DK170822B1 - 23-Oxo- og -iminoderivater af LL-F28249-forbindel ser, deres anvendelse ved fremgangsmåder til bekæmpelse af skadelige insekter og plantenematoder samt midler indeholdende dem til bekæmpelse af insekter og af endo- og/eller ectoparasitter hos varmblodede dyr - Google Patents

Description

DK 170822 B1

Opfindelsen angår hidtil ukendte 23-oxo- og 23-imino-derivater af forbindelser, der samlet betegnes som LL-F28249. De tilgrundliggende LL-F28249-antibiotika fremstilles fortrinsvis ved fermentering af mikroorganismen Streptomyces 5 cyaneogriseus, subspecies noncyanogenus, deponeret i NRRL under deponeringsnummer 15773.

Opfindelsen angår desuden de her omhandlede forbindelsers anvendelse ved fremgangsmåder til bekæmpelse af skadelige insekter og plantenematoder samt midler indehol-10 dende dem til bekæmpelse af insekter og af endo- og/eller ectoparasitter hos varmblodede dyr.

LL-F28249-komponenterne α-λ er komplekse makrolider med en 23-hydroxy-substituent og mindst én, fortrinsvis to, andre hydroxygrupper. Den selektive oxidation af denne 23-15 -hydroxygruppe til en 23-oxogruppe og den påfølgende deri-vatisering af oxogruppen til fremstilling af 23-iminoderi-vater giver de forbindelser, som er genstand for den foreliggende opfindelse. Disse 23-oxo- og 23-iminoderivater af LL-F28249α-λ-forbindelserne er nyttige til forebyggelse, 20 behandling eller bekæmpelse af helminth-, ectoparasit-, insekt-, mide- og nematode-infektioner og -angreb i varmblodede dyr og landbrugsafgrøder.

De hidtil ukendte 23-oxo- og 23-iminoderivater ifølge opfindelsen er afledt af forbindelser, som betegnes LL-25 F28249a-X, og som har den almene formel

9H

9*3 SV A

' 1β 9 A”/ V4 <*v T X ’ % 0 A*

M

° K/\ ch3 !r2 2 DK 170822 B1

Komponent __ R2_ R3_ R^_ LL-F282490! CH(CH3)2 H CH3 CH3 LL-F28249E CH3 H CH3 CH3 LL-F28249ύ CH3 CH3 CH3 CH3 5 LL-F28249e CH(CH3)2 Η H CH3 LL-F28249C CH2CH3 H CH3 CH3 LL-F28249* CH(CH3)2 H CH3 CH2CH3 LL-F282491 CH(CH3)2 H CH2CH3 CH3 LL-F28249X CH(CH3)2 CH3 CH3 CH3 10

Disse forbindelser er kendt fra EP nr. 0.170.006-A2, ligesom det deri er beskrevet, at de er biologisk aktive imod helminther, arthopod-ectoparasitter, acaricider og nematoder.

15 Selv om de ovenfor omtalte sygdomme har været kendt i årevis, og der findes terapier til behandling og forebyggelse af sygdommene, jf. de nedenfor omtalte patentskrifter, tilvejebringer den foreliggende opfindelse hidtil ukendte forbindelser til effektivisering af sådan behandling.

20 US-patentskrift nr. 3.950.360 beskriver antibiotiske stoffer, der fås ved dyrkning af en mikroorganisme af slægten Streptomyces, hvilke forbindelser er nyttige som insecticider og acaricider. Endvidere angår en hel række US-patentskrif ter forbindelser fremstillet ved fermentering af Streptomyces 25 avermitilis, jfr. US-patentskrifterne nr. 4.171.314, 4.199.569, 4.206.205, 4.310.519 og 4.333.925. US-patentskrift nr. 4.423.209 angår en fremgangsmåde til omdannelse af mindre ønskelige komponenter til mere foretrukne. Endelig omhandler GB offentliggørelsesskrift nr. 2.166.436 også antibiotika.

30 Det er derfor et formål med opfindelsen at tilveje bringe hidtil ukendte 23-oxo- og 23-iminoderivater af LL-F28249a-X. Disse derivater kan anvendes til forebyggelse, behandling eller bekæmpelse af endo- og ecto-parasit- (samlet betegnet parasit-), insekt-, nematode-, mide- og helmint- 35 sygdomme og -angreb i varmblodede dyr og landbrugsafgrøder, ligesom der tilvejebringes præparater, der indeholder pro- DK 170822 B1 3 phylaktisk, terapeutisk eller farmaceutisk effektive mængder af de hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen.

Forsøg har vist, at forbindelserne ifølge opfindelsen har en overraskende bedre virkning af den her omhandlede 5 art end de nærmest beslægtede, kendte forbindelser, og det har specielt vist sig, at en ændring i 5-stillingen i forbindelsen LL-F 28249a svarende til den, der ifølge opfindelsen er gennemført i forbindelsernes 23-stilling, ikke resulterer i nogen aktivitetsændring, hvilket er en markant og 10 overraskende forskel.

De LL-F28249-forbindelser, der kan tjene som forstadier for forbindelserne ifølge opfindelsen, repræsenteres ved den almene formel 15 p, A* Λ

λ AfXt Y

i” ?· ”r iw ,··ϊ\ ,e\ /*? \\

*3H !i11 18l·. CH

20 k \/'a

\: j>B

dfl 25 åV' Ν».

0R2

Komponent _Rj_ R2_ _R3_ R4_ LL-F28249a CH(CH3)2 H CH3 CH3 30 LL-F28249S CH3 H CH3 CH3 LL-F28249C CH2CH3 H CH3 CH3 hvori Ri, R2, R3 og R4 er defineret ved den ovenstående tabel.

4 DK 170822 B1

LL-F28249-derivaterne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den almene formel I

?h, Α,Λ 5 ΑΛΛ i I Iv >—v

Y CH / V

h,c * I 3 1

S V

MK

10 Q

o—\ Λ

Hn “· hvori 15 betyder methyl, ethyl eller isopropyl, og X betyder oxygen eller NO-C2-Cg-alkyl, dog med følgende forbehold: a) X er forskellig fra NO-C2-C6-alkyl, hvor C2~Cg-alkyl er ethyl, isopropyl eller n-butyl, såfremt er 20 isopropyl, b) X er forskellig fra oxygen, såfremt R]_ er ethyl eller isopropyl, eller de er farmaceutisk og farmakologisk acceptable salte deraf med baser.

25 Det foretrækkes, at R]_ betyder isopropyl, og X betyder oxygen eller NO-C2-Cg-alkyl, fortrinsvis at R;i_ betyder isopropyl, 30 X betyder oxygen eller NO-C2-C3~alkyl, især at R! betyder isopropyl, og C2-C3~alkyl betyder methyl eller ethyl.

Ved fremstillingen af forbindelserne ifølge opfindel-35 sen må hydroxylgruppen i 5-stillingen beskyttes før oxidationen af 23-hydroxylgruppen til 23-oxogruppen. Egnede beskyttelsesgrupper er trisubstituerede silylgrupper, såsom t.butyldimethylsilyl og trimethylsilyl, eller trisubstitue- DK 170822 B1 5 rede silyloxyacetylgrupper, såsom t.butyldimethylsilyloxy-acetylgrupper. Beskyttelsesgrupperne er imidlertid ikke begrænset til disse grupper, eftersom andre nyttige beskyttelsesgrupper såsom andre acylgrupper, f.eks. acetyl, tri-5 fluoracetyl, chloracetyl, trichloracetyl, phenoxyacetyl og lignende, også kan anvendes ved denne fremgangsmåde.

En af de foretrukne beskyttelsesgrupper er t.butyldi-methylsilyl. Denne gruppe knyttes til 5-hydroxylgruppen ved omsætning af en ubeskyttet 5-hydroxy-F-28249-forbindelse 10 med t.butyldimethylsilylchlorid i nærværelse af en base, såsom imidazol, pyridin, 4-dimethylaminopyridin, triethylamin og lignende, i et aprot opløsningsmiddel, såsom methylen-chlorid, toluen, ethylacetat, tetrahydrofuran, ethylenchlorid og lignende. Reaktionsblandingen omrøres ved en temperatur 15 på ca. 0 til 30°C, og reaktionen er afsluttet i løbet af nogle timer, afhængigt af reaktionstemperaturen. Reaktionens afslutning overvåges sædvanligvis ved væskechromatografi med høj ydeevne (HPLC) ved anvendelse af omvendt fase på en "Whatman® Partisil CCS/Cø"-hurtiganalyse-søjle.

20 En anden foretrukken beskyttelsesgruppe er t.butyldi- methylsilyloxyacetyl. Denne gruppe bindes til 5-hydroxyl-gruppen ved, at den ubeskyttede F-28249-forbindelse i et aprot opløsningsmiddel, såsom methylenchlorid, toluen, ethylacetat, tetrahydrofuran, ethylenchlorid og lignende, indehol-25 dende en tertiær amin, f.eks. pyridin eller triethylamin, forenes, og beskyttelsesmidlet tilsættes i form af et syre-halogenid. Reaktionen udføres ved en temperatur på ca. 0 til 30°C, og dens afslutning overvåges ved HPLC.

23-Hydroxylgruppen i den beskyttede F-28249-forbin-30 delse oxideres derpå til en 23-oxogruppe med oxidationsmidler, såsom pyridiniumdichromat, pyridiniumchlorochromat, chromsyredimethylpyrazol, eddikesyreanhydrid/dimethylsulf-oxid, trifluoreddikesyreanhydrid/dimethylsulfoxid, N-chlor-succinimid/dimethylsulfoxid, oxalylchlorid/dimethylsulfoxid 35 og lignende. Reaktionen udføres ved temperaturer fra tørisbad (ca. -78°C) til stuetemperatur (ca. 25°C) og er afsluttet i løbet af l til 24 timer afhængigt af oxidationshastigheden, 6 DK 170822 B1 der følges ved HPLC. Dimethylsulfoxid-oxidationerne udføres i nærværelse af triethylamin eller diisopropylethylamin. Opløsningsmidler, såsom methylenchlorid, ethylenchlorid, dimethylformamid, dimethylsulfoxid og lignende, anvendes.

5 Når der anvendes oxalylchlorid/dimethylsulfoxid i nærværelse af triethylamin, er det fordelagtigt at tilsættes molekylesigter til reaktionsblandingen for at forøge udbyttet. Oxidationen kan også udføres med jord-mikroorganismer, idet der anvendes 100 mg til 10 g af en 23-hydroxyforbindelse 10 pr. liter usteriliseret jord ved 20-30°C. Den oxiderede 23-ketoforbindelse ekstraheres fra jorden med et opløsningsmiddel, såsom acetone, methanol eller ethanol.

Silyl-beskyttelsesgruppen fjernes ved omrøring af en beskyttet 23-keto-LL-F28249-forbindelse i en lavere alkanol, 15 såsom methanol, ved 0°C til stuetemperatur i ca. 0,5 til 1 time i nærværelse af en syre såsom p-toluensulfonsyre. Hvis beskyttelsesgruppen er en silyloxyacetylgruppe, fjernes silylgruppen med syre som beskrevet ovenfor, og hydroxy-acetylgruppen spaltes med ét ækvivalent base, såsom natrium-20 methanolat i methanol ved 0°C til stuetemperatur i 0,5 til adskillige timer. Silyloxyacetylgruppen kan også fjernes i ét trin ved behandling med natriummethanolat ved stuetemperatur, indtil reaktionen er fuldstændig. Tilsvarende kan andre beskyttende acylgrupper fjernes ved behandling med base.

25 Imino-derivaterne af 23-oxoforbindelserne fremstilles let ved standardteknik, såsom de af S. M. McElvain i The Characterization of Organic Compounds, MacMillan Company, New York, 1953, side 204-205 beskrevne metoder.

Typisk omrøres en 23-oxoforbindelse i en alkohol, 30 f.eks. methanol eller ethanol, eller dioxan i nærværelse af eddikesyre og et overskud af den aminforbindelse, der skal danne derivat, såsom O-ethyl-hydroxylaminhydrochlorid og lignende, sammen med en ækvivalent mængde natriumacetat ved stuetemperatur til 50°C. Reaktionen er sædvanligvis afsluttet 35 i løbet af nogle timer til nogle dage ved stuetemperatur, men kan let fremskyndes ved opvarmning.

DK 170822 B1 7

De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen har en bemærkelsesværdig virkning som anthelmintika, ecto-parasiticider, insecticider, nematodicider og acaricider indenfor de humane og animalske sundhedsområder og i land-5 bruget.

Den sygdom eller gruppe af sygdomme, der generelt beskrives som helminthiasis, skyldes infektion af en dyrisk vært med parasitiske orme, der kendes som helminther. Helminthiasis er et almindeligt og alvorligt problem hos husdyr, 10 såsom svin, får, heste, kvæg, geder, hunde, katte og fjerkræ. Blandt helmintherne forårsager grupper af orme, der betegnes nematoder, udbredte og mange gange alvorlige infektioner i forskellige dyrearter. De mest almindelige slægter af nematoder, der inficerer de ovenfor nævnte dyr, er Haemonchus, 15 Trichostrongylus, Ostertagia, Nematodirus, Cooperia, Ascaris, Bunostomum, Oestophagostomum, Chabertia, Trichuris, Strongy-lus, Trichonema, Dictyocaulus, Capillaria, Heterakis, Toxo-cara, Ascaridia, Oxyuris, Ancylostoma, Uncinaria, Toxascaris og Paracaris. Nogle af disse, såsom Nematodirus, Cooperia 20 og Oesphagostomum, angriber primært tarmområdet, medens andre, såsom Haemonchus og Ostertagia, er mere almindelige i maven. Atter andre, såsom Dictyocaulus, findes i lungerne. Desuden kan andre parasitter være lokaliseret i andre af kroppens væv eller organer, såsom hjerte og blodkar, sub-25 kutant og i lymfevæv og lignende. Parasitinfektionerne, der kendes som helminthiasis, fører til anæmi, underernæring, svaghed, vægttab, alvorlig beskadigelse af tarmkanalens vægge og andet væv og andre organer, og kan, hvis de forbliver ubehandlede, føre til den inficerede værts død. 23-Oxo-30 og -imino-derivaterne af LL-F28249-forbindelserne ifølge opfindelsen har uventet høj virkning mod disse parasitter. Desuden er de aktive mod Dirofilaria hos hunde, Nematospiroi-des, Syphacia og Aspiculuris hos gnavere, anthropode-ecto-parasitter, såsom blodmider, mider, lus, lopper og spyfluer 35 hos dyr og fugle, ectoparasiten Lucilia sp. hos får, bidende 8 DK 170822 B1 insekter og vandrende diptera-larver såsom Hypoderma sp. hos kvæg, Gastrophilus hos heste og Cuterebra sp. hos gnavere .

Forbindelserne ifølge opfindelsen er også nyttige til 5 behandling, forebyggelse eller bekæmpelse af parasiter, der inficerer mennesker. De mest almindelige slægter af parasitter i menneskets mave-tarm-kanal er Ancylostoma, Neca-tor, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Tri-churis og Enterobius. Andre slægter af parasiter, der er 10 vigtige fra et medicinsk synspunkt, og som findes i blodet eller andet væv og organer udenfor mave-tarm-kanalen, er trådorme, såsom Wuchereria, Brugia, Onchocerca og Loa, Dra-cunculus og ekstra-intestinale stadier af tarm-ormene Strongyloides og Trichinella. Forbindelserne ifølge opfindelsen 15 er også værdifulde mod arthropoder, der parasiterer mennesker, bidende insekter og andre skadelige diptera, der bevirker irritation hos mennesker.

Disse forbindelser er endvidere aktive mod skadelige organismer i husholdningen, såsom kakerlakken, Blattella 20 sp., klædemøllet, Tineola sp., tæppebillen, Attagenus sp. og stuefluen Musca domestica.

Skadelige insekter i oplagret korn, såsom Tribolium sp. og Tenebrio sp., og hos landbrugsplanter, såsom spindemider (Tetranychus sp.), sydlig hærorm, tobaksknoporm, frø-25 kapselsnudebille, bladlus (Acyrthiosiphon sp.), vandrende orthoptera såsom græshopper og umodne stadier af insekter, der lever på plantevæv, bekæmpes med forbindelserne ifølge opfindelsen ligesom også jordnematoder og planteparasitter såsom Meloidogyne sp., der kan være vigtig i landbruget.

30 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives oralt eller parenteralt til anvendelse af dyr og mennesker, medens de kan formuleres i flydende eller fast form til anvendelse i landbruget. Oral indgivelse kan ske i form af en enhedsdosisform såsom en kapsel, bolus eller tablet eller en fly-35 dende "drench" (stor dosis), når de anvendes som anthelmin-tika til dyr.

DK 170822 B1 9

Den dyriske "drench" er normalt en opløsning, suspension eller dispersion af den aktive forbindelse, sædvanligvis i vand, sammen med et suspenderingsmiddel, såsom bentonit, og et befugtningsmiddel eller lignende excipiens. Generelt 5 kan "drenchene" også indeholde et antiskummemiddel. "Drench"--præparater indeholder generelt ca. 0,001 til 0,5 vægtprocent aktiv forbindelse. Foretrukne "drench"-præparater indeholder ca. 0,01 til 0,1 vægtprocent.

Kapsler og boli indeholder den aktive bestanddel 10 blandet med et bærestof, såsom stivelse, talkum, magnesium-stearat eller dicalciumphosphat.

Når det ønskes at indgive 23-oxo- eller 23-imino--derivaterne af LL-F28249 i en tør, fast enhedsdosisform, anvendes der sædvanligvis kapsler, boli eller tabletter, 15 der indeholder den ønskede mængde aktiv forbindelse. Disse doseringsformer fremstilles ved intim og ensartet blanding af den aktive bestanddel med passende findelte fortyndingsmidler, fyldstoffer, desintegreringsmidler og/eller bindemidler såsom stivelse, lactose, talkum, magnesiumstearat, 20 vegetabilske gummier og lignende. Sådanne enhedsdosispræparater kan varieres i vidt omfang med hensyn til deres samlede vægt og indhold af aktiv forbindelse, afhængigt af faktorer såsom den type værtsdyr, der skal behandles, infektionens alvor og art og værtens vægt.

25 Når den aktive forbindelse skal indgives via et dyre foder, dispergeres den intimt i foderet eller anvendes som overfladedrys eller i form af pellets, der kan sættes til det findelte foder eller eventuelt indfodres separat. Alternativt kan de aktive forbindelser ifølge opfindelsen indgives 30 dyrene parenteralt, såsom ved intraruminal, intramuskulær, intratracheal eller subkutan injektion. Ved en sådan lejlighed opløses eller dispergeres den aktive forbindelse i et flydende bæremedium.

Til parenteral indgivelse blandes den aktive forbin-35 delse med en acceptabel bærer, fortrinsvis en art vegetabilsk olie, såsom jordnøddeolie, bomuldsfrøolie og lignende. Andre 10 DK 170822 B1 parenterale bæremedier, såsom organiske præparater med sol-ketal, propylenglycol, glycerol-formal og vandigt parenteralt præparat anvendes også. Den eller de aktive 23-oxo- eller -imino-forbindelse(r) ifølge opfindelsen opløses eller sus-5 penderes i det parenterale præparat til indgivelse. Sådanne præparater indeholder sædvanligvis ca. 0,005 til 5 vægtprocent aktiv forbindelse.

Selv om forbindelserne ifølge opfindelsen primært anvendes til behandling, forebyggelse eller bekæmpelse af 10 helminthiasis, er de også nyttige til forebyggelse og behandling af sygdomme forårsaget af andre parasiter. Således kan f.eks. arthropode-parasiter, såsom blodmider, lus, lopper, mider og andre bidende insekter hos husdyr og fjerkræ bekæmpes med de her omhandlede forbindelser. Disse forbindelser 15 er også effektive til behandling af parasitsygdomme, der forekommer hos andre dyr, herunder mennesker. Den optimale mængde, der skal anvendes, vil naturligvis afhænge af den specielle forbindelser, der anvendes, arten af det dyr, der skal behandles, og arten og graden af parasitinfektion eller 20 -angreb. Generelt ligger den til oral indgivelse af disse hidtil ukendte forbindelser anvendelige mængde omkring 0,001 til 10 mg pr. kg legemsvægt af dyret, og en sådan totaldosis indgives på en gang eller i opdelte doser i løbet af en relativt kort tidsperiode, f.eks. 1-5 dage. De foretrukne 25 forbindelser ifølge opfindelsen giver en udmærket bekæmpelse af sådanne parasiter hos dyr ved indgivelse af ca. 0,025 til 3 mg pr. kg legemsvægt af dyret i en enkelt dosis. Gentagne behandlinger gives, som det er nødvendigt til bekæmpelse af reinfektioner, og afhænger af parasittens art og 30 den anvendte husdyravlsteknik. Fremgangsmåderne ved indgivelsen af disse materialer til dyr er kendte for fagmænd på veterinærområdet.

Når de heri beskrevne forbindelser indgives som en komponent af dyrets foder eller opløses eller suspenderes i 35 drikkevandet, tilvejebringes der sammensætninger, hvori den aktive forbindelse eller forbindelser er intimt dispergeret DK 170822 B1 11 i en indifferent bærer eller fortyndingsmiddel. En indifferent bærer er en, der ikke vil reagere med den aktive bestanddel, og som kan indgives sikkert til dyr. Fortrinsvis er en bærer til indgivelse med foderet eller kan være en 5 bestanddel af dyrets ration.

Egnede præparater omfatter foderforblandinger eller tilskudsfoder, hvori den aktive forbindelse er til stede i relativt store mængder, hvori de nævnte foderforblandinger eller tilskudsfodere er egnede til direkte fodring af dyrene 10 eller som tilskud til foderet enten direkte eller efter et mellemliggende fortyndings- eller blandingstrin.

Typiske bærere eller fortyndingsmidler, der er egnede til sådanne midler, omfatter tørret bærme, majsmel, citrus-mel, fermenteringsrester, formalede østersskaller, groft 15 hvedemel, melassesirup, majskolbemel, formalet foder af spiselige bønner, formalet soja, knust limsten og lignende.

De aktive forbindelser dispergeres intimt i hele bæreren ved metoder såsom grutning, omrøring, formaling eller omvæltning. Præparater, der indeholder fra ca. 0,005 til 2,0 vægt-20 procent af den aktive forbindelse, er særlig egnede som foderforblandinger.

Tilskudsfodere, med hvilke dyret fodres direkte, indeholder ca. 0,0002 til 0,3 vægtprocent af de aktive forbindelser. Sådanne tilskud sættes til dyrefoderet i en mæng-25 de, der kan give det færdige foder den til behandling, forebyggelse og/eller bekæmpelse af parasitsygdomme ønskede koncentration af aktiv forbindelse. Selv om den ønskede koncentration af aktiv forbindelse vil variere afhængigt af de ovennævnte faktorer og af det enkelte anvendte derivat, 30 indfodres forbindelserne ifølge opfindelsen sædvanligvis i koncentrationer fra ca. 0,00001 til ca. 0,02% i foderet for at opnå det ønskede antiparasitiske resultat.

Forbindelserne kan også administreres ved at hældes på dyrenes hud i form af en opløsning. Generelt opløses de 35 aktive forbindelser i et passende indifferent opløsningsmiddel, såsom dimethylsulfoxid, propylenglycol eller lignende, 12 DK 170822 B1 alternativt i en kombination af opløsningsmidler til administration ved påhældning.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er også nyttige til bekæmpelse af skadelige organismer i landbruget, der påfører 5 voksende eller lagrede afgrøder skade. De her omhandlede forbindelser påføres ved anvendelse af kendt teknik, såsom sprøjtemidler, puddere, emulsioner og lignende, til de voksende eller lagrede afgrøder for at give beskyttelse mod sådanne landbrugsskadelige organismer.

10 Opfindelsen illustreres ved de følgende eksempler, idet dog eksempel 4 ikke vedrører en forbindelse ifølge opfindelsen.

Eksempel 1 15 5-0-t .butvldimethvlsilvl-LL-F2 824 9Qi I 500 ml methylenchlorid omrøres 70 g LL-F28249a med 82,04 g imidazol ved 20°C under nitrogenatmosfære. Derpå tilsættes 43 g t .butyldimethylsilylchlorid i 400 ml methylenchlorid i løbet af 5 minutter. Efter 1 time undersøges det, 20 om reaktionen er afsluttet, ved væskechromatografi med høj ydeevne (HPLC) , idet der anvendes 50% CH3CN/50% H2O som kurvegradient i løbet af 10 minutter på en "Whatman® Partisil CCS/C3"-hurtiganalysesøjle med en strømhastighed på 1 ml pr. minut. Der tilsættes yderligere 3 g t.butyldimethyl-25 silylchlorid, og efter 3 timer er sammensætningen 92,3% ønsket produkt, 0,3% LL-F28249a og 1,16% disilyleret materiale. Blandingen fortyndes med methylenchlorid og udhældes i 2 liter vand. Methylenchloridlaget skilles fra. Den vandige del ekstraheres med 2 liter methylenchlorid, og de samlede 30 organiske lag tørres med natriumsulfat. Methylenchloridet afdampes i vakuum, hvilket giver 116 g af den i overskriften angivne forbindelse, der identificeres ved massespektrometri og NMR-spektroskop!.

35 DK 170822 B1 13

Eksempel 2 5-O-t . butvldimethvlsilvl-23-oxo-LL-F28249a; I 5 liter tørt methylenchlorid omrøres 116 g 5-0--t.butyldimethylsilyl-LL-F28249a under nitrogen, og der 5 tilsættes 540 g natriumacetat ved 22°C og derefter 172,5 g pyridiniumchlorochromat (PCC). Efter 1 time tilsættes yderligere 15 g PCC, da reaktionen er ufuldstændig ifølge HPLC--analyse. Efter 2 timer tilsættes yderligere 10 g PCC, og reaktionsblandingen omrøres i 5 timer i alt. Blandingen 10 udhældes i 6 liter blanding af is og vand, og methylenchlo-ridet skilles fra. Det vandige lag ekstraheres med methylenchlorid, og de samlede methylenchloridlag vaskes med vand og tørres med natriumsulfat. Methylenchloridet afdampes i vakuum, hvilket giver 197,8 g råprodukt, der opløses i 2 15 liter diethylether og filtreres. Etheropløsningen vaskes med 2 gange 1000 ml vand, tørres med natriumsulfat og inddampes til tørhed, hvilket giver 60 g af den i overskriften angivne forbindelse, der identificeres ved massespektrometri og NMR-spektroskopi.

20 Når pyridiniumchlorochromatet erstattes med pyridi- niumdichromat ved den ovenstående fremgangsmåde, fås også den i overskriften angivne forbindelse.

Eksempel 3 25 23-Oxo-LL-F2 824 9Qf I 1,5 liter methanol opløses 60 g 5-0-t.butyldimethyl-silyl-23-oxo-LL-F28249o; ved opvarmning, og der tilsættes ved 0°C 30 g p-toluensulfonsyre i 300 ml methanol. Blandingen omrøres i 3 timer og udhældes i 6 liter mættet natriumhydro-30 gencarbonatopløsning i 6 liter vand. Efter omrøring ekstraheres blandingen med 4 liter ethylacetat, og lagene adskil les. Det vandige lag mættes med natriumchlorid og ekstraheres med 2 gange 6 liter ethylacetat. Det første ethylacetatlag vaskes med mættet natriumchloridopløsning, forenes med de 35 øvrige ethylacetatekstrakter og tørres med natriumsulfat. Ethylacetatet afdampes i vakuum, hvilket giver 148,1 g mørk DK 170822 B1 14 remanens. Det rå materiale chromatograferes derpå ved HPLC på 1200 g S1O2 ved anvendelse af 1% isopropanol i methylen-chlorid til eluering og overvåges med en ultraviolet detek-tor/2540 Å filter. Fraktionerne 39-42 samles og inddampes 5 til tørhed, hvilket giver 12,65 g af den i overskriften angivne forbindelse med følgende analyse:

Analyse, beregnet for C3gH50O8: C = 70,79, H = 8,25 Fundet: C = 70,33, H = 8,31.

Den i overskriften angivne forbindelse identificeres 10 desuden ved massespektrometri og NMR-spektroskop!.

Eksempel 4 23-Methoxvimino-LL-F28249a

Til 930 ml tør dioxan sættes ved stuetemperatur 70 g 15 23-OXO-LL-F28249Q;, 11,8 g natriumacetat, 11,8 g O-methyl- hydroxylaminhydrochlorid og 2,1 ml eddikesyre. Blandingen omrøres i 3 dage under nitrogen, og efter at HPLC ikke viser noget udgangsmateriale, afdampes 650 ml dioxan i vakuum. Remanensen udhældes i 5 liter vand, og produkt ekstraheres 20 med 4 gange 2 liter methylenchlorid. De samlede ekstrakter vaskes med vand, tørres med natriumsulfat og inddampes til tørhed. Remanensen opløses i 1500 ml diethylether, og opløsningen vaskes med vand, tørres med natriumsulfat og inddampes til tørhed. Dette giver 11,84 g af den i overskriften angivne 25 forbindelse, der identificeres ved massespektrometri og NMR-spektroskopi. Den giver også følgende analyse:

Analyse beregnet for ¢37^30^-1,5 H2O: C = 66,64, H = 8,46, N = 2,10 Fundet: C = 66,82, H = 8,13, N = 2,32.

30

Eksempel 5-7

De følgende 23-O-substitueret oximino-LL-F28249--forbindelser fremstilles ved fremgangsmåden fra eksempel 4 ved anvendelse af de tilsvarende O-substituerede hydroxyl-35 aminer i stedet for O-methylhydroxylamin: DK 170822 B1 15 r*> Γ» n A" ’

v\a| I

i I Iv 5 V*·» ch(cv» \ \/ i"? ! LI !

10 åX

-£5-

Ethyl n-Hexyl 15 i-Propyl

Eksempel 8 23 -Qxo-LL-F28249o'

En opløsning, der indeholder 0,32 g oxalylchlorid i 2 0 5 ml methylenchlorid afkøles og omrøres med 0,71 g molekyle sigter type 4A i et tøris/acetone-bad, og der tilsættes langsomt en blanding af 0,4 g dimethylsulfoxid (DMSO) i 2 ml methylenchlorid under omrøring under nitrogenatmosfære. Derefter tildryppes 0,83 g 5-O-t.butyldimethylsilyl-LL-25 -F28249CK i 8 ml methylenchlorid i løbet af 10 minutter.

Efter 0,5 time tildryppes 1,6 ml triethylamin, og blandingen får lov til at varme op til stuetemperatur (ca. 25°C) i løbet af 1 time. Blandingen udhældes i en is/vand-blanding, og den vandige blanding ekstraheres med 3 gange 10 ml di- 3 0 ethylether. Etherlagene vaskes med 5 gange 5 ml vand og tørres med magnesiumsulfat. Etheren fjernes, og remanensen opløses i 15 ml methanol. Methanolopløsningen omrøres ved 0°C med 0,3 g p-toluensulfonsyre i 3 timer og udhældes i 30 ml mættet natriumhydrogencarbonat og 60 ml vand. Den vandige 35 blanding omrøres med natriumchlorid, indtil den er mættet, og ekstraheres med 3 gange 40 ml ethylacetat. De samlede DK 170822 B1 16 ethylacetatlag tørres med magnesiumsulfat og inddampes til tørhed, hvilket giver den i overskriften angivne forbindelse, der er identisk med det produkt, der fås ved fremgangsmåden i eksempel 3.

5

Eksempel 9 23-Qxo-LL-F28249X

Ved anvendelse af fremgangsmåden fra eksempel 2 omdannes LL-F28249X til den i overskriften angivne forbindelse 10 23-oxo-LL-F28249X, der renses ved chromatografi på kiselgel og identificeres ved massespektrometri og NMR-spektroskopi.

Eksempel 10-11 23-0XO-LL-F28249S

15 Ved fremgangsmåden ifølge eksempel 1 beskyttes LL- -F28249E med 5-t .butyldimethylsilylchlorid, og det beskyttede produkt oxideres på den i eksempel 2 beskrevne måde. Fjernelse af den beskyttende 5-silylgruppe udføres ved den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde, hvilket giver den i 20 overskriften angivne forbindelse, der identificeres ved massespektrometri og NMR-spektroskop!.

Claims (6)

1. LL-F28249-derivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel I

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Ri betyder isopropyl, og 30. betyder oxygen eller NO-C2-Cg-alkyl, fortrinsvis at R^ betyder isopropyl, X betyder oxygen eller NO-C2-C3-alkyl, især at Ri betyder isopropyl, og 35 C2~C3-alkyl betyder methyl eller ethyl. DK 170822 B1

3. Fremgangsmåde til topisk eller systemisk bekæmpelse af planteskadelige insekter og til beskyttelse af afgrøder, træer, buske, oplagret korn og prydplanter, kendetegnet ved, at der påføres en insecticidt effektiv 5 mængde af et LL-F28249-derivat ifølge krav 1.

4. Fremgangsmåde til bekæmpelse af plantenematoder, kendetegnet ved, at der påføres planternes blade, jorden, hvori de vokser, eller deres stængler en nematodicidt effektiv mængde af et LL-F28249-derivat ifølge krav 1.

5. Middel til forebyggelse, behandling, eller bekæm pelse af endo- og/eller ectoparasitinfektioner i varmblodede dyr, kendetegnet ved, at det indeholder en pro-phylaktisk, terapeutisk eller farmaceutisk effektiv mængde af et LL-F28249-derivat ifølge krav 1.

5 V \H 3

15 I hvori Ri betyder methyl, ethyl eller isopropyl, og X betyder oxygen eller N0-C2-Cg-alkyl, dog med følgende forbehold: 20 a) X er forskellig fra NO-C2“Cg-alkyl, hvor C2~Cg-alkyl er ethyl, isopropyl eller n-butyl, såfremt Ri er isopropyl, og b) X er forskellig fra oxygen, såfremt R]_ er ethyl eller isopropyl, 25 eller de er farmaceutisk og farmakologisk acceptable salte deraf med baser.

5 CH Å .-CH3 ?h3 . Λ / V /'v/ \/°\l I • · t · · A. v W ‘ '

10 IJHO Γ U !

6. Middel til bekæmpelse af insekter, kende tegnet ved, at det indeholder en insecticidt effektiv mængde af et LL-F28249-derivat ifølge krav 1 samt en indifferent bærer.