. Композиции наливают в 2-мл флаконы и хранят до 3 месяцев в стрессовых условиях. Темная пунктирная линия представляет подобранную прямую для величин, полученных для композиции, содержащей 0 мМ Lметионина, серая пунктирная линия представляет подобранную прямую для величин, полученных для композиции, содержащей 10 мМ L-метионина. Отчетливо наблюдают сниженную кинетику разложения в присутствии L-метионина.

Также наблюдают эффект зависимости от концентрации для композиций, содержащих 150 мг/мл секукинумаба. Исследование проводят с композициями, содержащими трегалозу в концентрациях от 200 до 300 мМ, полисорбата 80 от 0,01 до 0,04%, а также L-метионина от 0 мМ до 10 мМ. Композиции наливают в 1-мл PFS и хранят до трех месяцев в условиях длительного хранения, ускоренного хранения и хранения в стрессовых условиях. Проверяют физическую (АР-SEC, DLS, субвидимые частицы методом светотени и видимые частицы, мутность) и химические (чистота АО СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) устойчивость, а также биологическую активность.

Фиг. 3 отображает часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ после 6 месяцев хранения при 25°C. В то время как действие трегалозы и полисорбата 80 на разложение является незначительным, явно уменьшенные уровни разложения наблюдают в присутствии L-метионина. Такой эффект является более выраженным при сравнении устойчивости секукинумаба с L-метионином и без него, но также наблюдают зависимость от концентрации в интервале 2,5-10 мМ L-метионина. Такое же стабилизирующее действие L-метионина наблюдают после длительного хранения (до 30 месяцев) в композициях, содержащих 150 мг/мл секукинумаба, 200 мМ трегалозы, 0,02% полисорбата 80 в гистидиновом буфере, pH 5,8, налитых в 1-мл PFS.

Фиг. 4 отображает АР-SEC (А) и часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ (В) во время 30 месяцев хранения при 5°C. Черная штриховая линия представляет подобранную прямую для величин, полученных для композиции, содержащей 5 мМ L-метионина, серая пунктирная линия представляет подобранную прямую для величин, полученных для композиции, содержащей 0 мМ L-метионина. Отчетливо наблюдают сниженную кинетику разложения в присутствии L-метионина.

- 24 033824

Зависимость от концентрации также подтверждается в исследовании, в котором оценивают влияние концентрации L-метионина (0-20 мМ) на устойчивость секукинумаба (150 мг/мл, 200 мМ трегалозы, 0,02% полисорбата 80 в гистидиновом буфере, pH 5,8). Различные композиции наливают в PFS и хранят в условиях длительного хранения и ускоренного хранения в течение 13 месяцев и 30 месяцев (только 5°C). Устойчивость секукинумаба оценивают рядом выбранных аналитических методов, которые отмечены как показывающие стабильность в предыдущих проверках (чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по SEC, мутность). Из измерений мутности нельзя сделать вывод о четкой тенденции. Однако четкую зависимость от концентрации L-метионина показывают АР-SEC и часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ. Такой эффект незначителен при условиях хранения в реальном времени, но явные различия наблюдают при 25°C (фиг. 5).

После 13 месяцев хранения при 25°C уровни агрегатов по SEC в композиции без L-метионина повышаются на 4,5% от начального уровня <1% в t 0. При добавлении L-метионина в композицию такое повышение образования агрегатов снижается до 3,5% в случае 2,5 мМ, 3,0% в случае 5 мМ и 2,2% в случае 20 мМ L-метионина. При 5°C такое различие между композицией без L-метионина и композицией с 20 мМ L-метионина составляет только 0,3%. Часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ в образце, содержащем 0 мМ L-метионина, на протяжении 13 месяцев хранения при 25°C возрастает от 9,1% до 42,7%. Такое возрастание частей перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ в образцах, содержащих Lметионин, снижается до 29,4% в случае 2,5 мМ, 37,8% в случае 5,0 мМ и 34,5% в случае 20 мМ Lметионина. В итоге наблюдают пониженные уровни АР-SEC и части перед главным пиком по ОФВЭЖХ в присутствии L-метионина во время хранения при 5°C и 25°C в PFS. Более заметные различия наблюдают при хранении при 25°C, но они также обнаруживаются после хранения при 5°C.

Уже при уровне L-метионина 2,5 мМ степень разложения заметно снижается по сравнению с композициями без L-метионина. Это также подтверждается в дальнейшем исследовании при сравнении устойчивости секукинумаба в присутствии 0, 2,5 и 5,0 мМ L-метионина. Не наблюдают различий между композициями, содержащими 2,5 мМ и 5,0 мМ L-метионина, по чистоте по ОФ-ВЭЖХ, чистоте по SEC, а также мутности после 24 месяцев хранения в предполагаемых условиях хранения.

Добавление L-метионина в жидкие композиции антител во флаконах также снижает АР-SEC и примеси по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) (фиг. 6). Представляет интерес, что наблюдают зависимость от уменьшенной концентрации L-метионина для жидких композиций антител во флаконах с 25 мг/мл секукинумаба (фиг. 6), что предполагает, что более низкая концентрация L-метионина является достаточной для сохранения целостности и устойчивости антитела в композициях, имеющих более низкую концентрацию антител.

Из всех данных описанных выше экспериментов следует, что концентрация метионина по меньшей мре 2,5 мМ (предпочтительно примерно 5 мМ) является идеальной для жидких композиций секукинумаба и превосходной с другими стабилизаторами группы 2.

1.1.2. Пример 2. Содержание кислорода в свободном пространстве.

1.1.2.1. Первичная упаковка PFS.

Влияние содержания кислорода в свободном пространстве на устойчивость секукинумаба оценивают при концентрации секукинумаба 150 мг/мл и в композиции с 200 мМ трегалозы, 5 мМ Lметионина, 0,02% полисорбата 80 в гистидиновом буфере, pH 5,8. Композиции наливают в 1-мл PFS от различных поставщиков PFS. Содержание кислорода в свободном пространстве составляет или между 13% и 15% (объем заполнения 0,5 мл) или между 3-4% (объем заполнения 0,5 мл)/7-8% (объем заполнения 1,0 мл), соответственно. Образцы хранят до шести месяцев в условиях длительного и ускоренного хранения и хранения в стрессовых условиях. Выбранные композиции хранят до 24 месяцев в условиях длительного хранения. Устойчивость секукинумаба проверяют по чистоте по SEC, чистоте по ОФВЭЖХ, чистоте по СЕХ, чистоте по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях), мутности, цвету, свободным SH-группам, биологической активности, субвидимым частицам в режиме светотени и видимым частицам.

Воздействие различных уровней содержания кислорода в свободном пространстве, колеблющихся от 6 до 21% (т.е., без очистки) на признаки качества секукинумаба (мутность, чистота по SEC, чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях), свободные SH-группы, биологическая активность, субвидимые частицы в режиме светотени и видимые частицы, цвет) также оценивают во время хранения при 5°C в течение 12 месяцев, а также в ускоренных условиях (25°C) в течение 6 месяцев и в стрессовых условиях (40°C) в течение 3 месяцев. Исследования выполняют при концентрации секукинумаба 150 мг/мл и в композиции с 200 мМ трегалозы, 5 мМ L-метионина, 0,02% полисорбата 80 в гистидиновом буфере, pH 5,8. Образцы наливают в PFS и продувают серитфицированными кислородными смесями для получения заданного содержания кислорода в свободном пространстве.

Со временем хранения не наблюдают ни изменения в мутности, ни существенного влияния содержания кислорода в свободном пространстве на субвидимые частицы в режиме светотени, цвет и свободные SH-группы, и различия между образцами с различным содержанием кислорода в свободном пространстве находятся в пределах разброса метода. Концентрация метионина не изменяется релевантно во время хранения при 5°C и 25°C и отмечается как 4,9 мМ (начальная величина 4,9-5,0 мМ) после 12 меся

- 25 033824 цев хранения при 5°C несмотря на содержание кислорода в свободном пространстве.

В отличие от более ранних наблюдений авторов изобретения, которые показывали относительно существенное влияние содержания кислорода в свободном пространстве на продукты агрегации по SEC, в этом эксперименте отмечают только небольшие изменения во время хранения до 12 месяцев в преддполагаемых условиях хранения (5°C) даже в эталонном образце без продувки. Не отмечают релевантных различий в чистоте и агрегатах по SEC между образцами с различными уровнями кислорода для различных моментов проверки устойчивости (до 12 месяцев хранения при 2-8°C и до 6 месяцев хранения при 25°C) (фиг. 8). Напротив, авторы изобретения отметили возрастание в основной величине чистоты по ОФ-ВЭЖХ с возрастанием содержания кислорода в свободном пространстве. Это наблюдали при 5°C (после 12 месяцев хранения) (данные не приводятся) и при 25°C) (фиг. 9). Новые пики не появляются.

1.1.2.2. Первичная упаковка флаконы.

Композиции наливают в 2-мл флаконы и хранят в течение 12 месяцев в холодильнике и до 3 месяцев в условиях ускоренного и хранения в стрессовых условиях. В таблицах 5-7 суммированы изменения части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ и SEC-AP во время хранения при 5°C, 25°C и 40°C при концентрации секукинумаба 25 мг/мл, концентрации трегалозы 225 мМ и концентрации полисорбата 80 0,02% в гистидиновом буфере, pH 5,8, в присутствии 5 мМ L-метионина и в его отсутствие.

Таблица 5. Результаты ОФ-ВЭЖХ и SEC для жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе после 6 и 12 месяцев хранения при 5°C

Содержание	Часть перед главным	AP-SEC	(%)
кислорода в	пиком, ОФ-ВЭЖХ (%)
свободном
пространстве
	ТО 6 М 12 М	ТО	6 М	12 М
5%	- - 4,5	-	-	0, 81
10%	8,2 3,4 6,1	0, 84	0,78	0,86
20%	- 4,2 7,1	-	0,79	0, 91

Композиция: 25 мг/мл секукинумаба, 225 мМ трегалозы, 5 мМ L-метионина, 0,02% PS80.

Таблица 6. Результаты ОФ-ВЭЖХ и SEC для жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе после 3 месяцев хранения при 25°C и 40°C

Содержание	Часть перед главным	AP-SEC (%)
кислорода в	ПИКОМ)	, ОФ-ВЭЖХ	(%)
свободном
пространстве
	2 5°С	40°С		25°С 40^е	%
	ТО	3 М	3 м	ТО	3 М	3	М
5%	-	17,9	40, 6	-	1,10	1,	80
10%	8, 0	18,4	43, 1	0, 84	1,00	2,	00
20%	-	20, 6	46,2	-	0, 93	2,	50

Таблица 7. Результаты ОФ-ВЭЖХ и SEC для жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе после 6 и 12 месяцев хранения при 5°C

Содержание	Часть перед главным	AP-SEC	(%)
кислорода в	пиком, ОФ-ВЭЖХ (%)
свободном
пространстве
	ТО 6 М 12 М	ТО	6 М	12 М
5%	8,3 3,8 6,1	0, 84	0, 82	0, 91

Композиция: 25 мг/мл секукинумаба, 225 мМ трегалозы, 0 мМ L-метионина, 0,02% PS80.

- 26 033824

Таблица 8. Результаты ОФ-ВЭЖХ и SEC для жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе после 3 месяцев хранения при 25°C и 40°C

Содержание	Часть	перед главным	AP-SEC	(%
кислорода в	пиком,	ОФ-ВЭЖХ	(%)
свободном
пространстве
	25°С	40°С		25°С 40	^ЭС
	ТО	3 М	3 м	ТО	3	м	3	м
5%	-	20, 9	44, 6	-	1,	10	2,	60
10%	8,3	21,4	46, 7	0, 84	1,	10	2,	90
20%	-	25, 5	50, 9	-	1,	30	3,	50

Композиция: 25 мг/мл секукинумаба, 225 мМ трегалозы, 05 мМ L-метионина, 0,02% PS80.

Воздействие содержания кислорода в свободном пространстве на устойчивость жидкости с 25 мг/мл секукинумаба во флаконе видно по части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ после 12 месяцев хранения при 5°C (4,5% при содержании кислорода в свободном пространстве 5% против 7,1% при содержании кислорода в свободном пространстве 20%, см. табл. 5), после 3 месяцев хранения при 25°C (17,9% при содержании кислорода в свободном пространстве 5% против 20,6% при содержании кислорода в свободном пространстве 20%, см. табл. 6) и после 3 месяцев хранения при 40°C (40,6% при содержании кислорода в свободном пространстве 5% против 46,2% при содержании кислорода в свободном пространстве 20%, см. табл. 6). Такую же тенденцию можно заметить для АР-SEC после 3 месяцев хранения при 40°C (1,8% при содержании кислорода в свободном пространстве 5% против 2,5% при содержании кислорода в свободном пространстве 20%, см. табл. 6). Кроме того, концентрация L-метионина оказывает дополнительное влияние в комбинации с более низким содержанием кислорода. Например, при сравнении данных для части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ в композициях с содержанием кислорода в свободном пространстве 5% после 12 месяцев хранения при 5°C находят 6,1% (табл. 7) для композиции, не содержащей L-метионин, по сравнению с 4,5% (табл. 5) для композиции с 5 мМ Lметионина. Такое же различие видно для части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ после 3 месяцев хранения при 25°C (кислорода 5-20%: 20,9-25,5% в отсутствие L-метионина (табл. 8) против 17,9-25,5% в присутствии 5 мМ L-метионина (табл. 6)), и после 3 месяцев хранения при 40°C (кислорода 5-20%: 44,650,9% в отсутствие L-метионина (табл. 8) против 40,6-46,2% в присутствии 5 мМ L-метионина (табл. 6)).

На основании описанных выше экспериментов продувка азотом для снижения содержания кислорода в свободном пространстве до менее примерно 12% рассматривается как благоприятная для повышения устойчивости жидкой композиции как в PFS, так и во флаконах (при оценке части перед главным пиком методом ОФ-ВЭЖХ).

1.1.3. Пример 3. Взаимосвязь концентрации L-метионина и содержания кислорода в свободном пространстве.

В дальнейшем исследовании оценивают взаимосвязь между концентрацией L-метионина и содержанием кислорода в свободном пространстве. Получают композиции, содержащие L-метионин в интервале 2,5-7,5 мМ, и с содержанием кислорода в свободном пространстве между 3 и 9%. Композиции наливают в PFS и хранят в условиях длительного хранения и ускоренного хранения в течение 6 месяцев. Релевантные признаки качества секукинумаба (чистота по SEC, чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по СЕХ, свободные SH-группы, биологическая активность, субвидимые и видимые частицы в режиме светотени, мутность и цвет раствора) проверяют после 3 и 6 месяцев хранения. Фиг. 16 отображает чистоту по АРSEC после 6 месяцев хранения при 25°C как функцию концентрации L-метионина и содержания кислорода в свободном пространстве. Не наблюдают взаимосвязи в испытываемом интервале, когда проводят анализ на чистоту с использованием AP-SEC.

В другом исследовании оценивают действие пониженных содержания кислорода и концентрации Lметионина при концентрации секукинумаба 150 мг/мл. Композиции включают 270 мМ маннита, 0,04% полисорбата 80 и различные концентрации L-метионина, колеблющиеся от 0,15 до 2%. Композиции наливают в 2-мл стеклянные флаконы или с продувкой азотом или без нее и хранят в условиях длительного хранения, ускоренного хранения и в стрессовых условиях хранения до 6 месяцев.

Фиг. 11 отображает часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ до 36 месяцев хранения в композициях, содержащих 0,15% (10 мМ), 1% (67 мМ) или 2% (134 мМ) L-метионина и или с азотом или с воздухом в свободном пространстве. Как наблюдали ранее, часть перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ имеет более низкие уровни в композициях, содержащих большие количества L-метионина. Та же композиция показывает более низкие уровни части перед главным пиком по ОФ-ВЭЖХ, когда свободное пространство очищено азотом.

На основании общих результатов различных экспериментов с использованием как флаконов, так и

- 27 033824

PFS в качестве первичной упаковки, содержание кислорода в свободном пространстве менее примерно

12% в комбинации с концентрацией L-метионина по меньшей мере примерно 2,5 мМ является идеальным для жидких композиций с секукинумабом.

1.1.4. Пример 4: pH.

Влияние pH на устойчивость секукинумаба сначала оценивают при концентрации 10 мг/мл в смеси 100 мМ лимонной кислоты/натрийфосфатный буфер, содержащей 90 мМ хлорида натрия, при pH в интервале от 4,0 до 7,5. Образцы хранят в течение 3 недель при 5°C и 4 0°C. Параллельно проверяют устойчивость секукинумаба после пяти циклов замораживание/оттаивание qt<-60°C до комнатной температуры.

Оптимальный pH для секукинумаба изменяется в зависимости от анализируемого пути разложения. Агрегация и протеолиз, определяемые по чистоте по SEC, чистоте по SDS-PAGE (в условиях восстанавления) и средней молекулярной массе по LLS, являются минимальными при pH 5,7-6,2, в то время как оптимальный pH для чистоты по СЕХ составляет 5,3. Активный секукинумаб содержит один свободный цистеиновый остаток на каждой легкой цепи, таким образом, ожидается 2 моль тиольных групп на моль секукинумаба. Так как пониженный уровень свободных SH-групп коррелирует с утратой биологической активности секукинумаба, свободные SH-группы определяют количественно с использованием способа на основе реагента Элмана. Только при pH 4,3 наблюдают несколько меньшую величину 1,94 моль/моль. Устойчивость секукинумаба к замораживанию/оттаиванию, проверенная по чистоте по SEC и средней молекулярной массе по LLS, является максимальной при pH 5,3-5,7. В дальнейшем для получения композиций секукинумаба выбирают pH 5,8.

Дальнейшие исследования о влиянии pH на устойчивость секукинумаба проводят в PFS с использованием подхода DoE. Влияние pH в интервале 5,2-5,8 оценивают при концентрации секукинумаба 150 мг/мл. Композиции помещают для исследований устойчивости на 2 месяца в условия длительного хранения (5°C), ускоренного хранения (25°C) и хранения в стрессовых условиях (40°C) и оценивают в отношении физической устойчивости (AP-SEC, DLS, мутность, видимые частицы и субвидимые частицы в режиме светотени), химической устойчивости (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) и индикаторов биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы). Кроме того, к композициям, налитым в 2-мл флаконы, применяют замораживание-оттаивание (5 циклов от -20°C до комнатной температуры) и напряжение при встряхивании (150 об/мин в течение одной недели). Находят, что величины pH в исследуемом интервале не влияют существенно на устойчивость секукинумаба (АР-SEC, DLS, щелочные варианты по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ). Результаты более ранних исследований подтверждаются в отношении pH 5,8 как идеального (АР-SEC, DP-SEC и часть перед главным пиком по ОФВЭЖХ) (фигура 12).

Влияние pH также оценивают в композициях, содержащих секукинумаб в концентрации 150 мг/мл, 200 мМ трегалозы, L-метионин в интервале 2,5-7,5 мМ и с содержанием кислорода в свободном пространстве между 3 и 9%. Изменяют pH гистидинового буфера между 5,4 и 6,2. Композиции наливают в PFS и хранят в условиях длительного и ускоренного хранения в течение 6 месяцев. Релевантные признаки качества антител (чистота по SEC, чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по СЕХ, свободные SH-группы, биологическая активность, субвидимые частицы в режиме светотени, видимые частицы, мутность и цвет раствора) проверяют после 3 и 6 месяцев хранения. Фигура 13 отображает влияние pH на качество антител после хранения при 5°C. Повышенную мутность, АР-SEC и кислотные варианты по СЕХ, а также сниженную чистоту по SEC наблюдают при более высоких величинах pH, что дополнительно подтверждает наблюдения при начальном скрининге.

Из всех результатов различных экспериментов следует, что интервал pH от примерно 5,2 до примерно 6,2 является идеальным для жидких композиций секукинумаба.

1.2. Часть 2. Подробный анализ эксципиентов с меньшим влиянием на устойчивость секукинумаба в жидкости (стабилизатор, поверхностно-активное вещество и буфер).

1.2.1. Пример 5. Выбор стабилизатора оказывает слабое влияние на устойчивость.

Первоначальная разработка композиций для жидкой лекарственной формы сосредоточилась на оценке различных стабилизаторов в отношении образования растворимых и нерастворимых агрегатов секукинумаба (АР-SEC, чистота по SDS-PAGE, режим светотени), химической устойчивости (чистота по 0Ф-ВЭЖХ, чистота по СЕХ, цвет) и биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SHгруппы, биологическая активность) во время хранения в условиях длительного хранения, а также ускоренного хранения и в стрессовых условиях хранения.

Стабилизаторы подразделяют на три различных класса. Группа I включает неионные (маннит, дигидрат трегалозы) и ионные (хлорид натрия и гидрохлорид аргинина) стабилизаторы. Все стабилизаторы группы I обеспечивают благоприятное действие по сравнению с их отсутствием. Однако установлено, что неионные стабилизаторы (трегалоза и маннит) лучше стабилизируют молекулу, что определено по более низким уровням агрегатов и более высокой активности по Cys-CEX.

Основываясь на выводах исследований на первоначальной стадии разработки композиций, проводят дальнейшие исследования в PFS с использованием подхода DoE. Оценивают действие стабилизаторов группы I (глицина, маннита, дигидрата трегалозы, хлорида натрия). Композиции наливают в предва- 28 033824 рительно заполняемые шприцы и помещают на 2 месяца для исследования устойчивости в условия длительного и ускоренного хранения и в стрессовые условия, и оценивают в отношении физической устойчивости (АР-SEC, DLS, мутность, видимые частицы и субвидимые частицы в режиме светотени), химической устойчивости (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) и индикаторов биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы). Кроме того, к композициям, налитым в 2-мл флаконы, применяют замораживание-оттаивание (5 циклов от -20°C до комнатной температуры) и напряжение при встряхивании (150 об/мин в течение одной недели). Что касается стабилизаторов класса I, подтверждаются наблюдения более ранних проверок: 1) все стабилизаторы группы I обеспечивают благоприятное действие по сравнению с их отсутствием; и 2) найдено, что неионные стабилизаторы лучше стабилизируют белок секукинумаб (фиг. 14). Это особенно заметно по чистоте по SEC, чистоте по ОФВЭЖХ и полидисперсности по DLS. При сравнении различных неионных стабилизаторов релевантного эффекта не наблюдается.

Далее, авторы изобретения идентифицировали идеальную концентрацию стабилизатора класса I (200-300 мМ дигидрата трегалозы). Образцы наливают в PFS и хранят до трех месяцев в условиях длительного и ускоренного хранения. Проверяют физическую (АР-SEC, DLS, субвидимые частицы в режиме светотени, видимые частицы, мутность) и химическую (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) устойчивость секукинумаба, а также биологическую активность. Не наблюдают релевантного различия в признаках качества секукинумаба с изменением концентраций трегалозы (фиг. 3).

1.2.2. Пример 6. Выбор поверхностно-активного вещества оказывает слабое влияние на устойчивость.

Первоначальная разработка композиции для содержащей 150 мг/мл жидкой композиции концентрировалась на оценке различных эксципиентов (например, стабилизаторов и поверхностно-активных веществ) в отношении образования растворимых и нерастворимых агрегатов секукинумаба (АР-SEC, чистота по SDS-PAGE, режим светотени), химической устойчивости (чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по СЕХ, цвет) и биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы, биологическая активность) во время хранения в условиях длительного хранения, а также ускоренного хранения и в стрессовых условиях хранения. Эксципиенты подразделяют на три различных класса: группа III включает поверхностно-активные вещества полисорбат 20 и 80. Не обнаруживаются различия между полисорбатом 20 и 80 в концентрации 0,04% при сравнении с композициями без поверхностно-активного вещества во время хранения в состоянии покоя.

Основываясь на выводах исследований на первоначальной стадии разработки композиций, проводят дальнейшие исследования в PFS с использованием подхода DoE. Оценивают действие поверхностноактивного вещества (полисорбата 20, полисорбата 80, полоксамера 188, в отстуствие). Композиции наливают в PFS и помещают на 2 месяца для исследования устойчивости в условия длительного и ускоренного хранения и в стрессовые условия, и оценивают в отношении физической устойчивости (АР-SEC, DLS, мутность, видимые частицы и субвидимые частицы в режиме светотени), химической устойчивости (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) и индикаторов биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы). Кроме того, к композициям, налитым в 2-мл флаконы, применяют замораживание-оттаивание (5 циклов от -20°C до комнатной температуры) и напряжение при встряхивании (150 об/мин в течение одной недели). Присутствие поверхностно-активного вещества является благоприятным, так как наблюдают более низкие уровни мутности и числа видимых и субвидимых частиц в режиме светотени. Однако имеется только слабое влияние типа поверхностно-активного вещества (фиг. 15).

Затем авторы изобретения идентифицировали идеальную концентрацию поверхностно-активного вещества группы III (0,01-0,04% полисорбата 80). Образцы наливают в PFS и хранят до трех месяцев в условиях длительного и ускоренного хранения. Проверяют физическую (АР-SEC, DLS, субвидимые частицы в режиме светотени, видимые частицы, мутность) и химическую (чистота по СЕХ, чистота по ОФВЭЖХ, цвет) устойчивость секукинумаба, а также биологическую активность. Не наблюдают заметного влияния концентраций полисорбата 80 на признаки качества секукинумаба при хранении в состоянии покоя (фигура 3), а также после 1 недели встряхивания при 150 об/мин. Полидисперсность по DLS и число субвидимых частиц в режиме светотени несколько возрастают при более высокой концентрации поверхностно-активного вещества; поэтому устанавливают концентрацию полисорбата 80 0,02% для того, чтобы сохранить предел безопасности для самой низкой оцененной концентрации.

1.2.3. Пример 5. Выбор буфера оказывает небольшое влияние на устойчивость.

Влияние вида буфера (цитратный, гистидиновый, сукцинатный, ацетатный) оценивают в PFS с использованием подхода DoE. Композиции наливают в PFS и помещают на 2 месяца для исследования устойчивости в условия длительного и ускоренного хранения и в стрессовые условия, и оценивают в отношении физической устойчивости (АР-SEC, DLS, мутность, видимые и субвидимые частицы в режиме светотени), химической устойчивости (чистота по СЕХ, чистота по ОФ-ВЭЖХ, цвет) и индикаторов биологической активности (активность по Cys-CEX, свободные SH-группы). Кроме того, к композициям, налитым в 2-мл флаконы, применяют замораживание-оттаивание (5 циклов от -20°C до комнатной температуры) и напряжение при встряхивании (150 об/мин в течение одной недели). Влияния типа буфера

- 29 033824 не наблюдают. Фигура 16 показывает выбранные признаки качества.

1.2.4. Пример 6. Концентрация антител в испытываемом интервале оказывает небольшое влияние на устойчивость.

Влияние концентрации секукинумаба на признаки качества жидкой композиции оценивают в интервале 124,5-175,5 мг/мл. Композиции также содержат 200 мМ трегалозы, 5 мМ L-метионина и 0,02% полисорбата 80 в гистидиновом буфере, pH 5,8. Композиции наливают в PFS и хранят в условиях длительного и ускоренного хранения в течение 6 месяцев. Релевантные признаки качества антител (чистота по SEC, чистота по ОФ-ВЭЖХ, чистота по СЕХ, свободные SH-группы, биологическая активность, субвидимые частицы в режиме светотени, видимые частицы, мутность и цвет раствора) проверяют после 3 и 6 месяцев хранения. В интервале 25 мг/мл - 150 мг/мл релевантного влияния концентрации секукинумаба на признаки качества жидкой композиции не наблюдают (данные не приводятся).

1.3. Часть 3. Свойства предпочтительных конечных товарных композиций.

Предпочтительный фармацевтический продукт секукинумаба включает жидкую композицию со 150 мг/мл секукинумаба в 20 мМ гистидиновом буфере, pH 5,8, 200 мМ трегалозы, 0,02% полисорбата 80 и 5 мМ L-метионина, которая предоставляется в PFS. При начальном наполнении и в конце свободное пространство в PFS имеет содержание кислорода менее 12%. Такие фармацевтические продукты имеют превосходный срок хранения и общую устойчивость.

Выполняют проверку на устойчивость различных партий лекарственного продукта секукинумаба (150 мг/мл секукинумаба, 200 мМ дигидрата трегалозы, 20 мМ смеси L-гистидин/моногидрат гидрохлорида L-гистидина, 5 мМ L-метионина, 0,02% полисорбата 80 (% мас./об.), pH 5,8) в PFS. Результаты проверки в условиях длительного хранения (2-8°C) до 24 месяцев хранения, в условиях ускоренного хранения (25°C) до 6 месяцев хранения и хранения в условиях температурного стресса (30°C) до 6 месяцев хранения приводятся ниже в таблицах 9-11. На основании представленных данных по устойчивости данных до 24 месяцев реального времени для 150 мг секукинумаба/1 мл жидкости в предварительно заполняемом шприце (PFS) и данных по устойчивости до 36 месяцев, полученных во время разработки (объемный шприц), предлагается срок хранения 24 месяца для коммерческого продукта 150 мг секукинумаба/1 мл жидкости в PFS, при хранении в условиях длительного хранения 5°C±3°C, защиты от света и предотвращения замораживания.

Таблица 9. Чистота по методам SEC, CEX и ОФ-ВЭЖХ

	Чистота по SEC	Чистота по СЕХ	Чистота по ОФ- ВЭЖХ
		Чисто та/мо	АР- SEC	DP- SEC	Глав ный	Сумм а	Сумма кисло	Главн ый	Сумма частей до
		номер [%]	[%]	[%]	вари ант [%]	щело иных вари анто в [%]	тных вариа нтов [%]	вариа нт [%]	главного пика [%]
Условия
хранения
	Начальны	99,1	0,90	<0,10	78,2	11,3	10,5	88,7	2,2
	й анализ
-20°С	1,5	99,0	0,92	<0,10	77,5	11,8	10,6	89,4	1,8
	месяца
5°С ±	1,5	99,0	0,96	<0,10	77,2	12,0	10,7	89,4	1,9
3°С	месяца
	3 месяца	98,7	1,0	0.20	77,5	12,1	10,3	88,7	1,9
	6	98,8	1,1	<0,10	77,5	11,5	10,9	86, 5	4,1*
	месяцев
	9	98,7	1,2	0,10	76,7	12,4	10,8	88,2	2,1
	месяцев
	12	98,5	1,3	0,16	76,4	12,6	10,9	88,6	3,0
	месяцев
	18	98,2	1,3	0,43	73,8	14,7	11,5	84,8	6, 8*
	месяцев
	24	97,9	1,4	0,56	76,5	11,5	11,9	87,3	4,3
	месяца
25°С/	1,5	98,6	1,2	0,14	72,3	14,6	12,7	87,9	3,8
60%RH	месяца
	3 месяца	97,5	1,6	0,83	68,6	15,9	15,4	81,1	9,9
	6	96,2	2,0	1,7	62,8	16,2	21,0	76, 1	15,3
	месяцев
30°С/	1,5	97,6	1,5	0,90	67,9	16,4	15,5	86,7	5,1
75%RH	месяца
	3 месяца	96,5	2,0	1,4	60,9	17,2	21,8	77,1	14,0
	6	94,1	3,0	2,8	50,6	17,4	31,9	60,3	22,0
	месяцев

*Эта большая величина соотносится с появлением небольшого пика непосредственно перед главным пиком. Так как этот новый пик включается отдельно от главного пика, сумма вариантов перед главным пиком становится больше.

- 30 033824

Таблица 10. Чистота по методу CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) и примеси

Примеси по SDS-PAGE (в условиях восстановления)

Сумма примесей [%] по методу SDS-PAGE (в условиях восстанавления)

Условия хранения	Чистота по CE-SDS (в невосст. условиях) Чистота/Мономер [%]
Начальный	97,5

анализ

-20°С 1,5 месяца	97,3
5°С±3°С 1,5 месяца	97,2
3 месяца	97,4
6 месяцев	97,4
9 месяцев	97,5
Условия хранения	Чистота по CE-SDS (в невосст. условиях)

Чистота/Мономер [%]

Примеси по SDS-PAGE (в условиях восстановления)

Сумма примесей [%]

	12 месяцев 18 месяцев 24 месяцев	97,4 97.1 97.2	0,58 0,63 0,61
25°C/60%RH	1,5 месяца 3 месяца 6 месяцев	97,1 96, 7 95,3	1,3 0,86 1,1
30°C/75%RH	1,5 месяца 3 месяца 6 месяцев	96, 8 95,6 94,0	1,1 1,3 1,9

Таблица 11. Эффективность и количество

Условия	хранения	Ингибирование IL-16 хондроцитов С-20/А4	из [%]	Анализ белка по УФпоглощению
Эффективность	[%]		Количество [мг/мл]
	Начальный	107			147,9
	анализ
-20°С	1,5 месяца	107	149,6
5°С±3°С	1,5 месяца	92			149,4
	3 месяца	92*			149,5
	6 месяцев	102*			149,6
	9 месяцев	103			149,5
	12 месяцев	90*			149,0
	18 месяцев	88			147,9
	24 месяца	98			149,4
25°C/60%RH	1,5 месяца	100			149,4
	3 месяца	107*			149,7
	6 месяцев	94*			149,6
30°C/75%RH	1,5 месяца	90			149,1
	3 месяца	119*			149,3
	6 месяцев	85*			149,4

*Образцы испытывают >30 дней после даты срока годности, такое отклонение не оказывает воздействия на результаты анализа эффективности.

- 31 033824

Список последовательностей <110> Novartis AG

Serno-Schersch, Kathrin loerg, Susanne <120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРОДУКТЫ И УСТОЙЧИВЫЕ ЖИДКИЕ КОМПОЗИЦИИ

АНТИТЕЛ К IL-17 <130> 56417 FF <140> При сем <141> При сем <150> 62/095,210 <151> 2014-12-22 <160> 15 <170> Patentin, версия3.5 <210> 1 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> искусственная <220>

<223> CDR1 = гипервариабельный участок 1 тяжелой цепи AIN457 <400> 1

Asn Туг Trp Met Asn

5

<210>	2
<211>	17
<212>	БЕЛОК
<213>	ИСКУССТВЕННАЯ
<220>
<223>	CDR2 = гипервариабельный	участок	2 тяжелой цепи AIN457
<400>	2
Ala Не	; Asn Gin Asp Gly Ser Glu	Lys Tyr	Tyr Vai Gly Ser Vai Lys
1	5	10	15
Gly

- 32 033824

<210>	3
<211>	18
<212>	БЕЛОК
<213>	ИСКУССТВЕННАЯ
<220>
<223>	CDR3 = гипервариабельный	участок	3 тяжелой цепи AIN457
<400>	3
Asp Tyr Tyr Asp lie Leu Thr Asp	Туг Туг	lie His Туг Trp Туг Phe
1	5	10	15

Asp Leu <210> 4 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> ИСКУССТВЕННАЯ <220>

<223> CDR1' = гипервариабельный участок 1 легкой цепи AIN457 <400> 4

Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 15 10 <210> 5 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ИСКУССТВЕННАЯ <220>

<223> CDR2' = гипервариабельный участок 2 легкой цепи AIN457 <400> 5

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

5 <210> 6 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ИСКУССТВЕННАЯ

- 33 033824 <220>

<223> CDR3' = гипервариабельный участок 3 легкой цепи AIN457 <400> 6

Gin Gin Туг Gly Ser Ser Pro Cys Thr

5 <210> 7 <211> 381 <212> ДНК <213> HOMO SAPIENS <220>

<221> CDS <222> (1)..(381) <400> 7

gag Glu 1

gtg cag

ttg gtg Leu Vai 5

gag Glu

tet ggg gga ggc ttg gtc cag cct

ggg Gly 15

ggg Gly

48

Vai

Gin

Ser

Gly

Gly Leu 10

Vai

Gin

Pro

tcc

ctg

aga

etc

tcc

tgt

gca

gcc

tet

gga

ttc

acc

ttt

agt

aac

tat

96

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asn

Tyr

20

25

30

tgg

atg

aac

tgg

gtc

ege

cag

get

cca

ggg

aaa

ggg

ctg

gag

tgg

gtg

144

Trp

Met

Asn

Trp

Vai

Arg

Gin

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Vai

35

40

45

gcc

ata

aac

caa

gat

gga

agt

gag

aaa

tac

tat

gtg

ggc

tet

gtg

192

Ala

lie

Asn

Gin

Asp

Gly

Ser

Glu

Lys

Tyr

Vai

Gly

Ser

Vai

50

55

60

aag

ggc

cga

ttc

ace

ate

tcc

aga

gac

aac

gcc

aag

aac

tea

ctg

tat

240

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

lie

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Ser

Leu

Tyr

65

70

75

80

ctg

caa

atg

aac

age

ctg

aga

gtc

gag

gac

acg

get

gtg

tat

tac

tgt

288

Leu

Gin

Met

Asn

Ser

Leu

Arg

Vai

Glu

Asp

Thr

Ala

Vai

Tyr

Cys

85

90

95

gtg

agg

gac

tat

tac

gat

att

ttg

acc

gat

tat

tac

ate

cac

tat

tgg

336

Vai

Arg

Asp

Tyr

Asp

lie

Leu

Thr

Asp

Tyr

lie

His

Tyr

Trp

100

105

110

tac

ttc

gat

etc

tgg

ggc

cgt

ggc

acc

ctg

gtc

act

gtc

tcc

tea

381

Tyr

Phe

Asp

Leu

Trp

Gly

Arg

Gly

Thr

Leu

Vai

Thr

Vai

Ser

115

120

125

- 34 033824 <210> 8 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> HOMO SAPIENS <400> 8

Glu 1

Val Gln

Leu

Val Glu 5

Ser

Gly

Gly Gly 10

Leu Val Gln

Pro

Gly 15

Gly

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asn

Tyr

20

25

30

Trp

Met

Asn

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

35

40

45

Ala

lie

Asn

Gln

Asp

Gly

Ser

Glu

Lys

Tyr

Val

Gly

Ser

Val

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

lie

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Ser

Leu

Tyr

65

70

75

80

Leu

Gln

Met

Asn

Ser

Leu

Arg

Val

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

Cys

85

90

95

Val

Arg

Asp

Tyr

Asp

lie

Leu

Thr

Asp

Tyr

lie

His

Tyr

Trp

100

105

110

Tyr

Phe

Asp

Leu

Trp

Gly

Arg

Gly

Thr

Leu

Val

Thr

Val

Ser

115

120

125

<210> 9 <211> 327 <212> ДНК <213> HOMO SAPIENS <220>

<221> CDS <222> (1)..(327) <400> 9

- 35 033824

gaa Glu 1

att gtg lie Vai

ttg Leu

acg Thr 5

cag tet

cca ggc

acc Thr 10

Ctg tet

ttg tet

cca ggg

48

Gin

Ser

Pro

Gly

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro 15

Gly

gaa

aga gcc

acc

etc

tec

tgc

agg

gcc

agt

cag

agt

gtt

age

96

Glu

Arg Ala

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Vai

Ser

20

25

30

tac

tta gcc

tgg

tac

cag

aaa

cct

ggc

cag

get

ccc

agg

etc

144

Tyr

Leu Ala

Trp

Tyr

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

35

40

45

ate

tat ggt

gca

tec

age

agg

gcc

act

ggc

ate

cca

gac

agg

ttc

agt

192

He

Tyr Gly

Ala

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

He

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

50

55

60

ggc

agt ggg

tet

ggg

аса

gac

ttc

act

etc

acc

ate

age

aga

ctg

gag

240

Gly

Ser Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

He

Ser

Arg

Leu

Glu

65

70

75

80

cct

gaa gat

ttt

gca

gtg

tat

tac

tgt

cag

tat

ggt

age

tea

ecg

288

Pro

Glu Asp

Phe

Ala

Vai

Tyr

Cys

Gin

Tyr

Gly

Ser

Pro

85

90

95

tgc

acc ttc

ggc

caa

ggg

аса

ega

etg

gag

att

aaa

ega

327

Cys

Thr Phe

Gly

Gin

Gly

Thr

Arg

Leu

Glu

He

Lys

Arg

100

105

<210> 10

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> HOMO

SAPIENS

<400> 10

Glu

lie Vai

Leu

Thr

Gin

Ser

Pro

Gly

Thr

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

1

5

10

15

Glu

Arg Ala

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Vai

Ser

20

25

30

Tyr

Leu Ala

Trp

Tyr

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

35

40

45

He

Tyr Gly

Ala

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

He

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

50

55

60

- 36 033824

Gly 65

Ser Gly

Thr Asp Phe Thr Leu Thr

He

Ser

Arg

Leu

Glu 80

70

75

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Vai

Tyr

Cys

Gin

Tyr

Gly

Ser

Pro

85

90

95

Cys

Thr

Phe

Gly

Gin

Gly

Thr

Arg

Leu

Glu

He

Lys

Arg

100

105

<210> 11 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> искусственная <220>

<223> CDRl-x = гипервариабельный домен х тяжелой цепи AIN457 <400> 11

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Туг Trp Met Asn

10 <210> 12 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> искусственная <220>

<223> CDR2-X = гипервариабелльный домен тяжелой цепи х AIN457 <400> 12

Ala lie Asn Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr

10 <210> 13 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> ИСКУССТВЕННАЯ <220>

<223> CDR3-X = гипервариабельный домен x тяжелой цепи AIN457 <400> 13

Cys Vai Arg Asp Tyr Tyr Asp He Leu Thr Asp Tyr Tyr lie His Tyr

10 15

- 37 033824

Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly <210> 14 <211> 215 <212> БЕЛОК <213> homo sapiens <400> 14

Glu 1

He Vai

Leu Thr 5

Gin Ser

Pro Gly Thr 10

Leu Ser Leu

Ser

Pro 15

Gly

Glu

Arg

Ala

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ala

Ser

Gin

Ser

Vai

Ser

20

25

30

Tyr

Leu

Ala

Trp

Tyr

Gin

Lys

Pro

Gly

Gin

Ala

Pro

Arg

Leu

35

40

45

He

Tyr

Gly

Ala

Ser

Arg

Ala

Thr

Gly

He

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

50

55

60

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Thr

He

Ser

Arg

Leu

Glu

65

70

75

80

Pro

Glu

Asp

Phe

Ala

Vai

Tyr

Cys

Gin

Tyr

Gly

Ser

Pro

85

90

95

Cys

Thr

Phe

Gly

Gin

Gly

Thr

Arg

Leu

Glu

He

Lys

Arg

Thr

Vai

Ala

100

105

110

Ala

Pro

Ser

Vai

Phe

He

Phe

Pro

Ser

Asp

Glu

Gin

Leu

Lys

Ser

115

120

125

Gly

Thr

Ala

Ser

Vai

Cys

Leu

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

130

135

140

Ala

Lys

Vai

Gin

Trp

Lys

Vai

Asp

Asn

Ala

Leu

Gin

Ser

Gly

Asn

Ser

145

150

155

160

- 38 033824

Gin Glu Ser Vai Thr

165

Ser Ser Thr Leu Thr

180

Tyr Ala Cys Glu Vai

195

Ser Phe Asn Arg Gly

210

Glu Gin Asp Ser Lys Asp

170

Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

185

Thr His Gin Gly Leu Ser

200

Glu Cys

215

Ser Thr Tyr Ser Leu

175

Glu Lys His Lys Vai

190

Ser Pro Vai Thr Lys

205

<210> <211> <212> <213>	15 457 БЕЛОК homo sapiens
<400>	15

Glu 1

Vai Gin

Leu

Vai Glu Ser Gly 5

Gly

Gly Leu 10

Vai Gin Pro

Gly 15

Gly

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Ala

Ser

Gly

Phe

Thr

Phe

Ser

Asn

Tyr

20

25

30

Trp

Met

Asn

Trp

Vai

Arg

Gin

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Vai

35

40

45

Ala

lie

Asn

Gin

Asp

Gly

Ser

Glu

Lys

Tyr

Vai

Gly

Ser

Vai

50

55

60

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

He

Ser

Arg

Asp

Asn

Ala

Lys

Asn

Ser

Leu

Tyr

65

70

75

80

Leu

Gin

Met

Asn

Ser

Leu

Arg

Vai

Glu

Asp

Thr

Ala

Vai

Tyr

Cys

85

90

95

Vai

Arg

Asp

Tyr

Asp

He

Leu

Thr

Asp

Tyr

He

His

Tyr

Trp

100

105

110

- 39 033824

Tyr Phe

Asp 115

Leu

Trp

Gly Arg Gly 120

Thr

Leu Vai Thr

Vai 125

Ser

Ala

Ser

Thr

Lys

Gly

Pro

Ser

Vai

Phe

Pro

Leu

Ala

Pro

Ser

Lys

Ser

130

135

140

Thr

Ser

Gly

Thr

Ala

Leu

Gly

Cys

Leu

Vai

Lys

Asp

Tyr

Phe

145

150

155

160

Pro

Glu

Pro

Vai

Thr

Vai

Ser

Trp

Asn

Ser

Gly

Ala

Leu

Thr

Ser

Gly

165

170

175

Vai

His

Thr

Phe

Pro

Ala

Vai

Leu

Gin

Ser

Gly

Leu

Tyr

Ser

Leu

180

185

190

Ser

Vai

Thr

Vai

Pro

Ser

Leu

Gly

Thr

Gin

Thr

Tyr

195

200

205

He

Cys

Asn

Vai

Asn

His

Lys

Pro

Ser

Asn

Thr

Lys

Vai

Asp

Lys

Arg

210

215

220

Vai

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

His

Thr

Cys

Pro

Cys

Pro

225

230

235

240

Ala

Pro

Glu

Leu

Gly

Pro

Ser

Vai

Phe

Leu

Phe

Pro

Lys

245

250

255

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

He

Ser

Arg

Thr

Pro

Glu

Vai

Thr

Cys

Vai

260

265

270

Vai

Asp

Vai

Ser

His

Glu

Asp

Pro

Glu

Vai

Lys

Phe

Asn

Trp

Tyr

275

280

285

Vai

Asp

Gly

Vai

Glu

Vai

His

Asn

Ala

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

290

295

300

Gin

Tyr

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Vai

Ser

Vai

Leu

Thr

Vai

Leu

His

305

310

315

320

- 40 033824

Gin

Asp Trp

Leu

Asn Gly Lys 325

Glu

Tyr Lys Cys 330

Lys

Vai

Ser

Asn 335

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

He

Glu

Lys

Thr

He

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gin

340

345

350

Pro

Arg

Glu

Pro

Gin

Vai

Tyr

Thr

Leu

Pro

Ser

Arg

Glu

Met

355

360

365

Thr

Lys

Asn

Gin

Vai

Ser

Leu

Thr

Cys

Leu

Vai

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

370

375

380

Ser

Asp

He

Ala

Vai

Glu

Trp

Glu

Ser

Asn

Gly

Gin

Pro

Glu

Asn

385

390

395

400

Tyr

Lys

Thr

Pro

Vai

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Leu

405

410

415

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Vai

Asp

Lys

Ser

Arg

Trp

Gin

Gly

Asn

Vai

420

425

430

Phe

Ser

Cys

Ser

Vai

Met

His

Glu

Ala

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gin

435

440

445

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

450

455

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

1. Фармацевтический продукт, включающий:

a) контейнер со свободным пространством, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее 12% от объема свободного пространства, и

b) стабильную готовую к применению жидкую фармацевтическую композицию с pH, равным от примерно 5,2 до примерно 6,2, расположенную в указанном контейнере, причем указанная композиция содержит:

i) от примерно 20 мг/мл до примерно 175 мг/мл секукинумаба и ii) от примерно 2,5 до примерно 20 мМ L-метионина.

2. Фармацевтический продукт по п.1, причем концентрация метионина составляет примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ.

3. Фармацевтический продукт по любому из предшествующих пунктов, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее 10% от объема свободного пространства, менее 8% от объема свободного пространства или менее 6% от объема свободного пространства.

4. Фармацевтический продукт по любому из предшествующих пунктов, в котором жидкая фармацевтическая композиция имеет pH примерно 5,8.

5. Фармацевтический продукт по любому из предшествующих пунктов, причем концентрация секукинумаба составляет примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл.

6. Фармацевтический продукт, содержащий:

a) контейнер со свободным пространством, причем содержание кислорода в свободном пространстве составляет менее 6% от объема свободного пространства; и

b) стабильную готовую к применению жидкую фармацевтическую композицию, расположенную в указанном контейнере, причем указанная композиция содержит от примерно 25 до примерно 150 мг/мл секукинумаба, от примерно 10 до примерно 30 мМ гистидина с pH 5,2-6,2, от примерно 200 до примерно 225 мМ трегалозы, от примерно 0,01 до примерно 0,04% полисорбата и от примерно 2,5 до примерно 20 мМ Lметионина.

7. Фармацевтический продукт по п.6, содержащий:

a) примерно 25 мг/мл секукинумаба и примерно 225 мМ трегалозы; или

b) примерно 150 мг/мл секукинумаба и примерно 200 мМ трегалозы.

- 41 033824

8. Фармацевтический продукт по любому из предшествующих пунктов, в котором жидкая композиция сохраняет:

a) по меньшей мере 86% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере 76% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 25°C/60% относительной влажности (RH) в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере 60% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев;

b) по меньшей мере 77% чистоту по СЕХ после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере 62% чистоту по СЕХ после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере 50% чистоту по СЕХ после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев;

c) жидкая композиция сохраняет по меньшей мере 98% чистоту по SEC после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере 96% чистоту по SEC после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере 94% чистоту по SEC после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев;

d) по меньшей мере 97% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, по меньшей мере 95% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере 94% (предпочтительно по меньшей мере примерно 92%) чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев;

e) менее 0,57% примесей по SDS-PAGE (в условиях восстановления) после хранения при 2-8°C в течение 6 месяцев, менее 1,1% примесей по SDS-PAGE (в условиях восстановления) после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или менее 1,9% примесей по SDS-PAGE (в условиях восстановления) после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев; и/или

f) по меньшей мере 88% относительную биологическую активность по ингибированию высвобождения IL-6 из хондроцитов C-20M.4 после хранения при 2-8°C в течение 18 месяцев, по меньшей мере 94% относительную биологическую активность по ингибированию высвобождения IL-6 из хондроцитов C-20M.4 после хранения при 25°C/60% RH в течение 6 месяцев и/или по меньшей мере 85% относительную биологическую активность по ингибированию высвобождения IL-6 из хондроцитов C-20M.4 после хранения при 30°C/75% RH в течение 6 месяцев.

9. Фармацевтический продукт по любому из предшествующих пунктов, в котором жидкая композиция сохраняет:

a) по меньшей мере 84% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

b) по меньшей мере 73% чистоту по СЕХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

c) по меньшей мере 97% чистоту по SEC после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

d) по меньшей мере 97% чистоту по CE-SDS (в не восстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев; и/или

e) менее 0,91% примесей по SDS-PAGE (в условиях восстановления) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

10. Фармацевтический продукт по любому из пп.1-9, причем контейнер выбран из группы, состоящей из картриджа, ручки, предварительно заполняемый шприц, автоинжектор и флакон.

11. Способ уменьшения окисления секукинумаба, включающий:

a) получение стабильной готовой к применению жидкой композиции с pH, равным от примерно 5,2 до примерно 6,2 и содержащей:

i) от примерно 25 мг/мл до примерно 175 мг/мл секукинумаба и ii) от примерно 2,5 мМ до примерно 20 мМ L-метионина;

b) размещение указанной жидкой композиции в контейнере со свободным пространством и

c) доведение содержания кислорода в свободном пространстве до уровня, равного или меньше 12% от объема свободного пространства.

12. Способ по п.11, в котором стадию доведения с) выполняют, продувая свободное пространство с использованием инертного газа, выбранного из гелия, азота и аргона.

13. Способ по п.11, причем концентрация L-метионина составляет примерно 2,5 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ или примерно 20 мМ.

14. Способ по п.13, причем содержание кислорода в свободном пространстве доводят до менее 10% от объема свободного пространства, менее 8% от объема свободного пространства или менее от объема свободного пространства 6%.

15. Способ по п.14, причем жидкая композиция имеет pH примерно 5, 8.

16. Способ по п.15, причем концентрация секукинумаба составляет примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл.

17. Стабильная готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция, содержащая от примерно 25 мг/мл до примерно 150 мг/мл секукинумаба, от примерно 10 мМ до примерно 30 мМ гистидина с pH 5,2-6,2, от примерно 200 мМ до примерно 225 мМ трегалозы, от примерно 0,01% до примерно 0,04% полисорбата и от примерно 2,5 мМ до примерно 20 мМ L-метионина.

18. Готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция по п.17, в которой после 13 меся

- 42 033824 цев хранения при 25°C образование агрегатов, измеренное по АР-SEC, составляет <3,5%.

19. Готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция по п.17, в которой после 13 месяцев хранения при 25°C продукты разложения по ОФ-ВЭЖХ составляют <39,4%.

20. Готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция по п.19, причем жидкая компози ция сохраняет:

a) по меньшей мере 87,3% чистоту по ОФ-ВЭЖХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

b) по меньшей мере 76,5% чистоту по СЕХ после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

c) по меньшей мере 97,9% чистоту по SEC после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев;

d) по меньшей мере 97,2% чистоту по CE-SDS (в невосстанавливающих условиях) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев; и/или

e) менее 0,61% примесей по SDS-PAGE (в условиях восстановления) после хранения при 2-8°C в течение 24 месяцев.

21. Готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция по п.20, в которой после 13 месяцев хранения при 25°C образование агрегатов, измеренное по АР-SEC, составляет <3,5%.

22. Готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция по п.20, в которой после 13 меся цев хранения при 25°C продукты разложения по ОФ-ВЭЖХ составляют <39,4%.

23. Стабильная готовая к применению жидкая фармацевтическая композиция, содержащая примерно 150 мг/мл секукинумаба, примерно 20 мМ гистидина, pH 5,8, примерно 200 мМ трегалозы, примерно 0,02% полисорбата 80 и примерно 5 мМ L-метионина.