EA001099B1 - Инъекционное лекарственое средство "цитофлавин", обладающее цитопротекторным действием - Google Patents

Description

Изобретение относится к медицине, в частности, к комплексному лекарственному инъекционному препарату, обладающему цитопротекторным действием.

Препарат может быть использован для лечения острого инфаркта миокарда, ишемии головного мозга, гипоксического инсульта, коронарной недостаточности, ишемической болезни сердца, заболеваний печени и почек.

Известно большое количество различных фармакологических активностей янтарной кислоты, её солей - сукцинатов и производных.

Среди них антигипоксическое средство на основе сукцината янтарной кислоты для лечения внутриутробной патологии плода, связанной с гипоксией и инфекцией (патент России 2056842, МПК А 61К 31/19, 30.06.92); гепатопротекторное средство на основе производных янтарной кислоты (патент Японии 09/188.664, МПК С 07С 323/51, 22.07.97); лекарственное средство для лечения ишемии мозга на основе сукцината янтарной кислоты (патент России 2108095, МПК А 61К 31/19, 22.11.94).

Однако в списке разрешенных к медицинскому применению и внедрённых в медицинскую практику лекарственных средств, содержащих янтарную кислоту в качестве основного активного компонента, значится единственная лекарственная форма - таблетки «Лимонтар», (0,2 г свободной янтарной кислоты и 0,05 г лимонной кислоты), применяемые у взрослых в качестве диагностического средства для исследования секреторной способности желудка. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т.2 - Изд. 13-е, новое - Харьков, «Торсинг», 1997, с.494).

Широкий спектр фармакологической активности янтарной кислоты обусловлен тем, что она является естественным метаболитом организма, участвуя в окислительно-восстановительном цикле дикарбоновых кислот (цикл Кребса) и обеспечивая тем самым нормальную жизнедеятельность клетки.

Известны также комплексные препараты на основе природных пуриновых нуклеозидов, например, инозин (рибоксин), гуанозин, аденозин, которые используются в качестве лекарственных средств узконаправленного действия или кардиопротекторного (патент России 1769428, МПК А 61К 31/70, 09.04.90); (патент России 2035908, МПК А 61К 31/52, 24.09.91) или гепатопротекторного (патент Японии 61,277619, МПК А 61К 3 1/505, 04.01.85).

Наиболее близким к заявляемому является комплексный инъекционный лекарственный препарат узконаправленного гепатопротекторного действия, содержащий в своём составе смесь метоболитов и витаминов (патент Великобритании 1178984, МПК А 61К 25/00, 23.06.66), следующего состава:

Кальциевая соль 1-Ь-5-формилтетрагидрофолиевой кислоты 0,9 мг

Гидроксикобаламина гидрохлорид 0,5 мг

Цианкобаламин 0,5 мг

Рибоксин 60 мг

Аденин 20 мг

Никотинамид 10 мг

Рибофлавин-5-мононуклеотид натрия 2,73 мг

Остальное дистиллированная стериль- До 3 г ная вода для инъекций

Однако при тяжёлых патологиях возникает потребность в комплексных лекарственных препаратах, защищающих поражённую клетку и одновременно нормализующих её жизнедеятельность.

При различных патологических процессах в организме нормальная жизнедеятельность клеток нарушается, что выражается в ухудшении дыхательной (окислительно-восстановительной) функции клеток, уменьшении или прекращении синтеза белков и ферментов клеткой, другими нарушениями. В конечном итоге эти нарушения приводят к повреждению клеточных мембран, снижению уровня утилизации метаболитов, гибели клетки.

Поэтому создание комплексных лекарственных препаратов, защищающих клетку от разрушения и гибели и способствующих её нормальной жизнедеятельности, так называемых цитопротекторов, является актуальной и важной задачей.

Такие препараты должны содержать как вещества, способствующие усилению метаболических процессов, так и компоненты, способствующие быстрой и эффективной утилизации метаболитов в клетках повреждённых органов и тканей.

В связи с этим заявитель разработал комплексный препарат, обладающий цитопротекторным действием, в состав которого включены как компоненты метаболитной природы (янтарная кислота и рибоксин), так и коферметные компоненты - витамины (никотинамид и рибофлавин-5-мононуклеотид натрия), при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Янтарная кислота 9,5-10,5

Рибоксин (инозин) 1,9-2,1

Никотинамид 0,95-1,05

Рибофлавин-5-мононуклеотид натрия 0,19-0,21

Натрия гидроокись 3,3-3,7

Ν-Метилглюкамин 15,7-17,3

Вода для инъекций До 1 00

Пример конкретного получения «Цитофлавина» для инъекций

В стеклянный аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций, 10,0 кг янтарной кислоты, 3,4 кг едкого натрия, 0,6 кг рибофлавина-5- мононуклеотида натрия, 16,5 кг ^метилглюкамина, 1,0 кг никотинамида, 2,0 кг рибоксина. Полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов и далее добавляют воду для инъекций до получения объёма 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа «Палл», разливают в стерильные ампулы объёмом 5 мл и запаивают. Получают 18000 ампул объёмом 5 мл. Выход 90%.

Каждая ампула содержит - янтарной кислоты 500 мг (10%), рибоксина 100 мг (2%), никотинамида 50 мг (1%), рибофлавина-5мононуклеотида натрия 10 мг (0,2%), натрия гидроокиси 170 мг (3,4%), Ν-метилглюкамина 825 мг (16,5%), воды для инъекций до 100%.

Использование данного лекарственного средства позволило получить высокий цитопротекторный эффект на различных моделях повреждения клеток при патологии сердца, печени и почек.

Изучение цитопротекторной активности препарата

Изучение заявленного лекарственного средства проводили в сравнении с прототипом.

Опыт 1. Изучение кардиопротекторного действия на модели антиаритмической активности.

Учитывая, что аритмии являются одним из первых показателей развития патологии клеток миокарда при различных сердечно-сосудистых заболеваниях, сопровождающихся повреждением клеток миокарда, таких как острый инфаркт миокарда и ишемическая болезнь сердца, для оценки цитопротекторного действия «Цитофлавина» на клетки миокарда представлялось необходимым изучить и оценить прежде всего антиаритмическую активность предлагаемого лекарственного средства.

Опыт проводили на линейных белых мышах СВА, разбитых на пять групп по 25 животных.

Экспериментальную аритмию сердца моделировали общепринятым методом - введением алкалоида аконитина подкожно в разовой дозе 200 мкг/кг массы животного и пропранола подкожно в разовой дозе 40 мг/кг.

Введение алкалоида аконитина в организм вызывает стойкое повышение натриевой проницаемости мембран кардиомиоцитов (Орлов Б. Н. Ядовитые животные и растения СССР. - М., Высшая школа, 1990, с. 192 - 194).

Введение пропранола вызывает брадикардию и остановку сердца за счет блокады βадренорецепторов в миокарде и изменения внутриклеточного соотношения ионов калия и натрия. (Шотктд Огоир оп АтйЬш1а5-С1гси1айоп. 1991, ν.84, № 4. р. 1831 - 1851).

«Цитофлавин», прототип и контроль 0,9% изотонический раствор хлорида натрия вводили внутривенно в хвостовую вену в разовой дозе 1,2 мл/кг массы животного, однократно за пять минут до введения аконитина или пропранола. Запись электрокардиограммы у мышей проводилась в начале опыта, а далее через 10, 30 и 60 мин после введения препаратов.

Для определения времени возникновения и продолжительности экстрасистолии во время опыта проводился мониторинг электрокардиограммы в течение 60 мин.

Полученные экспериментальные данные обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента при Р < 0,05.

Данные по испытанию антиаритмической активности препаратов представлены в таблице 1.

При моделировании аконитиновой аритмии введение аконитина вызывало политонную экстрасистолию у 1 00% животных (см. табл. 1 ).

При введении «Цитофлавина» в дозе 1,2 мл/кг за 5 мин до введения аконитина экстрасистолия развивалась лишь у 25% мышей, при этом латентный период экстрасистолии уменьшился на 35%, а само число экстрасистол уменьшилось в 2,4 раза.

Таким образом «Цитофлавин» проявил выраженное цитопротекторное антиаритмическое действие на клетки миокарда на модели аконитиновой аритмии. Учитывая механизм действия алкалоида аконитина, механизм защитного действия «Цитофлавина» обусловлен стабилизацией мембран клеток кардиомиоцитов и понижением их проницаемости для ионов натрия.

Напротив, при введении раствора прототипа за 5 мин до введения аконитина развивалась совершенно противоположная картина: экстрасистолия наблюдалась у 75% мышей, а латентный период, продолжительность и общее число экстрасистол вообще не изменилось по сравнению с аконитином.

Таким образом, прототип проявлял слабо выраженную защитную антиаритмическую активность на клетки миокарда на модели аконитиновой аритмии и не обладает на данной модели стабилизирующим действием на клетки кардиомиоцитов.

При аритмии, вызванной введением пропранола политонная экстрасистолия также вызывалась у 1 00% мышей.

При предварительном введении «Цитофлавина» в дозе 1,2 мл/кг в хвостовую вену за пять минут до введения пропранола экстрасистолия развивалась у 40% животных, причём латентный период экстрасистолии уменьшился на 29%, а общее число экстрасистол уменьшилось в 3,2 раза. Полученные данные говорят о высоком цитопротективном эффекте «Цитофлавина» на клетки миокарда на модели аритмии, вызванной введением пропранола. Механизм защитного действия обусловлен нормализацией биохимии натрий/калиевого обмена через мембрану клетки.

При введении раствора прототипа политонная экстасистолия выявлялась у 50% мышей, латентный период экстрасистолии практически не изменился, а среднее число экстрасистол уменьшилось только в 1,7 раза (табл. 1.). Это свидетельствует об умеренном защитном действии прототипа на клетки миокарда.

Таким образом на модели пропраноловой аритмии «Цитофлавин» также проявляет выраженное цитопротективное антиаритмическое действие, а раствор - прототип имеет только слабый защитный антиаритмический эффект.

Такое различие объясняется созданием оптимальной комбинации естественных метаболитов - янтарной кислоты (энергетический компонент), рибоксина (субстрат для синтеза АТФ) и коферментов-витаминов для получения цитопротекторного эффекта. Вследствие ускорения усвоения клетками организма метаболитов, происходит ускорение биохимических процессов внутри клетки и оказывается протекторное действие на клетки миокарда-кардиомиоциты.

Опыт 2. Изучение кардиопротекторного действия на модели ишемии миокарда.

Ишемия (недостаток кислорода) в клетках миокарда приводит к нарушению биохимических процессов внутри кардиомиоцитов, связанных с потреблением энергии с последующим некрозом (разрушением) клеточной мембраны.

Исследование противоишемической активности «Цитофлавина» по сравнению с раствором-прототипом проводили на белых линейных крысах породы Вистар. Все животные были разделены на три группы по 25 голов.

Для исследования использовали общепринятую модель ишемии, вызванной окклюзией (хирургическим уменьшением диаметра сосуда - перевязкой) левой коронарной артерии (\νίη51ο\ν Е. МеШобк ίοτ 1Нс беЮсбоп апб аккекктеп! οί апОаггНубишс асйубу. / РЬаттасо1о§у апб 1Негару. 1984, V. 84, р. 401-433).

Данная модель наиболее хорошо иллюстрирует развитие острого инфаркта миокарда у человека.

Крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением этаминала натрия в дозе 50 мг/кг, фиксировали и осуществляли регистрацию электрокардиограммы.

Крыс с нарушениями ритма из опыта выводили. Всего было отобрано 36 крыс, разбитых на три группы по 1 2 животных.

У оставшихся животных катетеризировали бедренную вену и бедренную артерию. Далее при искусственной вентиляции легких крысам вскрывали грудную клетку и перевязывали нисходящую ветвь левой коронарной артерии у нижнего края ушка левого предсердия. У всех животных регистрировали среднее артериальное давление в бедренной артерии с помощью ртутного манометра и осуществляли 30-минутное мониторирование электрокардиограммы для выявления ранних желудочковых аритмий, развивающихся на фоне ишемии миокарда.

В первой группе животных вводили «Цитофлавин» в хвостовую вену в дозе 1,2 мл/кг чрез пять минут после перевязки.

Во второй группе вводили раствор прототипа в дозе 1,2 мл/кг.

В третьей контрольной группе вводили в хвостовую вену 0,9% физиологический раствор хлорида натрия в дозе 1,2 мл/кг.

В течение всего опыта продолжали искусственную вентиляцию легких с целью профилактики остановки дыхания, вызванной постоперационным пневмотораксом. По данным электрокардиограммы оценивали частоту сердечных сокращений, среднее артериальное давление, частоту возникновения и суммарную длительность периодов фибрилляции желудочков и желудочковой тахикардии.

Эффективность препаратов по общезащитному цитопротективному действию на клетки организма оценивали по летальности в каждой группе.

В течение всего опыта у всех животных регистрировали артериальное давление в бедренной вене и снимали электрокардиограмму через 1, 5, 15, 30, 45 и 60 мин от начала введения растворов в хвостовую вену.

Статистическую значимость оценивали с помощью критерия Стьюдента. Обобщенные данные по эксперименту представлены в табл. 2.

Результаты исследования противоишемической активности «Цитофлавина» показали, что при ишемии сердца препарат достоверно в 2,62 раза снижает количество желудочковых экстрасистолий по сравнению с контролем и в 1 ,6 раза по сравнению с прототипом.

Длительность тахикардии уменьшилась в 3 раза по сравнению с контролем и в 2,1 раза по сравнению с прототипом, хотя частота возникновения тахикардии не уменьшилась во всех случаях. «Цитофлавин» также достоверно уменьшал частоту фибрилляции желудочков в 2,2 раза по сравнению с контролем и в 1,5 раза по сравнению с прототипом, хотя и практически не влиял на длительность времени фибрилляции. Полученные данные свидетельствуют о высокой цитопротективной активности «Цитофлавина» на клетки миокарда в условиях ишемии.

Данные по выживаемости животных в условиях эксперимента также свидетельствуют о высокой цитопротективной активности «Цитофлавина», при введении которого после операции перевязки выжило 1 00 % (1 2 крыс), при введении прототипа - 50 % (6 крыс), а при введении контрольного физиологического раствора - всего 25 % (3 крысы) (см. табл. 3).

Мониторинг среднего артериального давления и частоты сердечных сокращений (см. табл. 4) показал, что «Цитофлавин» быстрее, чем прототип восстанавливал среднее артериальное давление в раннем периоде после окклюзии, практически не влияя на частоту сердечных сокращений. Такой эффект говорит о более выраженном компенсаторном действии «Цитофлавина» по сравнению с контролем и прототипом в восстановлении биохимических процессов, протекающих в клетках при ишемии кардиомиоцитов, а следовательно, об общем цитопротекторном действии на миокард.

Опыт 3. Исследование гепатопротекторной и ренопротекторной активности «Цитофлавина» при отравлении этиленгликолем.

Для моделирования поражений клеток печени и почек использовали общеизвестную модель токсического гепатита и нефрозо-нефрита отравление 1,2-этиленгликолем. (Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований. Под ред.

H. В. Лазарева. М.: «Медгиз», 1964, 392 с.).

В опыте было сформировано 6 экспериментальных групп животных по 1 2 крыссамцов: А-интактные животные, которым вводился физиологический раствор; Б - интактные животные, которым вводился «Цитофлавин»; В - интактные животные, которым вводился прототип; Г-животные с интоксикацией этиленгликолем без лечения; Д - животные с интоксикацией этиленгликолем и лечением «Цитофлавином»; Е- животные с интоксикацией этиленгликолем и лечением прототипом.

Этиленгликоль вводили однократно внутрижелудочно через атравматический зонд в дозе

I, 5 г/кг. «Цитофлавин», прототип и физиологический раствор в контроле вводили в хвостовую вену крыс один раз в сутки в течение пяти дней в дозе 1,2 мл/кг. Биохимические исследования проводили по стандартным методикам (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1978, 95 с.. Клиническая оценка лабораторных тестов / Под ред. Н.У.Тица, М.: Медицина, 1986, 480 с.). Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистическими методами по СтьюдентуФишеру.

Клиническая картина в группе крыс, получавших этиленгликоль без лечения характеризовалась гиподинамией, заторможенностью реакций, взъерошенностью шерсти и неопрятностью животных. На 2-й день у них развилась макрогематурия, а с 4-го дня олигурия. Биохимический и гистологический анализ печени и почек подтвердил развитие поражения почек и печени - нефрозо-нефрита и токсического гепатита. Интоксикация этиленгликолем нарушала все функции печени: белково-синтезирующую и пигментную, что сопровождалось биохимическими признаками цитолиза.

У всех животных без исключения развивались выраженные симптомы поражения почек: в анализе мочи определялись эритроциты, белок, цилиндры, кристаллы щавелево-кислого кальция, клетки почечного эпителия. Страдали все функции почек - выделительная, экстреторная и секреторная, а в крови нарастали продукты азотистого обмена, показатели цитолиза.

При морфологическом обследовании в почках обнаруживались дегенеративные изменения и мелкие кровоизлияния в паренхиму органов, наблюдалась жировая дистрофия нейроэпителия, в цитоплазме клеток извитых канальцев были видны мелкие капли жира.

Об гепатопротекторной эффективности «Цитофлавина» в сравнении с прототипом судили по клинической картине, содержанию общего билирубина, аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы, общего белка, липидов сыворотки крови, гликогена, глутатиона в печени и нагрузочной пробе - гексеналовому тесту.

Экспериментальные данные по гепатопротекторному действию «Цитофлавина» представлены в таблице 5.

Исследования показали, что введение «Цитофлавина» и прототипа здоровым животным (группы А, Б, В) не вызывает нарушений функций печени и поведенческих реакций крыс.

Введение этиленгликоля (группа Г) сопровождалось серьезным нарушением всех функций печени.

Снижение общего белка и липидов и запаса гликогена в печени свидетельствует о нарушении белковосинтезирующей функции печени.

Нарастание уровня аминотрансфераз, щелочной фосфатазы, билирубина и тимоловой пробы говорит о значительном разрушении клеток печени - гепатоцитов и нарушении пигментной функции.

Увеличение времени гексеналового сна, снижение уровня восстановленного глутатиона и креатинфосфата показывает уменьшение детоксицирующей функции печени.

Использование «Цитофлавина» для лечения поражения печени, вызванного этиленгликолем (группа Д) показало достоверную нормализацию всех функций печени: белковосинтезирующей (общий белок, липиды, гликоген) до 8091% от нормы, пигментной (билирубин, аминотрансферазы, щелочная фосфатаза, тимоловая проба) до 62-97% от нормы, детоксицирующей (гексеналовый сон, глутатион, креатинфосфат) на уровень 82-97% от нормы (группа А).

Лечение прототипом (группа Е) также имело положительный эффект после отравления этиленгликолем, однако прототип восстанавливал белковосинтезирующую функцию печени на 60-90%, пигментную на 68-71%, а детоксицирующую всего на 50-70%.

Таким образом, «Цитофлавин» обладает выраженным цитопротективным действием на клетки печени - гепатоциты при отравлении этиленгликолем (смотри таблицу 5).

Эффективность «Цитофлавина» в качестве ренопротектора (защиты клеток почек) оценивали по комплексу биохимических показателей в сравнении с нормой, контрольной группой и прототипом: относительной массе почек, суточному диурезу, белку мочи, хлоридам мочи, сахару мочи,плотности мочи, мочевине, креатинину, лактатдегидрогеназе.

Экспериментальные данные по ренопротекторному действию «Цитофлавина» представлены в таблице 6.

Экспериментальные данные показали, что введение как «Цитофлавина», так и прототипа здоровым животным (группы А, Б, В) не оказывало негативного влияния на функциональную активность почек.

В условиях патологии - отравления этиленгликолем (группа Г) у крыс увеличивалась масса почек, что свидетельствует об отеке. Достоверное увеличение в моче содержания белка, хлоридов, сахара, мочевины и увеличение плотности мочи свидетельствует о нарушении экстреторной и секреторной функции почек. Резкое уменьшение суточного объема мочи на фоне повышения уровня креатинина и фермента лактатдегидрогеназы говорит о разрушении клеток почечных канальцев, развитии нефрозо-нефрита и вследствие этого анурии.

Использование «Цитофлавина» (группа Д) для лечения поражения почек, вызванного этиленгликолем, показало восстановление функциональной активности почек по всем показателям: отек резко уменьшился (масса почек стала 94% от нормы), экскреторная функция (диурез, плотность мочи, креатинин) восстановилась на 62-100% секреторная функция (содержание в моче белка, сахара, хлоридов, мочевины, уровень лактатдегидрогеназы) улучшилась до 6282% от нормы.

Применения прототипа (группа Е) для лечения также имело положительный лечебный эффект при нефрозо-нефрите, но по различным показателям действие прототипа было менее эффективно чем у «Цитофлавина» : масса почек была 73% от нормы, экскреторная функция восстановилась 51-93% а секреторная функция на 45-60% от нормы (смотри табл. 6).

Анализ гистологических данных у животных групп Д и Е также показал резкое уменьшение дистрофических изменений в ткани почек и печени, более ярко выраженное в группе Д при лечении «Цитофлавином».

Таким образом, Цитофлавин оказывает выраженный цитопротекторный эффект на клетки нефроэпителия и гепатоциты, превосходящий действие прототипа при экспериментальном гепатите и нефрозо-нефрите, вызванном применением этиленгликоля.

Таким образом, изучение биологической активности препарата показало, что он обладает цитопротекторным действием, то есть оказывает защитный эффект на клетки сердца, печени и почек, нормализуя работу этих органов при различных патологиях.

Для создания стабильной лекарственной формы экспериментально подобраны необходимые количества Ν-метилглюкамина и натрия гидроокиси. Эти компоненты не являются активными компонентами лекарственной формы, но обеспечивают необходимые физикохимические параметры.

Опыт 4. Изучение влияния содержания Νметилглюкамина и гидроокиси натрия на стабильность «Цитофлавина».

Учитывая сложный многокомпонентный состав «Цитофлавина» и наличие в нём легко гидролизующихся в водных растворах по Νгликозидной связи в кислой и щелочной среде Ν-нуклеозида - Рибоксина (инозина) и Рибофлавина мононуклеотида (Справочник биохимика: перевод с англ. / Досон Р., Эллиот Д., Джонс К.М.: МИР, 1991, с. 71-88, 115.), было проведено исследование влияния содержания стабилизатора и комплексообразователя Ν-метилглюкамина на рН раствора и стабильность (отсутствие распада компонентов) при двухлетнем хранении при комнатной температуре водного раствора.

«Цитофлавин» - препарат, предназначенный для внутривенного введения. Вводимые в кровяное русло растворы должны физиологически сочетаться с физико-химическими параметрами крови, в частности, с рН. Введение кислых и/или щелочных растворов в кровяное русло недопустимо, так как это может привести к образованию тромбов, повреждению стенок вен, выпадению в осадок лекарственных веществ и закупорке крупных и мелких кровеносных сосудов (И.А. Муравьёв. -Технология лекарств, Т.2, Москва, «Медицина», 1980, с. 622-689, Государственная фармакология СССР, М., Медицина, 1990 - с. 140).

Нами было исследовано влияние количества натрия гидроокиси на величину рН раствора препарата и свойства лекарственной формы (таблица 8).

Проведённые исследования показали, что оптимальным для данной лекарственной формы является содержание натрия гидроокиси в количестве 3,3 - 3,7%.

Экспериментальные данные опыта представлены в таблице 7.

Проведенные исследования показали, что для создания стабильного лекарственного средства оптимальным является содержание Νметилглюкамина в «Цитофлавине» от 15,7 до 17,3 % - варианты Г, Д (табл.7) и содержание гидроокиси натрия от 3,3 - 3,7% - варианты Г, Д (табл.8).

Опыт 5. Определение острой токсичности «Цитофлавина».

Определение острой токсичности «Цитофлавина» проводили на линейных белых мышахсамцах СВА в группах по 10 животных.

Препарат вводили в хвостовую вену в возрастающих дозах по Вилкоксону-Литчфилду и определяли показатель ЛД₅₀ - дозу препарата, вызывающую гибель 50 % животных.

Результаты исследования представлены в таблице 9.

Результаты опыта показали, что препарат На слово «Цитофлавин» подана заявка № «Цитофлавин» относится к малотоксичным со- 98708522 на регистрацию товарного знака в единениям: ЛД₅₀ составляет 1146+124 мг/кг. Российской Федерации, дата подачи 19.05.98г.

Таблица 1. Влияние раствора «Цитофлавин» и прототипа на аконитиновую и пропраноловую аритмию у мышей

Препарат, используемый в опыте	Число мышей с экстраситолией, %	Латентный период до экстрасистолии, мин	Продолжительность экстрасистолии, мин	Число экстрасистолии
Аконитин	100,0	32 ± 2,8*	19,6 ±1,3*	306 ±14*
Аконитин ± «Цитофлавин»	25,0	21,3 ±1,7*	11,4 ±1,5*	127 ±11*
Аконитин + Прототип	75,0	29,6 ± 2,2*	19,2 ±1,1*	312 ±15*
Пропранол	100,0	18,6 ±1,4*	10,4 ±1,1*	359 ±23*
Пропранол + «Цитофлавин»	40,0	13,2 ±1,2*	6,2 ±1,0*	112 ± 9*
Пропранол + Прототип	50,0	16,4 ±1,2*	10,5 ±1,0*	208 ± 20*

Примечание: * - достоверность различий при Р < 0,05

Таблица 2. Противоишемический эффект «Цитофлавина»

Раствор* препаратов	Число желудочковых экстрасистол	Тахикардия	Фибрилляция желудочков
Частота, %	Длительность, сек*	Частота возникновения нарушений, %	Длительность, сек*
«Цитофлавин»	137 ±12*	100	42 ±3*	40	28 ±5
Прототип	221 ±15*	100	90 ±7*	60	27 ±3
Контроль	359 ± 24*	100	127 ±23*	86	28±4

Примечание: * - достоверность различий при Р < 0,05

Таблица 3. Влияние «Цитофлавина» на выживаемость животных в условиях возникновения ранних постишемических аритмий

Препарат	Количество прооперированных крыс	Выживаемость после 60 минут ишемии миокарда
Количество	%
«Цитофлавин»	12	12	100
Прототип	12	6	50
Контроль	12	3	25

Таблица 4. Влияние «Цитофлавина» на среднее артериальное давление (САД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) в ранних в условиях возникновения ранних постишемических аритмий

Показатель	Препарат	В]	эемя ишемии миокарда, мин
0	5	15	30	45	60
САДв% к исходному	«Цитофлавин»	100	57 ±12	67 ±2*	72 ±4*	73 ±1*	73 ±4*
Прототип	100	45 ±8	59 ±5*	65 ±7*	67 ±6*	73 ±7*
Контроль	100	31 ± 5	44 ±5*	53 ±9	68 ±12	73 ±6*
ЧСС в % к исходному	«Цитофлавин»	100	94 ±12	93 ±6*	95 ±8*	95 ±8*	96 ±8*
Прототип	100	92 ±16	90 ±6*	86 ±5*	84 ±6*	82 ±5*
Контроль	100	85 ±7	83 ±4*	82 ±5*	80 ±6*	75 ±8*

Примечание: * - достоверность различий при Р < 0,05

Таблица 5 Гепатопротекторный эффект «Цитофлавина» в сравнении с прототипом

Показатели	Экспериментальные группы
А (физ.раствор)	Б (цитофлвин)	В (прототип)	Г (без лечения)	Д (цитофлавин)	Е (прототип)
Общий белок, г/л	64±2	65 ±5	64 ±6	40 ±4*	58 ±4*	46 ±5*
Общие липиды, г/л	3,7 ± 0,3	3,7 ±0,3	3,5 ±0,1	3,0 ± 0,3*	3,4 ±0,1*	3,4 ±0,1*
АСТ, мкат/л	0,60 ± 0,05	0,60 ±0,06	0,60 ±0,06	0,99 ± 0,12*	0,73 ±0,06*	0,88 ± 0,12*
ЩФ, мкат/л	0,69 ±0,11	0,69 ±0,12	0,69 ±011	2,65 ±0,24*	0,73 ± 0,04*	0,96 ±0,14*
КФ, мкат/л	0,74 ±0,12	0,75 ±0,11	0,73 ±0,12	1,99 ±0,20*	0,72 ± 0,04*	0,96 ±0,11*
Тимоловая проба, ед.	1,46 ± 0,04	1,48 ±0,03	1,43 ±0,12	5,77 ±0,26*	1,56 ±0,12*	2,88 ±0,13*
АЛТ мккат/л	0,20 ± 0,03	0,20 ±0,02	0,25 ± 0,04	1,68 ±0,11*	0,32 ± 0,06*	0,52 ± 0,08*
Глутатион печени, мг%	160 ±5	155 ±5	170 ±12	70 ±10*	130±10*	100 ±10*
Гликоген печени, мг%	2500 ±100	2400 ± 90	2460 ±110	850 ± 80*	2000 ±150*	1800 ±200
Гексеналовый сон,мин	25,0 ±1,5	26,0 ±1,8	24,0 ± 1,6	46,5 ± 2,5*	27,0 ±1,5*	35,2 ±1,0*
Общий билирубин,ммоль/л	3,0 ± 0,3	3,0 ±0,1	3,2 ±0,2	6,8 ±0,4*	3,2 ± 0,2*	4,2 ±0,1
	интактные животные	опытные животные

Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05

АСТ - аспартатаминотрасфераза ЩФ - щелочная фосфатаза КФ - креатин фосфат АЛТ - аламиннаминотрансфераза

Таблица 6. Ренопротекторный эффект «Цитофлавина» в сравнении с прототипом, М±м.

Показатели	Экспериментальные группы
А (физ.раствор)	Б (цитофлавин)	В (прототип)	Г (на лечение)	Д (цитофлавин)	Е (прототип)
Масса тела крыс, г	184±6	183±7	188±11	154±11*	181±11	160±11
Относительная масса почек, г	7,9±0,9	7,8±1,2	7,7±1,0	11,2±1,5*	8,4±0,7	10,8±1,1
Суточный диурез, мл	3,7±0,2	3,5±0,3	3,5±0,4	1,9±0,3*	2,8±0,4*	1,9±0,5
Белок мочи, мг/мл	4,4±0,5	4,5±0,4	4,5±0,4	12,4±1,3*	6,0±0,6*	8,7±0,8*
Хлориды мочи, мг/мл	4,0±0,3	3,8±0,4	4,0±0,3	1,2±0,3*	3,3±0,3*	2,5±0,4*
Сахар мочи, ммоль/л	1,5±0,5	1,4±0,3	1,6±0,1	4,2±0,3*	2,4±0,4	3,0±0,5
Мочевина, моль/л	4,12±0,34	4,22±0,28	4,18±0,32	12,35±0,77*	5,17±0,11*	8,77±0,52*
Плотность мочи,	1,02±0,006	1,02±0,005	1,02±0,004	0,91±0,006*	1,02±0,003*	1,00±0,003*
Креатинин, ммоль/л	0,075±0,012	0,0075±0,012	0,073±0,011	0,065±0,08*	0,047±0,04*	0,35±0,09*
Лактатдегидрогеза, ммоль/ч/л	4,90±0,26	4,77±0,33	4,87±0,31	8,08±0,76*	5,85±0,55*	7,93±0,62*
	интактные животные	опытные животные

Примечание: * - достоверные отличия от интактных животных при Р<0,05

Таблица 7. Влияние содержания Ν-метилглюкамина на рН и стабильность «Цитофлавина»

Вариант	Содержание Ν-метилглюкамина, %	Характеристика стабильности лекарственной формы	Примечание
А	0	При хранении выпадает осадок - происходит кислый гидролиз	Для использования не пригоден
Б	5,0	При хранении выпадает осадок -происходит кислый гидролиз	Для использования не пригоден
В	10,0	Раствор стабилен при хранении, но имеет кислое значение рН	Непригоден для внутривенного введения
Г	15,7	Раствор стабилен при хранении	Пригоден для использования
д	17,3	Раствор стабилен при хранении	Пригоден для использования
Е	20,0	Раствор стабилен при хранении, но имеет щелочное значение рН	Не пригоден для внутривенного введения
Ж	25,0	Раствор при хранении чернеет происходит щелочной гидролиз	Для использования не пригоден

Таблица 8. Влияние содержания натрия гидроокиси на рН раствора «Цитофлавина»

Вариант	Количество натрия гидроокиси, %	Значение рН раствора	Характеристика полученного раствора	Примечание
А	0	4,01	Неполное растворение янтарной кислоты	Лекарственная форма не пригодна для использования
Б	1	4,88	Неполное растворение янтарной кислоты	Лекарственная форма не пригодна для использования
В	2	5,7	Кислое значение рН	Раствор не пригоден для внутревенного введения
Г	3,3	6,4	Физиологически приемлемое значение	Раствор пригоден для внутревенного введения
Д	3,7	7,2	Физиологически приемлемое значение	Раствор пригоден для внутревенного введения
Е	5	8,3	Щелочное значение рН	Раствор не пригоден для внутревенного введения

Таблица 9. Острая токсичность «Цитофлавина»

Доза «Цитофлавина», мг/кг	794	1000	1260	1580	2000
Выжило мышей	10	6	4	0	0
Пало мышей	0	4	6	10	10

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (1)

1. Инъекционное лекарственное средство, обладающее цитопротекторным действием, содержащее активную композицию естественных метаболитов и коферментов в растворителе, отличающееся, тем что в качестве естественных метаболитов содержит янтарную кислоту и рибоксин (инозин), в качестве коферментов - никотинамид и рибофлавин-5-мононуклеотид натрия, в качестве растворителя воду для инъекций, и также дополнительно содержит натрия гидроокись и Ν-метилглюкамин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

   Янтарная кислота 9,5 -10,5 Рибоксин (инозин) 1,9-2,1 Никотинамид 0,95-1,05 Рибофлавин-5- мононуклеотид натрия 0,19-0,21 Натрия гидроокись 3,3-3,7 Ν-Метилглюкамин 15,7-17,3 Вода для инъекций До 100

   Евразийская патентная организация, ЕАПВ