EA019554B1 - Аминопиразольное соединение - Google Patents
Аминопиразольное соединение Download PDFInfo
- Publication number
- EA019554B1 EA019554B1 EA201170831A EA201170831A EA019554B1 EA 019554 B1 EA019554 B1 EA 019554B1 EA 201170831 A EA201170831 A EA 201170831A EA 201170831 A EA201170831 A EA 201170831A EA 019554 B1 EA019554 B1 EA 019554B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- methyl
- chloro
- cells
- pyridazin
- morpholinomethyl
- Prior art date
Links
- -1 Amino pyrazole compound Chemical class 0.000 title claims description 48
- 201000007224 Myeloproliferative neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 66
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 15
- VRHSUUSKSRWSLL-UHFFFAOYSA-N 2-(5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)-8-(morpholin-4-ylmethyl)imidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine Chemical compound CC1=CC(=NN1)C=1N=C2N(N=C(C=C2CN2CCOCC2)N)C=1 VRHSUUSKSRWSLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 208000008601 Polycythemia Diseases 0.000 claims description 6
- 125000001064 morpholinomethyl group Chemical group [H]C([H])(*)N1C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 6
- 208000032027 Essential Thrombocythemia Diseases 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 208000003476 primary myelofibrosis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 208000037398 BCR-ABL1 negative atypical chronic myeloid leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037379 Myeloid Chronic Atypical BCR-ABL Negative Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004892 atypical chronic myeloid leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 208000016595 therapy related acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- DCLWNTIANRACSB-UHFFFAOYSA-N imidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine Chemical compound N1=C(N)C=CC2=NC=CN21 DCLWNTIANRACSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LETVJWLLIMJADE-UHFFFAOYSA-N pyridazin-3-amine Chemical compound NC1=CC=CN=N1 LETVJWLLIMJADE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- JVVRJMXHNUAPHW-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrazol-5-amine Chemical class NC=1C=CNN=1 JVVRJMXHNUAPHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 101
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 27
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 27
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 7
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 6
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 5
- GIMRDGMAHSBGHG-UHFFFAOYSA-N (4-chloro-2-fluorophenyl)-(6-chloro-2-methylimidazo[1,2-b]pyridazin-3-yl)methanone Chemical compound CC=1N=C2C=CC(Cl)=NN2C=1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1F GIMRDGMAHSBGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Chemical compound CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WXZUHCAKLKTCGB-UHFFFAOYSA-N (4-chloro-2-fluorophenyl)-[6-chloro-2-methyl-8-(morpholin-4-ylmethyl)imidazo[1,2-b]pyridazin-3-yl]methanone Chemical compound C=1C(Cl)=NN2C(C(=O)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)F)=C(C)N=C2C=1CN1CCOCC1 WXZUHCAKLKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XXKYRXQRSRDCAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-5-methylpyrazol-3-amine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CN1C(C)=CC(N)=N1 XXKYRXQRSRDCAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FYZHQRGIHWWQLB-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1-(4-chloro-2-fluorophenyl)ethanone Chemical compound FC1=CC(Cl)=CC=C1C(=O)CCl FYZHQRGIHWWQLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NDAJNMAAXXIADY-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanimidamide Chemical compound CC(C)C(N)=N NDAJNMAAXXIADY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- CXNIUSPIQKWYAI-UHFFFAOYSA-N xantphos Chemical compound C=12OC3=C(P(C=4C=CC=CC=4)C=4C=CC=CC=4)C=CC=C3C(C)(C)C2=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXNIUSPIQKWYAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VNTZQYCUWPBWSH-UHFFFAOYSA-N (4-chloro-2-fluorophenyl)-[6-chloro-2-methyl-8-(morpholin-4-ylmethyl)imidazo[1,2-b]pyridazin-3-yl]methanol Chemical compound C=1C(Cl)=NN2C(C(O)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)F)=C(C)N=C2C=1CN1CCOCC1 VNTZQYCUWPBWSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMPHUNHAMDBTBE-UHFFFAOYSA-N (4-methoxyphenyl)methylhydrazine;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.COC1=CC=C(CNN)C=C1 XMPHUNHAMDBTBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIGMDNONQJGUCF-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chloro-2-fluorophenyl)ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1F OIGMDNONQJGUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HXOQAJBRGYFLFH-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-chloro-3-(4-chloro-2-fluorobenzoyl)-2-methylimidazo[1,2-b]pyridazin-8-yl]methyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound CC=1N=C2C(CN3C(C4=CC=CC=C4C3=O)=O)=CC(Cl)=NN2C=1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1F HXOQAJBRGYFLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTXVKPOKPFWSFF-UHFFFAOYSA-N 3(S)-hydroxy-13-cis-eicosenoyl-CoA Chemical compound NC1=CC=C(Cl)N=N1 DTXVKPOKPFWSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- HINYAGKLTKBNMH-UHFFFAOYSA-N 4-[[6-chloro-3-[(4-chloro-2-fluorophenyl)methyl]-2-methylimidazo[1,2-b]pyridazin-8-yl]methyl]morpholine Chemical compound C=1C(Cl)=NN2C(CC=3C(=CC(Cl)=CC=3)F)=C(C)N=C2C=1CN1CCOCC1 HINYAGKLTKBNMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYTLHYRDGXRYEY-UHFFFAOYSA-N 5-Methyl-3-pyrazolamine Chemical compound CC=1C=C(N)NN=1 FYTLHYRDGXRYEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100058598 Arabidopsis thaliana BPM1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- BVMQMWQPSXROEQ-UHFFFAOYSA-N [8-(aminomethyl)-6-chloro-2-methylimidazo[1,2-b]pyridazin-3-yl]-(4-chloro-2-fluorophenyl)methanone Chemical compound CC=1N=C2C(CN)=CC(Cl)=NN2C=1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1F BVMQMWQPSXROEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 2
- 229940008099 dimethicone Drugs 0.000 description 2
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 2
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N p-methoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C=C1 ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 2
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical compound ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LAAOJPYAGIBKBK-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-[(4-methoxyphenyl)methylamino]carbamate Chemical compound COC1=CC=C(CNNC(=O)OC(C)(C)C)C=C1 LAAOJPYAGIBKBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKSZBOKPHAQOMP-SVLSSHOZSA-N (1e,4e)-1,5-diphenylpenta-1,4-dien-3-one;palladium Chemical compound [Pd].C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 UKSZBOKPHAQOMP-SVLSSHOZSA-N 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOHYOXXOKFQHDC-UHFFFAOYSA-N 1-(chloromethyl)-4-methoxybenzene Chemical compound COC1=CC=C(CCl)C=C1 MOHYOXXOKFQHDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOZVXADQAHVUSV-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-2-(2-bromoethoxy)ethane Chemical compound BrCCOCCBr FOZVXADQAHVUSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSEQDDGTNOMRHQ-UHFFFAOYSA-N 2-[(4-methoxyphenyl)methyl]-5-methylpyrazol-3-amine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CN1C(N)=CC(C)=N1 NSEQDDGTNOMRHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000006503 Janus Kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010019437 Janus Kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFTLOKWAGJYHHR-UHFFFAOYSA-N N-methylmorpholine N-oxide Chemical compound CN1(=O)CCOCC1 LFTLOKWAGJYHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006552 constitutive activation Effects 0.000 description 1
- 230000037011 constitutive activity Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000005429 filling process Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- JXYZHMPRERWTPM-UHFFFAOYSA-N hydron;morpholine;chloride Chemical compound Cl.C1COCCN1 JXYZHMPRERWTPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N isopropanol acetate Natural products CC(C)OC(C)=O JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940011051 isopropyl acetate Drugs 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-BJUDXGSMSA-N methanone Chemical compound O=[11CH2] WSFSSNUMVMOOMR-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N methoxycyclopentane Chemical compound COC1CCCC1 SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011812 mixed powder Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- MHHDXUNFNAZUGB-UHFFFAOYSA-N oxidovanadium(2+) Chemical compound [V+2]=O MHHDXUNFNAZUGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- IWKLCYXLUROGIV-NTEUORMPSA-N tert-butyl n-[(e)-(4-methoxyphenyl)methylideneamino]carbamate Chemical compound COC1=CC=C(\C=N\NC(=O)OC(C)(C)C)C=C1 IWKLCYXLUROGIV-NTEUORMPSA-N 0.000 description 1
- DKACXUFSLUYRFU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-aminocarbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NN DKACXUFSLUYRFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical compound CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
- A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
В изобретении предложены аминопиразольные соединения, подходящие для лечения хронических миелопролиферативных нарушений и различных видов рака, например глиобластомы, рака груди, множественной миеломы, рака простаты и лейкемий.
Description
Янус-киназа 2 (1ЛК2) является представителем семейства тирозинкиназ, участвующих в передаче цитокиновых сигналов. 1ЛК2 играет ключевую роль в сигнальном пути эритропоэтина (ЕРО), включающем дифференциацию эритроцитов и активацию 81а15. Недавние исследования показали, что у пациентов, страдающих хроническими миелопролиферативными нарушениями, такими как истинная полицитемия, первичный тромбоцитоз и миелосклероз с миелоидной метаплазией и тромботическими нарушениями, такими как резистентность к активированному протеину С, тромбоз вен внутренних органов, синдром Бадда-Киари и тромбоз воротной вены, часто имеются приобретенные активирующие мутации в 1ЛК2. Мутация, а именно замена аминокислоты валин на фенилаланин в положении 617, приводит к конститутивному возросшему уровню фосфорилирования тирозина согласно неизвестному механизму. Конститутивная активность мутантной 1ЛК2 приводит к увеличению уровней транскрипционной активности фосфорилированной 1ЛК2, р8ТЛТ5 и 8ТЛТ5, что приводит к патогенезу миелопролиферативных нарушений и лейкемий, таких как атипичная хроническая миелоидная лейкемия. Кроме того, 1ЛК2 активируется интерлейкин-6-зависимой аутокринной петлей или другими генетическими изменениями в солидных и гематологических опухолях, например, при глиобластоме, раке груди, множественной миеломе, раке простаты, первичной и вторичной острой миелоидной лейкемии, Т-линейной и В-линейной острой лимфобластной лейкемии и миелодиспластическом синдроме.
Были описаны различные аминопиразольные ингибиторы тирозинкиназ. См., например, №006087538 и №02007064797.
Тем не менее, по-прежнему существует потребность в дополнительных соединениях, ингибирующих тирозинкиназы, такие как 1ЛК2. В настоящем изобретении предложено новое аминопиразольное соединение, которое, как считается, может быть клинически применено для лечения миелопролиферативных нарушений, при которых активируется сигнальный путь 1ЛК2 или происходят нарушения регуляции сигнального пути 1ЛК/8ТЛТ.
В настоящем изобретении предложен 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.
В настоящем изобретении предложен способ лечения хронических миелопролиферативных нарушений, выбранных из группы, состоящей из истинной полицитемии, первичного тромбоцитоза и миелосклероза с миелоидной метаплазией у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
В настоящем изобретении также предложен способ лечения глиобластомы, рака груди, множественной миеломы, рака простаты и лейкемий, таких как атипичная хроническая миелоидная лейкемия, первичная и вторичная острая миелоидная лейкемия, Т-линейная и В-линейная острая лимфобластная лейкемия, миелодисплазия, а также миелопролиферативных нарушений у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества 3-(4-хлор-2-фторбензил)2-метил-Ы-(5 -метил-1Н-пиразол-3 -ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция, содержащая 3-(4-хлор2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6амин или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В настоящем изобретении также предложен 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Нпиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель в комбинации с другим терапевтическим ингредиентом. В настоящем изобретении также предложен 3-(4хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения для применения в качестве лекарственного средства. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложено применение 3-(4хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения для получения лекарственного средства для лечения хронических миелопролиферативных нарушений. В частности, указанные хронические миелопролиферативные нарушения выбраны из группы, состоящей из истинной полицитемии, первичного тромбоцитоза и миелосклероза с миелоидной метаплазией. Далее, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для лечения хронических миелопролиферативных нарушений, выбранных из группы, состоящей из истинной полицитемии, первичного тромбоцитоза и миелосклероза с миелоидной метаплазией, содержащая 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Нпиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения в качестве активного ингредиента.
Специалисту в данной области техники понятно, что соединение согласно настоящему изобретению способно образовывать соли. Соединение согласно настоящему изобретению представляет собой
- 1 019554 амин и, соответственно, реагирует с любой из числа неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты. Такие фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот и общая методика получения указанных солей известны в данной области техники. См., например, Р. 81аЫ, е! а1., ΗΛΝΏΒΘΘΚ ΘΕ РНАКМАСЕиТТСЛЬ 8АЬТ8: ΡΚΟΡΕΚΤΙΕ8, 5Ε1.Ε(ΊΊΟ\ ΑΝΏ И8Е, (УСНАЖбеу-УСН, 2002); 1..Ι). В1§Ыеу, 8.М. Ветде, 1ТС. Мопкйоше, в Епсус1оре61а οί Рйаттасеи6са1 Тес1по1оду. Ε6§. 1. 8^атЬт1ск апб ЕС. Воу1ап, Уо1. 13, Магсе1 Эеккег. 1пс., №\ν Уотк, Ва§е1, Нопд Копд 1995, рр. 453-499; 8.М. Вегде, е! а1., Рйаттасеи11са1 8а115, 1оитпа1 ок РйаттасеиНса1 8с1епсе5, Уо1 66, №. 1, 1апиату 1977.
Следующие соединения примеров получения и примеров названы при помощи СйетЭтате и1!га, Версия 10.0.
Схема 1
Пример получения. 1-(4-Метоксибензил)-5-метил-1Н-пиразол-3-амин.
Способ 1.
В круглодонной колбе вместимостью 1 л смешивали 5-амино-3-метилпиразол (22,8 г, 234,8 ммоль) и Ν-метилпирролидон (200 мл). Колбу охлаждали до 0°С и помещали в атмосферу азота. К содержимому колбы добавляли гидроксид натрия (9,39 г, 1,0 экв.) и перемешивали в течение 30 мин. Затем к содержимому колбы по каплям добавляли раствор альфа-хлор-4-метокситолуола (31 мл, 1,0 экв.) в Νметилпирролидоне (100 мл). Реакционную смесь оставляли на ночь для медленного нагревания до комнатной температуры. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором хлорида натрия. Концентрировали под вакуумом. Очищали на колонке с силикагелем (гексан 2:1 гексан:этилацетат 3:2 гексан:этилацетат 1:1 гексан:этилацетат 1:2 гексан:этилацетат этилацетат). Концентрировали требуемые фракции, получая соединение, указанное в заголовке (10,8 г, 21%). Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (4 мин.) = 218,0 (М+1).
Способ 2.
A. (Е)-трет-Бутил-2-(4-метоксибензилиден)-гидразинкарбоксилат.
В течение 20 мин добавляли 4-метоксибензальдегид (400 г, 2,94 моль) к раствору третбутилкарбазата (400 г, 2,94 моль) в толуоле (750 мл) при 50°С. Нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч, собирая воду в азеотропную смесь с толуолом. После того, как сбор воды прекращался, охлаждали смесь до 60°С. Добавляли гексаны до тех пор, пока продукт не выпадал в осадок. Сосуд охлаждали до 20°С. Твердые вещества собирали путем фильтрования и высушивали в атмосфере азота, получая соединение, указанное в заголовке (750,5 г, 91%). Ή ЯМР [400 МГц, диметилсульфоксид-66 (ДМСО66)] δ 10,6-10,8 (ушир.с, 1Н), 7,88-8,0 (с, 1Н), 7,5-7,55 (д, 2Н), 6,95-7,0 (д, 2Н), 1,45 (с, 9Н). Ε8/Μ8 (т/ζ): 249 [М-Н].
B. трет-Бутил-2-(4-метоксибензил)гидразинкарбоксилат.
В герметичный реактор, работающий под давлением, вносили 10% палладиевый катализатор на углеродном носителе (смоченный водой, 20 г), суспендированный в этилацетате (100 мл), при помощи вакуум-пересасывающего устройства. Промывали переходную линию минимальным количеством этилацетата. Вносили (Е)-трет-бутил-2-(4-метоксибензилиден)гидразинкарбоксилат (320 г, 1,28 моль), растворенный в тетрагидрофуране (ТГФ, 1000 мл), при помощи вакуум-пересасывающего устройства, и промывали линию минимальным количеством ТГФ. Повышали давление в реакторе до 50 фунтов на квадратный дюйм (344737,85 Па) при помощи Н2 и смешивали содержимое реактора при 20±10°С. Продолжали проведение реакции, поддерживая водородное давление на уровне 50 ры (345 кПа) до тех пор, пока не наблюдалось прекращение поглощения водорода. Фильтровали реакционный раствор для удаления катализатора и промывали фильтрационный осадок катализатора ТГФ (500 мл). Промытый фильтрационный осадок катализатора добавляли к фильтрату реакции. Концентрировали раствор под вакуумом, получая соединение, указанное в заголовке (337 г, 86%) в виде масла. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 8,1-8,3 (с, 1Н), 7,1-7,3 (д, 2Н), 6,8-6,9 (д, 2Н), 4,4-4,6 (ушир.с,1Н), 3,7-3,8 (с, 2Н), 3,6-3,7 (с, 3Н), 1,3-1,5 (с, 9Н).
C. Дигидрохлорид (4-метоксибензил)гидразина.
К раствору 4н. хлорида водорода в диоксане (2000 мл, 8,00 моль НС1) медленно добавляли третбутил 2-(4-метоксибензил)гидразинкарбоксилат (324 г, 1,09 моль), растворенный в минимальном количестве диоксана, в течение 1 ч. Постепенно формировался осадок. Раствор оставляли для перемешивания на 16 ч при 20±5°С. Собирали твердые вещества с помощью фильтрования. Суспендировали твердые вещества в гептане (2000 мл) и выделяли путем фильтрования. Высушивали твердые вещества в атмосфере азота, получая соединение, указанное в заголовке (242,3 г, 1,08 моль, 98%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 8,2-9,0 (ушир.с, 5Н), 7,3-7,4 (д, 2Н), 6,8-7,0 (д, 2Н), 4,0 (с, 2Н), 3,7 (с, 3Н).
Ό. 1-(4-Метоксибензил)-5-метил-1Н-пиразол-3-амин и 1-(4-метоксибензил)-3-метил-1Н-пиразол-5амин.
Смешивали трет-бутоксид калия (191,89 г, 1,71 моль) и ТГФ (2000 мл) при 22°С. Перемешивали до получения однородной смеси. Охлаждали до 5°С. Добавляли предварительно приготовленный раствор
- 2 019554 ацетонитрила (84,25 г, 2,05 моль) и метилацетата (126,7 г, 1,71 моль) к раствору трет-бутоксида калия в течение 45 мин, поддерживая температуру ниже 10°С. После завершения добавления смесь оставляли для нагревания до 20±5°С и перемешивали в течение примерно 2 ч. К реакционной смеси порциями добавляли дигидрохлорид (4-метоксибензил)гидразина (250 г) в течение 5 мин, затем добавляли 4н. гидрохлорид в диоксане (262,5 г, 1,00 моль) с такой скоростью, чтобы температура оставалась на отметке <30°С. После завершения добавления смесь оставляли для перемешивания при 25±5°С на примерно 16 ч. Выделяли твердые вещества с помощью фильтрования и промывали ТГФ (500 мл). Перемешивали сырые твердые вещества в дихлорметане (ДХМ, 4 л) и воде (2 л), доводя рН до значения >10 при помощи 5н. ΝαΟΗ. Оставляли слои для осаждения и собирали органическую фазу. Водную фазу промывали ДХМ (2 л). Органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия, затем концентрировали раствор до твердого состояния в вакууме, получая 165 г сырого вещества. Сырое вещество нагревали с обратным холодильником в изопропилацетате (660 мл) для растворения как можно большего числа твердых веществ. Охлаждали до 33°С и медленно добавляли гексан (600 мл) в течение 1 ч. Охлаждали до 10°С и оставляли при температуре 10°С на 10 мин. Твердые вещества отделяли при помощи фильтрования, промывали гексаном (200 мл) и высушивали в атмосфере азота с получением смеси соединений, указанных в заголовке (91,5 г, 0,4 моль, 47%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 7,2-7,3 (д, 2Н), 6,7-6,9 (д, 2Н), 5,1 (ушир.с, 2Н), 5,0 (с, 1Н), 4,9 (с, 2Н), 3,6-3,8 (с, 3Н), 1,9 (с, 3Н).
Примечание: указанные промежуточные соединения можно разделить с помощью хроматографии, однако в данном случае их выделяют в виде смеси; их можно использовать в конечной последовательности, приведенной ниже, включающей удаление бензильной защитной группы, что приводит к получению того же продукта.
Пример получения 2. 2-Хлор-1-(4-хлор-2-фторфенил)этанон.
В круглодонной колбе вместимостью 1 л смешивали 4'-хлор-2'-фторацетофенон (40 г, 231,8 ммоль), гептан (120 мл) и метанол (16 мл). Смесь охлаждали до 0°С и помещали в атмосферу азота. Растворяли сульфурилхлорид (21,5 мл, 1,15 экв.) в гептане (120 мл) и помещали в капельную воронку, и затем добавляли по каплям к реакционной смеси в течение 60 мин. Перемешивали 2,5 ч при 0°С; за это время формировался белый осадок. В капельную воронку помещали 1 М бикарбонат натрия (400 мл), затем добавляли к реакционной смеси по каплям. После того как прекращалось газовыделение, двухфазную суспензию фильтровали, получая соединение, указанное в заголовке (38,18 г, 80%) в виде игольчатых кристаллов. Ή ЯМР (ДМСО-66) δ 5,00 (д, 2Н, 1=2,5 Гц), 7,43 (м, 1Н), 7,63 (м, 1Н), 7,89 (т, 1Н, 1=8,4 Гц).
Пример получения 3. (Е)-№-(6-Хлорпиридазин-3-ил)-^№диметилацетимидамид.
В круглодонной колбе вместимостью 2 л смешивали 3-хлор-6-пиридазинамин (43,2 г, 333,5 ммоль), толуол (500 мл) и Ν,Ν-диметидацетамид диметилацеталь (67,8 мл, 1,25 экв.). К колбе присоединяли обратный холодильник и нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. Оставляли для охлаждения до комнатной температуры. Концентрировали под вакуумом. Измельчали неочищенное вещество в порошок с гексанами и фильтровали, получая соединение, указанное в заголовке (60,4 г, 91%) в виде светло-коричневого твердого соединения. МС = 199,0 (М+1).
Пример получения 4. (4-Хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил)метанон.
В круглодонной колбе смешивали (Е)-№-(6-хлорпиридазин-3-ил)-^№диметилацетимидамид (36,61 г, 184,3 ммоль), 2-хлор-1-(4-хлор-2-фторфенил)этанон (38,15 г, 1 экв.) и диметилформамид (150 мл). Помещали в атмосферу азота, затем нагревали до 120°С в течение 4 ч. Оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем для перемешивания в течение ночи. Разбавляли этилацетатом (1 л) и водой (500 мл). Три раза экстрагировали органические вещества при помощи воды, затем при помощи насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органические вещества высушивали над безводным сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очищали на колонке с силикагелем (гексан 4:1 гексан:этилацетат 3:1 гексан:этилацетат 2:1 гексан:этилацетат 1:1 гексан:этилацетат), получая соединение, указанное в заголовке (33,8 г, 57%) в виде светло-зеленого твердого вещества. Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (4 мин. = 324,0, 326,0, М+1).
Пример получения 5. 2-((6-Хлор-3-(4-хлор-2-фторбензоил)-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-8ил)метил)изоиндолин-1,3-дион.
Смешивали (4-хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил)метанон (5,6 г, 17,3 ммоль), Ν-фталоилглицин (6,0 г, 1,7 экв.), ацетонитрил (60 мл), воду (15 мл), трифторуксусную кислоту (0,26 мл, 0,2 экв.) и нитрат серебра (294 мг, 0,1 экв.) в круглодонной колбе с присоединенной капельной воронкой и помещали смесь в атмосферу азота. Нагревали до 70°С и оставляли при этой температуре на 15 мин. Растворяли персульфат аммония (7,1 г, 1,8 экв.) в воде (15 мл) и помещали в капельную воронку. Добавляли по каплям в реакционную колбу в течение примерно 20 минут. Нагревали реакционную смесь при 70°С в течение 1 ч. За это время формировался осадок; фильтровали при помощи воронки Бюхнера, получая неочищенное соединение, указанное в заголовке (7,3 г, 87%), в виде грязнобелого твердого соединения. Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (4 мин) = 483,0, 485,0, М+1.
Пример получения 6. (8-(Аминометил)-6-хлор-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил)(4-хлор-2фторфенил)метанон.
- 3 019554
Смешивали 2-((6-хлор-3 -(4-хлор-2-фторбензоил)-2-метилимидазо [ 1,2-Ь]пиридазин-8-ил)метил)изоиндолин-1,3-дион (7,30 г, 15,1 ммоль), этанол (200 мл) и гидразин (1,45 мл, 3 экв.) в круглодонной колбе и помещали в атмосферу азота. Перемешивали в течение 2 дней при комнатной температуре. Нагревали в течение 2 ч при 50°С, затем концентрировали реакционную смесь под вакуумом. Разбавляли этилацетатом. Промывали органические вещества 1н. НС1 (вод.) для того, чтобы происходила вытяжка продукта в водный слой. Затем водный слой делали основным, добавляя 1н. ΝαΟΗ (вод.), и экстрагировали продукт этилацетатом. Промывали этилацетат насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали под вакуумом, получая неочищенное соединение, указанное в заголовке (1,2 г, 23%) в виде светло-зеленого твердого вещества. МС = 355,0, 353,0 (М+1).
Пример получения 7. (4-Хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь] пиридазин-3-ил)метанон.
Смешивали (8-(аминометил)-6-хлор-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил)(4-хлор-2-фторфенил) метанон (1,15 г, 3,3 ммоль), воду (12 мл), карбонат калия (495 мг, 1,1 экв.) и 2-бромэтиловый эфир (0,47 мл, 1,1 экв.) в 20 мл микроволновом реакторе. Закрывали винтовой крышкой, затем нагревали в микроволновом реакторе при 120°С в течение 20 мин. Охлаждали до комнатной температуры и разделяли между этилацетатом и водой. Этилацетатный слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очищали на колонке с силикагелем (4:1 гексан:этилацетат 2:1 гексан:этилацетат 1:1 гексан:этилацетат), получая соединение, указанное в заголовке (0,43 г, 31%), в виде светло-желтой пены. Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (4 мин) = 423,0, 425,0, М+1.
Пример получения 8. (4-Хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь] пиридазин-3-ил)метанол.
Смешивали (4-хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8-(морфолинометил)-имидазо[1,2-Ь]пиридазин3-ил)метанон (0,43 г, 1,0 ммоль) и метанол (15 мл) в круглодонной колбе. Помещали в атмосферу азота и охлаждали до 0°С. Добавляли одну порцию боргидрида натрия (58 мг, 1,5 экв.). Перемешивали в течение 5 мин при указанной температуре, затем удаляли охлаждающую ванну и оставляли для нагревания до комнатной температуры. Спустя 15 мин гасили реакционную смесь водой, затем экстрагировали этилацетатом. Органические вещества промывали водой, затем насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органические вещества высушивали над безводным сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали под вакуумом, получая соединение, указанное в заголовке (0,4 г, 93%). Жидкостная хроматомассспектрометрия (4 мин) = 425,0, 427,0, М+1.
Пример получения 9. 4-((6-Хлор-3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-8ил)метил)морфолин.
Смешивали (4-хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8-(морфолинометил)-имидазо[1,2-Ь]пиридазин3-ил)метанол (0,4 г, 0,94 ммоль), 1,2-дихлорэтан (25 мл), триэтилсилан (0,45 мл, 3 экв.) и трифторуксусную кислоту (0,57 мл, 8 экв.) в круглодонной колбе и помещали в атмосферу азота. Нагревали при 70°С в течение ночи. Концентрировали реакционную смесь под вакуумом. Загружали 10-граммовый 8СХ ионобменный картридж (предварительно промытый метанолом) в Уапап МсдаЕйП®. Элюировали метанолом для удаления неосновных примесей. Элюировали 2 М аммиаком в метаноле. Концентрировали под вакуумом, получая соединение, указанное в заголовке (0,36 г,94%). Жидкостная хроматомассспектрометрия (4 мин) = 409,0, 411,0, М+1.
Пример получения 10. 3-(4-Хлор-2-фторбензил)-№(1-(4-метоксибензил)-5-метил-1Н-пиразол-3-ил)2-метил-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин.
Смешивали 4-((6-хлор-3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-8-ил)метил)морфолин (0,36 г, 0,88 ммоль), 1-(4-метоксибензил)-5-метил-1Н-пиразол-3-амин (0,248 г, 1,3 экв.), карбонат калия (0,30 г, 2,5 экв.), 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен (0,076 г, 0,15 экв.), воду (2 мл) и 1,4-диоксан (20 мл) в круглодонной колбе. Тщательно дегазировали азотом, затем добавляли бис(дибензилиденацетон)палладий (0,10 г, 0,2 экв.). К колбе присоединяли обратный холодильник и помещали в атмосферу азота. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи, затем пропускали через цеолитовый фильтр. Фильтр промывали этилацетатом. Реакционную смесь переносили в делительную воронку и промывали водой. Органический слой промывали водным хлоридом натрия, затем высушивали над безводным сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очищали на колонке с силикагелем (этилацетат 10% метанол:этилацетат), получая соединение, указанное в заголовке (0,447 г, 86%), в виде бледно-желтого твердого вещества. Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (4 мин) = 590,2, 591,2, М+1.
Пример 1. 3-(4-Хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил) имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин
- 4 019554
Смешивали 3-(4-хлор-2-фторбензил)-Ы-( 1 -(4-метоксибензил)-5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-2-метил-8(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин (0,447 г, 0,76 ммоль) и трифторуксусную кислоту (10 мл) в 20 мл трубе микроволнового реактора. Закрывали винтовой крышкой, затем нагревали в микроволновом реакторе при 120°С в течение 20 мин. Разделяли реакционную смесь между этилацетатом и водой, которая приобрела основную реакцию при избытке водного ΝαΟΗ. Три раза отмывали органическую фазу водным ΝαΟΗ, затем насыщенным водным раствором хлорида натрия. Высушивали над безводным сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очищали на колонке с силикагелем (этилацетат 10% метанол:этилацетат), получая соединение, указанное в заголовке (0,246 г, 0,52 ммоль) в виде бледно-желтого твердого вещества. Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (8 мин) = 470,0, М+1.
Пример 2. Гидрохлорид 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина
Смешивали 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил) имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин (0,1 г, 0,21 ммоль) и 1,4-диоксан (10 мл) в грушевидной колбе и помещали в атмосферу азота. Добавляли гидрохлорид (4М в 1,4-диоксане, 0,053 мл, 1,0 экв.) и оставляли для перемешивания при комнатной температуре на 1,5 ч. Концентрировали под вакуумом, затем дважды выпаривали под вакуумом из абсолютного этанола. Высушивали в течение ночи в вакуумной печи (60°С), получая соединение, указанное в заголовке (0,11 г, 102%). Жидкостная хроматомасс-спектрометрия (8 мин) = 470,0, М+1.
Схема 2
Пример получения 11. (Е)-№-(6-хлорпиридазин-3-ил)-^№диметилацетимидамид.
Смешивали 6-хлорпиридазин-3-амин (1,500 кг, 11,58 моль), 1,1-диметокси-^№диметилэтанамин (2,313 кг, 17,37 моль) и циклопентилметиловый эфир (8,25 л), затем нагревали смесь до 98°С, отгоняя получающийся побочный продукт метанола. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли к реакционному раствору гептаны (11,2 л) для кристаллизации продукта. Соединение, указанное в заголовке, собирали при помощи фильтрации и высушивали. (1,494 кг, 64,95%; т.пл. = 73°С).
Пример получения 12. 2-Хлор-1-(4-хлор-2-фторфенил)этанон.
Перемешивали смесь гептанов (1,5 л), метанола (0,4 л) и 1-(4-хлор-2-фторфенил)этанона (1 кг, 5,81 моль), охлаждая при этом до <5°С. В смесь по каплям вносили сульфурилхлорид (0,608 л, 1,02 кг, 7,55 моль) в виде раствора гептанов (1,5 л), поддерживая при этом температуру реакции <15°С. Спустя 2 ч реакционную смесь гасили гидроксидом натрия (5н, 2,0 л) до рН, равного 6, при комнатной температуре. Экстрагировали реакционную смесь метиленхлоридом (2 л) и концентрировали экстракт, получая белое твердое вещество. Фильтровали и высушивали твердое вещество.
Пример получения 13. (4-Хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3ил)метанон.
Смешивали 2-хлор-1-(4-хлор-2-фторфенил)этанон (1,5 кг, 5,44 моль) и (Е)-№-(6-хлорпиридазин-3ил)-^№диметилацетимидамид (1,19 кг, 5,72 моль) в диметилформамиде (ДМФ) (10,14 л) и нагревали при 120°С в течение 5 ч. После охлаждения добавляли воду (30 л) и перемешивали для кристаллизации продукта. Продукт собирали путем фильтрования и промывали осадок водой (2x12 л) и гептанами (2x10 л), затем высушивали под вакуумом, получая соединение, указанное в заголовке (1,490 кг, 84,44%; т.пл. = 160°С, М+ = 324).
Пример получения 14. (4-Хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь] пиридазин-3-ил)метанон.
В реакционный сосуд в атмосфере азота вносили этанол (12 л), (4-хлор-2-фторфенил) (6-хлор-2метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил) метанон (897,70 г, 2,77 моль) и бис(2,4-пентандионат)оксованадий (IV) (146,81 г, 553,67 ммоль). По каплям добавляли этанольный раствор (6 л) 4-метилморфолин-4-оксида (3,89 кг, 33,21 моль) в течение 150 мин, поддерживая температуру реакции на уровне 22-23°С, затем на
- 5 019554 гревали реакционную смесь при 40°С в течение 48 ч. Охлаждали реакционную смесь и концентрировали ее путем удаления растворителя (13 л). Получившуюся смесь фильтровали, промывали остаток на фильтре гексаном (1 л) и высушивали его. (728 г, 66,25%; т.пл. 145-147°С; М+ = 423).
Пример получения 15. Гидрохлорид 4-((6-хлор-3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метилимидазо[1,2Ь]пиридазин-8-ил)метил)морфолина.
При 26°С смешивали триэтилсилан (110 г, 94 6 ммоль) и (4-хлор-2-фторфенил)(6-хлор-2-метил-8(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-ил)метанон (50,1 г, 117,06 ммоль) с получением раствора. К реакционной смеси добавляли трифторуксусную кислоту (150 мл, 1,98 моль), затем нагревали смесь при 78°С в течение 24 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и разделяли смесь, удаляя верхний слой. Нижний слой растворяли в этилацетате (1 л) и доводили рН до 11 при помощи гидроксида натрия (4н, 500 мл). Отделяли органический слой и добавляли к нему НС1 (4М в этиловом эфире), получая соль соляной кислоты, которую затем фильтровали и высушивали. (100 г (96%); т.пл. =237238°С; М+ = 409).
Пример получения 16. Гидрохлорид и свободное основание 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина.
Получали активный катализатор путем смешивания хлорида палладия (160 мг, 0,90 ммоль) и 4,5бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантена (1,10 г, 1,84 ммоль) в ДМФ (25 мл) и нагревания с образованием раствора. Заранее приготовленный катализатор добавляли к раствору 3-метил-1Н-пиразол-5-амина (3,0 г, 29,65 ммоль), гидрохлорида 4-((6-хлор-3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метилимидазо[1,2-Ь]пиридазин8-ил)метил)морфолина (9,0 г, 20,19 ммоль), бикарбоната калия (6,0 г, 59,93 ммоль) в ДМФ (65 мл) и нагревали до 150°С в течение 1 ч. Охлаждали реакционную смесь до 60°С, и добавляли диоксид кремния, функционализированный меркаптопропилом (500 мг), и перемешивали в течение 1 ч, затем фильтровали для удаления диоксида кремния. Охлаждали до комнатной температуры, добавляли 2-метилтетрагидрофуран (125 мл) и экстрагировали водой для удаления ДМФ. Добавляли к органическому раствору НС1 для получения гидрохлоридной соли 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-И-(5-метил-1Н-пиразол-3ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина. Добавляли гидрохлоридную соль (1,1 г) к гидроксиду натрия (10 мл, 1н) в н-бутаноле (10 мл) и перемешивали. Получившуюся смесь фильтровали, получая 0,22 г свободного основания, имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин, 3-[(4-хлор-2-фторфенил)метил]2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(4-морфолинометил), (выход 22%, М+1. = 470).
Пример 3. Композиция 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина. Необязательно пропускали 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2метил-Ы-(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин и наполнители через подходящее сито. Соединяли и смешивали 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-Ы-(5-метил-1Нпиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин, прежелатинизированный крахмал и прежелатинизированный крахмал с 5% содержанием диметикона с использованием подходящей емкости для смешивания (с устройством для интенсификации перемешивания или без него) или другого подходящего оборудования для смешивания. В другом варианте добавляли диметикон во время смешивания с помощью системы ввода жидких добавок. Смешанным порошком наполняли капсулы с использованием подходящего оборудования для инкапсуляции. Контролировали однородность по массе и соответствующие технологические параметры во время процесса наполнения. Необязательно удаляли пыль из конечных капсул или полировали вручную или автоматически. Клеточный анализ 1ΆΚ2 ЕРО-ТЕ1/р8ТАТ5 Сс11о1шс5 Атгау8сап® НС8.
Клеточный анализ 1АК2 ЕРО-ТЕ1/р8ТАТ5 имитирует конститутивную активацию 1АК2-8ТАТ5 в эритроидных клетках-предшественниках, запускающую избыточное производство красных кровяных телец, что является характерным признаком истинной полицитемии (РУ).
Клетки ТЕ-1 (эритоидная лейкемия человека) культивировали в среде КРМ1 1640 (среда ВРМ1-1640 была разработана Муром с соавторами (Мооге е1. а1.) в Мемориальном институте Розуэлла Парка (Ро5\те11 Рагк Метопа1 1п81йи1е). Композиция основана на серии сред КРМ1-1630, в которых применяется бикарбонатная буферная система и меняющиеся количества аминокислот и витаминов) с 10% фетальной бычьей сывороткой (ЕВ8), 0,075% бикарбонатом натрия, 1 мМ пируватом натрия, 1-крат. антибиотиком/фунгицидом (1пуйтодеп, СагЕЬай. СА) и 0,45% глюкозой. Среду дополняли 6М-С8Е (гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор) в конечной концентрации 2 нг/мл. Клетки содержали при 37°С с 5% содержанием СО2. Клетки выращивали на бессывороточной среде для устранения внутренних факторов роста. Производили подсчет клеток ТЕ-1, затем их сбор для высевания в количестве 2х107 на 96-луночные планшеты с плотностью 2х105 клеток на лунку. Клетки дважды промывали средой ВРМ1 1640 без добавок (ВРМ1 1640 с 0,075% бикарбонатом натрия, 1 мМ пируватом натрия, 1-крат. антибиотиком/фунгицидом и 0,45% глюкозой) перед тем как суспендировать клетки в конечной концентрации 5х105 клеток/мл в КРМ1 с 0,6% ЕВ8. Разбавленные клетки помещали обратно в колбы с тканевой культурой и инкубировали в течение ночи при 37°С. Исследумые соединения приготавливали в 100% ДМСО при концентрации 10 мМ.
Соединения серийно разбавляли 100% ДМСО в пропорции 1:3 в диапазоне концентрация-ответ 10
- 6 019554 крат. - 200-крат. (4 мМ-200 нМ). В отдельном 96-луночном планшете с глубокими лунками добавляли 2,5 мкл 200-крат. раствора соединения к 125 мкл полной среды ΒΡΜΙ 1640 с 10% РВ8 на 4-крат. концентрацию соединения в планшете.
Для проведения исследования производили сбор клеток, выращенных на бессывороточной среде, и один раз промывали средой ΒΡΜΙ 1640 без добавок. Клетки суспендировали в полной среде ΒΡΜΙ с 10% РВ8 до конечной концентрации 8х105 клеток/мл. Аликвоту 250 мкл разбавленных клеток (2х105 клеток) добавляли в каждую лунку в концентрации, в 4 раза превышающей концентрацию соединения в планшете. Клетки перемешивали с использованием вортекса, и планшет инкубировали в водяной бане при 37°С в течение 10 мин. Готовили свежий 4-крат. рабочий раствор эритропоэтина (ЕРО) в пропорции 6,4 ед./мл с использованием заранее нагретой полной среды ΒΡΜΙ 1640 с 10% РВ8. После того как клетки обрабатывали соединением в течение 10 мин, в каждую лунку добавляли 125 мкл среды ЕРО, после чего содержимое планшета перемешивали с использованием вортекса. Клетки инкубировали в водяной бане при 37°С в течение 20 мин и перемешивали каждые 5 мин за время инкубации. Конечный 10-кратный диапазон концентрация-ответ составлял 20 мкМ-1 нМ при конечной концентрации ДМСО 0,5% и ЕРО 1,6 ед./мл. После обработки клеток в каждую лунку добавляли 500 мкл 1% раствора формальдегида (свежеприготовленного с использованием фосфатно-солевого буфера (ΡΒ8) и содержавшегося при 37°С). Лунки запечатывали и переворачивали 8-10 раз для перемешивания. Планшеты помещали в 37°С водяную баню на 10 мин. После инкубации планшеты с клетками центрифугировали на 1200 об./мин. в течение 5 мин при комнатной температуре. Надосадочную жидкость отделяли с помощью аспиратора, получая 100 мкл клеток (2х105 клеток). Клетки перемешивали с использованием вортекса и дважды промывали 800 мкл ΡΒ8, повторяя центрифугирование, и получая в итоге 100 мкл жидкости, содержащей ~2х105 клеток, после последнего промывания. Аликвоту 800 мкл холодного 90% метанола добавляли к клеткам и оставляли при -20°С на ночь. Планшеты центрифугировали и удаляли из них метанол. Клетки промывали буфером РАС8 (ΡΒ8 с 5% РВ8 и 0,02% азида натрия). К клеткам добавляли аликвоту 200 мкл 1-10-кратно разбавленного аий-р8ТАТ5 (ρΥ694) А1еха Р1иог 647® мыши в буфере флуоресцентной сортировки клеток (РАС8). Клетки тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 2 ч. Клетки один раз промывали ΡΒ8, в результате чего оставалось 100 мкл клеток. Готовили рабочий раствор 2 мкг/мл Ноесйй (Асгок Отдашск, Μοττίδ ΡΙαίηδ. N1) с помощью ΡΒ8. Аликвоту 200 мкл добавляли в каждую лунку и инкубировали клетки при комнатной температуре в темноте в течение 10 минут. Клетки промывали ΡΒ8, после чего добавляли к ним 50 мкл С'уЮП.х (ВБ Вюкаепсек, 8аи 1о§е, СА). Клетки перемещали в 96-луночные черные планшеты для культур тканей и запечатывали. Планшеты центрифугировали. Производили сбор приблизительных данных о средней интенсивности флуоресценции и анализировали их при помощи Се11отю8 Аггауксап® УТР Результаты обработки соединением сравнивали с результатами для носителя для определения процента ингибирования. Минимально значимое соотношение (Μ8Κ.) между двумя тестовыми соединениями с разными значениями 1С50 составило 2,2. Для получения относительных значений 1С50 использовали четырехпараметрический логистический подбор кривой при помощи программного обеспечения АсДуйуВаке 4.0. Для 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина 1С50=0,033 мкмоль, п=4. Результаты анализа показали, что 3-(4-хлорфторбензил) -2-метил-№ (5-метил-1Н-пиразол3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин является мощным ингибитором 1АК2.
Клеточный анализ ΊΑΚ3 ΙΕ-2-ΝΚ-92/ρ8ΤΑΤ5 - СеИошкз Аггау8еап® ИС8
1Ь-2 активирует путь 1АК3 в натуральных клетках-киллерах (ΝΚ), запуская пролиферацию ΝΚ и СБ8-лимфоцитов. Таким образом, клеточный анализ 1Ь2-стимулированного NΚ92/ρ8ТАТ5 позволяет оценить клеточную активность 1АК3 у 1АК2-соединений ίη νίΙΐΌ.
Клетки ΝΡ-92 (натуральные киллеры) (АТСС, Μаηа88а8, УА) культивировали в минимально обогащенной среде (ΜΕΜ) А1р11а с 15% фетальной бычьей сывороткой, 15% лошадиной сывороткой и 1-крат. антибиотиком/фунгицидом (1пуйтодеп, СаткЬаф СА). Среду дополняли 1Ь-2 (Р&Б куйетк, Μшηеаρο1^8, ΜΝ) до конечной концентрации 4 нг/мл. Клетки содержали при 37°С с 5% содержанием СО2. Клетки выращивали на бессывороточной среде для устранения внутренних факторов роста. Производили подсчет клеток М<-92, затем их сбор для высевания в количестве 2х 107 на 96-луночные планшеты с плотностью 2х 105 клеток на планшет. Клетки дважды промывали средой ΜΕΜ А1рйа без добавок (ΜΕΜ А1рйа) перед тем, как суспендировать клетки в конечной концентрации 8х105 клеток/мл в среде ΜΕΜ А1рйа с 0,6% сывороткой (0,3% РВ8, 0,3% лошадиной сыворотки). Разбавленные клетки помещали обратно в колбы с тканевой культурой и инкубировали в течение ночи при 37°С. Исследумые соединения приготавливали в 100% ДМСО при концентрации 10 ммоль. Соединения серийно разбавляли в пропорции 1:3 100% ДМСО в диапазоне концентрация-ответ 10-крат. - 200-крат. (4 ммоль -200 нмоль). В отдельном 96луночном планшете с глубокими лунками добавляли 2,5 мкл 200-крат. раствора соединения к 125 мкл полной среды ΒΡΜΙ 1640 с 10% РВ8 на 4-крат, концентрацию соединения в планшете.
Для проведения исследования производили сбор клеток, выращенных на бессывороточной среде, и один раз промывали их средой ΡΡΜΙ 1640 без добавок. Клетки суспендировали в полной среде ΒΡΜΙ с 10% РВ8 до конечной концентрации 8х105 клеток/мл. Аликвоту 250 мкл разбавленных клеток (2х105
- 7 019554 клеток) добавляли в каждую лунку в концентрации, в 4 раза превышающей концентрацию соединения в планшете. Клетки перемешивали с использованием вортекса, и планшет инкубировали в водяной бане при 37°С в течение 10 минут. Готовили свежий 4-крат. рабочий раствор 1Ь-2 в пропорции 2 нг/мл с использованием заранее нагретой полной среды ΚΡΜΙ 1640 с 10% РВ8. После того как клетки обрабатывали соединением в течение 10 мин, в каждую лунку добавляли 125 мкл среды 1Ь-2. Клетки перемешивали с использованием вортекса. Затем клетки инкубировали в водяной бане при 37°С в течение 20 минут, перемешивая их каждые 5 мин за время инкубации. Конечный 10-кратный диапазон концентрация-ответ составлял 20 мкмоль - 1 нмоль при конечной концентрации ДМСО 0,5% и 1Ь-2 0,5 нг/мл. После обработки клеток в каждую лунку добавляли 500 мкл 1% раствора формальдегида (свежеприготовленного с использованием фосфатно-солевого буфера (РВ8) и содержавшегося при 37°С). Планшеты запечатывали и переворачивали 8-10 раз для перемешивания. Планшеты помещали в 37°С водяную баню на 10 мин. После инкубации планшеты с клетками центрифугировали на 1200 об./мин. в течение 5 мин при комнатной температуре. Надосадочную жидкость отсасывали с помощью аспиратора, получая 100 мкл клеток (2х105 клеток). Клетки перемешивали с использованием вортекса и дважды промывали 800 мкл РВ8, повторяя центрифугирование, и получая в итоге 100 мкл жидкости, содержащей ~2х105 клеток, после последнего промывания. Аликвоту 800 мкл холодного 90% метанола добавляли к клеткам и оставляли при -20°С на ночь. Планшеты центрифугировали и удаляли из них метанол. Клетки промывали буфером РАС8 (РВ8 с 5% РВ8 и 0,02% азида натрия). К клеткам добавляли аликвоту 200 мкл 1-10-кратно разбавленного ап6-р8ТАТ5 (ρΥ694) А1еха Р1иог 647® мыши в буфере флуоресцентной сортировки клеток (РАС8). Клетки тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 2 ч. Клетки один раз промывали РВ8, в результате чего оставалось 100 мкл клеток. Готовили рабочий раствор 2 мкг/мл Ноесйк! (Асгок Отдашск, Μοττίδ ΡΙαίηδ. N1) с помощью РВ8. Аликвоту 200 мкл добавляли в каждую лунку и инкубировали клетки при комнатной температуре в темноте в течение 10 мин. Клетки промывали РВ8, после чего добавляли к ним 50 мкл Су1оПх® (ВО Вюкаепсек, 8аи 1оке, СА). Клетки перемещали в 96-луночные черные планшеты для культур тканей и запечатывали. Планшеты центрифугировали. Производили сбор приблизительных данных о средней интенсивности флуоресценции и анализировали их при помощи Се11от1ск Аггауксап® УТР Сравнивали результаты обработки соединением с результатами для осителя для определения процента ингибирования. Минимально значимое соотношение (Μ8Κ) составило 2,06. Для получения относительных значений 1С50 использовали четырехпараметрический логистический подбор кривой при помощи программного обеспечения АсЙУЙуВаке 4.0. Для 3 -(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3 -ил)-8-(морфолинометил)имидазо [1,2-Ъ] пиридазин-6-амина 1С50=0,94 мкМ, п=4. Результаты клеточного анализа 1АК3 ΙΡ-2-ΝΚ-92-ρ8ΤΛΤ5 показали, что 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ъ]пиридазин-6-амин является менее мощным ингибитором 1АК3 (при сравнении с результатами клеточного анализа 1АК2 ЕРО-ТРРр8ТАТ5 со значением 1С50=0,033 мкмоль). Исходя из этих результатов, для соотношения 1АК3/1АК2 значение 1С50 было определено как 28,5-кратное, что показывает, что 3-(4хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо-[1,2-Ъ]пиридазин-6-амин является селективным ингибитором 1АК2, а не 1АК3.
Клеточный анализ Ва/Р3.1АК2У6'17Е Се11ош1с8 Аггау8еап® ИС8
Целевое ингибирование 1АК2 было оценено в клетках Ва/Р3, экспрессирующих 1АК2 У617Р, путем вестерн-блоттинга, как сообщалось Вернигом с соавторами (ХУегшд е1 а1.) (\¥егшд О, е1 а1. ЕГПсасу оГ ТО101348, а ке1есйуе 1АК2 шЫЪйот, ίη 1геа1теп1 оГ а типпе тобе1 оГ ^ΛК2У617Р-^ηάисеά ро1усу111е1ша уега, Сапсег Се11, Арг; 13 (4):311-20). Для оценивания целевого ингибирования 1АК2 в клетках Ва/Р3, экспрессирующих 1АК2У617Р, был проведен анализ производительности среды Сейоткк. Данный анализ сделал возможным открытие эффективного терапевтического агента для лечения нарушений, связанных с мутацией 1АК2У617Р.
Клетки Ва/Р3 (мышиные рго-В клетки), экспрессирующие 1АК2У617Р, культивировали в среде ΚΡΜΙ 1640 с 10% РВ8, 0,07% бикарбонатом натрия, 1 мМ пирувата натрия, 1-крат. антибиотиком/фунгицидом Цпуйтодеп, СатНЪаф СА) и 0,45% глюкозой (81дта, 8ΐ Ьошк, МО). Клетки содержали при 37°С с 5% содержанием СО2. Исследуемое соединение приготавливали в 100% ДМСО при концентрации 10 ммоль. Соединения серийно разбавляли в пропорции 1:3 100% ДМСО в диапазоне концентрация-ответ 10-крат. - 200-крат. (4 мМ - 200 нМ). В отдельном 96-луночном планшете с глубокими лунками добавляли 2,5 мкл 200-крат. раствора соединения к 125 мкл полной среды ΚΡΜΙ 1640 с 10% РВ8 на 4крат. концентрацию соединения в планшете.
Для проведения исследования производили сбор клеток и один дважды промывали средой ΚΡΜΙ 1640 без добавок. Клетки суспендировали в полной среде ΚΡΜΙ с 10% РВ8 до конечной концентрации 4х105 клеток/мл. Далее, 500 мкл клеток (2х105 клеток) переносили в 96-луночные планшеты. Наконец, к клеткам добавляли 2,5 мкл (разбавление 1:200) исходного раствора соединения и инкубировали вместе с клетками в водяной бане при 37°С в течение 60 мин.
После обработки клеток в каждую лунку добавляли 500 мкл 1% раствора формальдегида (свежеприготовленного с использованием фосфатно-солевого буфера (РВ8) и содержавшегося при 37°С).
- 8 019554
Планшеты запечатывали и переворачивали 8-10 раз для перемешивания. Планшеты помещали в 37°С водяную баню на 10 мин. После инкубации планшеты с клетками центрифугировали на 1200 об./мин. в течение 5 мин при комнатной температуре. Надосадочную жидкость отсасывали с помощью аспиратора, получая 100 мкл клеток (2х105 клеток). Клетки перемешивали с использованием вортекса и дважды промывали 800 мкл РВ8. повторяя центрифугирование, и получая в итоге 100 мкл жидкости, содержащей ~2х105 клеток, после последнего промывания. Аликвоту 800 мкл холодного 90% метанола добавляли к клеткам и оставляли при -20°С на ночь. Планшеты центрифугировали и удаляли из них метанол. Клетки промывали буфером ГАС8 (РВ8 с 5% ЕВ8 и 0,02% азида натрия). К клеткам добавляли аликвоту 200 мкл 1-10-кратно разбавленного апй-р8ТАТ5 (ρΥ694) А1еха Е1иот 647® мыши в буфере флуоресцентной сортировки клеток (ЕАС8). Клетки тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 2 ч. Клетки один раз промывали РВ8, в результате чего оставалось 100 мкл клеток. Готовили рабочий раствор 2 мкг/мл Ноесйй (Асгок Отдашск, Μοττίδ Р1ашк, N1) с помощью РВ8. Аликвоту 200 мкл добавляли в каждую лунку и инкубировали клетки при комнатной температуре в темноте в течение 10 мин. Клетки промывали РВ8, после чего добавляли к ним 50 мкл Су1оПх® (ВО Вюкаепсек, 8аи 1оке, СА). Клетки перемещали в 96-луночные черные планшеты для культур тканей и запечатывали. Планшеты центрифугировали. Производили сбор приблизительных данных о средней интенсивности флуоресценции и анализировали их при помощи Се11ош1С8 Аггауксап® УТ1. Сравнивали результаты обработки соединением с результатами для носителя для определения процента ингибирования. Для получения относительных значений 1С50 использовали четырехпараметрический логистический подбор кривой при помощи программного обеспечения АсИуйуВаке 4.0. Для 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина 1С50=0,03 мкМ. Результаты данного анализа демонстрируют, что 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амин эффективно игибирует мишень 1АК2У617Г в клетках Ва/Р3, экспрессирующих ген 1АК2У617Е.
Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно входят в состав фармацевтических композиций, подходящих для введения различными путями. Наиболее предпочтительно, указанные композиции предназначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, ΚΕΜΙΝ6Τ0Ν: ТНЕ 8СIΕNСΕ ΛΝΩ РКАСТ1СЕ ОГ РНΛΚΜАСΥ (А. Сеппаго, е! а1., ебк., 191Ь еб., Маск РиЬйкЫпд Со., 1995).
Соединения согласно настоящему изобретению эффективны в широких пределах дозирования. Например, суточные дозировки обычно составляют от примерно 1 мг до примерно 1000 мг общей суточной дозы, предпочтительно от 500 мг до 1000 мг общей суточной дозы, более предпочтительно от 600 мг до 1000 мг общей суточной дозы. В некоторых случаях более чем достаточными могут быть уровни дозировок ниже нижней границы вышеуказанного диапазона, тогда как в других случаях можно применять еще более высокие дозы. Вышеуказанный диапазон дозировок никоим образом не ограничивает объем настоящего изобретения. Следует понимать, что фактически вводимое количество соединения будет определять лечащий врач с учетом соответствующих обстоятельств, включая состояние, лечение которого проводят, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение или соединения, возраст, массу тела и ответ конкретного пациента, а также степень тяжести симптомов заболевания у пациента.
Claims (10)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. 3 -(4-Хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3 -ил)-8-(морфолинометил)имидазо [1,2Ь]пиридазин-6-амин или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.
- 2. Соединение по п.1, представляющее собой 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Нпиразол-3 -ил)-8-(морфолинометил)имидазо [ 1,2-Ь]пиридазин-6-амин.
- 3. Соединение по п.1, представляющее собой гидрохлорид 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина.
- 4. Способ лечения хронических миелопролиферативных нарушений, выбранных из группы, состоящей из истинной полицитемии, первичного тромбоцитоза и миелосклероза с миелоидной метаплазией, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
- 5. Способ лечения глиобластомы, рака груди, множественной миеломы, рака простаты и лейкемий, таких как атипичная хроническая миелоидная лейкемия, первичная и вторичная острая миелоидная лейкемия, Т-линейная и В-линейная острая лимфобластная лейкемия, миелодиспластического синдрома и миелопролиферативных нарушений у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в указанном лечении, эффективного количества 3-(4-хлор-2-фторбензил)-2-метил-№(5-метил-1Н-пиразол-3ил)-8-(морфолинометил)имидазо[1,2-Ь]пиридазин-6-амина или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
- 6. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по пп.1, 2 или 3, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.- 9 019554
- 7. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 в качестве лекарственного средства.
- 8. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для лечения глиобластомы, рака груди, множественной миеломы, рака простаты и лейкемий, Т-линейной и В-линейной острой лимфобластной лейкемии, миелодиспластического синдрома и миелопролиферативных нарушений.
- 9. Применение по п.8 для лечения хронических миелопролиферативных нарушений.
- 10. Способ лечения патологических состояний, связанных с активностью мутантной 1АК2, у пациента, который в этом нуждается, включающий введение указанному пациенту соединения по п.1, 2 или 3.Евразийская патентная организация, ЕАПВРоссия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US12285408P | 2008-12-16 | 2008-12-16 | |
| PCT/US2009/067056 WO2010074947A1 (en) | 2008-12-16 | 2009-12-08 | Amino pyrazole compound |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201170831A1 EA201170831A1 (ru) | 2011-12-30 |
| EA019554B1 true EA019554B1 (ru) | 2014-04-30 |
Family
ID=41630090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201170831A EA019554B1 (ru) | 2008-12-16 | 2009-12-08 | Аминопиразольное соединение |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20100286139A1 (ru) |
| EP (1) | EP2379557B1 (ru) |
| JP (1) | JP5509217B2 (ru) |
| KR (1) | KR101300458B1 (ru) |
| CN (1) | CN102232075B (ru) |
| AR (1) | AR074240A1 (ru) |
| AU (1) | AU2009330503B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0923048A2 (ru) |
| CA (1) | CA2744714C (ru) |
| CL (1) | CL2011001445A1 (ru) |
| CO (1) | CO6331442A2 (ru) |
| CR (1) | CR20110341A (ru) |
| CY (1) | CY1113637T1 (ru) |
| DK (1) | DK2379557T3 (ru) |
| DO (1) | DOP2011000190A (ru) |
| EA (1) | EA019554B1 (ru) |
| EC (1) | ECSP11011132A (ru) |
| ES (1) | ES2396617T3 (ru) |
| HN (1) | HN2011001697A (ru) |
| HR (1) | HRP20120918T1 (ru) |
| IL (1) | IL213065A0 (ru) |
| JO (1) | JO2833B1 (ru) |
| MA (1) | MA32900B1 (ru) |
| MX (1) | MX2011006441A (ru) |
| MY (1) | MY158691A (ru) |
| NZ (1) | NZ592641A (ru) |
| PA (1) | PA8851101A1 (ru) |
| PE (1) | PE20110549A1 (ru) |
| PL (1) | PL2379557T3 (ru) |
| PT (1) | PT2379557E (ru) |
| SG (1) | SG172202A1 (ru) |
| SI (1) | SI2379557T1 (ru) |
| SV (1) | SV2011003949A (ru) |
| TN (1) | TN2011000292A1 (ru) |
| TW (1) | TWI440640B (ru) |
| UA (1) | UA104743C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010074947A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201103942B (ru) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8105633B2 (en) * | 2006-03-01 | 2012-01-31 | Spintec Engineering Gmbh | Method and apparatus for extraction of arthropod gland |
| GB2435646A (en) * | 2006-03-01 | 2007-09-05 | Spin Tec Engineering Gmbh | Apparatus and method of extraction of an arthropod gland |
| US20110121485A1 (en) * | 2006-10-30 | 2011-05-26 | Spintec Engineering Gmbh | Method and apparatus for the manufacture of a fiber |
| KR20130131461A (ko) * | 2011-03-07 | 2013-12-03 | 폰다지오네 텔레톤 | Tfeb 변종 및 그의 용도 |
| MX340816B (es) * | 2011-06-15 | 2016-07-26 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Compuestos que inhiben el glioblastoma y su uso. |
| CN112755193A (zh) | 2012-06-26 | 2021-05-07 | 德玛医药 | 使用卫康醇或其衍生物治疗抗酪氨酸激酶抑制剂的恶性肿瘤的方法 |
| PL400213A1 (pl) | 2012-08-01 | 2014-02-03 | Celon Pharma Spólka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia | Pochodne imidazo[1,2-b]pirydazyno-6-aminy jako inhibitory kinazy JAK-2 |
| RS62713B1 (sr) | 2014-08-11 | 2022-01-31 | Acerta Pharma Bv | Terapeutske kombinacije btk inhibitora i bcl-2 inhibitora |
| SI3179992T1 (sl) | 2014-08-11 | 2022-09-30 | Acerta Pharma B.V. | Terapevtske kombinacije zaviralca BTK, zaviralca PD-1 in/ali zaviralca PD-L1 |
| WO2016024232A1 (en) | 2014-08-11 | 2016-02-18 | Acerta Pharma B.V. | Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor and/or a cdk 4/6 inhibitor |
| ES2849974T3 (es) * | 2016-11-17 | 2021-08-24 | Bristol Myers Squibb Co | Moduladores de imidazopiridazina de IL-12, IL-23 y/o IFNalfa |
| WO2018167283A1 (en) | 2017-03-17 | 2018-09-20 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the diagnosis and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma associated neural remodeling |
| WO2018189335A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-10-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the diagnosis and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma |
| KR102328682B1 (ko) | 2018-08-27 | 2021-11-18 | 주식회사 대웅제약 | 신규한 헤테로사이클릭아민 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물 |
| WO2020092015A1 (en) | 2018-11-02 | 2020-05-07 | University Of Rochester | Therapeutic mitigation of epithelial infection |
| CN110305140B (zh) | 2019-07-30 | 2020-08-04 | 上海勋和医药科技有限公司 | 二氢吡咯并嘧啶类选择性jak2抑制剂 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007009773A1 (en) * | 2005-07-21 | 2007-01-25 | Novartis Ag | Pyrazolo[1.5-a]pyrimidin-7-yl amine derivatives as protein kinase inhibitors |
| US20070083044A1 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-12 | Schering Corporation | Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors |
| WO2007044426A2 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-19 | Schering Corporation | Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002059111A2 (en) | 2000-12-21 | 2002-08-01 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors |
| JP2003137785A (ja) * | 2001-08-23 | 2003-05-14 | Takeda Chem Ind Ltd | Ｊｎｋ活性化阻害剤 |
| AU2002357379A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-07-15 | Anormed Inc. | Chemokine receptor binding heterocyclic compounds with enhanced efficacy |
| RU2405780C2 (ru) | 2005-02-16 | 2010-12-10 | Астразенека Аб | Химические соединения |
| BRPI0608160A2 (pt) | 2005-02-16 | 2010-11-09 | Astrazeneca Ab | anticorpo isolado, célula hospedeira, método de inibir o crescimento de células psma+, e, uso de um anticorpo anti-psma defucosilado |
| AU2006265840B2 (en) * | 2005-07-01 | 2010-02-11 | Irm Llc | Pyrimidine-substituted benzimidazole derivatives as protein kinase inhibitors |
| CA2630884A1 (en) * | 2005-11-30 | 2007-06-07 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of c-met and uses thereof |
| US7989459B2 (en) * | 2006-02-17 | 2011-08-02 | Pharmacopeia, Llc | Purinones and 1H-imidazopyridinones as PKC-theta inhibitors |
| CN101594909A (zh) | 2006-09-07 | 2009-12-02 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 用于治疗炎性病症、细胞增殖性失调、免疫失调的irak调节剂 |
| BRPI0718266A2 (pt) * | 2006-10-30 | 2014-01-07 | Novartis Ag | Compostos heterocíclicos como agentes anti-inflamatórios. |
| EP2155742A1 (en) * | 2007-04-18 | 2010-02-24 | AstraZeneca AB | 5-aminopyrazol-3-yl-3h-imidazo [4,5-b]pyridine derivatives and their use for the treatment of cancer |
| EP2152708A1 (en) | 2007-05-23 | 2010-02-17 | Pharmacopeia, LLC | Purinones and 1h-imidazopyridinones as pkc-theta inhibitors |
| WO2009062059A2 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Pharmacopeia, Inc. | Isomeric purinones and 1h-imidazopyridinones as pkc-theta inhibitors |
-
2009
- 2009-11-30 PA PA20098851101A patent/PA8851101A1/es unknown
- 2009-12-01 JO JO2009459A patent/JO2833B1/en active
- 2009-12-01 AR ARP090104627A patent/AR074240A1/es unknown
- 2009-12-04 TW TW098141606A patent/TWI440640B/zh not_active IP Right Cessation
- 2009-12-08 EP EP09795842A patent/EP2379557B1/en not_active Not-in-force
- 2009-12-08 ES ES09795842T patent/ES2396617T3/es active Active
- 2009-12-08 HR HRP20120918AT patent/HRP20120918T1/hr unknown
- 2009-12-08 AU AU2009330503A patent/AU2009330503B2/en not_active Ceased
- 2009-12-08 JP JP2011540809A patent/JP5509217B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-08 US US12/742,302 patent/US20100286139A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-08 US US12/632,879 patent/US7897600B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-08 KR KR1020117013705A patent/KR101300458B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-08 PE PE2011001082A patent/PE20110549A1/es not_active Application Discontinuation
- 2009-12-08 SG SG2011044161A patent/SG172202A1/en unknown
- 2009-12-08 CA CA2744714A patent/CA2744714C/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-08 BR BRPI0923048A patent/BRPI0923048A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-12-08 MY MYPI2011002704A patent/MY158691A/en unknown
- 2009-12-08 UA UAA201107565A patent/UA104743C2/ru unknown
- 2009-12-08 EA EA201170831A patent/EA019554B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-12-08 MX MX2011006441A patent/MX2011006441A/es active IP Right Grant
- 2009-12-08 WO PCT/US2009/067056 patent/WO2010074947A1/en not_active Ceased
- 2009-12-08 DK DK09795842.5T patent/DK2379557T3/da active
- 2009-12-08 NZ NZ592641A patent/NZ592641A/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-12-08 SI SI200930448T patent/SI2379557T1/sl unknown
- 2009-12-08 CN CN2009801481167A patent/CN102232075B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-08 PT PT97958425T patent/PT2379557E/pt unknown
- 2009-12-08 PL PL09795842T patent/PL2379557T3/pl unknown
-
2011
- 2011-05-23 IL IL213065A patent/IL213065A0/en unknown
- 2011-05-27 ZA ZA2011/03942A patent/ZA201103942B/en unknown
- 2011-06-09 TN TN2011000292A patent/TN2011000292A1/fr unknown
- 2011-06-14 MA MA33943A patent/MA32900B1/fr unknown
- 2011-06-15 CL CL2011001445A patent/CL2011001445A1/es unknown
- 2011-06-15 DO DO2011000190A patent/DOP2011000190A/es unknown
- 2011-06-15 EC EC2011011132A patent/ECSP11011132A/es unknown
- 2011-06-15 CO CO11074831A patent/CO6331442A2/es active IP Right Grant
- 2011-06-16 HN HN2011001697A patent/HN2011001697A/es unknown
- 2011-06-16 SV SV2011003949A patent/SV2011003949A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-06-17 CR CR20110341A patent/CR20110341A/es not_active Application Discontinuation
-
2012
- 2012-11-27 CY CY20121101146T patent/CY1113637T1/el unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007009773A1 (en) * | 2005-07-21 | 2007-01-25 | Novartis Ag | Pyrazolo[1.5-a]pyrimidin-7-yl amine derivatives as protein kinase inhibitors |
| US20070083044A1 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-12 | Schering Corporation | Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors |
| WO2007044426A2 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-19 | Schering Corporation | Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA019554B1 (ru) | Аминопиразольное соединение | |
| JP7337951B2 (ja) | 癌を治療するための窒素含有芳香族ヘテロ環アミド誘導体 | |
| JP5926727B2 (ja) | 置換イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン | |
| KR102426986B1 (ko) | 삼환형 화합물 및 포스포다이에스터라제 억제제로서 이의 용도 | |
| KR20100016431A (ko) | 약학적 화합물 | |
| US10435403B2 (en) | Positive allosteric modulators of muscarinic M2 receptor | |
| WO2020224626A9 (zh) | 用作激酶抑制剂的化合物及其应用 | |
| US11472803B2 (en) | 7-substituted 1-aryl-naphthyridine-3-carboxylic acid amides and use thereof | |
| US9290503B2 (en) | Tricyclic compound derivatives useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory disorders and immunomodulatory disorders | |
| EP2370446A1 (fr) | DERIVES DE 6-CYCLOAMINO-3-(1H-PYRROLO[2,3-b]PYRIDIN-4-YL)IMIDAZO[1,2-b]-PYRIDAZINE, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE | |
| EA005065B1 (ru) | Энантиомер 1,2-аннелированного хиназолина, ингибирующий фарнезилтрансферазу | |
| EP4434986A1 (en) | 15-pgdh inhibitor and use thereof | |
| TW202221007A (zh) | 巨環化合物 | |
| HK40110628A (en) | 15-pgdh inhibitor and use thereof | |
| HK40119224A (zh) | 包含具有g12d突变型kras抑制活性的双官能化合物的抗癌剂的组合 | |
| CN120118074A (zh) | PI3Kα抑制剂化合物、药物组合物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ BY KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM KZ RU |