DK168705B1 - Methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater og farmaceutisk acceptable salte deraf, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt farmaceutiske præparater indeholdende methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater eller farmaceutisk acceptable salte der af - Google Patents
Methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater og farmaceutisk acceptable salte deraf, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt farmaceutiske præparater indeholdende methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater eller farmaceutisk acceptable salte der af Download PDFInfo
- Publication number
- DK168705B1 DK168705B1 DK407586A DK407586A DK168705B1 DK 168705 B1 DK168705 B1 DK 168705B1 DK 407586 A DK407586 A DK 407586A DK 407586 A DK407586 A DK 407586A DK 168705 B1 DK168705 B1 DK 168705B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- formula
- pharmaceutically acceptable
- acceptable salts
- converted
- methylenedioxyphenanthrene
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/70—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with ring systems containing two or more relevant rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
- C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
- C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
- C07D317/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i DK 168705 B1
Opfindelsen angår hidtil ukendte methylendioxyphen-anthren- og stilbenderivater med den nedenfor anførte formel (I) og farmaceutisk acceptable salte deraf, en 5 fremgangsmåde til fremstilling af disse og lægemidler, der indeholder disse forbindelser og/eller den kendte forbindelse l-carboxy-3,4-methyl endioxy-8-methoxy-phenanthren.
Methyl endioxyphenanthren- og stilbenderivaterne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den almene 10 formel
O-^^COOH
H=c'olI
sji (i) U-R, hvor JL Ri betyder ethoxy, og R2 og R3 hver for sig betyder et H-atom, eller 15 2 Ri betyder et H-atom, hydroxy eller ethoxy, og R2 og R3 sammen danner en aromatisk C-C-binding.
Som immunstimulerende middel til profylakse og behandling af infektionssygdomme kendes aristolochiasyrer med formlen O-T^Sv^COOH (I) H2<o1 J .
0-JN^N^NP2 R=H,0CH3 20 som har en fagooytoseforøgende og antiviral virkning, som forbedrer behandlingsresultatet ved almen-infektioner, og DK 168705 B1 2 som tillige med godt resultat kan anvendes til behandling af pusansamlinger og bylder.
Ved farmakologiske undersøgelser ved høje doseringer er 5 der dog for kort tid siden påvist en cellulær degenerering i formaven hos rotter, hvorfor det har været nødvendigt med tilbageholdenhed med anvendelse af dette ellers så behandlingsgunstige, aktive stof.
Det har overraskende vist sig, at forbindelserne med den 10 almene formel
H2CV
r| jj (IA) hvor Ri er et H-atom, methoxy eller ethoxy, og R2 og R3 hver for sig er et H-atom eller tilsammen danner en aromatisk C-C-binding, idet Ri i dette tilfælde også kan 15 være hydroxyl, selv ved en meget høj dosering (i forhold til den i humanterapien sædvanlige dosis på 1-10 jig/kg) hos rotter (10 mg/kg) hverken makroskopisk eller histologisk viser tegn på pladeepithelhyperplasi. Ligeledes påvises ingen mutagen virkning. Det fremgår af de i det 20 følgende anførte farmakologiske data, at forbindelserne med formlen IA har en fagocytoseforøgende og antiviral virkning uden at medføre cellulær degenerering.
Forbindelserne er derfor velegnede til profylakse mod og behandling af infektionssygdomme.
25 I overensstemmelse hermed er lægemidlet ifølge opfindelsen ejendommeligt ved, at det indeholder mindst én forbindelse med den almene formel (IA) eller farmaceutisk acceptable salte deraf, eventuelt i et farmaceutisk acceptabelt bære- 3 DK 168705 B1 stof.
Blandt disse forbindelser er l-carboxy-3,4-methylendi-oxy-8-methoxyphenanthren kendt fra J.Nat.Products 46 5 (1983), side 507 ff., hvor det anføres at forbindelsen i doser på 90 mg/kg (hos kaniner) er abortfremkaldende og ved 60 mg/kg (hos mus) virker implantationshæmmende. En immunstimulerende virkning af denne forbindelse kunne derfor ikke forventes.
10 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af forbindelserne med den almene formel 1 eller deres farmaceutisk acceptable salte er ejendommelig ved, at man omsætter 6-brom-piperonylbromid med formlen H C'°lfYBr 15 med triphenylphosphin i et vandfrit opløsningsmiddel til dannelse af et phosphoniumsalt med formlen ^<03Γ*γβγ ♦ 0-k^-CH2P(Ph)3Br som omsættes med benzaldehyd, O-methoxy-benzaldehyd eller ortho-ethoxybenzaldehyd i nærværelse af en stærk base til 20 dannelse af en stilben med formlen 4 DK 168705 B1 /0—Br
h2c.04^I
CXRl hvori Ri er H, OCH3 eller OC2H5, hvorpå dette stilben-bromid omdannes enten med et metalcyanid, især kobber-5 cyanid, i et polært, aprotisk opløsningsmiddel, især i dimethylformamid, til det tilsvarende nitril, som ved hydrolyse omdannes til en syre med formlen I, eller stilbenbromidet omdannes med n-butyllithium og carbondioxid til en syre med formlen I, eller stilbenbromidet 10 omdannes ved UV-bestråling til phenanthrenderivatet med formlen
h*c'04JC
cd der omdannes med et metalcyanid eller med n-butyllithium og kulsyre på den ovenfor nævnte måde til en syre med 15 formlen I, hvorpå en phenanthrenforbindelse med formlen I, hvor er en OCH3-gruppe, ved en etherspaltning omdannes til en forbindelse, hvor R^ er hydroxyl, eller en nitroforbindelse med formlen
n-r^Y^c°0H
°^N^V^N02 5 DK 168705 B1 hvor er H eller OCH3, denitreres med et polysulfid til en forbindelse med formlen I, og når er OCH3, omdannes 0CH3~gruppen til en OH-gruppe ved en etherspaltning.
5 Ved bromeringen af piperonylalkoholen anvendes som lav-alkylcarboxylsyre fortrinsvis eddikesyre.
Ved fremstillingen af phosphoniumsaltet anvendes som vandfrit opløsningsmiddel f.eks. benzen eller en alkyl-benzen, fortrinsvis toluen eller xylen.
10 Ved kondensationen af phosphoniumsaltet anvendes som stærk base f.eks. et alkalimetalalkoholat, fortrinsvis lithium-methylat. Den derved fremstillede stilben foreligger for 85%'s vedkommende på Z-form og 15%'s vedkommende på E-form. De to isomerer kan separeres ved behandling med 15 diethylether. Trans-forbindelsen går over i etheren, og den ønskede cis-forbindelse forbliver uopløst.
Ved UV-bestrålingen af stilbenbromidet arbejdes f.eks. i en opløsningsmiddelblanding bestående af absolut THF og absolut cyclohexan i blandingsforholdet f.eks. 1:12 under 20 tilsætning af iod og tilførsel af nitrogen.
Ved denitreringen anvendes som polysulfid fortrinsvis ammoniumpolysulfid i svagt basisk vandig opløsning.
8-Methoxy- eller 8-ethoxyphenanthrenforbindelsen (R2 og R3 danner tilsammen en aromatisk C-C-binding, R^ er methoxy 25 eller ethoxy) kan ved en etherspaltning omdannes til de tilsvarende 8-hydroxyforbindelser f.eks. ved hydrolyse med pyridinhydrochlorid.
Midlerne ifølge opfindelsen forøger infektionsforsvaret. Således giver de en signifikant aktivering af leucocy-30 ternes fagocytose. Midlerne ifølge opfindelsen kan derfor anvendes til behandling af almen-infektioner, f.eks. for- DK 168705 Bl 6 årsaget af mycobakterier eller pneumokokker, og til behandling af lokale infektioner. Midlerne ifølge opfindelsen kan også anvendes, når der foreligger en hæmning af 5 fagocytosen, eksempelvis efter anvendelse af cortico-steroider eller cytostatika. Ved anvendelse af midlerne ifølge opfindelsen kan den nedsatte fagocytose igen normaliseres.
Derudover er der påvist en antiviral virkning af midlerne 10 ifølge opfindelsen.
Forbindelserne ifølge opfindelsen er bl.a. undersøgt med hensyn til deres makrofagaktiverende virkning. Som parameter anvendes stimuleringen af monocyter og makrofager i bughulen hos mus.
15 Intraperitoneal applikation af teststoffet er hensigtsmæssigt til opnåelse af en forøget kemotaktisk indvandring af monocyter i bughulen og monocyternes differentiering til makrofager med øget evne til fagocytose.
Stimuleringen er en proces, der kræver en vis tid. Prøv-20 ning for fagocytoseaktivitet foretages derfor efter en sædvanlig farmakologisk model efter en 3-dages forbehandling af musene med forbindelserne ifølge opfindelsen.
I enkelte testgrupper udtages umiddelbart efter indgift af stoffet den intraperitoneale cellepopulation til påvisning 25 af, at den observerede stimulering først optræder efter en vis inkubationstid.
Stoffer og materialer.
Stofferne, der skal prøves, opløses i vand til koncentrationen 0,5 mg/ml og fortyndes efter behov.
7 DK 168705 B1 NH^Cl-Tris-puffer NH4CI : 8,3 g/liter
Tris[ Tris-(hydroxymethyl)- 5 aminomethan ] : 4,119 g/200 ml pH = 7,65
Blanding : 1 del tris + 9 dele NH4CI
indstilles på pH 7,2 med 2 N saltsyre
PBS/BSA
10 40,0 g NaCl
1.0 g KC1 op til 5 liter med H2O
7,2 g Na2HP04 x 2H2O pH = 7,4 1.0 g KH2PO4
+ 0,2 g BSA = albumin, bovint (Sigma, nr. A-9647) til 15 100 ml PBS
DMEM
= Dulbeccos modificerede Eagle medium med L-glutamin uden phenolrødt (Gibco, katalog nr. 041-1885)
+ 5% FCS
20 eller + 5% FCS + 0,2% heparin FCS
= føtalt kalveserum (Gibco, katalog nr. 011-6290)
May-Grtlnwald-opløsning modificeret (Merck, Art. 1424) 25 Fåreblod
Nr. 5, 30.08.84, MPI Freiburg Antiserum
Anti-fåreerrythrocyt-serum fra kaniner nr. 308, IKA 468/6-11 dage; 18.07.78, MPI Freiburg 8 DK 168705 B1
Forsøgsdyr
Undersøgelsen foretages med 18 uger gamle hunhybridmus (Balb/c x C57B16) Fl. Dyrene tilpasses før starten af 5 eksperimentet i 5 dage til laboratoriebetingelserne. De fodres med pelleteret standardfoder til rotter og mus (Altromin nr. 1324) og gives vandværksvand ad libitum. De prøves med en thioglycolat-standard til tre makrofag-stimulerbarhed, og de fremviser herved gode positive 10 reaktioner.
Dosering og applikation
Stofferne appliceres i vandig opløsning (0,5 mg/ml) i følgende doser: intraperitonealt: 20 mcg/kg 15 500 mcg/kg 5 mg/kg
Fortyndingen af stamopløsningen til applikationen af de forskellige doser udgør ved 20 mcg/kg 1 mcg/ml 20 500 mcg/kg 25 mcg/ml 5 mg/kg 250 mcg/ml heraf hver på 0,4 ml
Applikationsskema 1 gruppe = 5 mus 25 Forbehandling: a) Tre applikationer på 3 på hinanden følgende dage, på 4. dag udvinding af makrofagerne.
b) En applikation umiddelbart før makrofagudvindingen.
30 Udvinding af makrofag-cellesuspension og faqocytose Testprincip
Efter applikation af immunologisk aktiverende stoffer stimuleres makrofagerne i forsøgsdyrene, og monocyterne påvirkes ti differentiering i makrofager. De uddifferen- 9 DK 168705 B1 tierede, stimulerede makrofager er også efter isolering i stand til in vitro at fagocytere med antigenstrukturer opsoneret med tilsvarende antistoffer, her fåreerythro-5 cyter. De fagocyterede erythrocyter kan påvises mikroskopisk .
Udførelse
Efter tilsvarende forbehandling dræbes musene ved halshvirvelf raktur. Peritoneum frilægges, og 4 ml DMEM (5% 10 føtalt kalveserum, 0,2% heparin) appliceres intraperi-tonealt. Efter ca. 30 sekunders massage udtages 3 ml cellesuspension med en sprøjte og anbringes i et lille polypropylenrør i et kuldebad (0°C). Fra hver testgruppe anvendes 1 mus til bedømmelse af cellekoncentrationen i 15 exsudatet. Der indstilles på en tilnærmelsesvis koncentration på 4 x 105 celler/ml.
Isolering af adhæderede makrofager:
Makrofager og monocyter udskilles fra den isolerede cellepopulation ved inkubation på dækglas. Herved adhæ-20 derer makrofager og monocyter i modsætning til andre celler. I vævskulturskåle med 24 fordybninger (polystyren, Costar) lægges runde dækglas og overhældes med 0,25 ml DMEM (med 5% føtalt kalveserum). Til opnåelse af en ensartet fordeling af cellerne anbringes skålene på et 25 rysteapparat, og i hver indsats pipetteres under omrystning (5 min., ca. 200 o/min.) 0,25 ml cellesuspension. Derefter inkuberes vævskulturskålene i 1 time ved 37°C og 8% CO2 i varmeskab. Efter inkubationen frasuges de ikke adhæderede celler, hvorpå der vaskes to gange med 0,25 ml 30 DMEM (+ 5% føtalt kalveserum).
Opsonering af fåreerythrocyter: 1 ml fåreblod vaskes 2 gange med 4 ml PBS/BSA (centrifugering, 10 min., ved ca. 500 x g). Det vaskede blod fortyndes 1:50 med PBS/BSA. Antiserumet mod fåreerythro-35 cyter fortyndes med PBS/BSA 1:200. Fortyndet fåreblod og 10 DK 168705 B1 fortyndet antiserum blandes sammen i forholdet 1:1 og inkuberes i 1,5 time under skånsom omrystning (ca. 80 o/min.) 5 Fagocytose: I hver fordybning i vævskulturskålene med adhæderede makrofager på dækglassene pipetteres 0,5 ml opsoneret erythrocytsuspension. Skålene inkuberes i 20 minutter ved 37°C og 8% CO 2· Derpå frasuges de overskydende erythrocy-10 ter, og dækglassene vaskes to gange med DMEM (0,5% FCS).
Til lysering af ikke fagocyterede erythrocyter behandles disse med 1 ml NH4Cl-tris-puffer (en indvirkningstid på 3,75 minutter er pasende). Efter frasugning af pufferen vaskes dækglassene to gange med PBS/BSA.
15 Fagocytosepåvisning (farveteknik)
Efter fagocytose farves makrofager ifølge Pappenheim ved en kombineret May-Grtinwald-Giemsa-metode. Farvningen foretages i fordybningerne i vævskulturskålene.
- 5 minutter May-Griinwald, koncentreret, frasugning 20 - 3 minutter H2O dobbeltdestilleret, indstilling med H3PO4 min 85% til pH 7,0, frasugning - 9 minutter Giemsa-opløsning 1:40 fortyndet og filtreret før brug, frasugning efterskylning med H2O dest. fra sprøjteflaske.
25 Cellekernerne er efter farvningen rødviolette, cytoplas-maet lyseblåt. De fagocyterede erythrocyter er blegrosa. Efter lufttørring fastklæbes mikroskoppræparaterne med "Eukitt" på objektbærere (3 præparater/mus).
Mikroskopisk bedømmelse 30 Af de tre mikroskoppræparater fra en mus udvælges to. Der anvendes et Zeiss-mikroskop med en 1000-gange forstørrelse og olieimmersion. Det tredje præparat anvendes, hvis re- 11 DK 168705 B1 sultatet fra to præparater ikke er entydigt. For hvert præparat tælles 300 celler og afhængigt af fagocytose-aktiviteten inddeles i klasser efter stigende antal 5 erythrocyter/makrofag.
Klasse Erythrocyter/makrofag 1 0 2 1 3 2 10 4 3 5 4 6 5 7 6 8 7 15 9 8 10 9 11 10 12 11-20* * ved beregningen antages, at ved mere end 11 erythro-20 cyter/MF har fordelingen i klasse 12 et tyngdepunkt ved 12 erythrocyter/makrofag. Makrofager af 12. klasse optræder relativt sjældent.
Behandling af data og grafisk fremstilling Beregningerne vedrørende de mikroskopiske præparater 25 udføres på et regneanlæg Wang LVP 2200 ved hjælp af et specielt indgangsprogram, som tillader separat registreing af talklasserne. Behandlingen af enkeltdata udføres med programmet "MA 1", den grafiske afbildning med programmet "NPL".
30 Stimulationseffekten beskrives for hver teststof og dosis på to måder: 1. Fordelingen af makrofagerne på klasserne (erythrocyter/makrofag) i %, idet 300 celler er 100%. Herved med 12 DK 168705 B1 regnes tillige antallet af makrofager i den grafiske afbildning, som ikke har fagocyteret erythrooyter.
2. Fordeling af fagocyterede erythrooyter (antallet af NPH 5 i en klasse x antallet af erythrocyter/MF) på klasserne i %, idet det totale antal fagocyterede erythrooyter er 100%. Herved er antallet af makrofager, som ikke har fagocyteret erythrooyter, ikke ladt ude af betragtning.
Parameter 10 Som parameter for makrofagstimuleringen anvendes stigningen i fagocytoseaktiviteten udtrykt som antallet af fagocyterede erythrooyter pr. makrofag (= klasse).
Stimulering viser sig ved et faldende antal makrofager, der ikke har fagocyteret erythrooyter eller kun har 15 fagocyteret få erythrooyter, samt ved en forøgelse af antallet af makrofater med flere erythrooyter.
13 DK 168705 B1
Resultater MF-Stimulering med l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phenanthren (i.p.): 5 Fig. 1: 3 x 20 mcg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage (S ± SEM) a) fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i % 100 -i 80 -
ΰΡ X
80 - \ Φ \ M . \ 05 1 $ M - \ h \ o -I—i—,—i pr t" » t y 0 2 1 8 8 10 12
rtftSSE
b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 10 1-12 i % 100 -i 2 80 - x: +> >1 <*> 5-1 CO - 0) -H bu 0) 0) Ό m Φ to so -u i« 0) H .
+> X t \ >1 \ / \ 0 5-1 20 - / o φ I \ .
tf >i / h u o 4-7 i , i i r> > 0 2 H S 8 10 12
KLRSS'E
Tabel: 3 x 20 mcg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage 14 DK 168705 B1 a) fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i %
Kl. Mus Mus Mus Mus
η 1 S 3 4 middeltal SO SE HD
1 1.00 75.67 71.33 66.50 72.17. 71.417 3.777 1.889 71.750 2 2.00 12.67 17.00 20.00 15.50 16.292 3.056 1.528 16.250 3 3.00 ' 6.83 6.17 8.67 7.67 7.333 1.080 0.540 7.250 4 4.00 2.17 3.33 3.50 2.50 2.875 0.644 0.322 2.917 5 5.00 ’ 0.67 1.67 1.17 1.17 1.167 0.408 0.204 1.167 6 6.00 1.33 0.17 0.17 0.17 0.458 0.S83 0.292 0.167 7 7.00 0.17 0.33 0.00 0.50 0.250 0.215 0.108 0.250 8 8.00 0.00 0.00 0.00 0.17 0.042 0.083 0.042 0.000 9 9.00 0.17 0.00 0.00 0.00 0.042 0.083 0.042 0.000 10 10.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.000 0.000 0.000 0.000 11 11.00 0.33 0.00 0.00 0.17 0.125 0.160 0.080 0.083 12 12.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.000 0.000 0.000 0.000 b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 1-12 i %
Kl, Mus Mus Mus Mus n 1 2 3 4 middeltal SO SE M0 1 1.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.00 0.00 0.00 2 2.00 26.5 34.8 3.7.5 31.2 32.50 4.77 2.38 33.01 3 3.00 28.6 25.3 32.5 30.9 29.30 3.14 1.57 29.72 4 4.00 13.6 20.5 19.7 15.1 17.21 3.39 1.69 17.39 5 5.00 5.6 13.7 8.8 9.4 9.34 3.32 1.66 9.07 6 6.00 13.9 1.7 1.6 1.7 4.72 6.14 3.07 1.69 7 7.00 2.1 4.1 0.0 6.0 3.06 2.60 1.30 3.09 8 8.00 0.0 0.0 0.0 2.3 0.59 1.17 0.59 0.00 9 9.00 2.8 0.0 0.0 0.0 0.70 1.39 0.70 0.00 10 10.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.00 0.00 0.00 11 11.00 7.0 0.0 0.0 3.4 2.58 3.33 1.66 1.68 12 12.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.00 0.00 0.00
Fig. 2: 3 x 500 mcg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage (X ± SEM) 15 DK 168705 B1 a) Fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i % oxo 100 -
•H
O) 80 -0) tn (0 H 60 -M i CH ' \ s to - \
20 - V
0--1—I—I—I—i-i—T~T * ! T f 0 2 *» 8 8 10 12
KLftSSE
b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 1-12 i % i O 100 -i S-l Λ +>
>1 <A° an U 80 -<D -H
CD (D
Ό M e0 -
di m in (ti (D H
+> X
>Ί \ HO - υ n o Φ & -p *0 ^ 20 - ϋ i 0---1—I—I—I—I—i i 0 2 % 6 8 10 12
KLftSSE
DK 168705 Bl
Tabel: 3 x 500 mcg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage 16 a) Fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i %
Hus Mus Mus Mus Mus
η 1 2 3 4 5 middeltal so SE HD
1 1.00 63.00 52.83 53.83 47.33 51.33 53.667 5.775 2.583 52.833 2 2.00 13.00 19.67 20.50 17.83 15.67 17.333 3.053 1.365 17.833 3 3.00 8.00 11.83 13.33 15.00 12.17 12.267 2.893 1.294 12.167 *4' 4.00 5.00 6.00 5.83 7.83 8.67 6.667 1.523 0.681 6.000 5 5.00 4.33 3.83 3.00 5.00 5.50 4.333 0.979 0.438 4.333 6 6.00 2.83 2.83 1.33 2.50 2.67 2.433 0.630 0.282 2.667 7 7.00 1.17 1.33 0.83 1.17 2.17 1.333 0.500 0.224 1.167 8 8.00 0.83 0.50 0.50 0.83 0.50 0.633 0.183 0.082 0.500 9 9.00 1.17 0.67 0.1?· 1.00 0.67 0.733 0.384 0.172 0.667 10 10.00 0.00 0.17 0.33 0.00 0.00 0.100 0.149 0.067 0.000 11 11.00 0.67 0.33 0.17 0.50 0.50 0.433 0.190 0.085 0.500 12 12.00 0.00 0.00 0.17 0.00 0.1? 0.067 0.091 0.04 1 0.000 b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 1-12 i %
Mus Mus Mus Mus Mus n 1 2 3 4 5 middeltal_ ®__f___® 1 1.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.00 0.00 0.00 2 2.00 12.5 17.5 20.3 13.5 11.9 15.13 3.60 1.61 13.54 3 3.00 15.3 21.0 26.4 24.3 18.5 21.11 4.41 1.97 21.04 4 4.00 14.4 16.0 17.3 17.8 19.8 17.06 2.02 0.90 17.30 5 5.00 16.5 13.6 11.9 15.2 16.7 14.80 2.07 0.93 15.19 6 6.00 13.6 12.6 6.6 9.5 10.1 10.48 2.75 1.23 10.14 7 7.00 6.7 7.1 4.9 5.3 9.9 6.79 1.95 0.87 6.71 8 8.00 5.6 3.1 3.5 4.4 2.7 3.85 1.17 0.52 3.46 9 9.00 8.9 4.7 1.3 6.1 4.1 5.03 2.79 1.25 4.74 10 10.00 0.0 1.3 3.0 0.0 0.0 0.86 1.31 0.59 0.00 11 11.00 6.4 3.0 1.6 3.8 3.8 3.72 1.73 0.77 3.80 12 12.00 0.0 0.0 3.3 0.0 2.5 1.17 1.62 0.72 0.00
Fig. 3: 3 x 5 mg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage (x ± SEM) 17 DK 168705 B1 a) Fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i % 100 - so - o\° eo - j rt - \
I ·- V
S
o i—i—. ΓΤ~Τ~"^ T < "tM 0 2 Ί 6 s 10 12 KLASSE .
b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 1-12 i % ioo - o
Li ri ti 30 ->1# u
Q) -rH
εο - φ Φ Ό ω Φ w li (d φ Η Η0 -+J Λ! >-\ ϋ Li Ο Φ ,η - T^k tr- -Μ *·° __ (0 >» / fe ϋ - / ^ ^ ^
0--{—ι-1-1-1-i-1 I ι i i I
o 2 1 S 8 10 12
KLASSE
Tabel: 3x5 mg/kg i.p.
MF-Stimulering efter 3 dage 18 DK 168705 B1 a) Fordeling af 300 celler på klasserne 1-12 i %
Kl. Mus Mus Mus Mus Mus
n 1 2 3 4 5 middeltal SO SE . HD
1 1.00 69.33 50.33 52.17 49.50 56.17 55.500 8.149 3.644 52.167 2 2.00 9.83 16.17 18.00 23.33 22.17 17.900 5.381 2.406 18.000 3 3.00 8.00 12.17 ii.SO 14.67 11.17 11.500 2.389 1.068 11.500 4 4.00 4.83 7.17 5.83 6.50 5.33 5.933 0.925 0.414 5.833 5 5.00 2.83 6.00 5.17 2.67 3.00 3.933 1.539 0.688 3.000 6 6.00 2.00 2.33 4.17 1.83 1.67 2.400 1.018 0.455 2.000 7 7.00 0.67 2.67 1.33 0.50 0.17 1.067 0.990 0.443 0.667 8 8.00 0.67 1.00 0.00 0.33 0.00 0.400 0.435 0.194 0.333 9 9.00 0.67 1.17 0.83 0.17 0.17 0.600 0.435 0.194 0.667 10 10.00 0.33 0.17 0.50 0.17 0.17 0.267 0.149 0.067 0.167 . .11 11.00 0.17 0.67 0.17 0.17 0.00 0.233 0.253 0.113 0.167 12 12.00 0.6? 0.17 0.33 0.17 0.00 0.267 0.253 0.113 0.167 b) Fordeling af fagocyterede erythrocyter på klasserne 1-12 i %
Kl. Mus Mus Mus Mus Mus
„ 1 2 3 4 5 middeltal SD SE HD
1 1.00 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.00 0.00 0.00 2 2.00 10.5 11.4 14.1 22.2 26.2 16.88 6.94 3.10 14.12 3 3.00 17.1 17.2 18.0 27.9 26.4 21.32 5.3S 2.39 18.04 4 4.00 15.5 15.2 13.7 18.5 18.9 16.37 2.25 1.01 15.48 5 5.00 12.1 17.0 16.2 10.1 14.2 13.92 2.83 1.27 14.17 6 6.00 10.7 8.2 16.3 8.7 9.8 10.76 3.26 1.46 9.84 7 7.00 4.3 11.3 6.3 2.9 1.2 5.18 3.90 1.75 4.27 8 8.00 5.0 4.9 0.0 2.2 0.0 2.43 2.49 1.11 2.22 9 9.00 5.7 6.6 5.2 1.3 1.6 4.07 2.47 1.11 5.23 10 10.00 3.2 1.1 3.5 1.4 1.8 2.20 1.10 0.49 1.77 11 11.00 1.8 4.7 1.3 1.6 0.0 1.88 1.73 0.77 1.58 12 12.00 14.2 2.4 5.2 3.2 0.0 5.00 5.49 2.46 3.17 19 DK 168705 B1
Stimuleringseffektens dosisafhængighed
Kontrolgruppen efter i.p.- eller p.o.-indgift af fysiologisk NaCl-opløsning viser, at i.p.-applikationen i sig 5 selv giver en svag makrofagakt i vering. Et større antal makrofager har fagocyteret to erythrocyter.
En stigning i antallet af makrofager med mere end to erythrocyter kan derfor fortolkes som en virkning af stoffet. Den procentvise sum af erythrocyter fra den 4.
10 klasse (makrofager med tre erythrocyter eller flere) afbildes derpå i forhold til dosis.
Fig. 4: Afhængighed af den procentvise sum af erythrocyter fra den 4. klasse og derover i forhold til dosis efter i.p.-indgift på 20 mcg/kg, 500 mcg/kg og 5 mg/kg. Kon-15 trollen ligger ved 45% ± 6% (S ± SEM). I figuren er området ± SEM omkring middelværdien angivet ved den afbrudte linje.
SO - o
u ^ n -P
4J 0) 70 -
>i U
U Φ <D ^ >*— V I 60 - /
Ό 3 S
o) x / (D cSP / ir / o u / O Φ - / tT-4J / O >. . Λ * -
PmO +*-----------—* 30 - - "—r i i i iin| f"'i > i rrri'r~ i...... Γττηιΐ) 10 100 1000 10000
Dosis (mcg/kg i.p.) 20 DK 168705 B1
Tabel: Dosisafhængighed af makrofagstimuleringen efter i.p.-indgift. x = dosis (mcg/kg) 5 y = %-sum af fagocyterede erythrocyter SEM = standardfejl af middelværdi
Nr. x-værdi y-værdi SE-værdi N
1 20.0000 38.2000 2.7800 4 2 500.0000 63.7600 3.3200 5 3 5000.0000 61.B000 5.4200 5
Bedømmelse l-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxyphenanthren f rem- 10 kalder en stigning i makrofagaktiviteten fra 38% ved 20 mcg/kg til 64% ved 500 mcg/kg. En yderligere forøgelse af dosis til 5 mg/kg medfører en ubetydelig nedgang i stimuleringen. Makrofagaktiveringen forløber i det udvalgte doseringsområde ikke lineært.
15 Testgruppen, som umiddelbart før makrofagudvindingen modtager en enkel intraperitoneal applikation, demonstrerer, at de påviste effekter kun optræder efter en inkubationstid. Denne erkendelse tyder på, at stoffet in vivo inducerer de for fagocytosestigningen ansvarlige meka-20 nismer i makrofager.
Dette tyder på følgende effekter: 1. Stimulering af membranoptagelseshastigheden, 2. forøgelse af Fc-receptortætheden og/eller 3. forøget mobilitet af C3b-receptorer.
25 De andre forbindelser med formlen IA udviser en tilsvarende farmakologisk virkning. Virkningen kunne be- 21 DK 168705 B1 kræftes ved hjælp af andre farmakologiske modeller og ved kliniske forsøg.
Opfindelsen illustreres nærmere ved hjælp af de efterføl-5 gende eksempler.
Eksempel 1.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-2'-methoxy-stilben_ a) Fremstilling af 6-brompiperonylbromid HOAc_^ 10 *Br2 η^γγ* * 0-1^^L-CH20H O C H2Br (MG =*152) (MG*294) MG = molekylvægt Kemikalier:
Piperonylalkohol (EGA-Chemie eller Aldrich) = 120 g, brom 48 ml i 120 ml eddikesyre, 15 eddikesyre 240 ml en 1 liter 3-halset rundkolbe med dråbetragt, tørrerør og indre termometer anbringes piperonylalkohol i eddikesyre, og der afkøles i isbad. Under omrøring sættes langsomt dråbevis til denne opløsning brom, der er opløst i 20 eddikesyre, således at temperaturen forbliver mellem 15 og 25°C. Reaktionsblandingen henstår natten over, og de udfældede krystaller frasuges, vaskes med vand og omkrystalliseres fra methanol.
22 DK 168705 B1
Smp.: 92-93°C.
Udbytte: 174 g, 75%.
b) Fremstilling af triphenylphosphoniumsaltet H^fV' * (ph>3p -*· .
2 ^oA.^-CH2Br 0-^l^-CH2P(Ph)3Br' (MG=294) *WG=556)
Kemikalier: 6-brompiperonylbromid 294 g, triphenylphosphin 262 g, toluen.
10 I en 3 liter 3-halset rundkolbe med tilbagesvaler og KPG-omrører opløses 6-brompiperonylbromid og triphenylphosphin i absolut toluen under omrøring. Reaktionsblandingen opvarmes under omrøring i 2 timer og omrøres i 24 timer ved stuetemperatur. Det dannede 15 triphenylphosphoniumsalt suges fra, vaskes med lidt toluen og tørres i exsikkator.
Udbytte: 500 g, 95%.
c) Fremstilling af stilbenderivatet Η,Ο^ΊΓι-^ ♦ - CHgO-rr^i /O-rf^r-Br 2 -θΛ^-ΟΗ2Ρ(ΡΗ)3ΒΓ ♦ 03HC4j -► H2S4l (MG=556) |) (MG· 136) (MG =333) 23 DK 168705 B1
Kemikalier:
Lithium (tråd), methanol (absolut), 5 triphenylphosphoniumsalt, o-anisaldehyd, dimethylformamid (absolut).
Reaktionsforskrift:
Fintsnittet lithium (0,98 g, 0,14 g atom)sættes under 10 nitrogen til absolut methanol (30 ml). Efter at reaktionen er tilendebragt, sættes denne opløsning dråbevis i løbet af 2,5 timer til en ved 90°C omrørt opløsning af triphenyl- phosphoniumsalt (76,96 g 0,14 mol) og o-anisaldehyd (17,68 g, 0,13 mol) opløst i absolut 15 dimethyl formamid (200 ml). Reaktionsopløsningen omrøres i yderligere 1 time ved 90°C. Efter afkøling til stuetemperatur hældes reaktionsbian- dingen i vand (700 ml), og bundfaldet filtreres fra og tørres.
Det tørrede produkt ekstraheres i et Soxhlett-apparat med 20 petroleumsether (30-50°C), indtil remanensen i beholderen ikke mere indeholder stilben (tyndtlagskromatografi, kiselgel, CH2CI2). Petroleumsetheren afdampes under vakuum, og remanensen (64,82 g blanding) omkrystalliseres fra ethanol (herved fraskilles den største del af uren-25 hederne eller det ikke omsatte materiale). Det udfældede bundfald (31,13 g) opslæmmes i ether (300 ml) og koges i 2 timer (= adskillelse af cis- og trans-blandingen). Efter afkøling frafiltreres og tørres det faste stof.
Udbytte: 23,87 g (52%) 30 ren cis-forbindelse, analyserest ved tyndt- lagskromatografi og NMR. smeltepunkt: 112°C.
DK 168705 B1 24 d) Fremstilling af l-cyano-3,4-metylendioxy-2'-methoxy-stilben.
2°ΐί. H2Co4JT
|) Cu(CN)/DMF/^ | CT 2 il N^QCHg ^N)ch3 (MG= 331) (MG= 277) 5 Kemikalier:
Kobber(II)cyanid, N,N-dimethylformamid.
En blanding af det for-tørrede stilbenbromid (3 g), kobber(II)cyanid (4 g) og dimethylformamid (30 ml) koges i 10 8-12 timer under tilbagesvaling, indtil bromid ikke mere kan påvises ved tyndtlagskromatografi (dichlormethan-petroleumsether(l:2)). Efter afkøling sættes reaktionsblandingen til en opløsning af jern(III)chlorid (4 g), saltsyre (1 ml) og vand (10 ml), og 15 reaktionsblandingen holdes på 70°C i 20 minutter. (Udsugning: HCN-udvikling!). Derefter ekstraheres den afkølede reaktionsblanding med chloroform (5 x 40 ml), vaskes med vand (2 x 20 ml) og tørres med calciumchlorid. Efter fjernelse af opløsningsmidlet omkrystalliseres 20 remanensen fra ethanol.
Udbytte: 2,0 g (70%).
e) Hydrolyse af nitrilet til slutproduktet 25 DK 168705 B1 0_X^CN /0-γ^γ000Η h^o4 I «2c jii
NaOH ^il \^J^0CH3 \i^0CH3 (MG= 277) (MG= 296)
Kemikalier:
Stilbensyrenitril ifølge formlen, 5 NaOH.
Stilbensyrenitril (1 g) opløses i så lidt ethanol som muligt (30-50 ml) under opvarmning, og til blandingen sættes natriumhydroxidopløsning (10 g i 15 ml H2O). Reaktionsblandingen koges under kraftig tilbagesvaling, 10 indtil tyndtlagskromatogrammet (ether) ikke mere påviser cyanid (18-20 timer). Ethanolet afdampes under vakuum, og til remanensen sættes vand (50-100 ml). Den vandige fase ekstraheres med ether (2 x 30 ml) og neutraliseres med 6 N saltsyre. Det fnuggede bundfald forbliver for største-15 delens vedkommende som kolloid i opløsningen. Opløsningen opvarmes kort og henstår i 24 timer.
Det koagulerede bundfald suges fra og omkrystalliseres fra ethanol.
Udbytte: 0,53 g (50%).
26 DK 168705 B1
Eksempel 2.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-2'-methoxy-stilben ved omdannelse af stilbenbromidet til stilben-5 syren_ 1. n-BuLi/Ether 0—fx<^Y^Br 2. CO, /0— 3. saltsyre , \^-0CH3 X^'0CH3
Kemikalier:
Stilbenbromid ifølge formel 17,44 g (0,05 mol), n-BuLi (1,55 molar) 40 ml (0,061 mol), 10 ether 180 ml
Stilbenbromidet opløses i absolut ether og afkøles til -72°C under nitrogen. Til denne reaktionsopløsning sprøjtes forsigtigt n-BuLi og efter tilsætningen opvarmes i løbet af 1 time til stuetemperatur. Opløsningen sættes 15 straks til fast C02/ og blandingen omsættes natten over. Efter tilsætning af vand og adskillelse af faserne ekstraheres den vandige fase med ether (2 x 100 ml). De samlede, vandige faser afkøles i isbad og syrnes med koncentreret saltsyre. Bundfaldet suges fra og vaskes til 20 neutral reaktion med meget vand.
Efter 2 til 3 opkog med vand til fjernelse af smørsyre, der stammer fra n-BuLi, omkrystalliseres råproduktet fra ethanol/H2O.
Udbytte: 9,16 g (58%).
25 Smp.: 199,5°C.
27 DK 168705 B1
Det tilsvarende stilbenbromid kan fremstilles på tilsvarende måde som ovenfor beskrevet i eksempel 1, trinnene a-c.
5 Eksempel 3.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phenanthren__ a) Fotokemisk omdannelse af stilbenderivatet til det tilsvarende phenanthrenderivat.
/°—i^V-Br /0—fT^v-Br HAoHj^T . h2c^0J1 C? Oc \j^0CH3 \i^OCH3 (MG =333) (MG =331) 10 Kemikalier:
Stilbenbromid (cis-forbindelse), 1.2.3.4- tetrahydro-9-fluorenon, cyclohexan, iod.
15 cis-Stilbenbromid (3,3 g, 0,01 mol) opløses i absolut 1.2.3.4- tetrahydro-9-fluorenon (100 ml). Opløsningen fortyndes med absolut cyclohexan (1200 ml), og til blandingen sættes 1,7 g iod. Opløsningen belyses under tilledning af nitrogen med en laboratoriedyklampe med 28 DK 168705 B1 kølerør af typen TQ 150 (Hanau) i 12-14 dage. Reaktionen kontrolleres ved hjælp af tyndtlagskromatografi (CH2Cl2/petroleumsether 30-50°C 1:2). Den organiske fase 5 udrystes med vandig thiosulfatopløsning (3 x 300 ml) for at fjerne det overskydende iod. Efter tørring med MgS04 inddampes den organiske fase ved rotation. Råproduktet omkrystalliseres fra petroleumsether ved 60-90°C.
Udbytte: 1,55 g (47% af det teoretiske).
10 b) Fremstilling af l-cyano-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phenanthren af phenanthrenbromidet.
Omdannelse af phenanthrenbromidet til nitril
^ xO-r^VCN
/0——Br H2C I
H C O—v.
2 "0—Cu(CN)/DMF/^ t I ||
70 1 rV
Π J X^och3 \^och3 3 (MG = 331) (MG = 277)
Kemikalier: 15 Phenanthrenbormid ifølge formel kobber(II)cyanid, N, N-dimethylformamid
En blanding af det forud tørrede phenanthrenbromid (3 g), kobber(II)cyanid (4 g) og dimethylformamid (30 ml) koges i 20 8-12 timer under tilbagesvaling, indtil der ved tyndlags- 29 DK 168705 B1 kromatografi ikke kan påvises bromid (dichlormethan-petro-leumsether (1:2)). Efter afkøling sættes reaktionsblandingen til en opløsning af jern(III)chlorid (4 g), 1 5 ml saltsyre og 10 ml vand, og reaktionsblandingen holdes på 70°C i 20 minutter (udsug: HCN-udvikling!). Derpå ekstraheres den afkølede reaktionsblanding med chloroform (5 x 40 ml), med vand (2 x 20 ml) og tørres med calciumchlorid. Efter fjernelse af opløsningsmidlet 10 omkrystalliseres remanensen fra ethanol.
Udbytte: 2,0 g (70%).
Smp.: 215°C.
c) Hydrolyse af phenanthrensyrenitrilet til phenanthren-syren
/^cn o-r^COOH
(O (Y
\Yoch3 \Y^och3 (MG = 277) (MG = 296)
Kemikalier:
Phenanthrensyrenitril ifølge formel,
NaOH.
Phenanthrensyrenitril (1 g) opløses i så lidt ethanol som 20 muligt (30-50 ml) under opvarmning, og til blandingen sættes natriumhydroxidopløsning (10 g i 15 ml H2O). Reaktionsblandingen koges under kraftig omrøring, indtil 30 DK 168705 B1 tyndtlagskromatogrammet (ether) ikke påviser cyanid (8-20 timer). Ethanolet afdampes under vakuum, og til remanensen sættes vand (50-100 ml). Den vandige fase ekstraheres 5 med ether (2 x 30 ml) og neutraliseres med 6 N saltsyre. Det fnuggede bundfalde forbliver for størstepartens vedkommende i opløsningen som kolloid. Opløsningen opvarmes kort og henstår i 24 timer.
Det koagulerede bundfald suges fra og omkrystalliseres med 10 ethanol.
Udbytte: 0,53 g (50%).
Eksempel 4.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-hydroxy-phenanthren_ 15 1,0 g l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phenanthren bringes til at smelte sammen med 2,0 g pyridinhydrochlorid i oliebad ved 170°C, og blandingen holdes under begasning med nitrogen i 1 time på denne temperatur. Efter afkøling optages den størknede masse ved hjælp af 10 liter 5%' s 20 saltsyre, og der ekstraheres med 3 x 10 liter chloroform.
De samlede ekstrakter vaskes med vand til neutral pH-vær-di, og der filtreres til tørhed over silaniseret filtrerpapir (Whatman 1 PS). Efter afdampning af opløsningsmidlet ved 30°C i rotationsfordamper forestres blandingen 25 af udgangsmateriale og hydrolysat med henblik på adskillelse, idet blandingen destilleres med en blanding af 2,5 ml methanol og 0,1 liter koncentreret H2SO4 i 3 timer under tilbagesvaling. Derpå hældes blandingen i 10 liter vand, og vand-methanol-fasen udrystes med 3 x 10 liter 30 diisopropylether. Det organiske opløsningsmiddel vaskes flere gange med vand og ekstraheres derpå med 10 liter 31 DK 168705 B1
NaOH-opløsning, hvorved methylesteren af 8-methoxy-for-bindelsen forbliver i det organiske lag, og 8-hydroxy— forbindelsen under samtidig esterhydrolyse overføres til 5 den vandige fase. Efter udvaskning med frisk diisopropyl-ether syrnes den basiske fase, hvorpå den udrystes flere gange med chloroform, tørres med faseadskillelsespapir Whatman 1 PS, og opløsningsmidlet afdampes i rotationsfordamper . 1-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-hydroxy- 10 phenanthren bliver tilbage som tyndtlagskromatografisk ensartet forbindelse i fast form.
Fluorescens: (MeOH, Xmax, nm): Impuls: 261, 302, 318, 329, 358, 377
Emission: 336, 402 15 Udbytte: 0,714 g (75%).
Eksempel 5.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phenanthren ved reduktion af nitrogruppen 5 g aristolochiasyre I opløses i 1500 ml 1%’s vandig 20 natriumcarbonatopløsning, og blandingen filtreres derpå over i en 5 liter kolbe. Til denne klare saltopløsning sættes 1500 ml handelsgængs ammoniumpolysulfidopløsning. Reaktionsblandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur (udsugningI) og opbevares i lukket tilstand natten over.
25 Til blandingen sættes 1500 ml demineraliseret vand, og blandingen syrnes ved dråbevis tilsætning under omrøring med ca. 550 ml koncentreret saltsyre. Den herved fremkomne udfældning filtreres fra og eftervaskes med vand. Den vandige fase ekstraheres med 1500 ml ethylacetat. Ethyl-30 acetatfasen sættes til det udrørte bundfald, og udrøringen gentages derefter med 2 x 1500 ml ethylacetat. De organiske faser forenes og vaskes med 2 x 500 ml vand. Derpå ekstraheres ethylacetatopløsningen med 4 x 750 ml 32 DK 168705 B1 2%'s vandig natriumhydroxidopløsning. Den organiske fase kasseres, og den basisk-vandige opløsning indstilles med koncentreret saltsyre til pH 4-3, og udrystes derpå igen 5 med 4 x 1000 ml ethyl acetat. De forenede, organiske faser vaskes med 3 x 750 ml vand. Den vaskede, organiske fase tørres med natriumsulfat, og efter filtrering inddampes den i vakuum til tørhed (badtemperatur ca. 30°C).
Udbytte: 3,1 g 10 Smp.: 285°C (sønderdeling).
Stoffet renses ved omkrystallisation fra ethylacetat.
Eksempel 6.
Fremstilling af l-carboxy-3,4-methylendioxy-8-ethoxy-phenanthren 15 På i alt væsentligt samme måde som beskrevet i eksempel 3b) og c) og vist i nedenstående reaktionsskema fremstilles ovenstående forbindelse.
O-^S-Br u J3—Ti^rCOOH
H,Cn I CuCN/DMF Hjt^O—1[ JL 1- Na0H’ * u—li ^0-150°C ^ -VS EtOH, ^ \\\ i^l] 12 h XJI 2. hci i^l-OEt . X^I-OEt i 2 3 1 = l-Brom-3,4-methylendioxy-8-ethoxy-phenanthren 20 2 = l-Cyano-3,4-methylendioxy-8-ethoxy-phenanthren 3 = l-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-ethoxy-phenanthren 33 DK 168705 B1
Udbytte: 55%, snip.: 284-287°C (DMF).
Analyse for C18H14O5 (310,31)
Beregnet: C 69,67, H 4,55 5 Fundet: C 67,80, H 4,77 IR (KBr): p = 3370, 3182 (OH), 1642 (C=0), 1591 cm-1 (C=Carom).
’H-NMR (CDCI3/TMS: I = 1,53 (t, 3H, CH2CH3), 4,30 (q, 2H, CH2CH3), 6,46 (S, 2H, OCH2O), 7,24, 7,62, 8,07, 8,28, 8,66 10 (3d, 2m, MS = m/z = 310 (M+, 14%), 309 (M+, -lf 66%), 291 (M+, +1, -18, 100%)
Claims (3)
1 Ri betyder ethoxy, og R2 og R3 hver for sig betyder et H-atom, eller
1. Methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel 5 (I) hvor
2. Fremgangsmåde til fremstilling af methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater eller farmaceutisk acceptable salte deraf ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 15 6-brom-piperonylbromid med formlen 0_\^>i~CH2Br omsættes triphenylphosphin i et vandfrit opløsningsmiddel til dannelse af phosphoniumsaltet med formlen DK 168705 B1 HoCC ♦ % . O-X^-CtøPtPhfeBr som omsættes med benzaldehyd, O-methoxybenzaldehyd eller ortho-ethoxybenzaldehyd i nærværelse af en stærk base til 5 dannelse af en stilben med formlen H2<oQrBr oc, hvori Ri er H, OCH3 eller OC2H5, hvorpå stilbenbromidet omdannes enten med et metalcyanid, især kobbercyanid, i et polært aprotisk opløsningsmiddel, især i dimethylformamid, 10 til det tilsvarende nitril, som ved hydrolyse omdannes til en syre med formlen (I), eller stilbenbromidet omdannes med n-butyl-lithium og carbondioxid til en syre med formlen (I), eller stilbenbromidet omdannes ved UV-bestråling til phenanthrenderivatet med formlen der omdannes med et metalcyanid eller med n-butyllithium og kulsyre på den ovenfor nævnte måde til en syre med formlen (I), hvorpå en phenanthrenforbindelse med formlen (I), hvor Ri er en OCHø-gruppe, ved en etherspaltning 20 omdannes til en forbindelse, hvor R^ er hydroxyl, eller en DK 168705 B1 nitroforbindelse med formlen ν'»4ΐΝ„, hvor R]_ er H eller OCH3, denitreres med et polysulfid til 5 en forbindelse med formlen (I), og, når er OCH3, omdannes 0CH3~gruppen til en OH-gruppe ved etherspaltning.
2 Ri betyder et H-atom, hydroxy eller ethoxy, og R2 og R3 10 sammen danner en aromatisk C-C-binding, og deres farmaceutisk acceptable salte.
3. Lægemiddel, kendetegnet ved, at det indeholder mindst én forbindelse med den almene formel o— S π <«,) 10 hvor R]_ er hydrogen, methoxy eller ethoxy, og R2 og R3 hver for sig er et H-atom eller sammen danner en aromatisk C-C-binding, i hvilket tilfælde R^ også kan betyde hydroxyl, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, eventuelt i et farmaceutisk acceptabelt bærestof.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853530718 DE3530718A1 (de) | 1985-08-28 | 1985-08-28 | Methylendioxyphenanthren- und -stilbenderivate, verfahren zur herstellung derselben und arzneimittel, die diese enthalten |
| DE3530718 | 1985-08-28 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK407586D0 DK407586D0 (da) | 1986-08-27 |
| DK407586A DK407586A (da) | 1987-03-01 |
| DK168705B1 true DK168705B1 (da) | 1994-05-24 |
Family
ID=6279566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK407586A DK168705B1 (da) | 1985-08-28 | 1986-08-27 | Methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater og farmaceutisk acceptable salte deraf, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt farmaceutiske præparater indeholdende methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater eller farmaceutisk acceptable salte der af |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4835178A (da) |
| JP (1) | JPS62167776A (da) |
| KR (1) | KR880000179B1 (da) |
| AR (1) | AR242568A1 (da) |
| AT (1) | AT398568B (da) |
| BE (1) | BE905340A (da) |
| CH (1) | CH673457A5 (da) |
| DD (1) | DD266800A5 (da) |
| DE (1) | DE3530718A1 (da) |
| DK (1) | DK168705B1 (da) |
| ES (1) | ES2001893A6 (da) |
| FI (1) | FI92396C (da) |
| FR (1) | FR2586681B1 (da) |
| GB (1) | GB2179347B (da) |
| HU (3) | HU199446B (da) |
| IE (1) | IE59239B1 (da) |
| IT (1) | IT1197467B (da) |
| LU (1) | LU86556A1 (da) |
| MX (2) | MX172917B (da) |
| NL (1) | NL8602127A (da) |
| NO (1) | NO863434L (da) |
| PL (2) | PL154026B1 (da) |
| PT (1) | PT83258B (da) |
| SE (1) | SE465153B (da) |
| SU (1) | SU1731053A3 (da) |
| YU (2) | YU44061B (da) |
| ZA (1) | ZA866487B (da) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE432983T1 (de) * | 1989-12-15 | 1992-03-19 | Pharma Mar, S.A., Madrid | Neue verbindungen des diterpentyps. |
| ATE116637T1 (de) * | 1991-02-05 | 1995-01-15 | Merrell Dow Pharma | Sulfonische stilbenderivate zur behandlung von viruserkrankungen. |
| WO1993016992A1 (en) * | 1992-02-20 | 1993-09-02 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Sulfonic acid derivatives in the treatment of viral diseases |
| US5334615A (en) * | 1992-12-17 | 1994-08-02 | Walles Wilhelm E | Oil with bactericidal and virucidal properties |
| US5739166A (en) * | 1994-11-29 | 1998-04-14 | G.D. Searle & Co. | Substituted terphenyl compounds for the treatment of inflammation |
| CN112778264B (zh) * | 2021-01-21 | 2023-09-15 | 江西农业大学 | 马兜铃次酸衍生物及其在制备抗炎药物中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4122092A (en) * | 1977-08-25 | 1978-10-24 | University Of Rochester | Total synthesis of (±)-picropodophyllone and (±)-4'-demethylpicropodophyllone |
| JPS57106677A (en) * | 1980-12-22 | 1982-07-02 | Kureha Chem Ind Co Ltd | N-(3,4-methylenedioxybenzylidene) aminomethylcyclohexane-carboxylic acid, and salt of said carboxylic acid |
-
1985
- 1985-08-28 DE DE19853530718 patent/DE3530718A1/de active Granted
-
1986
- 1986-08-08 AT AT0215186A patent/AT398568B/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-12 GB GB8619644A patent/GB2179347B/en not_active Expired
- 1986-08-13 FI FI863282A patent/FI92396C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-08-20 AR AR86304988A patent/AR242568A1/es active
- 1986-08-20 LU LU86556A patent/LU86556A1/de unknown
- 1986-08-21 NL NL8602127A patent/NL8602127A/nl not_active Application Discontinuation
- 1986-08-22 YU YU1475/86A patent/YU44061B/xx unknown
- 1986-08-25 CH CH3406/86A patent/CH673457A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-26 IT IT8621526A patent/IT1197467B/it active
- 1986-08-26 SE SE8603589A patent/SE465153B/sv not_active IP Right Cessation
- 1986-08-26 MX MX003550A patent/MX172917B/es unknown
- 1986-08-27 HU HU863711A patent/HU199446B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 ES ES8601409A patent/ES2001893A6/es not_active Expired
- 1986-08-27 HU HU895304A patent/HU202104B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 BE BE0/217092A patent/BE905340A/fr not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 DK DK407586A patent/DK168705B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 SU SU864028078A patent/SU1731053A3/ru active
- 1986-08-27 FR FR868612129A patent/FR2586681B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1986-08-27 ZA ZA866487A patent/ZA866487B/xx unknown
- 1986-08-27 HU HU895304A patent/HU895304D0/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 PL PL1986268178A patent/PL154026B1/pl unknown
- 1986-08-27 PL PL1986261196A patent/PL148757B1/pl unknown
- 1986-08-27 NO NO863434A patent/NO863434L/no unknown
- 1986-08-27 IE IE228886A patent/IE59239B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 DD DD86293892A patent/DD266800A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 PT PT83258A patent/PT83258B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-08-28 JP JP61200261A patent/JPS62167776A/ja active Granted
- 1986-08-28 KR KR1019860007146A patent/KR880000179B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-06-19 YU YU1149/87A patent/YU43998B/xx unknown
-
1988
- 1988-03-22 US US07/171,695 patent/US4835178A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-12-27 US US07/457,353 patent/US5024743A/en not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-01-27 MX MX9300436A patent/MX9300436A/es unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2950616B2 (ja) | トリテルペン誘導体 | |
| JP2000502708A (ja) | ビトロネクチン受容体拮抗物質 | |
| JPS6212795A (ja) | 新規なプソラレン誘導体 | |
| JP2724114B2 (ja) | トリテルペン誘導体およびそれを含有するエンドセリンレセプター拮抗剤 | |
| DK168705B1 (da) | Methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater og farmaceutisk acceptable salte deraf, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt farmaceutiske præparater indeholdende methylendioxyphenanthren- og stilbenderivater eller farmaceutisk acceptable salte der af | |
| KR890001425B1 (ko) | 피리도 [2,3-d] 피리미딘-5-온류 및 그의 제법 | |
| DK155663B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af n-oe6-(fluorsubstitueret phenoxy)-5-indanylaa-methansulfonamidderivater | |
| CA2416537A1 (en) | Calcilytic compounds | |
| WO1999007382A1 (en) | Macrophage scavenger receptor antagonists for use in the treatment of cardiovascular diseases | |
| JPH01268689A (ja) | 新規なベンゾイミダゾ〔１，２―ｃ〕キナゾリン、その製造及び用途 | |
| JPS5946283A (ja) | １，３−ジオキソロ（４，５−ｇ）キノリンおよびその製造方法 | |
| JPS59204167A (ja) | ヒドロキノン誘導体およびその製法 | |
| JPH0667880B2 (ja) | ｇｅｍ−ジハロ−１，８−ジアミノ−４−アザ−オクタン類 | |
| CA3089666A1 (en) | Ghrelin o-acyltransferase inhibitors | |
| KR100279179B1 (ko) | 크산톤 유도체, 이의 제조방법 및 용도 | |
| FI63396C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av pao gallavsoendringen verkande /2-isopropyl-4-(2-tenoyl-5-metyl/-fenoxiaettiksyra | |
| NO175635B (da) | ||
| NO174808B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive metylendioksyfenantren-derivater | |
| EP0094059B1 (en) | Novel aminonaphthacene derivatives and process for preparation thereof | |
| JPS6097976A (ja) | ６Ｈ‐ジベンズ〔ｂ，ｆ〕チエピン化合物 | |
| JPS61236779A (ja) | ３環式化合物 | |
| JPS59112985A (ja) | クマリン誘導体、その製造法およびそれを有効成分とする抗アレルギ−剤 | |
| CN106946835A (zh) | 橙皮素酯化物及其制备方法和应用 | |
| JPH02212420A (ja) | 抗レトロウィルス剤としてのアリーロキシアルカノール類 | |
| EP1048640A1 (en) | Apoptosis inhibitors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |