[go: up one dir, main page]

EA028356B1 - Лечение и профилактика амилоидоза - Google Patents

Лечение и профилактика амилоидоза Download PDF

Info

Publication number
EA028356B1
EA028356B1 EA201070812A EA201070812A EA028356B1 EA 028356 B1 EA028356 B1 EA 028356B1 EA 201070812 A EA201070812 A EA 201070812A EA 201070812 A EA201070812 A EA 201070812A EA 028356 B1 EA028356 B1 EA 028356B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
zeo
variable region
antibody
light chain
amyloid
Prior art date
Application number
EA201070812A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201070812A1 (ru
Inventor
Дейл Б. Шенк
Питер А. Сейберт
Джонатан Уолл
Хосе Сальданха
Original Assignee
Протена Байосайенсиз Лимитед
Юниверсити Оф Теннесси Рисерч Фаундейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Протена Байосайенсиз Лимитед, Юниверсити Оф Теннесси Рисерч Фаундейшн filed Critical Протена Байосайенсиз Лимитед
Publication of EA201070812A1 publication Critical patent/EA201070812A1/ru
Publication of EA028356B1 publication Critical patent/EA028356B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1018—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

Раскрыты способы, полезные для осуществления профилактики или лечения амилоидоза, включающего амилоидоз АА-типа и амилоидоз AL-типа, путем введения пептидов, содержащих неоэпитопы, такие как фрагменты АА из С-концевой области АА, и антител, специфичных для неоэпитопов агрегированных амилоидных белков, например антител, специфичных для С-концевой области АА-фибрилл. Антитела, ингибирующие образование и/или усиливающие удаление амилоидных депо у пациента, осуществляют таким образом профилактику или лечение амилоидной болезни.

Description

Настоящее изобретение относится к областям иммунологии и медицины.
Уровень изобретения
Амилоидоз является общим термином, который описывает ряд заболеваний, характеризующихся наличием патологических форм амилоидных белков, при которых часто наблюдается внеклеточное отложение (депонирование) белковых фибрилл, образующих многочисленные амилоидные депо или амилоидные бляшки, расположенные локально или системно. Такие депо или бляшки, состоят, прежде всего, из растворимого белка или пептида природного происхождения, который собирается в тканях разной локализации в виде больших нерастворимых скоплений диаметром 10-100 мкм. Депо состоят из в общем латеральных скоплений фибрилл, имеющих диаметр примерно от 10 до 15 нм. Амилоидные фибриллы производят характерное светло-зеленое двупреломление в поляризованном свете при окрашивании красителем Конго красным. В общем, фибриллярное строение этих депо представляет собой идентифицирующий признак для разных форм амилоидного заболевания.
Пептиды или белки, образующие бляшечные депо, часто происходят из более крупного белкапредшественника. Более конкретно, в патогенез амилоидных агрегатов, таких как фибриллярные депо, обычно вовлечено протеолитическое расщепление патологического белка-предшественника на фрагменты, которые аггрегируются в непараллельные β-складчатые листы.
Фибриллярное строение указанных депо является идентифицирующим признаком разных форм амилоидного заболевания. Например, интрацеребральные и цереброваскулярные депо, состоящие в основном из фибрилл бета-амилоидного пептида (β-АР), характерны для болезни Алыдгеймера (как семейной, так и спорадической форм), островковый амилоидный полипептид (ΙΑΡΡ; амилин) характерен для фибрилл амилоидных депо в панкреатических островковых клетках, связанных с диабетом II типа, и β2микроглобулин представляет собой основной компонент амилоидных депо, которые образуются вследствие продолжительного проведения гемодиализа. Позднее амилоидными заболеваниями были также признаны прион-ассоциированные заболевания, такие как болезнь Крейтцфельдта - Якоба.
В общем, патологические первичные амилоидозы отличаются присутствием белковых фибрилл с амилоидным типом легкой цепи (АЬ-типом), называемых так по гомологии Ν-терминальной области АЬ-фибрилл и вариабельного фрагмента легкой цепи иммуноглобулина (каппа или лямбда).
Разные формы заболевания были разделены на классы, главным образом исходя из связи амилоидоза с основным системным заболеванием. Таким образом, считается, что некоторые патологические состояния являются первичными амилоидозами, при которых не подтверждается предшествующее наличие заболевания или его существование в качестве сопутствующей патологии. При вторичном или реактивном амилоидозе (тип АА), который характеризуется наличием фибриллярных депо амилоидного белка (АА), выявляется основное или ассоциированное хроническое воспалительное или инфекционное патологическое состояние.
При семейно-наследственных амилоидозах возможно наличие ассоциированных нейропатических, почечных или сердечно-сосудистых депо АТТР-типа (транстиретинового). Другие семейнонаследственные амилоидозы включают другие синдромы и могут иметь разные амилоидные компоненты (например, семейная средиземноморская лихорадка, для которой характерны АА-фибриллы). Другие формы амилоидоза включают локализованные формы, отличающиеся фокальными, часто опухолеподобными, депо, которые возникают в отдельных органах. Другие амилоидозы связаны со старением, и обычно характеризуются образованием бляшки в сердце или мозге. Также распространены амилоидные депо, связанные с продолжительным гемодиализом. Сведения об этих и других формах амилоидного заболевания объединены в табл. 1 (Тап, δ. Υ. апб Рерук, Н181ора1ко1о§у 25:403-414, 1994; НаггРоп'к НаибЬоок οί 1и1етиа1 Мебюше, 134Ь Еб., 188е1Ьаскег, К. 1., е! а1. , ебк, МсСта^-НШ, 8аи Ргапс18со, 1995), и описаны в патентах США №№ 6875434, 6890535, 6913745, 6923964 и 6936246, которые полностью включены путем ссылки в настоящий документ.
- 1 028356
Таблица 1. Классификация амилоидных заболеваний
Амилоидный белок / пептид Белок- предшественник Варианты белков Клинические проявления
АА Сывороточный А- амилоидный белок (АроЗЗА) Реактивный (вторичный) амилоидов: семейная средиземноморская лихорадка, семейная амилоидная нефропатия с крапивницей и глухотой (синдром Макла-Уэллса)
АА Сывороточный А- амилоидный белок (АроЗЗА) Реактивный системный амилоидов, связанный с системными воспалительными заболеваниями
АЬ Легкие цепи моноклонального иммун о гло б улина (каппа, лямбда) Ак, А, (например, АкШ) Идиопатический (первичный) амилоидоз: связанный с миеломой или макроглобулинемией; системный амилоидоз, связанный с иммуноцитарной дискразией; моноклональная гаммопатия; оккультная дискразия; локальный нодулярный амилоидоз, связанный с хроническими воспалительными заболеваниями
АН 1дС (1<у1)) Αγί Амилоидоз, связанный с несколькими имму н о ци т а р ными дискразиями, тяжелая цепь
АТТБ Транстиретин (ТТК) По меньшей мере 30 известных точечных мутаций Семейная амилоидная полинейропатия (например, метионин МеРЗО, португальский тип)
- 2 028356
АТТК Транстиретин (ТТК) например, МеМ11 Семейная амилоидная кардиомиопатия (датский тип)
АТТК Транстиретин Дикий тип Системный сенильный
(ТТК) ТТК или изолейцин 11е122 амилоидоз
АароА1 ΑροΑΙ Аргинин Агд2 6 Семейная амилоидная полинейропатия
Аде1 Гельсолин Аспарагин Азп187 Семейный амилоидоз (финского типа)
Асуз Цистатин С Глутамин О1пб8 Наследственная церебральная геморрагия с амилоидозом (исландский тип)
АЗ Вариант * Болезнь
белок- предшественник (например β- АРР^з) 31п618 Альцгеймера, синдром Дауна, наследственный церебральный геморрагический амилоидоз (голландский тип), спорадическая церебральная амилоидная ангиопатия, миозит с инклюзионными тельцами
ав2м Бетаг- микроглобулин Связанный с хроническим гемодиализом
- 3 028356
Аса1 (Про) кальцитонин (Про) кальцитонин Медуллярная карцинома щитовидной железы
ΑΑΝΓ Αβ ЗУБР3 АВ2М Атриальный натрийуретический фактор, β-амилоидный белок- предшественник бета2- микроглобулин Фокальные сенильные амилоидозы: Изолированный атриальный амилоид; Мозг Семенные пузырьки Простата
Кератин Первичный локализованный кожный амилоид (макулярный, папулезный)
РгР Белок- предшественник прионов (33-35 кДа, клеточная форма) Белок скрепи (Зсгарте) 27-30 кДа Спорадическая болезнь Крейтцфельдта - Якоба, болезнь куру (трансмиссивные спонгиформные энцефалопатии, прионные болезни)
ΑΙΑΡΡ Островковый амилоидный полипептид (ΙΑΡΡ) Островки Лангерганса; Диабет типа II; Инсулинома
Пептидные например, Экзокринный
гормоны, прекальцитонин амилоидоз,
фрагменты связанный с
апудомами
Белок экзокринного семенного пузырька
Часто фибриллы, образующие большую часть амилоидного депо, происходят из одного или нескольких первичных белков-предшественников или пептидов, и обычно связываются с сульфатированными гликозоаминогликанами. Кроме того, амилоидные депо могут включать незначительное количество белков и пептидов разных типов, наряду с другими компонентами, такими как протеогликаны, ганглиозиды и другие сахара, как описано более подробно в нижеследующих разделах.
Фибриллы АА-типа состоят из пептидных фрагментов, размер которых варьирует, но в общем составляет около 8000 дальтон (АА-пептид или белок), которые образуются путем протеолитического расщепления сывороточного А-амилоидного белка (88А), циркулирующего аполипопротеина, который присутствует в частицах ЛИВ (липопротеинов высокой плотности) и синтезируется в гепатоцитах в ответ на такие цитокины как интерлейкин (1Ь)-1 и 1Ь-6, а также фактор некроза опухолей ΤΝΡ-α. См. НикЬу, О. с1 а1. Λιηνίοίύ 1, 119-137 (1994). Протеолитическое расщепление приводит к патологическому накоплению Ν-терминального остатка около 76 аминокислот от двух третей белка 8АА. Концентрация 8АА в плазме человека обычно составляет около 0,1 мг/мл, но в ответ на воспалительный стимул может повышаться более чем в 1000 раз. Частью указанного процесса является протеолиз молекулы 8АА, и продукт Νтерминального расщепления систематически накапливается в виде АА-фибрилл в жизненно-важных ор- 4 028356 ганах, включающих печень, селезенку, почки и надпочечники. Обычно накопление часто происходит также в сердце и желудочно-кишечном тракте.
В общем, амилоидоз АА-типа является проявлением заболеваний, которые вызывают устойчивый острофазовый ответ. Такие заболевания включают хронические воспалительные заболевания, хронические локальные или системные микробные инфекции и злокачественные новообразования. Амилоидные заболевания АА-типа включают без ограничения воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическую артропатию, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета и болезнь Крона. Депо АА также образуются в результате хронических микробных инфекций, таких как лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит и болезнь Уиппла. Некоторые злокачественные новообразования могут также вызывать образование АА-фибриллярных амилоидных депо. Они включают такие патологии, как ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома и волосатоклеточный лейкоз. Амилоидное заболевание АА-типа также может быть результатом наследственных воспалительных заболеваний, таких как семейная средиземноморская лихорадка. Дополнительно, амилоидное заболевание АА-типа может быть обусловлено лимфопролиферативными заболеваниями, такими как болезнь Кастлемана.
Амилоидоз АА-типа развивается без явной симптоматики и прогрессирует. Обычно симптомы выявляются на более поздних стадиях болезни. Часто пациент остается недиагностированным до появления тяжелого органного поражения. Накопление фибрилл АА-типа происходит в жизненно важных органах и приводит к дисфункции органа и, впоследствии, к смерти. Уровень пятилетнего выживания составляет 45-50%. После диагностики средняя выживаемость составляет от 4 до 8 лет. Заболевания почек на последней стадии являются причиной смерти в 40-60% случаев. См. СШтоге Ю. е! а1., Ьаисе! 358:24-9 (2001).
В настоящее время не существует каких-либо одобренных амилоид-специфических способов лечения какой-либо из амилоидных заболеваний, включающих амилоидоз АА-типа. См. СШтоге 1. Ό. е! а1., Ьаисе! 358:24-9 (2001). При наличии основного или сопутствующего заболевания терапия направлена на уменьшение выработки амилоидогеннного белка путем лечения основного заболевания. Например, современная стратегия лечения амилоидоза АА-типа нацелена на основной воспалительный процесс путем уменьшения уровня белка Аро88А ниже 10 мг/л. Применяемые в настоящее время способы лечения включают химиотерапию (хлорамбуцил и метотрексат МТХ), иммунодепрессанты (азатиоприн), противовоспалительные лекарства (колхицин) и ингибиторы ΊΝΡ. Таким образом, настоящее изобретение осуществляет давнюю потребность в схемах лечения для улучшения состояния при амилоидозе АА-типа или для профилактики указанной патологии.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенному человеческому, гуманизированному или химерному антителу, или к его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфически связываются с эпитопом в пределах 70-76 остатков человеческого амилоидного пептида, например, с эпитопом в пределах 70-76 остатков последовательности 8Еф ΙΌ ΝΟ: 2, или с эпитопом, содержащим остатки, представленные как 8Еф ГО ΝΟ: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11. Антитела или антиген-связывающие фрагменты по изобретению включают те из них, которые конкурируют за связывание с человеческим амилоидным пептидом с антителом 2А4, продуцируемым инвентарным номером АТСС или с антителом 7Ό8, продуцируемым инвентарным номером АТСС. Дополнительные антитела по изобретению конкурируют за связывание с человеческим А-амилоидным пептидом с антителом, имеющим вариабельную область легкой цепи, представляющую собой остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 152 или остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 153 и вариабельную область тяжелой цепи, представляющую собой остатки 20-138 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 154.
Раскрытые в изобретении антитела включают гуманизированные и химерные версии антитела 2А4, продуцируемые инвентарным номером АТСС, или гуманизированную или химерную версию антитела 7Ό8, продуцируемую инвентарным номером АТСС.
Например, типичные антитела и антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую один или несколько участков, определяющих комплементарность, вариабельной области легкой цепи антитела 2А4, представленной как остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 152 или один или несколько участков, определяющих комплементарность, вариабельной области легкой цепи 7Ό8, представленной как остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 153. В качестве другого примера, типичные антитела и антиген-связывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую два участка, определяющие комплементарность, вариабельной области легкой цепи 2А4, представленной как остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 152, или два участка, определяющие комплементарность, вариабельной области легкой цепи 7Ό8, представленной как остатки 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 153. Дополнительные типичные антитела и антигенсвязывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющие комплементарность, вариабельной области легкой цепи 2А4, представленной как остатки 20- 5 028356
131 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 152, или три участка, определяющие комплементарность, вариабельной области легкой цепи 7Ό8, представленной как остатки 20-131 последовательности δΕφ ΙΌ N0: 153. Типичные версии гуманизированных антител 2А4 или 7Ό8 содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из Ь87 и Ь90 (соглашение о нумерации по КаЪаО, который занят, соответственно, Υ и Р, и в которых остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. Типичные антитела и антиген-связывающие фрагменты содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из +7, +14, +15, +17, +18, +50, +75, +88, + 92 и +109 (линейная нумерация), который занят, соответственно Т, δ, Ь, Ό, О. К, Υ, Ь, Р и Ь, и в которых остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. Например, типичные антитела и антигенсвязывающие фрагменты содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из +75 и +92 (линейная нумерация), который занят, соответственно Υ и Р, и в которых остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. В других типичных антителах и антиген-связывающих фрагментах по изобретению вариабельная область легкой цепи содержит остаток каркасного участка в +105 (линейная нумерация), который занят О.
Например, антитела и антигенсвязывающие фрагменты по изобретению включают те из них, которые содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую остаток каркасного участка в +7 (линейная нумерация), занятый Т, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +14 (линейная нумерация), занятый δ, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +15 (линейная нумерация), занятый Ь, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +17 (линейная нумерация), занятый Ό, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +18 (линейная нумерация), занятый Ц, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +50 (линейная нумерация), занятый К, в которых остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +75 (линейная нумерация), занятый Υ, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +88 (линейная нумерация), занятый Ь, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +92 (линейная нумерация), занятый Р, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +109 (линейная нумерация), занятый Ь, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; и антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области легкой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +105 (линейная нумерация), занятый Ц, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина.
Вариабельные области легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина, используемые в настоящем изобретении, включают человеческие вариабельные области каппа-подгруппы 2 легких цепей (нумерация по КаЪа1), например, человеческую вариабельную область подгруппы 2 легкой цепи из человеческой зародышевой линии νΚΙΙΑ 19/А3, такую, как человеческая вариабельная область легкой цепи Ук, которая содержит последовательности, указанные, как δΕΟ ΙΌ N0: 166 или 167. В конкретных аспектах изобретения антитела и антиген-связывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, образованную остатками 20-131 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 152, остатками 20-131 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 153, или такие как δΕΟ ΙΌ
- 6 028356
N0: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 174, 175 или 176.
Типичные антитела и антигенсвязывающие фрагменты по изобретению также включают те из них, которые содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую одну или несколько участков, определяющих комплементарность, вариабельной области тяжелой цепи 2А4, представленной как остатки 20-138 последовательности δΕΟ ГО N0: 154, например, содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую два участка, определяющих комплементарность, в вариабельной области тяжелой цепи 2А4, представляющую собой остатки 20-138 последовательности δΕΟ ГО N0: 154, или вариабельную область тяжелой цепи, содержащей три участка, определяющих комплементарность, в вариабельной области тяжелой цепи 2А4, представляющую собой остатки 20-138 последовательности δΕΟ ГО N0: 154. Типичные гуманизированные антитела 2А4 и 7Ό8 и антиген-связывающие фрагменты содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из Н37, Н49, Н70 и Н93 (соглашение о нумерации по КаЪаЕ), который занят I, А, Р или V, соответственно, и в котором остаток из вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. Типичные гуманизированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из +10, +15, +19, +37, +49, +73, +78, +79, +80, +87, +95, +99, +119 (линейная нумерация), который занят К, К, К, I, А, Р, О. δ, М, N М, V или А, соответственно, и в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. Например, типичные гуманизированные антитела и антиген-связывающие фрагменты содержат по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из +37, +49, +73 и +99 (линейная нумерация), который занят I, А, Р или V, соответственно, и в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина.
Например, антитела и антигенсвязывающие фрагменты по изобретению включают те из них, которые содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую остаток каркасного участка в +10 (линейная нумерация), занятый К, при этом остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +15 (линейная нумерация), занятый К, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +19 (линейная нумерация), занятый К, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +37 (линейная нумерация), занятый I, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи, занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +49 (линейная нумерация), занятый А, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +73 (линейная нумерация), занятый Р, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +78 (линейная нумерация), занятый О, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +79 (линейная нумерация), занятый δ, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +80 (линейная нумерация), занятый М, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +87 (линейная нумерация), занятый N в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +95 (линейная нумерация), занятый М, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; антитела и антиген-связывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержа- 7 028356 щие остаток каркасного участка в +99 (линейная нумерация), занятый V, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина; и антитела и антигенсвязывающие фрагменты вариабельной области тяжелой цепи, содержащие остаток каркасного участка в +109 (линейная нумерация), занятый А, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина.
Вариабельная область тяжелой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина включает человеческую вариабельную область тяжелой цепи гамма-подгруппы 3 (соглашение о нумерации по КаЬа1), например, человеческую вариабельную область тяжелой цепи гамма-подгруппы 3, содержащую последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0: 165, такую как вариабельная область тяжелой цепи, содержащая аминокислотную последовательность, представляющую собой остатки 20-138 последовательности §ЕЦ ГО N0: 154 или указанную как §ЕЦ ГО N0: 161, 162 или 163.
Дополнительные примеры антител и антигенсвязывающих фрагментов содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющие комплементарность, из вариабельной области легкой цепи 2А4, которые представляют собой остатки 20-131 последовательности §ЕЦ ГО N0: 152 или три участка, определяющие комплементарность, из вариабельной области легкой цепи 7Ό8, которые представляют собой остатки 20-131 последовательности §ЕЦ ГО N0: 153, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три участка, определяющих комплементарность, из вариабельной области тяжелой цепи 2А4, представляющую собой остатки 20-138 последовательности §ЕЦ ГО N0: 154. Например, такие антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают те из них, которые имеют вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющие комплементарность, указанные как §ЕЦ ГО N0: 168, 169 и 170 и вариабельную область тяжелой цепи, содержащие три участка, определяющие комплементарность, указанные как §ЕЦ ГО N0: 171, 172 и 173. В качестве другого примера, такие антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают те из них, которые имеют вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющие комплементарность, которые представляют собой §ЕЦ ГО N0: 177, 169 и 170, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащие три участка, определяющих комплементарность, которые представляют собой §ЕЦ ГО N0: 171, 172 и 173. В другом примере такие антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают те из них, которые имеют вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая представляет собой остатки 20-131 последовательности §ЕЦ ГО N0: 152 или остатки 20-131 последовательности §ЕЦ ГО N0: 153, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, которая представляет собой остатки 20-138 последовательности §ЕЦ ГО N0: 154. В качестве другого примера, такие антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают те из них, которые имеют вариабельную область легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 174, 175 или 176, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0: 161, 162 или 163.
В конкретных аспектах по настоящему изобретению антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:155, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как §ЕЦ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:155, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как §ЕЦ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:155, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:156, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:156, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, как §ЕЦ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:156, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как §ЕЦ ГО N0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:157, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как §ЕЦ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:157, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, как §ЕЦ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0: 157, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0: 163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как §ЕЦ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как §ЕЦ ГО N0:158, и вариабельную область тяжелой цепи, содер- 8 028356 жащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО Ν0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:159, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:159, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:159, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотные последовательности, указанные как δΕΟ ГО N0:163; δΕΟ ГО N0:174, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:174, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:174, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:175, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:175, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:162; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:175, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:163; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:176, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:161; вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:176, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, такую как δΕΟ ГО N0:162; или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ГО N0:176, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную как δΕΟ ΙΌ N0:163.
Также настоящее изобретение рассматривает выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие человеческое, гуманизированное или химерное антитело, или его антиген-связывающий фрагмент, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 человеческого А-амилоидного пептида, и включает все указанные антитела и антиген-связывающие фрагменты, описанные выше в настоящем документе и приведенные в формуле изобретения. Дополнительно, изобретение относится к клеткам, экспрессирующим указанные нуклеиновые кислоты.
В других аспектах настоящее изобретение относится к выделенному антителу или к его антигенсвязывающему фрагменту, которое специфически связывается с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, где Χ1 и Х2 являются любой аминокислотой. Такие антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают человеческие, гуманизированные или химерные антитела и их антиген-связывающие фрагменты, например, те из них, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-76 в человеческом А-амилоидном пептиде.
Дополнительные примеры антител и антигенсвязывающих фрагментов включают такие, где Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р, А, Ь, С, О, К, Е, К, Ό, О, V, Υ, I или V, и где Х2 представляет собой Т, δ, Ε, К, I, V, Ρ, Ό, А, О, М, Ь, N Р, С, К, Υ или О; или Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р или А, и в которых Х2 представляет собой Т, δ, Ε, К, I, V, Ρ, Ό или А; или Χ1 является Н, Т, Ρ или А; или Х2 является Т, δ, Ε, Ό или А; или Χ1 является Н, Т, Ρ или А и Х2 является Т, δ, Ε, Ό или А; или Χ1 является Н, Т или А и Х2 является Т, δ, Е или А; или Χ1 является Н или А, и Х2 представляет собой Т, δ или А; или Χ1 является Н, и Х2 является Т или А; или Χ1 является А, и Х2 представляет собой δ, Т, Е или V; или Χ1 представляет собой А и Х2 представляет собой δ,Τ или Е; или Χ1 представляет собой Т и Х2 представляет собой Е; или Χ1 представляет собой Ρ и Х2 представляет собой Ό; или Χ1 представляет собой δ и Х2 представляет собой Е, Ρ или А; или Χ1 является Р и Х2 представляет собой Е, I или Ρ. Например, такие антитела и антиген-связывающие фрагменты связываются с представляет собой, ΡΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 17), δΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 18), ΆΕΙ)Ε (δΕΟ ГО N0: 19), ΡΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 20), ΡΕΙ)Ι (δΕΟ ГО N0: 21), ΡΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 22),
- 9 028356
ΑΕΌν (8ЕЦ ΙΌ N0: 23), δΕΌΕ (8ЕЦ ΙΌ N0: 24) и δΕΌΑ (8ЕЦ ΙΌ N0: 25); или с эпитопом, состоящим из аминокислотной последовательности, которая выбрана из группы, состоящей из ΟΗΕΌΤ (8ЕЦ ГО N0: 3), ΗΕΌΤ (δΕρ ГО N0: 12), ΑΕΌδ (δΕρ ΙΌ N0: 13), ΑΕΌΤ (δΕρ ΙΌ N0: 14), ΗΕΌΑ (δΕρ ΙΌ N0: 15), ΤΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 16), ΕΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 17), δΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 18), ΛΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 19), ΡΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 20), ΡΕΌΙ (δΕρ ΙΌ N0: 21), ΡΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 22), δΕΌΕ (δΕρ ΙΌ 24) и δΕΌΑ (δΕρ ΙΌ 25), или с эпитопом, состоящим из аминокислотной последовательности, которая выбрана из группы, состоящей из ΟΗΕΌΤ (δΕρ ΙΌ N0: 3), ΗΕΌΤ (δΕρ ΙΌ N0: 12), ΛΕΌδ (δΕρ ΙΌ N0: 13), δΕΌΤ (δΕρ ΙΌ 14), ΗΕΌΆ (δΕρ ΙΌ N0: 15) и ΤΕΌΕ (δΕΟ ΙΌ N0: 16). В агрегированном амилоидном белке можно обнаружить раскрытые в изобретении эпитопы, например, эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность, которая выбрана из группы, состоящей из ΟΗΟΆΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 4), ΟΗΌΆΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 5), ΟΌΗΆΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 7), δΤνΙΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 8) и ΟΚΟΗΕΌΤ (δΕΟ ΙΌ N0: 9); или эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность ΟΗΟΆΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0 4); или эпитоп, содержащий аминокислоты ΗΕΌΤ (δΕΟ ΙΌ N0: 12); или эпитоп, содержащий аминокислоты ΗΕΌΆ (δΕΟ ΙΌ N0: 15); или эпитоп, содержащий аминокислоты ΛΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 13) или эпитоп, содержащий аминокислоты ΛΕΌΤ (δΕΟ ΙΌ N0: 14); или эпитоп, содержащий аминокислоты ΤΕΌΕ (δΕΟ ΙΌ N0: 16); или эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность ΛΕΌν (δΕΟ ΙΌ N0: 23); или эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность δΕΌΕ (δΕΟ ΙΌ N0: 24) или ΡΕΌΕ (δΕΟ ΙΌ N0: 22); или эпитоп, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ΡΕΌδ (δΕΟ ΙΌ N0: 26), ΡΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 27), ΤΕΌν (δΕρ ΙΌ N0: 28), ΛΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 19), δΕΌΙ (δΕρ ΙΌ N0: 29) и ΤΕΌΤ (δΕΟ ΙΌ N0: 30); или эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ΌΕΌΟ (δΕρ ΙΌ N0: 31), ΛΕΌΜ (δΕρ ΙΌ N0: 32), ΗΕΌδ (δΕρ ΙΌ N0: 33), ΟΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 34), ΡΕΌδ (δΕρ ΙΌ N0: 35), ΚΕΌδ (δΕρ ΙΌ N0: 36), ΤΕΌΟ (δΕρ ΙΌ N0: 16), ρΕΌΚ (δΕρ ΙΌ N0: 38), ΤΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 39), ΡΙ'ΌΧ (δΕρ ΙΌ N0: 40), ΕΕΌΡ (δΕρ ΙΌ N0: 41), ΌΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 42), ΚΕΌΑ (δΕρ ΙΌ N0: 43), δΕΌΟ (δΕρ ΙΌ N0: 44), ΕΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 45), δΕΌΚ (δΕρ ΙΌ N0: 46), ΌΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 47), ΌΕΌΟ (δΕρ ΙΌ N0: 13), ΌΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 49), ΟΕΌΆ (δΕρ ΙΌ N0: 13), ΥΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 51), ΥΕΌΕ (δΕρ ΙΌ N0: 52), ΙΕΌΌ (δΕρ ΙΌ N0: 53), ΑΕΌΥ (δΕρ ΙΌ N0: 54), ΌΕΌΑ (δΕρ ΙΌ N0: 55), δΕΌΌ(δΕρ ΙΌ N0: 56), ΥΕΌρ (δΕρ ΙΌ N0: 57), ΌΕΌΑ (δΕρ ΙΌ δΕρ N0: 58), ΥΕΌΚ (δΕρ ΙΌ δΕρ N0: 59) и ΡΕΌΚ (δΕρ ΙΌ N0: 60).
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, описанные в настоящем изобретении, включают те из них, которые связываются с амилоидным белком в мономерной форме с аффинностью, составляющей менее чем примерно 10 М-1. Типичные амилоидные белки включают сывороточный амилоидный белок (δΑΑ), белок легкой цепи иммуноглобулина (такой как νλ6 Αίΐ и νΚ), человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник (ΙΑΡΡ), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ΤΤΚ) и аполипопротеин Α1 (ΑροΑΙ).
Также настоящее изобретение рассматривает выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом Х1 и Х2 являются любыми аминокислотами, и включает все указанные антитела и антиген-связывающие фрагменты, описаннные выше и приведенные в формуле настоящего изобретения. Дополнительно рассматриваются клетки, экспрессирующие указанные нуклеиновые кислоты.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способам терапевтического лечения или профилактики субъекта с выявленным амилоидозом АА-типа, с применением человеческого, гуманизированного или химерного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-76 в человеческом А-амилоидном пептиде, например, с эпитопом в пределах остатков 70-76 последовательности δΕρ ΙΌ N0: 2. Субъекты, для которых могут быть полезными раскрытые в изобретении терапевтические способы лечения амилоидоза АА-типа, включают субъектов, страдающих амилоидным заболеванием, которое выбрано из группы, состоящей из следующих патологий: ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета и болезнь Крона, лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома, волосатоклеточный лейкоз, семейная средиземноморская лихорадка, болезнь Кастлемана. Субъекты, для которых могут быть полезными раскрытые в изобретении способы профилактики, включают субъекты, предрасположенные к развитию любого из вышеуказанных заболеваний или находящиеся в группе риска.
Также настоящее изобретение рассматривает способы терапевтического лечения или профилактического лечения субъекта, страдающего амилоидозом, связанным с наличием агрегированного амилоидного белка, который содержит аминокислотную последовательность ΕΌ, с использованием антитела или антиген-связывающего фрагмента, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом Х1 и Х2 являются любыми аминокислотами. В число субъектов, для которых могут быть полезными раскрытые в изобретении терапевтические способы лечения амилоидоза, связанного с агрегированным амилоидным белком, входят субъекты, страдающие
- 10 028356 амилоидозом АА-типа, амилоидозом АЬ-типа, болезнью Алыдгеймера, умеренным когнитивным нарушением, амилоидной полинейропатией, средиземноморской лихорадкой, синдромом Макла-Уэллса, реактивным системным амилоидозом, связанным с системными воспалительными заболеваниями, амилоидозом, связанным с миеломой или макроглобулинемией, амилоидозом, связанным с иммуноцитарной дискразией, моноклональной гаммапатией, оккультной дискразией, и страдающие локальным нодулярным амилоидозом, связанным с хроническими воспалительными заболеваниями. В чило субъектов, для которых могут быть полезными раскрытые в изобретении способы профилактики, входят субъекты, предрасположенные или имеющие риск развития любого из вышеуказанных заболеваний. В одном аспекте изобретения амилоидный белок содержит аминокислотную последовательность АЕЭУ (8Еф ГО ΝΟ: 23), и терапевтическое или профилактическое лечение осуществляют путем применения раскрытых в изобретении способов лечения амилоидогенного зоболевания, которая представляет собой амилоидоз АА-типа, амилоидоз АЬ-типа, амилоидную полинейропатию, средиземноморскую лихорадку, синдром Макла-Уэллса, реактивный системный амилоидоз, связанный с системными воспалительными заболеваниями, амилоидоз, связанный с миеломой или макроглобулинемией, амилоидоз, связанный с иммуноцитарной дискразией, моноклональной гаммапатией, оккультной дискразией, и локальный нодулярный амилоидов, связанным с хроническими воспалительными заболеваниями.
Раскрытые способы лечения и профилактики являются полезными для лечения людей.
Типичные показатели эффективности терапевтического лечения включают замедление прогрессирования амилоидоза, торможение образования депо амилоидных фибриллярных агрегатов и/или устранение амилоидных фибриллярных агрегатов. Типичные показатели эффективного профилактического лечения включают задержку начала развития амилоидоза и/или снижение риска развития амилоидоза.
В дополнение к указанному, изобретение относится к способам обнаружения амилоидного депо, связанного с амилоидозом АА-типа у субъекта-человека, с использованием гуманизированного или химерного антитела, или его антиген-связывающего фрагмента, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-76 человеческого А-амилоидного пептида, и указанное антитело или его антиген-связывающий фрагмент связаны с детектируемой меткой, и затем у субъекта проводят детекцию детектируемой метки. Дополнительные способы включают обнаружение агрегированного амилоидного белка, содержащего аминокислотные последовательности ЕЬ, путем использования антитела или антиген-связывающего фрагмента, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим Х1ЕЬХ2 в агрегированном амилоидном белке, где Х1 и Х2 являются любыми аминокислотами. Вышеуказанные способы обнаружения можно применять, например, для контроля начала или прогрессирования болезни, или для лечения любого из вышеупомянутых заболеваний и нарушений. В отношении раскрытых в настоящем изобретении способов лечения, такой контроль можно осуществлять у людей, а также у субъектов, отличных от людей. Полезные детектируемые метки включают радиометки, например, 125Ι. При осуществлении таких способов детекции этап обнаружения детектируемой метки можно проводить неинвазивными способами, например, получением изображения с помощью мульти-функциональной томографической системы 8РЕСТ/СТ и ядерно-магнитной (ЯМР) спектроскопии.
В дополнении к указанному способу рассматриваются способы активной иммунотерапии у субъекта с амилоидозом АА-типа путем применения средства, который индуцирует иммунный ответ к остаткам 70-76 из А-амилоидного пептида, который обладает эффектом индуцирования иммунного ответа и содержит антитела против остатков 70-76 из А-амилоидного пептида. Типичные средства, индуцирующие иммунный ответ, включают остатки 70-76 из А-амилоидных пептидов, или субфрагмент по меньшей мере из 3 смежных остатков, имеющих менее 20 смежных аминокислот из АА-пептида. Эти способы полезны с терапевтической и профилактической стороны для лечения вышеописанных субъектов, в отношении пассивной иммунотерапии, то есть, путем введения антитела или антиген-связывающего фрагмента, которые специфически связываются с остатками 70-76 А-амилоидного пептида. Показатели терапевтической и профилактической эффективности в отношении пассивной иммунотерапии анологичны указанным выше.
Вышеизложенное суммирует конкретные аспекты по настоящему изобретению, и далее описаны его дополнительные аспекты.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1: выравнивание последовательностей человеческого белка 8АА1, человеческого 8АА2, человеческого 8АА3 и человеческого 8АА4.
Фиг. 2: выравнивание последовательностей человеческого 8АА1 и человеческого АА1.
Фиг. 3: выравнивание последовательностей человеческого 8АА2 и человеческого АА2.
Фиг. 4: выравнивание последовательностей человеческого 8АА3 и человеческого АА3.
Фиг. 5: выравнивание последовательностей человеческого 8АА4 и человеческого АА4.
Фиг. 6: выравнивание последовательностей человеческого АА1, человеческого АА2, человеческого АА3 и человеческого АА4.
Фиг. 7: выравнивание последовательностей последних семи остатков человеческого АА1, человеческого АА2, человеческого АА3 и человеческого АА4.
Фиг. 8: выравнивание последовательностей мышиного 8АА1, мышиного 8АА2, мышиного 8АА3 и
- 11 028356 мышиного δΑΑ4.
Фиг. 9: выравнивание последовательностей мышиного δΑΑ1 и мышиного АА1.
Фиг. 10: выравнивание последовательностей мышиного δΑΑ2 и мышиного АА2.
Фиг. 11: выравнивание последовательностей мышиного δΑΑ3 и мышиного АА3.
Фиг. 12: выравнивание последовательностей мышиного δΑΑ4 и мышиного АА4.
Фиг. 13: выравнивание последовательностей мышиного АА1, мышиного АА2, мышиного АА3 и мышиного АА4.
Фиг. 14: выравнивание последовательностей последних семи остатков мышиного АА1, мышиного АА2, мышиного АА3 и мышиного АА4.
Фиг. 15: выравнивание последовательностей человеческого δΑΑ1 и мышиного δΑΑ1.
Фиг. 16: выравнивание последовательностей человеческого АА1 и мышиного АА1.
Фиг. 17: выравнивание последовательностей человеческого δΑΑ1 и фрагмента мышиного δΑΑ1.
Фиг. 18: выравнивание последовательностей человеческого δΑΑΙ-альфа, человеческого δΑΑ1-бета и человеческого δΑΑ1-гамма.
Фиг. 19: выравнивание последовательностей человеческого δΑΑ2-альфа и человеческого δΑΑ2бета.
Фиг. 20: сравнение последовательностей белков δΑΑ. Область пептида, обычно продуцирующая 2А4, 809 и 7Ό8, показана пунктирными линиями. Вставки из 8 аминокислот между положениями 67 и 68 в последовательности шарпея подчеркнуты и обозначены стрелкой. Выравнивание проводили с СШЗΤΆΣν.
Фиг. 21: зародышевая последовательность легкой цепи Ук.
Фиг. 22: зародышевая последовательность легкой цепи νλ.
Фиг. 23: аминокислотная последовательность νλ6 νίί.
Фиг. 24: рентгенокристаллография νλ6 νίί, показывающая положение Ο1ιι5()-Α5ρ51.
Фиг. 25: рентгенокристаллография νλ6 νίί, показывающая положение 01ιι81-Α5ρ82.
Фиг. 26: кинетика связывания моноклональных антител тΑЪ Είаη с синтетическими фибриллами νλ6 νίί. Измерения взаимодействия тΑЪ 2Α4, 7Ό8 и 809 в концентрации 6,6 нМ с иммобилизированными фибриллами νλ6 νίί с помощью биосенсора ВМсогс. Расчетная константа ΚΌ каждого взаимодействия составляла около 1 нМ.
Фиг. 27: кинетика связывания в зависимости от концентрации тΑЪ 7Ό8 с синтетическими фибриллами νλ6 νίί. Взаимодействие антитела в концентрации 6,6 - 33,3 нМ с иммобилизированными фибриллами νλ6 νίί измеряли с помощью ВМсогс.
Фиг. 28: кинетика связывания тΑЪ 7Ό8 с синтетическими фибриллами νλ6 νίί в присутствии пептидов р39 и р41. Взаимодействие тΑЪ 7Ό8 в концентрации 6,6 нМ с иммобилизированными фибриллами νλ6 измеряли с помощью ВМсогс в присутствии пептидов р39 и р41 в концентрации 1 или 20 мкг/мл.
Фиг. 29: реактивность моноклональных антител с тканевыми амилоидными депо ΑΒλ.
Фиг. 30: биораспределение меченого 125Ι тΑЪ 7Ό8 у мышей, несущих человеческую амилоидому
ΑΕλ.
Фиг. 31: взаимодействие анти-АА из культурального супернатанта с АА-фибриллами мышиного происхождения. Показатели связывания с мышиным фактором усиления амилоидоза (ΑΕΡ) АА-типа моноклонального антитела тΑЪ из культурального супернатанта. На верхней и нижней схеме представлены данные, соответственно, по первому и второму сбору культуральной жидкости.
Фиг. 32: электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия δΌδ-ΡΑ0Ε белка-А, очищенного моноклональными антителами 2А4, 809 и 7Ό8.
Фиг. 33: связывание очищенных тΑЪ с иммунизирующим (р#39) и контрольным пептидом (р#41).
Фиг. 34: связывание с мышиным амилоидным экстрактом АА-типа (ΑΕΡ).
Фиг. 35: связывание очищенных тΑЪ с амилоидным экстрактом АА-типа почек человека.
Фиг. 36А-36Е: мышиные последовательности вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи 2А4, 7Ό8 и 809 (фиг. 36А); последовательности вариабельных областей легкой цепи гуманизированного 2Α4/809 и 7Ό8 (фиг. 36В-36С); человеческие последовательности вариабельных областей легкой цепи, используемые в качестве акцепторных каркасов (фиг. 36Ό); последовательности вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированных 2Α4/7Ό8/809 и человеческой вариабельной области тяжелой цепи, используемые в качестве акцепторного каркаса (фиг. 36Е).
Подчеркивание - СЭР; двойное подчеркивание - лидерные последовательности; нижний регистр обратные мутации.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к выделенному антителу или к его антиген-связывающему фрагменту, которое специфически связывается с эпитопом, включающим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, где Χ1 и Х2 являются любыми аминокислотами.
Типичные антитела по изобретению также включают антитела или их фрагменты, которые (а) кон- 12 028356 курируют до связывания с эпитопом, включающим ΧιΕΌΧ2, с антителами 2А4, 7Ό8 или 809; (В) связываются с тем же эпитопом, включающим ХЩЭХг, что и антитела 2А4, 7Ό8 или 809; (с) включают антиген-связывающий домен из антител 2А4, 7Ό8 или 809; или (б) включают шесть участков, определяющих копмплиментарность (СИК), из антител 2А4, 7Ό8 или 809.
Изобретение также относится к выделенной вариабельной области антитела, которая включает (а) вариабельную область легкой цепи антитела, полученного из 2А4, 7Ό8, или 809 антитело; или (Ъ) вариабельную область тяжелой цепи антитела, происходящего из антител 2А4, 7Ό8 или 809.
Изобретение также относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей вариабельную область легкой цепи или вариабельную область тяжелой цепи антитела, которая включает (а) нуклеотидную последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи или тяжелой цепи антител 7Ό8, 2А4 или 809; (Ъ) нуклеотидную последовательность, которая идентична нуклеотидной последовательности антител 7Ό8, 2А4 или 809, которая кодирует вариабельную область легкой цепи или тяжелой цепи; (с) нуклеотидную последовательность, которая по существу идентична нуклеотидной последовательности (а) или (Ъ); или (б) нуклеиновую кислоту, которая специфически гибридизуется с нуклеиновой кислотой, имеющей нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности (а) или (Ъ) при строгих условиях гибридизации.
Также в настоящем изобретении рассматриваются клетки, экспрессирующие антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению. Изобретение дополнительно относится к клеткам, экспрессирующим нуклеиновые кислоты по изобретению.
Изобретение также включает способы лечения амилоидных заболеваний и способы профилактики амилоидных заболеваний путем применения антител и антиген-связывающих фрагментов по изобретению. В настоящее время не существует каких-либо одобренных амилоид-специфических способов лечения какого-либо из амилоидных заболеваний, включающих амилоидоз АА-типа и амилоидоз АЬ-типа. См. 0Штоге Ю. с1 а1., Ьаисе1 358:24-9 (2001). При наличии основного или сопутствующего заболевания терапия направлена на уменьшение выработки амилоидогеннного белка путем лечения основного заболевания. Например, современная стратегия лечения амилоидоза АА-типа нацелена на основной воспалительный процесс путем уменьшения уровня белка ΛροδδΛ ниже 10 мг/л. Применяемые в настоящее время способы лечения включают химиотерапию (хлорамбуцил и метотрексат МТХ), иммунодепрессанты (азатиоприн), противовоспалительные лекарства (колхицин) и ингибиторы ТНЕ. Изобретение относится к фармацевтическим композициям и способам лечения ряда амилоидных заболеваний, включающих амилоидоз, такой как, например, амилоидоз АА-типа и амилоидоз АЬ-типа. Согласно одному аспекту, изобретение включает фармацевтические композиции, которые в качестве активного компонента включают средство, обладающее действием индуцирования иммунного ответа против амилоидного компонента у пациента. Средство может быть пептидом, содержащим фрагмент, состоящий из аминокислотной последовательности ΧιΕΌΧ2, полученной из амилоидного белка. Средство может представлять собой антитело, которое специфически связывается с эпитопом, содержащим ХЩЭХг. В других вариантах осуществления средство может являться антиген-связывающим фрагментом антитела. Такие композиции будут также обычно включать наполнители, и в предпочтительных вариантах осуществления могут включать адъюванты. В дополнительно предпочтительных вариантах осуществления адъюванты включают, например, гидроокись алюминия, фосфат алюминия, монофосфорил-липид МРЬ™, Οδ-21 (δΊΊΜЕЕ0\ ™) или неполный адъювант Фрейнда. Согласно родственному варианту осуществления, указанные фармацевтические композиции могут включать множество средств, обладающих действием активации иммунного ответа у пациента на более чем один амилоидный компонент.
В родственном варианте осуществления средство обладает действием активации иммунного ответа, направленного против агрегированного амилоидного белка, такого как фибриллярный пептид или компонент амилоидного белка. Предпочтительно, указанный фибриллярный пептид или белок происходит из фибриллярного белка-предшественника, который достоверно связан с определенными формами амилоидных заболеваний, согласно описанию изобретения. Такие белки-предшественники включают без ограничения сывороточный А-амилоидный белок (АροδδА), легкую цепь иммуноглобулина, тяжелую цепь иммуноглобулина, АроАф транстиретин, лизозим, цепь фиброгена а, гельсолин, цистатин С, белокпредшественник β-амилоида (β-АРР), бета2-микроглобулин, белок-предшественник приона (РгР), атриальный натрийуретический фактор, кератин, островковый амилоидный полипептид, пептидный гормон и синуклеин. Такие предшественники также включают мутантные белки, фрагменты белков и протеолитические пептиды указанных предшественников. В предпочтительном варианте осуществления средство обладает действием активации иммунного ответа, направленного против неоэпитопа, образованного фибриллярным белком или пептидом, относительно фибриллярного белка-предшественника. Таким образом, как описано более подробно в настоящем изобретении, многие фибрилл-образующие пептиды или белки представляют собой фрагменты таких белков-предшественников, например, вышеупомянутых белков-предшественников. При образовании указанных фрагментов, например, путем протеолитического расщепления, могут быть обнаружены эпитопы, которые не присутствуют у предшественника, и поэтому иммунологически не доступны для иммунной системы, если фрагмент является частью белка- 13 028356 предшественника. Средства, нацеленные на такие эпитопы, могут быть предпочтительными терапевтическими средствами, так как они с меньшей вероятностью могут вызывать аутоиммунную реакцию у пациента. Иредпочтительно, такие средства вызывают иммунный ответ, направленный на патологическую форму амилоидного белка, в первую очередь, например, на агрегированный амилоидный белок, относительно непатологических форм амилоидного белка.
Согласно родственному варианту осуществления, фармацевтические композиции по изобретению включают вещества, нацеленные на амилоидные агрегаты, например, вещества, выбранные из группы, которые включают без ограничения следующие агрегированные (например, фибриллярные) пептиды или белки: АА, АЬ, АТТК, ААроА1, Л1у5. Адс1. Асук, АР, АВ2М, ΛδοΓ. Аса1, ААРР и фрагмент синуклеинNАС. В настоящем изобретении описаны полные наименования и композиции указанных пептидов. Такие пептиды можно изготовлять в соответствии с известными в данной области техники способами, согласно описанию по настоящему изобретению.
Способы содержат введение пациенту эффективной дозы антитела, которое специфически связывается с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в амилоидном белке, где Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, непосредственно предшествующий ΕΌ в указанном амилоидном белке; и в котором Х2 представляет собой Т, δ, Ε, К, I, V, Ρ, А или любой другой аминокислотный остаток, расположенный непосредственно после ΕΌ в таком амилоидном белке. Согласно некоторым способам, пациент страдает амилоидозом, связанным с агрегированным амилоидным белком, содержащим аминокислотные последовательности ΕΌ. Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом, состоящим из указанного ΧιΕΌΧ2. В некоторых антителах Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р или А, и Х2 является Т, δ, Ε, Ό, К, I, V, Ρ или А. В некоторых таких антителах, если Χ1 является Н, то Х2 представляет собой Т или А; если Χ1 является А, то Х2 представляет собой δ, Т, Е или V; если Χ1 является Т, то Х2 представляет собой Е; если Χ1 является Ρ, то Х2 является Ό; если Χ1 является δ, то Х2 представляет собой Е, Ρ или А; и если Χ1 является Р, то Х2 представляет собой Е, I или Ρ. В некоторых антителах Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р или А и Х2 представляет собой Т, δ, Ε, Ό, К, I, V, Ρ или А, при условии, что если Χ1 является А, то Х2 не является V. В некоторых антителах, если Χ1 является А, то Х2 представляет собой δ, Т или Е.
Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом, содержащим аминокислотную последовательность ΟΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 3), ΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 12), АЬ^ (δΕΟ ГО N0 13), АΕ^Τ (δΕΟ ГО N0: 14), IПГОА (δΕΟ ГО N0: 15), ΤΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 16), ΡΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 17), δΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 18), АΕ^Ε (δΕΟ ГО N0: 19), ΡΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 20), ΡΕΠ (δΕΟ ГО N0: 21), ΡΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 22), АЬ^ (δΕΟ ГО N0: 23), δΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 24) или δΕ^А (δΕΟ ГО N0: 25). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ΟΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 3), ΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 12), АЬ^ (δΕΟ ГО N0: 13), АΕ^Τ (δΕΟ ГО N0:
14) , IПГОА (δΕΟ ГО N0: 15), ΤΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 16), ΡΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 17), δΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 18), АΕ^Ε (δΕΟ ГО N0: 19), ΡΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 20), ΡΕ^I (δΕΟ ГО N0: 21), ΡΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 22), δΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 24) и δΕ^А (δΕΟ ГО N0: 25). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ΟΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 3, ΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 12), АΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 13), АΕ^Τ (δΕΟ ГО N0: 14), ЖОА (δΕΟ ГО N0:
15) и ΤΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 16).
Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА. Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 71-75 из АА.
Некоторые антитела индуцированы к пептиду, содержащему ΟΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 3).
Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотные последовательности ΡΕΌδ (δΕΟ ГО N0: 26), ΡΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 27), ΤΕΌ^ (δΕΟ ГО N0: 28), АВОВ (δΕΟ ГО N0: 19), δΕ^I (δΕΟ ГО N0: 29) и ΤΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 30). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотные последовательности ΌΕΌΟ (δΕΟ ГО N0: 31), АБОМ (δΕΟ ГО N0: 32), ΗΕΌδ (δΕΟ ГО N0: 33), ΟΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 34), ΟΕΌδ (δΕΟ ГО N0: 35), ΗΕΌδ (δΕΟ ГО N0: 36), ΤΕΌΟ (δΕΟ ГО N0: 37), ОЫ)Н (δΕΟ ГО N0: 38), ΤΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 39), ΡΕΙ)\ (δΕΟ ГО N0: 40), ΕΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 41), ΕΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 42), КИПА (δΕΟ ГО N0: 43), δΕΌΟ (δΕΟ ГО N0: 44), ΕΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 45), δΕΌΚ (δΕΟ ГО N0: 46), ΌΕΌΌ (δΕΟ ГО N0: 47), ΌΕΌΟ (δΕΟ ГО N0: 48), ΌΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 49), СЫТА (δΕΟ ГО N0: 50), ΑΈΌΡ (δΕΟ ГО N0: 51), ΥΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 52), ΙΙ'ΌΙ. (δΕΟ ГО N0: 53), \\ΤΌΥ (δΕΟ ГО N0: 54), 1)Ы№ (δΕΟ ГО N0: 55), δΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 56), ΥΕΌΟ (δΕΟ ГО N0: 57), 1.ЫЖ (δΕΟ ГО N0: 58), УЫЖ (δΕΟ ГО N0: 59) и ΡΕΌΚ (δΕΟ ГО N0: 60).
Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность АНОУ (δΕΟ ГО N0: 23). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность δΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 24) или ΡΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 22). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность ΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 13). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность ΡΕ^I (δΕΟ ГО N0: 21), АΕ^V (δΕΟ ГО N0 23), δΕΌΡ (δΕΟ ГО N0: 24), δΕΙΥΆ (δΕΟ ГО N0: 25), δΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 18), АΕ^Ε (δΕΟ ГО N0: 19) и ΡΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 20). Некоторые антитела связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность ΤΕΌΕ
- 14 028356 (8Еф ΙΌ ΝΟ: 16). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность АЕПУ (8Еф ΙΌ ΝΟ: 23). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность 8ЕЭЕ (8Еф ГО ΝΟ: 24) или РЕЭЕ (8Еф ГО ΝΟ: 22). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность АЕЭ8 (8Еф ГО ΝΟ: 13). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность РЕЭ! (8Еф ГО ΝΟ: 21), АЕЭУ (8Еф ГО ΝΟ 23), 8ЕЭЕ (8Еф ГО ΝΟ: 24), 8ЕОА (8Еф ГО ΝΟ: 25), 8ЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 18), АЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 19) и РЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 20). Некоторые антитела связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность ТЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 16).
Любое из вышеописанных антител можно вводить описанными выше способами для осуществления лечения или профилактики заболевания, характеризующегося накоплением амилоидного белка, например, амилоидного белка, содержащего аминокислотную последовательность ЕП. В некоторых способах для лечения или профилактики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного нарушения не вводят антитело, если амилоидный белок содержит аминокислотную последовательность АЕПУ (8Еф ГО ΝΟ: 23). Амилоидный белок может представлять собой что-либо из нижеперечисленного: сывороточный А-амилоидной белок, белок легкой цепи иммуноглобулина, такой как, например, УХ6 Αί1 или Ук, человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник ДАРР), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ТТР) или АроА1.
Необязательно, пациент является человеком. Необязательно, антитело специфически связывается с пептидом, остатки которого состоят из последовательностей 8Еф ГО ΝΟ 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11. Необязательно, антитело специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из (8Еф ГО ΝΟ: 2). Необязательно, антитело представляет собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело. Необязательно, человеческое антитело представляет собой изотип человеческого ЦС1, ЦС4, ЦС2 или ЦС3. Необязательно, гуманизированное антитело является изотипом человеческого Ι§01, ЦС4, ЦС2 или ЦС3. Необязательно, химерное антитело представляет собой изотип человеческого ЦС1, ЦС4. ЦС2 или ЦС3. Необязательно, антитело является мышиным антителом.
Необязательно, антитело является поликлональным антителом. Необязательно, антитело является моноклональным антителом.
В некоторых способах лечения антитело содержит две копии одной и той же пары легких и тяжелых цепей. В других способах антитело представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первую пару легкой и тяжелой цепи, которая специфически связывается с эпитопом Аβ, и вторую пару легкой и тяжелой цепи, которая специфически связывается с Ес-рецептором на микроглиальных клетках. Согласно другим способам, осуществляют слияние цепи антитела с гетерологичным полипептидом.
Согласно некоторым способам лечения, доза антитела составляет по меньшей мере 1 мг/кг массы тела пациента. По другим способам доза антитела составляет по меньшей мере 10 мг/кг массы тела пациента.
Согласно некоторым способам лечения антитело вводят с носителем в виде фармацевтической композиции. По другим способам, антитело представляет собой человеческое антитело к АА, приготовленное из В-клеток человека, иммунизированного пептидом АА. Необязательно, человек, иммунизированный пептидом АА, является больным. По некоторым способам антитело вводят интраперитонеально, перорально, интраназально, подкожно, внутримышечно, местно или внутривенно.
Согласно некоторым способам лечения антитело вводят посредством введения пациенту полинуклеотида, кодирующего по меньшей мере одну цепь антитела, и экспрессия полинуклеотида направлена на продукцию цепи антитела у пациента. Необязательно, полинуклеотид кодирует тяжелые и легкие цепи антитела, и полинуклеотид экспрессируется для продукции тяжелых и легких цепей у пациента.
Некоторые из вышеупомянутых способов лечения дополнительно содержат введение эффективной дозы по меньшей мере одного другого антитела, которое связывается с другим эпитопом АА. Некоторые из вышеупомянутых способов лечения дополнительно содержат контроль уровня вводимого пациенту антитела в крови пациента. В других способах антитело вводят в многократной дозе в течение по меньшей мере шести месяцев. В других способах антитело вводят в виде композиции с длительным высвобождением.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способам осуществления профилактики амилоидоза АА-типа у пациента, предрасположеного к развитию амилоидоза АА-типа. Указанные способы содержат введение пациенту эффективной дозы антитела, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА. Необязательно, пациент является человеком. Необязательно, антитело специфически связывается с пептидом, остатки которого состоят из последовательностей 8Еф ГО ΝΟ 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11. Необязательно, антитело специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из (8Еф ГО ΝΟ: 2). В некоторых способах основное заболевание пациента является амилоидным заболеванием, которое выбрано из группы, состоящей из следующих патологий: ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета, болезнь Крона, лепра, туберкулез,
- 15 028356 бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома, волосатоклеточный лейкоз, семейная средиземноморская лихорадка и болезнь Кастлемана.
Изобретение дополнительно расматривает человеческое, гуманизированное или химерное антитело, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА. Необязательно, гуманизированное антитело специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 7Ό8 (инвентарный № АТСС).
Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 7Ό29. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 7Ό19. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 7Ό47. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 7Ό39. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 7Ό66. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 809. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 803. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 804. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 8051. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 8022. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 8030. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 8046. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 2А4 (инвентарный номер АТСС). Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 2А20. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 2А44. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 2А77. Необязательно, гуманизированное антитело является гуманизированным антителом версии 2А13. Необязательно, гуманизированное антитело представляет собой гуманизированное антитело версии 2А14.
Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям. Фармацевтические композиции содержат антитело, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА, и фармацевтически приемлемый носитель. Некоторые фармацевтические композиции содержат человеческое, гуманизированное или химерное антитело, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 70-76 из АА, и фармацевтически приемлемый носитель. Другие фармацевтические композиции содержат антитело, которое специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 7076 из АА, и фармацевтически приемлемый носитель, в которых изотипом антитела является человеческий 1д01, и носитель является фармацевтически приемлемым. В некоторых фармацевтических композициях изотип антитела представляет собой человеческие 1д02, 1д03 или 1д04. В некоторых фармацевтических композициях антитело является человеческим. В некоторых фармацевтических композициях антитело является гуманизированным. В некоторых фармацевтических композициях антитело является химерным. В некоторых фармацевтических композициях антитело представляет собой поликлональное антитело. В некоторых фармацевтических композициях антитело является моноклональным антителом.
В некоторых фармацевтических композициях антитело содержит две копии одной и той же пары легких и тяжелых цепей. В некоторых фармацевтических композициях антитело представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первую пару легкой и тяжелой цепи, которая специфически связывается с эпитопом АА, и вторую пару легкой и тяжелой цепи, которая специфически связывается с Рсрецептором на микроглиальных клетках. Некоторые фармацевтические композиции имеют цепи антитела, слитые с гетерологичным полипептидом.
В некоторых фармацевтических композициях носитель представляет собой физиологически приемлемый разбавитель для парентерального введения. Некоторые фармацевтические композиции адаптированы для интраперитонеального, перорального, интраназального, подкожного, внутримышечного, местного или внутривенного введения. Некоторые фармацевтические композиции приспособлены для введения в многократной дозе в течение по меньшей мере шести месяцев. Некоторые фармацевтические композиции приспособлены для введения в виде композиции с длительным высвобождением. Некоторые фармацевтические композиции дополнительно содержат по меньшей мере одно другое антитело, которое связывается с другой эпитопом АА.
Настоящее изобретение относится к способам лечения амилоидоза АА-типа у пациента. Эти способы включают введение средства, индуцирующего иммунный ответ на АА70-76, по схеме, эффективной для вызова иммунного ответа, и указанное средство содержит антитела против АА70-76, по схеме, эффективной для вызова иммунного ответа, содержащей антитела против АА70-76. В некоторых способах пациент является человеком. Необязательно, средство содержит остатки 70-76 из пептида АА или субфрагмент по меньшей мере из его 3 смежных остатков, и имеет менее 20 смежных аминокислот из АА. Необязательно, средство является пептидом, имеющим аминокислотную последовательность, которая
- 16 028356 выбрана из группы, состоящей последовательности 8ЕО ГО N0 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 11, и субфрагменты по меньшей мере из 3 смежных остатков указанных последовательностей, и имеет менее 20 аминокислот из пептида АА. Необязательно, средство соединено с первым и вторым гетерологичным полипептидом на Ν-конце и С-конце. Необязательно, средство соединено на Ν-конце с гетерологичным полипептидом, и на С-конце по меньшей мере с одной дополнительной копией Ν-концевого сегмента. В некоторых способах гетерологичный полипептид индуцирует Т-клеточный ответ против гетерологичного полипептида и, таким образом, В-клеточный ответ против АА. В некоторых способах полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную копию АА. Необязательно, полипептид содержит АА от Νконца к С-концу, множество дополнительных копий АА и гетерологичный аминокислотный сегмент.
Согласно некоторым способам лечения полипептид вводят с адъювантом, который усиливает иммунный ответ на Ν-концевой сегмент. Необязательно, адъювант и полипептид вводят вместе в виде композиции. Необязательно, адъювант вводят перед полипептидом. Необязательно, адъювант вводят после полипептида. В некоторых способах адъювантом являются квасцы. В некоторых способах адъювантом является монфосфорил-липид МРЬ. В некоторых способах адъювантом является 08-21. В некоторых способах адъювант представляет собой неполный адъювант Фрейнда. В некоторых способах иммунная реакция содержит Т-клетки, которые связываются с АА-пептидом в качестве компонента главных комплексов гистосовместимости МНС I или МНС II.
Настоящее изобретение относится к способам осуществления профилактики амилоидоза АА у пациента. Указанные способы включают введение средства, который вызывает иммунный ответ на АА7076 по схеме, эффективной для индукции иммунного ответа, и указанное средство содержит антитела против АА70-76 по схеме, эффективной для индукции иммунного ответа, содержащей антитела против АА70-76. Согласно некоторым способам пациент является человеком. По некоторым способам у пациента отсутствует симптоматика. По некоторым способам основным заболеванием пациента является амилоидное заболевание, которое выбрано из группы, состоящей из следующего: ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета, болезнь Крона, лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома, волосатоклеточный лейкоз, семейная средиземноморская лихорадка и болезнь Кастлемана.
Согласно некоторым способам осуществления профилактики средство содержит АА70-76 или субфрагмент по меньшей мере из его 3 смежных остатков и имеет менее 20 смежных аминокислот из пептида АА. Необязательно, средством является пептид, имеющий аминокислотную последовательность из группы, состоящей последовательности 8Е0 ГО Ν0 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 11, и субфрагментов по меньшей мере из 3 смежных остатков этих последовательностей, и имеет менее 20 аминокислот из пептида АА. Необязательно, средство соединено с первым и вторым гетерологичным полипептидом на Ν-конце и Сконце.
Необязательно, средство соединено на Ν-конце с гетерологичным полипептидом, и на С-конце по меньшей мере с одной дополнительной копией Ν-концевого сегмента. В ряде способов гетерологичный полипептид индуцирует Т-клеточный ответ против гетерологичного полипептида и, таким образом, Вклеточный ответ против АА. В некоторых способах полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную копию АА. Необязательно, полипептид содержит АА от Ν-конца к С-концу, множество дополнительных копий АА и гетерологичный аминокислотный сегмент.
Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям. Фармацевтические композиции содержат АА-фрагмент, состоящий из остатков, начиная с остатка 70 из АА и заканчивая остатком 76 из АА. Необязательно, фрагмент АА соединен на С-конце с гетерологичным полипептидом. Необязательно, АА-фрагмент соединен на Ν-конце с гетерологичным полипептидом. Необязательно, АА-фрагмент соединен на Ν-конце и С-конце с первым и вторым гетерологичными полипептидами. Необязательно, фрагмент АА связан на Ν-конце с гетерологичным полипептидом, и на С-конце по меньшей мере с одной дополнительной копией Ν-концевого сегмента. Необязательно, полипептид дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную копию Ν-концевого сегмента. Необязательно, полипептид содержит АА от Ν-конца к С-концу, множество дополнительных копий АА и гетерологичный аминокислотный сегмент. В некоторых фармацевтических композициях гетерологичный полипептид индуцирует Т-клеточный ответ против гетерологичного полипептида и, таким образом, Вклеточный ответ против Ν-концевого сегмента.
Некоторые фармацевтические композиции дополнительно содержат адъювант, который усиливает иммунный ответ на АА. В некоторых способах адъювантом являются квасцы. В некоторых способах адъювантом является МРЬ. В некоторых способах адъювантом является 08-21. В некоторых способах адъювант представляет собой неполный адъювант Фрейнда. Необязательно, адъювант дополнительно содержит гранулоцито-макрофаго-колониестимулирующий фактор СМ-С8Р. Необязательно, адъювантом является макрофаго-колониестимулирующий фактор М-С8Р.
Необязательно, композиция содержит более 10 микрограммов полипептида.
- 17 028356
Настоящее изобретение относится к способам лечения амилоидоза АА-типа у пациента. Способы содержат введение средства, эффективно индуцирующего иммунную реакцию против пептидного компонента амилоидного депо у пациента, и введение другого средства, который лечит основное заболевание, и таким образом осуществляется лечение амилоидоза АА-типа у пациента. В некоторых способах основное заболевание выбирают из группы, состоящей из следующих патологий: ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета, болезнь Крона, лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома, волосатоклеточный лейкоз, семейная средиземноморская лихорадка и болезнь Кастлемана.
Настоящее изобретение относится к способам осуществления профилактики амилоидоза АА-типа у пациента. Способы содержат введение средства, обладающего действием индуцирования иммунной реакциии против пептидного компонента амилоидного депо у пациента, и другого средства, который лечит основное заболевание, и таким образом проводят лечение амилоидоза АА-типа у пациента. В некоторых способах основное заболевание выбирают из группы, состоящей из следующих патологий: ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета, болезнь Крона, лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома, волосатоклеточный лейкоз, семейная средиземноморская лихорадка и болезнь Кастлемана.
Настоящее изобретение относится к способам скрининга антител на активность для лечения пациента, страдающего амилоидозом АА-типа. Указанные способы содержат контакт антитела с ААпептидом и определение специфическиго связывания антитела с АА, при этом специфическое связывание является показателем активности антитела в лечении амилоидоза АА-типа.
Настоящее изобретение относится к способам скрининга антител на активность удаления биологических единиц, физически связанных с антигеном. Способы содержат объединение связанной с антигеном биологической единицы, антитела и клеток-фагоцитов, имеющих в среде Ре-рецепторы; и контроль количества связанных с антигеном биологических единиц, остающихся в среде, при этом уменьшение количества связанных с антигеном биологических единиц указывает на наличие активности антитела по удалению антигена. В некоторых способах на этапе контроля отслеживается количество антигена, остающегося в среде. В некоторых способах объединение содержит добавление связанной с антигеном биологической единицы к среде, и контакт среды с клетками-фагоцитами, несущими Рс-рецепторы. Согласно некоторым способам связанная с антигеном биологическая единица представляет собой образец ткани. В некоторых способах антигеном является биологическая единица. В некоторых способах образец ткани содержит амилоидное депо. Необязательно, образец ткани забирается у пациента или млекопитающего, страдающего амилоидозом АА-типа. В некоторых способах антигеном является АА. В некоторых способах клетки-фагоциты представляют собой микроглиальные клетки. В некоторых способах образец ткани выбирают из группы, состоящей из образца злокачественной ткани, образца инфицированной вирусом ткани, образца ткани, содержащего воспалительные клетки, образца с доброкачественным аномальным клоточным ростом и образца ткани, содержащего аномальный внеклеточный матрикс.
Изобретение относится к способам обнаружения амилоидного депо у пациента. Указанные способы содержат введение пациенту антитела, которое специфически связывается с эпитопом в АА в пределах от 70 до 76 аминокислот, и детекцию присутствия антитела у пациента. Необязательно, антитело является меченым. Необязательно, антитело имеет парамагнитную метку.
Необязательно, меченое антитело обнаруживают с помощью ядерномагнитного резонанса. Необязательно, меченое антитело обнаруживают получением отображения с помощью 8РЕСТ/СТ. В некоторых способах антитело не способно вызывать у пациента реакцию элимнации при связывании с амилоидным депо.
Настоящее изобретение относится к диагностическим комплектам. Комплекты содержат антитело, которое специфически связывается с эпитопом с остатками 70-76 из АА. Некоторые комплекты дополнительно содержат маркировку, описывающую применение антитела ίη νίνο у пациента для диагностики или контроля болезни, связанной с амилоидными депо АА-типа. В некоторых вариантах осуществления комплекты содержат инструкции по применению антитела или его антиген-связывающего фрагмента для обнаружения АА.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу диагностики амилоидоза у субъекта, содержащему: (а) введение субъекту антитела или его антиген-связывающего фрагмента, которые связаны с меткой обнаружения, и специфическое связывание указанного антитела или его фрагмента с эпитопом, содержащим Х|ЕЭХ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом X! и Х2 являются любыми аминокислотами; и (Ь) обнаружение присутствия или отсутствия связанного антитела или его фрагмента, при этом присутствие связанного антитела или его фрагмента указывает на диагноз амилоидоза АА-типа.
- 18 028356
Дополнительно, настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики амилоидоза с применением антитела или его антиген-связывающего фрагмента, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом X! и Х2 являются любыми аминокислотами.
Настоящее изобретение относится к антителу или его антиген-связывающему фрагменту, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2, в агрегированном амилоидном белке, при этом Χι и Х2 являются любыми аминокислотами. Например, Χι содержит Н, Т, Ρ, δ, Р, А, Ь, С, ф, К, Е, К, Ό, С, V, Υ, I или ^, например, Н, Т, Ρ, δ, Р или А, или, например, Н, Т, Ρ или А. Х2 содержит Т, δ, Ε, К, I, V, Ρ, Ό, А, С, М, Ь, Ν, Р, С, К, Υ, или ф, такие как Т, δ, Ε, К, I, V, Ρ, Ό или А, или, например, Т, δ, Ε, Ό или А. В других примерах Χι представляет собой Н, Т или А, и Х2 представляет собой Т, δ, Е или А, например, Χι является Н или А, и Х2 представляет собой Т, δ или А. В еще одном примере Χι является Н и Н2 представляет собой Т или А; или Χι представляет собой А, и Х2 является δ, Т, Е или V, например, Χι является А и Х2 является δ, Т или Е, или Χ! представляет собой Т, и Х2 является Е, или Χ! является Ρ, и Х2 является Ό, или Χ! является δ, и Х2 является Е, Ρ или А; или Χ! является Р, и Х2 представляет собой Е, I или Ρ.
В частности, эпитопы включают аминокислотные последовательности, такие как указанные последовательности от δΕφ ГО N0: 3 до δΕφ ГО N0: 25, например, δΕφ ГО N0: 3, 12, 13, 14, 15 и 16.
Дополнительные примеры содержат δΕφ ГО N0: 4, 5, 7, 8 и 9, например, δΕφ ГО N0: 4. Антитела по изобретению, которые связываются с эпитопами, например, с δΕφ ГО N0: 3, включают антитела 2А4, 7Ό8 и 8С9.
Агрегированные амилоидные белки, с которыми связываются антитела изобретения, представляют собой немономерные белки. Такие агрегированные амилоидные белки включают сывороточный Аамилоидный белок (δΑΑ), белок легкой цепи иммуноглобулина, человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник ДАРР), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ТТК) и ΑροΑΙ, такой как δΑΑ.
Настоящее изобретение дополнительно относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые (а) конкурируют с антителами 2А4, 7Ό8, или 8С9 за связывание с эпитопом, который включает ΧιΕΌΧ2; (Ь) связываются с тем же эпитопом, который включает ΧιΕΌΧ2, что и антитела 2А4, 7Ό8, или 8С9; (с) имеют антиген-связывающий домен из антител 2А4, 7Ό8 или 8С9; или (4) включают шесть участков, определяющих комплементарность (СГОК) из антител 2А4, 7Ό8 или 8С9. Изобретение также относится к химерным или гуманизированным версиям антител 2А4, 7Ό8 или 8С9.
Типичные антитела, которые специфически связываются с эпитопом, включающим ΧιΕΌΧ2, также включают антитела, имеющие по меньшей мере один, два, или три из участка, определяющих комплементарность (СГОК) в легкой цепи антител 2А4, 7Ό8 или 8С9. Антитела по изобретению, которые специфически связываются с эпитопом, включающим ΧιΕΌΧ2, также включают антитела, имеющие по меньшей мере один, два или три участка СГОК из тяжелой цепи антител 2А4, 7Ό8 или 8С9.
Участки СГОК можно идентифицировать согласно способам, известным в данной области техники. Например, общепринятыми являются системы нумерации для распознавания участков СГОК. Определение по КаЬа1 основано на вариабельности последовательностей, и определение по С'1ю11иа основано на местоположении структурных петлевых участков. Определение ΑЬМ представляет собой компромисс между подходами по КаЬа1 и С'1ю11иа. Участки СГОК вариабельной области легкой цепи соединены посредством остатков в положениях 24 и 34 (СИГО-Ь), 50 и 56 (СИК2-Ь) и 89 и 97 (СИК3-Ь) согласно алгоритмам по КаЬаб С’1ю11иа или ΑЬМ. Согласно определению КаЬаб участки СГОК вариабельной области тяжелой цепи соединены посредством остатков в положениях 31 и 35В (СИК1-Н), 50 и 65 (СГОК2-Н) и 95 и 102 (СГОК3-Н) (соглашение о нумерации по КаЬа1). Согласно определению ΠιοΟΝ-τ участки СГОК вариабельной области тяжелой цепи соединены посредством остатков в положениях 26 и 32 (СИК1-Н), 52 и 56 (СГОК2-Н) и 95 и 102 (СГОК3-Н) (соглашение о нумерации по С’1ю11иа). Согласно определению ΑЬМ, участки СГОК вариабельной области тяжелой цепи соединены посредством остатков в положениях 26 и 35В (СИК1-Н), 50 и 58 (СГОК2-Н) и 95 и 102 (СГОК3-Н) (соглашение о нумерации по КаЬа1). См. публикации: МаШи е! а1. (1989) Ргос. №·ιΐ1. Αεαά. δεΕ υδΑ 86: 9268-9272; МаШи е! а1. (1991) ΜεΐΡοάδ Εηζутο1. 203: 121-153; Рейегзеп εΐ а1. (1992) IттиηοтеίЬοάδ 1:126; и Кеез е! а1. (1996) в издании δΐετώετ§ Μ.ΡΕ. (ей.), Рго1ет δΙπιεΙιιΐΌ Рге4ю1юи, 0χίοτά ишуегейу Ргезз, 0χίοτά, ρρ. 141-172.
Антитела по изобретению дополнительно включают антитело, которое специфически связывается с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2, в агрегированном амилоидном белке, при этом Χι и Х2 являются любыми аминокислотами, имеющими вариабельные области, происходящие из вариабельных областей антител 2А4, 7Ό8 или 8С9. Антитела, имеющие вариабельные области антител 2А4, 7Ό8 или 8С9, также включены в изобретение.
Антитела по изобретению дополнительно включают химерные антитела, человеческие антитела, гуманизированные антитела, одноцепочечные антитела, тетрамерные антитела, тетравалентные антитела, мультиспецифичные антитела, домен-специфичные антитела, домен-делетированные антитела или слитые белки.
Фрагменты антител по изобретению также относятся к настоящему изобретению. Фрагменты по
- 19 028356 изобретению могут быть фрагментами участков связывания антигена РаЪ, РаЪ'-фрагментами, Р(аЪ')2Фрагментами, Ρν-фрагментами или δсРν-фрагментами. Такие антитела или их фрагменты могут функционировать в паре с цитостатическим средством, радиотерапевтическим средством или с детектируемой меткой.
Настоящее изобретение также относится к вариабельной области выделенного антитела, содержащей (а) вариабельную область легкой цепи, полученную из вариабельной области легкой цепи антитела 7Ό8, 2А4 или 809, или (Ъ) вариабельную область тяжелой цепи, полученную из вариабельной области легкой цепи антитела 7Ό8, 2А4 или 809. Также рассматриваются выделенные вариабельные области, имеющие вариабельную область легкой цепи или тяжелой цепи антитела 7Ό8, 2А4 или 809. Выделенные вариабельные области антитела являются полезными для получения антитела.
Изобретение также относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим вариабельные области легкой цепи антитела или вариабельные области тяжелой цепи, которые имеют (а) нуклеотидную последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи или тяжелой цепи антитела 7Ό8, 2А4 или 809; (Ъ) нуклеотидную последовательность, идентичную нуклеотидной последовательности антитела 7Ό8, 2А4 или 809, которая кодирует вариабельную область легкой или тяжелой цепи; или (с) нуклеотидную последовательность, которая, по существу, идентична, то есть по меньшей мере на 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или на 99% идентична нуклеотидной последовательности (а) или (Ъ); или (к) нуклеиновую кислоту, которая специфически гибридизуется с нуклеиновой кислотой, имеющей нуклеотидную последовательность, которая комплементарна нуклеотидной последовательности (а) или (Ъ) при строгих условиях гибридизации, например, при условии заключительного промывания 0,1 раствором хлорида и цитрата натрия δδС при 65°С.
Настоящее изобретение дополнительно относится к клеткам и клеточным линиям, экспрессирующим антитела или нуклеиновые кислоты по изобретению. Типичные клетки-хозяева включают клетки человека и млекопитающих, такие как клетки яичников китайских хомячков СНО, клетки почечного эмбрионального эпителия НЕК-293, клетки из раковой опухоли НеЬа, клетки африканской зеленой мартышки СУ-ι и клетки С0δ. Способы получения устойчивой клеточной линии после трансформации гетерологичной конструкции в клетку-хозяина известны в данной области техники. Примеры клеток-хозяев, не относящиеся к клеткам млекопитающих, включают клетки насекомых (РоИег е1 ак (1993) Ιηΐ. Ке\'. 1ттииок 10(2-3): 103-112). Антитела также можно получать в трансгенных животных (НоикеЪше (2002) Сигг. 0ρίη. Вю1есЬиок 13(6) :625-629) и трансгенных растениях (ЬсНШЬегд е1 ак (2003) СеИ Мок Ыке. δα. 60 (3) :433-45).
Настоящее изобретение также относится к способам осуществления лечения или профилактики амилоидоза, связанным с применением иммуногеннных фрагментов амилоидного белка, содержащего ΧιΕΌΧ2, в котором Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, непосредственно предшествующий ΕΌ в таком амилоидном белке; и в котором Х2 представляет собой Т, δ, Ε, Р, I, ν, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, следующий сразу после ΕΌ в указанном амилоидном белке. Без намерения установить связь с конкретной теорией, считается, что эпитоп, содержащий Χ!ΕΌΧ2, может становиться доступным, когда происходит агрегация амилоидных белков, или фибриллогенез, или иным образом создается фибриллярная структура, или при расщеплении более крупного белка-предшественника, или при конформационном изменении. Например, примеры способов лечения или профилактики амилоидоза АА-типа включают введение остатков 70-76 АА или его иммуногенных фрагментов. Изобретение также относится к способам осуществления лечения или профилактики амилоидоза, связанного с накоплением амилоидного белка, с использованием антител, реагирующих с ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом Χ1 представляет собой Н, Т, Ρ, δ, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, непосредственно предшествующий ΕΌ в таком агрегированном амилоидном белке; и в котором Х2 представляет собой Т, δ, Ε, Р, I, ν, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, расположенный сразу после ΕΌ в указанном агрегированном амилоидном белке. Предпочтительно, такие антитела предпочтительно реагируют с агрегированным амилоидным белком относительно непатологического амилоидного белка. Например, способы лечения или профилактики амилоидоза ААтипа, связанного с АА-фибриллами, могут включать введение антител, специфичных к С-концевому участку АА-фибрилл (примерно остатки 70-76 из АА). Антитела могут ингибировать образование ААагрегатов (например, фибрилл) или вызывать их дезагрегацию и удаление, что таким образом является лечением или профилактикой амилоидоза АА-типа.
Ι. Определения.
Термин по существу идентичны означает, что две пептидные последовательности при оптимальном выравнивании, например, с помощью программ 0ΑΡ или ΒΕδΤΡΙΤ с использованием значений веса промежутков по умолчанию, имеют последовательности, идентичность которых составляет по меньшей мере 65%, предпочтительно идентичные последовательности по меньшей мере на 80 или 90%, более предпочтительны идентичные последовательности по меньшей мере на 95% или больше (например, идентичность последовательностей составляет 99% или выше). Предпочтительно, положения неидентичных остатков отличаются консервативными заменами аминокислот.
Для сравнения последовательностей обычно одна последовательность действует как контрольная
- 20 028356 последовательность, с которой сравнивают тестовые последовательности. Используя алгоритм сравнения последовательностей, тестовые и контрольные последовательности вводят в компьютер, в случае необходимости задают координаты субпоследовательности и определяют параметры программы алгоритма сравнения последовательностей. Затем по алгоритму сравнения последовательности на основе заданных параметров программы вычисляют процент идентичности последовательностей для тестовой последовательности (последовательностей) относительно контрольной последовательности.
Можно проводить оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения, например, с помощью алгоритма локальной гомологии по διηίΐΐι & \Уа1сгтап. Λάν.ΛρρΙ.ΜαΙΙι. 2:482 (1981), с помощью алгоритма выравнивания гомологии по №ей1ешаи & ^ипзеЬ, 1. Μοί. ΒίοΙ. 48:443 (1970), с помощью поиска по методике сходства по Реагкоп & Ыртап, Ргос. Ν;·ι1'1. Асай. δεί.υδΑ 85:2444 (1988), с помощью компьютерных программ выполнения указанных алгоритмов (САР, ΒΕδΤΡΙΤ, ΡΑδΤΑ и ΤΡΑδΤΑ из пакета программ ХУюсопйп Сеиейск Зой^апе Раскаде, Сеиейск Сотри1ег Сгоир, 575 Заеисе Иг., Майкоп), или путем визуального наблюдения (см. в общем публикации ΑикиЬе1 е1 а1., выше). Одним из примеров алгоритмов, подходящим для определения процента идентичности последовательностей и процента сходства последовательностей, является алгоритм ΒΕΑδΤ, который описан авторами ΑΙίδοΗϋΙ е1 а1., 1. Мо1. Вю1. 215:403-410 (1990). Программное обеспечение для проведения анализа ΒΕΑδΤ является общедоступным в Национальном центре биотехнологической информации (№Иоиа1 Сеп1ег йог Β^οΐесЬпο1οду Шогтайоп (1Шр://\у\у\у.псЫ.п1т.пЙ1.доу/). Как правило, можно использовать параметры программы по умолчанию для проведения сравнения последовательностей, вместе с тем, можно также использовать задаваемые параметры. Программа ΒΕΑδΊΤ для аминокислотных последовательностей использует по умолчанию длину слова (XV) 3, ожидание (Е) 10, и матрицу замен ΒΕΘδυΜ62 (см. Неткой & Неткой, Ргос. №11. Αсай. δс^.υδΑ, 89, 10915 (1989)).
Для классификации аминокислотных замен на консервативные или неконсервативные аминокислоты разделены на группы следующим образом: группа I (гидрофобные боковые цепи): норлейцин, метионин, аланин, валин, лейцин, изолейцин; группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи): цистеин, серии, треонин; группа III (кислые боковые цепи): аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; группа IV (основные боковые цепи): аспарагин, глутамин, гистидин, лизин, аргинин; группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепи): глицин, пролин; и группа VI (ароматические боковые цепи): триптофан, тирозин, фенилаланин. Консервативные замены охватывают замены между аминокислотами одной группы. Неконсервативные замены представляют собой обмен члена одной из указанных групп на член из другой группы.
Понятие полностью-Ό относится к пептидам, в которых >75, >80, >85, >90, >95 и 100% аминокислот имеют Ό-конфигурацию.
Термин средство используется для описания соединения, которое обладает или может обладать фармакологическим действием. Средства включают соединения, которые являются известными лекарствами, соединениями с идентифицированным фармакологическим действием, но для которых проводится дополнительная терапевтическая оценка, и соединения, которые перечислены в коллекциях и библиотеках, для которых необходим скрининг на фармакологическое действие.
Термины амилоидное заболевание или амилоидоз относятся к любому ряду заболеваний, при которых накопление или образование амилоидных бляшек являются их симптомом или частью патологического процесса. Амилоидная бляшка представляет собой внеклеточное депо, состоящее в основном из белковых фибрилл. В общем, фибриллы состоят из доминантного белка или пептида; вместе с тем, бляшка может также включать дополнительные компоненты, которые являются пептидными или непептидными молекулами, как описано в настоящем изобретении.
Амилоидный белок или амилоидный пептид является белком или пептидом, который может подвергаться расщеплению, конформационному изменению, агрегации или фибриллогенезу, что приводит к образованию патологических олигомеров, амилоидных фибрилл, амилоидных бляшек и/или амилоидных компонентов.
Амилоидный компонент представляет собой любую молекулярную единицу, которая присутствует в амилоидной бляшке, включая антигенные части таких молекул. Амилоидные компоненты включают без ограничения белки, пептиды, протеогликаны и углеводы.
Антиамилоидное средство является средством, способным индуцировать иммунный ответ на амилоидный компонент бляшки у субъекта подтипа позвоночных, при введении способами активной или пассивной иммунизации.
Термины АА-белок или АА-пептид относятся к форме амилоидного белка или пептида А, образованного путем протеолитического расщепления сывороточного А-амилоидного белка (δΑΑ), и мономерного и агрегированного, и растворимого и нерастворимого.
Понятия агрегированный амилоидный белок или агрегированный амилоидный пептид или амилоидный агрегат относятся к патологической, немономерной, агрегированной форме амилоидного белка или амилоидного пептида. Агрегированные амилоидные белки и амилоидные пептиды могут быть растворимыми или нерастворимыми. Некоторые агрегированные амилоидные белки и агрегированные амилоидные пептиды могут образовывать олигомеры, фибриллы и/или амилоидные бляшки. В настоя- 21 028356 щем изобретнии рассматриваются примеры таких агрегированных амилоидных белков и амилоидных пептидов, включающих фибриллярные пептиды и белки.
Термин АА-агрегат относится к агрегированной форме АА.
Терапевтические средства изобретения обычно, по существу, не содержат нежелательных примесей. Это означает, что средство обычно имеет чистоту по меньшей мере около 50% в/в (вес./вес.), а также, по существу, не содержит вредные белки и загрязнители. Иногда средства имеют чистоту по меньшей мере около 80% в/в, более предпочтительно чистота по меньшей мере составляет около 90% или 95% в/в. Вместе с тем, используя общепринятые способы очистки белка, можно получать гомогенные пептиды с чистотой по меньшей мере 99% в/в. Терапевтические средства изобретения могут предотвращать или лечить болезнь, связанную с амилоидными депо, или обладать профилактическим действием.
Специфичное связывание между единицами означает, что единицы имеют взаимную аффинность друг к другу, которая по меньшей мере в 10, в 100 или в 100 раз больше, чем аффинность контрольной единицы, например, постороннего антигена или антитела к другому антигену. Взаимная аффинность указанных двух единиц составляет друг для друга обычно по меньшей мере 107 М-1, 108 М-1, 109 М-1 или 1010 М-1. Предпочтительными являются показатели аффинности более 108 М-1.
Термины иммуноглобулин или антитело (используемые в настоящем изобретении взаимозаменяемо) относятся к антиген-связывающему белку, который обладает способностью специфически связываться с антигеном, имеющему основную структуру в виде цепи с четырьмя полипептидами, состоящую из двух тяжелых и двух легких цепей, и указанные цепи стабилизированы, например, межцепочечными дисульфидными связями. И тяжелые и легкие цепи свернуты в домены. Термин домен относится к глобулярному участку тяжелой или легкой цепи полипептида, содержащему пептидные петли (например, содержащему 3-4 пептидные петли), устойчивость которому придается, например, посредством βскладчатой листовой структуры и/или межцепочечной дисульфидной связи. Дополнительно в изобретении упоминаются постоянные или вариабельные домены, в зависимости от относительной недостаточности вариантов последовательностей в пределах доменов у членов разных групп в случае постоянного домена, или значительного количества вариантов в пределах доменов у членов разных групп в случае вариабельного домена. В изобретении взаимозаменяемо упоминаются постоянные области легкой цепи, постоянные домены легкой цепи, постоянные области легкой цепи, СЬ области или СЬ домены. Постоянные домены тяжелой цепи взаимозаменяемо упоминаются в изобретении как постоянные области тяжелой цепи, постоянные домены тяжелой цепи, СН области или СН домены. Вариабельные домены легкой цепи взаимозаменяемо упоминаются как вариабельные области легкой цепи, вариабельные домены легкой цепи, \Ь области или \Ь домены. Вариабельные области тяжелой цепи взаимозаменяемо упоминаются как вариабельные области тяжелой цепи, вариабельные домены тяжелой цепи, νΗ области или νΗ области.
Термин область относится к части или участку цепи антитела и включает постоянные или вариабельные домены, определение которых приведено выше, а также более дискретные части или участки указанных доменов. Например, вариабельные области или домены легкой цепи включают участки, определяющие комплементарность или СЭК, вставленные между каркасными областями или РК, упоминаемые в изобретении.
Иммуноглобулины или антитела могут существовать в мономерной или полимерной форме. Термин антиген-связывающий фрагмент относится к полипептидному фрагменту иммуноглобулина или антитела, связывающего антиген, или конкурирующего с интактным антителом (то есть, с интактным антителом, из которого они были получены) для связывания антигена (то есть, специфическиго связывания). Термин конформация относится к третичной структуре белка или полипептида (например, к антителу, цепи антитела, его домену или области). Например, понятие конформация легкой (или тяжелой) цепи относится к третичной структуре вариабельной области легкой (или тяжелой) цепи, и фраза конформация антитела или конформация фрагмента антитела относится к третичной структуре антитела или его фрагмента.
Специфичное связывание антитела означает, что антитело проявляет заметную аффинность к антигену или к предпочтительной антигенной детерминанте и, предпочтительно, не показывает значительной кросс-реактивности. Заметное или предпочтительное связывание включает связывание с аффинностью по меньшей мере 106, 107, 108, 109 М-1 или 1010 М-1. Предпочтительными являются показатели аффинности более 107 М-1, более предпочтительными более 108 М-1. Промежуточные значения указанных здесь показателей также считаются входящими в объем по настоящему изобретению, и предпочтительную связывающую аффинность можно обозначить в диапазоне показателей, например, от 106 до 1010 М-1, предпочтительно от 107 до 1010 М-1, более предпочтительно от 108 до 1010 М-1. Антитело, которое не проявляет значительной кросс-реактивности, представляет собой антитело, которое не будет в заметной степени связываться с нежелательной единицей (например, с нежелательной белковой единицей). Например, антитело, которое специфически связывается с АА, будет в заметной степени связываться с АА, но не будет в значительной степени реагировать с белками или пептидами не АА-типа (например, с белками или пептидами не АА-типа, включенными в бляшки). Антитело, специфическое для предпочтительной антигенной детерминанты, не будет, например, в значительной степени перекрестно реагировать
- 22 028356 с посторонними эпитопами в том же белке или пептиде. Специфичное связывание можно определять согласно любым принятым в данной области техники способам для определения такого связывания. Предпочтительно, специфическое связывание определяют с помощью анализа δοαίαΐκ-πά и/или анализов конкурентного связывания.
Антигенсвязывающие фрагменты антитела производят способами рекомбинантных ДНК, или ферментативным или химическим расщеплением интактных иммуноглобулинов. Связывающие фрагменты включают ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2, ЕаЬс, Εν, единственные цепи и одноцепочечные антитела. Дополнительные фрагменты антитела и варианты эффекторных функций рассмотрены в изобретении в разделе под названием Антитела. В отличие от биспецифичных или бифункциональных иммуноглобулинов или антител, считается, что каждый иммуноглобулин или антитело имеет свой идентичный участок связывания. Биспецифические или бифункциональное антитело представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две разных пары тяжелых/легких цепей и два разных участка связывания. Биспецифичные антитела можно получать множеством способов, включающих слияние гибридом или связывание ЕаЬ' фрагментов. См., например, ЗопдЕПш & ЬасЬтаии, С1т. Εχρ. Iттиηο1. 79:315-321 (1990); Κοδΐβΐηγ е! а1. , 1. Iттиηο1. 148, 1547-1553 (1992).
Термины гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело относятся к иммуноглобулину или антителу, которое включает по меньшей мере одну цепь гуманизированного иммуноглобулина или антитела (то есть, по меньшей мере одну гуманизированную легкую или тяжелую цепь). Термины цепь гуманизированного иммуноглобулина или цепь гуманизированного антитела (то есть, легкая цепь гуманизированного иммуноглобулина или тяжелая цепь гуманизированного иммуноглобулина) относятся к цепи иммуноглобулина или антитела (то есть, к легкой или тяжелой цепи, соответственно), имеющей вариабельную область, которая включает вариабельную каркасную область по существу из человеческого иммуноглобулина или антитела, и участки, определяющие комплементарность (СОК) (например, по меньшей мере один СОК, предпочтительно два СОК, более предпочтительно три СОК), от иммуноглобулина или антитела по существу нечеловеческого происхождения, и дополнительно включает постоянные области (например, по меньшей мере одну постоянную область или ее часть, в случае легкой цепи, и предпочтительно три постоянные области в случае тяжелой цепи). Термины гуманизированная вариабельная область (например, гуманизированная вариабельная область легкой цепи или гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи) относятся к вариабельной области, которая включает вариабельную каркасную область по существу из человеческого иммуноглобулина или антитела, и участки, определяющие комплементарность (СОК) из иммуноглобулина или антитела по существу нечеловеческого происхождения.
Выражение по существу из человеческого иммуноглобулина или антитела или по существу человеческий означает, что выравнивание аминокислотной последовательности с человеческим иммуноглобулином или антителом в целях сравнения показывает идентичность областей по меньшей мере 8090%, предпочтительно 90-95%, более предпочтительно 95-99% (то есть, локальная идентичность последовательности) по отношению к человеческой последовательности каркасной или постоянной области, что позволяет осуществлять, например, консервативные замены, замены консенсусных последовательностей, замены зародышевых линий, обратные мутации и тому подобное. Вставка консервативных замен, замен консенсусных последовательностей, замен зародышевых линий, обратных мутаций и т.п. часто упоминается как оптимизация гуманизированного антитела или цепи. Выражение по существу из иммуноглобулина или антитела нечеловеческого происхождения или по существу нечеловеческий означает, что последовательность иммуноглобулина или антитела является идентичной по меньшей мере на 80-95%, предпочтительно 90-95%, более предпочтительно, на 96, 97, 98 или 99% последовательности нечеловеческого организма, например млекопитающего нечеловеческого происхождения.
Соответственно, все области или остатки гуманизированного иммуноглобулина или антитела, или цепи гуманизированного иммуноглобулина или антитела, кроме, возможно, участков СОК, по существу идентичны соответствующим областям или остаткам одной или более нативных последовательностей человеческого иммуноглобулина. Термин соответствующая область или соответствующий остаток относится к области или остатку во второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, которая занимает такое же (то есть, эквивалентное) положение, как и область или остаток в первой аминокислотной или нуклеотидной последовательности, если первые и вторые последовательности оптимально выравнены в целях сравнения.
В понятия гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело не входят химерные иммуноглобулины или антитела, как указано ниже. Гуманизированные иммуноглобулины или антитела являются химерными по своей конструкции (то есть, они содержат области белков более чем от одного вида), они включают дополнительные признаки (то есть, вариабельные области, содержащие остатки донорской СОК и остатки акцепторного каркаса), но вместе с тем, они не относятся к химерным иммуноглобулинам или антителам, указанным в изобретении.
Термины химерный иммуноглобулин или химерное антитело относятся к иммуноглобулину или антителу, вариабельные области которых происходят от первого вида, и постоянные области которых происходят от второго вида. Химерные иммуноглобулины или антитела можно конструировать, напри- 23 028356 мер, с помощью генной инженерии, из генных сегментов иммуноглобулина, принадлежащего разным видам.
Антиген представляет собой единицу (например, белковоподобную единицу или пептид), с которым антитело специфически связывается.
Термин эпитоп или антигенная детерминанта относится к сайту в антигене, с которым специфически связываются иммуноглобулин или антитело (или его антиген-связывающий фрагмент). Эпитопы могут быть образованы как из смежных аминокислот, так и из несмежных аминокислот, прилежащих друг к другу в третичной структуре белка. Эпитопы, образованные смежными аминокислотами, обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичным свертыванием, обычно исчезают при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп обычно включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения пространственной конформации антигенных детерминант включают, например, рентгеновскую кристаллографию и двумерный ядерный магнитный резонанс. См., например, в издании Ерйоре Марршд РгоЮсоХ ίη Мейюйх ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, νοί. 66, 0. Е. ΜοΓτΐδ, Ей. (1996).
Типичные антитела по изобретению включают антитело или его фрагмент, который специфически связывается с эпитопом, включающим X] ЕЭХ2. в агрегированном амилоидном белке, который связывается с эпитопом, включающим Х^ИХ^ который также связывается, например, с антителами 2А4, 7Ό8 или 809. Антитела, которые распознают аналогичный эпитоп, можно идентифицировать с помощью простого иммуноанализа, демонстрирующего способность одного антитела блокировать связывание другого антитела с антигеном-мишенью, то есть, анализом конкурентного связывания. Определение конкурентного связывания проводят с помощью анализа, в котором тестируемый иммуноглобулин ингибирует специфическое связывание референс-антитела с общим антигеном, таким как β. Известны многие типы анализов конкурентного связывания, например: прямой или непрямой твердофазный радиоиммуноанализ (РИА), прямой или непрямой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), конкурентный сендвич-анализ (см. публикации §1аЬй е1 а1., МеФойк ίη Еп/уто1оду 9:242 (1983)); прямой твердофазный ИФА с биотином-авидином (см. КлгЫапй е1 а1., ί. 1ттипо1. 137:3614 (1986)); прямой твердофазный анализ с меткой, прямой твердофазный сендвич-анализ с меткой (см. Наг1оте апй Ьапе, ЛпйЬоФек: А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1й 8ргш§ НагЬог Рге88 (1988); прямой твердофазный РИА с использованием метки 1251 (см. Моге1 е1 а1. , Мо1. 1ттипо1. 25 (1):7 (1988)); прямой твердофазный ИФА с биотином-авидином (Сйеипд е1 а1. , ^го1о§у 176:546 (1990)); и прямой РИА с мечением (Мо1йепйаиег е! а1., 8сапй. ί. 1ттипо1. 32:77 (1990)). Обычно такие анализы охватывают использование очищенного антигена, связанного с твердой поверхностью, или клетки, несущей очищенный антиген, немеченого тестового иммуноглобулина и меченого стандартизированного иммуноглобулина. Конкурентное ингибирование измеряют путем определения количества меток, связанных с твердой поверхностью или клеткой в присутствии тестового иммуноглобулина. Обычно тестовый иммуноглобулин присутствует в избытке. Обычно, когда конкурентное антитело присутствует в избытке, оно будет ингибировать специфическое связывание референс-антитела с общим антигеном по меньшей мере на 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% или больше.
Эпитоп также распознается иммуными клетками, например, В-клетками и/или Т-клетками. Клеточное распознавание эпитопа можно выявлять в анализах ш Х11го, измеряющих антиген-зависимую пролиферацию, которую обнаруживают по включению Н-тимидина, по секреции цитокина, секреции антитела, или по антиген-зависимому киллингу (анализ цитотоксических Т-лимфоцитов).
Термин неоэпитоп относится к новому и/или уникальному сайту на антигене, на который отвечают В и/или клетки Т.
Термин неоэпитопные антитела относится к антителам, которые специфически распознают новую Х-концевую или С-концевую аминокислотную последовательность, появивишуюся путем протеолитического расщепления молекулы, но не связываются с таким эпитопом на нативной (нерасщепленной) молекуле. Термин неоэпитопные антитела может относиться к антителам, которые специфически распознают новую ^концевую или С-концевую аминокислотную последовательность, полученную протеолитическим расщеплением §АА, но не связываются с таким эпитопом на нативной (нерасщепленной) молекуле 8АА. Некоторые неоэпитопные антитела связываются как с растворимым, так и с нерастворимым АА, и вызывают диссоциацию агрегатов АА, включающих АА-фибриллы. Неоэпитопное антитело может также представлять собой антитело, которое специфически распознает новый эпитоп, который способен связываться с антителом только после того, как произойдет конформационное изменение белка, например, как в случае АЬ-амилоидоза, и легкую цепь, когда экспрессируется только легкая цепь и образует амилоид.
Термин иммунологический ответ или иммунный ответ означает развитие полезной гуморальной (опосредованной антителом) и/или клеточной (опосредованной антиген-специфичными Т-клетками или продуктами их секреции) реакции, направленной против амилоидного пептида у больного реципиента. Такой ответ может быть активным ответом, вызванным введением иммуногена, или пассивным ответом, вызванным введением антитела или примированных Т-клеток. Клеточный иммунный ответ вызывается представлением полипептидных эпитопов в ассоциации с молекулами МНС I класса или II класса для
- 24 028356 активации антиген-специфических хелперных Т-клеток СЭ4' и/или цитостатических Т-клеток СЭ8'. В такой ответ также может вовлекаться активация моноцитов, макрофагов, клеток НК (натуральных киллеров), базофилов, дендритных клеток, астроцитов, микроглиальных клеток, ацидофильных гранулоцитов или других компонентов врожденного иммунитета. Присутствие клеточно-опосредованного иммунного ответа можно определить анализом пролиферации (Т-клетки СЭ4') или ЦТЛ (цитотоксических Тлимфоцитов) (см., Витке, выше; Нддез, выше). Можно раздельно оценивать относительный вклад гуморального и клеточного ответа на защитный или терапевтический эффект иммуногена путем отдельного выделения антител и Т-клеток от иммунизированного сингенного животного и измерения защитного или терапевтического действия у второго субъекта.
Иммуногенное средство или иммуноген способен индуцировать иммунологический ответ на самого себя при введении его млекопитающему, необязательно в сочетании с адъювантом.
Термин голый полинуклеотид относится к полинуклеотиду, не образующему комплекс с коллоидными материалами. Голые полинуклеотиды иногда клонируют в плазмидный вектор.
Термин адъювант относится к соединению, которое при введении в сочетании с антигеном усиливает иммунный ответ на антиген, но при введении его единственным не вызывает иммунный ответ на антиген. Адъюванты могут усиливать иммунный ответ посредством ряда механизмов, включающих рекрутинг лимфоцитов, активацию В- и/или Т-клеток и активацию макрофагов.
Термины эффективная доза или эффективная дозировка определяют количество, достаточное для достижения, или по меньшей мере, частичного достижения желательного эффекта. Термин терапевтически эффективная доза определяют, как количество, достаточное для излечения, или по меньшей мере частичного устранения болезни и ее осложнений у пациента, уже страдающего указанной болезнью. Количество, эффективное для этого применения, будет зависеть от тяжести инфекции и общего состояния собственной иммунной системы пациента.
Термин пациент включает субъекты человеческого происхождения и других млекопитающих, которые получают или профилактическое или терапевтическое лечение.
Настоящее изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связываются с эпитопом, включающим Χ|ΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, и которые конкурирует за связывание с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2, например, с антителами 2А4, 7Ό8 или 809.
Конкурирование между антителами определяют анализом, в котором тестовый иммуноглобулин ингибирует специфическое связывание референс-антитела с общим антигеном, например, АА.
Известны многие типы анализов конкурентного связывания, например: прямой или непрямой твердофазный радиоиммуноанализ (РИА), прямой или непрямой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), конкурентный сендвич-анализ (см. §1аЬП е1 а1., МеИобз ίη Εηζνιηοίοβν 9:242-253 (1983)); прямой твердофазный ИФА с биотином-авидином (см. Кйк1апб е1 а1., ί. 1ттипо1. 137:3614-3619 (1986)); прямой твердофазный анализ с меткой, прямой твердофазный сендвич-анализ с меткой (см. Наг1о№ апб Ьапе, АпНЬоФек: А ЬаЬогаЮгу Мапиа1, Со1б 8ргшд НагЬог Рге88 (1988); прямой твердофазный РИА с использованием метки 1251 (см. Моге1 е1 а1., Мо1. 1ттипо1. 25 (1):7-15 (1988)); прямой твердофазный ИФА с биотином-авидином (СЬеипд е1 а1., УиЫоду 176:546-552 (1990)); и прямой РИА с мечением (МоМепЬаиег е1 а1., 8еапб. ί. 1ттипо1. 32:77-82 (1990)). Обычно такие анализы подразумевают использование очищенного антигена, связанного с твердой поверхностью или клеткой, несущей очищенный антиген, немеченого тестового иммуноглобулина и меченого стандартизированного иммуноглобулина. Конкурентное ингибирование измеряют путем определения количества меток, связанных с твердой поверхностью или клеткой в присутствии тестового иммуноглобулина. Обычно тестовый иммуноглобулин присутствует в избытке. Антитела, идентифицированные в конкурентном анализе (конкурирующие антитела), включают антитела, связанные с одним и тем же эпитопом, что и референс-ссылки, и антитела, связанные со смежным эпитопом, расположенным в достаточной близости к эпитопу с присоединенным референсантителом, чтобы возникло стерическое несоответствие. Обычно конкурентное антитело, находясь в избытке, будет ингибировать специфическое связывание референс-антитела с общим антигеном по меньшей мере на 50-75%.
Антитело, которое специфически связывается с амилоидным белком, представляет собой антитело, которое связывается с амилоидным белком с аффинностью по меньшей мере 107 М-1. Некоторые антитела связываются с амилоидным белком с показателями аффинности от 108 М-1 до 1011 М-1.
Антитело, которое специфически связывается с агрегированным амилоидным белком, таким как АА-агрегат, без специфическиго связывания с мономерным амилоидным белком, представляет собой антитело, которое связывается с агрегированным амилоидным белком, таким как, например, фибриллы (например, АА в агрегированной β-складчатой листовой форме, например, от трупа больного амилоидозом АА или от трансгенной модели животных), как описано выше, и его специфичная связывающая аффинность к мономерным формам амилоидного белка ниже по меньшей мере в десять раз и обычно по меньшей мере в 100 раз. Например, такое антитело могло бы связываться с растворимым АА с аффинностью 109 М-1 и с бляшками с аффинностью менее 107 М-1. Аффинность таких антител для бляшек составляет обычно менее 107 М-1 или 106 М-1. Такие антитела дополнительно или альтернативно определяют по
- 25 028356 интенсивности флюоресценции по сравнению с посторонним контрольным антителом, (например, с антителом или смесью поликлональных антител к АА-пептиду с обратной последовательностью), при контакте антител с фибриллами, и оценивают связывание по флуоресцентным меткам. Интенсивность флюоресценции антител, связанных с растворимым пептидом АА, которые не связываются с бляшками, находится в пределах фактора пять, иногда в пределах фактора два, и иногда неразличима в границах экспериментальной ошибки интенсивности флуоресценции контрольного антитела.
Композиции или способы, содержащие один или несколько упомянутых элементов, могут включать другие элементы, конкретно не упомянутые. Например, композиция, которая содержит АА-пептид, охватывает и выделенный АА-пептид, и АА-пептид в качестве компонента полипептидной последовательности большей длины.
II. Амилоидные заболевания.
1. Краткий обзор и патогенез.
Амилоидные заболевания, или амилоидозы, включают ряд патологических состояний, проявляющихся широким разнообразием объективных симптомов. Общим для этих заболеваний является присутствие аномальных внеклеточных депо фибриллярного белка, называемых амилоидными депо или амилоидными бляшками, диаметр которых обычно составляет 10-100 мкм, с их локализацией в определенных органах или участках тканей. Такие бляшки состоят в основном из растворимого белка или пептида природного происхождения. Эти нерастворимые депо состоят из в общем латеральных агрегатов из фибрилл диаметром около 10-15 нм. Амилоидные фибриллы производят характерное светло-зелёное двупреломление в поляризованном свете при окрашивании красителем Конго красным. Указанные заболевания классифицируют в зависимости от основных фибриллярных компонентов, образующих бляшечные депо, как расмотрено ниже.
Пептиды или белки, образующие бляшечные депо, часто происходят из более крупного белкапредшественника. Более конкретно, в патогенез амилоидных фибриллярных депо обычно вовлечено протеолитическое расщепление на фрагменты аномального белка-предшественника. Эти фрагменты обычно собраны в антипараллельные β-складчатые листы; вместе с тем, известны некоторые нерасщепленные формы белка-предшественника, способные к агрегации и образованию фибрилл при семейной амилоидной полинейропатии (вариант транстиретинновых фибрилл), и амилоидозе, связанном с диализом (β2микроглобулиновые фибриллы) (Тап, с1 а1., 1994, см. выше).
2. Клинические синдромы.
В этом разделе приведено описание основных типов амилоидозов, в которое включено характерное строение их фибриллярных бляшек. Общим открытием по настоящему изобретению является возможность лечения амилоидных заболеваний путем введения средств, действие которых направлено на активацию иммунного ответа против компонента или разных компонентов амилоидных депо, конкретных для каждого заболевания. Как рассмотрено более подробно ниже в разделе С, такие компоненты предпочтительно представляют собой элементы фибрилл, которые образуют бляшки. В разделах ниже приведены примеры основных форм амилоидоза, которые не предназначены ограничивать объем по настоящему изобретению.
a. Амилоидозы ЛЬ-типа.
Амилоидные депо ЛЬ-типа обычно связаны практически с любой дискразией В-лимфоцитарной линии, варьируя от злокачественного развития плазматических клеток (множественная миелома) до доброкачественной моноклональной гаммапатии. Иногда присутствие амилоидных депо может быть первичным индикатором основной дискразии.
Фибриллы в амилоидных депо ЛЬ-типа состоят из легких цепей моноклонального иммуноглобулина или их фрагментов. Более конкретно, фрагменты происходят из Ν-концевой области легкой цепи (каппа или лямбда) и содержат полностью вариабельный домен (Уь) или его часть. Депо обычно возникают в мезенхимальных тканях, вызывая периферическую и автономную нейропатию, синдром запястного канала, макроглоссию, рестриктивную кардиомиопатию, артропатию крупных суставов, имунные дискразии, миеломы, а также оккультные дискразии. Вместе с тем, необходимо отметить, что может быть вовлечена практически любая ткань, в особенности висцеральные органы, например, сердце.
b. Наследственные системные амилоидозы
Существует множество форм наследственных системных амилоидозов. Хотя они представляют собой относительно редкие состояния, появление симптомов во взрослом возрасте и характер наследования (обычно аутосомно-доминантный) приводит к персистентному существованию таких заболеваний в популяции. В общем, указанные синдромы обусловлены точечными мутациями в белкепредшественнике, что приводит к продукции амилоидогенных пептидов или белков. Табл. 2 приводит обобщенные данные фибриллярного строения при разных формах указанных заболеваний в качестве примеров.
- 26 028356
Таблица 2. Наследственные амилоидозыа
Фибриллярный пептид/белок Генетический вариант Клинический синдром
Транстиретин и фрагменты (АТТЕ) МебЗО, многие другие Семейная амилоидная полинейропатия (САП), (главным образом периферические нервы)
Транстиретин и фрагменты (АТТЕ) ТЬг45, А1а60, Зег84, Ме£111, 11е122 Вовлечено сердце, преимущественно без нейропатии
Ν-концевой фрагмент аполипопротеина А1 (ароА1) Агд2 6 Семейная амилоидная полинейропатия (САП), (главным образом периферические нервы)
Ν-концевой фрагмент аполипопротеина А1 (ароА1) Агд26, Агд50, АгдбО, другие Озбегбад-тип, ненейропатическая форма (преобладает вовлечение висцеральных органов)
Лизозим (А1уз) ТНг56, Ηίδ67 Озбегбад-тип, ненейропатическая форма (преобладает поражение висцеральных органов)
Фрагмент о-цепи фибриногена Ьеи554, Уа152б Озбегбад-тип, ненейропатическая форма (преобладает поражение висцеральных органов)
Фрагмент гельсолина (Аде1) Азп187, Туг187 Краниальная нейропатия с решетчатой дистрофией роговицы
Фрагмент цистатина С С1иб8 Наследственная церебральная геморрагия (церебральная амилоидная ангиопатия) - исландский тип
β-амилоидный белок (Αβ), полученный из амилоидного белка- предшественника (АРР) С1п693 Наследственная церебральная геморрагия (церебральная амилоидная ангиопатия) - голландский тип
β-амилоидный белок (Αβ), полученный из амилоидного белка- предшественника (АРР) 11е717, РНе717, С1у717 Семейная болезнь Альцгеймера
β -амилоидный белок (Αβ), полученный из амилоидного белка- предшественника (АРР) Азп670, Ъеиб71 Семейное слабоумие - предположительно болезнь Альцгеймера
Прионный белок (РгР), происходящий из белка- предшественника РгР, вставка 51-91 Ъеи102, Уа1167, Азп178, Ьуз200 Семейная болезнь Крейтцфельдта-Якоба; синдром Геротмана- Штраусслера-Шейнкера (наследственные спонгиозные энцефалопатии, прионные болезни)
кА, происходящий из сывороточного амилоидного белка (АроЗЗА) Семейная средиземноморская лихорадка, с преобладающим поражением почек (аутосомно- рецессивная)
АА, происходящий из сывороточного амилоидного белка (АроЗЗА) Синдром Макла-Уэллса, нефропатия, глухота, крапивница, боль в конечностях
Неизвестно Кардиомиопатия с персистирующей асистолией предсердий
Неизвестно Кожные депо (буллезные, папулезные, кожно- пустульные)
а Данные получены из пуоликации Тап & Реруз, 1994, см. выше.
- 27 028356
Данные, предоставленные в табл. 2, приведены в качестве примеров и не предназначены ограничивать объем по настоящему изобретению. Например, были описаны больше 40 отдельных точечных мутаций в гене транстиретина, все из которых дают начало клинически сходным формам семейной амилоиднойполинейропатии.
Транстиретин (ТТР) является белком размером 14 кДа, который также иногда называют преальбумином. Он вырабатывается в печени и хориодном сплетении и участвует в транспорте гормонов щитовидной железы и витамина А. По меньшей мере 50 разных форм белка, отличающиеся единственной заменой аминокислоты, отвечают за разные формы семейной амилоидной полинейропатии. Например, замена пролина на лейцин в положении 55 приводит к особенно прогрессирующей форме нейропатии; замена метионина на лейцин в положении 111 приводит к тяжелому поражению сердца у пациентов из Дании. Амилоидные депо, выделенные из сердечной ткани больных системным амилоидозом, показали, что депо состоят из гетерогенной смеси ТТР и их фрагментов, вместе называемых АТТР, для которых были описаны полные параметры длины последовательностей. Из таких бляшек можно извлекать фибриллярные компоненты АТТР, и определять их структуру и последовательности согласно известным в данной области техники способам (например, СикШуккои А., е! а1, ЬаЬога!огу ШуекЕ 73: 703-708, 1995; Кате!аш, Е., е! а1. , ВюсНет. ВюрНук. Рек. Соттии. 125: 622-628, 1984; Ргак, М., е! а1., ΡNΑ8 80: 539-42, 1983).
У людей, несущих точечные мутации в молекуле аполипопротеина А1 (например, С1у^Агд26; Тгр^Аг§50; Ьеи^Агд60), выявляют форму амилоидоза (тип Οκ^γ^), которая отличается наличием депо аполипопротеинового белка А1 или его фрагментов (ААроА1). У таких больных обнаруживают низкие уровни липопротеинов высокой плотности (ЛВП) и периферическую нейропатию или почечную недостаточность.
Другая форма ненейропатического наследственного амилоида Οκ^γ^-™^, наблюдаемая в английских семьях, обусловлена мутацией в альфа-цепи фермента лизозима (например, Пе^ТНг56 или Акр^Н1к57). В этом случае происходит накопление фибрилл мутантного белка лизозима (А1ук), обычно проявляющееся у больных нарушением функции почек. Указанный белок в отличие от большинства фибрилл-образующих белков, описанных в настоящем изобретении, обычно присутствует в своей полной (нефрагментированной) форме (Веикои, М.И., е! а1. США Еби. 8утр. 199: 104-131, 1996).
β-амилоидный пептид (Λβϊ) представляет собой пептид из 39-43 аминокислот, полученный путем протеолиза из более крупного белка, называемого бета-амилоидным белком-предшественником фАРР). Мутации в βАРР приводят к семейным формам болезни Альцгеймера, синдрома Дауна и/или сенильного слабоумия, для которых характерны церебральные депо бляшек, состоящих из Аβ-фибрилл и других компонентов, которые более подробно описаны ниже. Известные мутации в АРР, связанные с болезнью Альцгеймера, возникают проксимальнее к сайтам расщепления β-или γ-секретазы, или в Аβ. Например, положение 717 является ближайшим к сайту расщепления γ-секретазы в АРР при его процессирования до Аβ, и положения 670/671 являются ближайшими к сайту расщепления β-секретазы. Мутации в любом из этих остатков могут привести к болезни Альцгеймера, по-видимому, посредством увеличения количества 42/43 аминокислот Аβ-формы, созданного из АРР. Структура и последовательность Аβ-пептидов разной длины известна в данной области техники. Такие пептиды можно изготавливать согласно способам, известным в данной области техники (например, С1еииег аиб Аоид, ВюсНет ВюрНук. Рек. Сотт. 129: 885890, 1984; С1еииег аиб Аоид, ВюсНет ВюрНук. Рек. Сотт. 122: 1131-1135, 1984). Дополнительно, коммерчески доступны разные формы пептидов.
Синуклеин представляет собой связанный с синапсом белок, который напоминает алипопротеин и содержит обилие нейрональной цитозоли и пресинаптических терминалов. Пептидный фрагмент, полученный из α-синуклеина, называемого NΑС, также является компонентом амилоидных бляшек болезни Альцгеймера. (С1ау!ои е! а1., 1998). Этот компонент также представляет собой цель иммунологического лечения согласно настоящему изобретению, как подробно описано ниже.
Гельсолин является кальцийсвязывающим белком, который связывается с фрагментами актиновых филаментов. Мутации белка в положении 187 (например, Акр^АкН; Акр^Туг) приводят к возникновению формы наследственного системного амилоидоза, обычно выявляемого у пациентов в Финляндии, а также у людей в Голландии или Японии. У людей с указанным повреждением фибриллы, образованные из фрагментов гельсолина (Аде1), обычно состоят из аминокислот 173-243 (карбоксиконцевой фрагмент размером 68 кДа) и накапливаются в кровеносных сосудах и базальных мембранах, что приводит к дистрофии роговицы и краниальной нейропатии, которая прогрессирует до периферической нейропатии, дистрофических изменений кожи и других органов, где происходит накопление. (Каидак, Н., е! а1. Нитаи Мо1. Сеие!. 5 (9) : 1237-1243, 1996).
Другие подвергшиеся мутации белки, такие как мутантная альфа-цепь фибриногена (АйЬА) и мутантный цистатин С (Асук), также образуют фибриллы и вызывают характерные наследственные патологии. Фибриллы АйЬА образуют депо, характерные для ненейропатического наследственного амилоида с почечной патологией; депо Асук характерны при наследственной церебральной амилоидной ангиопатии, выявляемой в Исландии. (ЪкеШасНег, е! а1., Наткои'к Рйис1р1ек ой ШетШ Мебюше, МсСга^-НШ, 8аи Егаисгксо, 1995; Веикои, е! а1., см. выше). По меньшей мере в некоторых случаях у больных церебральной
- 28 028356 амилоидной ангиопатией (ЦАА) выявляли амилоидные фибриллы, содержащую немутантную форму цистатина С в соединении с бета-белком. (Надар А., е! а1. Мо1ес. Сйет. №игора1йо1. 33: 63-78, 1998).
В настоящее время некоторые формы прионной болезни считаются наследственными, при этом ранее предполагалось, что до 15% случаев имеют инфекционное происхождение ((Βα1ύ\νίη. е! а1., ίη КезеагсЬ Айуапсез ίη АкЬешег'з ОЁзеазе апй Ке1а!ей О1зогйегз, 1ойп \Уйеу апй δοηδ, №\у Уогк, 1995). При указанных прионных патологиях у больных разрастаются бляшки, состоящие из аномальных изоформ нормального прионного белка (РгРС). Преобладающая мутантная изоформа РгР8с, также называемая АБсг, отличается от нормального клеточного белка своей устойчивостью к расщеплению протеазой, нерастворимостью при экстракции детергентами, накоплением во вторичных лизосомах, посттрансляционным синтезом и высоким содержанием β-складчатых листов. Были установлены генетические связи по меньшей мере для пяти мутаций, приводящих к болезни Крейтцфельдта-Якоба (БКЯ), синдрома Герстмана-Штраусслера-Шейнкера (ГШШ) и фатальной семейной бессоннице (ФСБ) (Ва1й\уш). Способы экстракции фибриллярных пептидов из скрапи-фибрилл, определения последовательностей и изготовления таких пептидов известны в данной области техники (например, публикации Веекез М., е! а1. 1. Сеп. У1го1. 76: 2567-76, 1995).
Например, одна из форм ГТТПТТ связана с мутацией РгР в кодоне 102, тогда как теленцефалическая форма ГТТПТТ отличается мутацией в кодоне 117. Мутации в кодонах 198 и 217 вызывают форму ГТТПТТ, при которой нейритные бляшки при болезни Альцгеймера имеют характерное содержание РгР вместо Αβ-пептида. Некоторые формы семейной БКЯ были связаны с мутациями в кодонах 200 и 210; мутации в кодонах 129 и 178 были обнаружены и при семейной форме БКЯ и при семейной форме ФСБ. (Ва1й\уит см. выше).
с. Сенильный системный амилоидоз.
Амилоидные депо, как системные, так и фокальные, увеличиваются с возрастом. Например, фибриллы дикого типа транстиретина (ТТК) обычно обнаруживают в сердечной ткани пожилых людей. Указанные депо могут быть бессимптомными, клинически молчащими, или могут приводить к остановке сердца. Бессимптомные фибриллярные фокальные депо могут также возникать в мозге (Αβ), в амилоидных тельцах (согрога ату1асеа) простаты (микроглобулин Αβ2), суставах и семенных пузырьках.
й. Церебральный амилоидоз.
Локальные амилоидные депо часто встречаются в мозге, особенно у пожилых людей. Наиболее частый тип амилоида в мозге состоит в основном из фибриллярного пептида Αβ и приводит к слабоумию или спорадической (ненаследственной) болезни Альцгеймера. Фактически, частота встречаемости спорадической болезни Альцгеймера значительно превышает частоту форм, являющихся наследственными. Фибриллярные пептиды, образующие эти бляшки, очень сходны с описанными выше, в отношении наследственных форм болезни Альцгеймера (БА).
е. Амилоидоз, связанный с диализом.
Бляшки, состоящие из β2-микроглобулиновых фибрилл Αβ^), обычно развиваются у больных, которым проводят продолжительный гемодиализ или перитонеальный диализ. β2-микроглобулин представляет собой полипептид в 11,8 кДа, который является легкой цепью антигенов МНС I класса, присутствующие на всех клетках, содержащих ядра. При нормальных обстоятельствах он постоянно сбрасывается с клеточной мембраны и обычно фильтруется почками. Нарушение удаления β2-микроглобулина, например, в случае ослабления функции почек, приводит к его накоплению в почке и других участках (прежде всего в богатых коллагеном тканях суставов). В отличие от других фибриллярных белков, молекулы Αβ2М обычно находятся в фибриллах в нефрагментированной форме. (Вепзоп, см. выше).
£. Амилоидозы гормонального происхождения.
В эндокринных органах могут накапливаться амилоидные депо, особенно у пожилых людей. Гормон-секретирующие опухоли также могут нести амилоидные бляшки гормонального происхождения, фибриллы которых состоят из полипептидных гормонов, таких как кальцитонин (медуллярная карцинома щитовидной железы), островковый амилоидный полипептид (амилин; встречающийся у большинства больных диабетом II типа), и атриальный натрийуретический пептид (изолированный амилоидоз предсердий). Последовательности и структура указанных белков известны в данной области техники.
д. Разные амилоидозы.
Существует множество других форм амилоидного заболевания, которые обычно проявляются в виде локализованных депо амилоида. Предполагают, что эти болезни обычно являются результатом локальной продукции и/или недостаточного катаболизма определенных предшественников фибрилл, или предрасположенности конкретной ткани (такой, как сустав) к образованию фибриллярного депо. Примеры таких идиопатических депо включают нодулярный амилоид АЬ-типа, кожный амилоид, эндокринный амилоид и связанный с опухолью амилоид.
III. Амилоидные заболевания АА-типа.
Амилоидоз АА-типа ранее называли вторичным или реактивным амилоидозом, поскольку он развивается вторично в добавление к существовавшему ранее или сопутствующему заболеванию. Такие заболевания включают без ограничения воспалительные заболевания, например, ревматоидный артрит,
- 29 028356 ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическую артропатию, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета и болезнь Крона. Депо АА также образуются в результате хронических микробных инфекций, таких как лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит и болезнь Уиппла. Некоторые злокачественные новообразования могут также вызывать образование АА-фибриллярных амилоидных депо. Они включают такие патологии, как ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома и волосатоклеточный лейкоз. Амилоидное заболевание АА-типа может также быть результатом наследственных воспалительных заболеваний, таких как семейная средиземноморская лихорадка. Дополнительно, амилоидное заболевание АА-типа может быть обусловлено лимфопролиферативными заболеваниями, такими как болезнь Кастлемана.
1. Воспалительные заболевания, связанные с амилоидозом АА-типа.
Ревматоидный артрит представляет собой хроническое системное заболевание, поражающее в первую очередь суставы. Симптомами ревматоидного артрита являются воспалительные изменения в синовиальных мембранах и суставных структурах (суставы), и атрофия и остеопороз (уменьшение плотности костей). В последних стадиях ревматоидного артрита развиваются деформации и анкилоз (неподвижность сустава). Модель ревматоидного артрита можно создать на мышах или крысах путем введения коллагена II типа в полном адъюванте Фрейнда.
Ювенильный хронический артрит проявляется множеством форм, наиболее распространенным является ювенильный ревматоидный артрит. Он может развиваться у детей в любом возрасте, но наиболее часто отмечают начало симптоматики в возрасте от 2 до 6 лет. Существует 3 основных типа ювенильного ревматоидного артрита, а именно, пауциартикулярный артрит, полиартикулярный артрит и системный артрит (также известный как болезнь Стилла). Пауциартикулярный артрит обычно затрагивает 4 или меньше суставов, обычно крупные суставы, например, коленные. Он может сопровождаться ригидностью сустава, заставляя ребенка хромать. Полиартикулярный артрит характеризуется вовлечением 5 или больше суставов, обычно мелких суставов рук и ног. У детей с полиартикулярным артритом часто наблюдается более тяжелая форма болезни. Системный артрит характеризуется опуханием суставов в сочетании с повышением температуры и розовой сыпью. Опухание суставов может не начинаться в течение нескольких месяцев или нескольких лет после начала повышения температуры. Болезнь может также затрагивать внутренние органы, такие как печень, сердце, селезенка и лимфатические узлы, и часто возникает анемия. Системный артрит имеет тенденцию к самостоятельному уменьшению, при этом небольшой процент больных детей может страдать тяжелой формой артрита, который продолжается в их взрослой жизни.
Анкилозирующий спондилит представляет собой ревматическое заболевание, при котором наблюдается артрит позвоночных и крестцовоподвздошных суставов и может возникать воспаление глаз, легких и сердечных клапанов. Симптомы варьируют от перемежающихся эпизодов болей в пояснице, которые наблюдаются в течение жизни, до тяжелого хронического заболевания, которое на протяжении жизни поражает позвоночник, периферические суставы и другие части тела, что приводит к развитию выраженной ригидности суставов и позвоночника, потере подвижности и деформации.
Псориаз является распространенным хроническим чешуйчатым дерматозом, с обострениями и ремиссиями, который имеет полигенный характер наследования. Симптомы псориаза заключаются в наличии округлых, сухих шелушащихся участков разных размеров, покрытых сероватыми, белыми или серебристо-белыми чешуйками, со склонностью к их появлению на разгибательных поверхностях, ногтях, волосистой части головы, гениталиях и в поясничнокрестцовой области.
Псориатическая артропатия представляет собой заболевание, при котором псориаз связан с развитием артрита. Эта патология может иметь варианты проявления. Артрит обычно проявляется в умеренной форме и поражает только некоторые суставы. У некоторых пациентов болезнь носит тяжелый характер и обычно поражает пальцы и позвоночник. При вовлечении позвоночника симптомы очень похожи на симптомы анкилозирующего спондилита.
Синдром Рейтера представляет собой группу симптомов, состоящих из артрита, уретрита (воспаления мочеполового тракта), конъюнктивита (воспаления оболочек глаза) и поражения кожи и слизистых оболочек. Синдром Рейтера также называется реактивным артритом, что означает, что указанный артрит возникает как реакция на инфекцию, которая началась в другом месте организма. Чаще всего с синдромом Рейтера связана бактериальная инфекция СЬ1атуб1а йасйотабк, приобретенная при половом контакте. Некоторые другие бактериальные инфекции, связанные с синдромом Рейтера, включающие 8а1топе11а, 8Ы§е11а, Уеглша и Сатру1оЪас1ег, возникают через пищеварительный тракт.
Болезнь Стилла у взрослых, также называемая болезнью Стилла с началом в старшем возрасте, является редким воспалительным состоянием, при котором поражаются внутренние органы, суставы и другие части организма. Она может внезапно начинаться и исчезать. При очень тяжелых случаях взрослая форма болезни Стилла становится хронической и чрезвычайно изнурительной, вызывающей нестерпимую боль и ригидность. Через много лет болезнь поражает жизненноважные органы, такие как сердце и легкие.
- 30 028356
Синдром Бехчета является полисистемной патологией, которая может приводить к слепоте и неврологическим нарушениям, с проявлением в виде рецидивирующих язв ротовой полости и/или гениталий, и хронического вторичного увеита. Для указанного синдрома характерны 4 основных симптома: афтозные язвы ротовой полости, поражение кожи, глазные симптомы и язвы области гениталий, и иногда воспаление тканей и органов всего организма, включая желудочно-кишечный тракт, центральную нервную систему, сосудистую систему, легкие и почки. Артрит при синдроме Бехчета обычно носит интермиттирующий, самоограничивающийся, недеформирующий характер и ограничен коленными и голеностопными суставами.
Болезнь Крона представляет собой хроническое грануломатозное (с наличием маленьких зерноподобных телец или новообразований) воспалительное заболевание, которое поражает любую часть желудочно-кишечного тракта от ротовой полости до ануса; но обычно вовлечена подвздошная кишка (нижний участок тонкой кишки длиной три пятых) с рубцеванием и утолщением кишечной стенки. Симптомы болезни Крона включают наличие хронической диареи, усиление перистальтического шума, судороги, возможно подтвержаемые потерей веса и отвращением к еде.
2. Хронические микробные инфекционные заболевания, связанные с амилоидозом АА-типа.
Лепра представляет собой инфекционное заболевание, характеризующееся обезображивающими рубцами на коже, поражением периферических нервов и прогрессирующим истощением.
Возбудителем лепры является микроорганизм МусоЪас1егшт 1ергае, который имеет длительный инкубационный период и не обладает высокой контагиозностью. Распространены две формы лепры, туберкулоидная и лепроматозная. Обе формы вызывают образование кожных рубцов, но лепрматозная форма является более тяжелой, с образованием больших, обезображивающих узлов (шишек и неровностей). В конечной стадии лепра вызывает периферическое неврологическое поражение. Больные, страдающие лепрой продолжительное время, могут терять функции рук или ног из-за рецидивирующего поражения, обусловленного отсутствием чувствительности.
Туберкулез является контагиозной бактериальной инфекцией, вызываемой МусоЬасЮгшт (иЬегси1о818. Болезнь характеризуется развитием гранулём (гранулярных опухолей) в пораженных тканях. В первую очередь поражаются легкие, но инфекция может распространяться на другие органы.
Бронхоэктаз представляет собой патологическую деструкцию и расширение крупных дыхательных путей. Бронхоэктаз часто вызывается рецидивирующим воспалением или инфекцией дыхательных путей. Классическим возбудителем, выявляемым у больных бронхоэктатической болезнью, является бактерия Ркеикотоиак аегидто8а, элиминация которой, как известно, очень затруднена. Частое инфицирование дыхательных путей указанной бактерией может приводить к обсеменению бронхов этим микроорганизмом, что вызывает у таких людей предрасположенность к псевдомональным пневмониям, для лечения которых необходимы специальные антибиотики.
Язвы лежачего положения, также называемые компрессионными язвами или пролежнями, представляют собой изъязвления кожи и подлежащих тканей, вызванные длительным давлением на вовлеченную область. Они начинаются с покраснения кожи, но быстро прогрессируют до ухудшения в виде образования пузырей, затем открытой раны, и, наконец, язвы. Такие язвы обычно возникают на костных выступах, например, пятках, на ягодицах в области копчика и на затылке.
Хронический пиелонефрит представляет собой инфекцию почек и мочеточников (трубочек, по которым моча выходит из почек). Пиелонефрит чаще всего возникает в результате инфицирования мочевых путей, особенно при наличии спорадического или постоянного обратного тока мочи из мочевого пузыря в мочеточники или почечную лоханку.
Остеомиелит является острой или хронической костной инфекцией, обычно вызываемой бактериями. Часто инфекция начинает в другой части организма и через кровь распространяется до кости. При инфицировании кости внутри нее образуется гной, что может приводить к абсцессу. При абсцессе нарушается кровоснабжение кости. При некрозе костной ткани в результате потери кровоснабжения остеомиелит становится хроническим. Хроническая инфекция может носить интермиттирующий характер и сохраняться в течение многих лет.
Болезнь Уиппла представляет собой редкое состояние, при котором происходит неадекватная абсорбция питательных веществ из кишечного тракта, обусловленная кишечной инфекцией.
Возбудителем болезни является бактерия ТгорНегута \у1ирре1П. Симптомы включают диарею, кишечное кровотечение, боль в животе, потерю аппетита, потерю веса, утомляемость и слабость. Артрит и повышение температуры часто возникают за несколько лет до развития кишечных симптомов. Также у больных может выявляться неврологическая симптоматика. Диагноз основан на симптомах и результатах биопсии тканей тонкой кишки или других пораженных органов. При диагностике и проведении лечения болезнь Уиппла обычно можно излечить. Без лечения указанная патология обычно является смертельной.
3. Злокачественные новообразования, связанные с амилоидозом АА-типа.
Ходжкинская лимфома представляет собой рак лимфатической ткани, выявляемый в лимфатических узлах, селезенке, печени и в костном мозге. Первым симптомом указанного рака часто является увеличенный лимфатический узел. Болезнь может распространяться на соседние лимфоузлы, и в даль- 31 028356 нейшем может распространяться в легкие, печень или костный мозг.
Почечная карцинома представляет собой рак почки. Злокачественные клетки обнаруживают в выстилке почечных канальцев. Первым симптомом обычно является кровь в моче. Иногда поражаются обе почки. Указанный рак распространяется легко, чаще всего в легкие и другие органы. Карцинома почечных клеток является наиболее распространенным типом рака почек, за ним следует папиллярная почечно-клеточная карцинома, хромофобная почечная карцинома и карцинома собирательных протоков почек. Около 5% случаев карциномы почек не классифицированы, поскольку их симптоматика не вписывается ни в одну из категорий.
Кишечные карциномы включают раковые новообразования желудочно-кишечного тракта, такие как колоректальный рак, рак поджелудочной железы, желудка и пищевода. Колоректальный рак возникает в толстой кишке или в прямой кишке. Почти во всех случаях колоректальый рак начинается в виде доброкачественных полипов, которые в течение ряда лет перерождаются в раковые образования. В большинстве случаев колоректальный рак протекает бессимптомно. Панкреатический рак представляет собой злокачественное поражение поджелудочной железы. Его симптомы включают боль в животе, потерю аппетита, значительную потерю веса и безболезненную желтуху. Рак желудка, также называемый желудочным раком, может развиваться в любой части желудка и может распространяться на весь желудок и другие органы; в частности, на пищевод и тонкую кишку. Он также может метастазировать через стенку желудка в соседние лимфатические узлы и органы, такие как печень, поджелудочную железу и легкие, или в отдаленные органы, например, в надключичные лимфатические узлы, толстую кишку и яичники. Рак желудка часто является бессимптомным. Рак пищевода представляет собой злокачественное поражение пищевода. Его симптомы включают дисфагию (затрудненное глотание), боль и значительную потерю веса.
Карциномы легких представляют собой раковые заболевания легких, характеризующиеся наличием злокачественных опухолей. Существует два основных типа рака легкого: немелкоклеточный рак легкого и мелкоклеточный рак легкого. Симптомы зависят от конкретного типа рака, но могут включать хронический кашель, кровохарканье, одышку, хрипы, боль в груди, потерю аппетита, потерю веса и утомляемость.
Карциномы мочеполового тракта включают без ограничения рак простаты, рак мочевого пузыря, рак эндометрия, цервикальный рак и рак яичника. Рак простаты охватывает злокачественные опухолевые новообразования предстательной железы. Его симптомы могут включать частое мочеиспускание, затрудненное начало мочеиспускания и поддержание равномерности потока мочи, кровь в моче, болезненное мочеиспускание, затрудненное достижение эрекции или болезненную эякуляцию. Рак мочевого пузыря подразумевает любой из нескольких типов злокачественных новообразований мочевого пузыря. Его симптомы включают кровь в моче, частое мочеиспускание, болезненное мочеиспускание и недержание мочи. Эндометриальный рак охватывает злокачественные новообразования эндометрия (оболочки матки). В основном он возникает после наступления менопаузы и проявляется влагалищным кровотечением. Цервикальный рак представляет собой злокачественную опухоль шейки матки. Ранние стадии цервикального рака могут быть полностью бессимптомными. Влагалищное кровотечение может указывать на наличие злокачественной опухоли. В последующих стадиях могут появляться метастазы в желудке, легких или в другой локализации. Рак яичников представляет собой злокачественное новообразование яичников. Симптомы рака яичников являются часто нечеткими и неспецифическими, и включают неясный дискомфорт внизу живота, ощущение тяжести в тазовой области, нарушение менструального цикла, влагалищное кровотечение, увеличение веса или потерю веса, неспецифические желудочно-кишечные симптомы.
Злокачественные новообразования яичников являются источником распространения раковых клеток, которые часто имплантируются в матку, мочевой пузырь, кишку и в оболочки кишечной стенки. Эти раковые клетки могут давать начало новому опухолевому образованию прежде, чем возникнет предположение о раке.
Базальноклеточная карцинома представляет собой медленно растущую опухоль кожи, охватывающую злокачественные изменения базальных клеток кожи. Её симптомы включают поражение участков кожи, расположенных на лице, ухе, шее, груди, спине или волосистой части головы; видимые кровеносные сосуды на пораженных или смежных участках коже; и постоянные, незаживающие раны. Этот тип рака обычно остается локальным и почти никогда не метастазирует в отдаленные части организма, но его рост может продолжаться и инвазировать соседние ткани и структуры, включающие нервы, кости и головной мозг.
Волосатоклеточный лейкоз представляет собой рак лимфоцитов (В-клеток), который приводит к снижению количества форменных элементов крови. Болезнь вызывается В-клетками аномальной формы с волосообразной конфигурацией. Симптомы часто неопределенны. Снижение количества форменных элементов, вызванное волосатоклеточным лейкозом, может приводить к инфекциям, утомляемости и обильным чрезмерным кровотечениям.
4. Наследственное воспалительное заболевание, связанное с амилоидозом АА-типа.
Семейная средиземноморская лихорадка является наследственной патологией, характеризующейся
- 32 028356 рекуррентным повышением температуры и воспалением, часто с вовлечением брюшной полости или легких. Симптомы включают воспаление покровов брюшной полости, воспаление грудной клетки, кожи или суставов, наряду с высокой температурой, обычно достигающей максимального подъема через 12-24 ч. Приступы лихорадки могут варьировать по степени тяжести симптомов, и между приступами у людей обычно отсутствует симптоматика. Это заболевание является очень редким. Факторы риска включают наличие в семейном анамнезе семейной средиземноморской лихорадки или происхождение из Средиземноморского региона.
5. Лимфопролиферативные заболевания, связанные с амилоидозом АА-типа.
Болезнь Кастлемана является формой лимфопролиферативного заболевания, с характерной патологической гигантской гиперплазией лимфатического узла с инфильтрацией плазматическими клетками.
У пациентов с болезнью Кастлемана обычно выявляют лихорадку, анемию, гипергаммаглобулинемию и повышенную концентрацию в сыворотке белков - острофазовых средств, и все из перечисленных симптомов обусловлены большим количеством ГБ-6, который продуцируется в лимфатических узлах.
IV. Сывороточный амилоид А-типа.
1. Человеческий сывороточный амилоид А-типа.
Сывороточный амилоид А-типа (8АА) является циркулирующим предшественником амилоидного белка А-типа, фибриллярным компонентом амилоидных депо. Структурные исследования показали, что человеческий 8АА является гетерогенным и представляет семейство полиморфных генов 8АА и белковых продуктов. Суперсемейство генов 8АА содержит группу близко связанных генов, локализованных в 11р15.1. См. 8е11аг, ОС е( а1. Оепошкк 19: 221-227 (1994). У людей описаны четыре гена 8АА. Типичные аминокислотные последовательности белков, кодируемых четырьмя указанными генами 8АА, показаны в фиг. 1. Два гена (8АА1 и 8АА2) кодируют сывороточный острофазовый амилоид (А-8АА), и их стимуляция является согласованным ответом на воспаление.
Последовательности 8АА1 и 8АА2 обладают 95% идентичнностью как в кодирующих, так и в некодирующих областях. Существуют альфа-, бета- и гамма-изоформы человеческого 8АА1, и альфа- и бета-изоформы человеческого 8АА2, как показано в фигурах 18 и 19. 8АА3 является псевдогеном. 8АА4 кодирует конститутивный 8АА и имеет минимальную индуцибельность. См. публикации Сиппапе О. ВабЬеге'к С1ш. ВЬеита(о1. 13 (4): 615-628. Все человеческие молекулы 8АА/АА несут теоретическую кальций-связывающую тетрапептидную последовательность О1у-Рго-О1у-О1у, которая при фибриллогенезе возможно имеет значение для самоагрегации и для агрегации с экстрафибриллярными остатками амилоида. См. публикации Рукке, Е.М. е( а1. ВюеЬет. 1. 256:973-980 (1988) и Тите11 е( а1. Мо1. Вю1. Меб. 3:387-407 (1986). Ν-концевой участок 8АА/АА обладает мощной гидрофобностью, вероятно, важной для самоагрегации и с другими компонентами в амилоидных депозитах. См. НикЬу е( а1. С1ш. Iттиηо1. Ьппшпора(1ю1. 70 (1):2-9 (1994). В фигурах 2-5 показаны последовательности каждой из изоформ АА и их отношение к соответствующей изоформе 8АА. Например, человеческая альфа-изоформа 8АА1 имеет последовательность:
Н2Н-Ме^-Ьуз-Ьеи-Ьеи-ТЪг-61у-Ьеи-Уа1-РЪе-Суз-Зег-Ъеи-Уа1Ьеи-61у-Уа1-5ег-5ег-Агд-5ег-РЦе-РНе-5ег-Р11е-Ьеи-С1у-С1и-А1аРЪе-Азр-е1у-А1а-Агд-Азр-Ме11-Тгу-Агд-А1а-Туг-8ег-Азр-Ме^-Агд01и-А1а-Азп-Туг-11е-С1у-5ег-Азр-Ъу£-Туг-Р11е-Н15-А1а-Агд-С1уАзп-Туг-Азр-А1а-А1а-Ъуз-Агд-С1у-Рго-С1у-51у-А1а-Тгу-А1а-А1аС1и-Уа1-11е-5ег-Азр-А1а-Агд-01и-Азп-11е-С1п-Агд-РНе-Рйе-С1уН1£-131у-А1а-С1и-Азр-5ег-Ъеи-А1а-А£р-С1п-А1а-А1а-А£п-С1и-ТгуС1у-Агд-8ег-С1у-Ъуз-Азр-Рго-Азп-Н1з-РЬе-Агд-Рго-А1а-61у-ЬеиРго-С1и-Ъу£-Туг-ОН (ЗЕО ЮЫ0:1).
АА, который является протеолитическим фрагментом 8АА, также является гетерогенным. Преобладающий человеческий пептид АА состоит из 76 аминокислот. Пример АА имеет следующую аминокислотную последовательность:
Н2И-Агд-5ег-РЬе-РЬе-5ег-РЬе-Ьеи-С51у-С51и-А1а-РЬе-Азр-С51уА1а-Агд-Азр-Ме£-Тгу-Агд-А1а-Туг-8ег-Азр-Меб-Агд-С1и-А1а-АзпТуг-11е-51у-Зег-Азр-Ьуз-Туг-РЬе-Н13-А1а-Агд-51у-Азп-Туг-АзрА1а-А1а-Ьуз-Агд-й1у-Рго-й1у-е1у-А1а-Тгу-А1а-А1а-й1и-Уа1-11е5ег-Азр-А1а-Агд-С1и-Азп-11е-С1п-Агд-РЪе-РЬе-С1у-Н1з-С1у-А1а61и-Азр-5ег-0Н (ЗЕО Ю N0:2).
Остатки 70-76 из АА относятся к фрагменту АА в последовательности (8ЕО ГО Ν0:2), начинающемуся с остатка 70 и заканчивающегося остатком 76, который состоит из последовательности ОНОАЕО8 (8Е0 ГО Ν0: 4) или из соответствующего сегмента другого природного человеческого АА-белка или ААбелка других видов, при этом аминокислотная последовательность указанного белка имеет максималь- 33 028356 ное выравнивание с δΕΟ ГО N0:2.
2. Мышиный сывороточный амилоид А.
У мышей описаны четыре гена δΛΛ. Типичные аминокислотные последовательности белков, кодируемые четырьмя мышиными генами δΛΛ, показаны в фиг. 8. Генное семейство мышиных δΛΛ содержит четыре члена, которые тесно связаны в хромосоме 7. Два из этих генов, кодирующих основные мышиные изотипы δΛΛ ^АА1 и δΛΛ2), имеют высокоидентичные последовательности не только в экзонах, но также и в интронах и фланкирующих областях, и в ответ на амилоидную индукцию в моделях индуцируются примерно в равных количествах. Указанные два изотипа отличаются только по 9 аминокислотным остаткам из 103; однако только δΛΛ2 селективно депонируется в амилоидные фибриллы. См. публикации бе Веег М.С. Вюсйет I. 1991 280 (Ρΐ 1): 45-49 (1991); ΗοίϊΦαη Ιδ. е! а1. I Εχρ Меб. 159:641646 (1984); δΐάοο М. е! а1. δсаηб. I. Iттиηο1. 26:709-716 (1987). δΛΛ3 представляет собой минорный аполипопротеин ЛВИ, и периферически продуцируемый острофазовый белок. δΛΛ4 является конститутивным субсемейством, которое представляет собой минорный нормальный аполипопротеин ЛВИ, содержащий более 90% δΛΛ для поддержания гомеостаза. См. публикации δΐеа^таη КБ. е! а1. №с1ею Асΐάδ Кекеагсй, 14(2)797-809 (1986) и бе Веег М.С. Оепотюк, 34(1): 139-42 (1996).
Мышиный АА, который представляет собой протеолитический фрагмент δΛΛ, также является гетерогенным. Аминокислотные последовательности каждой из мышиных δΛΛ-изоформ показаны на фигурах 9-12. Выравнивание мышиных последовательностей АА1, АА2, АА3 и АА4 показано на фиг. 13.
Мышиный АА1 представляет собой мышиный эквивалент человеческого АА1. См. фиг. 16. В частности, остатки 69-75 из мышиных последовательностей АА1 (ΟΡΟΗΕΟΤ, δΕΟ ГО N0: 9) имеют максимальное выравнивание с остатками 70-76 человеческих АА1 (ΟΗΟАΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 4). См. также фиг. 17.
3. Сывороточный А-амилоид шарпея.
Аминокислотная последовательность шарпея показана на фиг. 20. Интересно, что гомологичный участок в человеческом белке δΛΛ-ΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 13) несет консервативную замену ΤΙιγ на δе^ в положении 76, а также в значительной степени отличающуюся боковую цепь остатка в положении 73 (замена Ηίκ на А1а; фиг. 1). Последовательность ΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 13) также обнаруживают у собак породы шарпей, при этом указанная порода особенно восприимчива к АА-амилоидозу и может являться естественной моделью системного АА-амилоидоза, с помощью которой можно оценивать новые диагностические и терапевтические применения амилоид-специфических АА-антител и других соединений.
4. Жконцевой сегмент А-белка определяет его фибриллогенные свойства.
Амилоидный фибриллярный белок АА состоит из вариабельной длинной части Жконцевого сывороточного АА-белка-предшественника. Иодтверждено, что амилоидогенная часть молекулы представляет собой Жконцевой сегмент длиной от 10 до 15 аминокислот. Аминокислотые замены в этой части молекулы могут объяснить, почему только одна из двух мышиных изоформ δΛΛ является амилоидогенной. См. ^ек!егтагк Ο.Τ. Вюсйет Вюрйук Кек Соттип. 182 (1):27-33 (1992).
V. Другие человеческие амилоидогенные белки.
Ниже в табл. 3 представлены инвентарные №№ в банке генов ОепЬапк и последовательности ΧιΕΌΧ2 для нескольких человеческих амилоидогенных белков, включающих некоторые из перечисленных выше белков из табл. 2.
- 34 028356
Таблица 3. Человеческие амилоидогенные белки
Человеческие амилоидогенные белки Консенсусная последовательность Инвентарные номера в банке генов ОепЬапк
5АА1 ΑΕϋ5, 13) (5Εφ Ιϋ N0:
5АА2 ΑΕϋ5, 13) (3Εφ Ιϋ N0:
5ААЗ ΑΕϋ5, 13) (3Εφ Ιϋ N0:
5АА4 ΑΕϋ5, 13) (3Εφ Ιϋ N0:
Область легкой цепи анти-Зт иммуноглобулина-каппа; цепь моноклонального антитела 4В4-каппа ΑΕϋν, 23) (3Εφ Ιϋ N0: ААВ26897
Вариабельный участок, задействованный в легкой цепи иммуноглобулина-каппа 1ТС52 (подгруппа V каппа III) ΡΕϋ5, 26) (3Εφ Ιϋ N0: ААС61608
Вариабельный участок, задействованный в легкой цепи иммуноглобулина-каппа 1ТС48 (подгруппа V каппа IV) ΑΕϋν, 23) (3Εφ Ιϋ N0: ААС61606
Предшественник легкой цепи анти-КНО моноклонального Т125-каппа 5ΕϋΕ, 24) (3Εφ Ιϋ N0: ААИ82027
Предшественник легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΑΕϋν, 23) (3Εφ Ιϋ N0: САА45496
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΓ, 22) (3Εφ Ιϋ N0: ААТ44350
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΕ, 22) (5Εζ) Ιϋ N0: ААТ44349
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΓ, 22) (3Εφ Ιϋ ΝΟ: ААТ44348
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΓ, 22) (3Εφ Ιϋ ΝΟ: САА09185
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа 3ΕΏΓ, 24) (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: САА09181
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа 3ΕΏΓ, 24) (3Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААШ4891
Легкая цепь антирабического иммуноглобулина-каппа ЗОДА ΡΕϋΓ, 22) (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: ААО17825
Вариабельный участок легкой цепи антистрептококкового/ антимиозинового иммуноглобулина-каппа 3ΕΏΓ, 24) (3Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААВ68786
Вариабельный участок легкой цепи антистрептококкового/ антимиозинового иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΕ, 22) (3Εφ Ιϋ N0: ААВ68785
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа против человеческого лейкоцитарного антигена НДА-А2/анти-НЬА-А2 8 ΡΕϋΕ, 22) (3Εφ Ιϋ N0: ААС99644
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа; против ДНК антитела 18/2 ΡΕϋΓ, 22) (3Εφ Ιϋ ΝΟ: ААВ62946
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΕ, 22) (3Εφ Ιϋ N0: ВАЕ75949
Легкая цепь иммуноглобулина 48ά каппа против вируса иммунодефицита человека Н1У-1др120 ΡΕϋΕ, 22) (3Εφ Ιϋ N0: ААВ88370
- 35 028356
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа РЕОЪ, 27) (5Ε<2 Ιϋ N0: ΒΑΑ97671
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа против ЕпЪатоеЪа Мз^оИНса ΡΕΌΓ, 22) (3Ε0 Ιϋ N0: ΒΑΑ82105
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа против ЕпЪатоеЪа Мз^оИНса ТЕРУ, 28) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΑ82102
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ААС41705
Вариабельный участок легкой цепи моноклонального 1д (иммуноглобулина)-каппа против СМ2 ганглиозидного ДНК ΑΕϋν, 23) (3Ε2 Ιϋ N0: ААС26480
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа; против вируса тяжёлого острого респираторного синдрома 3ΑΚ3-0ον ΡΕϋν, 151) (3Εζ) Ιϋ N0: ΑΑΤ51719
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа; против ЗАВЗ-СоУ ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΑΑΤ51718
УЬД участок (соединительный участок легкой цепи) иммуноглобулина-каппа ΡΕΌΓ, 22) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑϋ27502
УЬД участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа 3ΕΌΕ, 24) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΩ27497
Легкая цепь иммуноглобулина 47е каппа против Н1У-1др120 ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΑΑΒ88378
Легкая цепь иммуноглобулина 16с каппа против Н1У-1др120 ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΑΑΒ88374
Легкая цепь иммуноглобулина 411д каппа против Н1У- 1др120 5ΕΌΓ, 24) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΒ88372
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕΌΕ, 22) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΓ14212
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕΌΕ, 22) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΓ14211
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа РЕРГ, 22) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΕ14210
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа РЕРЕ, 22) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΓ14209
V (вариабельный)участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕΡΙ, 21) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΒ02415
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа РЕРГ, 22) (ЗЕО Ιϋ N0: ΑΑΜ46647
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа АЕРУ, 23) (ΞΕΟ Ιϋ N0: ΑΑΜ46643
Легкая цепь иммуноглобулина-каппа против ЕпЬатоеЪа Ыз^оИИса РЕРГ, 22) (3Ε0 Ιϋ N0: ΒΑΑ82103
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΑΕϋν, 23) (3Εφ Ιϋ ΝΟ: ΑΑΣ65723
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа РЕРГ, 22) (3Ε0 Ιϋ N0: ΑΑΣ65718
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа 5ΕΡΓ, 24) (3Εΰ Ιϋ N0: ΑΑΣ65717
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа 5ΕΡΓ, 24) (3Εΰ Ιϋ N0: ΑΑΣ65716
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа РЕРГ, 22) (ΞΕΩ ΙΡ N0: ААЬ65714
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа РЕРГ, 22) (3Ε0 Ιϋ N0: ΑΑΣ65713
- 36 028356
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕϋΕ, 22) (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ΑΑΣ65712
Вариабельный участок легкой ΡΕΌΕ, (ΞΕΟ ΙΌ N0: ААЪ65711
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΡΕΌΕ, (ΞΕΟ ΙΌ N0: ААЪ65710
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ЬЕОС, (ΞΕΟ ΙΌ N0: ААЪ65709
цепи иммуноглобулина-каппа 31)
ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ:
22)
Вариабельный участок легкой ЬЕОС, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65708
цепи иммуноглобулина-каппа 31)
ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ:
22)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65707
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65706
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65705
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65704
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААЬ65703
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой 5ΕϋΕ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ААС64146
цепи иммуноглобулина-каппа 24)
Вариабельный участок легкой 3ΕϋΕ, (5Ε<2 Ιϋ ΝΟ: ААС64144
цепи иммуноглобулина-каппа 24)
Вариабельный участок легкой ΡΕϋΕ, (5Ε0 Ιϋ N0: ΑΒΙ64139
цепи иммуноглобулина-каппа 22)
Вариабельный участок легкой ΑΕϋν, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ΑΑΣ04535
цепи иммуноглобулина-каппа 23)
Вариабельный участок легкой ΑΕϋν, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ΑΑΣ65722
цепи иммуноглобулина-каппа 23)
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΑΕϋν, 23) (5Ε<2 Ιϋ N0: ААЬ6572О
ν-Д (вариабельный соединительный) участок легкой цепи иммуноглобулина ΡΕΌΕ, 22) (3Ε0 Ιϋ N0: ΒΑΑ19563
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΑΕϋΕ, 19) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19562
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΑΕϋΕ, 19) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19561
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΡΕΌΕ, 22) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19560
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΡΕΌΕ, 22) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19559
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΑΕϋν, 23) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19558
ν-Д участок легкой цепи иммуноглобулина ΡΕΏΙ, 21) (3Εζ) Ιϋ N0: ΒΑΑ19556
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΑΑΑ71907
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина-каппа ΑΕϋν, 23) (3Ε2 Ιϋ N0: ΑΑΑ71905
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина С1 ЕаЬ ΑΕϋν, 23) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΕ49281
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина С1 ЕаЬ ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΕ48998
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина С1 ЕаЬ ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΕ48996
ν-участок легкой цепи каппа ΑΕΌΜ, 32) (3Ε2 Ιϋ N0: САА37675
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина С1 ЕаЬ 8ΕΌΕ, 24) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΕ48994
Вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина С1 ЕаЬ ΡΕΌΕ, 22) (3Ε2 Ιϋ N0: ΒΑΕ48992
ν-Д-С участок цепи предшественника 1д-каппа ΑΕϋν, 23) (3Ε2 Ιϋ N0: Α53261
- 37 028356
ν-участок цепи предшественника 1д-каппа ΑΕϋν, 23) (5Εφ ΙΡ ΝΟ: Α49137
ν-Ι участок цепи предшественника 1д-каппа 5ΕΡΙ, 29) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: ΡΝ0445
ν-ΙΙΙ участок цепи предшественника 1д-каппа (ЕУ1-15) РЕРЕ, 22) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: Α32274
ν-ΐν участок (Цер) цепи 1д- каппа ΑΕϋν, 23) (3Εφ ΙΡ ΝΟ: Α34153
ν-ΐν участок (Еие) цепи 1д- каппа ΑΕϋν, 23) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: Β34153
ν-ΙΙ участок (Рес) цепи 1д- каппа ΑΕϋν, 23) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: С34153
Цепь Ь (легкая) ГаЬ- фрагмента 1д-д (связывание СЦ25) ΑΕΡΑ, 62) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: 1ΜΙΜ Ъ
Цепь Н (тяжелая) ГаЬ- фрагмента 1д-д (связывание Сс125) ΗΕΡ3, 33) (ЗЕф ΙΡ ΝΟ: 1ΜΙΜ_Η
С - область цепи 1д-мю, секретируемая сплайс-форма СЕРР, 34) (3Ε0 ΙΡ ΝΟ: МННЦ
ν-Ц участок цепи иммуноглобулина-каппа ΑΕΡν, 23) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: ΑΑΑ58923
Вариабельный участок легкой цепи рекомбинантного моноклонального антитела 1дМ 12 каппа ΡΕΡΕ, 22) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: ΑΒΑ41551
Легкая цепь иммуноглобулина ΑΕΡΕ, 19) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: САА65054
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ΑΕΡΕ, 19) (3Ε0 ΙΡ ΝΟ: ААЦ65769
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ΑΕΡΕ, 19) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: ААЪ657 67
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ΑΕΡΕ, 19) <5Εφ ΙΡ ΝΟ: ААЪ657 65
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ТЕРЕ, 16) (ЗЕф Ю ΝΦ: ААЬ65764
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ю N0: ААЬ 657 63
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ЗЕРЕ, 18) (ЗЕф ю N0: ААЬ65762
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ЗЕРЕ, 18) (ЗЕф ю N0: ААЬ65761
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина ЗЕРЕ, 18) (ЗЕф ю N0: ААЬ65760
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ю N0: ААЬ65759
Вариабельный участок легкой цепи лямбда иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ю N0: ААЬ65758
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина РЕРЕ, 22) (ЗЕф ю N0: ВАА19563
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ю N0: ВАА19562
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ю N0: ВАА19561
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина РЕРЕ, 22) (ЗЕф ю N0: ВАА19560
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина РЕРЕ, 22) (ЗЕф ю N0: ВАА19559
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина ΑΕΡν, 23) (ЗЕф ю N0: ВАА19558
ν-Ц участок легкой цепи иммуноглобулина ΡΕΡΙ, 21) (ЗЕф ю N0: ВАА19556
Вариабельный участок легкой цепи 30-лямбда иммуноглобулина АЕРЕ, 19) (ЗЕф ιρ N0: ААК95335
- 38 028356
Прогноз: сходный с ФЕЬЗ, (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: ΧΡ_ _001129584
низкоаффинным 35)
иммуноглобулином-гамма, Рс-
участок рецептора 11-а
предшественника (Гс-гамма
ЕП-а) (ГсЕИ-а) (1дС Рс-
рецептор ΙΙ-а) (Рс-гамма-
КПа) (антиген СО32)
(СРм32)
Гс-фрагмент 1дС, ΕΕϋ5, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ _0 0 0 557
высокоаффинный 1а, рецептор 36)
(СО64) ΤΕϋΟ, (3Εφ Ιϋ N0:
37)
φΕϋΕ, (3Εφ Ιϋ N0:
38
Гс-фрагмент 1дС, φΕϋ5, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ 001002273
низкоаффинный ПЬ, рецептор 35) ΧΡ_ _943944
для (СО32), изоформа 2
Рс-фрагмент 1дС, ФЕЬЗ, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ_ _003992
низкоаффинный НЬ, рецептор 35)
для (СБ32), изоформа 1
Рс-фрагмент 1дС, φΕϋ5, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ 001002275
низкоаффинный НЬ, рецептор 35)
для (СЬ32), изоформа 4
Рс-фрагмент 1дС, ФЕЬЗ, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ_ _0 010 02274
низкоаффинный НЬ, рецептор 35) ΧΡ 001129592
для (СБ32), изоформа 3
Рс-фрагмент 1дС, φΕϋΕ, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ _001017986
высокоаффинный 1Ь, рецептор 38)
для (6ϋβ4), изоформа а
Рс-фрагмент 1дС, ΦΕΏΚ, (5Εζ) Ιϋ N0: ΝΡ_ _001004340
высокоаффинный 1Ь, рецептор 38) ΧΡ _496386
для (СБ64), изоформа Ь
Рс-фрагмент 1дС, 0ΕΏ3, (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: ΝΡ 067674
низкоаффинный На, рецептор 35) ΧΡ 943942
для (Οϋ32)
Низкоаффинный ТЕОЪ, (ЗЕО Ιϋ N0: ΝΡ 000561
иммуноглобулин-гамма, Гс- 39)
участок рецептора ш-ь ΡΕΏΝ, (3Ε0 Ιϋ N0:
предшественника 40)
ΕΕϋΡ, (3Ε0 Ιϋ N0:
41)
Рс-фрагмент 1дс, ТЕОЪ, (3Ε0 Ιϋ N0: ΝΡ_000560
низкоаффинный Ш-а, 39) ΧΡ_001133750
рецептор для (СО16) ΡΕΏΝ, (3Ε0 Ιϋ N0:
40)
ΕΕϋΡ, (3Ε0 Ιϋ N0:
41)
Низкоаффинный φΕϋ5, (3Ε0 Ιϋ N0: Ρ12318
иммуноглобулин-гамма, Гс- 35)
участок рецептора 11-а
предшественника (Гс -гамма
КП-а) (РсЕН-а) (1дС Рс-
рецептор ΙΙ-а) (Гс- гамма-
КПа) (антиген 0Ώ32)
(Οϋ«32)
Низкоаффинный ТЕОЪ, (3Ε0 Ιϋ N0: 075015
иммуноглобулин-гамма, Гс- 39)
участок рецептора ΙΙΙ-Β ΡΕΏΝ, (3Ε0 Ιϋ N0:
предшественника (1дС Гс- 40)
рецептор III—1) (Рс- гамма- ΕΕϋΡ, (3Ε0 Ιϋ N0:
ΚΙII-бета) (Рс-гамма КШЬ) 41)
(РсКШЬ) (Рс-гамма -ΕΙΙΙ)
(Гс-КШ) (РсК-10) (антиген
СО16Ь)
- 39 028356
Низкоаффинный ΤΕΩΣ, (3ΕΩ Ιϋ ΝΟ: Ρ08637
иммуноглобулин-гамма, Ес- 39)
участок рецептора ΙΙΙ-Α ΡΕΏΝ, (3Εφ Ιϋ ΝΟ:
предшественника (1дС Кс- 40)
рецептор III—2) (Кс-гамма- ΕΕϋΡ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ:
ΒΙΙΙ-альфа) (Кс-гамма 41)
КШа) (ГсКШа) (Кс-гамма-
ΚΙΙΙ) (Рс-ΚΠΙ) (КсК-10)
(антиген СО16а)
Высокоаффинный ΚΕϋ8, (3Εφ Ιϋ N0: Ρ12314
иммуноглобулин-гамма, Кс- 36)
участок рецептора I ΤΕϋΟ, (3Εφ Ιϋ N0:
предшественника (Кс-гамма- 37)
ΚΙ) (Кс-К1) (1дС Кс- ΟΕϋΚ, (3Εφ Ιϋ N0:
рецептор I) (антиген Οϋβ4) 38)
Постоянная тяжелая цепь ΑΕϋΤ, (3Εφ Ιϋ N0: 06РДА4
иммуноглобулина 1СНС1 14)
гамма1 (С1ш маркер)
ароА1 (Ното зар^епз) ΣΕϋΣ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: САА01253
42)
Предшественник ΑΕϋΑ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ: ΝΡ 000031
аполипопротеина С-Ш (Ното 62)
зар^епз)
Предшественник ΑΕϋν, (3Εφ Ιϋ N0: ΝΡ 000473
аполипопротеина Α-ΐν (Ното 23)
зараепз)
Гельсолин (амилоидоз, ΤΕϋΤ, (3Ε0 Ιϋ N0: САМ20459
финский тип) (Ното зараепз) 30)
ΚΕϋΑ, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ:
43)
5Εϋ<3, (5Εζ) Ιϋ ΝΟ:
44)
ΟΕϋΣ, (3Ε0 Ιϋ N0:
63)
Гельсолин (амилоидоз, ΤΕϋΤ, (ЗЕф Ю ΝΟ: СА114413
финский тип) (Ното зар1епз) 30)
ΚΕϋΑ, (ЗЕО Ιϋ N0:
43)
3ΕϋΟ, (ЗЕО Ю ΝΟ:
44)
ОЕОЬ, (ЗЕО Ю ΝΟ:
63)
Гельсолин (амилоидоз, ΤΕϋΤ, (ЗЕО Ю ΝΟ: ΕΑΝ87491
финский тип), изоформа 30)
СНА с (Ното зар1епз) ΚΕϋΑ, (ЗЕО Ю ΝΟ:
43)
ЗЕВС, (ЗЕО ΙΒ N0:
44)
ОЕОЬ, (ЗЕО ю ΝΟ:
63)
Гельсолин (амилоидоз, ΤΕϋΤ, (ЗЕО ю ΝΟ: ΕΑΝ87490
Финский тип 1 . изоформа. 30)
СНА Ь (Ното зар1епз) ΚΕϋΑ, (ЗЕО ю ΝΟ:
43)
3ΕϋΟ, (ЗЕО ю ΝΟ:
44)
ОЕОЬ, (ЗЕО ю ΝΟ:
63)
Гельсолин (амилоидоз, ΤΕϋΤ, (ЗЕО ю ΝΟ: ΕΑΝ87489
финский тип), изоформа 30)
СНА а (Ното зар1епз) ΚΕϋΑ, (ЗЕО ю ΝΟ:
43)
5Εϋ(3, (ЗЕО Ιϋ N0:
44)
ОЕОЬ, (ЗЕО ю ΝΟ:
63)
Амилоидный белок- ΑΕϋν, (ЗЕО ю ΝΟ: ААВ23646
предшественник; АРР (Ното 23)
заргепз)
-40028356
Амилоидный белок- предшественник; АРР (Ното зар1епз) АЕБУ, (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 23) ΑΑΒ19991
Амилоидный белок ΑΕΌν, (ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 23) ΑΑΑ51768
Белок-предшественник амилоид-бета А4 (АРР) (АВРР) (амилоидный белок болезни Альцгеймера) (церебральный васкулярный амилоидный пептид) (СУАР) (протеаза ηβχϊη-ΙΙ) (ΡΝ-ΙΙ) (ΑΡΡΙ) (РгеА4) [содержит: растворимый АРР-альфа (5- АРР-альфа); растворимый АРР-бета (3-АРР-бета); 099; бета-амилоидный белок 42 (0ета-АРР42); бета- амилоидный белок 40 (бета- АРР40); 083; Р3(42); РЗ(40); гамма-СТЕ(59) (С- концевой фрагмент 59 гамма- секретазы) (амилоидный внутриклеточный домен 59) (АЮ(59)) (ΑΙΟϋ-59) ; гамма- СТГ(57) (С-концевой фрагмент 57 гамма- секретазы) (амилоидный внутриклеточный домен 57) (АЮ(57)) (ΑΙΟΌ-57); гамма- СТГ(50) (С-концевой фрагмент 50 гамма- секретазы) (амилоидный внутриклеточный домен 50) (АЮ(50)) (ΑΙΟΌ-50); С31] ΕΕΌΌ, (ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 45) 3ΕΌΚ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 46) ΌΕΌΌ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 47) ΌΕΌΟ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 48) ΑΕΌν, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 23) Ρ05067
Белок АРР (Ното зартепз) ΕΕϋϋ, (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 45) 5ΕΌΚ, (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 46) ϋΕϋϋ, (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 47) ΌΕΌΟ, (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 48) ΑΑΗ6552 3
Белок АРР (Ното зартепз) ΕΕϋϋ, (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 45) 3ΕΌΚ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 46) ΌΕΌΌ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 47) ΌΕΌΟ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 48) ΑΑΗ04369
Белок-предшественник амилоид-бета А4 (протеаза ηβχίη-ΙΙ, болезнь Альцгеймера) (Ното зарлепз) ΕΕΌΌ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 45) 3ΕΌΚ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 46) ΌΕΌΌ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 47) ΌΕΌΟ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 48) ΑΕΌν, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 23) ΑΑΜ82435
Кальцитонин 3ΕΌΕ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 18) ΑΑΑ58403
Предшественник кальцитонина 3ΕΌΕ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 18) ΑΑΑ35501
Препрокальцитонин (Ното зар1епз) 3ΕΌΕ, (3Ε0 ΙΌ ΝΟ: 18) САА25103
Препрокальцитонин 3ΕΟΕ, (5Ε0 ΙΟ ΝΟ: 18) ΑΑΑ51913
- 41 028356
Предшественник кальцитонина ЗЕБЕ, (ЗЕО 1Б N0: РО12 58
[содержит: кальцитонин; 18)
катакальцин
(кальцитониновый карбокси-
концевой пептид) (ССР)
(РБЫ-21)]
Изоформа кальцитонина ЗЕБЕ, (ЗЕО 1Б N0: ΝΡ 001029124
препропротеин САБСА (Ното 18)
заргепз)
Изоформа кальцитонина ЗЕВЕ, (5Е0 ΙΒ N0: ΝΡ_001732
препропротеин САБСА (Ното 18)
заргепз)
Изоформа кальцитонина ЗЕВЕ, (ЗЕО ТБ N0: ΝΡ 001029125
препропротеин СЗКР (Ното 18)
заргепз)
Предшественник ЗЕБЕ, (ЗЕО ΙΒ N0: Р06881
кальцитонинового генно- 18)
родственного пептида 1
(кальцитониновый генно-
родственный пептид 1)
(СЗКР-1) (СЗИР альфа-типа)
Атриальный БЕ БЕ, (ЗЕО ΙΒ N0: ААА35528
натрийуретический фактор 49)
Пропептид атриального БЕВЕ, (ЗЕО ΙΒ N0: САА25700
натрийуретического фактора 49)
(Ното заргепз)
Атриальный БЕВЕ, (ЗЕО ТБ N0: 1101403А
натрийуретический фактор 49)
Предшественник атриального натрийуретического фактора (ΑΝΓ) (атриальный натрийуретический пептид) (ΑΝΡ) (препронатрийдилатин) (СББ-ΑΝΕ) [содержит: кардиодилатин-родственный пептид (СБР)] БЕБЕ, (ЗЕО 1Б N0: 49) Р01160
Атриальный натрийуретический пептид БЕБЕ, (ЗЕО 1Б N0: 49) ААА35529
Кератин (Ното заргепз) ЗЕВА, (ЗЕО ΙΒ N0: 50) ААВ30058
Кератин (Ното заргепз) ΫΕΒΕ, (ЗЕО ΙΒ N0: 51) ΥΕΒΕ, (ЗЕО ТБ N0: 52) СААЗ 1695
Кератин 1ЕВБ, (ЗЕО 1Б N0: 53) ЗЕВА, (ЗЕО ТБ N0: 50) ААВ59562
Кератин, цитоскелетный бС 11 типа (цитокератин-бС) (СК бС) (Кбс кератин) (цитокератин-6Е) (СК 6Е) (кератин Кбй) УЕБЕ, (ЗЕО ТБ N0: 64) УЕБЕ, (ЗЕО ТБ N0: 52) БЕБ А, (5Е0 ТБ N0: 65) Р48668
Фибриноген (Ното заргепз) ΜΕΒΥ, (ЗЕО ТБ N0: 54) САА50740
- 42 028356
Предшественник фибриногена, ΌΕΏΜ, (ЗЕО Ю N0: ААС97142
альфа-субъединица (Ното 55)
зар^епз) 3ΕΏΣ, (ЗЕО ю N0:
56)
ΥΕΏ0, (ЗЕО ю N0:
57)
3ΕΏΟ, (ЗЕО ю N0:
бб)
ΣΕΏΜ, (ЗЕО ю N0:
58)
Фибриноген альфа-цепь (Ното ΌΕΏΜ, (ЗЕО ю N0: ΑΑΙ01936
зарзепз) 55)
3ΕΏΣ, (ЗЕО ю N0:
56)
ΥΕΏ0, (ЗЕО ю N0:
57)
3ΕΏΟ, (ЗЕО ю N0:
66)
Фибриноген альфа-цепь (Ното ΌΕΏΜ, (ЗЕО ю N0: ААН98280
зарзепз) 55)
3ΕΏΣ, (ЗЕО ю N0:
56)
ΥΕΏ0, (ЗЕО ю N0:
57)
3ΕΏΟ, (ЗЕО ю N0:
бб)
Фибриноген альфа-цепь, ΌΕΏΜ, (ЗЕО Ю N0: ЕАХ04926
изоформа СКА. Ь (Ното 55)
зар^епз) 3ΕΏΣ, (ЗЕО ю N0:
56)
ΥΕΏΟ, (ЗЕО ю N0:
57)
3ΕΏ0, (ЗЕО ю N0:
бб)
ΣΕΏΜ, (ЗЕО ю N0:
58)
Фибриноген альфа-цепь, ΌΕΏΜ, (ЗЕО ю N0: ЕАХ04928
изоформа СКА с (Ното 55)
зар!епз) ЗЕОЬ, (ЗЕО ю N0:
56)
ΥΕΏΟ, (ЗЕО ю N0:
57)
3ΕΏ0, (ЗЕО ю N0:
66)
Фибриноген альфа-цепь, 0ЕЖ (ЗЕО ю N0; ЕАХ04924
изоформа СКА а (Ното 55)
зар^епз) 3ΕΏΣ, (ЗЕО ю N0:
56)
Предшественник прионного ΥΕΏΚ, (ЗЕО ю N0: ААС62750
белка; ΡΚΝΡ [Ното зарзепз] 59)
Основной предшественник ΥΕΏΚ, (ЗЕО Ιϋ N0: Р04156
прионного белка (РгР) 59)
(РГР27-30) (РГРЗЗ-35С
(А5СК) (антиген СБ230)
Предшественник прионного ΥΕΏΚ, (ЗЕО ю N0: ΝΡ.000302
белка [Ното зарзепз] 59)
Пролактин [Ното зартелз] ΡΕΏΚ, (ЗЕО Ιϋ N0: САА 38264
60)
Пролактин [Ното зартелз] ΡΕΏΚ, (ЗЕО ю N0: ААН88370
60)
- 43 028356
Уй. Амилоидные пептиды для активной иммунизации.
Терапевтические средства, применяемые в способах по настоящему изобретению, представляют собой иммуногенные пептиды, такие как пептиды АА-типа и пептиды АЬ-типа, которые при введении пациенту создают антитела, специфически связывающиеся с одним или несколькими эпитопами, содержащими Х1ЕЬХ2, например, с такими, как эпитопы между остатками 70-76 АА (АА-средства). Дополнительные примеры средств включают иммуногенные пептиды, которые содержат фрагмент, состоящий из Х1ЕЬХ2, полученного из других амилоидных белков (фрагменты ХЦЬХ/), такие как АЬ-фрагменты Ук, состоящие из аминокислотных последовательностей РЕШ (8Еф ΙΌ ΝΟ: 21), РЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 22), АЕПУ (8Еф ГО ΝΟ: 23), 8ЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 24) или 8ЕЬА (8Еф ГО ΝΟ: 25), и АЬ-фрагменты УХ, состоящие из аминокислотных последовательностей 8ЕЭЕ (8Еф ГО ΝΟ: 18), АЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 19), ТЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 16) или РЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 20). Также может использоваться АЬ-фрагмент УХ, состоящий из аминокислотной последовательности ЕЕЬЬ (8Еф ГО ΝΟ: 17). Некоторые подходящие амилоидные белки включают сывороточный А-амилоидный белок, белок легкой цепи иммуноглобулина, человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник ДАРР), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ТТР), АроА1 и другие амилоидные белки, перечисленные в табл. 1, которые содержат аминокислотную последовательность Х1ЕЭХ2. В некоторых средствах Х1 представляет собой Н, Т, Е, 8, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, непосредственно предшествующий ЕЬ в амилоидном белке; и Х2 представляет собой Т, 8, Е, Р, Ι, У, Е, Ό, А или любой другой аминокислотный остаток, расположенный непосредственно после ЕЬ в таком амилоидном белке. В некоторых средствах Х1 представляет собой Н, Т, Е, 8, Р или А и Х2 является Т, 8, Е, Ό, Р, Ι, У, Е или А. Если Х1 в некоторых указанных средствах представляет собой Н, то Х2 является Т или А; если Х1 представляет собой А, то Х2 является 8, Т, Е или У; если Х1 представляет собой Т, то Х2 является Е; если Х1 представляет собой Е, то Х2 является Ό; если Х1 представляет собой 8, то Х2 является Е, Е или А; и если Х1 представляет собой Р, то Х2 является Е, Ι или Е. В некоторых средств Х1 представляет собой Н, Т, Е, 8, Р или А и Х2 является Т, 8, Е, Ό, Р, Ι, У, Е или А, при условии, что если Х1 представляет собой А, то Х2 не является У. Если Х1 в некоторых средствах представляет собой А, то Х2 является 8, Т или Е.
Некоторые средства содержат аминокислотную последовательность СНЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 3), НЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 12), АЕЬ8 (8Еф ГО ΝΟ: 13), АЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8Еф ГО ΝΟ: 15), ТЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 16), РЕЬЬ (8Еф ГО ΝΟ: 17), 8ЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 18), АЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 19), РЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 20), РЕШ (8Еф ГО ΝΟ: 21), РЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 22), АЕПУ (8Еф ГО ΝΟ: 23), 8ЕЬР (8Еф ГО ΝΟ: 24) или 8ЕИА (8Еф ГО ΝΟ: 25). Некоторые средства состоят из аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из СНЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 3, НЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 12), АЕЬ8, (8Еф ГО ΝΟ: 13), АЕПТ (8Еф ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8Еф ГО ΝΟ: 15), ТЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 16), ЕЕПП (8Еф ГО ΝΟ: 17), 8ЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 18), АЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 19), РЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 20), РЕШ (8Еф ГО ΝΟ: 21), РЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 22), АЕПУ (8Еф ГО ΝΟ: 23), 8ЕПЕ (8Еф ГО ΝΟ: 24) или 8ЕПА (8Еф ГО ΝΟ: 25), которые связаны с носителем для образования конъюгата. Некоторые средства содержат аминокислотные последовательности СНЕЬТ (8 ЕС) ГО ΝΟ: 3, НЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 12), АЕП8 (8 ЕС) ГО ΝΟ: 13), АЕЬТ (8ЕС) ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8ЕС) ГО ΝΟ: 15), ТЕЬЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 16), ЕЕПП (8ЕС) ГО ΝΟ: 17), 8ЕПЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 18), АЕПЕ (8Е() ГО ΝΟ: 19), РЕПЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 20), РЕШ (8ЕС) ГО ΝΟ: 21), РЕПЕ (8Е() ГО ΝΟ: 22), АЕПУ (8ЕС) ГО ΝΟ: 23), 8ЕЬЕ (8Еф ГО ΝΟ: 24) или 8ЕИА (8Еф ГО ΝΟ: 25). Некоторые средства состоят из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из СНЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 3), НЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 12), АЕП8 (8Е() ГО ΝΟ: 13), АЕЬТ (8ЕС) ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8ЕС) ГО ΝΟ: 15), ТЕЬЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 16), ЕЕПП (8 ЕС) ГО ΝΟ: 17), 8ЕПЕ (8 ЕС) ГО ΝΟ: 18), АЕПЕ (8 ЕС) ГО ΝΟ: 19), РЕПЕ (8 ЕС) ГО ΝΟ: 20), РЕШ (8 ЕС) ГО ΝΟ: 21), РЕПЕ (8Е() ГО ΝΟ: 22), АЕПУ (8Е() ГО ΝΟ: 23), 8ЕПЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 24) или 8ЕИА (8Еф ГО ΝΟ: 25), которые связаны с носителем для образования коньюгата. Некоторые средства содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из СНЕЬТ (8Еф ГО ΝΟ: 3, НЕЬТ (8ЕС) ГО ΝΟ: 12), АЕП8 (8Е() ГО ΝΟ: 13), АЕЬТ (8Е() ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8ЕС) ГО ΝΟ: 15) и ТЕЬЕ (8ЕС) ГО ΝΟ: 16).
Предпочтительными АА-фрагментами являются остатки 70-76 альфа-изоформы человеческой АА1 (НАА1) (СНСАЕЬ8, 8Еф ГО ΝΟ:4), остатки 70-76 бета-изоформы НАА1 (СНЬАЕП8, 8Еф ГО ΝΟ:5), остатки 70-76 гамма-изоформы НАА1 (СНПАЕЬ8, 8Еф ГО ΝΟ: 5), остатки 70-76 альфа- и бета-изоформ НАА2 (СНСАЕЬ8, 8Еф ГО ΝΟ: 4), остатки 70-76 НАА3 (СПНАЕЬ8, 8Еф ГО ΝΟ:7), остатки 78-84 НАА4 (8ТУШЬ8, 8ЕС) ГО ΝΟ:8), остатки 69-75 мышиной АА1 (МАА1) (СРСНЕЬТ, 8Еф ГО ΝΟ:9), остатки 6975 МАА2 (СРСНЕЬТ, 8Еф ГО ΝΟ: 9), остатки 62-68 МАА3 (СНСАЕЬ8, 8Еф ГО ΝΟ: 10) и остатки 76-82 МАА4 (ИНСЬЕТЬ, 8Еф ГО ΝΟ: 11) или субфрагменты по меньшей мере из трех смежных аминокислот любого из указанных остатков. Некоторые АА-фрагменты не содержат остатков АА- амилоидного пептида, кроме обозначенного выше сегмента. Другие АА-фрагменты содержат дополнительные фланкирующие остатки АА-амилоидного пептида, но содержат всего не более 20, или предпочтительно не более 10 смежных остатков из АА-амилоидного пептида. Дополнительные предпочтительные фрагменты Х ГБ.У и АЬ-типа включают СНЕЬТ (8ЕС) ГО ΝΟ: 3), НЕЬТ (8Е() ГО ΝΟ: 12), АЕП8 (8ЕС) ГО ΝΟ: 13), АЕЬТ (8Е() ГО ΝΟ: 14), НЕЬА (8Е() ГО ΝΟ: 15) и ТЕЬЕ (8Е() ГО ΝΟ: 16).
Терапевтические средства для применения в способах по настоящему изобретению также включают
- 44 028356 иммуногенные АА-пептиды, которые при введении пациенту создают антитела, специфически связывающиеся с Ν-концевыми эпитопами АА. Предпочтительные средства индуцируют иммуногенный ответ, направленный на эпитоп в пределах 1-15 остатков человеческих АА-пептидов.
Предпочтительно вводимые фрагменты АА или АЬ, или другие средства, такие как фрагменты ΧιΕΌΧ2, содержат недостаточно эпитопов, которые будут вызывать Т-клеточный ответ на фрагмент. В общем, Т-клеточные эпитопы имеют более 10 смежных аминокислот. Поэтому предпочтительные фрагменты амилоидных белков, такие как АА или фрагменты ΧιΕΌΧ2, имеют размер от 4 до 10, или предпочтительно, от 7 до 10 смежных аминокислот; то есть, обладают достаточной длиной для индукции ответа антитела, без генерации ответа Т-клеток. Отсутствие Т-клеточных эпитопов является предпочтительным, поскольку указанные эпитопы не являются необходимыми для иммуногенного действия фрагментов, и они могут вызывать нежелательную воспалительную реакцию у подгрупп пациентов (Апйегзоп е! а1., (2002) 1. Iттиηο1. 168, 3697-3701; Зепюг (2002) Ьапсе! №иго1. 1, 3).
Предпочтительными АА-фрагментами являются остатки 70-76 альфа изоформы человеческого АА1 (НАА1) (СНСАЕЭ8) (81Т) II) ΝΟ: 4), остатки 70-76 бета изоформы НАА1 (С1ГОА1ГОЗ) (81Т) ГО N0:5), остатки 70-76 гамма изоформы НАА1 (СНОАЕПЗ, ЗЕЦ ГО N0: 5), остатки 70-76 альфа- и бета-изоформ НАА2 (СНСАЕП8, 31Т) ГО N0: 4), остатки 70-76 НАА3 (С1)11А1ГОЗ) (81Т) ГО N0:7), остатки 78-84 НАА4 (δΤνΣΕΌδ) (31Т) ГО N0:8), остатки 69-75 мышиного АА1 (МАА1) (СКС1 ПГОТ) (8ΙΤ) ГО N0:9), остатки 69-75 МАА2 (СКС ПГОТ, 8ΙΤ) ГО N0: 9), остатки 62-68 МАА3 (С11СА1ГОЗ) (8ΙΤ) ГО N0: 10) и остатки 76-82 МАА4 (ГОНСйЕТЕ) (8ЕЦ ГО N0: 11) или субфрагменты по меньшей мере из трех смежных аминокислот любого из указанных остатков. Некоторые фрагменты АА не содержат остатков амилоидного АА-пептида, кроме обозначенного выше сегмента. Другие АА-фрагменты АА содержат дополнительные фланкирующие остатки амилоидного АА-пептида, но содержат всего не более 20, или предпочтительно, не более 10 смежных остатков амилоидного АА-пептида. Дополнительные предпочтительные фрагменты Х^ПХ2 и АЬ включают С1 ПГОТ (81Т) ГО N0: 3), I ПГОТ (81Т) ГО N0: 12), АЕГОН (81Т) ГО N0: 13), АЕЭТ (8ΙΤ) ГО N0: 14), НЕЭА (8ΙΤ) ГО N0: 15) и ТЕПЕ (8ΙΤ) ГО N0: 16).
Для индукции иммунного ответа в способах и композициях по настоящему изобретению можно также использовать аналоги АА-амилоидного, АЬ-амилоидного и других амилоидных пептидов природного происхождения. Аналоги включают аллельные, видовые варианты и варианты индуцирования. Аналоги АА-пептида индуцируют антитела, которые специфически связываются с АА-пептидом остатков 70-76 природного происхождения. Некоторые такие аналоги не способны индуцировать антитела, которые специфически связываются с эпитопами вне остатков 70-76 в АА-пептиде. Обычно отличия аналогов АА от пептидов природного происхождения составляют до 30% положений аминокислот, и указанные отличия заключаются в заменах до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или до 10 положений. Каждая делеция или замена аминокислотного остатка природного происхождения считается заменой положения в виде вставки остатка без замены. Замены аминокислот часто представляют собой консервативные замены.
Некоторые аналоги АА или АА-фрагментов АЬ или АЬ-фрагментов или других амилоидных фрагментов белка, таких как фрагменты Χ^ΌΧ^ также включают аминокислоты искусственного происхождения или модификации ^концевых или С-концевых аминокислот в первом, втором, пятом, десятом или даже во всех положениях. Например, остаток аспарагиновой кислоты прородного происхождения можно заменить на изоаспарагиновую кислоту. Примерами аминокислот искусственного происхождения являются Ό, альфа, альфа-дизамещенные аминокислоты, ^алкильные аминокислоты, молочная кислота, 4гидроксипролин, гамма-карбоксиглутамат, эпсилон-Ц^^триметиллизин, эпсилон-^ацетиллизин, Офосфосерин, ^ацетилсерин, ^формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, омегаГО-метиларгинин, β-аланин, орнитин, норлейцин, норвалин, гидроксипролин, тироксин, гамма-аминомасляная кислота, гомосерин, цитруллин и изоаспарагиновая кислота. Некоторые терапевтические средства по изобретению представляют собой полностью-Ό пептиды, например, полностью-Л АА или полностью-Л фрагменты АА, и полностью-Ό пептидные аналоги. Некоторые терапевтические средства по изобретению на 90% являются полностью-Ό пептидами, например, на 90% полностью-Л АА или на 90% полностью-Ό фрагментами АА, и на 90% полностью-Л пептидными аналогами. Некоторые терапевтические средства по изобретению на 80% являются полностью-Ό пептидами, например, на 80% полностью-Л АА или на 80% полностью-Ό фрагментами АА, и на 80% полностью-Л пептидными аналогами. Можно проводить скрининг фрагментов и аналогов на профилактическую или терапевтическую эффективность с помощью трансгенных моделей животных по сравнению с контролем без лечения или плацебо, как описано ниже.
Пептиды АА, АЬ, их фрагменты и аналоги, и фрагменты ΧιΕΌΧ2 и их аналоги можно синтезировать путем твердофазного синтеза пептидов или путем рекомбинантной экспрессии, или их можно получать из источников природного происхождения. Автоматические пептидные синтезаторы являются коммерчески доступными у многочисленных поставщиков, таких как компания Аррйей Вюзуз!етз, Роз!ег С11у, Калифорния. Рекомбинантную экспрессию можно осуществлять в бактериях, например, Е. сой, в дрожжах, в клетках насекомых или клетках млекопитающих. Методики рекомбинантной экспрессии описаны авторами Затйгоок е! а1. , Мо1еси1аг С1отпд: А Ьайога!огу Мапиа1 (С.8.Н.Р. Ргезз, NΥ 2й ей., 1989).
Терапевтические средства также включают более длинные полипептиды, которые включают, на- 45 028356 пример, иммуногенный фрагмент АА-пептида, АЬ-пептида или фрагмент Х1ЕОХ2, вместе с одной или больше другими аминокислотами, фланкирующими АА-пептид, АЬ-пептид или фрагмент Х|ЕЭХ2 на одной стороне или на одной или обеих сторонах. Например, предпочтительные средства включают слитые белки, содержащие сегмент АА, АЬ или фрагмент Х1ЕЬХ2, слитый с гетерологичной аминокислотной последовательностью, которые индуцируют Т-клеточный ответ против гетерологичной аминокислотной последовательности, и таким образом В-клеточный ответ против сегмента АА, сегмента АЬ или фрагмента Х1ЕЬХ2. Также можно использовать одну или больше фланкирующих гетерологичных аминокислот, чтобы накрыть пептиды АА или АЬ, или фрагмент Х1ЕЬХ2 для защиты от их разрушения при изготовлении, хранении или применении. С помощью животных моделей можно проводить скрининг указанных полипептидов на их профилактическую или терапевтическую эффективность по сравнению с контролем без лечения или плацебо, как описано ниже. Терапевтические средства по изобретению включают иммуногенный фрагмент АА или АЬ, или фрагмент Х1ЕЬХ2 между последовательностями полилизина. Последовательности полилизина можно сливать с ^концом, С-концом, или и с ^концом и Сконцом АА или АЬ, или с иммуногенным фрагментом АА или АЬ, или с фрагментом ХЩЭХг. Пептиды АА или АЬ, фрагмент Х^ЬХ^ аналог, активный фрагмент АА или другого полипептида можно вводить в связанной или мультимерной форме, или в диссоциированной форме.
Терапевтические средства также включают мультимеры мономерных иммуногенных средств.
В дополнительных вариантах иммуногенный фрагмент АА, или АЬ, или фрагмент Х1ЕЬХ2 могут быть представлены вирусом или бактерией в виде части иммуногенной композиции. Нуклеиновая кислота, кодирующая иммуногенный пептид, вставлена в геном или эписому вируса или бактерий. Необязательно, нуклеиновая кислота вставлена таким образом, что иммуногенный пептид экспрессируется в виде секретируемого белка или в виде белка, слитого с белком внешней оболочки вируса или с трансмембранным белком бактерии, для фенотипирования пептида. Вирусы или бактерии, используемые в таких способах, должны быть непатогенными или аттенуироваными. Подходящие вирусы включают аденовирус, вирус простого герпеса Ηδν, вирус венесуэльского лошадиного энцефалита и другие альфа-вирусы, вирус везикулярного стоматита и другие рабдовирусы, возбудители вакцинии и оспы птиц. Подходящие бактерии включают За1топе11а и ЗЫде11а. Особенно подходит слияние иммуногенного пептида с поверхностным антигеном вируса гепатита В НВ§А§ ΗΒν.
Терапевтические средства также включают пептиды и другие соединения, которые не обязательно имеют аминокислотные последовательности, в значительной степени подобные АА, или АЬ, или фрагменту Х^ЬХ^ но тем не менее являются миметиками АА или АЬ или фрагмента Х1ЕЬХ2 и индуцируют сходный иммунный ответ. Например, можно проводить скрининг на применимость любых пептидов и белков, образующих β-складчатые листы. Также можно использовать анти-идиотипические антитела против моноклональных антител к АА, или АЬ, или к другим амилоидогенным пептидам, например, фрагментам Х1ЕЬХ2. Такие анти-1й (антиидиотипические) антитела подражают антигену и создают иммунный ответ на него (см. Е88еп11а1 1ттипо1о§у (Кок ей., В1аск\уе11 ЗаепБПс РиЬНсаБопк, Ра1о АНо, 6(1 ей) р. 181). Другие средства, кроме АА-пептидов, должны индуцировать иммуногенный ответ против одного или больше предпочтительных сегментов АА, упомянутых выше (например, АА 70-76 или ОНЕЬТ (ЗЕО ГО N0: 3) или упомянутого выше фрагмента Х1ЕОХ2, такого как, например, НЕЬТ (ЗЕф ГО N0: 12), АЕЬЗ (ЗЕО ГО N0: 13), АЕПТ (ЗЕО ГО N0: 14), НЕЬА (ЗЕО ГО N0: 15) и ТЕПЕ (ЗЕО ГО N0: 16).
Предпочтительно, что такие средства индуцируют иммуногенный ответ, который специфически направлен на один из указанных сегментов, и при этом не направлен на другие сегменты АА, или АЬ, или амилоидного белка, из которого происходит фрагмент Х1ЕЬХ2.
Также можно проводить скрининг на применимость рандомизированных библиотек пептидов или других соединений. Можно создавать комбинаторные библиотеки для многих типов соединений, которые можно синтезировать поэтапно. Такие соединения включают полипептиды, бета-варианты миметиков, полисахариды, фосфолипиды, гормоны, простагландины, стероиды, ароматические соединения, гетероциклические соединения, бензодиазепины, олигомерные ^замещенные глицины и олигокарбаматы. Большие комбинаторные библиотеки указанных соединений можно конструировать с помощью способа кодирующих синтетических библиотек (ЕЗЬ), описанного в следующих источниках: Айутах, патент \У0 95/12608, Айутах, патент \У0 93/06121, Колумбийский университет, патент \У0 94/08051, Фармакопея, патент \У0 95/35503 и Зспррк, патент \У0 95/30642 (каждый из которых для всех целей включен в настоящее изобретение со ссылкой). Пептидные библиотеки также можно создавать способами фаговых дисплеев. См., например, Пеу1ш, патент \У0 91/18980.
Вначале проводят скрининг комбинаторных библиотек и других соединений на применимость, путем определения способности соединений специфически связываться с антителами или лимфоцитами (Вили Т-), которые достоверно специфичны для АА или других амилоидогенных пептидов. Например, начальный скрининг можно проводить с любой поликлональной сывороткой или моноклональным антителом к АА, или АЬ, или их фрагментам, или к фрагменту Х1ЕЬХ2. Можно проводить скрининг на специфическое связывание со специфическим эпитопом в пределах АА (например, остатки АА 70-76 или ОНЕЬТ (ЗЕО ГО N0: 3), или в пределах АЬ, или вышеупомянутого фрагмента Х^ЬХ^ такого как, на- 46 028356 пример, ΗΕΌΤ (δΕφ ГО N0: 12), ΑΕΌδ (δΕφ ГО N0: 13), ΑΕΌΤ (δΕφ ГО N0: 14), ΗΕΌΑ (δΕφ ГО N0: 15) и ΤΕΌΕ (δΕφ ГО N0: 16).
Можно тестировать соединения с помощью методик, аналогичных описанным методикам картирования характеристик эпитопов антитела. Идентифицированные с помощью такого скрининга соединения затем дополнительно анализируют на способность индуцировать антитела или реактивные лимфоциты к АА, или ΑΣ, или их фрагментам, или к фрагменту Χ1ΕΏΧ2. Например, можно тестировать серийные разведения сывороток на микротитровальных планшетах с предварительным нанесением АА, или ΑΌ, или их фрагментов, или фрагмента Χ1ΕΏΧ2, и можно проводить стандартный твердофазный иммуноферментный анализ ΕΟδΑ для тестирования на реактивные антитела к АА, или ΑΕ, или их фрагментам, или к фрагменту Χ1ΕΏΧ2. Также можно тестировать соединения на профилактическую и терапевтическую эффективность у трансгенных животных, предрасположенных к амилоидозу, например, к амилоидозу АА-типа или амилоидозу ЛЬ-типа. Такой же скрининговый подход можно применять с другими потенциальными средствами, аналогами АА, аналогами ΑΌ и более длинными пептидами, включающими фрагменты АА, ΑΕ и фрагменты Χ^ΌΧ^ описанные выше.
VII. Конъюгаты.
Некоторые средства для индуцирования иммунного ответа содержат соответствующий эпитоп для индукции иммунного ответа на АА, но имеют слишком малый размер, чтобы обладать иммуногенными свойствами. В таком случае пептидный иммуноген может быть связан с подходящей молекулойносителем для образования конъюгата, который способствует активации иммунного ответа. Единственное средство может быть связано с единственным носителем, множественные копии средства можно связывать с множественными копиями носителя, которые в свою очередь связаны друг с другом, множественные копии средства могут быть связаны с единственной копией носителя, или единственная копия средства может быть связана с множественными копиями носителя или разных носителей. Подходящие носители включают альбуминовую сыворотку, гемоцианин лимфы улитки, молекулы иммуноглобулина, тироглобулин, овальбумин, токсоид столбняка или токсоид других патогенных бактерий, таких как дифтерия, Е. εο1ί, холера или Н. ρί1οιγ, или аттенуированное производное токсина. Т-клеточные эпитопы также представляют собой подходящие молекулы-носители. Некоторые конъюгаты можно создавать путем связывания средств по настоящему изобретению с иммуностимулирующей полимерной молекулой (например, трипальмитоил^-глицерин-цистеином (Рат3Суз), маннаном (манозный полимер) или глюканом (бета 1^2 полимер)), цитокинами (например, пептиды интерлейкины ГО-1, ГО-1-альфа и бета, ГО-2, гамма-интерферон, ГО-Щ гранулоцито-макрофаго-колониестимулирующий фактор СΜ-СδΡ) и хемокинами (например, альфа- и бета-МГО1 и КΑNΤΕδ). Иммуногенные средства также могут быть связаны с пептидами, которые увеличивают транспорт через ткани, как описано автором 0'Ма1юпу в патентах \У0 97/17613 и \У0 97/17614. Связь иммуногенов с носителями может осуществляться со спейсерными аминокислотами (например, С1у-С1у), или без них.
Некоторые конъюгаты можно образовывать посредством связывания средств по изобретению по меньшей мере с одним Т-клеточным эпитопом. Некоторые Т-клеточные эпитопы являются промискуитентными, тогда как другие Т-клеточные эпитопы универсальны. Промискуитентные Т-клеточные эпитопы способны усиливать индукцию Т-клеточного иммунитета у широкого ряда субъектов с выявленными разными типами ΗΕΑ. В отличие от промискуитентных Т-клеточных антигенных детерминант, универсальные Т-клеточные эпитопы обладают способностью усиливать индукцию Т-клеточного иммунитета в большем процентном отношении, например, по меньшей мере, у 75% субъектов с выявленными разными молекулами ΗΕΑ, кодируемыми разными аллелями ΗΕΑ-ЭК.
Существует большое количество Т-клеточных эпитопов природного происхождения, таких как токсоид столбняка (например, эпитопы Р2 и Р30), поверхностный антиген гепатита В, токсоид коклюша, Ρбелок вируса кори, основной белок внешней мембраны СЫатуФа ί^асЬοт^ί^8, токсоид дифтерии (например, СКМ197), антигены Т Р1аδтοά^ит Иодатит с^^ситδρο^οζ^ΐе, Сδ Р1аδтοά^ит 131013341111 триозофосфат изомераза δείιίδίοδοιικι таηδοη^, ТгаТ ΕδсЬе^^сЬ^а εο1ί и гемагглютинин (ГА) вируса гриппа. Иммуногенные пептиды по настоящему изобретению также можно конъюгировать с Т-клеточными антигенными детерминантами, описанным в публикациях δίηί§3§1ΐ3 Ρ. Εΐ а1, №Гиге, 336:778-780 (1988); С.’1пс/ К.М. еГ а1, 1. Εχρ. Мей., 178:27-47 (1993); Шттег 1. Εΐ а1. , Се11 74:197-203 (1993); Ρа1к К. Εΐ а1. , Iттипοΰепе11Сδ. 39:230-242 (1994); в патенте \У0 98/23635; и авторами δοιι11ι\\Όού δ. еΐ а1. 1. Тттипскёу; 160:3363-3373 (1998); и С1аптт С. еΐ а1. №с1ею Αείάδ Кез. 12: 4063-4069 (1984), (все из которых включены со ссылкой настоящее изобретение во всех целях). Дополнительные примеры включают:
Гемагглютинин вируса гриппа: НА307-319.
Сδ малярии: антигенная детерминаната Т3 ΕККIΑКΜΕКΑδδVΡNV, (δΕφ ГО N0: 67).
Поверхностный антиген гепатита В: ΗΒδΑ§19-28 ΡΡ^^ΤКI^ΤI, (δΕφ ГО N0: 68).
Белок теплового шока 65: 1δρ65153-17ΐ ^^δIС^^IΑΕΑΜ^КVСNΕС, (δΕφ ГО N0: 69).
Бацилла Кальметта-Герена ^VΗΡ^Р^РРΑVVК^, (δΕφ ГО N0: 70).
Токсоид столбняка: ТТ830-844 ^ΥIКΑNδКΡIСIΤΕ^, (δΕφ ГО N0: 71).
Токсоид столбняка: ТТ947-967 Г%М;Т\УГЛ\ЕК\ЕК\У ΑδΗΓΕ, (δΕφ ГО N0: 72).
Вирус иммунодефицита человека И!У §ρ120 Т1:
- 47 028356
ΙΗ9]]\\1\\Τ)Ε\ΌΙκ\\1ΥΑ. (δΕΟ ΙΌ N0: 73).
Токсоид столбняка: ТТ^эет ΡΝΝΕΤνδΡ\ΕΚνΡΚνδΑ8ΗΕΕ
Ηΐν др120 Τ1: КОШ\1М\ОЕ\0КАМ¥А.
Альтернативно, можно создавать конъюгат путем связывания средств по изобретению по меньшей мере с одним Т-клеточным эпитопом искусственного происхождения, способным к связыванию с большой пропорцией молекул II класса главного комплекса гистосовместимости МНС, например, с пан-ЭКэпитопом (РАЭКЕ). Описание РАЭКЕ приведено в патенте США 5,736141, \0 95/07707 и в публикации А1ехапбег ί. Εΐ а1. , 1ттипИу, 1:751-761 (1994) (каждая из которых включена в настоящее изобретение со ссылкой во всех целях). Предпочтительный пептид РАЭКЕ представляет собой АКХ\АА\ТЬКААА (δΕφ ΙΌ N0: 74), (общие остатки выделены жирным шрифтом), в котором X предпочтительно является циклогексилаланином, тирозином или фенилаланином, при этом наиболее предпочтительным является циклогексилаланин.
Иммуногенные средства могут быть связаны с носителями посредством химических связей. Методики связывания иммуногена с носителем включают образование дисульфидных связей с использованием ^сукцинимидил-3-(2-пиридил-тио)пропионата (АРЭР) и сукцинимидил-4-Щ-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата ^МСС) (если в пептиде не хватает сульфгидрильной группы, ее можно обеспечить путем добавления остатка цистеина). Указанные средства создают дисульфидную связь между собой и остатком пептида цистеина в одном белке, и амидную связь посредством эпсилон-аминогруппы на лизине, или посредством другой свободной аминогруппы в других аминокислотах. Многие из таких дисульфидно/амино-образующих средств описаны в журнале 1ттип. Кеу. 62, 185 (1982). Другие бифункциональные связывающие средства образуют не дисульфидную связь, а тиоэфир. Многие из таких тиоэфир-образующих средств являются коммерчески доступными и включают реактивные сложные эфиры 6-малеимидокапроновой кислоты, 2-бромуксусной кислоты и 2-йодоуксусной кислоты, 4-Щ-малеимидометил)циклогексан-1-карбоновой кислоты. Карбоксильные группы можно активизировать путем сочетания их с сукцинимидом или 1-гидроксил-2-нитро-4-сульфоновой кислотой, натриевая соль.
Иммуногенность можно улучшить путем добавления спейсерных остатков (например, 01у-01у) между Т1 (Т-хелперной) эпитопом и пептидным иммуногеном по изобретению. В дополнение к физическому отделению Т1-эпитопа от В-клеточного эпитопа (то есть, иммуногенного пептида), глициновые остатки могут разрушать любые исксственные вторичные структуры, созданные посредством присоединения Т1-эпитопа к иммуногенному пептиду, и таким образом устранять интерференцию между Т-клеточными и/или В-клеточными ответами. Таким образом, конформационное разделение эпитопа адъюванта и домена активации антитела позволяет достичь более эффективного взаимодействия между представленным иммуногеном и подходящими Т1-клетками и В-клетками.
Для усиления индукции Т-клеточного иммунитета к средству по настоящему изобретению у большего процентного количества субъектов с разными типами НЬА можно изготовлять смесь конъюгата с разными Т1-клеточными эпитопами. Смесь может содержать смесь по меньшей мере двух конъюгатов с разными Т1-клеточными антигенными детерминантами, смесь по меньшей мере трех конъюгатов с разными Ть-клеточными эпитопами, или смесь по меньшей мере четырех конъюгатов с разными Тьклеточными эпитопами. Смесь можно вводить с адъювантом.
Иммуногенные пептиды также могут представлять собой белки, слитые с носителями (то есть, гетерологичными пептидами). Иммуногенный пептид может быть связан с амино-концом носителем, с карбокси-концом носителя, или с двумя указанными концами. Необязательно, в слитом белке могут присутствовать множественные повторы иммуногенного пептида. Необязательно, иммуногенный пептид может быть связан с множественными копиями гетерологичного пептида, например, и на Ν-конце, и на С-конце пептида. Необязательно, множественные копии иммуногенного пептида могут быть связаны с множественными копиями гетерологичного пептида, которые связаны друг с другом. Некоторые пептиды носителя служат индуктором Т-клеточного ответа адъюванта на пептид-носитель. Активированные Т-клетки адъюванта в свою очередь вызывают В-клеточный ответ на иммуногенный пептид, связанный с носителем.
Ниже показаны некоторые примеры слитых белков, подходящих для использования в настоящем изобретении. Некоторые из этих слитых белков содержат сегменты АА, связанные с эпитопами токсоида столбняка, например, описанные в патентах США 5196512, ЕР 378881 и ЕР 427347. Некоторые слитые белки содержат сегменты АА, связанные по меньшей мере с одним пептидом РАПИР, описанным в патенте США 5736142. Некоторые гетерологичные пептиды представляют собой разнородные Т-клеточные эпитопы, тогда как другие гетерологичные пептиды являются универсальными Т-клеточными эпитопами. В некоторых способах средство, предназначенное для введения, является просто единственным слитым белком с сегментом АА, который связан с гетерологичным сегментом в линейной конфигурации. Терапевтические средства по настоящему изобретению могут быть представлены формулой. Например, в некоторых способах средство представляет собой мультимер слитых белков, представленный формулой 2х, в которой х является целым числом от 1 до 5. Предпочтительно, х равен 1, 2 или 3, при этом наиболее предпочтительно, что х равен 2. Если х равен двум, такой мультимер имеет четыре слитых белка, связанные в предпочтительной конфигурации, называемой МАР4 (см. патент США 5229490).
- 48 028356
Ниже показана конфигурация МАР4, в которой получают разветвленные структуры посредством начала пептидного синтеза в аминах лизина и на Ν-конце и в боковой цепи. В зависимости от количества повторов лизин вставляют в аминокислотную последовательность и допускают ветвление, при этом получаемая структура будет представлять собой множественные Ν-концы. В этом примере четыре идентичных Ν-конца были получены на разветвленном лизин-содержащем ядре. Такая мультиплетность в значительной степени повышает реактивность аутоиммунных В-клеток. В приведенных ниже примерах Ζ относится к иммуногенному фрагменту АА, ΑΣ или фрагменту ΧιΕΌΧ2, и Ζ1-4 относится к иммуногенному фрагменту (фрагментам) АА, ΑΣ или фрагменту ΧιΕΌΧ2. Фрагменты могут быть сходными друг с другом или разными.
ζι '' КХЗО
Ζ4 - - -—
Другие примеры слитых белков включают:
Ζ-токсоид столбняка 830-844 в конфигурации МАР4:
Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡΊСIΤΕ^, (δΕΟ ГО N0: 71)
Ζ-токсоид столбняка 947-967 в конфигурации МАР4:
Ζ-ΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε, (δΕΟ ГО N0: 72)
Ζ-токсоид столбняка 830-844 в конфигурации МАР4:
Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡIСIΤΕ^, (δΕΟ ГО N0: 71)
Ζ-токсоид столбняка 830-844 + 947-967 в линейной конфигурации:
Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡIСIΤΕ^ΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε, (δΕΟ ГО N0: 75).
Пептиды ΓΑΌΡΕ (все в линейных конфигурациях), в которых X предпочтительно представляет собой циклогексилаланин, тирозин или фенилаланин, при этом наиболее предпочтительным Ζ является циклогексилаланин:
ΑΚΧνΑΑνΤΡΚΑΑΑ-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 74).
Ζχ3 ΓΑΌΡΕ пептид:
Ζ-Ζ-Ζ-ΑΚΧνΑΑνΤΡΚΑΑΑ, (δΕΟ ГО N0: 74).
Ζ - овальбумин 323-339 в линейной конфигурации:
Ζ-Iδ^ΑVНΑΑНΑΕINΕΑСΚ, (δΕΟ ГО N0: 76).
Дополнительные примеры слитых белков включают:
ΑΚΧνΑΑνΤΕΚΑΑΑ-Ζ-Ζ-Ζ-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 74).
Ζ-ΑΚΧνΑΑνΤΕΚΑΑΑ, (Ζ-(δΕφ ГО N0: 74).
РΚΥVΚ^NΤ^Κ^ΑΤ-Ζ-Ζ-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 77).
Ζ-РΚΥVΚ^NΤ^Κ^ΑΤ-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 77).
Ζ-Ζ-Ζ-РΚΥVΚ^NΤ^Κ^ΑΤ, (δΕΟ ГО N0: 77).
Ζ-Ζ-РΚΥVΚ^NΤ^Κ^ΑΤ, (Ζ-Ζ-(δΕφ ГО N0: 77)
Ζ-РΚΥVΚ^NΤ^Κ^ΑΤ-ΕΚΚIΑΚΜΕΚΑδδVΡNV-^ΥIΚΑNδΚΡIСIΤΕ^ΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε- (δΕΟ ГО N0: 78)
Ζ-Ζ-Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡIСIΊΈ^-ΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε, (δΕΟ ГО N0: 79).
Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡΊСIΤΕ^СΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 79).
^ΥIΚΑNδΚΡIСIΊΈ^СΡNNΡΤVδΡV^ΚVРΚVδΑδН^Ε-Ζ, (δΕΟ ГО N0: 79)
Ζ-^ΥIΚΑNδΚΡIСIΤΕ^, (δΕΟ ГО N0: 71) на 2 разветвленных смолах: фрагменты могут быть одинаковыми или разными.
Можно использовать те же самые или подобные белки-носители и способы связи для получения иммуногенов, которые предполагается применять для создания антител против АА или иммуногенного фрагмента АА, ΑΣ, или фрагмента ΧιΕΌΧ2. Например, для получения моноклональных антител к АА или к иммуногенным фрагментам АА, ΑΣ, или фрагменту ΧιΕΌΧ2 лабораторному животному можно вводить АА, или иммуногенные фрагменты АА, ΑΣ или фрагмент Χ1ΕΌΧ2, связанные с носителем.
VIII. Кодирующие нуклеиновые кислоты как терапевтические средства.
Терапевтические средства по настоящему изобретению также включают нуклеиновые кислоты. Иммунные реакции на амилоидные депо также можно индуцировать путем введения нуклеиновых кислот, кодирующих сегменты АА-пептида и их фрагменты, других иммуногенных пептидов, таких как фрагменты ΧιΕΌΧ2, или антитела и цепи, составляющие эти антитела, такие как антитела 2А4, 8С9 и 7Ό8, применяемые для пассивной иммунизации. Такие средства для использования в способах по настоящему изобретению включают нуклеиновые кислоты, кодирующие АА-пептиды, которые при введении пациенту создают антитела, которые специфически связываются с одной или несколькими эпитопа- 49 028356 ми между остатками 70-76 из АА, АЬ, или нуклеиновые кислоты, кодирующие пептиды, которые содержат фрагменты ΧιΕΌΧ2. Такие средства для использования в способах изобретения также включают нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, которые специфически связываются с С-концом неоэпитопа АА или с Χ1ΕΌΧ2. В частности, такие нуклеиновые кислоты кодируют антитела, которые специфически связываются с альфа-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 (ΟΗΟАΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 4), бета-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 ^ΗΟ^Ώδ (δΕΟ ГО N0: 5), гамма-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 ^ΗΟ^Ώδ (δΕΟ ГО N0: 5), альфа- и бета-изоформами НАА2 в пределах остатков 70-76 (ΟΗΟΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 4), НАА3 в пределах остатков 70-76 (Ο^ΗΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 7), НАА4 в пределах остатков 78-84 (^ΤΎ^Ώδ (δΕΟ ГО N0: 8), с Мишиным АА1 (МАА1) в пределах остатков 69-75 (ΟΡΟΗΒΌΤ (δΕΟ ГО N0: 9), МАА2 в пределах остатков 69-75 (С.НС.1 ΙΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 9), МАА3 в пределах остатков 62-68 (ΟΗΟΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 4), и МАА4 в пределах остатков 76-82 (ΉΗΟΡΕΤΡ (δΕΟ ГО N0: 11). Такие нуклеиновые кислоты могут представлять собой ДНК или РНК. Дополнительные предпочтительные нуклеиновые кислоты кодируют антитела, которые специфически связываются с ΗΕΌΤ (δΕΟ ГО N0: 12), ^Ώδ (δΕΟ ГО N0: 13), АЮТ (δΕΟ ГО N0: 14), ЖОА (δΕΟ ГО N0: 15) или ΤΕΌΕ (δΕΟ ГО N0: 16) или с другими пептидами ΧιΕΌΧ^, упомянутыми выше. Сегмент нуклеиновой кислоты, кодирующий иммуноген, обычно связан с регуляторными элементами, такими как промоторное и энхансерное средство, которые позволяют экспрессировать сегмент ДНК в предполагаемых клетках-мишенях пациента. Иоскольку для индукции имунного ответа желательна экспрессия в клетках крови, подходящими для прямой экспрессии являются промоторный и энхансерный участки из легких или тяжелых цепей генов иммуноглобулина, или основной промежуточный ранний промотор и энхансер СМV. Связанные регуляторные элементы и кодирующие последовательности часто клонируются в вектор. Для введения двухцепочечных антител эти две цепи можно клонировать в одни и те же или отдельные векторы. Нуклеиновые кислоты, кодирующие терапевтических средства изобретения, могут также кодировать по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп. Раскрытия по настоящему изобретению, которые касаются применения адъювантов и применения носителей, ти!айк ти1апб1к применимы к их использованию с нуклеиновыми кислотами, кодирующими терапевтические средства по настоящему изобретению.
Доступны многие вирусные векторные системы, включающие ретровиральные системы (см., например, Ьа^пе апб Τβη Сиг. 0ρίη. Оепе!. Оеуе1ор. 3, 102-109 (1993)); аденовирусные векторы (см., например, Вей е! а1, I. ХйоЕ 67, 5911 (1993)); адено-ассоциированные вирусные векторы (см., например, 2йои е! а1, I. Εχρ. Меб. 179, 1867 (1994)), вирусные векторы семейства оспы, включая вирус вакцинии и вирусы птичьей оспы, вирусные векторы рода альфа-вирусов, такие как полученные из вирусов δίι^^ апб δет1^к^ Еогек! (см., например, ОиЬепкку е! а1. , I. ^гоЕ 70, 508-519 (1996)), вирус венесуэльского лошадиного энцефалита (см. патент США 5643576) и рабдовирусы, такие как вирус везикулярного стоматита (см. патент \У0 96/34625) и папилломавирусы (0пе е! а1., Жтап Оепе Легару 6, 325-333 (1995); V оо е! а1, ν0 94/12629 и Аню & Вгапбкта, №с1ею Ашбк. Кек. 24, 2630-2622 (1996)).
ДНК, кодирующая иммуноген, или вектор, содержащий указанную ДНК, можно упаковывать в липосомы. Подходящие липиды и родственные аналоги описаны в патентах США 5208036, 5264618, 5279833 и 5283185. Векторы и ДНК, кодирующие иммуноген, могут также быть адсорбированными на макрочастицах-носителях или быть связанными с ними, примеры макрочастиц-носителей включают полиметилметакрилатные полимеры, и полилактиды и поли(лактид-ко-гликозиды), см., например, МсОее е! а1., I. М1сго Εηсаρ. (1996).
Векторы для генной терапии или голую ДНК может доставлять ш угуо путем введения их отдельным пациентам, обычно путем системного введения (например, внутривенным, внутрибрюшинным, назальным, гастральным, внутрикожным, внутримышечным, подкожным путем или внутричерепной инфузией) или путем местного применения (см. например, патент США 5399346). Такие векторы могут дополнительно включать вспомогательные вещества, такие как бупивацин (патент США 5593970). Можно также вводить ДНК с применением генной пушки. (См. А|ао & Вгапбкта, выше). ДНК, кодирующая иммуноген, преципитирована на поверхности микроскопических металлических шариков. Выстреливание микроинъекций происходит с помощью ударной волны или расширения газа гелия, и они проникают через ткани на глубину в несколько клеточных слоев. Например, подходящим является устройство для доставки АссеГ™ Оепе Оейуегу Оеуюе производства компании АдасеШк, Шс М1бб1е!оп VI. Альтернативно, проникновение через кожу голой ДНК в кровеносное русло можно осуществлять просто точечным нанесением ДНК на кожу с помощью химического или механического раздражения (см. патент ν0 95/05853).
В дополнительных вариантах векторы, кодирующие иммуногены, можно доставлять в клетки ех νίуо, например, в клетки, эксплантированные у конкретного пациента (например, лимфоциты, аспирированные клетки костного мозга, биоптаты тканей), или в гематопоэтические стволовые клетки универсального донора, с последующей реимплантацией пациенту, обычно после селекции клеток, в которые внедрили вектор.
ΕΧ. Адъюванты.
Иммуногенные вещества по настоящему изобретению, такие как пептиды, иногда вводят в комби- 50 028356 нации с адъювантом. Адъювант повышает титр индуцированных антител и/или связывающую аффинность индуцированных антител, по сравнению с показателями при использовании пептида единственным. Для активации иммунного ответа можно применять множество адъювантов в сочетании с иммуногенным фрагментом АА. Предпочтительные адъюванты увеличивают исходную реакцию на иммуноген и не вызывают конформационных изменений иммуногена, что влияет на качественную форму реакции. Предпочтительные адъюванты включают гидроокись алюминия и фосфат алюминия, 3-де-Оацилированный монофосфофорил-липид (МРЬ™) (см. патент 0В 2220211 (ΡΙΒΙ 1ттииоСкет Ре8еагск 1ис, Гамильтон, Монтана, в настоящее время является часть Сопха), РС-529 (Сопха, Гамильтон, Монтана). Адъювант δΤΙ\1ΕΕ0\'™ φδ-21 представляет собой тритерпеновый гликозид или сапонин, выделяемый из коры дерева Ош11а)а δаρоиа^^а МоИиа, произрастающего в Южной Америке (см. Кеи8Й е1 а1., в издании Vасс^ие Эе81ди: Тке διώνιπΠ аик Αк^иνаиΐ Αρρι-оаск (ек8. Ро\уе11 & №№таи, Р1еиит Рге88, ΚΥ, 1995); патент США № 5057540), (ΑμιίΕι ВюРкагтасеиксак, Ргат1идкат, Массачусетс). Другие адъюванты представляют собой эмульсии масло-в-воде (такие, как сквален или арахисовое масло), необязательно в сочетании с иммуностимуляторами, например, монофосфорил-липидом (см. 81ои1е е1 а1, N. Ετιμί. ΐ. Мек. 336, 86-91 (1997)), полимеры плуроника и инактивированные микобактерии. Другим адъювантом является Ср0 (патент ν0 98/40100). Адъюванты можно вводить в качестве компонента терапевтической композиции с активным средством, или их можно вводить отдельно, перед введением терапевтического средства, одновременно, или после его введения.
Предпочтительный класс адъювантов представляет собой соли алюминия (квасцы), например, гидроокись алюминия, фосфат алюминия, сульфат алюминия. Указанные адъюванты можно применять со специфичными иммуностимулирующими средствами, такими как монофосфорил-липид МРЬ или 3-деО-ацилированный монофосфофорил-липид 3-ЭМР, φδ-21, полимерные или мономерные аминокислоты, например, полиглутаминовая кислота или полилизин, или без указанных средств. Другим классом адъювантов являются рецептуры эмульсии масло-в-воде. Такие адъюванты можно использовать с другими специфичными иммуностимулирующими средствами, такими как мурамиловые пептиды (например, N ацетилмурамил-Ь-треонил-Э-изоглутамин (Шг-МЭР), к-ацетил-нормурамил-Е-аланил-Э-изоглутамин (иог-МЭР), N-ацетилмурамил-^-аланил-^-изоглутаминил-^-аланин-2-(1'-2'дипальмитоил-8и-глицеро-3гидрофосфорилокси)этиламин (МТР-РЕ), N-ацетилглюкозоаминил-N-ацетилмурамил-^-Α1-^-изоглу-^ала-дипальмитокси-пропиламид (ΌΊΡ-ОРР) ΤНΕΡΆМI^Ε™), или другие компоненты оболочки бактериальной клетки, или без вышеперечисленных средств. Эмульсии масло-в-воде включают (а) МР59 (патент ν0 90/14837), содержащую 5% сквалена, 0,5% Твин-80 и 0,5% δρаи-85 (которая необязательно содержит варьирующее количество МТР-РЕ), которую помещают в субмикронные частицы, используя микрофлюидизатор, наприме, микрофлюидизатор модели 110Υ (Мюгойшкю8, №Мои МΑ), (Ъ) δΑΡ, содержащую 10% сквалена, 0,4% Твин-80, 5% плуроник блок-полимер Ь121 и 1кг-МЭР, которые или микрофлюидизируют в субмикронную эмульсию, или интенсивно перемешивают для получения эмульсии с большим размером частиц, и (с) адъювантную систему ΡΙΒΙ™ (ΡΑδ), (Κίόί 1ттииоСкет, Гамильтон, Монтана), содержащую 2% сквалена, 0,2% Твин-80, и один или больше компонентов оболочки бактериальной клетки из группы, состоящей из монофосфорил-липида Α (МРЬ), димиколята трегалозы (ТЭМ) и скелета клеточной стенки ^νδ), предпочтительно МΡ^+СVδ (ΌΕΤ0Χ'1™).
Другой класс предпочтительных адъювантов представляет собой сапониновые адъюванты, такие как δΤΙ\1ΕΕ0Χ'™ (Οδ-21, Αηυίίη, Ргат1и§кат, МΑ), или образованные из них частицы, такие как ШС0М (иммуностимулирующие комплексы) и IδС0МΑΤΡIX. Другие адъюванты включают РС-529, 0М-СδΡ, полный адъювант Фрейнда (ΡΈΑ) и неполный адъювант Фрейнда (ΙΡΑ). Другие адъюванты включают цитокины, такие как интерлейкины (например, а- и β-пептиды Ш-1, ΙΣ-2, Ш-4, Ш-6, Ш-12, ΙΣ-13 и Ш-15), макрофаго-колониестимулирующий фактор М-СδΡ (МСδΡ), гранулоцито-макрофаго-колониестимулирующий фактор (0М-СδΡ), фактор некроза опухолей (ΤΧΡ), хемокины, такие как М1Р1 а- и β-и ΡΑNΤΕδ. Другим классом адъювантов являются аналоги гликолипидов, включающие N-гликозиламиды, N-гликозилмочевины и N-гликозилкарбаматы, в сахарном остатке каждого из которых имеется замена на аминокислоту, в качестве иммуномодуляторов или адъювантов (см. патент США № 4855283). Также в качестве адъювантов можно использовать белки теплового шока, например, ЖР70 и ЖР90.
Адъювант можно вводить с иммуногеном в виде монолитной композиции, или его можно вводить перед введением иммуногена, параллельно или после его введения. Иммуноген и адъювант можно упаковывать и поставлять в одном флаконе, или их можно упаковывать в раздельных флаконах и смешивать перед применением. Иммуноген и адъювант обычно упаковывают с маркировкой, на которой указано предназначенное терапевтическое применение. Если иммуноген и адъювант упакованы отдельно, упаковка обычно включает инструкции по смешиванию перед применением. Выбор адъюванта и/или носителя зависит от устойчивости иммуногенных рецептур, содержащих адъювант, от пути введения, схемы введения, эффективности адъюванта для вакцинируемых видов, и в отношении людей - фармацевтически приемлемым адъювантом является адъювант, получивший одобрение подходящих регулирующих органов для введения человеку или возможный для одобрения. Например, полный адъювант Фрейнда не подходит для введения человеку. Предпочтительными являются квасцы, МРЬ и φδ-21. Необязательно,
- 51 028356 можно одновременно применять два или больше разных адъювантов. Предпочтительные комбинации включают квасцы с МРЬ, квасцы с Οδ-21, МРЬ с Οδ-21, МРЬ или КС-529 с 0Μ^δΡ, и совместное введение квасцов, Οδ-21 и МРЬ. Также можно использовать неполный адъювант Фрейнда (СЬапд е1 а1., Абуапсеб Эгид РеИуегу Ке\зе\У5 32, 173-186 (1998)), необязательно в комбинации с чем-либо из квасцов, Οδ-21 и МРЬ и всех сочетаний из них.
Χ. Пассивное введение антител.
Терапевтические средства по настоящему изобретению включают антитела, которые специфически связываются с эпитопом, содержащим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, где Χι представляет собой Н, Т, Р, δ, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, непосредственно предшествующий ΕΌ в этом агрегированном амилоидном белке; и Х2 представляет собой Т, δ, Е, К, I, V, Р, А или любой другой аминокислотный остаток, расположенный сразу после ΕΌ в этом агрегированном амилоидном белке, включающем эпитопы в амилоидных пептидах, таких как АА-пептиды. Антитела, применяемые для пассивного введения, могут быть антителами, которые связываются с эпитопами Оконца или С-конца АА. Другие амилоидные белки, в дополнение к сывороточному амилоидному белку А, включают сывороточный А-амилоидный белок, белок легкой цепи иммуноглобулина, такой как, например, V//) \νί1 или УЪ, человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник ДАРР), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ТТК) и АроА1, а также другие, перечисленные в табл. 1 выше.
Пептид АА образуется путем протеолитического расщепления δАА. Предпочтительные антитела специфически связываются с неоэпитопами АА, которые образуются при протеолитическом расщеплении δАА. Предпочтительные антитела специфически связываются с С-концом неоэпитопа из АА, в частности, такие антитела специфически связываются с альфа-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 (0Η0АЕ^δ δΕΟ ГО N0:4), бета-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 (0Η^АЕ^δ, δΕΟ ГО N0:5), гамма-изоформой НАА1 в пределах остатков 70-76 (0Η^АΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 5), альфа- и бетаизоформами НАА2 в пределах остатков 70-76 (0Η0АΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 10), НАА3 в пределах остатков 70-76 (СГО1δΕΟ ГО N0:7), НАА4 в пределах остатков 78-84 (δ'ΙΛΊΕυδ, δΕΟ ГО N0:8), с мышиным АА1 (МАА1) в пределах остатков 69-75 (0К0ЖПТ, δΕΟ ГО N0:9), МАА2 в пределах остатков 6975 (01/01112)% δΕΟ ГО N0: 9), МААЗ в пределах остатков 62-68 (0Η0АΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 10) и МАА4 в пределах остатков 76-82 (ΚΗ0ΕΕΤΕ, δΕΟ ГО N0: 11). Некоторые антитела связываются с эпитопом только в одном из указанных пептидов. Другие антитела связываются с эпитопами более чем в одном из указанных пептидов. Например, некоторые антитела специфически связываются с пептидом 0Η0ΛΕ^δ (δΕΟ ГО N0: 4) и пептидом 0Η^АΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 5). Некоторые антитела связываются с пептидом 0Η0ΛΕ^δ. δΕΟ ГО N0: 4), и при этом не образуют специфическиго связывания с пептидом 0Η^АΕ^δ, δΕΟ ГО N0: 5). Связывание по меньшей мере с одним из человеческих АА-пептидов является предпочтительным. Связывание по меньшей мере с одним из человеческих АА-пептидов и с соответствующим мышиным пептидом представляется полезным, поскольку одно и то же антитело можно тестировать на мышиной модели и впоследствии применять у людей. Некоторые предпочтительные антитела специфически связываются с антигенными детерминантами в следующих остатках: остатки альфа-изоформы НАА1 71-76, 72-76, 73-76, 74-76, 70-75, 70-74, 70-73, 70-72, 71-75, 72-75, 73-75, 71-74, 71-73, 72-74, или остатки МАА1 70-75, 71-75, 72-75, 73-75, 69-74, 69-73, 69-72, 69-71, 70-74, 71-74, 72-74, 70-73, 70-72. Такие антитела обычно специфически связываются с амилоидными депо, но могут связываться или не связываться с растворимым АА. Если считается, что антитело специфически связывается с эпитопом в пределах указанных остатков, например, с остатками 70-76 альфа-изоформы НАА1, то подразумевается, что указанное антитело специфически связывается с полипептидом, содержащим указанные остатки (то есть, остатки 70-76 из альфа-изоформы НАА1, в качестве примера). Такое антитело не обязательно контактирует с каждым остатком в пределах остатков 70-76 альфа-изоформы НАА1, не придает каждой отдельной замене или делеции аминокислоты в остатках 70-76 альфа-изоформы НАА1 обязательно значительного влияния на связывающую аффинность. Такие неоэпитопные антитела связываются с АА, но не с δАА. Можно определять эпитопную специфичность антитела, например, согласно описанию в патенте ν0 00/72880.
Антитела, используемые для пассивного введении, могут быть антителами к ^концевым эпитопам АА. Предпочтительные антитела специфически связываются с ^концевым неоэпитопом АА, в особенности, такие антитела специфически связываются с остатками НАА1 1-15 (КδРРδР^0ΕАР^0АК, δΕΟ ГО N0: 80), остатками НАА2 1-15 (КδРРδР^0ΕАР^0АК, δΕΟ ГО N0: 80), остатками НАА3 1-15 (Ο0\νΐ. ТРЬКАА0О0АК, δΕΟ ГО N0: 81), остатками НАА4 1-15 ^№КЗРРКБА, (δΕΟ ГО N0: 82), остатками МАА11-15 (0РРδРVΗΕАР^0А0^, δΕΟ ГО N0: 83), остатками МАА2 1-15 (0РРδРVΗΕАР^0А0^, δΕΟ ГО N0: 83), остатками МАА3 1-9 (ΕА0^0δК^, (δΕΟ ГО N0: 84) и остатками 1-14 МАА4 (VΥδРРКΕА V^ΟТV^, δΕΟ ГО N0: 85). Некоторые антитела связываются только с эпитопом в пределах одного из этих пептидов. Другие антитела связываются с эпитопами более чем одного из этих пептидов. Например, некоторые антитела специфически связываются с пептидом КδРРδР^0ΕАР^0ΛК, δΕΟ ГО N0: 80) и пептидом ^ΟV^ТР^КААΟ^ΟΛК, δΕΟ ГО N0: 81). Некоторые антитела связываются с пептидом КδРРδР^0ΕΛР^0ΛК, δΕΟ ГО N0: 80), при этом не связываются специфически с пептидом 00νΕΤРЬКАА000АК, δΕΟ ГО N0: 81). Связывание по меньшей мере с одним из человеческих АА-пептидов
- 52 028356 является предпочтительным. Связывание по меньшей мере с одним из человеческих АА-пептидов и с соответствующим мышиным пептидом является полезным, поскольку одно и то же антитело можно тестировать на мышиной модели и впоследствии применять у людей.
Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом, состоящим из указанного Х1ЕПХ2. Предпочтительно, такие антитела специфически связываются с указанным эпитопом в агрегированном амилоидном белке. Некоторые из таких антител предпочтительно специфически связываются с агрегированным амилоидным белком относительно мономерной формы такого амилоидного белка. В некоторых антителах Х1 представляет собой Н, Т, Р, 8, Р или А и Х2 представляет собой Т, 8, Е, Ό, К, I, V, Р или А. В некоторых таких антителах, если Х1 является Н, то Х2 представляет собой Т или А; если Х1 является А, то Х2 является 8, Т, Е или V; если Х1 является Т, то Х2 представляет собой Е; если Х1 является Р, то Х2 является Ό; если Х1 является 8, то Х2 является Е, Р или А; и если Х1 является Р, то Х2 представляет собой Е, I или Р. В некоторых антителах Х1 представляет собой Н, Т, Р, 8, Р или А и Х2 представляет собой Т, 8, Е, Ό, К, I, V, Р или А, при условии, что если Х1 представляет собой А, то Х2 не является V. В некоторых антителах, если Х1 является А, то Х2 представляет собой 8, Т или Е.
Некоторые антитела специфически связываются с эпитопом, содержащим аминокислотную последовательность СНЕЛТ (8Е0 ГО N0 3), ΗΕΌΤ (8ЕС) ГО N0: 12), ΆΕΌ8 (8ЕС) ГО N0: 13), ΆΕΌΤ (8ЕС) ГО N0: 14), НЕПА (8ЕЕ) ГО N0: 15), ТЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 16), РЕПП (8ЕЕ) ГО N0: 17), 8ЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 18), АЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 19), РЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 20), РЕЛ1 (8ЕЕ) ГО N0: 21), РЕЛР (8ЕЕ) ГО N0: 22), ЛЕВА (8ЕЕ) ГО N0: 23), 8ЕЛР (8ЕЕ) ГО N0: 24) или 8ЕЛА (8ЕЕ) ГО N0: 25).
Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из СНЕПТ (8Еф ГО N0: 3), НЕЛТ (8Еф ГО N0: 12), АЕЛ8 (8ЕЕ) ГО N0: 13), АЕЛТ (ГО 8ЕО N0: 14), НЕЛА (8ЕЕ) ГО N0: 15), ТЕЛЕ (8ЕЕ) ГО N0: 16), РЕЛЛ (8ЕЕ) ГО N0: 17), 8ЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 18), АЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 19), РЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 20), РЕП1 (8ЕЕ) ГО N0: 21), РЕПР (8ЕО ГО N0: 22), 8ЕЛР (8ЕО ГО N0: 24) и 8ЕЛА (8ЕО ГО N0: 25). Некоторые антитела специфически связываются с пептидом, содержащим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из СНЕПТ (8ЕЕ) ГО N0: 3), НЕПТ (8ЕЕ) ГО N0: 12), АЕЛ8 (8ЕЕ) ГО N0: 13), АЕЛТ (8ЕЕ) ГО N0: 14), НЕЛА (8ЕЕ) ГО N0: 15) и ТЕПЕ (8ЕЕ) ГО N0: 16).
Некоторые антитела индуцируют к пептиду, содержащему СНЕЛТ (8Еф ГО N0: 3), такие как, например, 2А4, 7Л8 и 8С9, или их гуманизированные или химерные версии.
Антитела могут быть поликлональными или моноклональными. Поликлональные сыворотки обычно содержат смесь популяций антител, которые специфически связываются с несколькими эпитопами по всей длине АА. Вместе с тем, поликлональные сыворотки могут быть специфичными для конкретного сегмента АА, такого как остатки 70-76 в альфа-изоформе НАА1.
Предпочтительные антитела являются химерными или гуманизированными (см. Онееп е! а1, Ргос. №11. Асай. 8с1. И8А 86:10029-10033 (1989) и патенты \Е0 90/07861, США 5693762, США 5693761, США 5585089, США 5530101 и патент νίπΕΓ. США 5225539), или человеческими (ЬопЬегд е! а1., \У0 93/12227 (1993); патенты США 5877397, США 5874299, США 5814318, США 5789650, США 5770429, США 5661016, США 5633425, США 5625126, США 5569825, США 5545806, публикации №1иге 148, 1547-1553 (1994), №Циге Вю1есЬпо1оду 14, 826 (1996), патент КисЬег1араИ, XV0 91/10741 (1991)). Альтернативный подход получения гуманизированного антитело, также известный как маскировка, описан в патенте США 6797492. В качестве исходных материалов для изготовления гуманизированных антител доступны несколько мышиных антител с разными характеристиками связывания.
Типичными гуманизированными антителами являются гуманизированное антитело версии 7Л8 (инвентарный номер АТСС), гуманизированное антитело версии 7Л29, гуманизированное антитело версии 7Л19, гуманизированное антитело версии 7Л47, гуманизированное антитело версии 7Л39, гуманизированное антитело версии 7Л66, гуманизированное антитело версии 8С9, гуманизированное антитело версии 8С3, гуманизированное антитело версии 8С4, гуманизированное антитело версии 8С51, гуманизированное антитело версии 8С22, гуманизированное антитело версии 8С30, гуманизированное антитело версии 8С4 6, гуманизированное антитело версии 2А4 (инвентарный номер АТСС), гуманизированное антитело версии 2А20, гуманизированное антитело версии 2А44, гуманизированное антитело версии 2А77, гуманизированное антитело версии 2А13, и гуманизированное антитело версии 2А14. Гибридомы, которые продуцируют антитело 7Л8 (1Н80 7Л8.29.19.47) и антитело 2А4 (1Н80 2А4.20.44077) были депонированы, соответственно, 4 сентября 2008 года и 17 декабря 2008 года в Американской коллекции типовых культур (АТСС), расположенной в настоящее время по адресу: 10801 ИпщегзНу ВоЫетагй. Мапаззаз, VА20110-2209, согласно условиям будапештского соглашения о международном признании депонирования микроорганизмов для цели процедуры выдачи патентов (будапештское соглашение). Согласно АТСС, гибридома, продуцирующая 7Л8, имеет инвентарный номер АТСС_, и гибридома, продуцирующая 2А4, имеет инвентарный номер АТСС .
Человеческий изотип 1дС1 является предпочтительным для антител к С-концевой области АА, поскольку обладает наиболее высокой из человеческих изотипов аффинностью для рецептора РсК1 на фагоцитарных клетках. Некоторые антитела специфически связываются с АА, со связывающей аффинностью больше или равной примерно 10 , 10 , 10 или 10 М- .
- 53 028356
Активную иммунизацию фрагментами АА можно комбинировать с пассивным введением антител. Примеры специфичных комбинаций включают фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфаизоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 7076 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 71-76 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 72-76 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 73-76 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфаизоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 7476 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-75 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-74 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-73 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфаизоформы НАА1 с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 7072 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 71-75 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 72-75 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 73-75 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфаизоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 7375 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 71-74 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 71-73 альфа-изоформы НАА1; фрагменты АА, содержащие остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 72-74 альфа-изоформы НАА1. Дополнительно, фрагменты АА, содержащие остатки альфа-изоформы НАА1: 71-76, 72-76, 73-76, 74-76, 70-75, 70-74, 70-73, 70-72, 71-75, 72-75, 73-75, 71-74, 71-73, 72-74, можно объединять с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков альфа-изоформы НАА1: 71-76, 72-76, 73-76, 74-76, 70-75, 70-74, 70-73, 70-72, 71-75, 72-75, 73-75, 71-74, 71-73, 72-74. Фрагменты АА, содержащую остатки 70-76 альфа-изоформы НАА1, остатки 70-76 бета-изоформы НАА1, остатки 70-76 гамма-изоформы НАА1, остатки 70-76 альфа- и бета-изоформ НАА2, остатки 69-75 МАА1, остатки 69-75 МАА2 или остатки 62-68 МАА3, можно объединять с антителами, которые специфически связываются с эпитопом в пределах остатков 70-76 альфа-изоформы НАА1, остатков 70-76 бета-изоформы НАА1, остатков 70-76 гамма-изоформы НАА1, остатков 70-76 альфа- и бета-изоформ НАА2, остатков 69-75 МАА1, остатков 69-75 МАА2 или остатков 62-68 МАА3.
Некоторые из описанных выше антител не связываются специфически с мономерной формой или формой амилоидного белка-предшественника. Некоторые из таких антител специфически связываются с неоэпитопом, полученным при расщеплении белка-предшественника, в результате чего создается амилоидный белок.
Например, некоторые антитела специфически связываются с С-концевыми остатками мышиных АА-фибрилл, такими как ΗΕΌΤ, (δΕρ ΙΌ N0: 12), но специфически не связываются с пептидом, который продолжается в неамилоидной части δΑΑ (ΟΗΕΌΤΜΑΌΡΕ. δΕρ ΙΌ N0: 61). Некоторые антитела специфически связываются с конформационным эпитопом. Некоторые из таких конформационных эпитопов являются линейными. Некоторые из таких конформационных эпитопов проявляются, если у амилоидного белка возникает агрегированная структура (например, фибриллярная), или он становится частично денатурированным. Примеры таких антител включают мышиные моноклональные антитела 2А4 (инвентарный номер АТСС ), 8Ο9 (инвентарный номер АТСС ) и 7Ό8 (инвентарный номер АТСС ), их человеческие, гуманизированные и химерные формы, другие антитела, которые специфически связываются с одним и тем же эпитопом, что и антитела 2А4, 8Ο9 или 7Ό8, и антигенсвязывающие фрагменты любых таких антител. Некоторые антитела специфически связываются с амилоидным белком, содержащим аминокислотные последовательности ΕΌ. Некоторые антитела специфически связываются с амилоидным белком, выбранным из группы, состоящей из белка легкой цепи иммуноглобулина, человеческого островкового амилоидного полипептида-предшественника (ΙΑΡΡ), бета-амилоидного пептида, транстиретина (ΤΤΕ) и ΑροΑΙ.
Известно, что основная структурная единица антитела содержит тетрамер из субъединиц. Каждый тетрамер составлен из двух идентичных пар полипептидных цепей, и каждая пара имеет одну легкую (около 25 кДа) и одну тяжелую цепь (около 50-70 кДа). Амино-концевая часть каждой цепи включает вариабельную область примерно из 100-110 или больше аминокислот, отвечающих, главным образом, за
- 54 028356 распознавание антигена. Карбокси-концевая часть каждой цепи определяет постоянную область, отвечающую главным образом за эффекторную функцию.
1. Антитела.
В объем по настоящему изобретению входят интактные антитела и антиген-связывающие фрагменты антитела, также пегилированные антитела и фрагменты антител, а также антитела с нарушенной (например, уменьшенной или элиминированной) эффекторной функцией, например, антитела, содержащие мутации или замещенные остатки в Рс области. Примеры иммунологически активных частей иммуноглобулиновых молекул включают фрагменты Р(аЬ) и Р(аЬ')2 Ιτι-РаЬ, РаЬ', Ρν, 8сРу, άί-РаЬ', которые можно создавать посредством ферментной обработки антитела, например, пепсином, или создавать с помощью признанных в данной области технологий рекомбинантной инженерии. Дополнительные антигенсвязывающие фрагменты антител по изобретению включают фрагменты терапевтических антител, которые включают фрагменты пегилированных антител, такие как РЕО-(пегилированные) РаЬ' и ΡΕΟ-άί-РаЬ'. Примеры мутантов с эффекторными функциями описаны в патенте США № 5624821, который включен полностью со ссылкой в настоящее изобретние. Некоторые антитела обладают уменьшенной связывающей аффинностью к Ы-рецептору Рс-гамма. Мутантные антитела с эффекторной функцией включают антитела, содержащие мутации в шарнирной области. Некоторые мутантные антитела 1дС содержат мутацию в постоянной области тяжелой цепи в одном или больше из положений 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 и 322. В некоторых антителах имеются замены одного или нескольких из остатков 234, 236 и 237 на аланин. В некоторых антителах остаток 235 заменен на глутамин. В некоторых антителах остаток 297 заменен на аланин. В некоторых антителах остатки 318, 320 и 322 заменены на аланин. В некоторых антителах остаток 318 заменен на валин. В некоторых антителах остаток 322 заменен на глутамин. Антитела с усиленной эффекторной функцией включают антитела с единственной мутацией 8239Ό и Ι332Ε и с двойной и тройной мутацией 8239Ό/Ι332Ε и 8239Ό/Ι332Ε/Λ330Ε (нумерация по КаЬа!).
2. Поликлональные антитела.
Поликлональные антитела можно изготовлять согласно описанию выше, путем иммунизации подходящего субъекта иммуногеном. Титр антител у иммунизированного субъекта можно контролировать в течение времени с помощью стандартных способов, например, твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЙ18А) с использованием иммобилизированного антигена-мишени.
Если желательно, молекулы антитела, направленные против антигена-мишени, можно выделять от млекопитающего (например, из крови) и дополнительно очищать общеизвестными способами, такими как сефарозная хроматография А-белка, чтобы получить фракцию антитела, например, 1дС. В соответствующее после иммунизации время, например, когда титры анти-антигенного антитела являются наиболее высокими, от субъекта можно получать антитело-продуцирующие клетки и использовать их для изготовления моноклональных антител с помощью стандартных методик, таких как технология гибридом, описанная впервые авторами КоЫег и МЙ8!еш (1975) Ыа!иге 256:495-497) (см. также, Вго\уп е! а1. (1981) 1. 1ттипо1. 127:539-46; Вго\\п е! а1. (1980) 1. Βίο1. СЬет. 255:4980-83; Уей е! а1. (1976) Ргос. Ыа!1. Асаб. 8сг И8А 76:2927-31; и Уей е! а1. (1982) 1п!. 1. Сапсег 29:269-75). Об изготовлении химерных поликлональных антител см. ВиесЬ1ег е! а1., патент США № 6420113.
3. Моноклональные антитела.
Для получения моноклонального антитела можно применять любой из многих общеизвестных протоколов, используемых для слияния лимфоцитов и бессмерных клеточных линий (см., например, публикации С. Сайге е! а1. (1977) Ыа!иге 266:55052; Сейег е! а1. 8отайс Се11 Сепе!., цитированные выше; Ьегпег, Уа1е 1. Вю1. Меб., цитированная выше; Кеппе!Ь, Мопос1опа1 АпйЬоб1е8, цитированная выше). Кроме того, рядовой специалист в данной области сможет оценить, что существует ряд вариантов указанных способов, которые также могут быть полезными. Обычно бессмертную клеточную линию (например, клеточную линию миеломы), получают от тех видов млекопитающих, от которых получены лимфоциты. Например, мышиные гибридомы можно создавать путем слияния с бессмертной мышиной клеточной линией лимфоцитов мыши, иммунизированных иммуногенным препаратом по настоящему изобретению. Предпочтительными бессмертными клеточными линиями являются клеточные линии мышиной миеломы, которые чувствительны к культуральной среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин (среда НАТ). В качестве пары для слияния можно использовать любую из множества миеломных клеточных линий согласно стандартным способам, например, миеломные линий Р3-Ы81/1-А§41, Р3-х63-Ад8.653 или 8р2/0-Ад14. Указанные миеломные линии доступны в АТСС. Обычно НАТчувствительные клетки мышиной миеломы сливают с мышиными спленоцитами с использованием полиэтиленгликоля (РЕС). Затем проводят селекцию полученных в результате слияния клеток гибридомы с использованием среды НАТ, которая уничтожает неслитые и недостаточно слитые миеломные клетки (неслитые спленоциты умирают через несколько дней, так как они не подверглись трансформации). Детекцию гибридомных клеток, продуцирующих моноклональное антитело по изобретению, проводят путем скрининга супернатантов культуры гибридомы на антитела, которые связываются с антигеноммишенью, например, АР, с помощью стандартного анализа ЕЫ8А.
4. Рекомбинантные антитела.
Альтернативой к изготовлению гибридом, секретирующих моноклональные антитела, можно иден- 55 028356 тифицировать и выделять моноклональное антитело путем скрининга рекомбинантной комбинаторной библиотеки иммуноглобулинов (например, библиотеки фаговых дисплеев антител) с антигеноммишенью, чтобы таким образом выделить элементы в библиотеке иммуноглобулинов, которые связываются с антигеном-мишенью. Комплекты для создания и скрининга библиотек фаговых дисплеев коммерчески доступны (например, Рекомбинантная фаговая система антител (КесотЬшап! РЬаде АпйЬойу Зук!ет) РЬагтата, № каталога 27-9400-01; и комплект фаговых дисплеев З1га1адепе ЗигЕАР™, № каталога 240612). Дополнительно, примеры способов и реактивов, особенно подходящих для использования в создании и скрининге библиотеки дисплеев антител, можно найти в следующих публикациях: например, Ьайпег е! а1. и.З. Ра1еп1 №. 5223409; Капд е! а1. РСТ 1п1егпа1юпа1 РиЬЕсайоп №. \У0 92/18619; Ьо^ег е! а1. РСТ 1п1егпа1юпа1 РиЬНсайоп №. \У0 91/17271; \Ут1ег е! а1. РСТ 1п!егпайопа1 РиЬНсайоп \У0 92/20791; Магк1апй е! а1. РСТ 1п1егпа1юпа1 РиЬНсайоп №. \У0 92/15679; Вгеййпд е! а1. РСТ 1п!егпайопа1 РиЬНсайоп \У0 93/01288; МсСайейу е! а1. РСТ 1п1егпа1юпа1 РиЬНса!юп №. \У0 92/01047; Оаггагй е! а1. РСТ 1п1егпа1юпа1 РиЬЕсайоп №. \У0 92/09690; Ьайпег е! а1. РСТ 1п!егпайопа1 РиЬЕсайоп №. \У0 90/02809; РисЬк е! а1. (1991) Вю/ТесЬпо1о§у 9:1370-1372; Нау е! а1. (1992) Нит. АпЬЬой. НуЬпйотак 3:81-85; Нике е! а1. (1989) Заепсе 246:1275-1281; Огйй!Ьк е! а1. (1993) ЕМВ0 1 12:725-734; Начкшк е! а1. (1992) 1. Мо1. Вю1. 226:889-896; С1агккоп е! а1. (1991) №1иге 352:624-628; Огат е! а1. (1992) Ргос. ЫаИ. Асай. Зс1. ИЗА 89:3576-3580; Оаггай е! а1. (1991) Вю/ТесЬпо1о§у 9:1373-1377; НоодепЬоот е! а1. (1991) №с. Лай Кек. 19:4133-4137; ВагЬак е! а1. (1991) Ргос. №И. Асай. Зс1. ИЗА 88:7978-7982; апй МсСайейу е! а1. №!иге (1990) 348:552-554.
5. Химерные и гуманизированные антитела.
Дополнительно, в объем по настоящему изобретению входят рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные моноклональные антитела, содержащие и человеческие и нечеловеческие части, которые можно изготовлять с использованием стандартных способов рекомбинантных ДНК.
Термин гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело относится к иммуноглобулину или антителу, которое включает по меньшей мере одну цепь гуманизированного иммуноглобулина или антитела (то есть, по меньшей мере одну гуманизированную легкую или тяжелую цепь). Термины цепь гуманизированного иммуноглобулина, или цепь гуманизированного антитела (то есть, легкая цепь гуманизированного иммуноглобулина или тяжелая цепь гуманизированного иммуноглобулина) относится к цепи иммуноглобулина или антитела (то есть, соответственно, к легкой или тяжелой цепи), имеющей вариабельную область, которая включает вариабельный каркасный участок в основном от человеческого иммуноглобулина или антитела, и участки, определяющие комплементарность (СЬК), (например, по меньшей мере один СЬК, предпочтительно два СЬК, более предпочтительно три СЬК) в основном от нечеловеческого иммуноглобулина или антитела, и дополнительно включает постоянные области, (например, по меньшей мере одну постоянную область или ее часть, в случае легкой цепи, и три постоянные области в случае тяжелой цепи). Термин гуманизированная вариабельная область (например, гуманизированная вариабельная область легкой цепи или гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи) относится к вариабельной области, которая включает вариабельный каркасный участок в основном от человеческого иммуноглобулина или антитела, и участок, определяющий комплементарность (СЬК), в основном от нечеловеческого иммуноглобулина или антитела.
Выражение в основном от человеческого иммуноглобулина или антитела или в основном человеческий означает, что при выравнивании с человеческим иммуноглобулином или с аминокислотной последовательностью антитела в целях сравнения идентичность указанных участков составляет по меньшей мере 80-90%, 90-95%, или 95-99% (то есть, идентичность локальных последовательностей) с аминокислотной последовательностью человеческого каркасного участка или постоянного участка, что позволяет, например, осуществлять консервативные замены, замены консенсусных последовательностей, замены зародышевых линий, обратные мутации и тому подобное. Вставка консервативных замен, замен консенсусных последовательностей, замен зародышевых линий, обратных мутаций и тому подобного часто называют оптимизацией гуманизированного антитела или цепи. Выражение в основном от нечеловеческого иммуноглобулина или антитела или в основном нечеловеческий означает, что иммуноглобулин или аминокислотная последовательность антитела являются идентичными по меньшей мере на 80-95%, предпочтительно по меньшей мере на 90-95%, более предпочтительно на 96, 97, 98 или на 99% идентичными иммуноглобулину или аминокислотной последовательности антитела от организма нечеловеческого происхождения, например, от млекопитающего нечеловеческого происхождения.
Соответственно, все участки или остатки гуманизированного иммуноглобулина или антитела, или цепи гуманизированного иммуноглобулина или антитела, кроме СЬК, в основном идентичны соответствующим участкам или остаткам одной или больше нативных последовательностей человеческого иммуноглобулина. Термин соответствующий участок или соответствующий остаток относится к участку или остатку во второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, которая занимает одинаковое (то есть, эквивалентное) положение, что и участок или остаток в первой аминокислотной или нуклеотидой последовательности, при оптимальном выравнивании первой и второй последовательности в целях сравнения.
Термин по существу идентичны означает что две полипептидные последовательности при опти- 56 028356 мальном выравнивании, например, с помощью программ ΟΑΡ или ΒΕδΤΕΙΤ с использованием значений веса промежутков по умолчанию, имеют по меньшей мере на 50-60% идентичные последовательности, предпочтительно по меньшей мере на 60-70% процентов идентичные последовательности, более предпочтительно по меньшей мере на 70-80% идентичные последовательности, более предпочтительно по меньшей мере на 80-90% идентичные последовательности, более предпочтительно по меньшей мере на 80-90% идентичные последовательности, еще более предпочтительно по меньшей мере на 90-95% идентичные последовательности, и еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентичные последовательности, (например, идентичность последовательностей составляет 99% или выше). Термин по существу идентичные означает что две полипептидные последовательности при оптимальном выравнивании, например, с помощью программ ΟΑΡ или ΒΕδΤΕΙΤ с использованием значений веса промежутков по умолчанию, имеют по меньшей мере на 80-90% идентичные последовательности, предпочтительно по меньшей мере на 90-95% идентичные последовательности, и более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентичные последовательности, или больше (например, идентичность последовательностей составляет 99% или выше). Для сравнения последовательностей обычно одна последовательность действует как контрольная последовательность, с которой сравнивают тестовые последовательности. Используя алгоритм сравнения последовательностей, тестовые и контрольные последовательности вводят в компьютер, в случае необходимости задают координаты субпоследовательности и определяют параметры программы алгоритма сравнения последовательностей. Затем по алгоритму сравнения последовательности вычисляют процент идентичности последовательностей для тестовой последовательности (последовательностей) относительно контрольной последовательности, на основе заданных параметров программы.
Можно проводить оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения, например, с помощью алгоритма локальной гомологии по διηίΐΐι & Аа!егтап, Αύν.ΑρρΙ.ΜηΙΙι. 2:482 (1981), с помощью алгоритма выравнивания гомологии по №е41етап & АипзсЬ, 1. Μο1. Βίο1. 48:443 (1970), с помощью поиска по методике сходства по Ρеа^δοη & Ыртап, Ггос. Лсай. δα. υδΑ 85:2444 (1988), с помощью компьютерных программ выполнения указанных алгоритмов (ΟΑΡ, ΒΕδΤΕΙΤ, ΕΑδΤΑ и ΤΕΑδΤΑ из пакета программ Αΐδ^ι^Η! Οеηеΐ^сδ δοΠ\νηΐΌ Ρаскаде, Οеηеί^сδ Сοтρиΐе^ Οίουρ, 575 δ^ι^ Όγ., Μπάίδοη), или путем визуального наблюдения (см. в общем публикации Αι^ιι^ΐ е! а1., выше). Одним из примеров алгоритмов, подходящим для определения процента идентичности последовательностей и процента сходства последовательностей, является алгоритм ΒΕΑδΤ, который описан авторами ΑΙΐδΛυΙ е! а1., 1. Μο1. Βίο1. 215:403-410 (1990). Программное обеспечение для проведения анализа ΒΕΑδΤ является общедоступным в Национальном центре биотехнологической информации (№1юпа1 СеШег Γογ Β^οΐесЬηο1ο§у ΙηΓοι·!™^!'! (публично доступное на Интернет-сервере Национальных институтов здоровья NСΒI). Обычно можно использовать параметры программы по умолчанию для проведения сравнения последовательностей, вместе с тем, можно также использовать задаваемые параметры. Программа ΒΕΑδΤΡ для аминокислотных последовательностей использует по умолчанию длину слова (А) 3, ожидание (Е) 10, и матрицу замен ΒΕ0δυΜ62 (см. ^πίΚοΓΓ& ^πίΚοΓΓ Бтос. №-Н1. Лсаά. δα. υδΑ, 89, 10915 (1989)).
Предпочтительно, положения неидентичных остатков отличаются консервативными аминокислотными заменами. В целях классификации аминокислотных замен на консервативные или неконсервативные аминокислоты разделены на группы следующим образом: группа Ι (гидрофобные боковые цепи): норлейцин, метионин, аланин, валин, лейцин, изолейцин; группа ΙΙ (нейтральные гидрофильные боковые цепи): цистеин, серии, треонин; группа ΙΙΙ (кислые боковые цепи): аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; группа Ιν (основные боковые цепи) : аспарагин, глутамин, гистидин, лизин, аргинин; группа ν (остатки, влияющие на ориентацию цепи): глицин, пролин; и группа νΙ (ароматические боковые цепи): триптофан, тирозин, фенилаланин. Консервативные замены охватывают замены между аминокислотами одной группы. Неконсервативные замены представляют собой обмен члена одной из указанных групп на член из другой группы.
Предпочтительно гуманизированные иммуноглобулины или антитела связываются с антигеном с аффинностью, которая находится в диапазоне фактора трех, четырех или пяти от аффинности соответствующего негуманизированного антитела. Например, если негуманизированное антитело обладает связывающей аффинность 10-9 М, то гуманизированные антитела будут иметь связывающую аффинность по меньшей мере 3х10-8 М, 4х10-8 М, 5х10-8 М или 10-9 М. Описывая связывающие характиристики цепи иммуноглобулина или антитела, можно описать цепь на основании ее способности направлять антигенное связывание (например, АР). Считается, что цепь направляет антигенное связывание когда она придает интактному иммуноглобулину или антителу (или его антиген-связывающему фрагменту) свойства специфического связывания или связывающую аффинность. Считается, что мутация (например, обратная мутация), в значительной степени влияет на способность тяжелой или легкой цепи направлять связывание антигена, если она влияет (например, уменьшает), связывающую аффинность интактного иммуноглобулина или антитела (или его антиген-связывающего фрагмента), которые содержат указанную цепь по меньшей мере в порядке величины, по сравнению с показателями аффинности антитела (или его антиген-связывающего фрагмента), которые содержат эквивалентную цепь без указанной мутации. Мутация по существу не влияет (например, уменьшает) на способность цепи направлять связыва- 57 028356 ние антигена, если она влияет (например, уменьшает) связывающую аффинность интактного иммуноглобулина или антитела (или его антиген-связывающего фрагмента), которые содержат указанную цепь, только с фактором два, три, или четыре от показателей антитела (или его антиген-связывающего фрагмента), которые содержат эквивалентную цепь без указанной мутации.
Термин химерный иммуноглобулин или антитело относится к иммуноглобулину или антителу, вариабельные области которого происходят от первых видов, и чьи постоянные области происходят от вторых видов. Можно конструировать химерные иммуноглобулины или антитела из генных сегментов иммуноглобулина, принадлежащих разным видам, например, с помощью технологий генной инженерии. В понятия гуманизированный иммуноглобулин или гуманизированное антитело не входят химерные иммуноглобулины или антитела, определение которых приведено ниже. По своей конструкции гуманизированные иммуноглобулины или антитела являются химерными (то есть, содержат области белков от более чем одного вида), но вместе с тем, они включают дополнительные признаки (то есть, вариабельные области, содержащие донорские остатки СОК и акцепторные каркасные остатки), которые не обнаруживаются в химерных иммуноглобулинах или антителах, определенных согласно изобретению.
Такие химерные и гуманизированные моноклональные антитела можно получать технологией рекомбинантных ДНК, известной в данной области техники, например, используя способы, описанные в следующих публикациях: КоЬшкоп е! а1. 1п!егпабопа1 АррБсабоп №. РС.’Т/ГО86/02269; Акта, е! а1. Ειιιόреап Ра!еп! Аррйсабоп 184,187; ТаШдисЫ, М., Εи^ореаη Ра!еп! АррБсабоп 171,496; Моткоп е! а1. Ειιιόреап Ра!еп! АррБсабоп 173,494; №иЬегдег е! а1 РСТ 1п!егпабопа1 РиЬБсабоп №. \0 86/01533; СаЬШу е! а1. υ.δ. Ра!еп! №. 4816567; СаЬШу е! а1. Εи^ореаη Ра!еп! АррБсабоп 125023; Вейег е! а1. (1988) δ№ΐ'^ 240:1041-1043; Ыи е! а1 (1987) Ргос. №!1. Асаб. δα. ГОА 84:3439-3443; Ыи е! а1 (1987) I. 1ттипо1 139:3521-3526; 8ип е! а1 (1987) Ргос. №!1 Асаб. δα. ГОА 84:214-218; УкНппига е! а1 (1987) Сапе. Кек. 47:999-1005; \ ооб е! а1 (1985) №!иге 314:446-449; апб δίκην е! а1 (1988) I. №!1 Сапсег 1пк!. 80:1553-1559); Моткоп, δ. Ь. (1985) δ№ι^ 229:1202-1207; 0ί е! а1 (1986) ВюТесНпцщек 4:214; \ш!ег υ.δ. Ра!еп! 5,225,539; Шпек е! а1 (1986) №!иге 321:552-525; \егБоеуап е! а1 (1988) δ№ι^ 239:1534; апб Ве1б1ег е! а1 (1988) I. 1ттипо1 141:4053-4060.
Терапевтические средства также включают миметики антител, такие как миметики области, определяющей комплементарность (СОК).
6. Человеческие антитела от трансгенных животных и фаговые дисплеи.
С другой стороны, в настоящее время возможно получение трансгенных животных (например, мышей), которые при иммунизации способны продуцировать полную гамму человеческих антител при отсутствии эндогенной продукции иммуноглобулина. Например, было описано, что гомозиготная делеция гена тяжелой цепи соединяющего участка (бН) антитела в химерной и зародышевой линии мутантных мышей приводит к полному ингибированию эндогенной продукции антитела. Перенос матрицы гена зародышевой линии человеческого иммуноглобулина в такие зародышевые линии мутантных мышей приводит к продукции человеческих антител на антигенную провокацию. См., например, патенты США №№ 6150584; 6114598 и 5770429.
Полностью человеческие антитела также можно получать из библиотек фаговых дисплеев (НоодепЬоот е! а1., I. Мо1. Вю1, 227:381 (1991); Магкк е! а1, I. Мо1. Вю1, 222:581-597 (1991)). Химерные поликлональные антитела также могут быть получены из библиотек фаговых дисплеев (ВиесЫег е! а1., патент США № 6420113).
7. Биспецифичные антитела, слитые с антителом полипептиды и одноцепочечные антитела.
Биспецифичные антитела (ВкАЬк) являются антителами, которые обладают специфичностью связывания по меньшей мере с двуми разными эпитопами. Такие антитела можно получать из полноразмерных антител или из фрагментов антител (например, биспецифичные антитела Е(аЬ)'2). Способы изготовления биспецифичных антител известны в данной области техники. Общепринятое получение полноразмерных биспецифичных антител основано на коэкспрессии двух пар иммуноглобулиновых тяжелых цепей - легких цепей, при этом эти две цепи имеют разную специфичность (МБ1к!ет е! а1., №!иге, 305:537539 (1983)). По причине рандомизированного набора тяжелых и легких цепей иммуноглобулина указанные гибридомы (квадромы) продуцируют потенциальную смесь разных молекул антитела (см. патент \0 93/08829 и публикацию Тгаипескег е! а1, ΕМВ0 I., 10:3655-3659 (1991)).
Биспецифичные антитела также включают сшитые или гетероконъюгированные антитела. Например, одно из антител в гетероконъюгате может быть соединено с авидином, другое с биотином или другим полезным элементом. Гетероконъюгированные антитела можно изготовлять с использованием любых приемлемых способов сшивания. Подходящие сшивающие средства известны в данной области техники и раскрыты в патенте США № 4676980, наряду с некоторыми способами сшивания.
В еще одном аспекте антитело может быть химически или генетически слитым с полезным элементом, таким как реагирующая, обнаружимая или функциональная группа, например, с иммунотоксином, чтобы получить слитый с антителом полипептид. Такие полезные элементы включают, например, иммунотоксины, химиотерапевтические препараты и радиоизотопы, все из которых известны в данной области техники.
Одноцепочечные антитела также подходят для придания устойчивости согласно изобретению. Эти
- 58 028356 фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (νΉ), связанный с вариабельным доменом легкой цепи (УЬ) с помощью линкера, который позволяет каждой вариабельной области соединяться друг с другом и восстанавливает антиген-связывающий карман родительского антитела, из которого получены области УЬ и УН. См. СгиЬег е! а1., 1. Iттиηο1., 152:5368 (1994).
Подразумевается, что любая из упомянутых полипептидных молекул, единственная или в сочетании, подходит для изготовления в качестве стабилизированных рецептур согласно изобретению.
XI. Субъекты, поддающиеся лечению.
В число субъектов или пациентов, поддающихся лечению, входят люди из группы риска заболевания, но не проявляющие симптомов, а также пациенты (больные), с выраженной текущей симптоматикой. Таким образом, способы по настоящему изобретению можно применять у всей популяции с профилактической целью, не нуждающейся в какой-либо оценке риска для субъекта - пациента. Способы по настоящему изобретению особенно полезны для людей с подтвержденным генетическим риском аутоиммунных патологий. В число таких людей входят люди, имеющие родственников с таким заболеванием и люди из группы риска, который подтвержден анализом генетических или биохимических маркеров.
Пациенты, страдающие амилоидозом АА-типа, могут не иметь симптомов в течение длительного периода времени. Поэтому постановка клинического диагноза амилоидоза АА-типа часто опаздывает или упущена до момента, пока амилоидные депо не распространяются в организме. Считается, что диагностированы только 53% случаев у пациентов с явной симптоматикой. См. Ь. Е. К. СопзиШпд, Шйерепйеп! Магке! КезеагсЬ (2003).
Изобретение относится к способам, полезным для осуществления лечения или профилактики заболевания, характеризующегося депонированием амилоидного белка, например, такого, как вышеописанные заболевания, включающие перечисленные в табл. 1. Некоторые способы полезны для осуществления лечения или профилактики заболевания, характеризующегося депонированием амилоидного белка, содержащего аминокислотные последовательности ЕЛ. В некоторых способах, если амилоидный белок содержит аминокислотную последовательность ДЕЛУ, не вводят антитело для проведения лечения или профилактики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного нарушения. Амилоидный белок может представлять собой любой из амилоидных белков, описанных выше, включая белки, перечисленные в табл. 1, например, такие, как сывороточный А-амилоидный белок, белок легкой цепи иммуноглобулина, такой как, νλ6 \νί1 или Ук, человеческий островковый амилоидный полипептид-предшественник ДАРР), бета-амилоидный пептид, транстиретин (ТТК) или АроА1.
Настоящие способы особенно полезны для людей, которые имеют достоверный риск амилоидоза АА-типа или амилоидоза АЬ-типа, имеют предполагаемый или подтвержденный диагноз амилоидоза АА-типа или амилоидоза АЬ-типа. В число таких людей входят без ограничения люди, имеющие хронические воспалительные заболевания, наследственные воспалительные заболевания и хронические микробные инфекции, такие как ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилозирующий спондилит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь Стилла у взрослых, синдром Бехчета, болезнь Крона, семейная средиземноморская лихорадка, лепра, туберкулез, бронхоэктатическая болезнь, язвы при пролежнях, хронический пиелонефрит, остеомиелит, болезнь Уиппла, миелома, макроглобулинемия, иммуноцитарная дискразия, моноклональная гаммапатия, оккультная дискразия. Хронические воспалительные и инфекционные состояния являются предпосылкой к развитию амилоидоза АА-типа и амилоидоза АЬ-типа, с проявлением в виде локального нодулярного амилоидоза, который может быть связан с хроническими воспалительными заболеваниями. В число людей с достоверным риском амилоидоза АА-типа также входят без ограничения люди, страдающие злокачественными новообразованиями, такими как ходжкинская лимфома, почечная карцинома, карциномы кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточная карцинома и волосатоклеточный лейкоз. Дополнительно, в число людей с достоверным риском амилоидоза АА-типа также входят без ограничения люди, страдающие лимфопролиферативными нарушениями, например, болезнью Кастлемана.
Лечение больных без симптомов и с явной симптоматикой можно начинать в любое время перед диагностикой или после диагностики основного амилоидного заболевания АА-типа или АЬ-типа. Лечение обычно подразумевает множественное введение доз на протяжении времени. Лечение можно контролировать путем оценки реакций антител, активированных Т-клеток (побочный эффект) или В-клеток на терапевтическое средство (например, АА-пептид), или посредством сцинтиграфии с радиометкой §АР в течение времени. При снижении реакции показано применение бустерной дозы.
XII. Схемы лечения.
В общем, схемы лечения охватывают введение средства, который эффективно индуцирует иммуногенный ответ на амилоидный белок, и предпочтительно, на агрегированную форму указанного амилоидного белка, например, АА- или АЬ-белка. Предпочтительно пациенту вводят иммуногенный фрагмент АА или АЬ или фрагмент ΧιΕΌΧ2. Для профилактических применений фармацевтические композиции или лекарства вводят пациенту, восприимчивому к возникновению амилоидоза, такому как амилоидоз АА-типа или амилоидоз АЬ-типа, или имеющему риск его возникновения, в количестве, достаточном для устранения или снижения риска, уменьшения тяжести болезни или отдаления времени начала болезни, включающего физиологические, биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы
- 59 028356 болезни, ее осложнения и промежуточные патологические проявления в ходе развития болезни. Для терапевтических применений средство вводят пациенту с подозрением на наличие указанной болезни или уже страдающему такой болезнью, по схеме, содержащей достаточное количество и частоту введения средства для излечения, или, по меньшей мере, частичного сдерживания или торможение ухудшения симптомов болезни (физиологических, биохимических, гистологических и/или поведенческих), включающих их осложнения и промежуточные патологические проявления в ходе развития болезни. В некоторых способах введение средства приводит к уменьшению или устранению ранней симптоматики у пациентов с еще неразвившейся характерной патологией амилоидоза АА-типа или АЬ-типа. Количество, адекватное для осуществления терапевтического или профилактического лечения, называют терапевтически или профилактически эффективной дозой. Сочетание количества и частоты введения, адекватное для осуществления терапевтического или профилактического лечения, называют терапевтически- или профилактически эффективной схемой введения. В схемах как профилактических, так и терапевтических, обычно осуществляют введение средств в нескольких дозах, до достижения достаточной иммунной реакции. Дозу и частоту введения, адекватные для осуществления терапевтического или профилактического лечения, называют терапевтически- или профилактически эффективными схемами введения. Обычно проводят контроль иммунной реакции у пациента и вводят повторные дозы, если начинается уменьшение иммунной реакции. Иммунную реакцию можно контролировать с помощью обнаружения антител, например, к АА или АЬ, в крови пациента, или путем определения содержания, например, АА или АЬ.
Эффективные дозы средств и композиции по настоящему изобретению для лечения вышеописанных состояний варьируют в зависимости от ряда разных факторов, включающих способы введения, от локализации предназначенной для введения, физиологического состояния пациента, вида пациента - человек или животное), от введения других лекарств и вида лечения профилактическое или терапевтическое лечение. Обычно пациент является человеком, но лечению также могут подвергаться млекопитающие нечеловеческого происхождения, включающие трансгенных млекопитающих. Для оптимизации безопасности и эффективности необходимо титрование лечебных доз. Количество иммуногена зависит от сопутствующего введения адъюванта, если в отсутствии адъюванта необходимы более высокие дозы. Количество иммуногена для введения иногда варьирует от 1 до 500 мкг на одного пациента и чаще от 5 до 500 мкг на одну инъекцию для введения человеку. Иногда применяют более высокую дозу 1-2 мг на инъекцию. Обычно для каждой инъекции человеку применяют по меньшей мере 10, 20, 50 или 100 мкг. Количество иммуногена также зависит от количественного отношения иммуногенного эпитопа в иммуногене к количеству иммуногена в целом. Обычно на 1 мкг иммуногена используют от 10-3 до 10-5 мкмоль иммуногенного эпитопа. Выбор частоты введения может варьировать в значительной степени от одного раза в день до одного раза в год, до одного раза в десять лет. В любой конкретный день введения дозы иммуногена указанная доза при сопутствующем введении адъюванта составляет более 1 мкг/на пациента, и обычно более 10 мкг/на пациента, и более 10 мкг/на пациента и обычно более 100 мкг/на пациента в отсутствии адъюванта. Обычная схема введения состоит из иммунизации с последующими бустерными инъекциями с интервалами времени, например, с интервалами в 6 недель. Другая схема введения состоит из иммунизации, с последующими бустерными инъекциями через 1, 2 и 12 месяцев. Другая схема подразумевает инъекции каждые два месяца в течение жизни. Альтернативно, бустерные инъекции можно проводить нерегулярно, при показаниях на основе контроля иммунной реакции.
Дозы нуклеиновых кислот, кодирующие иммуногены, варьируют в диапазоне от около 10 нг до 1 г, от 100 нг до 100 мг, от 1 мкг до 10 мг, или от 30 до 300 мкг ДНК на одного пациента. Дозы для инфекционных вирусных векторов варьируют от 10 до 100 или больше вирионов на дозу.
Для пассивной иммунизации с антителом (при комбинированных способах лечения) диапазон дозы составляет от около 0,0001 до 100 мг/кг, от 0,5 до менее 5 мг/кг, и чаще от 0,01 до 5 мг/кг, от 0,5 до 3 мг/кг массы тела пациента. Например, дозы могут составлять 1 мг/кг массы тела, или 10 мг/кг массы тела, или находиться в диапазоне от 1 до 10 мг/кг, или другими словами, составлять 70 мг или 700 мг, или, соответственно, быть в диапазоне от 70 до 700 мг для пациента массой 70 кг. Как дополнительный пример, дозы могут составлять менее 5 мг/кг массы тела, или 1,5 мг/кг массы тела, или находиться в диапазоне от 0,5 до 1,5 мг/кг, предпочтительно по меньшей мере 1,5 мг/кг. Примерные схемы лечения подразумевают однократное введение каждые две недели, или введение один раз в месяц, или однократно каждые 3-6 месяцев. В некоторых способах два или больше моноклональных антител с разной специфичностью связывания вводят одновременно, если доза каждого вводимого антитела находитсятся в пределах указанных диапазонов. Обычно антитело вводят способом многократного введения. Интервалы между введением монолитных доз могут составлять неделю, месяц или год. Интервалы также могут быть нерегулярными, и показание для введения определяют путем измерения уровня антитела к АА в крови пациента. В некоторых способах дозу подбирают до достижения концентрации антитела в плазме от 1 до 1000 мкг/мл, и в некоторых способах от 25 до 300 мкг/мл. Альтернативно, антитело можно вводить в виде рецептуры с замедленным высвобождением, в этом случае необходимо менее частое введение. Дозы и частота введения варьируют в зависимости от периода полувыведения антитела у пациента. В целом, самым продолжительным периодом полувыведения обладают человеческие антитела, следом за
- 60 028356 ними располагаются гуманизированные антитела, химерные антитела и антитела нечеловеческого происхождения. Дозы и частота введения могут варьировать в зависимости от профилактического или терапевтического предназначения лечения. Для применения с профилактической целью относительно низкую дозу вводят с относительно большими интервалами в течение длительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают получать лечение до конца жизни. Для применения с терапевтической целью иногда необходима относительно высокая дозировка с относительно короткими интервалами до уменьшения или прекращения прогресса заболевания, и предпочтительно, до тех пор, пока у пациента не выявляют частичного или полного улучшения симптоматики заболевания. После этого пациента можно переводить на профилактический режим.
Вещества для индукции иммунного ответа с целью профилактического и/или терапевтического лечения можно вводить парентерально, местно, внутривенно, перорально, подкожно, внутриартериально, внутричерепным путем, внутрибрюшинно, интраназально или внутримышечно. Наиболее общепринятым путем введения иммуногенного средства является подкожный, хотя другие пути введения могут быть одинаково эффективными. Следующим самым распространенным путем введения является внутримышечная инъекция. Указанный тип инъекции чаще всего выполняют в мышцы руки или ноги. В некоторых способах средства вводят непосредственно в конкретную ткань с образовавшимся депо, например, путем внутричерепной инъекции. Предпочтительным путем введения антитела является внутримышечная инъекция или внутривенное вливание (в комбинированных способах лечения). В некоторых способах конкретные терапевтические антитела вводят непосредственно в череп. В некоторых способах антитела вводят в виде рецептуры с замедленным высвобождением или с помощью устройства, например, устройства ΜΕΟ^ΑΏ™.
Вещества по изобретению часто вводят в виде фармацевтических композиций, содержащих активное терапевтическое средство, 1.е., и ряд других фармацевтически приемлемых компонентов. См. издание КепипдЮп'к РЬагтасеиРса1 δ№ι^ (15Л ей., Маск РиЬкккпд Сотрапу, БакОп, Реппкукаша, 1980). Предпочтительная лекарственная форма зависит от предполагаемого пути введения и терапевтического применения. Композиции могут также включать, в зависимости от желательной рецептуры, фармацевтически приемлемые нетоксичные носители или разбавители, которые представляют собой носители, обычно используемые для создания рецептуры фармацевтических композиций для введения животным или людям. Выбирают разбавитель, не влияющий на биологическую активность комбинированного препарата. Примерами таких разбавителей являются дистиллированная вода, физиологический фосфатнобуферный раствор, растворы Рингера, раствор декстрозы и раствор Хенкса. Дополительно, фармацевтическая композиция или рецептура может также включать другие носители, адъюванты, или нетоксичные, нетерапевтические, неиммуногенные стабилизаторы и тому подобное.
Фармацевтические композиции могут также включать большие макромолекулы с замедленным метаболизмом, такие как белки, полисахариды, например, хитозан, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты и сополимеры (такие как латексная функционализированная Сефароза™, агароза, целлюлоза и т. п.), полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот и липидные агрегаты (такие как капельки масла или липосомы). Дополнительно, указанные носители могут действовать как иммуностимулирующие средства (то есть, адъюванты).
Для парентерального введения средства по изобретению можно вводить в виде доз растворов или суспензий для инъекций указанного вещества в физиологически приемлемом разбавителе с фармацевтическим носителем, который может представлять собой стерильную жидкость, такую как вода-масло, солевой раствор, глицерин или этанол. Дополнительно, в композициях могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие средства, сурфактанты, регуляторы уровня рН, буферные вещества и тому подобное. Другими компонентами фармацевтических композиций являются масла минерального, животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло и вазелиновое масло. В общем, предпочтительными жидкими носителями, в частности, в растворах для инъекций, являются гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Антитела можно вводить в виде инъекции с замедленным всасыванием или имплантируемого препарата, рецептура которого может предусматривать длительное высвобождение активного компонента. В качестве примера, композиция содержит моноклональное антитело в рецептуре 5 мг/мл в водном буфере, состоящем из 50 мМ Ь-гистидина, 150 мМ №С1, с уровнем рН 6,0, который регулируют НС1. Композиции для парентерального введения обычно являются по существу стерильными, изотоническими, и их производят при соблюдении условий СМР (надлежащей медицинской практики) Управления по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств ΡΌΑ или подобных органов.
Обычно композиции изготовляют в форме для инъекций, как в виде жидких растворов, так и суспензий; также можно изготовлять твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией. Препарат также может быть эмульгированным или инкапсулированным в липосомах или микрочастицах, например, из полилактида, полигликолида или сополимера, для усиления адъювантного эффекта, как рассмотрено выше (см. Ьаидег, δ№ι^ 249, 1527 (1990) апй Напек, Αйνапсей Ргид Ое1кегу Ре\зе\ук 28, 97-119 (1997). Вещества по настоящему изобретению можно вводить в форме инъекций замедленного всасывания или имплантируемого препарата, рецептура которых может
- 61 028356 позволять длительное или пульсирующее высвобождение активного компонента.
Дополнительные рецептуры, подходящие для других способов введения, включают пероральные, интраназальные и легочные рецептуры, суппозитории и трансдермальное применение.
Связующие вещества и носители для суппозиториев включают, например, полиалкиленгликоли или триглицериды; такие суппозитории можно изготовлять из смесей с содержанием активного компонента в диапазоне от 0,5 до 10%, предпочтительно 1-2%. Пероральные рецептуры включают наполнители, такие как фармацевтические сорта маннита, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу и карбонат магния. Указанные композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, рецептур с постоянным высвобождением или порошков и содержат от 10 до 95% активного компонента, предпочтительно от 25 до 70%.
Местное применение может заключаться в трансдермальной или внутрикожной доставке. Местное применение можно облегчать с помощью совместного введения средства с холерным токсином или его детоксифицированными производными или субъединицами или с другими подобными бактериальными токсинами (См. С1епп еΐ а1. , №Лиге 391, 851 (1998)). Совместное введение может быть достигнуто при использовании компонентов в виде смеси или молекулярного связывания, полученного химическим сшиванием или экспрессией в виде слитого белка.
Альтернативно, можно осуществлять трансдермальную доставку, применяя кожный маршрут или используя трансферосомы ((Раи1 еΐ а1., Εηγ. ί. Iттиηο1. 25, 3521-24 (1995); Сеус еΐ а1., ВюсНет. Βίορίινδ. Α^ 1368, 201-15 (1998)).
ΧΣΠ. Схемы лечения с комбинированной лекарственной терапией.
Комбинированную терапию согласно изобретению можно проводить как единственную, так и в сочетании с другим видом терапии, для лечения или профилактики амилоидоза АА-типа. Также комбинированная терапия согласно изобретению может проводиться в сочетании с другим видом терапии, с помощью которой осуществляют лечение или профилактику основной амилоидной болезни, например, воспалительных заболеваний, хронических микробных инфекций, злокачественных новообразований, наследственных воспалительных заболеваний и лимфопролиферативных патологий. Существует широкий диапазон доступных видов лечения по коммерческому использованию, по клинической оценке и в доклинических разработках, которые можно выбирать для использования с настоящим раскрытым изобретением для осуществления профилактики и лечения амилоидоза АА-типа с помощью комбинированной лекарственной терапии. Такие лекарственные средства могут представлять собой одно или несколько соединений, выбранных без ограничения из нескольких основных групп, а именно, (ί) нестероидные противовоспалительные средства (НПВС; например, детопрофен, диклофенак, дифлунизал, этодолак, фенопрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, меклофенамеат, мефенамовая кислота, мелоксикам, набумеон, натрия напроксен, оксапрозин, пироксикам, сулиндак, толметин, целекоксиб, рофекоксиб, аспирин, холиновый эфир салициловой кислоты, салсалат и натриевый и магниевый эфиры салициловой кислоты); (ίί) стероиды (например, кортизон, дексаметазон, гидрокортизон, метилпреднизолон, преднизолон, преднизон, триамцинолон); (ίίί) БПРП, то есть базовые противоревматические препараты, модифицирующие течение болезни (например, циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, лефлуномид, циклофосфамид, гидроксихлорокин, сульфазалазин, Ό-пеницилламин, миноциклин и препараты золота); или (ίν) рекомбинантные белки (например, ΕNΒКΕ^® (этанесепт, растворимый рецептор ТОТ1) и КΕΜIСΑ^Ε® (инфликсимаб) химерное моноклональное анти-ТОТ1 антитело).
Продолжительность комбинированной терапии зависит от типа основного заболевания, которое лечат, от возраста и состояния пациента, стадии и типа болезни пациента и от реакции пациента на лечение. Врач может непосредственно наблюдать терапевтические эффекты и осуществлять любую необходимую регуляцию. Дополнительно, человек с более высоким риском развития амилоидоза АА-типа (например, человек с генетической предрасположенность или наличием в анамнезе воспалительного заболевания или других основных заболеваний), или амилоидоза ΑΌ-типа может получать профилактическое лечение для замедления или отдаления во времени развития ΑΌ и АА агрегатов, таких как фибриллы.
Можно осуществлять независимый контроль дозировки, частоты и способа введения каждого компонента комбинированной терапии. Например, одно соединение можно вводить перорально три раза в день, тогда как второе соединение можно вводить внутримышечно один раз в день. Комбинированную терапию можно проводить периодическими циклами, которые включают перерывы в лечении. Также соединения можно объединять в одной рецептуре, таким образом, что при одном введении доставляются оба соединения. Комбинированный препарат по изобретению также может быть предоставлен в виде компонентов фармацевтической упаковки. Лекарства могут находиться в рецептуре совместно или раздельно, и в индивидуальной по количеству дозировке. Каждое соединение смешивают с подходящим веществом носителя, и обычно оно присутствует в количестве от 1 до 95% веса от общего веса композиции.
Композиция может представлять собой лекарственную форму, которая подходит для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного), ректального, трансдермального, интраназального, влагалищного, ингаляционного или глазного введения. Таким образом, фор- 62 028356 мой композиции могут быть, например, таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, суспензии, эмульсии, растворы, гели, включающие гидрогели, пасты, мази, кремы, пластыри, примочки, устройства для доставки, суппозитории, клизмы, растворы для инъекций, импланты, спреи или аэрозоли. Фармацевтические композиции можно создавать согласно общепринятой фармацевтической практике (см., например, КепнпдЮп: ТЬе δ^ι^ апб РгасЬсе о£ РЬагтасу, (191Ь еб.) еб. А. К. 0еппаго, 1995, Маск РиЪЬзЫпд Сотрапу, Εа8ΐοп, Ра. и Εпсус1οреб^а о£ РЬагтасеиЬса1 ТесЬпо1оду, еб§. ί. δγ-агЪпск апб ί. С. Воу1ап, 19881999, Магсе1 Реккег, КУ.
Χ^. Способы контроля или диагностики амилоидоза АА-типа или АЬ-типа.
Способы контроля или диагностики амилоидоза АА-типа или АЬ-типа включают измерение концентраций в плазме δАА и С-реактивного белка, проведение биопсии тканей (почечной, ректальной, желудочной, гингивальной, жировой, ткани слюнных желез, лабиальных желез) и гистологического анализа с окрашиванием Конго красным и/или иммуноокрашиванием со специфичными антителами против агрегатов АА или АЬ, таких как фибриллы. Изобретение относится к способам обнаружения ответа антитела на пептид АА у пациента, страдающего амилоидозом АА-типа или восприимчивого к нему. Способы особенно полезны для контроля проводимого у пациента курса лечения. Указанные способы можно применять для контроля как терапевтического лечения пациентов с выраженной симптоматикой, так и профилактического лечения у бессимптомных пациентов. Некоторые способы подразумевают определение исходных показателей ответа антитела у пациента перед введением дозы иммуногенного средства, и сравнение их с показателями иммунного ответа после лечения. Значительное увеличение показателей ответа антитела (то есть, больше чем обычные границы экспериментальной ошибки в повторных измерениях одного и того же образца, выраженной в виде одного стандартного отклонения от средних значений таких измерений), сигнализирует о положительном результате лечения (а именно, что введение средства вызывает иммунный ответ или усиливает его). Если происходит незначительное изменение или уменьшение показателей ответа антитела, это указывает на отрицательный результат лечения. В общем, у пациентов, проходящих начальный курс лечения иммуногенным средством, предполагается увеличение ответа антитела при последовательном введении доз, который в конечном счете достигает плато. Обычно продолжают вводить средство при нарастании ответа антитела. Достижение плато является индикатором возможного прекращения или уменьшения дозы или частоты введения препарата.
В других способах контрольные значения (то есть, среднее значение и стандартное отклонение) ответа антитела определены для контрольной популяции. Обычно люди из контрольной популяции не получают предшествующего лечения. Затем проводят сравнение контрольного значения и измеренных показателей ответа антитела у пациента после введения терапевтического средства. Значительное увеличение относительно контрольного значения (например, более чем на одно стандартное отклонение от среднего значения) говорит о положительном результате лечения. Отсутствие значительного повышения или уменьшение показателей ответа антитела указывает на отрицательный результат лечения. Введение средства обычно продолжают при нарастании ответа относительно котрольных значений. Как указано выше, достижение плато относительно контрольных значений является индикатором возможного прекращения или уменьшения дозы или частоты введения препарата.
В других способах контрольные значения ответа антитела (например, среднее значение и стандартное отклонение) определяют в контрольной популяции людей, которые подвергались введению терапевтического средства, и у которых реакция на лечение в виде ответа антитела достигла плато. Измеренные значения ответа антитела у пациента сравнивают с контрольными значениями. Если имеется незначительное отличие от контрольных показателей, измеренных у пациента (например, больше чем на одно стандартное отклонение), лечение может быть прекращено. Если показатели пациента значительно ниже контрольных значений, гарантировано длительное введение средства. Если показатели пациента остаются ниже контрольных значений, это может быть показанием для изменения режима лечения, например, для применения другого адъюванта, фрагмента или для переключения на пассивное введение.
В других способах для определения необходимости возобновления лечения проводят контроль у пациента, не проходящего текущего лечения, который при этом прошел курс лечения раньше. Показатели ответа антитела, измеренные у пациента, можно сравнивать с показателями ответа антитела, которые пациент показывал после предыдущего курса лечения. Значительное уменьшение относительно предыдущих показателей (то есть, больше чем обычная граница погрешностей при повторных измерениях одного и того же образца) служит показанием для возможного возобновления лечения. Альтернативно, измеренные у пациента показатели можно сравнивать с контрольными значениями (среднее значение плюс стандартное отклонение), которые определяют в популяции пациентов после прохождения курса лечения. Альтернативно, показатели, измеренные у пациентов, можно сравнивать с контрольными значениями в популяциях пациентов после профилактического лечения, у которых отсутствуют симптомы болезни, или в популяциях пациентов после терапевтического лечения, у которых выявлено улучшение патологических показателей. Во всех этих случаях значительное уменьшение относительно контрольного уровня (то есть, больше чем на одно стандартное отклонение) является показанием для возобновления лечения пациента.
В некоторых способах применяется сцинтиграфия с меченным йодом-123 или йодом-125 сыворо- 63 028356
123 125 123 точным Р-амилоидным компонентом ( I-δАΡ или I-δΛΡ). Пациентам внутривенно вводят I-δАΡ или 125I-δАΡ и проводят визуализацию с помощью гамма-камеры. Радиосцинтиграфия с δАΡ представляет собой полезный способ контроля развития амилоидоза у пациентов и оценки их лечения. Он специфичен для амилоида и может применяться для количественного контроля локализации и количества амилоидных депо у пациентов. У здоровых субъектов или у пациентов, не страдающих амилоидозом, не происходит накопление 123I-δАΡ и 125I-δАΡ. Радиосцинтиграфию с δАΡ можно применять для контроля динамики метаболизма в амилоиде, и с ее помощью можно оценивать эффективность лечения, направленного на регресс амилоидных депо. Дополнительно, радиосцинтиграфия с δΛΡ является неинвазивным способом и позволяет полностью сканировать тело.
Способы изобретения подразумевают определение исходных показателей ответа антитела у пациента перед введением дозы средства, и сравнение их с показателями иммунного ответа после лечения пациента. Значительное увеличение показателей ответа антитела (то есть, больше чем обычные границы экспериментальной ошибки в повторных измерениях одного и того же образца, выраженной в виде одного стандартного отклонения от средних значений таких измерений), сигнализирует о положительном результате лечения (а именно, что введение средства приводит к возникновению иммунного ответа или к его усилению). Если происходит незначительное изменение или уменьшение показателей ответа антитела, это указывает на отрицательный результат лечения. В общем, у пациентов, проходящих начальный курс лечения иммуногенным средством, предполагается увеличение ответа антитела при последовательном введении доз, который в конечном счете достигает плато. Введение средства обычно продолжают при нарастании ответа антитела. Достижение плато является индикатором возможного прекращения или уменьшения дозы или частоты введения препарата.
Образцом ткани для анализа обычно является кровь, плазма, сыворотка, слизистая или спинномозговая жидкость от пациента. Образец анализируют для определения имунного ответа на любую форму пептида АЬ или АА. Иммунный ответ можно определить по присутствию антител, которые специфически связываются с пептидом АЬ или АА. Антитела могут быть обнаружены в анализе связывания с лигандом, который специфически связывается с антителами. Обычно лиганд вляется иммобилизированным.
Связывание можно обнаруживать с использованием меченого антиидиотипического антитела.
В комбинированных схемах, использующих и активное и пассивное введение, можно применять аналогичные подходы для контроля уровня антитела, создаваемого пассивной иммунизацией.
Также можно применять способы диагностики амилоидоза, которые подразумевают, например, введение субъекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, который связан с обнаружимой меткой, при котором антитело или его фрагмент специфически связываются с эпитопом, включающим ΧιΕΌΧ2 в агрегированном амилоидном белке, при этом Χ1 и Х2 представляют собой любые аминокислоты, и обнаружение присутствия или отсутствия связанного антитела или его фрагмента. Обнаружение связанного антитела или фрагмента поддерживает диагноз амилоидоза. Полезные для диагностики амилоидоза антитела и фрагменты включают антитела, раскрытые в настоящем изобретении.
Диагностические антитела или фрагменты по настоящему изобретению можно вводить, например, путем внутривенной инъекции в тело пациента, или непосредственно в мозг путем внутричерепной инъекции. Дозу антитела легко определит специалист в данной области техники. Обычно антитело несет метку, хотя в некоторых способах присутствует немеченое антитело, и для связывания с этим антителом используют второе меченое средство. Выбор метки зависит от способов обнаружения. Например, для оптического обнаружения подходит флуоресцентная метка. Использование парамагнитных меток подходит для томографического обнаружения без хирургического вмешательства. Можно применять радиометки, включаяющие 211А!, 212В1, 67Си, 125р 131! “Тп, 32Ρ, 212ΡΚ 186Ке, 188Ке, 15^т, 99™Το или 90Υ. Такие метки можно обнаруживать с помощью позитронно-эмиссионной томографии ΡΕΤ или мультифункциональной томографической системы δΡΕСΤ или других подходящих технологий.
Диагноз можно устанавливать также путем сравнения количества, размера, и/или интенсивности меченых участков, с соответствующими исходными значениями. Исходные значения могут отражать средние показатели в популяции не больных людей. Исходные значения также могут отражать предыдущие показатели, полученные у этого же пациента. Например, у пациента можно определять исходные значения и затем проводить сравнение измеренных значений с исходными значениями. Увеличение значений относительно исходных показателей подтверждает диагноз амилоидоза АА-типа.
Диагностические способы по изобретению можно применять для диагностики амилоидозного заболевания, включающего амилоидоз АА-типа, амилоидоз АЬ-типа, болезнь Альцгеймера, умеренное когнитивное нарушение, амилоидную полинейропатию, средиземноморскую лихорадку, синдром МаклаУэллса, реактивный системный амилоидоз, связанный с системными воспалительными болезнями, амилоидоз, связанный с миеломой или макроглобулинемией, амилоидоз, связанный с иммуноцитарной дискразией, моноклональной гаммопатией, оккультной дискразией, или локальный нодулярный амилоидоз, связанный с хроническими воспалительными болезнями.
Животные модели амилоидоза АА-типа.
Амилоидоз АА-типа можно экспериментально вызывать у мышей с выраженным повышением кон- 64 028356 центрации 8АА посредством инъекции нитрата серебра, казеина или липополисахарида. Указанные средства активируют выработку цитокинов. См. 8ее 8к1ппег е! а1. ЬаЬ 1п\'еЫ. 36:420-427 (1997) апб Κΐ8Пе\'8ку е! а1. ВаППеге '8 Сйп. 1ттипо1. 1ттипора!Ьо1. 8(3) 613-626 (1994). В течение 2 или 3 недель после стимуляции воспаления у животных развиваются системные депо АА, сходные с депо, которые выявляют у больных с амилоидозом АА-типа. Эта латентная фаза значительно сокращается, если мышам вводят сопутствующую внутривенную инъекцию белка из экстракта мышиной селезенки или печени, несущей АА-амилоид. См. Ахе1габ е! а1. ЬаЬ 1п\'е8Е 47(2): 139-46 (1982). Действие таких препаратов, ускоряющих амилоидогенное развитие, назвали фактором усиления амилоидоза (АЕР). Авторы Ьипбтагк е! а1. сообщает, что действующим началом АЕР однозначно является сама АА-фибрилла. Дополнительно, они показали, что этот материал обладает чрезвычайно мощным действием, будучи активным в дозах менее 1 нг, и сохраняет свою биологическую активность на протяжении значительного периода времени. Примечательно, что АЕР также эффективен при пероральном введении. Авторы пришли к заключению, что АА и возможно другие формы амилоидоза относятся к трансмиссивным болезням, сходным с прионсвязанными патологиями. См. Ьипбтагк е! а1. Ргос. ΝηΙ. Асаб. 8с1 99: 6979-6984 (2002).
Амилоидов АА-типа также можно индуцировать у трансгенных линий мышей, несущих ген человеческого интерлейкина-6 при контроле с энхансером металлотионеин-Ι, в результате чего заметно возрастает концентрация 8АА, и к 3-месячному возрасту развивается амилоидоз в селезенке, печени и почках. К моменту смерти в возрасте около 8-9 месяцев в органах таких трансгенных мышей обнаруживали обширные амилоидные депо. См. 8о1отоп е! а1., Ат. 1. Ра!Ьо1. 154 (4) :1267-1272 (1999).
Модель трансгенного быстро индуцируемого амилоидного заболевания (ТК1АЭ) у трансгенных мышей является усовершенствованной вышеупомянутой трансгенной мышиной моделью. Мыши ТК1АЭ несут ген человеческого интерлейкина-6 при контроле промотора гистосовместимости Н-2ЬС. Введение АЕР мышам ТК1АЭ в возрасте 8 недель приводит к развитию выраженных АА-амилоидных депо в селезенке и печени в течение 3-4 недель. Впоследствии указанный процесс распространяется на другие органы, и через 4-6 недель приводит к смерти. Развитие системного амилоидоза происходит быстрее по сравнению с описанной выше моделью трансгенных мышей. См. Публикации ИиАегейу ой Теппе88ее Ке8еагсЬ Согрогайоп, \АО 01/77167, Фрамакопея, \АО 95/35503 и 8спрр8, \АО 95/30642 ^а11 е! а1. Ату1о1б 12(3): 149-156 (2005) (каждая из которых включена во всех целях по настоящему изобретению со ссылкой).
В биомедицинских исследованиях широко задействован мелкий примат Нового Света из Бразилии обыкновенная игрунка (Са11ййге1х _)ассйи8). Авторы Ьиб1аде е! а1. сообщают, что у обыкновенной игрунки обнаруживали амилоидные депо в одном или больше органах, включающих печень, надпочечники, почки и кишечник. Авторы установили, что у этого примата развитие амилоидоза АА-типа может быть обусловлено наследственными факторами. В этой связи, обыкновенная игрунка может служить уникальной экспериментальной моделью для исследования патогенеза и терапии АА-амилоидоза и других системных амилоидных заболеваний. См. Ьиб1аде е! а1. Уе! Ра!Ьо1 42: 117-124 (2005).
Порода собак шарпей несет аминокислотную последовательность АА с мотивом -АЕЭ8 и является особенно восприимчивой к АА-амилоидозу. Она представляет собой природную модель системного ААамилоидоза, позволяющую оценивать новые диагностические и терапевтические применения АА амилоид-специфичных антител и других соединений.
Примеры
Пример 1. Фрагменты АА.
Пептиды, соответствующие аминокислотам 71-75 -СНЕЭТ. как описано Уатато!о и М1дйа Ргос. Ν!1. Асаб. 8с1. И8А 82:2915-2919, были синтезированы компанией Апа8рес, 8ап 1о8е, Калифорния, США. Были индуцированы поликлональные антитела (РаЬ) АА и выделена фракция иммуноглобулина, как ранее описано авторами Вагб, Р. Е! а1., (2000) ΝπΙ. Меб. 6, 916-919.
Пример II. Иммуноген для изготовления мышиных антител.
Использовали эпитоп СНЕИТ, (8ЕЦ ГО N0: 3) с СС-линкером на Ν-конце. Пептид ЕРКВ-39, содержащий указанный эпитоп, соединяли в паре с овечьим анти-мышиным антителом. Пептид ЕРКВ-39 был получен в компании Апа8ес, Сан-Хосе, Калифорния. Очевидно, что полученные антитела являются специфичными к неоэпитопу, поскольку они не связываются специфически с пептидом, который охватывает области СНЕОГОАОЦЕ, (8ЕЕ) ГО N0: 89).
Пример ΙΙΙ. Методика иммунизации.
Мышам А/1 в возрасте шести недель внутрибрюшинно вводили 50 мкг ЕРКВ-39/овечьего антимышиного 1дС с полным адъювантом Фрейнда (СРА), с последующим введением неполного адъюванта Фрейнда (1РА) один раз в две недели, проведя в общей сложности три инъекции. За три дня до слияния в хвостовую вену вводили 50 мкг ЕРКВ-39 овечьего анти-мышиного (8АМ) 1дС в 90 мкл фосфатнобуферного раствора (ФБР). Титр, оцененный в анализе ЕЫ8А, составлял 1/10000 при высоком исходном уровне.
Номером слияния для ЕРКВ-39 является 1Н80. Ниже приведен список клонов и клонов предельных разведений, которые являются активными:
- 65 028356
7Ώ8.29.19.47*, 39, 66 809.3.4.51.22*, 30,46 2А4.20.44.77*, 13, 14
1§О2Ь к 1§О2Ь к 1§О2Ь к
7Ό47, 8С9 и 2А77 определены как предпочтительные субклоны. Очевидно, что полученные антитела являются специфичными к неоэпитопу, поскольку они не реагируют с пептидом, который охватывает С-концевой сайт расщепления ЗАЛ.
Пример ТУ. Связывание антитела с агрегированным и растворимым АА.
Определение сывороточных титров (по серийным разведениям) и моноклональное связывание антитела с агрегированным АА выполняли посредством анализа ЕОЗА, как ранее описано авторами ЗсЬепк Ό. Е! а1., (1999) №Циге 400, 173-177. Растворимый АА относится к фибриллам АА, разрушенным ультразвуком в диметилсульфоксиде. Серийные разведения антитела инкубировали с Ι2'Ί-ΛΛ с числом импульсов в минуту 50000 срт в течение ночи при комнатной температуре. 50 мкл жидкого раствора, содержащего 75 мг/мл белка А-сефарозу (АтегзЬат Вюзаепсез, Иррза1а, Швеция) /200 мкг антимышиного кроличьего ЦС (Н+Ь) Оаскзоп IттиηοКезеа^сЬ, Vез! Сгоуе, Пенсильвания, США) инкубировали с разведенными антителами в течение 1 ч при комнатной температуре, дважды промывали и производили подсчет в гамма-счетчике VаТ1ас (РегкшЕ1тег ЬТГе Заепсе, Сгоуе, Иллинойс, США). Все этапы выполняли в буфере для радиоиммунологического анализа, состоящего из 10 мМ Трис, 0,5 М №С1, 1 мг/мл желатина и 0,5% №шйе! Р-40, уровень рН 8,0.
Пример У. Анализ структуры Уλ6 νΐ1.
Последовательности экспрессируемых генов зародышевой линии легких цепей человеческих Ук и Уλ иммуноглобулина показаны в фигурах 21 и 22. За исключением подгрупп к1а, λθ, λ3а и λ3ο, в них имеется остаток Си-Азр, и указанная пара находится в положениях 81 и 82 во всех Ук и Уλ генных последовательностях зародышевой линии (фигуры 21 и 22). Дополнительно, вторая зародышевая линия, кодируемая парой С1и-Азр в положениях 50 и 51, является уникальной для гена Уλ6 зародышевой линии. Таким образом, Уλ6 νί1 содержит пары С1и-Азр и в 50-51 и в 81-82. Обе боковые цепи остатков 50 и 51 доступны на поверхности Уλ6 νί1, по данным рентгенкристаллографии (фиг. 24). Напротив, только боковая цепь С1и81 выступает на поверхность, и боковая цепь Азр82 частично заглублена и, очевидно, взаимодействует (или посредством электростатических взаимодействий или Н-связи) с боковыми цепями Ьуз79 и Агд61 (фиг. 25).
На основе этих исследований рентгеновской кристаллической структуры, учитывая относительную доступность боковых цепей ОАзр, авторы по настоящему изобретению пришли к заключению, что заглубленные С1и81 становятся доступным, поскольку домен принимает агрегированную (например, фибриллярную) структуру (или становится частично денатурированным), таким образом открывается криптическая антигенная детерминанта, скрытая в других случаях.
Пример УТ. Анализ связывания анти-АА моноклональных антител с Уλ6.
А. Поверхностный плазмонный резонанс.
Для определения кинетики связывания нескольких моноклональных антител с фибриллами и мономером Уλ6 νί1 применяли поверхностный плазмонный резонанс. При концентрации 6,6 нМ все 3 антитела связывались с иммобилизированными синтетическим Уλ6 νί1 фибриллами с КО около 1 нМ, и указанное значение сопоставимо со значением их реактивности с мышиными АА-фибриллами (фиг. 26). Отклонение (выраженное в единицах КИ) во время фазы связывания было сходным со значением для тАЬ 7Ό8 и 2А4, но на 50% ниже, чем для 8С9. В этой связи предполагается, что плотность указанного антитела на фибриллах была ниже, чем у 2 других средств, поскольку расчетные показатели аффинности были одинаковыми для всех 3 антител. МАЬ ^СТ служило контролем и не проявляло связывания с фибриллами Уλ6 νί1.
Титрование тАЬ 7Ό8 в диапазоне от 6,6 нМ до 33,3 нМ вызывало ожидаемое уменьшение максимального отклонения, связанного с коп (фиг. 27). В общем, кинетика связывания была сходной при каждой концентрации, хотя в этих пилотных экспериментах значение КО для 7Ό8 при 26,6 нМ действительно отличались от значений, полученных при других концентрациях.
Для оценки специфичности реакции и гарантии, что связывание тАЬ с фибриллами происходит посредством классического взаимодействия Р(аЬ)-антиген (в противоположность Рс-опосредованному связыванию или неспецифической адсорбции), данные о связывании были получены в присутствии иммуногенного пептида (р39) в концентрации 20 и 1 мкг/мл (фиг. 8). Пептид р41, который не связывается с тАЬ 7Ό8 при низких концентрациях, служил контролем. В присутствии 20 мкг/мл пептида р41, кинетика связывания тАЬ 7Ό8 с фибриллами Уλ6 νί1 была идентичной 7Ό8 единственному. Напротив, иммуногенный пептид р39 при 1 мкг/мл вызывал больше, чем 2-кратное уменьшение степени связывания, что оценивали по отклонению измеренного сигнала (фиг. 28). Ингибирование связывания с фибриллами 7Ό8 почти полностью подавлялось при использовании 20 мкг/мл пептида р39. Эти данные указывают, что тАЬ 7Ό8 связывается с фибриллами посредством Р(аЬ) области молекулы, поскольку это взаимодействие может быть полностью подавляться иммуногенным пептидом.
- 66 028356
С помощью биосенсора В1Асоге исследовали реактивность тАЬ 7Ό8 с мономером νλ6, иммобилизированном на чипе. Антитело не реагировало с мономерным белком. Эти данные указывают, что антиген-связывающий участок, распознаваемый тАЬ 7Ό8, присутствует на фибриллах, но не на растворимом белке-предшественнике, подразумевая, что антиген имеет конформационную или криптическую структуру.
В. Иммуногистохимия.
Иммуногистохимический анализ выполняли следующим образом: срезы толщиной 6 мкм, отрезанные от фиксированных в формалине и залитых в парафин блоков, подвергали антигенной демаскировке путем инкубации с СкгаР1и8 (ВюОеиех, 8аи Ватой, Калифорния) в течение 30 мин при 90°С. Ткани подвергали иммуноокрашиванию раствором 3 мкг/мл тАЬ 2А4, 7Ό8 или 809. Контролем являлось 1§О2а тАЬ ΤΥ11. Конъюгированное с НВРО лошадиное антимышиное 1д антитело (1ттРВЕ8§ Ьшуегка1 ВеадеШ, Vесΐо^ ЬаЬк, ВигНидате, Калифорния) использовали в качестве вторичного реактива. Слайды обрабатывали 3,3'-диаминобензидином ^ес1ог ЬаЬк) и исследовали с помощью микроскопа Ье1са ΌΜ500. Взаимодействие моноклональных антител с депо амилоидных тканей АЬк и Лк-λ также изучали с использованием иммуногистохимических иследований. Как показано в фиг. 29, амилоидные депо в щитовидной железе пациента, которые состояли из Х2 фрагментов, подвергались иммуноокрашиванию с помощью 7Ό8, 2А4 и 809. Области реактивности коррелировали с амилоидными депо, обозначенными зелено-золотым двойным лучепреломлением, которое видно на срезе ткани, окрашенном Конго красным. Самая впечатляющая реактивность была достигнута с тАЬ 7Ό8 и 2А4 тАЬ, тогда как 809, при положительных результатах, проявляло намного более слабую реакцию. Эти качественные показатели хорошо соотносятся с анализами В1Асоге, в которых отмечено меньшее связывание 809 с фибриллами νλ6 ^ί1, чем показывали другие 2 реактива (фиг. 26). Изотип соответствовал тАЬ ΤΥ11, который служил контролем и не проявлял амилоидной иммунореактивности.
Аминокислотная последовательность этого белка λ2 (8Е0 ΙΌ N0: 86) (показанная ниже) содержит зародышевую линию, которую кодируют остатки 01и и Акр в положении 81 и 82, соответственно.
1= 21 2=1 55
Изучение депо АЬ-к-амилоидной ткани показало положительную реактивность 2А4, и в меньшей степени 7Ό8 и 809. Было вновь выявлено соответствие между иммуноокрашиванием и двойным лучепреломлением, амилоидные участки окрашивались Конго красным. Реактивность тАЬ ΤΥ11 отсуствовала.
С. Радиовизуализация амилоидомы АЬ-типа с использованием 7Ό8, меченого 125Ι.
Экспериментальная модель амилоидомы АЬ-типа ίη νί\Ό использовали для изучения возможности визуализации человеческого АЬ-амилоида с радиометкой тАЬ 7Ό8. Эффективность радиомеченого 7Ό8, определяемая электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия 8Ό8РА0Е, показала, что указанная метка 125Ι включена в обе цепи и 1дН и 1дЬ, и достоверно не выявлено полос, связанных с фрагментацией или аггрегацией. Визуализация с помощью 8РЕСТ/СТ мышей, несущих индуцированную АЬ-амилоидома, показала, что меченое 125Ι антитело локализовано в индуцированной, расположенной в области спины амилоидной массе, о чем свидетельствует накопление радиомеченых антител в амилоиде, по сравнению с тканями без амилоидного поражения (например, печень, сердце, селезенка и почки). Постороннее тАЬ 1д0 с радиометкой не накапливалось в амилодной массе; вместе с тем, обнаружен свободный радиоактивный йодид, который накапливался в щитовидной железе, что говорит о катаболизме и дегалогенировании 1д0 антитела. Распределение меченого тАЬ 125Ι-7Ό8 у мышей, несущих амилоидому, определяли количественно, путем измерения активности, связанной с амилоидной массой, по сравнению с показателями из печени, селезенки, почки, желудка, сердца и легкого. Эти данные подтверждали анализом с визуализацией 8РЕСТ/СТ. Через 72 ч после инъекции (в этот момент времени производили забор ткани и получали изображения), амилоидома содержала около 8% ГО, что примерно в 4 раза превышает уровень, отмеченный в печени (в которой локализуется катаболизм тАЬ), и в сердце, где предполагается высокая остаточная активность кровяного пула. Активность, определяемая в легком, была обусловлена способом эвтаназии (данные не показаны).
Для подтверждения данных биораспределения производили забор тканей амилоидомы, а также печени, селезенки, сердца и почек, и срезы тканей были подготовлены к авторадиографическому анализу. Радиоактивное мечение проводили следующим образом: антитело 7Ό8 метили 125Ι 2 в дозе тСз. не содержащим редуктант (Регкш Е1тег), с использованием ограничивающего количества хлорамина Т, и суспендировали в ФБР, содержащем 5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА/ФБР). Несвязанный изотоп и белковые агрегаты удаляли с помощью эсклюзионной жидкостной хроматографии на колонке ЬИ:годе1 АсА34 (Атегккат Ркагташа). Для экспериментов визуализации собирали фракции, содержащие
- 67 028356 мономер 1д0. Радиохимический выход составлял около 50%, обеспечивая специфичную активность около 25 цСРмкг. Меченое 125Ι тΑЪ подвергали δ^δ-ΡΑ0Ε (10% гели) в присутствии или отсутствии редуцирующего средства и анализировали с помощью устройства Циклон для фосфор-визуализации. Согласно изображениям δΡΕСΤ и измерениям биораспределения, авторадиограммы подтвердили значительное накопление 125Ι -7Ό8 в амилоидоме по сравнению с печенью. Не было выявлено какого-либо захвата радиомеченого антитела 125Ι-7Ό8 в любых других органах (кроме ожидаемой активности в печени, связанной с катаболизмом антитела). Хотя тΑЪ 7Ό8 имело относительно равномерное распределение в общей амилоидной массе, наблюдалась слегка более высокая плотность в периферических зонах на границе амилоид-живот. Отсутствовал захват радиомеченого контрольного 1д0 в каких-либо органах.
Ό. Выводы и заключение.
С помощью поверхностного плазмонного резонанса, иммуногистохимии и радиовизуализации ш νί\Ό установлено, что АА-реактивные антитела 2А4, 7Ό8 и 809 связываются с амилоидом ΑΣ-типа, и фибриллами (Кк около 1 нМ) происходящими из легкой цепи иммуноглобулина. Вероятно, указанное взаимодействие происходит в глубоко консервативных 01ιι-Α8ρ аминокислотах в положениях 81 и 82, соответственно, образующих криптический линейный эпитоп, который становится выступающим только при вставке амилоидогенной легкой цепи в фибриллы.
Пример νίί. Анализ ΕΣΙδΑ, демонстрирующий связывание антитела с пептидами Χ1ΕΌΧ2.
Анализ ВМсоге проводили для оценки связывания антител 2А4, 7Ό8 и 804 на пептидах разных последовательностей. Как показано ниже в табл. 4, было выявлено, что антитела реагировали с пептидами, имеющими аминокислотную последовательность ΧιΕΌΧ2. Интересно, что антитела не реагировали с пептидами, имеющими дополнительные С-концевые остатки. Потому предполагается, что антитела специфически связываются с неоэпитопом, образованным расщеплением δΑΑ, чтобы создать свободный Сконец. Однако, как показано в примере ν, свободный конец не является необходимым для связывания этих антител с νλ6 νίί, а скорее происходит конформация доменов ΧιΕΌΧ2 с их адаптацией для связи с антителами, когда они принимают агрегированную (например, фибриллярную) структуру (или становятся частично денатурированными), таким образом открывается криптическая антигенная детерминанта, скрытая в других случаях.
Таблица 4
Поипяк.· Пептид антитела
2А4(39) СООНЕЭТ, (ЗЕр ГО N0 87) пол
40 ΟΟΟΑΕϋδ, (5Е<2 ΙΠ N0: 88) пол
41 ΟΗΕΟΤΙΑυςΕ, (5Ер ГО N0: 89) ОТР
64 СССАЕЭТ, (ЗЕр ГО N0; 90) пол
65 ΟΟΟΗΑϋΤ, (5Εζ> ГО N0: 91) 5УЕАК.
66 СООНЕАТ, (ЗЕр ГО N0: 92) ОТР
67 СООНЕОА, (ЗЕр ГО N0: 93 ) пол
68 СООНЕОТМ, (ЗЕр ГО N0: 94) ОТР
69 СССНЕОТМА, (ЗЕр ГО N0: 95) ОТР
70 СООНЕОТМАЭ, (ЗЕР ГО N0: 96) ОТР
71 СОСНЕО, (8Е0 10 N0: 97) положительный 7
7ά8 (39) СООНЕОТ, (БЕр ГО N0: 87) пол
40 СООАЕОЗ, (ЗЕО 10 N0: 88) пол
41 ΟΗΕΟΤΙΑϋΟΕ, (ЗЕР ГО N0; 89) ОТР
64 СООАЕОТ, (ЗЕр ГО N0; 90) пол
65 ССОНАОТ, (ЗЕО 10 N0: 91) ОТР
66 СООНЕАТ, (ЗЕР ГО N0: 92) ОТР
67 СООНЕОА. (ЗЕО ГО N0; 93) ПОЛ
68 СООНЕОТМ, (ЗЕр ГО N0: 94) ОТР
69 СССНЕОТМА, (ЗЕр ΙΟ N0: 95) ОТР
70 ССОНЕОТМАО, (ЗЕО ГО N0; 96) ОТР
71 СООНЕО, (ЗЕО ГОЫО: 97) ОТР
864 (39) СООНЕОТ, (ЗЕр ГО N0; 87) пол
40 СООАЕОЗ, (ЗЕр ГО N0: 88) пол
41 ΟΗΕϋΤίΑΟρΕ, (ЗЕр 10 N0: 89) ОТР
64 СООАЕОТ, (ЗЕР ГО N0: 90) пол
65 СООНАОТ, (ЗЕО ГО N0; 91) ОТР
66 СООНЕАТ, (ЗЕр ГО N0: 92) ОТР
67 СООНЕОА, (ЗЕр ГО N0:93) Слабый
68 СООНЕОТМ, (5Е0 ГО N0. 94) п<1ЛОЙ”“ии„ ,
69 СООНЕОТМА, (8Е0 ГО N0; 95) поло7„;-Еый ,
70 ССОНЕОТМАО, (ЗЕР 10 N0: 96) ОТР
71 СООНЕО, (ЗЕО ГО ΝΟ: 97) ОТР
- 68 028356
Пример νΙΙΙ. Иммуногистохимический анализ мышиного АА.
В иммуногистохимическом анализе подтверждали реактивность супернатантов от гибридом, экспрессирующих антитела 2А4, 8Ο9 и 7Ό8, к мышиным АА-амилоидным депо в селезёнке и печени (основные локализации накопления амилоида). Для этих исследований срезы тканей от мышей ΤΕΙΑΌ с обширным амилоидом АА-типа в печени и селезенке (о чем свидетельствует зеленое двойное лучепреломление в депо, окрашиваемых Конго красным) окрашивали содержащим тЛЬ супернатантами. Все 3 антитела связывались с амилоидом печени и селезёнки. Напротив, отсутствовала какая-либо реактивность с культурой супернатантов, полученых из посторонних гибридом. Используя 2А4, 8Ο9 и 7Ό8, тестировали возможность иммуноокрашивания амилоида в свежих (нефиксированной), залитых в соединение ОСТ (с оптимальной температурой резания) срезах мышиной печени и селезенки. Доказано, что антитела тЛЬ сохраняют свою способность связывать АА амилоид в синусах печени. Дополнительно, облегчалась интерпретация реактивности антитела в ткани селезёнки, и перифолликулярный амилоид подвергался интенсивному иммуноокрашиванию. Чтобы показать специфичность связывания тЛЬ с АА амилоидом, супернатанты тЛЬ в разведении 1:25 предварительно инкубировали с 50 мкг/мл или пептида #39 (р#39) или #41 (р#41) в течение 1 ч при комнатной температуре. На фиксированной формалином ткани в качестве субстрата пептид р#39 (50 мкг/мл) значительно подавлял амилоидную реактивность обеих тЛЬ, и 2А4 и 7Ό8 (результаты 8Ο9 находятся на рассмотрении). Напротив, пептид р#41 не показал эффективности. Сопоставимые результаты были получены на свежих тканях.
Пример ΙΧ. Иммуногистохимический анализ человеческого АА.
Сравнение аминокислотной последовательности мышиного и человеческого δΑΑ из положений 7376 показало 2 идентичных остатка, консервативную замену δе^ на ΤΗγ и неконсервативную замену на Ηίδ. Для тестирования возможности перекрестной реакции тЛЬ 2Α4, 8Ο9 и 7Ό8 с человеческими ААамилоидными депо авторы проверили их реактивность к несущим АА-амилоид человеческим почке, надпочечнику, яичнику и печени. Во всех случаях супернатанты тЛЬ проявляли иммуноокрашивание амилоидных депо. В ткани яичников пептид р#39 эффективно блокировал связывание антител тЛЬ с периваскулярным АА-амилоидом, тогда как пептид р#41 не подавлял эту реакцию.
Пример X. Взаимодействие анти-АА из культуры супернатантов с АА-фибриллами мышиного происхождения.
Взаимодействие тЛЬ 2Α4, 8Ο9 и 7Ό8 с АА-амилоидом вначале тестировали в анализе ΕΌΙδΑ, и данные, представленные в фигуре 31, анализировали с использованием программы δί§ιηηΡ1οΙ (δΡδδ Ιικ). Каждая точка отражает среднее значение ± стандартная ошибка δΕ (п=3). Супернатантную культуру посторонней гибридомы использовали в качестве контроля (С1г1 Си11иге δυρ). Выявили чрезвычайно низкое отношение шум-сигнал, и результаты показали, что содержание тЛЬ в первом сборе культуры был больше по сравнению со вторым сбором, о чем свидетельствует более сильный сигнал поглощения относительно супернатантного контроля. (Дополнительно, иммуногистохимическая реактивность в материале от 1 дня была выше, чем в образце от 2 дня). При более высоких значениях δΕ из этих данных очевидно, что связывающая аффинность 2А4, 8Ο9 и 7Ό8 была почти эквивалентной, при отсутствии реактивности в разведениях примерно после 1:64. По показателям связывания также предполагается, что емкость, то есть, количество связей тЛЬ, варьирует при соотношении 7Ό8>8Ο9>2Λ4; вместе с тем, приведенные данные не корректировались по концентрации тЛЬ, и такая тенденция в последующих исследованиях не наблюдалась. По причине низкого сигнала и высокой вариабельности, выявленной в культуре супернатантов, и для более точного определения относительной связывающей аффинности антител тЛЬ для мышиных и человеческих АА-амилоидных фибрилл (а также для получения материала с целью изучения биораспределения ш νίνο), было необходимо выделить тЛЬ с помощью А-белковой аффинной хроматографии. Чистоту выделенных тЛЬ устанавливали в δΌδ-ΡΑΟΕ, используя 10% акриламидные гели при редуцирующих и нередуцирующих условиях (фиг. 32). Образцы из полос 1-4 обрабатывали меркаптоэтанолом, полосы 5-9 были без обработки. Гель окрашивали красителем Кумасси синим: тЛЬ 8Ο9, полосы 1 и 6; тЛЬ 2Α4, полосы 2 и 7; тЛЬ 7Ό8, полосы 3 и 8; δΡ2/0 супернатантный контроль, полосы 4 и 9; пусто, полоса 5. Маркерами белка Μγ (διά) являлись, сверху вниз: 176, 119, 75, 49, 39, 25 и 19 кДа. Взаимодействие очищенных тЛЬ с иммунизирующим пептидом р#39, контрольным пептидом (р#41), мышиными и человеческими экстрактами АА были определены в анализе ΕΟδΑ, как описано выше. Полученные данные анализировали путем подбора сигмоидальной кривой, используя программное обеспечение δί§ιηηΡ1οΙ и показатели концентрации тЛЬ в растворе 50% насыщенности (ЕС50) (табл. 5).
Таблица 5. Значения ЕС50 для связывания очищенного тЛЬ
Субстрат
тАЬ Человеческий АА Мышиный АА (АЕЕ) Пептид 39 Пептид 41
8С9 31,7 нМ 5,64 нМ 4, 0 нМ >>100 нМ
2А4 26,4 нМ 4,09 нМ 3,4 нМ »100 нМ
7Р8 13,3 нМ 1,84 нМ 2,3 нМ »100 нМ
- 69 028356
Взаимодействие 3 тΑЬ с пептидом р#39 показало насыщаемое связывание при значениях ЕС50 в низком наномолярном диапазоне (см. выше табл. 5). Напротив, даже при самой высокой используемой концентрации тΑЬ (100 нМ) обнаруживали небольшое связывание с пептидом р#41 (фиг. 33 - каждая точка показывает среднее значение ±δΕ, (п=3 для каждой концентрации)). Эти данные подтверждают иммуногистохимические результаты, описанные выше, то есть, что пептид р#39 способен полностью блокировать связывание тΑЬ с тканями, несущими АА-амилоид. Расчетные значения ЕС50 для связывания каждого тΑЬ с пептидом р#39 были в высокой степени идентичны, поскольку в одном случае экстракт мышиного АА-амилоида использовали в качестве субстрата (фигура 34 - каждая точка показывает среднее значение ±δΕ (п=3 для каждой концентрации)). Расчетные значения ЕС50 для тΑЬ, связывающегося с экстрактом мышиного АА, были чрезвычайно идентичны значениям, полученным при использовании в качестве субстрата пептида р#39 (фиг. 34; табл. 5). Напротив, если экстракт человеческого ААамилоида высушивали на лунках микропланшета, значения ЕС50 были ниже от 5 до 7 раз, чем значения, выявленные для мышиного АА и пептида р#39 (фиг. 35 - каждая точка показывает среднее значение ± δΕ (п=3 для каждой концентрации); табл. 5). Значение ЕС50 для связывания тΑЬ 7Ό8 было самым низким из указанных 3 тестированных антител, и авторы по настоящему изобретению выбрали указанный реактив для совместной локализации ш νί\Ό и анализах визуализации. На значения ЕС50 влияли 2 аминокислотные замены в человеческой последовательности δΑΑ относительно мышиного белка. Не будучи связанными с конкретной теорией, авторы изобретения объясняют более высокие значения ЕС50 для человеческого АА более плохой пригодностью боковых цепей аминокислоты в антиген-связывающем сайте, вместе с тем, этот эффект соответствует только 5-кратному уменьшению относительной аффинности при поверхностной адсорбции амилоидных экстрактов, как в анализе ΕΜδΑ. Кроме того, приведенные данные подтверждают наблюдение, что все 3 тΑЬ связываются как с мышиной, так и с человеческой тканью АА-амилоидных депо.
Пример ΧΣ. Конкурентное связывание антител таЬ с мышиным и человеческим АА-амилоидом.
Чтобы определить эффект, при его наличии, потенциальной денатурации при поверхностной адсорбции на микротитровальной лунке, оценивали реактивность 2А4, 8С9 и 7Ό4, используя конкурентный анализ ΕΕΙδΑ, в котором использовали экстракт мышиного или человеческого АА-амилоида в качестве растворимого конкурента для взаимодействия с антителами тΑЬ с поверхностным экстрактом АА. Во всех случаях растворимые (неадсорбированные) амилоидные фибриллы АА и человеческого и мышиного происхождения были способны к конкуренции за 3 тΑЬ, указывая на то, что антигенная детерминанта, распознаваемая реактивами, не зависит от частичной денатурации, которая происходит в результате поверхностной адсорбции. В общем, экстракт мышиного АА (ΑΕΡ) являлся лучшим конкурентом, чем человеческий АА (табл. 6).
Таблица 6. Значения Ю50 (мкг/мл) для связывания тΑЬ с АА-амилоидом
шАЬ Человеческий АА1 Мышиный АА (АЕЕ)2
869 >119, 5 17,3
2А4 >211,7 14,7
7Ό8 >881,1 26, 8
* Человеческий АА-амилоид в растворе, конкурирующий с адсорбированным мышиным АА (ΑΕΡ);
** Мышиный АА (ΑΕΡ) в растворе, конкурирующий с адсорбированным человеческим ААамилоидным экстрактом на планшете.
Значения Ю50 (концентрация АА (по весу), при которых на 50% уменьшалось связывание тΑЬ), для мышиного ΑΕΡ в растворе составляли около 20 мкг/мл, тогда как для человеческого АА значения были от 6 до 44 раз выше (напротив, значения ЕС50 для человеческого АА были только в 7 раз ниже, чем значения ЕС50 для мышиного АА). Это может говорить о том, что антигенная детерминанта на амилоидных фибриллах в растворе является менее доступной в препаратах человеческого АА по сравнению с мышиным АА. Как предполагалось, самая высокая концентрация АА-амилоида для достижения конкуренции потребовалась для тΑЬ 7Ό8, которое показывало самую высокую относительную аффинность к человеческим и мышиным фибриллам АА, если они были адсорбированы на поверхности.
Пример ΧΠ. Радиомеченное тΑЬ 7Ό8.
Эффективность радиомечения 7Ό8 определяли с помощью δΌδ-ΓΑΟΕ. Анализировали редуцированное и нативное тΑЬ, белки визуализировали с использованием устройства для фосфор-визуализации. И цепи !дН и цепи [дЛ включали метки I125, и достоверно отсутствовали полосы, связанные с фрагментацией или аггрегацией.
Пример ΧΠΕ Визуализация АА-амилоида с использованием 125Гмеченого 7Ό8.
Для ислледования ίίί νί\Ό локализации радиомеченного тΑЬ 7Ό8 использовали три группы мышей: трансгенные ГЕ-6; индуцированные ΑдN0з/ΑΕΡ, и контрольные без амилоида (νΤ). Визуализация с помощью δРΕСΤ/СΤ показала, что тΑЬ 12Э-7Э8 находились в АА-амилоидных депо мышей в селезенке и печени, о чем свидетельствует накопление радиомеченных тΑЬ в этих тканях, относительно контрольных мышей, у которых отмечена только низкая активность кровяного пула в печени и свободный йодид
- 70 028356 в щитовидной железе. В отличие от этих мышей, захват свободного йодида обнаружен в щитовидной железе у мышей после введения Α§N0з, некоторая активность в печени, но основная зона связывания 125Τ-7Ό8 выявлена в месте подкожной инъекции ЛдN03, (нижняя правая часть спины). Активность в этой зоне четко контурирована рентген-поглощающим раствором серебра, что обнаруживают с помощью компьютерной томографии КТ. Показано, что у мышей ТИМО антитело тΑЬ 7Ό8 связывается с ААамилоидными депо и в печени и в селезенке в присутствии циркулирующего δΑΑ, что подтверждается визуализацией δРΕСΤ.
A. Биораспределение 125Τ-7Ό8 у мышей.
Через 48 ч после инъекции 125Τ-7Ό8 обнаруживали радиоактивность в кровяном пуле, которая обусловлена относительно высоким захватом в легких (которые заполняются кровью при умерщвлении мышей). Необходимо отметить, что накопление тΑЬ в печени и селезёнке у мышей [И-6 указывает на присутствие амилоида. Отображения δРΕСΤ/СΤ подтвердили распределение тΑЬ в этих органах. Через 72 ч после инъекции значения кровяного пула слегка изменились, о чем свидетельствует неизменившаяся активность в сердце и легких по сравнению с мышами, которых умерщвляли через 48 ч, из-за относительно долгого периода полувыведения Т1/2Ь10 этого тΑЬ (около 60 ч). Отмечено значительное накопление радиомеченного тΑЬ у мышей [ГО-6, которое коррелирует с полученными изображениями δРΕСΤ, демонстрирующими выраженный захват в селезёнке и, в меньшей степени, в печени. Из других органов самым важным была печень (которая является зоной катаболизма ^С и источником δΑΑ во время острофазового ответа). У мышей линии \УТ без воспалительной или амилоидной индукции в печени содержалось <6% ГО/г, что сопоставимо с почкой и сердцем, где сигнал почти исключительно обусловлен кровяным пулом.
B. Авторадиографические и гистохимические исследования.
Чтобы определить, является ли увеличенное накопление ^4-708 в печени у мышей !ГО-6 и мышей Α§N0з результатом захвата амилоида, проводили авторадиографический анализ печени, а также других тканей, на катаболическое удаление или связывание с вновь синтезированным δΑΑ. На основе визуализации с помощью δРΕСΤ и измерений биораспределения предполагается, что наибольшее количество амилоида у трансгенных мышей ГО-6 находится в печени и селезенке. Эта гипотеза была подтверждена окрашиванием срезов Конго красным, в которых наблюдали значительное количество амилоида во всей красной пульпе, а также в периваскулярных зонах и синусах печени. Дополнительно, менее заметные двупреломляющие депо присутствовали в почках и сердце. Распределение 124-7Э8 в этих тканях хорошо коррелировало с окрашиванием Конго красным и АА-реактивным материалом. Отсутствовало какоелибо накопление в гепатоцитах, в которых не было амилоида.
По данным биораспределения у мышей после введения ЛдN03, выявлен больший захват 124-7Э8 в печени, чем в селезенке, что было неожиданным, так как печень не является нормальной структурой накопления АА у таких животных. Окрашивание Конго красным показало небольшое количество амилоида в единственной перифолликулярной области селезенки (верхний правый угол), и обширные периваскулярные депо в печени, и оба этих факта подтверждены авторадиографически. Дополнительно, в отображениях δРΕСΤ на участке подкожной инъекции ЛдN03, выявлена значительная концентрация 124-7Э8 (авторы также наблюдали этот факт при использовании меченого радиоактивным йодом δΑΓ (сывороточного Р-амилоидного компонента) в качестве средства визуализации). В этом участке отсутствует амилоид (то есть, материал с двойным лучепреломлением Конго красного); однако, он подвергался иммуноокрашиванию с помощью анти-АА тΑЬ. Без связи с конкретной теорией, возможно, что тΑЬ 7Ό8 локализуется в участках воспаления или предамилоидных участках (а также в зрелых амилоидных депо). В отличие от внушительного накопления 7Ό8 в органах мышей ГО-6, в тканях контрольных мышей был выявлен слабый след или отсутствие следа в любом органе, кроме кровяного пула. В срезах любого органа этих контрольных мышей при окрашивании Конго красным амилоид не был обнаружен.
C. Фармакокинетика 125Τ-7Ό8.
После инъекции радиомеченного антитела 7Ό8 определяли скорость исчезновения молекулы и периоды полувыведения Т1/2Ь;О, полученные данные приведены в табл. 7. Определено, что Т1/2Ь;О у 7Ό8 составлял около 60 ч, что сопоставимо с Т4Ью !§С2Ь мышиного тΑЬ (примечание: 7Ό8 происходит из подкласса !дС2Ь). Незначительно более быстрое выведение Ι2'Ί-7Ό8 у мышей !ГО-6 ('ΓΈΙΑΏ) было несущественным. По этим данным, на скорость экскреции не влияет удержание тΑЬ в амилоидной ткани более чем на 72 ч, о чем свидетельствуют данные δРΕСΤ.
Таблица 7. Анализ полувыведения 125Τ-7Ό у мышей
Мыши Д<8.Е,| К(5.Е. х10’4) К* ίΐ/2 Ыо (42 е/Г
________ ____________ ......0ΌΪ17{7Ό) 0.98..... .....59.2 ч .....56.2......
11-6, 72ч 175.2 (3.99) 0.012(8.9) 0.97 57.7 ч
АдИОг- 48ч 181.0(1.99) 0.0106 (4.9) 0.99 65.3 ч 61.1
АдИОз. 72ч 174.1 (2.97) 0.0112 (5.8) 0.98 62.2 ч
С1г1, 48 ч 185.1 (3.19) 0.0108 (7.6) 0.98 64.3 ч 61.3
С1г1, 72 ч 185.1 (3Ό9) 0.0109(5.6) 0.98 83.7 ч
- 71 028356
1. Способ идентификации средств для профилактики или лечения амилоидоза, в котором используют трансгенных мышей или мышей ΤΗ^Ό.
Методики изготовления средств описаны авторами δсЬеηк е! а1. №Циге 400:173-177. Средства эмульгировали в соотношении 1:1 (объем/объем) с полным адъювантом Фрейнда для первой иммунизации трансгенных мышей, с последующим усилением полным адъювантом Фрейнда через 2 недели и ежемесячно после этого. Инъекции ФБР проводили по той же схеме, и для контроля мышам вводили смесь 1:1 ФБР/адъюванта. Сравнивали продолжительность жизни трансгенных мышей, чтобы определить эффективность средств для профилактики амилоидоза АА-типа посредством увеличения срока жизни животного.
2. Гистопатология.
Для световой и поляризующей микроскопии готовили срезы ткани толщиной от 4 до 6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином (ГЭ) и свежеприготовленным щелочным раствором Конго красного, соответственно. Для электронной микроскопии образцы помещали в смолу Εροη (Беб ΡеГГа, Кеббшд, Калифорния), готовили срезы и исследовали в трансмиссионном электронном микроскопе ΣΕ0Ε Κ)0δ. См. Ьиб1аде е! а1. Vе!. Ρа!ЬοГ 42: 117-124 (2005).
3. Иммуногистохимия.
Помещенные в парафин срезы ткани (6 мкм толщиной) нарезали на микротоме, закрепляли на слайдах с покрытием поли-Ь-лизином, высушивали в течение ночи при комнатной температуре и удаляли парафин. Выполняли иммуноокрашивание, используя комплексную авидин-биотин (АВС-ей!е) технологию, как описано ранее. Первичными антителами являлись мышиная античеловеческая А-амилоидная (Ассига!е СЬетюа1 апб δс^еηι^Γ^с Согрогайоп, Vек!Ьшу, №У) и антимышиная δΛΛ поликлональные антисыворотки. В качестве вторичных антител использовали конъюгат аффинно-очищенного лошадиного антимышиного иммуноглобулина-О (IдΟ) с пероксидазой хрена (БесЮг ЬаЬога!опек, ВигНпдате, Калифорния) или конъюгаты козьего антикроличьего, антимышиного или антикрысиного ЦО с пероксидазой хрена (ВюКаб ЬаЬога!опек, Кюйтопб, Калифорния).
4. Количественное определение δΛΛ анализом Ε^IδΛ.
Концентрации δΛΛ измеряли твердофазным иммуноферментным анализом (Ε^IδΛ) с использованием многовидового комплекта Ε^IδΛ δΛΛ (МиШкреаек δΛΛ Ε^IδΛ кй) согласно инструкциям изготовителя (Вюкоигсе, СатагШо, Калифорния). Стандартные кривые были подготовлены с использованием известного количества человеческого белка δΛΛ, и поглощение измеряли при 405 нм на планшетном ридере модели 4450 ВюКаб (ЕиНеПоп, Калифорния).
5. Изучение метаболизма с помощью радиосцинтиграфии δАΡ у мышей.
δАΡ подвергали окислительному иодированию с 127 (2-5 МВц/мг) с использованием N бромсукцинимида. Мышам в возрасте 6-12 недель внутривенно вводили от 2 до 10 мкг 12Ί - δАΡ в 200 мкл. Точно отмеренные пробы крови из хвоста (от 0,01 до 0,04 г) брали в определенные интервалы времени, и проводили подсчет радиоактивности с осаждением трихлоруксусной кислотой в каждой партии в конце каждого эксперимента вместе со стандартными аликвотами введенного меченого вещества. Ρеρук е! а1. 1’гос. №Й Асаб. δοΐ. и8А 91:5602-5606 (1994).
6. Изучение метаболизма с помощью радиосцинтиграфии δАΡ и анализ визуализации у человека.
Для применения у человека выделяли δАΡ из плазмы единственного нормального официального донора и подвергали окислительному иодированию с 127 (2-5 МВц/мг) или 123Ί (110 МВд/50 мкг белка) с использованием ^бромсукцинимида. После инъекции 133Ί δАΡ полученные данные обрабатывали в гамма-камере №Ε δΙ;·ιπ:;Ηη (ΜΕ Мебюа1 δук!етк, δ^^Η, Великобритания). Выведение 125Ьмеченого δАΡ изучали у здоровых людей и больных амилоидозом АА-типа. Ρеρук е! а1. Ρ^οс №й1. Асаб. δα. ГОА 91 :5602-5606 (1994).
7. Экстракция и очистка амилоида.
Для экстракции амилоида из ткани применяли способы, описанные авторами Ρα^ е! а1. См. Ρη^ е! а1. I. С1ш. Шуек!. 47:924-933 (1968) Коротко, образец печени или тканей из других органов, полученных при вскрытии трупа и сохраняемых при -80°С, гомогенизировали с холодным солевым раствором в ледяной ванне с использованием 0тт-миксера (0тт МетаБо^^ Vа!е^Ьи^у, Коннектикут). Экстракт центрифугировали при 10000 оборотов в минуту в течение 30 минут при 4°С, и осадок повторно экстрагировали еще дважды с холодным солевым раствором, один раз с 0,1 М цитратно-натриевым Трисбуферный раствором с уровнем рН 8,0, и затем снова с солевым раствором, пока показатели А280 супернатанта не стали <0,10. Полученный осадок гомогенизировали с холодной дистиллированной водой, и смесь центрифугировали при 35000 оборотах в минуту в течение 3 ч при 4°С. Затем полученный из водного эктракта осадок лиофилизировали.
8. Поверхностный плазмонный резонанс.
Кинетику связывания измеряли с помощью устройства ВМсою Χ. Фибриллы, подготовленные из V//) νί1, быстро разрушали ультразвуком с соникатором образцов и затем соединяли с чипом СМ-5, используя химию аминов согласно протоколу В^соге. Для этой методики применяют ЮС и нормальную человеческую сыворотку ΜΗδ для активации карбоксильной группы на чипе, для соединения со свобод- 72 028356 ными аминогруппами на фибриллах. Соединение проводят в буфере №0Ас с уровнем рН 4,0 при концентрации 100 мкг/мл. Контрольный канал подвергали пробному соединению, и оба канала реагировали с этаноламином для насыщения непрореагировавших участков. Были соединены около 16000 КИ фибрилл ^6 νΐ1.
Сенсограммы проводили по методике в буфере ΗВδ-ΕР от компании В^соге в 20 мкл/мин в РЛ (фибриллы ^<6 νί1) минус Рс-2 (контроль). В образцы, содержащие тАЪ или тАЪ вместе с пептидными ингибиторами, вводили инъекции (70 мкл), и получали сенсограммы с использованием функции задержки промывания в течение 200 секунд. Данные анализировали с программным обеспечением В^еуаЬНаЬоп, используя 1:1 модель Ленгмюра с коррекцией действия массы.
9. Микро-δРΕСΤ/СΤ.
В двух группах по 3 мыши в каждой мышам подкожно между лопатками вводили 50 мг экстракта человеческого АЬ-амилоида. Через 7 дней в одной группе мышам внутривенно путем в/в инъекции в хвостовую вену вводили 300 цСц 12Й меченого тАЪ 7Ό8. Второй группе вводили равное количество мышиного тАЪ МОРС 31С в качестве контроля. Через 72 ч мышей умерщвляли передозировкой изофлурана и получали отображения δРΕСΤ/СΤ. Для обеспечения повышения контрастности сосудов на КТ-отображениях, мышам за 5 мин до сканирования в/в вводили 200 мкл Фенестра VС™ (РепеЧга VС™ Абуапсеб КезеагсЬ ТесЬпо1од1е5, Монреаль, Канада).
Данные δРΕСΤ получали с помощью сканера МюгоСАТ II + δРΕСΤ с технологией двойного отображения (δРΕСΤ биа1 тоба1Ьу шадшд ркцГогт (Ыетещ РгесЬшса1 δο1иΐ^οи5, КпохуШе, ТЩ , дающей возможность субмиллиметроваго разрешения, оборудованным коллиматором с точечной апертурой диаметром 0,5 мм. Для получения отображения 2 датчика (состоящие из мультианодной фотоумножительной трубки Хамамацу К2486-0250 диаметром 50 мм, присоединенной к кристаллической решетке С5I (Т1) 1x1x8 мм, закрепленной на гриде 1,2 мм2 ), помещали примерно в 45 мм от центра вращения. Каждый набор данных δРΕСΤ содержал 45 проекций, полученных на 360° в течение около 50 мин. Реконструкцию изображений проводили с использованием алгоритма максимизации ожидания максимального правдоподобия (ΕΜ-Μ^).
После сбора данных δРΕСΤ были получены изображения компьютерной томографии (КТ) высокого разрешения. Сканер МюгоСАТ II имеет геометрию конического луча с круговой орбитой, оборудованную микрофокусными рентгеновскими источниками с пиковым напряжением в киловольтах 20-80 ^р, и с размером зоны визуализации 90x60 мм, с использованием ССР-матричного детектора 2048x3072, оптически соединенного с люминесцентным экраном пипК посредством опто-волоконной связи. Каждый набор данных КТ состоял из 360 проекций с азимутом 1°, который получали в течение 8 мин. Изображения реконструировали в реальном времени на изотропических вокселах 77 мкм с использованием алгоритма обратных проекций Ре1бкатр.
Для облегчения совместной регистрации реконструированных изображений δРΕСΤ и КТ, на визуализируемое основание помещали герметичные источники Со-57. Визуализировали пакеты данных микро-δРΕСΤ и КТ и регистрировали их совместно вручную с помощью пакета программ 3-Ό анализа отображений (АтЬа, Версия 3.1: Мегсигу СотрШег δу5ΐет5).
10. Биораспределение.
У мышей забирали образцы печени, селезенки, почки, сердца, легкого, и имплантированных амилоидных опухолей (а именно, амилоидомы) и помещали в тарированные флаконы, взвешивали и измеряли радиоактивность. Первичные значения индекса выражали как % введенной дозы на 1 грамм ткани (ГО/г %).
11. Авторадиография.
Срезы толщиной 6 мкм, отрезанные от фиксированных в формалине и залитых в парафин блоков тканей, полученных от мышей, умерщвленных через 72 часа после инъекций 125Τ-7Ό8, наносили на слайды для микроскопа РгоЪопб (Р1зЬег δ^ιΚΤΟ), опускали в эмульсию NΤВ-2 ^аб^тал Кобак), сохраняли в темноте и обрабатывали после экспозиции в течение 24 часов. Срезы подвергали контр-окрашиванию гематоксилином и эозином (ГЭ), накрывали со сдвигом с использованием РегтоиШ (РОЬег δ^ι-ηΓΟ), и исследовали световой микроскопией. Дополнительно, следующие слайды окрашивали щелочным Конго красным и наблюдали в поляризованном свете. Наконец, третий слайд подвергали иммуноокрашиванию, используя в качестве первичного реактива АА-реактивное тАЪ по настоящему изобретению. Применяли цифровую камеру для изображений с микроскопа и оценивали их с использованием программного пакета анализа изображений Дтаде Рго Р1из, Меб1а, СуЪегиеЬсз).
Пример Χ^. Создание гуманизированного антитела 2А4 и 7Ό8 Гуманизированные антитела 2А4, 7Ό8, и 809 изготовляли путем трансплантации мышиных 2А4, 7Ό8, и 809 СГОК на человеческие акцепторные каркасы согласно способам, известным в данной области техники. Обратные мутации осуществляли для уменьшения антигенности при сохранении связывающей аффинности. Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи мышиных 2А4 представляли собой остатки 20-131 последовательности δΕΟ ГО N0: 152 и остатки 20-138 последовательности δΕΟ ГО N0: 154, соответственно. Вариабельные области легкой цепи и тяжелые цепи 7Ό8 представляли собой остатки 20-131 последовательности δΕΟ ГО N0:
- 73 028356
153 и остатки 20-138 последовательности 8Еф ΙΌ ΝΟ: 154, соответственно. Вариабельные области легкой цепи мышиных 2А4 и 8С9 идентичны друг другу и отличаются от вариабельной области легкой цепи 7Ό8 по единственному остатку в СИР1. Вариабельные области тяжелой цепи каждого из 2А4, 7Ό8, и 8С9 были идентичными.
Вариабельная область каппа (Ук) из 2А4 и 7Ό8 относится к мышиной подгруппе 2, которая соответствует человеческой подгруппе 2, и вариабельная область тяжелой цепи (УН) относится к мышиной подгруппе 3, которая соответствует человеческой подгруппе 3 (РаЬа! е! а1. (1991) 8ециеисек ой РгсЯетк ой Iттиηο1οд^са1 Шегек!, Ей!Н ЕбШои. ШН РиЬйсайои №. 91-3242). СИР-Ь1 включает 16 остатков и принадлежит к каноническому классу 4 из Ук. СИР-Ь2 включает 7 остатков и относится к классу 1 из Ук. СОР-Ь3 включает 9 остатков и относится к классу 1 из Ук. См. Магйи А.С, ТНот!ои ЙМ. (1996) й Мо1 Вю1. 263, 800-15. Лейцин в положении 27 в 7Ό8 является довольно необычным, и глутамин в 2А4 является более типичным. На модели показано, что боковая цепь находится на поверхности связывающего сайта, и поэтому должна быть важной для связывания антигена. СИР-Н1 включает 5 остатков и относится к классу 1, и СИР-Н2 включает 19 остатков и относится к классу 4 (Магйи & ТНот!ои, 1996). Область СИР-Н3 не имеет каких-либо канонических классов, но в петле из 8 остатков, вероятно, имеется перекрученное основание согласно правилам 8Нйа1 е! а1. (1999) ЕЕВ8 Ье!!. 455, 188-97. В модели она является консервативной, вместе с тем, конформация верхушки СИР-Н3 может быть разной. Остатки в области контакта между доменами Ук и УН представляют собой остатки, обычно выявляемые для 2А4 Ук, 7Ό8 Ук и 2А4 УН.
Чтобы найти структуры, способные направить выбор обратных мутаций, проводили поиск в базе данных РЭВ (ИекНраибе е! а1. (2005) №с1е1с Аабк Рек. 33: Ό233-7). Поиск по статически определимой базе данных последовательностей белка Национального центра биотехнологической информации NСВI позволил выбрать подходящие человеческие структуры для трансплантации мышиных СИР. Для области Ук была выбрана человеческая легкая цепь каппа с кодом доступа NСВI ВАС01562 (дй:21669075) (8Еф ГО ΝΟ: 166). Она имеет одинаковую длину с СПР-Ь3 и относится к человеческой зародышевой линии УКПА 19/А3 и к подгруппе 2 человеческой области каппа. Также была найдена подобная структура, отличавшаяся только по й-области, с кодом доступа NСВI ВАС01733 (дй:21669417) (8Еф ГО ΝΟ: 167). ВАС01562 использовали в качестве каркаса для 2А4 Ук, и ВАС01733 использовали как каркас для 7Ό8 Ук. Для области УН использовали тяжелую цепь человеческого Ц ААС51024 (дй: 1791061) (8Еф ГО ΝΟ: 165). См. С1ак е! а1. (1997) Сйи. Ехр. Iттиηο1. 107: 372-380. Она относится к человеческой зародышевой линии УН3-72 и подгруппе 3 человеческой тяжелой цепи.
Вариабельные области легкой цепи типичного гуманизированного антитела 2А4 представляют собой 8Еф ГО ΝΟ: 155, 156, и 157. Вариабельные области легкой цепи типичного гуманизированного 7Ό8 представляют собой 8Еф ГО ΝΟ: 158, 159, 160, 174, 175 и 176. Вариабельные области тяжелой цепи типичного гуманизированного 2А4/7И8 представляют собой 8Еф ГО Ν0: 161, 162 и 163. См. фигуры 36А36Е. Типичные гуманизированные антитела по изобретению включают антитела, имеющие вариабельные области легкой цепи, выбранные из одного из остатков 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 152, остатков 20-131 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 153 и 8Еф ГО ΝΟ: 155, 156, 157, 157, 159, 160, 174, 175 и 176; и вариабельные области тяжелой цепи, выбранные из одного из остатков 20-138 последовательности 8Еф ГО ΝΟ: 154 и 8Еф ГО ΝΟ: 161, 162 и 163.
Пример ХУ. Терапевтические эффекты тАВ 2А4 у мышей с тяжелым системным амилоидозом ААтипа.
Терапевтическую эффективность тАЬ 2А4 оценивали у мышей Ш/ЬиГО-й с тяжелым системным амилоидозом. У трансгенных Н2/Нп!Е-6 мышей, которые конститутивно экспрессируют трансгенный человеческий ΙΕ-6, подтверждается быстрое и необратимое развитие системного амилоидоза АА-типа. В первом и втором исследовании мышам вводили изотипически сходное тАЬ ТΥ-11, которое не имеет активности у мышей, и использовалось в качестве контроля. Перед введением фактора усиления амилоида для индукции АА у мышей Н2/Нц[Е-6 забирали образцы крови через ретроорбитальную пазуху, приготовляли сыворотку, и определяли концентрации 8АА с использованием коммерчески доступного комплекта ЕЫ8А, Были получены следующие репрезентативные значения: 2196,7 мкг/мл, 823,91 мкг/мл, 1415,00 мкг/мл, 1673,01 мкг/мл, 814,53 мкг/мл, 1088,18 мкг/мл, 736,34 мкг/мл, 1546,35 мкг/мл, 953,70 мкг/мл, 886,46 мкг/мл, при среднем значении = 1213,4 ± 478 мкг/мл.
В начале второго исследования (неделя 0) мышам Н2/Нп!Е-6 в/в вводили 100 мкг фактора усиления амилоида (АЕЕ). После индукции патологии АА путем введения АЕЕ мышам подкожно в другую конечность вводили 5 инъекций по 100 мкг тАЬ 2А4 (13 животных) или ТΥ11 (11 животных). Лечение начинали примерно через 1 неделю после инъекции АЕЕ. Выживаемость животных в каждой группе лечения регистрировали и анализировали. Результаты показаны в табл. 7. Только 45% мышей, которым вводили тАЬ ΊΥ11, выжили до конца исследования. Напротив, ни одна из мышей, получавших 2А4, не погибла в течение исследования. Анализ данных выживаемости с использованием стандартных методик показал существенное различие в кривых выживания (Р <0,0025) в обеих группах. Средняя выживаемость мышей с введением ТΥ11 составляла 41 день, что сопоставимо с данными предыдущего исследования (38,5 дней).
- 74 028356
Таблица 7
Процент выживших мышей
Дни после инъекции Введение ΤΥ11 Введение 2А4
0 100.00 100.00
22 81.82 100.00
33 72.73 100.00
37 63.64 100.00
41 45.45 100.00
42 45.45 100.00
На 6 неделе после введения АЕР у мышей забирали кровь и забивали, и их органы забирали для дальнейшего анализа. Для определения количества амилоида в печени и селезенке проводили микроскопию в поляризованном свете, визуализировали двойное лучепреломление с окрашиванием Конго красным и регистрировали в цифровой форме. Область двупреломляющего материала определяли путем отбора (с использованием методики спектральной сегментации) и подсчета количества амилоид-связанных пикселей. Индекс амилоидной нагрузки (АВ1), как меру содержания амилоида, выражали как процент занятой амилоидом области в каждом органе. Определение количества амилоида в печени и селезенке у мышей, получавших 2А4 и ΊΎ11, не показало существенного различия между указанными двумя видами лечения. Однако, при сравнении мышей, получавших 2А4, у мышей, которым вводили ТУ11 и выжившим к 42 дню, не выявлено развития патологических признаков или такого распределения АА-амилоида, которое приводит к заболеванию.
Также в течение исследования на выживаемость контролировали амилоидную гепатоселезеночную массу, чтобы оценить увеличение амилоидной нагрузки, которая коррелирует с заболеваемостью.
В третьем исследовании проводили сравнение тАЬ 2А4 с изотипически сходным тАЬ 1Н70, о реактивности которого у мышей не сообщалось. Дополнительно, на протяжении всего периода лечения проверяли химические показатели крови и другие параметры. В этом исследовании использовали самцов и самок мышей Н2/Ъи1Ь-6, рожденных в период между 8/1/08 и 9/7/08. У двадцати трех самок мышей и 16 самцов мышей осуществляли забор крови через ретроорбитальную пазуху. Цельную кровь использовали для химического анализа азота мочевины крови (АМК) и аланинаминотрансферазы (АЛТ), чтобы оценить функции почек и печени, с использованием Vеΐ8саη V82 (АЬах1х, Итоп С?11у, Калифорния). Одновременно измеряли концентрацию в сыворотке 12 других белков и анализируемых веществ. Проводили общий анализ крови (СВС) с использованием оборудования Vеΐ8саη НМ5. Дополнительно, каждой мыши вводили низкие дозы (-50-60 мк С1) человеческого сывороточного амилоидного компонента Р с радиоактивным йодом (1251-8АР) в 5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина, для оценки амилоидной нагрузки у мышей до инициирования патологического процесса. Измеряли процент 1251-8АР, остаточного через 24 ч после инъекций (П/И), путем помещения каждой мыши в калибратор дозы. Показателем амилоидного заболевания было более высокое, чем наблюдаемое у нетрансгенных (контрольных) мышей, удержание 1251-8АР. Наконец, использовали сыворотку для измерения концентрации сывороточного амилоидного белка (зАА) с помощью коммерческого набора для анализа ЕЫ8А. Итоги полученных перед лечением данных, некоторых химических показателей крови и результаты лечения, приведенные для каждой мыши, показаны ниже в табл. 8 и 9.
- 75 028356
Таблица 8. Сводные данные показателей до лечения и введения тАЬ для каждого животного
Мышь Хе Концентрация 8АА. (мкг/мл) Пол Дата рождения Удержание 1251-8АР (%) Лечение (группа Хз)
3488 360 Р 8/1/08 9 2А4(1)
3489 996 Р 8/1/08 29 2А4(1)
3490 472 Р 8/1/08 10 2А4(1)
3492 2068 М 8/1/08 13 2А4(1)
3493 1740 М 8/1/08 11 ΙΗ70 (1)
3494 1272 М 8/1/08 10 1Н70(1)
3495 1436 М 8/1/08 13 1Н70(1)
3496 2080 М 8/1/08 9 2А4(1)
3498 268 М 8/1/08 9 2А4(1)
3500 700 Р 8/11/08 11 1Н70(1)
3501 Νϋ Р 8/11/08 9 1Н70(1)
3503 1040 Р 8/11/08 11 ΙΗ70 (1)
3504 960 Р 8/11/08 10 ЛН70 (1)
35131 4400 м 8/13/08 60 2А4 (1)
35141 4400 м 8/13/08 40 2А4(1)
3515 2800 м 8/13/08 13 2А4 (1)
3521 1480 м 8/18/08 11 2А4(1)
3524 1680 м 8/18/08 9 2А4(1)
3549 720 Р 9/6/08 9 2А4 (2)
3550 760 Р 9/6/08 9 2А4 (2)
35522 0 Р 9/6/08 11 2А4 (2)
3553 1160 Р 9/6/08 12 2А4 (2)
3558 1660 м 9/6/08 9 ДН70 (2)
3559 3520 м 9/6/08 12 ДН70 (2)
3562 1312 Р 9/6/08 11 ДН70 (2)
3563 1120 м 9/6/08 9 ДН70 (2)
3564 2512 м 9/6/08 11 2А4 (2)
3565 1960 м 9/6/08 10 2А4 (2)
3567 1880 Р 9/6/08 12 2А4 (2)
3570 792 Р 9/7/08 13 2А4 (2)
3573 700 Р 9/7/08 8 2А4 (2)
35772 0 Р 9/7/08 10 2А4 (2)
35782 0 Р 9/7/08 9 2А4 (2)
3579 1120 Р 9/7/08 10 2А4 (2)
35802 0 Р 9/7/08 8 ДН70 (2)
3581 700 Р 9/7/08 9 ДН70 (2)
3582 1680 Р 9/7/08 9 ДН70 (2)
3583 804 Р 9/7/08 9 ДН70 (2)
- гомозиготные по 1Ь-6 животные с высокими уровнями 8АА и возникновением амилоидного заболевания в начале жизни. 2 - мыши дикого типа, без циркулирущего ЗАА и отсутствием амилоидной болезни. Удержание 125Ι-8ΑΡ у этих животных считается нормальным и показывает отсутствие амилоидной нагрузки.
Таблица 9. Нормальные значения химических показателей крови у мышей Н2/Ьи1Ь-6
АМК (мг/дл)
ГЛЮ (мг/дл)
АЛТ (ед/дл) АЛБ (г/дл) ОБ (г/дл) ИГ (г/дл)
Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец
знрачде5ие 21,1 23.8 144.7 151,2 37.6 42.3 2.5 1.9 5.6 6,2 3.1 4.4
8ϋ 4.0 2.7 14.0 17.6 16.3 24.3 0.3 0.4 0.2 0.6 0.4 0.6
η 18 13 18 13 18 13 18 13 18 13 18 13
Высокий 28,0 30.0 184.0 179,0 79.0 105,0 3.0 2.6 6.0 7,4 3.7 5.8
Низкий 15,0 20.0 126.0 119.0 21.0 23.0 2.0 1,2 5,1 5,5 2.6 3.4
Средние 20.0 24.0 143.0 154.0 32.5 32.0 2.4 1.9 5.6 6.0 3.2 4.3
АМК, азот мочевины крови, ГЛЮ. глюкоза, АЛТ, аланинаминотрансфераза, АЛБ. альбумин, ОБ, общий белок сыворотки, ИГ, иммуноглобулин, Р- самка, М- самец, ЗЭ, стандартное отклонение, η - число мышей, используемых для определения показателей
В начале третьего исследования (неделя 0), все мыши из всей группы Н2/Ьи1Ь-6 внутривенно получали 100 мкг фактора усиления амилоида (1 мг/мл). Через одну неделю после начала лечения каждой мыши подкожно вводили 100 мкг или тАЬ 2А4 или 1Н70, как описано в общих чертах в табл. 8. Инъекции тАЬ продолжались еженедельно в течение 7 недель.
Через 2 недели после введения АЕР проводили анализы СВС, биохимии крови и сывороточного кАА путем забора крови через ретроорбитальную пазуху. В это время мышам в группе 1 также вводили около 60 цС1 1251-ЗАР в БСА, как описано выше, для оценки накопления амилоида, что подтверждается удержанием радиомеченого ЗАР. У нескольких животных проявился побочный эффект экстремального стресса, и поэтому оценку амилоидной нагрузки с использованием 1251-ЗАР у них не продолжали. Результаты некоторых химических показателей крови, полученных через 2 недели после введения АЕР, показаны в табл. 10.
Таблица 10
Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец Самка Самец
3ΐίνΐβΗΗ6 31 4 52 1 145.1 129 8 33 9 63 3 23 1 8 65 8 1 42 62
5ϋ 24 3 39 1 16.6 25 6 69 30 6 03 05 1 0 1 7 1 1 1 5
η 15 13 15 13 15 13 15 13 15 13 15 12
Высокий 100 0 1590 177.0 178 0 46 0 134 0 27 3 0 86 11.7 70 96
Низкии 16 0 20 0 104 0 82 0 22 0 32 0 1 7 1 0 5 2 6 0 3 1 45
АМК <ыо1 мочевины крони ГЛЮ иноком АЛТ а.1<1ннн11мнно1ранс1]|срам АЛБ альбумин ОБ общий белок смиоро! ки ИГ нм\нноиюб\лин Р- еамьа М- самец 30 ы андар| ное οι клоисние а - число мышей иепотмусмых для определения показателей
- 76 028356
Через 8 недель после введения ΑΕΕ у мышей производили заключительный забор крови и сразу после этого вводили около 200 МКС1 125ГОАР с использованием в качестве носителя 5% нормальную мышиную сыворотку. В ответ на это введение несколько животных проявили слегка необычное поведение, которое нормализовалось в течение 30 минут. Через двадцать четыре часа мышам вводили рентгеноконтрастное вещество для КТ (около 200 мкл в/в в хвостовую вену) и затем их умерщвляли путем передозировки изофлурана. Были получены томографические изображения одиночной фотонной эмиссии (δΡΕСΤ) и рентгеновские изображения (КТ) каждого животного. Производили забор органов, вычисляли количество радиоактивности в каждом образце, которое выражали в виде % введенной дозы на грамм ткани. Дополнительно, часть каждой ткани фиксировали в буферизованном формалине в течение ночи в препаратах для микротомирования и проведения микроскопии.
В течение 7 недели клинических исследований 2 мыши были обнаружены мертвыми, и 3 мышей забили по причине малой вероятности их выживания в течение ночи и плохих показателей состояния организма (<2; связанных с потерей веса >15%). Мышей, проявивших побочные реакции на инъекцию ГОАР и 1 мышь, которую забили по причине осложнений в результате ретроорбитального кровотечения, не оценивали в части анализа выживаемости. Выживаемость мышей в каждой группе лечения тАЬ показана в табл. 11.
Таблица 11. % выживаемости мышей
Около 65% мышей с введением тАЬ ТН70, которые могли войти в оценку, выжили до конца исследования. Напротив, ни одна из мышей с 2А4, которая могла войти в оценку, не умерла в течение этих 57 дней. Анализ данных выживаемости с использованием стандартных методик показал значительные отличия в кривых выживания (Р=0,015, с использованием теста Мантел-Кокса и Р=0,016 с использованием теста Грехана-Бреслау-Вилкоксона (0ге11ап-Вгек1о\\-\УПсохоп).
Заключительные химические показатели крови анализировали в соответствии с препаратами, которые получала каждая мышь. Из-за отличий параметров средних значений, связанных с полом (самки и самцы) мышей Н2/Би1Ь-6 (в момент эвтаназии уровни АМК у самок мышей были выше, как при введении 2А4, так и при введении ТН70), и в табл. 12 ниже включены только выжившие самки мышей. Таблица 12
АМК .......(мг/дл).......... ГЛЮ (мг/дл) АЛТ (ед/дл) АЛБ (г/дл) ОБ (г/дл) ИГ (г/дл)
2А4 Л470 2А4 Л170 2А4 .ГН70 2А4 Л470 2А4 Л470 2А4 .ГН70
Среднее значение 60.7 73.3 107.8 Ю0.1 45.5 119.7 2.3 2.2 9.2 9.1 7.0 7.1
3ϋ 27.2 25.7 27.0 13.3 6.2 123.1 0.5 0.6 1.5 1.5 2.0 2.1
η 6.0 7.0 6.0 7.0 6.0 7.0 6.0 7.0 6.0 7.0 6.0 7.0
Высокий 95.0 120.0 160.0 123.0 52.0 381.0 2.9 3.0 11.7 11.9 10.1 10.6
Низкий 17.0 36.0 83.0 83.0 35.0 33.0 1.5 1.2 7.2 7.5 4.3 5.3
Средние 66.5 70.0 99.5 98.0 46.5 65.0 2.2 2.1 9.1 8.9 7.1 6.2
АМК, азот мочевины крови, ГЛЮ, глюкоза, АЛТ, аланинаминотрансфераза, АЛБ, альбумин, ОБ, общий белок сыворотки, ИГ, иммуноглобулин, Р- самка, М- самец. 3Ώ, стандартное отклонение, п - число мышей, используемых для определения показателей
У мышей, которым вводили 2А4, выявлено снижение уровней азота мочевины крови в сыворотке (АМК) и аланинаминотрансферазы (АЛТ), по сравнению с мышами, которым вводили Ш70. АМК и АЛТ представляют собой маркеры функции почек и печени, соответственно, и снижение их уровней указывают на то, что функции органа, возможно, лучше сохранялись при введении 2А4.
- 77 028356
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Е1ап РЬагтасеиб1са1з, 1пс. ЗсЬепк, Ьа1е В.
Иа11, ЛопабЬап ЗеиЬегб, Ребег А.
За1ЬапЬа, Лозе <120> Лечение и профилактика амилоидоза <130> 021452-0376734 <150> 61/007,544 <151> 2007-12-28 <150> 61/095,932 <151> 2008-09-10 <160> 177 <170> РабепбТп версия 3.4 <210> 1 <211> 122 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <400> 1
Меб 1 Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг 5 О1у Ьеи Уа1 РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у 15 Уа1
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азр А1а Агд
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд РЬе РЬе О1у НФз О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп О1и Тгр О1у Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп Нгз
100 105 110
Рйе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 2 <211> 76 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М15С_КЕАТиКЕ (область биологического интереса, которая не может быть описана никаким другим ключом, новая или редкая характерстика)
- 78 028356 <223> Человеческий амилоидный белок пептид А <400> 2
Агд 1 Зег РЬе РЬе Зег 5 РЬе Ьеи О1у О1и А1а 10 РЬе Азр О1у А1а Агд 15 Азр
Меб Туг Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е О1у Зег
20 25 30
Азр Ьуз Туг РЬе НЧз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у А1а Туг А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азр А1а Агд О1и Азп
50 55 60
11е О1п Агд РЬе РЬе О1у Нтз О1у А1а О1и Азр Зег
65 70 75
<210> 3 <211> 5 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из А-амилоидного пептида <400> 3
О1у ΗΪ3 О1и Азр ТЬг
5 <210> 4 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из А-амилоидного белка <400> 4
О1у НЧз О1у А1а О1и Азр Зег 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из А-амилоидного белка <400> 5
О1у НЧз Азр А1а О1и Азр Зег
5 <210> 6 <211> 7
- 79 028356
<212> <213> РКТ Искусственная
<220>
<223> Получена из амилоидного белка
<400> 6
О1у Ηίε ! О1у А1а О1и Азр Зег
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из А-амилоидного белка
<400> 7
О1у Азр Нгз А1а О1и Азр Зег
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из А-амилоидного белка
<400> 8
Зег ТЬг Уа1 11е О1и Азр Зег
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из А-амилоидного белка
<400> 9
О1у Агд О1у ΗΪ3 О1и Азр ТЬг
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из А-амилоидного белка
<400> 10
- 80 028356
О1у Ηΐ3 О1у А1а О1и Азр Зег 1 5 <210> 11 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из А-амилоидного белка <400> 11
Азп Ηΐ3 О1у Ьеи О1и ТЬг Ьеи
5 <210> 12 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из амилоидного пептида <400> 12
Ηΐ3 О1и Азр ТЬг <210> 13 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223>
Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 13
А1а О1и Азр Зег 1 <210> 14 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223>
Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 14
А1а О1и Азр ТЬг <210> 15
- 81 028356 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 15
НФз О1и Азр А1а
<210> 16
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> V фрагмент лямбда из амилоидного АЬ-белка
<400> 16
ТЬг О1и Азр О1и
1
<210> 17
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> V фрагмент лямбда из амилоидного АЬ-белка
<400> 17
РЬе О1и Азр Азр
1
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 18 4 РКТ Искусственная V фрагмент лямбда из амилоидного АЬ-белка
<220>
<221> М1ЗС_КЕАТиКЕ
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 18 <210> 19
Зег О1и Азр О1и <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V фрагмент лямбда из амилоидного АЬ-белка <220>
<221> М13С_КЕАТиКЕ <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 19
А1а О1и Азр О1и <210> 20 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V фрагмент лямбда из амилоидного АЬ-белка <400> 20
Рго О1и Азр О1и <210> 21 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V фрагмент каппа из амилоидного АЬ-белка <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих догенных белков <400> 21
Рго О1и Азр 11е амилои<210> 22 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V фрагмент каппа из амилоидного АЬ-белка <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои-
<400> 22
Рго О1и Азр РЬе 1
<210> <211> <212> <213> 23 4 РКТ Искусственная
<220> <223> V фрагмент каппа из амилоидного АЬ-белка
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 23
А1а О1и Азр να1
1
<210> 24
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> V фрагмент каппа из амилоидного АЬ-белка
<220> <221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 24
Зег О1и Азр РЬе 1 <210> 25 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V фрагмент каппа из амилоидного АЬ-белка <400> 25
Зег О1и Азр А1а <210> 26 <211> 4
- 84 028356 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 26
Рго О1и Азр Зег
1
<210> 27
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 27
Рго О1и Азр Ьеи 1 <210> 28 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои<400> 28
ТЬг О1и Азр Уа1 1
<210> 29
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 29
Зег О1и Азр 11е
1
<210> 30
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 30
ТЬг О1и Азр ТЬг
<210> 31
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 31
Ьеи О1и Азр О1у 1
<210> 32
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 32
А1а О1и Азр Меб 1 <210> 33 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 33
Нгз О1и Азр Зег
1
<210> 34
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 34
Суз О1и Азр Азр
<210> 35
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидо-
генных белков
<400> 35
О1п О1и Азр Зег
1
<210> 36
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 36
Агд О1и Азр Зег
<210> 37
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 37
ТЬг О1и Азр О1у 1
<210> 38
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 38
О1п О1и Азр Агд 1 <210> 39 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих догенных белков <400> 39
ТЬг О1и Азр Ьеи амилои<210> 40 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои<400> 40
Рго О1и Азр Азп <210> 41 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои<400> 41
О1и О1и Азр Рго 1 <210> 42 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои<400> 42
Ьеи О1и Азр Ьеи <210> 43 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои- 88 <400> 43
Ьуз О1и Азр А1а 1
<210> 44
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 44
Зег О1и Азр Суз
1
<210> 45
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 45
О1и О1и Азр Азр 1
<210> 46
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 46
Зег О1и Азр Ьуз
1
<210> 47
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 47
Азр О1и Азр Азр 1
<210> 48
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 48
Азр О1и Азр О1у
1
<210> 49
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 49
Ьеи О1и Азр О1и 1
<210> 50
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 50
О1у О1и Азр А1а
1
<210> 51
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 51
Уа1 О1и Азр РЬе 1 <210> 52 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих
догенных белков
<400> 52
Туг О1и Азр О1и
1
<210> 53
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих
догенных белков <400> 53
11е О1и Азр Ьеи 1 амилоиамилои<210> 54 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков полученная из человеческих амилои<400> 54
Тгр О1и Азр Туг 1
<210> 55
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих
догенных белков амилои-
<400> 55
Азр О1и Азр Тгр
1
<210> 56
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих
догенных белков амилои<400> 56
Зег О1и Азр Ьеи <210> 57 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 57
Туг О1и Азр О1п
1
<210> 58
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидо-
генных белков
<400> 58
Ьеи О1и Азр Тгр <210> 59 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, догенных белков <400> 59 полученная из человеческих амилои-
Туг О1и Азр Агд 1
<210> <211> <212> <213> 60 4 РКТ Искусственная
<220> <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 60
Рго О1и Азр Ьуз <210> 61 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> <400> Неамилоидная 61 часть сывороточного А амилоидного белка
О1у Нйз О1и Азр ТЬг Меб А1а Азр О1п О1и
1 5 10
<210> 62
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 62
А1а О1и Азр А1а
1
<210> 63
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 63
О1п О1и Азр Ьеи 1 <210> 64 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков
<400> 64
Уа1 О1и Азр Ьеи
1
<210> 65
<211> 4
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220> <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилои-
догенных белков <400> 65
Ьеи О1и Азр А1а 1
- 93 028356 <210> 66 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 66
Зег О1и Азр О1у <210> 67 <211> 16 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из СЗ малярии <220>
<221> М1ЗС_КЕАТиКЕ <223> Антигенная детерминанта Т3 <400> 67
О1и Ьуз Ьуз 11е А1а Ьуз Меб О1и Ьуз А1а Зег Зег Уа1 РЬе Азп Уа1 1 5 10 15 <210> 68 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из остатков 19-28 поверхностного антигена гепатита В <400> 68
РЬе РЬе Ьеи Ьеи ТЬг Агд 11е Ьеи ТЬг 11е
5 10 <210> 69 <211> 19 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из остатков 153-171 белка теплового шока 65 микобактерии <400> 69
Азр О1п Зег 11е О1у Азр Ьеи 11е А1а О1и А1а Меб Азр Ьуз Уа1 О1у
5 10 15
Азп О1и О1у <210> 70
- 94 028356 <211> 14 <212> РКТ <213> Бацилла Кальметта - Герена <400> 70
О1п Vа1 1 . Нчз РНе О1п Рго 5 Ьеи Рго Рго А1а 10 Vа1 Vа1 Ьуз Ьеи
<210> 71
<211> 15
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из остатков 830 -844 токсоида столбняка
<400> 71
О1п Туг 11е Ьуз А1а Азп Зег Ьуз РЪе 11е О1у 11е ТЪг О1и Ьеи
1 5 10 15
<210> 72
<211> 21
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из остатков 947 -967 токсоида столбняка
<400> 72
РНе Азп Азп РНе ТЪг Vа1 Зег РЪе Тгр Ьеи Агд Vа1 Рго Ьуз Vа1 Зег
1 5 10 15
А1а Зег НФз Ьеи О1и 20 <210> 73 <211> 16 <212> РКТ <213> Н^ <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Н^ дЫ20 Т1 <400> 73
Ьуз О1п 11е 11е Азп МеЬ Тгр О1п О1и Vа1 О1у Ьуз А1а МеЬ Туг А1а
1 5 10 15
<210> 74
<211> 13
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Эпитоп Рап БК
- 95 028356 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (3)..(3) <223> Хаа может быть любой аминокислотой природного происхождения <400> 74
А1а Ьуз Хаа Уа1 А1а А1а Тгр ТЬг Ьеи Ьуз А1а А1а А1а
5 10 <210> 75 <211> 36 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Слитый белок, полученный из Т остатков токсоида столбняка 830-844 и 947-967 <400> 75
О1п Туг 1 11е Ьуз А1а Азп 5 Зег Ьуз РЬе 11е 10 О1у 11е ТЬг О1и Ьеи 15 РЬе
Азп Азп РЬе ТЬг Уа1 Зег РЬе Тгр Ьеи Агд Уа1 Рго Ьуз Уа1 Зег А1а
20 25 30
Зег Нтз Ьеи О1и
35
<210> 76
<211> 17
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из остатков 323- 389 овальбумина
<400> 76
11е Зег О1п А1а Уа1 Н1з А1а А1а Нтз А1а О1и 11е Азп О1и А1а О1у
1 5 10 15
Агд <210> 77 <211> 13 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из гемагглютинина А вируса гриппа <400> 77
- 96 028356
Рго Ьуз Туг Vа1 Ьуз О1п Азп ТЬг Ьеи Ьуз Ьеи А1а ТЬг 1 5 10 <210> 78 <211> 65 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Слитый белок, полученный из остатков 307-319 гемагглютинина А вируса гриппа, СЬ малярии: эпитоп Т3, остатки 830-844 и 947-967 токсоида столбняка <400> 78
Рго 1 Ьуз Туг Vа1 Ьуз 5 О1п Азп ТЬг Ьеи Ьуз 10 Ьеи А1а ТЬг О1и Ьуз 15 Ьуз
11е А1а Ьуз МеЬ 20 О1и Ьуз А1а Зег Зег 25 Vа1 РЬе Азп Vа1 О1п 30 Туг 11е
Ьуз А1а Азп 35 Зег Ьуз РЬе 11е О1у 40 11е ТЬг О1и Ьеи РЬе 45 Азп Азп РЬе
ТЬг Vа1 50 Зег РЬе Тгр Ьеи Агд 55 Vа1 Рго Ьуз Vа1 Зег 60 А1а Зег Нгз Ьеи
О1и <210> 79 <211> 37 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Слитый белок <400> 79
О1п Туг 11е Ьуз А1а Азп Зег Ьуз РЬе 11е О1у 11е ТЬг О1и Ьеи Суз
1 5 10 15
РЬе Азп Азп РЬе ТЬг Vа1 Зег РЬе Тгр Ьеи Агд Vа1 Рго Ьуз Vа1 Зег
20 25 30
А1а Зег НФз Ьеи О1и
35
<210> 80
<211> 15
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из человеческого А амилоидного белка
- 97 028356 <400> 80
Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а Агд
1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 81 15 РКТ Искусственная
<220> <223> Получена из человеческого А амилоидного белка
<400> 81
О1п О1у Тгр Ьеи ТЬг РЬе Ьеи Ьуз А1а А1а О1у О1п О1у А1а Ьуз 1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 82 10 РКТ Искусственная
<220> <223> Получена из мышиного А амилоидного белка
<400> 82
О1и Зег Тгр Агд Зег РЬе РЬе Ьуз О1и А1а
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 83 15 РКТ Искусственная
<220> <223> Получена из мышиного А амилоидного белка
<400> 83
О1у РЬе РЬе Зег РЬе Уа1 Нтз О1и А1а РЬе О1п О1у А1а О1у Азр
1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 84 8 РКТ Искусственная
<220> <223> Получена из мышиного А амилоидного белка
<400> 84
О1и А1а О1у О1п О1у Зег Агд Азр
1 5
<210> <211> <212> 85 14 РКТ
- 98 028356 <213> Искусственная <220>
<223> Получена из мышиного А амилоидного белка <400> 85
Тгр Туг Зег РЬе РЬе Агд О1и А1а Уа1 О1п О1у ТЬг Тгр Азр
5 10 <210> 86 <211> 99 <212> РКТ <213> Ното ЗарФепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Фрагменты 2 лямбда из человеческих амилоидных депо <400> 86
О1у 1 Зег Уа1 Уа1 ТЬг 5 О1п Рго Рго
ТЬг Уа1 А1а 11е 20 Зег Суз Зег О1у
А1а Уа1 Азп 35 Тгр Туг О1п О1п Ьеи 40
11е Туг 50 Туг Азр Азр Ьеи Ьеи 55 Рго
О1у 65 Зег Ьуз Зег О1у ТЬг 70 Зег А1а
Зег О1и Азр О1и О1у 85 Азр Туг Туг
Зег А1а Ьеи
Зег Уа1 10 Зег О1у А1а Рго Агд 15 О1п
Зег 25 Зег Зег Азп 11е О1у 30 Азп Азп
Рго О1у Ьуз А1а Рго 45 Ьуз Уа1 Ьеи
А1а О1у Уа1 Зег 60 Азр Агд РЬе Зег
Зег Ьеи А1а 75 11е Агд О1у Ьеи О1п 80
Суз А1а 90 А1а Тгр Азр Азр Зег 95 Ьеи
<210> 87 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка <400> 87
Суз О1у О1у НФз О1и Азр ТЬг
5
- 99 028356
<210> 88
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного
<400> 88 белка
Суз О1у О1у А1а О1и Азр Зег 1 5 <210> 89 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного <400> 89 белка
О1у НФз О1и Азр ТЬг 11е А1а Азр О1п О1и
5 10
<210> 90
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного
<400> 90 белка
Суз О1у О1у А1а О1и Азр ТЬг
1 5
<210> 91
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного
<400> 91
Суз О1у О1у Нгз А1а Азр ТЬг
1 5
белка
<210> 92
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного
белка
- 100 028356
<400> 92
Суз О1у О1у Нгз О1и А1а ТЬг
1 5
<210> 93
<211> 7
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка
<400> 93
Суз О1у О1у Нгз О1и Азр А1а 1 5 <210> 94 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка
<400> 94
Суз О1у О1у Нгз О1и Азр ТЬг Мек
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка
<400> 95
Суз О1у О1у Нгз О1и Азр ТЬг Мек . А1а
1 5
<210> 96
<211> 10
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка
<400> 96
Суз О1у О1у Нгз О1и Азр ТЬг Мек А1а Азр 1 5 10 <210> 97 <211> 6 <212> РКТ
- 101 028356 <213> Искусственная <220>
<223> Получена из сывороточного А амилоидного белка <400> 97
Суз О1у 1 О1у Нтз О1и 5 Азр
<210> <211> <212> <213> 98 122 РКТ Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ НЗАА1
<400> 98
МеЬ Ьуз 1 Ьеи Ьеи ТЬг 5 О1у Ьеи Уа1
Зег Зег Агд Зег 20 РЬе РЬе Зег РЬе
Агд Азр МеЬ 35 Тгр Агд А1а Туг Зег 40
О1у Зег 50 Азр Ьуз Туг РЬе Н1з 55 А1а
Агд О1у 65 Рго О1у О1у Уа1 70 Тгр А1а
О1и Азп 11е О1п Агд 85 РЬе РЬе О1у
Азр О1п А1а А1а 100 Азп О1и Тгр О1у
РЬе Агд Рго 115 А1а О1у Ьеи Рго О1и 120
РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у 15 Уа1
Ьеи 25 О1у О1и А1а РЬе Азр 30 О1у А1а
Азр МеЬ Агд О1и А1а 45 Азп Туг 11е
Агд О1у Азп Туг 60 Азр А1а А1а Ьуз
А1а О1и А1а 75 11е Зег Азр А1а Агд 80
Н1з О1у 90 А1а О1и Азр Зег Ьеи 95 А1а
Агд 105 Зег О1у Ьуз Азр Рго 110 Азп Нтз
Ьуз Туг <210> 99 <211> 122 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> НЗАА2 <400> 99
- 102
Меб 1 Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг О1у Ьеи Уа1 5 РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи Зег 15 Уа1
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе Нбз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азп А1а Агд
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд Ьеи ТЬг О1у Нйз О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп Ьуз Тгр О1у Агд Зег О1у Агд Азр Рго Азп Нйз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 100
<211> 122
<212> РКТ
<213> Ното зарйепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> НЗАА3
<400> 100
Меб Ьуз Ьеи Зег ТЬг О1у 11е 11е РЬе Суз Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у Уа1
1 5 10 15
Зег Зег О1п О1у Тгр Ьеи ТЬг РЬе Ьеи Ьуз А1а А1а О1у О1п О1у А1а
20 25 30
Ьуз Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Ьуз О1и А1а Азп Туг Ьуз
35 40 45
Ьуз Зег Азр Ьуз Туг РЬе Нбз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а Уа1 О1п
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а ТЬг О1и Уа1 11е Зег Азр А1а Агд
65 70 75 80
- 103
О1и Азп να1 О1п Агд Ьеи ТЬг О1у Азр НФз А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
О1у О1п А1а ТЬг Азп Ьуз Тгр О1у О1п Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп НФз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 101
<211> 130
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> НЗАА4
<400> 101
Меб Агд Ьеи РЬе ТЬг О1у 11е να1 РЬе Суз Зег Ьеи να1 Меб О1у να1
1 5 10 15
ТЬг Зег О1и Зег Тгр Агд Зег РЬе РЬе Ьуз О1и А1а Ьеи О1п О1у να1
20 25 30
О1у Азр Меб О1у Агд А1а Туг Тгр Азр 11е Меб 11е Зег Азп НФз О1п
35 40 45
Азп Зег Азп Агд Туг Ьеи Туг А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у να1 Тгр А1а А1а Ьуз Ьеи 11е Зег Агд Зег Агд
65 70 75 80
να1 Туг Ьеи О1п О1у Ьеи 11е Азр Туг Туг Ьеи РЬе О1у Азп Зег Зег
85 90 95
ТЬг να1 Ьеи О1и Азр Зег Ьуз Зег Азп О1и Ьуз А1а О1и О1и Тгр О1у
100 105 110
Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азр Агд РЬе Агд Рго Азр О1у Ьеи Рго Ьуз
115 120 125
Ьуз Туг 130
<210> 102
<211> 76
<212> РКТ
<213> Ното
- 104 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> НАА1 <400> 102
Агд 1 Зег РЬе РЬе Зег 5 РЬе Ьеи О1у О1и А1а 10 РЬе Азр О1у А1а Агд 15 Азр
Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е О1у Зег
20 25 30
Азр Ьуз Туг РЬе Нчз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и А1а 11е Зег Азр А1а Агд О1и Азп
50 55 60
11е О1п Агд РЬе РЬе О1у Нчз О1у А1а О1и Азр Зег
65 70 75
<210> 103
<211> 76
<212> РКТ
<213> Ното зар1епз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> НАА2
<400> 103
Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а Агд Азр
1 5 10 15
Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е О1у Зег
20 25 30
Азр Ьуз Туг РЬе Нчз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азп А1а Агд О1и Азп
50 55 60
11е О1п Агд Ьеи ТЬг О1у Нтз О1у А1а О1и Азр Зег
65 70 75
<210> 104 <211> 76 <212> РКТ <213> Ното заргепз
- 105 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> НАА3 <400> 104
О1п О1у 1 Тгр Ьеи ТЬг 5 РЬе Ьеи Ьуз А1а А1а О1у О1п О1у А1а Ьуз Азр
10 15
Мек Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Мек Ьуз О1и А1а Азп Туг Ьуз Ьуз Зег
20 25 30
Азр Ьуз Туг РЬе Н1з А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а Уа1 О1п Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а ТЬг О1и Уа1 11е Зег Азр А1а Агд О1и Азп
50 55 60
Уа1 О1п Агд Ьеи ТЬг О1у Азр Н1з А1а О1и Азр Зег
65 70 75
<210> 105
<211> 84
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> НАА4
<400> 105
О1и Зег Тгр Агд Зег РЬе РЬе Ьуз О1и А1а Ьеи О1п О1у Уа1 О1у Азр
1 5 10 15
Мек О1у Агд А1а Туг Тгр Азр 11е Мек 11е Зег Азп Н1з О1п Азп Зег
20 25 30
Азп Агд Туг Ьеи Туг А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а Ьуз Ьеи 11е Зег Агд Зег Агд Уа1 Туг
50 55 60
Ьеи О1п О1у Ьеи 11е Азр Туг Туг Ьеи РЬе О1у Азп Зег Зег ТЬг Уа1
65 70 75 80
11е О1и Азр Зег <210> 106 <211> 117
- 106 028356 <212> РКТ
<213> Миз тизси1из (мышь домовая)
<220>
<221> М1ЗС_КЕАТиКЕ
<223> МЗАА1
<400> 106
Меб Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг Зег Ьеи Уа1 РЬе Суз Зег Ьеи Ьеи Ьеи О1у Уа1
1 5 10 15
Суз Ηΐ3 О1у О1у РЬе РЬе Зег РЬе Уа1 Няз О1и А1а РЬе О1п О1у А1а
20 25 30
О1у Азр Меб Тгр Агд А1а Туг ТЬг Азр Меб Ьуз О1и А1а Азп Тгр Ьуз
35 40 45
Азп Зег Азр Ьуз Туг РЬе Няз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и Ьуз 11е Зег Азр О1у Агд
65 70 75 80
О1и А1а РЬе О1п О1и РЬе РЬе О1у Агд 11е А1а Азр О1п О1и А1а Азп
85 90 95
Агд Ηΐ3 О1у Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп Туг Туг Агд Рго Рго О1у
100 105 110
Ьеи Рго Азр Ьуз Туг
115
<210> 107
<211> 122
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> МЗАА2
<400> 107
Меб Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг Зег Ьеи Уа1 РЬе Суз Зег Ьеи Ьеи Ьеи О1у Уа1
1 5 10 15
Суз Няз О1у О1у РЬе РЬе Зег РЬе 11е О1у О1и А1а РЬе О1п О1у А1а
20 25 30
О1у Азр Меб Тгр Агд А1а Туг ТЬг Азр Меб Ьуз О1и А1а О1у Тгр Ьуз
- 107
35 40
Азр О1у 50 Азр Ьуз Туг РЬе Н1з 55 А1а
Агд 65 О1у Рго О1у О1у Уа1 70 Тгр А1а
О1и Зег РЬе О1п О1и 85 РЬе РЬе О1у
Азр О1п О1и А1а 100 Азп Агд Н1з О1у
Туг Агд Рго Рго О1у Ьеи Рго А1а
115 120
Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п 60
А1а О1и Ьуз 11е Зег Азр А1а Агд 75 80
Агд О1у Н1з О1и Азр ТЬг Меб А1а 90 95
Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп Туг
105 110
Ьуз Туг <210> 108 <211> 122 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> МЗАА3 <400> 108
Меб 1 Ьуз Рго Зег 11е 5 А1а 11е 11е
Азр Зег О1п Агд 20 Тгр Уа1 О1п РЬе
Агд Азр Меб 35 Тгр Агд А1а Туг Зег 40
Азп Зег 50 Азр Ьуз Туг РЬе Н1з 55 А1а
Агд 65 О1у Рго О1у О1у А1а 70 Тгр А1а
О1и А1а Уа1 О1п Ьуз 85 РЬе ТЬг О1у
Азр О1п РЬе А1а 100 Азп О1и Тгр О1у
Ьеи Суз 11е Ьеи 11е Ьеи О1у Уа1 10 15
Меб Ьуз О1и А1а О1у О1п О1у Зег
30
Азр Меб Ьуз Ьуз А1а Азп Тгр Ьуз 45
Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Агд 60
А1а Ьуз Уа1 75 11е Зег Азр А1а Агд 80
Н1з О1у А1а О1и Азр Зег Агд А1а
90 95
Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп Нтз
105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго Ьуз Агд Туг
- 108
115 120 <210> 109 <211> 130 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> МЗАА4 <400> 109
Меб Агд Ьеи А1а ТЬг Уа1 11е Уа1 Ьеи Суз 10 Зег Ьеи РЬе Ьеи О1у Уа1 15
1 5
Зег О1у Азр О1у Тгр Туг Зег РЬе РЬе Агд О1и А1а Уа1 О1п О1у ТЬг
20 25 30
Тгр Азр Ьеи Тгр Агд А1а Туг Агд Азр Азп Ьеи О1и А1а Азп Туг О1п
35 40 45
Азп А1а Азр О1п Туг РЬе Туг А1а Агд О1у Азп Туг О1и А1а О1п О1п
50 55 60
Агд О1у Зег О1у О1у 11е Тгр А1а А1а Ьуз 11е 11е Зег ТЬг Зег Агд
65 70 75 80
Ьуз Туг РЬе О1п О1у Ьеи Ьеи Азп Агд Туг Туг РЬе О1у 11е Агд Азп
85 90 95
Нчз О1у Ьеи О1и ТЬг Ьеи О1п А1а ТЬг О1п Ьуз А1а О1и О1и Тгр О1у
100 105 110
Агд Зег О1у Ьуз Азп Рго Азп Нчз РЬе Агд Рго О1и О1у Ьеи Рго О1и
115 120 125
Ьуз РЬе
130
<210> 110
<211> 85
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> МАА1
<400> 110
О1у РЬе РЬе Зег РЬе Уа1 Нтз О1и А1а РЬе О1п О1у А1а О1у Азр Меб
1 5 10 15
- 109
Тгр Агд А1а Туг ТЬг Азр МеЬ Ьуз О1и А1а Азп Тгр Ьуз Азп Зег НФз
20 25 30
О1и Азр ТЬг 11е А1а Азр О1п О1и А1а Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд
35 40 45
О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п Агд О1у Рго О1у О1у Vа1 Тгр А1а А1а
50 55 60
О1и Ьуз 11е Зег Азр О1у Агд О1и А1а РЬе О1п О1и РЬе РЬе О1у Агд
65 70 75 80
О1у НФз О1и Азр ТЬг
85
<210> 111
<211> 75
<212> РКТ
<213> Мышиная
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> МАА2
<400> 111
О1у РЬе РЬе Зег РЬе 11е О1у О1и А1а РЬе О1п О1у А1а О1у Азр МеЬ
1 5 10 15
Тгр Агд А1а Туг ТЬг Азр МеЬ Ьуз О1и А1а О1у Тгр Ьуз Азр О1у Азр
20 25 30
Ьуз Туг РЬе Нгз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а О1п Агд О1у Рго
35 40 45
О1у О1у Vа1 Тгр
50
О1п О1и РЬе РЬе
65
А1а А1а О1и 55 Ьуз
О1у Агд 70 О1у Нгз
11е Зег Азр А1а 60
О1и Азр ТЬг 75
Агд О1и Зег РЬе <210> 112 <211> 68 <212>
<213>
РКТ
Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> МАА3 <400> 112
- 110
О1и А1а О1у О1п О1у Зег Агд Азр МеЪ Тгр Агд А1а Туг Зег Азр МеЪ
1 5 10 15
Ъуз Ъуз А1а Азп Тгр Ъуз Азп Зег Азр Ъуз Туг РЪе Нчз А1а Агд О1у
20 25 30
Азп Туг Азр А1а А1а Агд Агд О1у Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а Ъуз
35 40 45
Vа1 11е Зег Азр А1а Агд О1и А1а Vа1 О1п Ъуз РЪе ТЪг О1у Нчз О1у
50 55 60
А1а О1и Азр Зег
65
<210> 113
<211> 82
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<220>
<221> М1ЗС_ _ЕЕАТиКЕ
<223> МАА4
<400> 113
Тгр Туг Зег РЪе РЪе Агд О1и А1а Vа1 О1п О1у ТЪг Тгр Азр Ъеи Тгр
1 5 10 15
Агд А1а Туг Агд Азр Азп Ъеи О1и А1а Азп Туг О1п Азп А1а Азр О1п
20 25 30
Туг РЪе Туг А1а Агд О1у Азп Туг О1и А1а О1п О1п Агд О1у Зег О1у
35 40 45
О1у 11е Тгр А1а А1а Ъуз 11е 11е Зег ТЪг Зег Агд Ъуз Туг РЪе О1п
50 55 60
О1у Ъеи Ъеи Азп Агд Туг Туг РЪе О1у 11е Агд Азп Нтз О1у Ъеи О1и
70 75 80
ТЪг Ъеи
<210> 114
<211> 122
<212> РКТ
<213> Ното заргепз
<220> <221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> НЗАА1 а1рЪа
- 111 <400> 114
Меб 1 Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг О1у 5 Ьеи Уа1 РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у 15 Уа1
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и А1а 11е Зег Азр А1а Агд
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд РЬе РЬе О1у НФз О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп О1и Тгр О1у Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп НФз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 115
<211> 122
<212> РКТ
<213> Ното зарФепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> НЗЗА1 Ьеба
<400> 115
Меб Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг О1у Ьеи Уа1 РЬе Суз Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у Уа1
1 5 10 15
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азр А1а Агд
- 112
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд 85 РНе РЬе О1у Н1з Азр 90 А1а О1и Азр Зег Ьеи 95 А1а
Азр О1п А1а А1а 100 Азп О1и Тгр О1у Агд 105 Зег О1у Ьуз Азр Рго 110 Азп Нгз
РНе Агд Рго 115 А1а О1у Ьеи Рго О1и 120 Ьуз Туг
<210> 116 <211> 122 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М13С_КЕАТиКЕ <223> НЗЗА1 гамма <400> 116
МеЬ 1 Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг 5 О1у Ьеи Уа1 РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи О1у 15 Уа1
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр МеЬ Тгр Агд А1а Туг Зег Азр МеЬ Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе Н1з А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и А1а 11е Зег Азр А1а Агд
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд РЬе РЬе О1у Н1з Азр А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп Ьуз Тгр О1у Агд Зег О1у Агд Азр Рго Азп Нгз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 117
<211> 122
<212> РКТ
<213> Ното
- 113 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> НЗАА2 альфа <400> 117
Меб 1 Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг О1у Ьеи 5 Уа1 РЬе Суз 10 Зег Ьеи Уа1 Ьеи Зег 15 Уа1
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
Агд О1у Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азп А1а Агд
65 70 75 80
О1и Азп 11е О1п Агд Ьеи ТЬг О1у НФз О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп Ьуз Тгр О1у Агд Зег О1у Агд Азр Рго Азп НФз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 118
<211> 122
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> НЗАА2 бета
<400> 118
Меб Ьуз Ьеи Ьеи ТЬг О1у Ьеи Уа1 РЬе Суз Зег Ьеи Уа1 Ьеи Зег Уа1
1 5 10 15
Зег Зег Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а
20 25 30
Агд Азр Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е
35 40 45
О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз
50 55 60
- 114
Агд О1у 65 Рго О1у О1у А1а Тгр А1а А1а О1и Уа1 11е Зег Азп А1а Агд 80
70 75
О1и Азп 11е О1п Агд Ьеи ТЬг О1у Агд О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а
85 90 95
Азр О1п А1а А1а Азп Ьуз Тгр О1у Агд Зег О1у Агд Азр Рго Азп НФз
100 105 110
РЬе Агд Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
115 120
<210> 119
<211> 104
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> Бета изоформа НАА1
<400> 119
Агд Зег РЬе РЬе Зег РЬе Ьеи О1у О1и А1а РЬе Азр О1у А1а Агд Азр
1 5 10 15
Меб Тгр Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг 11е О1у Зег
20 25 30
Азр Ьуз Туг РЬе НФз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а Ьуз Агд О1у
35 40 45
Рго О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и А1а 11е Зег Азр А1а Агд О1и Азп
50 55 60
11е О1п Агд РЬе РЬе О1у НФз О1у А1а О1и Азр Зег Ьеи А1а Азр О1п
65 70 75 80
А1а А1а Азп О1и Тгр О1у Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп НФз РЬе Агд
85 90 95
Рго А1а О1у Ьеи Рго О1и Ьуз Туг
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
100 <210> 120 <211> 102 <212> РКТ <213> Миз тизси1из
- 115
<223> <400> Сывороточный 120 А амилоидный белок
11е О1у О1и А1а РЬе 10 О1п О1у А1а О1у Азр 15 Меб
О1у 1 РЬе РЬе Зег РЬе 5
Тгр Агд А1а Туг ТЬг Азр Меб Ьуз О1и А1а О1у Тгр Ьуз Азр О1у Азр
20 25 30
Ьуз Туг РЬе Нчз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а С1п Агд О1у Рго
35 40 45
О1у О1у Уа1 Тгр А1а А1а О1и Ьуз 11е Зег Азр А1а Агд О1и Зег О1п
50 55 60
О1и РЬе РЬе О1у Агд О1у Нчз О1и Азр ТЬг Меб А1а Азр С1п О1и А1а
65 70 75 80
Азп Агд Нчз О1у Агд Зег О1у Ьуз Азр Рго Азп Туг Туг Агд Рго Рго
85 90 95
О1у Ьеи Рго А1а Ьуз Туг
100
<210> 121
<211> 84
<212> РКТ
<213> Сапгз 1ириз : ЕатШаггз (шарпей)
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТиКЕ
<223> Сывороточный А амилоидный белок
<400> 121
Тгр Туг Зег РЬе Уа1 О1у О1и А1а А1а С1п О1у А1а Тгр Азр Меб Ьеи
1 5 10 15
Агд А1а Туг Зег Азр Меб Агд О1и А1а Азп Туг Ьуз Азп Зег Азр Ьуз
20 25 30
Туг РЬе Нчз А1а Агд О1у Азп Туг Азр А1а А1а С1п Агд О1у Рго О1у
35 40 45
О1у А1а Тгр А1а А1а Ьуз Уа1 11е Зег Азр А1а Агд О1и Азп Зег О1п
50 55 60
Агд Азр Зег О1у Нтз О1у А1а О1и Азр Зег Ьуз А1а Азр О1п А1а А1а
65 70 75 80
Азп О1и Тгр О1у
- 116 <210> 122 <211> 8 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Аминокислотная вставка между положениями 67 и 68 в последовательности шарпея <400> 122
11е ТЬг Азр Ьеи Ьеи Агд РЬе О1у 1 5 <210> 123 <211> 95 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр1а <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности ν каппа легкой цепи <400> 123
Азр 1 11е О1п Меб ТЬг 5 О1п Зег Рго Зег ТЬг 10 Ьеи Зег А1а Зег να1 15 О1у
Азр Агд να1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег О1п Зег 11е Зег Зег Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Ьуз А1а Зег Зег Ьеи О1и Зег О1у να1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
Азр Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Зег Туг Зег
85 90 95
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <210> 124 <211> 17 <212> РКТ <213> Ното зартепз
- 117 <223> кр1Ь <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 124
Зег О1п Азр 1
Азп Туг Азп Азр Азп ТЬг Азр 5 10
РЬе О1и 11е Азр Азп Ьеи 15
Рго <210> 125 <211> 11 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр1с <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 125
Зег Туг Азп А1а О1п Азр О1и Зег Туг ТЬг Рго
5 10 <210> 126 <211> 13 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> крШ <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 126
Зег О1у Агд Азп 1
Азр О1у Агд А1а О1п 5
О1и Ьеи Н1з Рго 10 <210> 127 <211> 11 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр1е
- 118 <220>
<221> <223> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи
<400> 127
Зег О1у Азп Туг РЬе Зег А1а О1п Азр О1и Рго
1 5 10
<210> 128
<211> 11
<212> РКТ
<213> Ното заргепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> кр1£
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи
<400> 128
А1а Ьеи Зег О1у А1а Азр Азр О1и РЬе Азп Рго
1 5 10
<210> 129
<211> 10
<212> РКТ
<213> Ното заргепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> кр1д
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи
<400> 129
Зег ν&1 . О1у А1а О1п Азр О1и А1а РЬе Рго
1 5 10
<210> 130
<211> 51
<212> РКТ
<213> Ното заргепз
<220> <221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> кр2а
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 130
- 119
ν&1 1 ТЬг Ьеи Зег Рго ν&1 5 ТЬг Рго О1и Рго А1а 10 Зег Зег Зег Ьеи 15 Ьеи
Азр Зег Азр Азр О1у Азп ТЬг Туг Азр Ьеи О1п Зег О1п ТЬг Ьеи Туг
20 25 30
Агд А1а Азр Азр Ьуз Агд ν&1 О1и А1а О1и ν&1 О1у ν&1 Меб Агд 11е
35 40 45
О1и РЬе Рго 50 <210> 131 <211> 49 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр2Ь <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 131
ν&1 1 Ьеи Зег Рго ν&1 5 ТЬг Рго О1и Рго А1а 10 Зег Зег Зег Ьеи Ьеи 15 Нтз
Зег Азп О1у Туг Азп Туг Азр Ьеи О1п Зег О1п Ьеи О1у Азп Агд А1а
20 25 30
Азр Азр Ьуз Агд ν&1 О1и А1а О1и ν&1 О1у ν&1 Меб А1а Ьеи О1п ТЬг
35 40 45
Рго <210> 132 <211> 50 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр2с <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 132
- 120
Vа1 1 ТЬг Ьеи Зег Vа1 5 ТЬг Рго О1п Рго А1а 10 Зег Зег Ьуз Зег Ьеи 15 Ьеи
НФз Зег Азр О1у Ьуз ТЬг Туг Туг Ьеи О1п Рго О1п О1и Vа1 Азп Агд
20 25 30
РЬе Азр Азр Ьуз Агд Vа1 О1и А1а О1и Vа1 О1у Vа1 МеЬ Зег 11е О1п
40 45
Ьеи Рго 50
<210> 133
<211> 26
<212> РКТ
<213> Ното зарФепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> кр3а
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 133
О1и Vа1 А1а Vа1 Рго О1и А1а Ьеи Зег Vа1 Азп О1п Агд О1у ТЬг Агд 1 5 10 15
А1а ТЬг 11е А1а Зег О1и Vа1 Азп Тгр Рго 20 25 <210> 134 <211> 29 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> кр3Ь <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 134
О1и Vа1 Ьеи О1у Ьеи Рго О1и А1а Ьеи Зег Vа1 Зег Туг О1п Агд О1у 1 5 10 15
Агд А1а ТЬг 11е Азр Азр Агд О1и О1и Vа1 О1у Зег Рго 20 25 <210> 135
- 121 <211> 31 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> кр3с <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V каппа легкой цепи <400> 135
О1и Vа1 Ьеи А1а Ьеи Рго О1и А1а Ьеи Зег Vа1 Зег Туг О1п Агд Азр
1 5 10 15
Азп Агд А1а ТЪг 11е А1а Азр О1и О1и Vа1 Агд Зег Азп Тгр Рго
20 25 30
<210> 136 <211> 35 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> кр4 <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Зародышевые последовательности V легкой цепи лямбда <400> 136
Vа1 Азр Зег А1а Vа1 Ьеи О1и А1а Азп Ьуз Зег Vа1 Ьеи Туг Зег Зег
1 5 10 15
Азп Азп Ьуз Азп Туг О1п Рго Тгр ТЪг Агд Азр Азр А1а О1и Vа1 Vа1
20 25 30
Туг ТЪг Рго 35 <210> 137 <211> 49 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> кр5 <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи
- 122 <400> 137
О1и 1 ТЬг ТЬг Ьеи А1а 5 РЬе Меб ТЬг Рго Ьуз 10 Азп Зег Ьуз Азр Азр Азр 15
Азр Меб Азп О1и А1а 11е РЬе 11е О1п О1и ТЬг ТЬг ν&1 Рго 11е Рго
20 25 30
Туг Азр Азп Азп 11е О1и Зег О1и А1а Туг РЬе Ьеи Нчз Азр Азп РЬе
35 40 45
Рго <210> 138 <211> 97 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т1а <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 138
О1п 1 Зег ν&1 Ьеи ТЬг 5 О1п Рго Рго Зег ν&1 10 Зег А1а А1а Рго О1у 15 О1п
ν&1 ТЬг 11е Зег Суз Зег О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у Азп Азп Туг
20 25 30
ν&1 Зег Тгр Туг О1п О1п Ьеи Рго О1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг О1и Азп Азп Ьуз Агд Рго Зег О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег Ьуз Зег О1у ТЬг Зег А1а ТЬг Ьеи О1у 11е ТЬг О1у Ьеи О1п ТЬг
65 70 75 80
О1у Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз О1у ТЬг Тгр Азр Зег Зег Ьеи Зег
85 90 95
А1а <210> 139 <211> 19
- 123 028356
<212> РКТ
<213> Ното заргепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> 1т1Ь
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> V лямбда легкой цепи
<400> 139
А1а О1у ТЬг Агд Зег Туг Агд О1п Vа1 Зег А1а Зег Агд Зег О1и А1а
1 5 10 15
А1а Азр О1у <210> 140 <211> 21 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т1с <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 140
Vа1 О1у Агд ТЬг А1а О1у Туг Азр Няз О1у Зег Азп Vа1 Зег А1а А1а 1 5 10 15
О1и О1п Зег Туг О1у <210> 141 <211> 27 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т2а <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 141
А1а А1а О1у Зег Зег 11е ТЬг ТЬг Азр ν&1 Зег Туг Ьеи Нгз Ьуз Меб
1 5 10 15
- 124
О1у Зег Уа1 Зег А1а А1а О1и О1п Зег Туг О1у 20 25 <210> 142 <211> 34 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т2Ь <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 142
А1а Агд О1у Зег ν&1 11е ТЬг ТЬг Азр ν&1 О1у Туг НФз Ьуз Меб Азр
5 10 15 ν&1 Зег ν&1 Азп ТЬг Зег ТЬг Зег А1а О1и Суз Зег Туг А1а О1у Туг 20 25 30
ТЬг РЬе <210> 143 <211> 41 <212> РКТ <213> Ното зарФепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т3а <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> ν лямбда легкой цепи <400> 143
Зег Туг ν&1 Ьуз ТЬг А1а Агд ТЬг О1у Азп Азп 11е О1у Зег Ьуз Зег
1 5 10 15
НФз Ьуз О1п ν&1 ν&1 ν&1 Азр Азр Зег Азр 25 О1и Азп Азп ТЬг ТЬг Зег 30
20
Агд ν&1 О1и А1а О1п ν&1 Зег Азр НФз
35 40
<210> 144
<211> 38
<212> РКТ
<213> Ното зарЁепз
- 125 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т3Ь <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 144
Зег 1 Туг О1и ναΐ Зег 5 ТЬг А1а Агд ТЬг Азр 10 А1а Ьеи Рго Ьуз О1п 15 А1а
Туг Ьуз О1п ναΐ 20 ναΐ Ьуз Азр Зег О1и 25 О1и Зег ТЬг να1 ТЬг 30 Зег να1
А1а О1и О1п 35 Зег А1а О1у
<210> 145 <211> 39 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т3с <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 145
Зег Туг О1и να1 Зег ТЬг А1а Зег ТЬг Азр Ьуз Ьеи О1у Азр Ьуз А1а
1 5 10 15
Суз Ьуз С1п Зег 20 Vа1 Vа1 О1п Азр Зег 25 О1и Азп Азп ТЬг ТЬг Зег ТЬг 30
А1а Меб С1п 35 А1а ТЬг А1а Нгз
<210> 146 <211> 23 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т4 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи
- 126 <400> 146
Зег О1и Азр А1а Уа1 Ьеи ТЬг Агд ТЬг О1п Азр Ьеи Агд Зег Туг А1а 1 5 10 15
Ьуз О1п Уа1 Уа1 О1у Ьуз Азп 20 <210> 147 <211> 38 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т6 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 147
Азп 1 РЬе Меб Нтз О1и 5 Зег Ьуз ТЬг ТЬг Агд 10 О1у Зег А1а Зег О1п 15 Агд
Зег Зег ТЬг ТЬг 20 ν&1 Азр О1п ν&1 11е 25 Азр Зег Зег Азп Зег 30 ТЬг Зег
Ьуз О1и О1п 35 Зег Туг Азп
<210> 148 <211> 57 <212> РКТ <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т7 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 148
ТЬг ν&1 1 О1и Ьеи ТЬг 5 ν&1 Зег О1у ТЬг Ьеи 10 ТЬг А1а Зег ТЬг О1у 15 А1а
ν&1 ТЬг Зег О1у Туг Рго Азп РЬе Ьуз О1п Агд А1а Зег ТЬг Зег Азп
20 25 30
Ьуз Нтз Тгр ТЬг А1а Ьеи Ьеи О1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи Зег ν&1 Рго О1и
35 40 45
- 127
О1и Ьеи Ьеи Туг Туг О1у О1у А1а О1п 50 55 <210> 149 <211> 50 <212> РКТ <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> 1т8 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> V лямбда легкой цепи <400> 149
Ьеи 1 Зег А1а Зег Ьеи 5 А1а Зег Ьуз Ьеи ТЬг 10 ТЬг Ьеи О1у Н1з Зег 15 Зег
Туг А1а 11е А1а Н1з О1п О1и Ьуз О1у Агд Туг Мек Ьуз Ьеи Зег Азр
20 25 30
О1у О1у Азр Зег А1а О1и Агд Туг ТЬг Зег Зег Зег О1и О1п О1у ТЬг
35 40 45
О1у 11е
50
<210> 150
<211> 98
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> V лямбда Μί1
<400> 150
Азп РЬе Ьеи Ьеи ТЬг О1п Рго Н1з Зег Vа1 Зег О1и Зег Рго О1у Ьуз
1 5 10 15
ТЬг Vа1 ТЬг 11е Зег Суз ТЬг Агд Зег Зег О1у Зег 11е А1а Азп Азп
20 25 30
Туг Vа1 Н1з Тгр Туг О1п О1п Агд Рго О1у Зег Зег Рго ТЬг ТЬг Vа1
35 40 45
11е РЬе О1и Азр Азр Нгз Агд Рго Зег О1у Vа1 Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
- 128
О1у Зег Vа1 Азр ТЬг Зег Зег Азп Зег А1а Зег Ьеи ТЬг 11е Зег О1у
65 70 75 80
Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз О1п Зег Туг Азр Нгз
85 90 95
Азп Азп <210> 151 <211> 4 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> V каппа фрагмент из АЬ-амилоидного белка <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Консенсусная последовательность, полученная из человеческих амилоидогенных белков <400> 151
Рго О1и Азр Vа1 <210> 152 <211> 131 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> V каппа легкой цепи мышиных 2А4 и 809 <220>
<221> ЗТСЫАЬ <222> (1)..(19) <223> Лидерная последовательность <220>
<221> таб_пептид (кодирующая последовательность зрелого пептида или белка™) <222> (20)..(131) <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (43)..(58) <223> СЬК 1 <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (74)..(80) <223> СЬК 2 <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
- 129 028356 <222> (113)..(121) <223> СВК 3 <400> 152
Меб Ьуз Ьеи Рго να1 -15 Агд Ьеи Ьеи να1 Ьеи -10 Меб РЬе Тгр 11е Рго -5 А1а
Зег Зег Зег Азр να1 να1 Меб ТЬг О1п ТЬг Рго Ьеи Зег Ьеи Рго να1
-1 1 5 10
Зег Ьеи О1у Азр О1п А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег О1п Зег Ьеи
15 20 25
να1 НФз Зег ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи НФз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго
30 35 40 45
О1у О1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз να1 Зег Азп Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у να1 Рго Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Туг РЬе ТЬг
65 70 75
Ьеи Ьуз 11е Зег Агд να1 О1и А1а О1и Азр Ьеи О1у να1 Туг РЬе Суз
80 85 90
Зег О1п Зег ТЬг Нтз να1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи
95 100 105
О1и 11е Ьуз
110 <210> 153 <211> 131 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> ν каппа легкой цепи мышиного 7Ό8 <220>
<221> ЗТСЫАЬ <222> (1)..(19) <223> Лидерная последовательность <220>
<221> таб_пептид <222> (20)..(131) <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (43)..(58) <223> СЬК 1 <220>
- 130 <221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (74)..(80) <223> СБК 2 <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <222> (113)..(121) <223> СБК 3 <400> 153
МеЪ Ьуз Ьеи Рго Vа1 -15 Агд Ьеи Ьеи Vа1 Ьеи -10 МеЪ РЪе Тгр 11е Рго -5 А1а
Зег Зег Зег Азр Vа1 Vа1 МеЪ ТЪг О1п ТЪг Рго Ьеи Зег Ьеи Рго Vа1
-1 1 5 10
Зег Ьеи О1у Азр О1п А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи
15 20 25
Vа1 Нчз Зег ТЪг О1у Азп ТЪг Туг Ьеи Нчз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго
30 35 40 45
О1у О1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз Vа1 Зег Азп Агд РЪе Зег
50 55 60
О1у Vа1 Рго Азр Агд РЪе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЪг Туг РЪе ТЪг
65 70 75
Ьеи Ьуз 11е Зег Агд Vа1 О1и А1а О1и Азр Ьеи О1у Vа1 Туг РЪе Суз
80 85 90
Зег О1п Зег ТЪг Нтз Vа1 Рго РЪе ТЪг РЪе О1у О1у О1у ТЪг Ьуз Ьеи
95 100 105
О1и 11е Ьуз 110 <210> 154 <211> 138 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> ν тяжелой цепи мышиных 2А4, 809 и 7Ό8 <220>
<221> З1ОЫАЬ <222> (1)..(19) <223> Лидерная последовательность <220>
<221> таЪ_пептид
- 131 028356 <222> (20)..(138) <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (45)..(54) <223> СВК 1 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (69)..(87) <223> СВК 2 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (120)..(127) <223> СВК 3 <400> 154
Меб ν&1 Ьеи О1у Ьеи -15 Ьуз Тгр ν&1 РЬе РЬе -10 ν&1 ν&1 РЬе Туг О1п -5 О1у
ν&1 Н1з Суз О1и ν&1 О1п Ьеи ν&1 О1и Зег О1у О1у Агд Ьеи ν&1 О1п
-1 1 5 10
Рго Ьуз О1у Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе
15 20 25
Азп ТЬг Туг А1а Меб Туг Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи
30 35 40 45
О1и Тгр ν&1 А1а Агд 11е Агд Зег Ьуз Зег Азп Азп Туг А1а 11е Туг
50 55 60
Туг А1а Азр Зег ν&1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е РЬе Агд Азр Азр Зег
65 70 75
О1п Зег Меб Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Азп Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг
80 85 90
А1а Меб Туг Туг Суз ν&1 Агд Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг Тгр
95 100 105
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи ν&1 ТЬг ν&1 Зег А1а
110 115
<210> 155
<211> 112
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 1 ν каппа легкой цепи гуманизированного 2А4 и 809
<400> 155
- 132 028356
Азр 1 Уа1 Уа1 Меб ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 20 11е Зег Суз Агд Зег 25 Зег О1п Зег Ьеи Уа1 30 Нйз Зег
ТЬг О1у Азп 35 ТЬг Туг Ьеи Нйз Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п Зег
Рго О1п 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз 55 Уа1 Зег Азп Агд РЬе 60 Зег О1у Уа1 Рго
Азр 65 Агд РЬе Зег О1у Зег 70 О1у Зег О1у ТЬг Туг 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е 80
Зег Агд Уа1 О1и А1а 85 О1и Азр Уа1 О1у Уа1 90 Туг РЬе Суз Зег О1п 95 Зег
ТЬг Нйз Уа1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105 110 <210> 156 <211> 112 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> <400> Версия 2 156 ν каппа легкой цепи гуманизированного 2А4 и 809 О1у
ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи
Азр 1 Уа1 Уа1 Меб Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15
О1и Рго А1а Зег 20 11е Зег Суз Агд Зег 25 Зег О1п Зег Ьеи Уа1 30 Нйз Зег
ТЬг О1у Азп 35 ТЬг Туг Ьеи Нйз Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п Зег
Рго О1п 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз 55 Уа1 Зег Азп Агд РЬе 60 Зег О1у Уа1 Рго
Азр 65 Агд РЬе Зег О1у Зег 70 О1у Зег О1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е 80
Зег Агд Уа1 О1и А1а 85 О1и Азр Уа1 О1у Уа1 90 Туг РЬе Суз Зег О1п 95 Зег
ТЬг Нйз Уа1 Рго 100 РЬе ТЬг РЬе О1у О1у 105 О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 110 11е Ьуз
- 133 <210> 157 <211> 112 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Версия 3 ν каппа легкой цепи гуманизированного 2А4 и 809
<400> 157
Азр ν&1 ν&1 Меб ТЬг О1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго ν&1 ТЬг Рго О1у
1 5 10 15
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег О1п Зег Ьеи ν&1 Н1з Зег
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи Н1з Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз ν&1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у ν&1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд ν&1 О1и А1а О1и Азр ν&1 О1у ν&1 Туг Туг Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Н1з ν&1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз ν&1 О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 158
<211> 112
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 1 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8
<400> 158
Азр ν&1 ν&1 Меб ТЬг О1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго ν&1 ТЬг Рго О1у
1 5 10 15
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи ν&1 Н1з Зег
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи Н1з Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз ν&1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у ν&1 Рго
50 55 60
- 134
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Туг РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд Vа1 О1и А1а О1и Азр Vа1 О1у Vа1 Туг РЬе Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Нгз Vа1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 159 <211> 112 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Версия 2 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8 <400> 159
Азр 1 Vа1 Vа1 МеЬ ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Vа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Vа1 НФз Зег
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи НФз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз Vа1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у Vа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд Vа1 О1и А1а О1и Азр Vа1 О1у Vа1 Туг РЬе Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Нгз Vа1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 160
<211> 112
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 3 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8
<400> 160
Азр Vа1 Vа1 МеЬ ТЬг О1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго Vа1 ТЬг Рго О1у
5 10 15
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Vа1 Нгз Зег
- 135 028356
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи НФз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз ν&1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у ν&1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд ν&1 О1и А1а О1и Азр ν&1 О1у ν&1 Туг Туг Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг НФз ν&1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 161
<211> 119
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 1 тяжелой цепи гуманизированного 2А4, 809 и 7Ό8
<400> 161
О1и ν&1 О1п Ьеи ν&1 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи ν&1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг
20 25 30
А1а Меб Туг Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр ν&1
35 40 45
А1а Агд 11е Агд Зег Ьуз Зег Азп Азп Туг А1а 11е Туг Туг А1а Азр
50 55 60
Зег ν&1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е РЬе Агд Азр Азр Зег Ьуз Азп Зег
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг А1а ν&1 Туг
85 90 95
Туг Суз ν&1 Агд Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи ν&1 ТЬг ν&1 Зег Зег 115
- 136 <210> 162 <211> 119 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> <400> О1и ν&1 1 Версия 2 162 тяжелой цепи гуманизированного 2А4, 809 Рго и 7Ό8
ν&1 5 О1и
О1п Ьеи Зег О1у О1у О1у 10 Ьеи ν&1 О1п О1у 15 О1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг
20 25 30
А1а Меб Туг Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр ν&1
35 40 45
А1а Агд 11е Агд Зег Ьуз Зег Азп Азп Туг А1а 11е Туг Туг А1а Азр
50 55 60
Зег ν&1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азр Зег Ьуз Азп Зег
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг А1а ν&1 Туг
85 90 95
Туг Суз ν&1 Агд Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи ν&1 ТЬг ν&1 Зег Зег
115
<210> 163
<211> 119
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 3 тяжелой цепи гуманизированного 2А4, 7Ό8 и 8д9
<400> 163
О1и ν&1 О1п Ьеи ν&1 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи ν&1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг
20 25 30
А1а Меб Туг Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр ν&1
35 40 45
- 137
А1а Агд 50 11е Агд Зег Ьуз Зег 55 Азп Азп Туг А1а 11е 60 Туг Туг А1а Азр
Зег Vа1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азр Зег Ьуз Азп Зег
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг А1а Vа1 Туг
85 90 95
Туг Суз А1а Агд Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Vа1 ТЬг Vа1 Зег Зег
115
<210> 164
<211> 119
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 164
О1и Vа1 О1п Ьеи Vа1 О1и Зег О1у О1у Агд Ьеи Vа1 О1п Рго Ьуз О1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг
20 25 30
А1а Меб Туг Тгр 11е Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Vа1
35 40 45
А1а Агд 11е Агд Зег Ьуз Зег Азп Азп Туг А1а 11е Туг Туг А1а Азр
50 55 60
Зег Vа1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е РЬе Агд Азр Азр Зег О1п Зег Меб
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Азп Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг А1а Меб Туг
85 90 95
Туг Суз Vа1 Агд Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Vа1 ТЬг Vа1 Зег А1а
115
<210> 165
<211> 120
<212> РКТ
<213> Ното
- 138 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Каркасный участок человеческой тяжелой цепи <400> 165
О1и 1 Vа1 О1п Ьеи Vа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи Vа1 10 О1п Рго О1у 15 О1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азр Нчз
20 25 30
Туг Меб Азр Тгр Vа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Vа1
35 40 45
О1у Агд ТЬг Агд Азп Ьуз А1а Азп Зег Туг ТЬг ТЬг О1и Туг А1а А1а
50 55 60
Зег Vа1 Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азр Зег Ьуз Азп Зег
65 70 75 80
Ьеи Туг Ьеи О1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз ТЬг О1и Азр ТЬг А1а Vа1 Туг
85 90 95
Туг Суз А1а Агд Туг Vа1 Vа1 О1у А1а ТЬг Ьеи Азр Туг Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьеи Vа1 ТЬг Vа1 Зег Зег
115 120
<210> 166
<211> 113
<212> РКТ
<213> Ното зарчепз
<220>
<221> М1ЗС_ _РЕАТЬКЕ
<223> Каркасный участок человеческой ν каппа легкой цепи
<400> 166
Азр Vа1 Vа1 Меб ТЬг О1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго Vа1 ТЬг Рго О1у
1 5 10 15
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег О1п Зег Ьеи Ьеи Нчз Зег
20 25 30
Азп О1у Туг Азп Туг Ьеи Азр Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи О1у Зег Азп Агд А1а Зег О1у Vа1 Рго
50 55 60
- 139
Азр 65 Агд РЬе Зег О1у Зег 70 О1у Зег О1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е 80
Зег Агд ν&1 О1и А1а О1и Азр ν&1 О1у ν&1 Туг Туг Суз Меб О1п А1а
85 90 95
Ьеи О1п ТЬг Рго Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз ν&1 О1и 11е Ьуз
100 105 110
Агд <210> 167 <211> 276 <212> РКТ <213> Ното зар1епз <220>
<221> т1зс_£еабиге <223> Каркасный участок человеческой ν каппа легкой цепи <400> 167
Меб 1 Ьуз Туг Ьеи Ьеи 5 Рго ТЬг А1а А1а А1а 10 О1у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи 15 А1а
А1а О1п Рго А1а 20 Меб А1а Азр ν&1 ν&1 25 Меб ТЬг О1п Зег Рго 30 Ьеи Зег
Ьеи Рго ν&1 35 ТЬг Рго О1у О1и Рго 40 А1а Зег 11е Зег Суз 45 Агд Зег Зег
О1п Зег 50 Ьеи Ьеи Н1з Зег Азп 55 О1у Туг Азп Туг Ьеи 60 Азр Тгр Туг Ьеи
О1п 65 Ьуз Рго О1у О1п Зег 70 Рго О1п Ьеи Ьеи 11е 75 Туг Ьеи О1у Зег Азп 80
Агд А1а Зег О1у ν&1 85 Рго Азр Агд РЬе Зег 90 О1у Зег О1у Зег О1у 95 ТЬг
Азр РЬе ТЬг Ьеи 100 Ьуз 11е Зег Агд ν&1 105 О1и А1а О1и Азр ν&1 110 О1у ν&1
Туг Туг Суз 115 Меб О1п А1а Ьеи О1п 120 ТЬг Рго Туг ТЬг РЬе 125 О1у О1п О1у
ТЬг Ьуз 130 Ьеи О1и 11е Ьуз Агд 135 ТЬг ν&1 А1а А1а Рго 140 Зег ν&1 РЬе 11е
РЬе Рго Рго Зег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Зег О1у ТЬг А1а Зег ν&1 ν&1
- 140
145 150 155 160
Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз
165 170 175
Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Зег О1у Азп Зег О1п О1и Зег Уа1 ТЬг О1и
180 185 190
О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи
195 200 205
Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Нчз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг
210 215 220
Нчз О1п О1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд О1у О1и
225 230 235 240
Суз Зег А1а Агд О1п Зег ТЬг Рго РЬе Уа1 Суз О1и Туг О1п О1у О1п
245 250 255
Зег Зег Азр Ьеи Рго О1п Рго Рго Уа1 Азп А1а О1у О1у О1у Зег О1у
260 265 270
О1у О1у Зег О1у
275 <210> 168 <211> 16 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<222> (1)..(16)
<223> 2А4 УЬ СЬК1
<400> 168
Агд Зег Зег О1п Зег Ьеи Уа1 Нчз Зег ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи Нчз
1 5 10 15
<210> 169
<211> 7
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<220> <221> М1ЗС _РЕАТиКЕ
<222> (1). .(7)
<223> 2А4 УЬ СЬК2
<400> 169
- 141
Ьуз Vа1 Зег Азп Агд РЬе Зег
1 <210> <211> <212> <213> 5
170 9 РКТ Миз : тизси1из
<220>
<221> М1ЗС _РЕАТиКЕ
<222> (1). .(9)
<223> 2А4 'V. СЬК3
<400> 170
Зег О1п Зег ТЬг Н1з Vа1 Рго РЬе
1 5
<210> 171
<211> 10
<212> РКТ
<213> Миз : тизси1из
<220>
<221> М1ЗС _РЕАТЬКЕ
<222> (1). .(10)
<223> 2А4 VΗ СЬК1
<400> 171
О1у РЬе > ТЬг РЬе Азп ТЬг Туг А1а
1 5
<210> 172
<211> 19
<212> РКТ
<213> Миз : тизси1из
<220>
<221> М1ЗС _РЕАТЬКЕ
<222> (1). .(19)
<223> 2А4 VΗ СЬК2
<400> 172
Агд 11е > Агд Зег Ьуз Зег Азп Азп
1 5
Vа1 Ьуз Азр
<210> 173
<211> 8
<212> РКТ
<213> Миз : тизси1из
ТЬг
Мек Туг 10
Туг А1а 11е Туг Туг А1а Азр Зег 10 15
- 142 028356 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <222> (1)..(8) <223> 2А4 VΗ СВК3 <400> 173
Рго Туг Зег Азр Зег РЬе А1а Туг
5 <210> 174 <211> 112 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Версия 4 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8 <400> 174
Азр 1 να1 να1 Меб ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго να1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи να1 НФз Зег
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи НФз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз να1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у να1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Туг РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд να1 О1и А1а О1и Азр να1 О1у να1 Туг РЬе Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Нтз να1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 175
<211> 112
<212> РКТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Версия 5 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8
<400> 175
Азр να1 να1 Меб ТЬг О1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго να1 ТЬг Рго О1у
5 10 15
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи να1 Нтз Зег
- 143 028356
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи Нтз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз ν&1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у ν&1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд ν&1 О1и А1а О1и Азр ν&1 О1у ν&1 Туг РЬе Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Нтз ν&1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 176 <211> 112 <212> РКТ <213> Искусственная <220>
<223> Версия 6 ν каппа легкой цепи гуманизированного 7Ό8 <400> 176
Азр 1 ν&1 ν&1 Меб ТЬг 5 О1п Зег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго ν&1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи ν&1 Нтз Зег
20 25 30
ТЬг О1у Азп ТЬг Туг Ьеи Нтз Тгр Туг Ьеи О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег
35 40 45
Рго О1п Ьеи Ьеи 11е Туг Ьуз ν&1 Зег Азп Агд РЬе Зег О1у ν&1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд ν&1 О1и А1а О1и Азр ν&1 О1у ν&1 Туг Туг Суз Зег О1п Зег
85 90 95
ТЬг Нтз ν&1 Рго РЬе ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 177
<211> 16
<212> РКТ
- 144 <213> Миз тизси1из <400> 177
Агд Зег Зег Ьеи Зег Ьеи Vа1 НФз Зег ТЪг О1у Азп ТЪг Туг Ьеи НФз

Claims (38)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с агрегированным амилоидным белком и представляет собой гуманизированную или химерную версию антитела 2А4, которое может быть получено из АТСС, номер доступа РТА-9662, или гуманизированную или химерную версию антитела 7Ό8, которое может быть получено из АТСС, номер доступа РТА-9468, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
    (a) вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющих комплементарность, как показано в 8Ер ГО N0: 168, 169 и 170; или (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую три участка, определяющих комплементарность, как показано в 8Ер ГО N0: 177, 169 и 170; и (c) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую три участка, определяющих комплементарность, как показано в 8Ер ГО N0: 171, 172 и 173.
  2. 2. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из Ь87 и Ь90 (соглашение о нумерации по КаЬаЦ, занятый Υ и Р соответственно, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  3. 3. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из +7, +14, +15, +17, +18, +50, +75, +88, +92 и +109 (линейная нумерация), занятый Т, 8, Ь, Ό, О. К, Υ, Ь, Р и Ь соответственно, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  4. 4. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.3, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из +75 и +92 (линейная нумерация), занятый Υ и Р соответственю, в котором остаток вариабельной области легкой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области легкой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  5. 5. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.2, в котором вариабельная область легкой цепи акцепторного иммуноглобулина человека представляет собой каппа-подгруппу 2 вариабельной области легкой цепи человека (соглашение о нумерации по КаЬа1).
  6. 6. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.5, в котором вариабельная область легкой цепи подгруппы 2 человека происходит из зародышевой линии νΚΙΙΑ19/Α3 человека.
  7. 7. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.6, в котором вариабельная область легкой цепи VI человека содержит последовательность 8ЕР ГО N0: 166 или остатки 23-134 из 8ЕР ГО N0: 167.
  8. 8. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, представленную остатками 20-131 последовательности 8Е0 ГО N0: 152, остатками 20-131 последовательности 8ЕР ГО N0:153 или представленную последовательностью 8ЕР ГО N0: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 174, 175 или 176.
  9. 9. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из Н37, Н49, Н70 и Н93 (соглашение о нумерации по КаЬаЦ, занятый I, Α, Р или V соответственно, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  10. 10. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из +10, +15, +19, +37, +49, +73, +78, +79, +80, +87, +95, +99 +119 (линейная нумерация), занятый К, К, К, I, Α, Р, р, 8, М, N М, V или А соответственно, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  11. 11. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.10, которое содержит по меньшей мере один остаток каркасного участка тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из +37, +49, +73 и +99 (линейная нумерация), занятый I, Α, Р или V соответственно, в котором остаток вариабельной области тяжелой цепи занят соответствующим остатком в вариабельной области тяжелой цепи акцепторного иммуноглобулина человека.
  12. 12. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.9, в котором вариабельной областью тяже- 145 028356 лой цепи акцепторного иммуноглобулина человека является вариабельная область тяжелой цепи гаммаподгруппы 3 человека (нумерация по КаЪа1).
  13. 13. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.12, в котором вариабельная область тяжелой цепи гамма-подгруппы 3 человека содержит последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 165.
  14. 14. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, представленную как остатки 20-138 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 154 или представленную как последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 161, 162 или 163.
  15. 15. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную как остатки 20-131 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 152 или остатки 20-131 последовательности δΕΟ ΙΌ N0:153, и вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, представленную как остатки 20-138 последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 154.
  16. 16. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1, которое содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную как последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 174, 175 или 176; и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную как последовательность δΕΟ ГО N0: 161, 162 или 163.
  17. 17. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.16, в котором вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 155 и вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 161.
  18. 18. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.16, в котором вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 156 и вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 162.
  19. 19. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.16, в котором вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 157 и вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 163.
  20. 20. Способ терапевтического или профилактического лечения индивида, имеющего амилоидоз ААили ΑΣ-типа или предрасположенного к амилоидозу АА- или ΑΣ-типа, включающий введение индивиду эффективной дозы антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-19.
  21. 21. Способ по п.20, где индивидом является человек.
  22. 22. Способ по п.20, где терапевтическое лечение включает замедление развития амилоидоза ААили ΑΣ-типа.
  23. 23. Способ по п.20, в котором индивид страдает амилоидным заболеванием, выбранным из группы, состоящей из ревматоидного артрита, ювенильного хронического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза, псориатической артропатии, синдрома Рейтера, болезни Стилла у взрослых, синдрома Бехчета, болезни Крона, лепры, туберкулеза, бронхоэктатической болезни, язв при пролежнях, хронического пиелонефрита, остеомиелита, болезни Уиппла, ходжкинской лимфомы, почечной карциномы, карцином кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточной карциномы, волосатоклеточного лейкоза, семейной средиземноморской лихорадки и болезни Кастлемана.
  24. 24. Способ обнаружения амилоидного депо, связанного с амилоидозом АА- или ΑΣ-типа у индивида, включающий введение индивиду антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.119, который связан с детектируемой меткой, и детекцию детектируемой метки у индивида.
  25. 25. Способ по п.24, где индивидом является человек.
  26. 26. Способ по п.24, где индивид страдает амилоидным заболеванием или является восприимчивым к амилоидному заболеванию, выбранному из группы, состоящей из ревматоидного артрита, ювенильного хронического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза, псориатической артропатии, синдрома Рейтера, болезни Стилла у взрослых, синдрома Бехчета, болезни Крона, лепры, туберкулеза, бронхоэктатической болезни, язв при пролежнях, хронического пиелонефрита, остеомиелита, болезни Уиппла, ходжкинской лимфомы, почечной карциномы, карцином кишки, легкого и мочеполового тракта, базальноклеточной карциномы, волосатоклеточного лейкоза, семейной средиземноморской лихорадки и болезни Кастлемана.
  27. 27. Способ по п.24, где детектируемая метка является радиометкой.
  28. 28. Способ по п.24, где радиометкой является 125Ι.
  29. 29. Способ по п.26, где детекцию осуществляют визуализацией с помощью δΡΕСΤ/СΤ.
  30. 30. Способ по п.24, где детекцию проводят с помощью ядерно-магнитной спектроскопии.
  31. 31. Фармацевтическая композиция для терапевтического или профилактического лечения индивида, имеющего амилоидоз АА- или ΑΣ-типа или предрасположенного к амилоидозу АА- или ΑΣ-типа, содержащая:
    a) терапевтическое или профилактическое эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-19;
    b) фармацевтически приемлемый носитель, который не влияет на биологическую активность композиции.
    - 146 028356
  32. 32. Фармацевтическая композиция по п.31 для парентерального введения.
  33. 33. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-19.
  34. 34. Клетка-хозяин для экспрессии антитела или антигенсвязывающего фрагмента по пп.1-19, трансформированная нуклеиновой кислотой по п.33.
  35. 35. Клетка-хозяин по п.34, выбранная из группы, состоящей из клетки СНО, клетки ΗΕΚ-293, клетки ИеЬа, клетки СУ-1 и клетки С’(У.
  36. 36. Клетка-хозяин по п.35, которая представляет собой клетку СНО.
  37. 37. Гибридома, экспрессирующая моноклональное антитело мыши 2А4 (номер доступа в АТСС РТА-9662).
  38. 38. Гибридома, экспрессирующая моноклональное антитело мыши 7Ό8 (номер доступа в АТСС
    РТА-9468).
    НЗАА1 (ЗЕО ГО N0: 98) НЗАА2 (ЗЕО ГО НО: 99) НЗААЗ (ЗЕО ГО ПО: 100) Н8АА4 (ЗЕО ГО НО: 101)
    1 МКЬЬТОЬЦРС ЗЕУЬОУЗЗКЗ 1 МКЬЬТОЬУРС ЗЬУЪЗУЗЗЕЗ 1 МКЬЗТСИРС ЗЬУЬСУЗЗОС ι мкьртогурс вхлтмсутзез
    РРЗРЬОЕАРО САКПМИКАУЗ ΟΜΚΕΑΝΥΙΘ5 РРЗРЪОЕАРО САИЭМИКАУЗ ΏΜΕΕΑΜΥΙΘ8 НЬТРЬКААОО САИЭМИЕАУЗ ΏΜΚΕΑΗΥΚΚ3 «Ε3ΡΡΚΕΑΙΧ2 σνΟΕΜΘΕΑΥν ΟΙΜΙ3ΝΗ0ΝΞ
    НЗАА1 (ЗЕО Ιϋ ЫО: 98) НЗАА2 (ЗЕО ГО N0: 99) Н8ААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 100) Н8АА4 (ЗЕО ГО ЫО: 101)
    51 ΌΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΘΡθσν 51 ΌΚΥΡΗΑΚ,ΟΝΥ ϋΑΑΚΚ6Ρ<3ΟΑ 51 ΟΚΥΡΗΑΕ,ΟΝΥ ϋΑνθΚ.ΘΕ><3σν 51 ΝΕΥΒΥΑΕΟΝΥ ϋΛΑΟΕΟΡΟσν ϊίΑΑΕΑΙβΟΑΕ ЕНЮЕРРЗНЗ А--------Е ΐϊΑΑΕνίΒΕΑΕ ЕЫГОНЬТ&Нб А--------Е ϋίΑΤΕνίβϋΑΕ ЕКГУОЕЬТеаЬ. А--------Е ^/ААКЫЗЕЗЕ уу1дд1тйуу 1£дпзб£у1Е
    НЗАА1 (ЗЕО ГО ЫО: 98) НБАА2 (ЗЕО ГО ЫО: 99) НЗААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 100) НЗАА4 (ЗЕО ГО ЫО: 101)
    93 ΌΞΏΑΟΟΑΑΝΕ ЫБЕЗСКОРЫН 93 ПЗПГООААЫК ИСКЗбКЮРЫН 93 ОЗЬАООАТЫК ИНОЗвКОРЫН
    101 ЭЗКЗНЕКАЕЕ ЫСКЗСКОРСН
    Фиг. 1
    РЕРАбЪРЕКУ
    РКРАОЬРЕКУ
    РЕРАВЬРЕКУ
    ГЕРЕЮЬРККУ
    НЗАА1 НАА1 (ЗЕО ГО N0: (ЗЕО ГО ЫО: 98) 102) 1 1 тк11£д1у£с з1у1дуззК5 РРЗРЕОЕАРО ОАИЭМИКАУЗ ΟΜΚΕΑΝΥΙΟ5 РРЗРОСЕАРО 6ΑΚΟΜΜΕΑΥ3 ΟΜΚΕΑΝΥΙΘ3 Н5АА1 (ЗЕО ГО N0: 9В) 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ΌΑΆΚΧΟΡΟΟν ΝΑΑΕΑΙ8ΟΑΚ ΕΝΙ0ΚΡΡΟΗΘ АЕОз1аСдаа НАЙ.1 (ЗЕО ГО N0: 102) 33 ΟΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ΟΑΑΚΚΟΡΟΟΥ ΪΙΑΑΕΑΙ3ΟΑΚ ЕЫГОКРРОНО АЕОЗ------ Η8ΑΑ1 (ЗЕО ГО ЫО: 98) 101 пекдгздкйр пЬ£град1ре ку НАА1 (ЗЕО ГО ЫО: 102)
    Фиг. 2
    Н5АА2(а1рЬа) (ЗЕО НАА2 (аГрЬа) (ЗЕО
    ГО ЫО: ГО ЫО:
    99)
    103)
    1 тпк11£д1у£с 3ΐν1βνΒ3Ε8 РРЗРЕеЕАГО ΟΑΗΟΜΜΗΑΥ8 ΟΜΚΕΑΝΥΙΟ8 1 ------------------К.д ΡΡ3ΡΙ/3ΕΑΡΟ САИЗЮТКАУЗ ΟΜΗΕΑΝΥΙΟ3
    Н5АА2(а1рЬа) НАА2 (а1рЪа) (ЗЕО ГО N0: 99) (ЗЕО ГО ЫО: 103)
    51 ΕΚΥΡΗΑΕ6ΝΥ ОААЕЖСРСОА ΗΑΑΕνίΞΝΑΕ ЕЫГОЕЪТСНб АЕО31аадаа 33 ΟΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΟΡΟΟΑ ЫААЕУГЗЫАК ЕЫГОКЬТОНО АЕОЗ-----Η8ΑΆ2(а1рЬа) НАА2(а1рЬа) (ЗЕО ГО ЫО: (ЗЕО ГО N0:
    99)
    103)
    101 пкидгздпЗр пЬ£град1ре ку
    Фиг. 3
    НЗААЗ НААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 1 Οπη ТГ| КТО . 100) 104) 1 1 тк1з£дИ£с з1у1дмзз06 ЫЬТРЬКААОО ОАКОМЫКАУЗ ------------------Ώα ИЪТРЬКААбО ΟΑΚΟΜΝΚΑΥ5 ΟΜΚΕΑΝΥΚΚ3 ОМКЕАЫУККЗ НЗААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 100) 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ΟΑνΟΚΟΡΟσν ΝΑΤΕνΐ3ΟΑΚ ΕΝνθΚΙ-ТСОН АЕОЗ1адда£ НААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 104) 33 οκυρηακονυ ϋΑνοκσροσν ыатеухзыае Еыуокьтота АЕОЗ------ НЗААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 100) 101 пкадддздкйр хЛ£град1ре ку НААЗ (ЗЕО ГО ЫО: 104)
    Фиг. 4
    НЗАА4 (ЗЕО ГО N0: 101) ΗΑΑ4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 105) НЗАА4 (ЗЕО го ЫО: 101) НАА4 (ЗЕО го ЫО: 105) НЗАА4 (ЗЕО го ΝΟ: 101) НАА4 (ЗЕО го ЫО: 105)
    1 тг1££д±у£с з1утд\г£зЕ5 ЫКЗРРКБАЬО ονΟϋΜΟΚΑΥΜ ЩМ13ЫН0ЫБ 1 ------------------ЕЗ ЫЕЗРРКЕАЬО ΟνΟϋΜΟΚΑΥΝ ϋΙΜΙΒΝΗΟΚΓΒ
    51 ЫКУЬУАКОЫУ ϋΛΑΟΚΟΡΟΟν ИААКЫЗК8Н УУЬООЬГОУУ ЬРОЫ5э£.у1е 33 ΝΚΥΙΥΑΗΟΝΥ ΌΑΑΟΚΟΡΟΟν КААКЫЗКЗК УУЬОСЬГОУУ ЬРОЫЗ----101 йзкзпекаее «дгадкйрйг £грс(д1ркку
    Фиг. 5
    - 147 028356
    НАА1 (ЗЕО ГО ΝΟ: 102) 1 КЗРРЗРПСЕА госАкгадакА Υ3ΠΜΚΕΑΝΥΙ ©ЗПКУРНАКС ΝΥΏΑΑΚΚΟΡΟ ΗΆΆ2 (ЗЕО ГО ΝΟ: 103) 1 К5РР5РЫЗЕА РЛСАЕПМНКА Υ3ΠΜΕΕΑΝΥ1 ΟΞϋΚΥΡΗΑΚα ΝΥΠΑΑΚΚαΡΟ НААЗ (ЗЕО го ΝΟ: 104) 1 оетаотръкАА СОСАКПМНКА Υ3ΠΜΚΕΑΝΥΚ Κ3ΠΚΥΡΗΑΗΟ ΝΥΠΑνΟΕΟΡΟ НАА4 (ЗЕО го ΝΟ: 105) 1 Ε3ΝΕ.3ΡΓΚΕΑ ЮСУСПМСКА ΥΜΠΙΜΙΒΝΗΟ ΝΞΝΕΥΙΥΑΕΟ ΝΥΌΑΑΟΚΟΡΟ НАА1 (ЗЕО го N0: 102) 51 0УНААЕА13П ΑΚΕΝΧ0ΗΡ-- ---РСНОА-- -ΕΏ8 НАА2 (ЗЕО го ΝΟ: 103) 51 <3ΑΗΑΑΕνΐ3Ν ΑΗΕΝΙΟΗΙι-- ---Τ5Η0Α-- -ΕΠ5 НААЗ (ЗЕО го N0: 104) 51 σννϊΑΤΕνιεπ ΑΚΕΝνΟΗΒ-- —тсаЬА-- -ЕЛЗ НАА4 (ЗЕО го КТО: 105) 51 СЗУМААКЫЗН знууьоеыа γγ1Ρ0Ν8Β£ν 1Εϋ3
    Фиг. 6
    ΗΑΑ1 (ЗЕО ГО N0: 102) 70 ©НСАЕПЗ ΗΑΑ2 (ЗЕО Ιϋ N0: 103) 70 СНСАЕПЗ НААЗ (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 104) 70 еаьАЕлз ΗΑΑ4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 105) 78 εϋνίΕϋβ
    Мышиная ЗАА1 (ЗЕО ГО N0: 106) Мышиная 8АА2 (ЗЕО ГО N0: 107) Мышиная ЗААЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 108) Мышиная 8АА4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 109) Мышиная 8АА1 (ЗЕО ГО ΝΟ: 106) Мышиная ЗАА2 (ЗЕО го ΝΟ: 107) Мышиная ЗААЗ (ЗЕО го ΝΟ: 108) Мышиная 8АА4 (ЗЕО го ΝΟ: 109) Мышиная ЗАА1 (ЗЕО го ΝΟ: 106) Мышиная ЗАА2 (ЗЕО го ΝΟ: 107) Мышиная ЗААЗ (ЗЕО го ΝΟ: 108) Мышиная ЗАА4 (ЗЕО го ΝΟ: 109)
    Фиг. 7 ι мкы/гзютс зыьетснес ррзрунеаео сасомикаут омкЕАсттатз 1 МКЬЬТЗЮТС ЗЬЫСУСНЙС РР8Р1СЕАР0 оасемикаут ОМКЕАОИКОС 1 МКР31А1ШС ГЫЬСТОЗОК. ИУОЕМКЕАСО СЗКОМНЕАУЗ омккмтатаз ι мкьатугуьс зьрьсузсес иузррееадо стильиеаук οπΙεανυονα
    51 ϋΚΥΐΉΑΚΟΝΎ ΌΑΑΟΕΘΡΟσν НААЕК13ЕСК ΕΑΡΟΕ-----РРС---НСНЕ
    51 ΟΚΥΡΗΑΚΘΝΥ ОААОЕСРССУ «ΑΑΕΚΙ3ΟΑΕ ЕЗРОЕ-----РЕС---КОНЕ
    51 ΏΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ПААЕЖ6РООА ΝΑΑΚνίδϋΑΚ ЕАУОК-----РТС---ИСАЕ
    51 ΟΟΥΡΥΑΚΟΝΥ ЕА00КСЗСС1 ИААКИЗТЗЕ КУРддИпгу УРСхмНОЬЕ
    101 ϋΤΙΑΟΟΕΑΝΕ НСКЗСКОРЫУ УКРРСЬРЕКУ ϋΤΜΜΟΟΕΑΝΗ НСКЗСКЛРЫУ УЕРРСЕРАКУ Ε5ΚΑΕ0ΡΑΝΕ НСЕЗСИЭРЫН РЕРАСЬРКЕУ ТЬОАТОКАЕЕ ИСКЗСКЫРПН РКРЕСЬРЕКР
    Фиг. 8
    МЗАА1 (ЗЕО ХП ΝΟ: 106) 1 такИЪзГурс ΒΐΙ^νσίΐΗ© РРЗРУНЕАГО САСПМНЕАУТ ΠΜΚΕΑΝΝΚΝ3 МАА1 (ЗЕО го N0: 110) 1 ---------6 РРЗРУНЕАРО ΟΑΘΠΜΝΕΑΥΤ ΠΜΚΞΑΝΝΚΝ3 МЗАА1 (ЗЕО го N0: 106) 51 ΠΚΥΡΗΑΗΟΝΥ πΑΑΟκαρσσν 18ААЕК13ПСК ЕАРОЕРРСЕС НЕЛПаддеа МАА1 (ЗЕО го N0: 110) 32 ΠΚΥΡΗΑΕΟΝΥ πΑΑΟκσρσσν ИААЕК18ПСН. ЕАРОЕРРСЕС НЕПТ------ МЗАА1 (ЗЕО го ΝΟ: 106) 101 пгЬдгвдкб-р пуугррд1ра ку МАА1 (ЗЕО го ΝΟ: 110)
    Фиг. 9
    Μ5ΑΆ2 (ЗЕО ГО N0: 107) 1 ткШвЗзгЕс 8ΐ1ΐ9νσ1ΐ9β ГРЗР1СЕАР0 САСЕМИЕАУТ ЛМКЕАСНКЛС МАА2 (ЗЕО ΙΠ ΝΟ: 1115 1 ---------с РРЗР1СЕАР0 САГОМНЕАУТ ЛМКЕАСИКЛО МЗАА2 (ЗЕО ГО ΝΟ: 107) 51 ΌΚΥΡΗΑΕΘΝΥ ΌΑΑΟΕΟΡΟβν ИААЕК13ПАЕ ЕЗРОЕРРСЕС НЕЛТГпаадеа МАА2 (ЗЕО ГО N0: 111) 32 ϋΚΥΡΗΑΕΟΝΥ ΏΑΑΟΗΟΡΟΟν ΥΤΑΑΞΚΙ3ΠΑΕ ЕЗРОЕРРСЕС НЕПТ------ МЗАА2 (ЗЕО го ΝΟ: 107) ιοί' пгНдгвдкдр пуугррд1ра ку МАА2 (ЗЕО го ΝΟ: 111)
    Фиг. 10
    МЗААЗ (ЗЕО ГО N0: 108) МААЗ (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 112)
    МЗААЗ (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 108) МААЗ (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 112)
    МЗААЗ (ЗЕО ΙΠ ΝΟ: 108) МААЗ (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 112)
    1 шкрзгаШс ИПср/йздг ^ллдЕткЕАСЗО Ο5ΚΠΜΝΗΆΥ3 ΠΜΚΚΑΝΝΚΝ3 1 --------------------------ЕАО0 ©3ΚΠΜΝΚΑΥ3 ЫЖКАИЧЮТЗ
    51 ΠΚΥΡΗΑΗΟΝΥ ПААНЕСРОСА ΝΑΑΚνΐ3ΠΑΚ ЕАУОКРТСНС АЕЛЗга<1д£а 25 ΏΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ПААЕКСРСОА ΝΑΑΚνίδΠΑΕ ЕАУОКРТОНО АЕПБ-----101 пе^дгздкйр п1Н:град1рк гу
    Фиг. 11
    МЗАА4 (ЗЕО ΙΠ ΝΟ: 109) 1 тгХаб'иптт’Хс β1£1дνβдад МУЗРРЕЕАУО СТИПЫЯЕАУЕ ΌΝΙΕΑΝΥΟΝΑ МАА4 (ЗЕО ГО N0: 113) 1 КГУЗРРЕЕАУО СТИЛШЕАУЕ □ΝΠΞΑΝΥΟΝΑ МЗАА4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 109) 51 Π0ΥΡΥΑΕΟΝΥ ЕА00ЕСЗСС1 ΝΑΑΚΙΙ3Τ3Ε КУРОСЬЬВГКУ УРС1ЕЫНСЬЕ МАА4 (ЗЕО ГО N0: 113) 31 ΠΟΥΡΥΑΕΟΝΥ ЕА00ЕСЗСС1 ΝΑΑΚΙΙ3Τ3Ε КУРОСЫЛЕУ урстынсьЕ МЗАА4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 109) 101 ТПдаРдкаее етдгздкпрпА £гред!рек£ МАА4 (ЗЕО ГО ΝΟ: 113) 81 ТЬ--------
    Фиг. 12
    - 148 028356
    ΜΑΑ1 (ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 110) 1 ОРРБРУНЕАР ΟΟΑΟϋΜΝΚΑΥ ΤϋΜΚΕΑΝΝΚΝ ΕϋΚΥΡΗΑΚΟΝ ΥϋΑΑΟΚΟΡΟΟ ΜΑΑ2 (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 111) 1 ΟΡΡ3ΡΙΟΞΑΡ ΟΟΑΟϋΜΝΚΑΥ ΊΏΜΚΕΑΟΝΚϋ ΟϋΚΥΡΗΑΚΟΝ ΥϋΑΑΟΚΟΡΟΟ ΜΑΑ3 (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 112) 1 -------εαο ООЗКОМИКАУ ΞϋΜΚΚΑΝΝΚΝ ΒϋΚΥΡΗΑΚΟΝ ΥϋΑΑΚΚΟΡΟΟ ΜΑΑ4 (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 113) 1 -ИУБРРКЕАУ ΟΟΤΪίϋΙΛίΚΑΥ ΚϋΝΙχΕΑΝΎΌΝ ΑϋΟΥΡΥΑΚ,ΟΝ ΥΕΑΟΟΚΟΞΟΟ
    ΜΑΑ1 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 110) 51 νΗΑΑΕΚΙδϋα Κ.ΕΑΡΟΕ---- -ΡΡΟ---ΚΟΗ ΕϋΤ ΜΑΑ2 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 111) 51 ν«ΑΑΕΚΙ3ϋΑ ΚΕ3ΡΟΕ---- -ΡΡΟ---ΚΟΗ гепт ΜΑΑ3 (8Ε0 Ιϋ ΝΟ: 112) 44 ΑΜΑΑΚνίβϋΑ ΗΕΑνΟΚ---- -РТС---НСА Εϋβ ΜΑΑ4 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 113) 50 ΙΉΑΑΚΙΙ3Τ3 ККУР0д11пг уугаФгпнеь ΕΤΙι
    Фиг. 13
    НЗАА1 (ЗЕО Ш НО: 98)
    МЗАА1 (зе<з ю ио. юб)
    НЗАА1 (ЗЕО Ιϋ N0: 98) М8АА1 (ЗЕО Ιϋ НО: 106)
    Н8АА1 (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 98) Μ8ΑΑ1 (ЗЕО Ιϋ НО: 106)
    ΜΑΑ1 (ΞΕΟ Ιϋ ΝΟ: 110) 69 ΟΚΟΗΕϋΤ ΜΑΑ2 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 111) 69 ΟΚΟΗΕϋΤ ΜΑΑ3 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 112) 62 ΘΗΟΑΕϋβ ΜΑΑ4 (5Ε0 Χϋ ΝΟ: 113) 76 ПНСЕЕТЬ
    Фиг. 14 мкььтеютс
    МКЫ.Т31Л7РС згллютззкз
    ЗЬЬЬбУСНОО
    РРЗРЬОЕАРО
    ЕРЗРУНЕАРО
    ΟΑΚϋΜΝΗΑΥΒ
    ΟΑΟϋΜΝΡΑΥΤ ϋΜΗΕΑΝΥΙΟ8 ϋΜΚΕΑΝΝΚΝ8 ϋΚΥΡΗΑΡΟΝΥ ϋΑΑΚΡΟΡΟΟν ΝΑΑΕΑΙΒϋΑΚ ϋΚΥΡΗΑΡΟΝΥ ϋΑΑΟΡΟΡΟΟν НААЕКТ5ЕЮР епЮРРРЕНС АЕОЗЬАЮОАА еаЕОЕРРОРО ΗΕϋΤΙΑϋΟΕΑ
    101 ΝΕ№3Κ56ΚϋΡ ИНЕНРАбБРЕ ΚΥ 101 ИГКНСКЗСКОР ΝΥΥΚΡΡΟΙ,Ρϋ ΚΥ
    Фиг. 15
    ΗΑΑ1 (8Ε0 Ιϋ ΝΟ: 102) 1 гзРРЗРЬОЕА ΡϋΟΑΚϋΜΝΚΑ ΥβϋΜΚΕΑΝΥί дЗОКУРНАКО ΝΎϋΑΑΚΚΟΡΟ ΜΑΑ1 (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 110) 1 д-РРЗРУНЕА ΡΟΟΑΟϋΜΗΚΑ УТОМКЕА№?к η3ϋΚΥΡΗΑΚΟ ΝΥϋΑΑΟΚΟΡΟ
    ΗΑΑ1 (8Ε0 Ιϋ ΝΟ: 102) 51 ΟνΝΑΑΕΑίεϋ ΑΚΕηίΟΚΡΡΟ НОАЕОБ ΜΑΑ1 (3Ε0 Ιϋ ΝΟ: 110) 50 ΟνΗΑΑΕΚΙΒϋ ОКЕаЕОЕРРО ΕΟΗΕϋΤ
    Фиг. 16
    НАА1 (ЗЕО Ю ΝΟ: 102) МАА1 (БЕО Ιϋ ΝΟ: 110)
    1 етЮАЕЕЗ 1 ΟΚΟΗΕϋΤ
    Фиг. 17
    Η3ΑΑ1альфа (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 114) 1 шкььтоьурс зьуьоуззкз ΡΡβΡΙιΟΕΑΡϋ ΟΑΚϋΜΝΚΑΥΒ ϋΜΚΕΑΝΥΙΟ3 НЗАА1бета (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 115) 1 тКЬЕТСЕУРС ЗЬУЬСУЗЗКЗ ΡΡΒΡΕΘΕΑΡϋ ΟΑΚϋΜΝΚΑΥ3 ϋΜΗΕΑΝΥΙΟΒ НЗАА1гамма (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 116) 1 ткььтеьурс ЗЬУЪОУЗЗКЗ РРЗРЬОЕАРО ΟΑΗϋΜΝΚΑΥδ ΟΜΚΕΑΝΥΙΟ8
    ΗΞΑΑ1альфа (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 114) 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΟΡΟΟν ΝΑΑΕΑΙβϋΑΚ ΕΝΙΟΚΡΡΟΗΟ ΑΞϋΒΙΑϋΟΑΑ НЗАА1бета (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 115) 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΟΡΟΟΑ ΗΑΑΕνίΞϋΑΗ ΕΝΙΟΚΡΡΟΗϋ ΑΕϋ3ΙιΑϋΟΑΑ НЗАА1гамма (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 116) 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΟΡΟΟν ΝΑΑΕΑΧΒϋΑΚ ΕΝΙΟΚΡΡΟΗϋ ΑΕϋβΙΑϋΟΑΑ
    Η3ΑΑ1альфа (ЗЕО Γϋ ΝΟ: 114) 101 ΝΕΝΟΚΕΟΚϋΡ ΝΗΡΚΡΑΘΕΡΞ ΚΥ НЗАА16ета (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 115) 101 ΝΕΝΟΚ3ΟΚΌΡ ЫНРКРАОЪРЕ ΚΥ Η3ΑΑ1 гамма (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 116) 101 ΝΕΝΟΚΞΟΚϋΡ ΝΗΡΚΡΑΟϋΡΕ ΚΥ
    Фиг. 18
    Η3ΑΑ2альфа (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 114) 115) НЗАА2бета (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: Η3ΑΑ2 альфа (ЗЕО Ιϋ ΝΟ: 114) НЗАА26ета (ЗЕО Χϋ ΝΟ: 115) Η3ΑΑ2альфа (8Ε0 Ιϋ ΝΟ: : 114) НЗАА2бета (ЗЕО Χϋ ΝΟ: . 115)
    1 тКЬЬТОЮТС ЗЬУЪЗУЗЗЕЗ РРЗРШЕАВО САЕОМИКАУЗ ϋιηΚΕΑΝΥΙΟ3 1 шКЬЬТОЬУРС ЗХЛЪЗУЗЗКЗ РГЗРЬОЕАРО ОАКОМИКАУЗ ϋΐηΚΕΑΝΥΙΟΒ
    51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΡΟΡΟΟΑ ΝΑΑΕνίβΝΑΚ ΕΝΙΟΚϋΤΟΗΟ ΑΕϋΒϋΑϋΟΑΑ 51 ϋΚΥΡΗΑΚΟΝΥ ϋΑΑΚΚΟΡΟΟΑ ΝΑΑΕνίβΝΑΚ ΕΝΙΟΚϋΤΟΚΟ ΑΕϋΞΙΑϋΟΑΑ
    101 ΝΚΝΟΚββΚϋΡ ΝΗΡΚΡΑΟϋΡΕ ΚΥ 101 ΝΚΗΟΚΞΟΚΟΡ ΝΗΡΚΡΑΘΧ.ΡΕ ΚΥ
    Фиг. 19
    - 149 028356
    10 20 30 40 Человеческая (ЗЕО Ю N0: 119) : ЕЗРРЗРБ6ЕА ΡΙ5ΘΑΕΕΙΜΝΚΑ Υ3ΟΜΚΕΑΝΥΙ 63ΟΚΥΡΗΑΕ6 Мышиная (ЗЕО ΙΏ N0: 120) : Θ ΡΡ3ΡΙ6ΕΑ ΡΟΟΑΟϋΜΗΚΑ ΥΤΏΜΚΕΑ6ΝΚ гкаэкурнАке Шарпей (ЗЕО 1Б НО: 121):Е НУЗРУОЕА АОеАИПМБЕА ΥΒϋΜΚΕΑΝΥΚ Ν3ΏΚΥΡΗΑΚ.Θ
    50 60 70 80
    Человеческая (ЗЕО Ш ΝΟ: 119) : НУЛААКЕОРС 6УИААЕА13О ΑΕΕΗΙ0ΕΡΡΟ НОАЕОЗЬАОО Мышиная (ЗЕО т ΝΟ: 120) : ΝΥΌΑΑΟΕΟΡΟ еУИААЕК13О АЕЕЗРОЕРРСЗ КОНЕОТМЫЭО Шарпей (ЗЕО т ΝΟ: 121) : ΝΥΟΑΑΟΕΟΡΟ САИААКУ13О АЕЕЫЗОЕОЗС ΗΟΑΕΟβΚΑΟΟ
    ттрббдр6
    90 100 104
    Человеческая (ЗЕО т ΝΟ: 119) : ΑΑΝΕΝ6Ε3ΘΚ ϋΡΝΗΡΕΡΑΟΙ ΡΕΚΥ Мышиная (ЗЕО та ΝΟ: 120) : ΕΑΝΚΗ6Κ86Κ ΠΡΝΥΥΕΡΡΟΙ ΡΑΚΥ Шарпей (ЗЕО т N0: 121) : ΑΑΝΕΝΟ
    Фиг. 20
    0 1 1 1 2 1 аЬс 3 3 аеГ 0 5 4 5 5 4 кр1а (ЗЕО та N0:123) Ш0МТ08РЗТ БЗАЗУбБЕУТ 1ТСЕА3031* *****д5Жд ΝΥ00ΚΡΘΚΑΡ КББ1УКА35Б кр1Ь (ЗЕО та N0:124) . .3 -·-0-· .ϋ. . ......ΝΥ.Ν...... . -Б.-Ν. кр1с (ЗЕО та N0:125) . . 3 .......Υ.Ν...... .-А.... кр1й (ЗЕО та N0:126) . .8 .в. . .....КВП3.6 ...... .Е. .-А.... кр1е (ЗЕО ю N0:127) . .8 .С. . ......ΝΥ.. .Р.... .3. ..А.... кр1£ (ЗЕО ΙΩ N0:128) А • Б. . . - .8 .а.. .......А........ ..Б.... ]сп1а (ЗЕО ю N0:129) з V . с. . .А. . . . кр2а (ЗЕО та N0:130) V. . .т .БЗ РУТР ЕРАЗ .5..3. . .ББ БЗБЕЮЫТУ.Б ..Б... .03. 0. - . . ΤΕ-ΥΚ. кр2Ь (ЗЕО та N0:131) V. . . . . БЗ .рутр ЕРАЗ .3..3. . . ББ Η8.ΝΟΥΝΥ.ϋ ..Б... , .03. о.. . . ΕΟ-.ΝΕ кр2с (ЗЕО ΙΟ N0:132) V. . -Т -БЗ . ,ντρ ОРАВ .5.КЗ. . .ББ Η5.Ι36ΚΤΥ.Υ .,Б... , .ОР. 0- . ..Εν.ΝΕ крЗа (ЗЕО та N0:133) Е V. . . . .А. . ,ν.Ρ Е.А. БЗ.... . .V. .......N........ . .0. . Е. . ..6..ТЕ крЗЬ (ЗЕО ΙΡ N0:134) Е УБ. . . -С. . .Б.Р Е.А. БЗ.... . .νε .......Υ........ .0. . Е. . ..С...К крЗс (ЗЕО та N0:135) Ξ VI,--- -А. . .Б.Р Е.А. БЗ . . . . . .УЗ .......Υ........ . .0. . Е. . .-В.-ΝΚ кр4 (ЗЕО та N0:136) V. . . . -БЗ • Αν.Б Е.А. Ν.Κ3. . .УБ Υ33ΝΝΚΝΥ........ . .ор. ... ..Ν..ТЕ кр5 (ЗЕО Ю N0:137) ЕТТЬ... -АР М. .ТР -Κ.Ν .З.К.. .Ό. . .....ΏΠΏΜΝ ...... . .Е.А ΙΡΙ .ОЕ.ТТ.
    5 6 7 8 9
    5 5 аЬ 3 3 3
    кр1а (ЗЕО ΙΒ N0:123) ЕЗОУРЗЕРЗС зо**зстерт БТ133Б0РВБ ΡΑΤΥΥΟ00ΥΝ дуд**** кр!Ь (ЗЕО та ΝΟ 124) .Т. .......β.. Ρ. . .....Ε. X. . . . . . . ГО ΝΕΡ... кр1с (ЗЕО ΙΒ N0:125) 0- . .......в.. .....Ε. . . . 5Υ .ΤΡ... кр1а (ЗЕО Ιϋ N0:126) 0- .....Ε_ .Ιι.Η. .,Ρ. .. кр1е (ЗЕО го N0:127) 0- - .....Ε. .,Ρ... ........ кр1£ (ЗЕО го N0:128) .......ϋ.. .....Ε. . - .Ρ. Ν.Ρ.., кпкт (ЗЕО го N0:129) Ω- .......η.. .....Ε. . - -Α. ,ΕΡ... ''•Л·' з кр2а (ЗЕО го N0:130) А. . .. го.. . . .......η.. .κ. ЕУЕАЕ. νσν.. • Μ.ΚΙ ΕΡΡ.. . кр2Ь (ЗЕО го N0:131) А. . .. го.. . . .......η.. -Κ. .ЕУЕАЕ. νον.. -М.АБ ΟΤΡ... кр2с (ЗЕО ХБ N0:132) Р. . .. го.. . . .......Ώ. . .Κ. ЕУЕАЕ. усу.. -Μ.31 ОБР... крЗа (ЗЕО ГО N0:133) АТ. .Ι.Α.... ...·3Ε. . .V. . ΝΝΡ... крЗЬ (ЗЕО ГО N0:134) АТ. 1ГО. . . . .......ϋ. . .Ε.Ε.Ε. . .V. . ... .σ ·3Ρ... крЗс (ЗЕО ГО N0:135) АТ. Ι.Α.... .......η.. ..,Ε.Ε. . .V. . . . .КЗ ΝΝΡ... кр4 (ЗЕО го N0:136) , . ГО. . . . .......ϋ. . ....ΑΕ. ν.ν. . . . . -Υ .ΤΡ... кр5 (ЗЕО го N0:137) УР. ,Ι.Ρ.... ...-Υ.-Β.. ΝΝΙΕ3Ε- Α.Υ.Ρ .Б.НВ ΝΡΡ...
    Фиг. 21
    0 1 1 1 2 1 аЬс йе£ 3 0 3 4 5 5 5 4 1т1а (ЗЕО го N0:138) ОЗУЬТОРРЗ* УЗААРООКУТ ΐ3οεσε53Νΐ Θ»***ΝΝΥν3 №У00ЬР6ТАР ΚΙΒΙΥΕΝΝΚΕ 1т1Ь (ЗЕО го N0:139) .... ...... А.ет...к.. . . . - .8. . .У .............. -Е.-0. 1т1с (ЗЕО го N0:140) . . .V ..С....К.. .. .т...... .А. . .6ΥΟ.Η .6.3Ν. 1т2а (ЗЕО го N0:141) - .А. , ...А.. ..65...51. ...Τ.Τ.-ϋν .5. . .У.Ь.. ....Н..К.. .-М. ..63.. 1т2Ь (ЗЕО Ιϋ N0:142) . .А. ...К.. ..63...VI. ...Т.Т.ГОУ ,С. . .У.... ....Н.-К.. ..м. -ϋνβ.. 1тЗа (ЗЕО го N0,-143) ЗУ. . . .V. . . КТАЕ .Τ.6.ΝΝΙ6* .зкз.н ....К.-0.. ν.νν .иозо. 1шЗЬ (ЗЕО го N0:144) ЗУЕ. . .νε. . .ТАЕ. .Τ...ϋΑΕΡ* .КО.АУ ....К..0-. ν.ν. .КОЗЕ. 1тоЗс (8Е0 го N0:145) ЗУЕ. ..УЗ...ТАЗ .Τ...ϋΚΕΟ* * . . . ГОК.АС ....К..03. ν.ν. -ОЭЗ.. 1т4 (ЗЕО го N0:146) З.Е. , . .О.А. ..У.Ь..Т.Е .Т.О.О.ЬК* * . . . .ЗУ.А. ....к..о.. ν.ν. .6Κ.Ν. 1т6 (ЗЕО го N0:147) ΝΕΜ. ...Н.. ..ЕЗ..КТ.. ...ТЕ..63. А. . . .3...0 ...-Е..33. ТТУ. ..0.0. 1та7 (ЗЕО ГО N0:148) .τ.ν. ..Е... БТУЗ.-6Т.. 1Т.А5.Т6АУ та.. •6Υ.ΡΝ .Р.-К..0.. ЕА.. .3Τ3ΝΚ 1тВ (ЗЕО го N0:149) .ь.. ..3... А..ЗЬ.АЗ.К ЬТ.ТЬ..6** *..НЗЗУА1А .Н..0.ЕК6. ЕУ.МКЬ.ЗОб 5 6 7 8 9 5 5 аЬ 3 3 3 1т1а (ЗЕО го N0:138) рзстрперзс 5К**36Т8АТ Еагтсг-отою Емэуусйтап 85Е5А** 1т1Ь (ЗЕО го N0:139) . . .V ...... .........3 •А.З..К5Е. ..АА.. ϋ...6.. 1т1с (ЗЕО го N0:140) . . .V. ...... .........3 .А.....АЕ. .-ОЗУ. ....6.. 1т2а (ЗЕО го N0.-141) . . .Υ3Ν. . .. ......ΝΤ.8 .Т.З...АЕ. ..СЗУА е.зть.. 1т2Ь (ЗЕО го N0:142) . . .V. , ..... ......ΝΤ.3 . Т.5...АЕ. . .СЗУА 6.УТР.. 1тЗа (ЗЕО го N0:143) .,Е... . .Ν....ΝΤ.. .Т.ЗЕ^ЕА.. ..-СУ.. . ..зон.. 1тЗЬ (ЗЕО го N0:144) .... .Е.... .3.....τν. .Т.З.У.АЕ. . -03А. ..6**.. 1тЗс (ЗЕО го N0:145) •Е.... .Ν.___ΝΤ. . .Т.З.Т.АМ. . .ОА. . ..ТАН.. 1т4 (ЗЕО го N0:146) .3....ΝΤ.8 .Τ...А.АЕ. ..Ν3Ε. . . 6ΝΗ. . 1т6 (ЗЕО го N0:147) ...V.. . . . . . .ГОЗ.ЗИ-.З . Т.З..К.Е. . .ОЗУ. . . .И**. . 1т7 (ЗЕО го N0:148) Η-ΝΤ. .А. . . . .Ь..Б.6К.А .ТЬ8.V.РЕ. . .Е. ..ЬЬУУ 66А0*.. 1п»8 (ЗЕО го N0:149) <30. . .3...,ΑΕΕΥ .Т.ЗЗ..ЗЕ. .-0. -6 Τ6Ι**-.
    Фиг. 22
EA201070812A 2007-12-28 2008-12-29 Лечение и профилактика амилоидоза EA028356B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US754407P 2007-12-28 2007-12-28
US9593208P 2008-09-10 2008-09-10
PCT/US2008/088493 WO2009086539A2 (en) 2007-12-28 2008-12-29 Treatment and prophylaxis of amyloidosis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201070812A1 EA201070812A1 (ru) 2016-05-31
EA028356B1 true EA028356B1 (ru) 2017-11-30

Family

ID=40825109

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201070812A EA028356B1 (ru) 2007-12-28 2008-12-29 Лечение и профилактика амилоидоза
EA201790858A EA036059B1 (ru) 2007-12-28 2008-12-29 Способ получения антитела или его фрагмента, которое специфически связывается с агрегированным амилоидным белком

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790858A EA036059B1 (ru) 2007-12-28 2008-12-29 Способ получения антитела или его фрагмента, которое специфически связывается с агрегированным амилоидным белком

Country Status (21)

Country Link
US (13) US8791243B2 (ru)
EP (3) EP3693470A1 (ru)
JP (3) JP5730020B2 (ru)
KR (1) KR101603076B1 (ru)
CN (1) CN102016059B (ru)
AU (1) AU2008345022B2 (ru)
BR (1) BRPI0821949B1 (ru)
CA (1) CA2710984C (ru)
CO (1) CO6341486A2 (ru)
DK (1) DK2237803T3 (ru)
EA (2) EA028356B1 (ru)
ES (1) ES2544679T3 (ru)
HU (1) HUE025560T2 (ru)
IL (2) IL206641B (ru)
MX (1) MX384227B (ru)
NO (1) NO20101036L (ru)
NZ (1) NZ586875A (ru)
PL (1) PL2237803T3 (ru)
PT (1) PT2237803E (ru)
SG (2) SG187504A1 (ru)
WO (1) WO2009086539A2 (ru)

Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7964192B1 (en) * 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
TWI239847B (en) * 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
JP2006516639A (ja) * 2003-02-01 2006-07-06 ニユーララブ・リミテツド 可溶性Ａ−βに対する抗体を生成させるための能動免疫
US8916165B2 (en) 2004-12-15 2014-12-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition
JP5116662B2 (ja) * 2005-04-06 2013-01-09 ワシントン ユニバーシティ イン セント ルイス インビボにおける神経系由来生体分子の代謝測定方法
US8784810B2 (en) * 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
DK2182983T3 (da) * 2007-07-27 2014-07-14 Janssen Alzheimer Immunotherap Behandling af amyloidogene sygdomme med humaniserede anti-abeta antistoffer
JO3076B1 (ar) * 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
US20090142766A1 (en) * 2007-11-09 2009-06-04 Washington University In St. Louis Methods for measuring the metabolism of cns derived biomolecules in vivo
EA028356B1 (ru) * 2007-12-28 2017-11-30 Протена Байосайенсиз Лимитед Лечение и профилактика амилоидоза
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
US20110294138A1 (en) * 2008-11-12 2011-12-01 The Washington University Methods for simultaneously measuring the in vivo metabolism of two or more isoforms of a biomolecule
JP2013522167A (ja) * 2010-02-12 2013-06-13 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ｕＰＡＲ結合剤及びその使用方法
WO2011119608A1 (en) * 2010-03-26 2011-09-29 University Of Tennessee Research Foundation Peptides that specifically target amyloid deposits
LT2563920T (lt) * 2010-04-29 2017-05-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Transtiretino raiškos moduliavimas
FR2969153B1 (fr) * 2010-12-17 2014-10-17 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification de proteine amyloide p et utilisation de la proteine ainsi purifiee
WO2012094611A1 (en) 2011-01-06 2012-07-12 Humacyte Tissue-engineered constructs
EP4088736A1 (en) * 2011-10-25 2022-11-16 Prothena Biosciences Limited Humanized anti-amyloid antibody formulations and methods
DK3378535T5 (da) 2011-10-28 2024-09-30 Prothena Biosciences Ltd Humanserede antistoffer, der genkender alpha-synuklein
CN108517010A (zh) 2012-01-27 2018-09-11 普罗典娜生物科学有限公司 识别α-突触核蛋白的人源化抗体
EP2895512B1 (en) 2012-09-12 2018-07-04 Neurimmune Holding AG Human islet amyloid polypeptide (hiapp) specific antibodies and uses thereof
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн
CN103772487B (zh) * 2012-10-24 2015-11-25 国家纳米科学中心 一种抑制人胰淀素聚集或毒性的多肽、试剂及其应用
US10513555B2 (en) 2013-07-04 2019-12-24 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
RS60774B1 (sr) * 2013-12-20 2020-10-30 Neurimmune Holding Ag Lečenje transtiretinske (ttr) amiloidoze na bazi antitela i odgovarajuća antitela humanog porekla
EP3101132B1 (en) 2014-01-29 2021-12-22 KM Biologics Co., Ltd. Anti-transthyretin human antibody
JP6818268B2 (ja) 2014-01-29 2021-01-20 Ｋｍバイオロジクス株式会社 抗トランスサイレチンヒト化抗体
CN103834663B (zh) * 2014-03-07 2015-12-02 中国科学院南海海洋研究所 一种血清淀粉样蛋白a及其编码基因和应用
JP6744856B2 (ja) 2014-04-08 2020-08-19 プロセナ・バイオサイエンシズ・リミテッド α−シヌクレインを認識する抗体を含む血液脳関門シャトル
US9683017B2 (en) 2014-07-17 2017-06-20 University Tennessee Research Foundation Inhibitory peptides of viral infection
CA2956820A1 (en) 2014-08-26 2016-03-03 University Of Tennessee Research Foundation Targeting immunotherapy for amyloidosis
US10830775B2 (en) 2014-09-30 2020-11-10 Washington University Tau kinetic measurements
EP4019552A1 (en) * 2015-06-10 2022-06-29 National Research Council of Canada Carbonic anhydrase ix-specific antibodies and uses thereof
GB2541003A (en) * 2015-08-05 2017-02-08 Kran Life Sciences Llp Neurodegenerative disorders
HK1259325A1 (zh) 2015-11-09 2019-11-29 英属哥伦比亚大学 淀粉样蛋白β中的N-末端表位及其构象选择性抗体
WO2017079833A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 The University Of British Columbia Epitopes in amyloid beta mid-region and conformationally-selective antibodies thereto
WO2017079835A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 The University Of British Columbia Amyloid beta epitopes and antibodies thereto
WO2018005967A1 (en) 2016-06-30 2018-01-04 Prothena Therapeutics Limited Compositions for treating amyloidosis
WO2018014126A1 (en) 2016-07-18 2018-01-25 The University Of British Columbia Antibodies to amyloid beta
US20180125920A1 (en) 2016-11-09 2018-05-10 The University Of British Columbia Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions
EP3559038B1 (en) 2016-12-21 2022-12-14 The United States of America as represented by The Secretary Department of Health and Human Services Human monoclonal antibodies specific for flt3 and uses thereof
EP3351271A1 (en) * 2017-01-23 2018-07-25 TheraPharm GmbH Radioimmunoconjugate for use in treating bone marrow associated diseases
US11530257B2 (en) * 2017-06-29 2022-12-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Chimeric antibodies for treatment of amyloid deposition diseases
US12286469B2 (en) 2017-07-18 2025-04-29 The University Of British Columbia Humanized antibodies binding to amyloid-beta (A-beta)
JP7330164B2 (ja) 2017-07-18 2023-08-21 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア アミロイドベータに対する抗体
US11382974B2 (en) 2017-08-01 2022-07-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for treatment of amyloid deposition diseases
CN108299551A (zh) * 2018-02-09 2018-07-20 北京市华信行生物科技有限公司 血清淀粉样蛋白a1突变体及其制备方法和应用
BR112020019172A2 (pt) * 2018-03-23 2021-01-26 Prothena Biosciences Limited tratamento e profilaxia de amiloidose
US12018069B2 (en) 2018-06-28 2024-06-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for imaging amyloid deposits
CN109678945A (zh) * 2018-12-20 2019-04-26 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 一种血清淀粉样蛋白a抗原表位、其预测与验证方法及单克隆抗体的制备方法
EA202192235A1 (ru) 2019-02-12 2022-01-19 Протена Байосайенсиз Лимитед Лечение al-амилоидоза комбинацией моноклональных антител против легких цепей иммуноглобулина и молекул клеточной мембраны cd38 в продуцирующих антитела и других иммунных клетках
MX2021010665A (es) 2019-03-05 2021-12-10 Prothena Biosciences Ltd Metodos de tratamiento de amiloidosis al.
CN109957003B (zh) * 2019-04-15 2022-04-19 南京立顶医疗科技有限公司 一种稳定的saa突变体及其在疾病检测中的应用
US20220411489A1 (en) * 2019-11-15 2022-12-29 Attralus, Inc. Modified immunoglobulins for targeting amyloid deposits
AU2022211971A1 (en) 2021-01-29 2023-08-10 Illimis Therapeutics, Inc. Fusion molecule having non-inflammatory phagocytosis inducing activity
TW202300517A (zh) 2021-03-12 2023-01-01 美商美國禮來大藥廠 抗類澱粉β抗體及其用途
WO2022251048A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Eli Lilly And Company Anti-amyloid beta antibodies and uses thereof
CN114591918B (zh) * 2022-05-07 2022-07-26 北京第一生物化学药业有限公司 产生抗β-淀粉样蛋白抗体的杂交瘤细胞及其用途
WO2025006958A2 (en) * 2023-06-30 2025-01-02 Research Foundation Of The City University Of New York Methods of treating amyloidosis of the skin and rejuvenating skin using biosensors

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6375949B1 (en) * 1995-08-30 2002-04-23 Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha Monoclonal antibody recognizing serum amyloid A
US20040223912A1 (en) * 2003-05-07 2004-11-11 Montalto Michael Christopher Compositions and methods for non-invasive imaging of soluble beta-amyloid
US20050038117A1 (en) * 2003-06-23 2005-02-17 Neurochem (International) Limited Methods and compositions for treating amyloid-related diseases
US20070003552A1 (en) * 2002-07-09 2007-01-04 Gebbink Martijn F B Cross-beta structure comprising amyloid binding proteins and methods for detection of the cross-beta structure, for modulating cross-beta structures fibril formation and for modulating cross-beta structure-mediated toxicity and method for interfering with blood coagulation
US20070178504A1 (en) * 2005-12-22 2007-08-02 Tracey Colpitts Methods and marker combinations for screening for predisposition to lung cancer

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
US5208036A (en) 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
DE3521994A1 (de) 1985-06-20 1987-01-02 Bayer Ag N-(2-aminoacylamido-2-desoxy-hexosyl)-amide-, -carbamate und -harnstoffe, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung in arzneimitteln
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JPS6344895A (ja) * 1986-08-13 1988-02-25 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗アミロイドａ蛋白質単クロ−ン性抗体
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
AU4308689A (en) 1988-09-02 1990-04-02 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
CA2006700A1 (en) 1989-01-17 1990-07-17 Antonello Pessi Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
WO1990014837A1 (en) 1989-05-25 1990-12-13 Chiron Corporation Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0600866T3 (da) 1990-06-01 1998-03-09 Chiron Corp Præparater og fremgangsmåder til identifikation af biologisk aktive molekyler
US5593970A (en) 1990-06-11 1997-01-14 Biochem Pharma Inc. Heterocyclic anthracycline analogs
EP0585287B1 (en) 1990-07-10 1999-10-13 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DE69127627T2 (de) 1990-08-29 1998-02-19 Genpharm Int Produktion und Nützung nicht-menschliche transgentiere zur Produktion heterologe Antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
ES2330052T3 (es) 1991-03-01 2009-12-03 Dyax Corporation Proteina quimerica que comprende micro-proteinas que tienen dos o mas puentes disulfuro y relaizaciones de las mismas.
ATE414768T1 (de) 1991-04-10 2008-12-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
US6797492B2 (en) 1991-05-17 2004-09-28 Merck & Co., Inc. Method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
DE69230545T2 (de) 1991-08-21 2000-07-06 Novartis Ag, Basel Antikörperderivate
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
CA2118806A1 (en) 1991-09-18 1993-04-01 William J. Dower Method of synthesizing diverse collections of oligomers
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5736141A (en) 1992-06-05 1998-04-07 Dalhousie University Method to prevent fertilization in mammals by administering a single dose of zona pellucida derived antigens, liposome and Freund's adjuvant
DK0665897T3 (da) 1992-10-01 2003-10-20 Univ Columbia Komplekse, kombinatoriske, kemiske biblioteker kodet med etiketter
US5674703A (en) 1992-12-02 1997-10-07 Woo; Savio L. C. Episomal vector systems and related methods
CA2169635C (en) 1993-08-26 2002-11-12 Dennis A. Carson Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides
ES2318848T3 (es) 1993-09-14 2009-05-01 Pharmexa Inc. Peptidos que se unen a pan dr para potenciar la respuesta inmunitaria.
NZ276860A (en) 1993-11-02 1997-09-22 Affymax Tech Nv Apparatus and its use for synthesising diverse molecular products on substrates
WO1995030642A1 (en) 1994-05-06 1995-11-16 Pharmacopeia, Inc. Combinatorial dihydrobenzopyran library
US5505947A (en) 1994-05-27 1996-04-09 The University Of North Carolina At Chapel Hill Attenuating mutations in Venezuelan Equine Encephalitis virus
US5663046A (en) 1994-06-22 1997-09-02 Pharmacopeia, Inc. Synthesis of combinatorial libraries
US7153510B1 (en) 1995-05-04 2006-12-26 Yale University Recombinant vesiculoviruses and their uses
WO1997004317A1 (en) 1995-07-21 1997-02-06 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin Method for the quantitative measurement of human acute phase serum amyloid a protein; recombinant protein; specific antibody
JPH09121888A (ja) 1995-11-06 1997-05-13 Cosmo Sogo Kenkyusho:Kk モノクローナル抗体
AU705688B2 (en) 1995-11-10 1999-05-27 Cytogen Corporation Peptides which enhance transport across tissues and methods of identifying and using the same
AUPO390396A0 (en) 1996-11-29 1996-12-19 Csl Limited Novel promiscuous T helper cell epitopes
ATE441432T1 (de) 1997-03-10 2009-09-15 Ottawa Hospital Res Inst Verwendung von nicht-methyliertem cpg dinukleotid in kombination mit aluminium als adjuvantien
JP2002514919A (ja) 1997-04-04 2002-05-21 バイオサイト ダイアグノスティックス，インコーポレイテッド 多価ライブラリーおよびポリクローナルライブラリー
US7179892B2 (en) * 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6913745B1 (en) 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US6923964B1 (en) 1997-12-02 2005-08-02 Neuralab Limited Active immunization of AScr for prion disorders
US6743427B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-01 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
WO2001077167A2 (en) 2000-04-05 2001-10-18 University Of Tennessee Research Corporation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
WO2005025516A2 (en) * 2003-09-12 2005-03-24 The Regents Of The University Of California Monoclonal antibodies specific for conformational epitopes of prefibrillar aggregates
MXPA05003621A (es) 2002-10-09 2005-10-19 Rinat Neuroscience Corp Metodos de tratamiento de la enfermedad de alzheimer usando anticuerpos dirigidos contra el peptido beta amiloide y composiciones de los mismos.
CN1849139A (zh) * 2002-10-09 2006-10-18 里纳特神经系统学公司 使用针对淀粉样β肽的抗体及其组合物治疗阿尔茨海默氏病的方法
US8506959B2 (en) * 2002-11-01 2013-08-13 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
WO2007112566A1 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Queen's University At Kingston Compositions and methods for treating atherosclerosis
CN101058608B (zh) * 2006-04-21 2011-02-23 杜如昱 人类抗Aβ1-32淀粉样蛋白抗体、其纯化方法及用途
EA028356B1 (ru) 2007-12-28 2017-11-30 Протена Байосайенсиз Лимитед Лечение и профилактика амилоидоза
IT1395574B1 (it) 2009-09-14 2012-10-16 Guala Dispensing Spa Dispositivo di erogazione

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6375949B1 (en) * 1995-08-30 2002-04-23 Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha Monoclonal antibody recognizing serum amyloid A
US20070003552A1 (en) * 2002-07-09 2007-01-04 Gebbink Martijn F B Cross-beta structure comprising amyloid binding proteins and methods for detection of the cross-beta structure, for modulating cross-beta structures fibril formation and for modulating cross-beta structure-mediated toxicity and method for interfering with blood coagulation
US20040223912A1 (en) * 2003-05-07 2004-11-11 Montalto Michael Christopher Compositions and methods for non-invasive imaging of soluble beta-amyloid
US20050038117A1 (en) * 2003-06-23 2005-02-17 Neurochem (International) Limited Methods and compositions for treating amyloid-related diseases
US20070178504A1 (en) * 2005-12-22 2007-08-02 Tracey Colpitts Methods and marker combinations for screening for predisposition to lung cancer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MALLE et al. "Mapping of antigenic determinants of punfied, lipid-free human serum amyloid A proteins" Scand J. Immunol, 1998, Vol 48, p 557-561, Abstract, and pg 559, Fig 1-B *

Also Published As

Publication number Publication date
US20090202432A1 (en) 2009-08-13
JP5730020B2 (ja) 2015-06-03
CO6341486A2 (es) 2011-11-21
PT2237803E (pt) 2015-10-16
US20180360934A1 (en) 2018-12-20
WO2009086539A4 (en) 2009-11-12
US20120039878A1 (en) 2012-02-16
ES2544679T3 (es) 2015-09-02
MX384227B (es) 2025-03-14
EA201070812A1 (ru) 2016-05-31
IL232956A0 (en) 2014-07-31
EP3693470A1 (en) 2020-08-12
EP2237803A4 (en) 2011-03-02
JP2016003233A (ja) 2016-01-12
US20110224408A1 (en) 2011-09-15
EP2730659A2 (en) 2014-05-14
HUE025560T2 (en) 2016-03-29
US20250268999A1 (en) 2025-08-28
BRPI0821949A2 (pt) 2020-12-22
EA201790858A3 (ru) 2017-12-29
SG186689A1 (en) 2013-01-30
SG187504A1 (en) 2013-02-28
EA201790858A2 (ru) 2017-08-31
DK2237803T3 (en) 2015-10-05
AU2008345022A1 (en) 2009-07-09
EP2237803A2 (en) 2010-10-13
US20140134103A1 (en) 2014-05-15
CN102016059B (zh) 2014-10-22
KR101603076B1 (ko) 2016-03-14
US20170081396A1 (en) 2017-03-23
US20110218328A1 (en) 2011-09-08
HK1156365A1 (en) 2012-06-08
US8404815B2 (en) 2013-03-26
US8636981B2 (en) 2014-01-28
EP2237803B1 (en) 2015-07-01
US8268973B2 (en) 2012-09-18
CN102016059A (zh) 2011-04-13
KR20110011596A (ko) 2011-02-08
US7928203B2 (en) 2011-04-19
IL206641B (en) 2019-05-30
BRPI0821949B1 (pt) 2022-12-06
US20210008185A1 (en) 2021-01-14
WO2009086539A2 (en) 2009-07-09
CA2710984C (en) 2018-05-29
IL206641A0 (en) 2010-12-30
EA036059B1 (ru) 2020-09-21
NO20101036L (no) 2010-09-23
IL232956B (en) 2019-05-30
US8791243B2 (en) 2014-07-29
JP2011510913A (ja) 2011-04-07
CA2710984A1 (en) 2009-07-09
US20110038790A1 (en) 2011-02-17
PL2237803T3 (pl) 2015-12-31
US20120189624A1 (en) 2012-07-26
WO2009086539A3 (en) 2009-09-24
AU2008345022B2 (en) 2014-11-06
US20150158937A1 (en) 2015-06-11
JP2014080434A (ja) 2014-05-08
EP2730659A3 (en) 2016-01-13
US20120321555A1 (en) 2012-12-20
NZ586875A (en) 2012-10-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028356B1 (ru) Лечение и профилактика амилоидоза
JP2011510913A5 (ru)
TW200906852A (en) Monoclonal antibody
CN102695722A (zh) 对错误折叠的朊病毒蛋白具有特异性的抗体和表位
AU2013205096B2 (en) Treatment and prophylaxis of amyloidosis
AU2017248481B2 (en) Treatment and prophylaxis of amyloidosis
HK40035870A (en) Treatment and prophylaxis of amyloidosis
HK1156365B (en) Treatment and prophylaxis of amyloidosis