[go: up one dir, main page]

DK165731B - Anvendelse af chitin eller chitosanoligomerer til fremstilling af immunopotenserende midler - Google Patents

Anvendelse af chitin eller chitosanoligomerer til fremstilling af immunopotenserende midler Download PDF

Info

Publication number
DK165731B
DK165731B DK550685A DK550685A DK165731B DK 165731 B DK165731 B DK 165731B DK 550685 A DK550685 A DK 550685A DK 550685 A DK550685 A DK 550685A DK 165731 B DK165731 B DK 165731B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
chitin
oligomers
solution
tumor
mice
Prior art date
Application number
DK550685A
Other languages
English (en)
Other versions
DK550685A (da
DK550685D0 (da
DK165731C (da
Inventor
Shigeo Suzuki
Masuko Suzuki
Hitoshi Katayama
Original Assignee
Ihara Chemical Ind Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP25276184A external-priority patent/JPS61130230A/ja
Priority claimed from JP60109854A external-priority patent/JPH0615476B2/ja
Application filed by Ihara Chemical Ind Co filed Critical Ihara Chemical Ind Co
Publication of DK550685D0 publication Critical patent/DK550685D0/da
Publication of DK550685A publication Critical patent/DK550685A/da
Publication of DK165731B publication Critical patent/DK165731B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK165731C publication Critical patent/DK165731C/da

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

i
DK 165731 B
Den foreliggende opfindelse angår anvendelse af en chitinoligomer eller en chitosanoligomer som den aktive bestanddel til fremstilling af et præparat, som forøger 5 immunresponset i levende dyr og mennesker.
Det er kendt, at patienter med nedsat immunfunktion, f.eks. patienter med tumorer og patienter, hvis immunrespons er nedsat til et usædvanligt lavt niveau ved forudgående indgift af et immunosuppresivt middel inden 10 kirurgiske operationer med henblik på at lette transplantationen af indre organer, er yderst følsomme for den opportunistiske infektion med bakterier og svampe således, at der også er et behov for nye immunopotenserende midler, der er effektive til bekæmpelse og/eller tera-15 peutisk behandling af bakterie- og svampeinfektionerne.
Der er fornyligt udviklet en række nye midler til terapeutisk bekæmpelse og behandling af bakterie- og svampeinfektioner, og disse midler indeholder chitin eller chitosan som de aktive bestanddele, der udviser den 20 immunopotenserende virkning til imødekommelse af ovennævnte behov, jf. japansk patentpublikation "Kokai" Sho 59-27827 offentliggjort den 14. februar 1984. Chitin og chitosan er let tilgængelige, da de forekommer i store mængder i naturen, f.eks. i cellevæggene i Crustacea, 25 såsom krabber og hummere.
Der kendes endvidere adskillige midler til terapeutisk behandling af maligne tumorer, der som aktiv bestanddel indeholder et polysaccharid eller polysaccharider isoleret fra celler fra mikroorganismer eller fra stofskif-30 teprodukterne fra mikroorganismer. Som et eksempel kan nævnes lentinan, der er et polysaccharid isoleret fra frugtlegemet af en svamp med betegnelsen "shiitake" (Cortinellus shiitake), jf. japansk patentpublikation nr. 37002/72 og nr. 484/74, et antitumor-polysaccharid-35 proteinkompleks isoleret fra en svamp med betegnelsen "kawaratake" i Japan (Coriolus versicolor) jf. japansk
DK 165731 B
2 patentpublikation nr. 2371/80 og nr. 40159/82, US-pa-tentskrift nr. 4.271.151 og nr. 4.289.688, GB-patent-skrift nr. 1.565.090 og CA-patentskrift nr. 1.084.488, og 5 et antitumormiddel, der som aktiv bestanddel indeholder lipopolysaccharider isoleret fra cellevæggen fra Mycobacterium tuberculosis, som er virulent over for mennesker, jf. japansk patentansøgning "Kokai" Sho 57-18617 offentliggjort den 30 januar 1982. Der kendes 10 endvidere et antitumormiddel, der som aktiv bestanddel indeholder chitin, der er et polysaccharid sammensat a£ N-acetylglucosaminrester, og som forekommer i store mængder i naturen, jf. japansk patentansøgning "Kokai"
Sho 59-27826 offentliggjort den 14. februar 1984 og 15 "Microbiology and Immunology" 2, 93, 1984.
De ovenfor omtalte terapeutiske midler, som indeholder chitin eller chitosan som aktiv bestanddel, har bemærkelsesværdige terapeutiske virkninger til bekæmpelse og behandling af tumorer. Imidlertid er både chitin og chito-20 san vanskelige at formulere i vandige injektionsopløsninger til intravenøs indgift, da chitin og chitosan er vanduopløselige polymerer og derfor ikke er helt tilfredsstillende i praksis til anvendelse ved klinisk terapeutisk behandling af tumorer.
25 Det er formålet med den foreliggende opfindelse at afhjælpe de ovenfor omtalte ulemper ved chitin og chitosan, når disse anvendes som antitumormidler.
USA-patentskrift nr. 3.914.413 beskriver et farmaceutisk præparat indeholdende delvis depolymeriseret chitin, 30 f.eks. chitobiose og chitotriose, som forbedrer helingen af sår, især hos patienter, der undergår cortisonbehand-ling. Dette farmaceutiske præparat kan have form af en injektionsopløsning, da chitobiose og chitotriose er vandopløselige chitinoligomere.
3
DK Λ 65731 B
Det har overraskende vist sig, at visse vandopløselige chitinoligomerer (der også betegnes N-acetyl-chito-oligosaccharider), som er kendt som hydrolyseprodukter af 5 chitin, og visse vandopløselige chitosanoligomerer (der også betegnes som chitooligosaccharider), som også er kendt som hydrolyseprodukter af chitosan, har immuno-potenserende virkninger, idet de stimulerer og forøger immunresponset i levende dyr og mennesker og udviser 10 antitumorvirkning i disse organismer.
De vandopløselige chitinoligomerer, som anvendes ifølge opfindelsen på grund af deres immunopotenserende virkninger, har den almene formel
CHjOH ' Cf^OH ' CH2 OH
<Ia) H0 NHOOCHj NHCOCHj NHC0CH3 k J n 15 hvori n er et helt tal på 3-5, idet n er 3 i tilfælde af penta-N-acetylchitopentaose, n er 4 i tilfælde af hexa-N-acetyl-chitohexaose, og n er 5 i tilfælde af hepta-N-ace-tyl-chitoheptaose.
De vandopløselige chitosanoligomerer, som anvendes ifølge 20 opfindelsen på grund af deres immunopotenserende virkninger, har den almene formel
<j^0H I CHj OH CH2 OH
» »4 i«, i.
k Jn 1
DK 165731 B
4 hvori n er et helt tal på 3-5, idet n er 3 i tilfælde af chitopentaose, n er 4 i tilfælde af chitohexaose, og n er 5 i tilfælde af chitoheptaose.
5 I overensstemmelse hermed anvendes ifølge opfindelsen pent a-N- acetyl -chitopentaose, hexa-N - acetyl -chitohexaos e, hepta-N-acetyl-chitoheptaose, chitopentaose, chitohexaose eller chitoheptaose til fremstillingen af et immunopoten-serende middel til forbedring af immunresponset mod væk-10 sten af tumorer.
Chitinoligomerernes fremstilling og nogle af deres egenskaber er eksempelvis beskrevet i Journal of Chemical Society (C), 1970, s. 1654-1655, og fremstillingen af chitosanoligomererne og nogle af deres egenskaber er 15 eksempelvis beskrevet i Journal of American Chemical Society, 79, 5046-5049, 1957.
Det immunopotenserende middel kan foreligge i form af et farmaceutisk præparat, som indeholder én eller flere af de immunopotenserende chitinoligomerer og chitosanoligo-20 merer som aktiv bestanddel i en immunopotenserende virksom mængde deraf i blanding med et farmaceutisk acceptabelt, flydende eller fast bærestof, som er kendt, og som sædvanligvis anvendes ved formulering af lægemidler, såsom fysiologisk saltopløsning, stivelse eller talkum. Blandt 25 de ovenfor beskrevne immunopotenserende chitinoligomerer og chitosanoligomerer foretrækkes især hexa-N-acetyl-chitohexaose, idet sidstnævnte forbindelse foretrækkes, da den har de kraftigste virkninger.·
Det immunopotenserende middel kan fordelagigt formuleres 30 som en vandig injektionsopløsning af den aktive forbindelse på konventionel måde under anvendelse af den høje vandopløselighed af chitinoligomeren eller chitosanoligo-meren, der anvendes som den aktive bestanddel. Den således fremstillede vandige injektionsopløsning kan ikke blot DK 165731 d 5 indgives intravenøst, men også subkutant, intrakutant, intramuskulært eller intraperitonealt. Det immuno-potenserende middel kan også formuleres til tabletter 5 eller pulvere til oral indgift ved blanding med et kendt farmaceutisk acceptabelt fast bærestof. Den således fremstillede vandige injektionsopløsning kan indeholde fra 0,1 til 10 vægt-% chitinoligomer med formlen (la) eller chitosanoligomer med formlen (Ib). Det immunopoten-10 serende middel i form af tabletter eller pulvere kan indeholde fra 10 til 30 vægt-% chitinoligomer med formlen (la) eller chitosanoligomer med formlen (Ib).
Ved eksperimentelle forsøg har det vist sig, at alle de pågældende seks forbindelser, som er omfattet af chitin-15 oligomererne med formlen (la) og af chitosanoligomererne med formlen (Ib), fremmer den cellulære immunitet, dvs. den cellemedierede immunitet samt den humorale immunitet hos mus og andre levende dyr og mennesker, og stimulerer og forøger immunresponset i værtsdyr, således at væksten 20 af tumorer inhiberes. Det har også vist sig, at det immu-nopotenserende middel er virksomt som antitumormiddel til inhibering af væksten af tumorer, herunder forskellige musecancerceller, såsom Sarcoma-180, Ehrlich carcinoma, MM-46 og Meth-A.
25 Det immunopotenserende middel, som anvendes til at forøge immunresponset mod væksten af tumorer, indeholder en effektiv mængde af en chitinoligomer med formlen (la) eller en chitosanoligomer med formlen (Ib) i kombination med et farmaceutisk acceptabelt bærestof. Til cancer-30 immunoterapi indgives det immunopotenserende middel i en mængde svarende til en effektiv dosis af den aktive bestanddel på fra 1 til 500 mg/kg/dag, fortrinsvis fra 10 til 150 mg/kg/dag.
Det immunopotenserende middel har den fordel, at chitin-35 oligomererne med formlen (la) eller chitosanoligomererne
DK 165731 B
6 med formlen (Ib), der anvendes som den aktive bestanddel, er meget sikrere for mennesker, da de praktisk taget er ugiftige for mennesker og ikke fremkalder nogen som helst 5 bivirkninger i praksis ved indgift til mennesker, at de vandopløselige chitinoligomerer og chitosanoligomerer let kan formuleres til vandige injektionsopløsninger og derfor let kan indgives til mennesker, at udviklingen af de terapeutiske virkninger efter indgivelsen af midlet sker 10 hurtigt, at midlet kan formuleres til injektionspræparater til intravenøs indgift, hvilket i praksis har været umuligt med de hidtil kendte antitumormidler, herunder chitin og chitosan, som aktiv bestanddel, og at de aktive oligomere forbindelser, som anvendes i midlet, 15 let kan isoleres og renses til et rent produkt på grund af deres relativt enkle kemiske struktur og deres lave molekylvægt.
Det er kendt, at nogle terapeutisk midler, såsom antibiotika, lægemidler, antitumormidler og hormoner, kan ind-20 kapsles i liposomer, som er unilamellare eller multila-mellare phospholipidvesikler, og at liposomer tjener som bærevesikler for det terapeutiske middel, som er indesluttet deri, og tillige bevirker forøget optagelse af det terapeutiske middel i målorganerne eller målvævene in vivo 25 efter indgift, jf. eksempelvis artiklen "New Aspects of Liposomes" i "Biochimica et Biophysica Acta, 457,. 259-302, 1976, "Proc. Natl. Acad. Sci. USA" 73, nr. 5, 1603-1607, 1976 og "Cancer Research", 39, 881-892, 1979. Det har nu vist sig, at når en vilkårlig af chitinoligomererne med 30 formlen (la) eller chitosanoligomererne med formlen (Ib) indkapsles i de kendte liposomer, bevirker disse oligo-merer yderligere forbedret immunopotenserende virkninger med henblik på inhibering af væksten af tumorer. Liposom-præparaterne indeholdende chitinoligomerer med formlen 35 (la) eller chitosanoligomerer med formlen (Ib) i phospho-lipidvesiklerne kan fremstilles under anvendelse af kendte fremgangsmåder til fremstilling af liposompræ- parater.
DK 165731 B
7
Liposomerne til indkapsling af chitinoligomererne eller chitosanoligomererne kan sædvanligvis bestå af de kendte unilamellare vesikler eller multilamellare vesikler dannet 5 af filmdannende phospholipidmateriale, herunder naturlige phospholipider, såsom phosphatidylcholin, dvs. lecithin, phosphatidylethanolamin, phosphatidylserin, phosphat-idylinositol, phosphatidylglycerol og sphingomyelin, samt syntetiske phospholipider, såsom dipalmitoylphosphati-10 dylcholin, disteatoylphosphatidylcholin og dipalmitoyl-phosphatidylethanolamin. De filmdannende phospholipid-materialer kan om ønsket være blandet med en passende mængde konventionel stabiliseringsmiddel, feks. cholesterol, dicetylphosphat, phosphatidsyre, stearylamin og 15 andre elektrisk ladede lipider, samt α-tocopherol.
En brugbar fremgangsmåde til fremstilling af liposomer, hvori chitinoligomererne eller chitosanoligomererne er indesluttet, kan eksempelvis omfatte følgende trin: En opløsning af det liposome filmdannende phospholipidmate-20 riale i et organisk opløsningsmiddel, såsom chloroform eller ethanol, anbringes i en beholder, det organiske opløsningsmiddel afdampes helt eller delvis i vakuum fra phospholipidopløsningen i beholderen til dannelse af en fast tynd film af phospholipidmaterialet på beholderens 25 indre overflade, en opløsning af den aktive chitinoligo-mer eller chitosanoligomer i vand, fysiologisk saltopløsning, pufret phosphatopløsning, pufret tris-aminomethan-opløsning eller i en vandig opløsning af glucose eller sorbitol sættes til beholderen, hvorefter beholderind-30 holdet omrøres mekanisk eller under anvendelse af ultralyd, indtil der er dannet en flydende suspension af liposomerne. Liposompræparaterne kan eksempelvis også fremstilles ved at blande en vandig opløsning af chitin-oligomeren eller chitosanoligomeren med en opløsning af 35 det liposome filmdannende phospholipidmateriale i et vandublandbart organisk opløsningsmiddel, såsom diethyl-ether eller diisopropylether, hvorpå den dannede væske-
DK 165731 B
8 blanding emulgeres ved mekanisk omrøring eller under anvendelse af ultralyd, hvorpå det organiske opløsningsmiddel afdampes helt eller delvis i vakuum fra den dannede 5 emulsion, således at der dannes en suspension af liposo-merne.
Liposomerne i den således dannede suspension kan derpå renses ved isolering af liposompartiklerne fra det flydende medium i suspensionen ved centrifugering, gendi-10 spergering af de isolerede partikelformede liposomer i et vandigt flydende medium, hvori chitinoligomeren eller chitosanoligomeren er opløselig, og efterfølgende adskillelse af liposompartiklerne ved centrifugering fra den dannede dispersion. Den først fremstillede suspension af 15 liposomerne kan også ledes gennem en søjle med et gelfiltreringsmiddel, såsom "Sephadex"®, med henblik på rensning.
Liposomerne indeholdende chitinoligomererne eller chito-sanoligomererne renset på den ovenfor beskrevne måde kan 20 anvendes som sådan i form af den ovenfor beskrevne væskesuspension. De isolerede partikelformede liposomer kan gendispergeres i et passende flydende medium, således at de er brugsfærdige. Eventuelt kan suspensionen af liposomerne frysetørres til adskillelse af liposompartikler-25 ne, som derpå gendispergeres i et passende væskemedium. Under alle omstændigheder kan liposomerne indeholdende chitinoligomererne eller chitosanoligomerne formuleres som injektionspræparater til intravenøs eller intraperitoneal indgift i form af en dispersion i et passende flydende 30 vandigt medium. Chitinoligomeren med formlen (la) eller chitosanoligomeren med formlen (Ib) i form af liposom-præparat kan indgives svarende til en dosis af oligomeren på 1 til 500 mg/kg/dag, fortrinsvis 10-150 mg/kg/dag med henblik på antitumorbehandling ved hjælp af 3 5 immunopotensering.
9 UK lbb/^1 d
Opfindelsen illustreres nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler.
Eksempel 1
Dette eksempel illustrerer fremstillingen af en injek-5 tionsopløsning af penta-N-acetyl-chitopentaose.
10 g penta-N-acetyl-chitopentaose opløses i et passende rumfang fysiologisk saltopløsning fremstillet til injektionsformål til et samlet rumfang på 1000 ml. Den færdige opløsning formuleres til et injektionsopløsnings-10 præparat under anvendelse af standardfremgangsmåden til fremstilling af injektionspræparater som beskrevet i japansk Pharmacopeia nr. 10.
Eksempel 2
Dette eksempel illustrerer fremstillingen.af en injek-15 tionsopløsning af hexa-N-acetyl-chitohexaose.
10 g hexa-N-acetyl-chitohexaose opløses i et passende rumfang fysiologisk saltopløsning fremstillet til injektionsbrug til et samlet rumfang på 1000 ml. Den færdige opløsning formuleres til et injektionsopløsnings-20 præparat under anvendelse af den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde.
Eksempel 3
Dette eksempel illustrerer fremstillingen af en injektionsopløsning af chitohexaose.
25 10 g chitohexaose opløses i et passende rumfang fysiologisk saltopløsning fremstillet til injektionsformål til et samlet rumfang på 1000 ml. Den færdige opløsning formuleres til et injektionsopløsningspræparat under anvendelse af den i eksempel 1 beskrevne fremgangs-30 måde.
DK 165731 B
10
Eksempel 4
Dette eksempel viser chitinoligomerernes forøgende virkning på det humurale antistofrespons.
Der fremstilles en injektionsopløsning på samme måde som 5 beskrevet i eksempel 1-3 indeholdende den i tabel 1 anførte chitinoligomer. Injektionsopløsningen injiceres intravenøst i halen på BALB/C-mus (hanmus, 4-6 uger gamle, 6 mus pr. gruppe) i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg en gang om dagen i tre på hinanden følgende 10 dage, i alt tre gange. En dag senere immuniseres de behandlede mus med 1 x 10® røde blodlegemer fra får (SEBC) som antigenet ved intravenøs injektion. 4 dage ' senere bortopereres milten fra forsøgsmusene, og antallet af antistofdannende celler pr. milt bestemmes ved 15 hjælp af Jernes hæmolytiske plaqueanalysemetode udtrykt ved antallet af plaquedannende celler med henblik på at bedømme forsøgsforbindelsens forstærkende virkning på antistofdannelsen i milten.
Der gennemføres et kontrolforsøg under anvendelse af den 20 ovenfor beskrevne fremgangsmåde, idet man blot anvender fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindelse.
Forsøgsresultaterne udtrykt som en gennemsnitsværdi -standardafvigelse er anført i tabel 1.
DK 165731 B
11
Tabel 1
Virkning af chitinoligomer på det humorale antistofrespons i miltceller fra mus.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af aktiv Antal antistof- 5 nr. bestanddel (mg/kg x dannende celler _antal indgivelser) pr. milt (x 10^) 1 hexa-N-acetyl-chito- 100 x 3 2,7 - 0,3 hexaose (P «0,01**)
Kontrol- ingen (fysiolo- 10 forsøg gisk saltopløs- 0,1 ml x 3 1,7 - 0,08 ning)
Eksempel 5
Dette eksempel viser chitinoligomerernes forøgende virk-15 ning på den cellulære immunitet i mus.
Der fremstilles en injektionsopløsning på samme måde som beskrevet i eksempel 1-3 indeholdende en chitinoligomer eller en chitosanoligomer som anført i tabel 6. Injektionsopløsningen indgives intraperitonealt til BALB/C-20 mus (hanmus, 4-6 uger gamle, 6 mus pr. gruppe) i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg én gang om dagen i 3 på hinanden følgende dage, i alt 3 gange.
O
En dag senere immuniseres de behandlede mus med 1 x 10 røde blodceller fra får (SRBS) som antigenet ved 25 injektion af SRBC i trædepuden på bagpoten. Fire dage 8 senere indgives musene igen SRBC ved injektion af 1 x 10 SRBC i trædepuden på den anden bagpote til bedømmelse af responset af den forsinkede type hypertensivitet (D.T.H.). En forøget tykkelse af trædepuden angiver 30 forsøgsforbindelsens forøgende virkning på den cellemedi-
DK 165731 B
12 erede (cellulære) immunitet.
Der gås frem på samme måde som beskrevet ovenfor, idet man dog anvender fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindelse. Dette forsøg tjener til kontrolforsøg.
5 Der gennemføres endvidere et forsøg, hvor man også går frem som beskrevet ovenfor, idet man dog anvender chitin som sammenligningsforbindelse.
Resultaterne er anført i nedenstående tabel 2.
Tabel 2 10 Virkning af chitinoligomer på den cellulære immunitet hos mus immuniseret med SRBC.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af aktiv Forøgelse af træde- nr. bestanddel (mg/kg x pudens tykkelse _antal indgivelser (x 0,1 itttt)_ 15 1 penta-N-acetyl- 100 x 3 8,03 - 0,25 chitcpentaose (p < 0,05) 2 hexa-N-acetyl- 100 x 3 10,5 - 0,32 chitohexaose (p < 0,01) 3 hepta-N-acetyl- 100 x 3 8,35 - 0,97 20 chitcheptaose 4 (sanmen- lignings- chitin 100 x 3 9,28 - 0,23 forsøg 1) (P < 0,01)
Kontrol- ingen (fysiolo- 25 forsøg gisk saltopløsning) 0,1 m x 3 6,93 - 0,34
DK 165731 B
13
Eksempel 6
Dette forsøg viser chitinoligomerernes og chitosanoligo-merernes vækstinhiberende virkning på Sarcoma 180 fast tumor i mus.
5 ddY-Mus (hanmus/ SPF, 4-6 uger gamle, 5 mus pr. gruppe) g inokuleres subkutant med Sarcoma 180-tumorceller (1 x 10 celler pr. mus) i musens højre lyske. 7 dage efter inoku-leringen af tumorcellerne foretages intravenøs injektion af en injektionsopløsning fremstillet på samme måde 10 som beskrevet i eksempel 1-3 og indeholdende den i tabel 3 anførte chitinoligomer eller chitosanoligomer i de tumorinficerede mus i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg én gang dagligt med 1 dags mellemrum i 5 på hinanden følgende dage, i alt tre gange. 23 dage 15 efter inokuleringen af tumorcellerne bestemmes tumorens vægt, og inhiberingsforholdet (%) til tumorvægten bestemmes og sammenlignes med resultatet af kontrolforsøget. Kontrolforsøget gennemføres med mus, som er blevet behandlet med tumorpodematerialet og derefter blot er blevet 20 injiceret med fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindelse.
Resultaterne er anført i den efterfølgende tabel 3.
DK 165731 B
14
Tabel 3
Virkning af chitinoligomerer og chitosanoligomerer på væksten af sarcoma 180 fast tumor i ddY-mus.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af Gennemsnits- Inhiberings-nr. aktiv be- vægt af tu- forhold (%) standdel mor (g) (mg/kg x antal irid- _velser)_ 1 hexa-N-acetyl- 100 x 3 0,53 85 chitohexaose 2 chitqpentaose 100 x 3 0,88 75 3 chitohexaose 100 x 3 0,23 94
Kontrol- ingen (fysio- forsøg logisk salt- 0,2 ml x 3 3,51 0 · opløsning)
Eksempel 7 15 Dette eksempel viser chitinoligomerernes og chitosan-oligomerernes vaekstinhiberende virkning på sarcoma 180 fast tumor.
ddY-Mus (hanmus, SPF, 4-6 uger gamle, 7 mus pr. gruppe) 6 inokuleres subkutant med sarcoma 180 tumor (1 x 10 20 celler pr. mus) i musens højre lyske. 7 dage efter ino-kuleringen med tumorcellerne injiceres en injektionsopløsning fremstillet på samme måde som i eksempel 1-3 indeholdende chitinoligomeren eller chitosanoligomeren anført i tabel 4 Intravenøst i de tumorinficerede mus 25 i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg én gang om dagen med 1 dags mellemrum mellem indgivelserne
DK 165731 B
15 af forsøgsforbindelsen i 9 på hinanden følgende dage svarende til i alt 5 indgivelser. 23 dage efter inokule-ringen af tumorcellerne bestemmes tumorvægten og inhiberingsforholdet (%) til tumorvæksten bedømmes 5 sammenlignet med resultatet af kontrolforsøg. Kontrolforsøg gennemføres med mus, som er blevet inokuleret med tumorcellerne og blot har fået injektion af fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindelse.
Forsøgsresultaterne er anført i nedenstående tabel 4.
10 Tabel 4
Virkning af chitinoligomererne og chitosanoligomererne på væksten af sarcoma 180 fast tumor i ddY-mus.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af aktiv Inhiberingsforhold nr. bestanddel (mg/kg x (%) _antal indgivelser)_ 1 hexa-N-acetyl- 100 x 5 100 dhitdhexaose 15 2 chitohexaose 100 x 5 98
Kontrol- ingen (fysiolo- forsøg gisk saltcpløs- 0,2 ml x 5 0 _ninq)_
Eksempel 8
Dette eksempel viser chitinoligomerenes og chitosan-oligomerernes vækstinhiberende virkning på MM-46 fast 20 tumor.
C3H/He-mus (hanmus, SPF, 4-6 uger gamle, 7 mus pr. gruppe) inokuleres subkutant med MM-46 tumorceller (1 x 10^ celler pr. mus) i musens højre lyske. 7 dage efter inokulerin-gen af tumorcellerne foretages intravenøs injektion af 25 en injektionsopløsning fremstillet på samme måde som i eksempel 1-3 indeholdende chitinoligomer eller chitosan-oligomer som anført i tabel 5 i de tumorinficerede mus ,i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg én gang
DK 165731 B
16 om dagen med 1 dags mellemrum mellem indgivelsen af forsøgsforbindelsen i 9 på hinanden følgende dage, i alt 5 gange. 23 dage efter inokuleringen af tumorcellerne bestemmes tumorens vægt og inhiberingsforholdet (%) 5 til tumorvæksten bedømmes sammenlignet med resultaterne af kontrolforsøg. Kontrolforsøg gennemføres under anvendelse af mus, som er blevet behandlet med tumorcellerne, men som kun er blevet injiceret med fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindeIse.
10 Forsøgsresultaterne er anført i nedenstående tabel 5.
Tabel 5
Inhiberende virkning af chitinoligomerer og chitosanoligo-merer på væksten af MM-46 fast tumor i C3H/He-mus.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af Gennemsnits- Inhiberings-nr. aktiv bestand- vægt af forhold (%) del (mg/kg x tumor (g) antal indgi- _velser_ 15 1 hexa-N-acetyl- 100 x 5 0,68 83 chitohexaose 2 chitohexaose 100 x 5 1,80 55
Kontrol- ingen (fysiolo- 0,2 ml x 5 3,96 0 forsøg gisk saltopløsning)
Eksempel 9
Dette eksempel viser chitinoligomerernes inhiberende virk-20 ning på væksten Meth-A tumor.
BALB/C-mus (hanmus, SPF, 4-6 uger gamle, 8 mus pr. gruppe) g inokuleres subkutant med Meth-A tumorceller (1 x 10 celler pr. mus) i musens højre lyske. 14 dage efter inokuleringen med tumorcellerne foretages intravenøs injek-25 tion med en injektionsopløsning fremstillet på samme måde som beskrevet i eksempel 1-3 indeholdende den i tabel 6
DK 165731 B
17 anførte chitinoligomer i den tumorinficerede mus i en dosis af den aktive bestanddel på 100 mg/kg. 23 dage efter inokuleringen af tumorcellerne bestemmes tumorens . vægt og inhiberingsforholdet (%) til tumorvægten bedøm-5 mes sammenlignet med resultaterne af kontrolforsøget. Kontrolforsøget gennemføres på samme måde som beskrevet ovenfor under anvendelse af mus, som inokuleres med tumorceller, og som kun injiceres med fysiologisk saltopløsning uden forsøgsforbindelse.
10 Resultaterne er anført i den efterfølgende tabel 6.
Tabel 6
Virkning af chitinoligomer på væksten af Meth-A fast tumor i BALB/C-mus.
Forsøg Forsøgsforbindelse Dosering af ak- Gennem- Inhiberings-nr. tiv bestanddel snits- forhold (%) (mg/kg x antal vægt af _indgivelser)_tumor (g)_ 15 1 hexa-N-acetyl- 100 x 1 5,42 44 chitohexaose
Kontrol- ingen (fysiologisk forsøg saltopløsning) 0,2 ml x 1 9,59 0
Eksempel 10
Dette eksempel illustrerer fremstillingen af et liposom-præparat indeholdende hexa-N-acetyl-chitohexaose som et 20 eksempel på et af de omhandlede chitinoligomerer.
En opløsning af 14 mg (17,5 ymol) æggeblommelecithin (phosphatirylcholin), 6 mg (7,5 ymol) phosphatidylserin og 15 mg (15 ymol) cholersterol i 5 ml chloroform anbringes sammen med en dråbe tocopherol i en 50 ml rund-25 bundet kolbe. Kolben med indhold opvarmes på et vakuumind-dampningsapparatur til fuldstændig afdampning af chloro-formet fra opløsningen. Et lille rumfang chloroform sættes til kolben, og remanensen i kolben opløses i den tilsatte
DK 165731 B
18 chloroform. Den dannede opløsning destilleres igen under grundig omrøring med en elektromagnetisk omrører, således at der dannes en tynd film hovedsagelig bestående af lecithin på og over kolbens indre overflade, hvoref-5 ter der tilsættes en vandig opløsning af 20 mg hexa-N-acetyl-chitohexaose opløst i 2 ml phosphatpufferopløs-ning med en sådan hastighed, at den samlede mængde tilsatte lipider udgør 20 ymol pr. ml vandig opløsning af chitinoligomer. Kolbeindholdet omrøres yderligere med 10 en elektromagnetisk omrører, indtil der dannes en hvid suspension af liposomerne. Når liposomerne i suspensionen undersøges under et elektronmikroskop viser det sig, at de har form af multilamellare vesikler med en diameter på ca. 1-10 u, og at den vandige opløsning af hexa-15 N-acetyl-chitohexaose er indesluttet i de pågældende liposomvesikler.
Den ovenfor anvendte phosphatpufferopløsning er fremstillet' ved at opløse 0,8 g natriumchlorid, 0,2 g ka-liumchlorid, 0,1 g calciumchlorid, 0,1 g magnesium-20 chlorid-hexahydrat, 2,9 g dinatriumhydrogenphosphat- 12-hydrat og 0,2 g kalium-dihydrogenphosphat i destilleret vand til et samlet rumfang på 1000 ml.
Eksempel 11
Dette eksempel viser den forøgede inhiberingsvirkning 30 af liposomerne indeholdende hexa-N-acetyl-chitohexaose på væksten af sarcoma 180 tumor.
ddY-Mus (hanmus, SPF, 4 uger gamle, 6 mus pr. gruppe)
C
inokuleres subkutant med sarcoma 180 tumorceller (5 x 10
DK 165731 B
19 celler pr. mus) i musens højre lyske. 7 dage efter ino-kuleringen af tumorcellerne foretages intravenøs injektion i halen af de tumorinficerede mus med den i eksempel 10 fremstillede liposomsuspension i en sådan 5 mængde, at der opnås en dosis af den aktive bestanddel som anført i tabel 7 . 30 dage efter inokuleringen af tumorcellerne bestemmes tumorens vægt og inhiberings-raten (%) til tumorvæksten bedømmes sammenlignet med resultaterne af kontrolforsøget.
10 Kontrolforsøget gennemføres på samme måde som beskrevet ovenfor, idet musene dog blot behandles med phosphat-pufferopløsning i stedet for med suspensionen af lipo-somerne indeholdende hexa-N-acetyl-chitohexaose, og vægten af tumoren bestemmes derpå (kontrolforsøg nr. 2).
15 Ved et yderligere kontrolforsøg gås der frem som beskrevet ovenfor, idet dog de tumorholdige mus kun behandles med en vandig opløsning af hexa-N-acetyl-chitohe-xaose (til sammenligningsbrug) eller med en suspension af liposomer, som ikke indeholder hexa-N-acetyl-chito- 20 hexaose, men blot phosphatpufferopløsning (kontrolforsøg nr. 1).
Resultaterne er anført i nedenstående tabel 7.
DK 165731 B
20
Tabel 7
Antitumorvirkning af chitinoligomerer indkapslet i lipo-somer på sarcoma 180 fast tumor i ddY-mus.
Forsøg Forsøgspræ- Dosering af Gennemsnits- Inhiberings- iTir. parat aktiv bestand- vægt af forhold (%) del pr. dag x tumor (g) _antal doser_ 1 hexa-N-ace- 100 mg/kg χ 1 2,18 81 tyl-chito- hexaose indkapslet i liposan 2 vandig op- 100 mg/kg x 1 9,55 19 løsning af hexa-N-acetyl- __chitohexaose____________
Kontrol- liposcmer forsøg indehol- - 11,68 0 nr. 1 dende kun phosphat-pufferop-løsning
Kontrol- phosphat- forsøg puffer- - 11,73 0 nr. 2 opløsning

Claims (2)

1. Anvendelse af penta-N-acetyl-chitopentaose, hexa-N-acetyl-chitohexaose, hepta-N-acetyl-chitoheptaose, 5 chitopentaose, chitohexaose eller chitoheptaose til fremstillingen af et immunopotenserende middel til forbedring af immunresponset mod væksten af tumorer.
2. Anvendelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det immunopotenserende middel indeholdes i liposomer.
DK550685A 1984-11-29 1985-11-28 Anvendelse af chitin eller chitosanoligomerer til fremstilling af immunopotenserende midler DK165731C (da)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP25276184 1984-11-29
JP25276184A JPS61130230A (ja) 1984-11-29 1984-11-29 抗感染症剤
JP5061885 1985-03-15
JP5061885 1985-03-15
JP60109854A JPH0615476B2 (ja) 1985-05-22 1985-05-22 抗感染症剤
JP10985485 1985-05-22

Publications (4)

Publication Number Publication Date
DK550685D0 DK550685D0 (da) 1985-11-28
DK550685A DK550685A (da) 1986-05-30
DK165731B true DK165731B (da) 1993-01-11
DK165731C DK165731C (da) 1993-06-07

Family

ID=27294019

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK550685A DK165731C (da) 1984-11-29 1985-11-28 Anvendelse af chitin eller chitosanoligomerer til fremstilling af immunopotenserende midler

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4971956A (da)
EP (1) EP0183556B1 (da)
CA (1) CA1261264A (da)
DE (1) DE3583217D1 (da)
DK (1) DK165731C (da)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1261264A (en) * 1984-11-29 1989-09-26 Shigeo Suzuki Immunopotentiating agents and method
FR2667072B1 (fr) * 1990-09-24 1993-08-13 Bioetica Sa Complexe ternaire de chitosane, d'ions calcium et de lipides, procede de preparation et leurs applications.
JPH04334322A (ja) * 1991-05-09 1992-11-20 Unitika Ltd 抗腫瘍剤
JP3393560B2 (ja) * 1993-12-29 2003-04-07 日本水産株式会社 水溶性キトサンを含有するカルシウム吸収促進性組成物およびカルシウム吸収促進用添加剤
US6060429A (en) * 1994-07-25 2000-05-09 State of Israel--Ministry of Agriculture Composition and method for controlling plant diseases caused by fungi
WO1996009805A2 (en) * 1994-09-23 1996-04-04 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
US5912000A (en) * 1994-09-23 1999-06-15 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
GB9419979D0 (en) * 1994-10-04 1994-11-16 Medeva Holdings Bv Vaccine compositions
AU702725B2 (en) * 1995-01-04 1999-03-04 Wyeth Holdings Corporation Compositions and methods for inhibiting fungal cell wall formation
WO1996031237A2 (en) * 1995-04-04 1996-10-10 Wound Healing Of Oklahoma Cancer treatment by photodynamic therapy, in combination with an immunoadjuvant
US6316007B1 (en) 1995-04-04 2001-11-13 Wound Healing Of Oklahoma Combined physical and immunotherapy for cancer
DE19534370C2 (de) * 1995-09-15 1998-04-02 Henkel Kgaa Verwendung von kationischem Chitosan
AU754675B2 (en) * 1995-11-01 2002-11-21 Archimedes Development Limited Influenza vaccine compositions
GB9522351D0 (en) * 1995-11-01 1996-01-03 Medeva Holdings Bv Vaccine compositions
GB9525083D0 (en) * 1995-12-07 1996-02-07 Danbiosyst Uk Vaccine compositions
US5858378A (en) * 1996-05-02 1999-01-12 Galagen, Inc. Pharmaceutical composition comprising cryptosporidium parvum oocysts antigen and whole cell candida species antigen
US5891861A (en) * 1996-10-15 1999-04-06 Platt; David Composition and method for treating fungal disease in animals
AU771525B2 (en) * 1997-03-25 2004-03-25 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
US5980912A (en) * 1997-03-25 1999-11-09 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
WO1998042374A1 (en) * 1997-03-25 1998-10-01 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
GB9725084D0 (en) 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
US6136794A (en) * 1998-02-02 2000-10-24 Merck & Co., Inc. Platelet aggregation inhibition using low molecular weight heparin in combination with a GP IIb/IIIa antagonist
US6037333A (en) * 1998-05-07 2000-03-14 Trustees Of Tufts College Microbe-inhibiting compositions
US6280742B1 (en) 1998-06-17 2001-08-28 Zonagen, Inc. Methods and materials for the treatment of prostatic carcinoma
DE69928013T2 (de) 1998-11-24 2006-07-27 Safescience, Inc., Boston Chitosan-metall-komplexe und sie verwendende verfahren zur bekämpfung von mikrobiellem wachstum auf pflanzen
KR20000050331A (ko) * 1999-01-06 2000-08-05 김희경 미네럴염 키토산올리고당 유도체를 유효성분으로 하는 가축 질병 예방 및/또는 치료제
US7011845B2 (en) * 2000-05-09 2006-03-14 Mcp Hahnemann University β-glucans encapsulated in liposomes
WO2001098206A1 (en) 2000-06-22 2001-12-27 Rxkinetix, Inc. Delivery vehicle composition and methods for delivering antigens and other drugs
WO2002034287A2 (en) * 2000-10-27 2002-05-02 Pharmexa A/S Therapeutic vaccine formulations containing chitosan
AU2002324124B2 (en) * 2001-08-16 2007-01-04 Mucovax Inc. Chitin microparticles and their medical uses
DE10147100A1 (de) * 2001-09-25 2003-04-17 Numico Res B V Antiinfektive Kohlenhydrate
KR20030045315A (ko) * 2001-12-03 2003-06-11 김광 천연소재 항암제 엔-아세틸-디-키토올리고 6당 및 7당,그리고 그 제조방법
CA2507870A1 (en) * 2001-12-13 2003-07-03 Ism Biopolymer Inc. Method of modulating release of saccharides and uses thereof
DE60229431D1 (de) * 2001-12-14 2008-11-27 Dnp Canada Inc Verwendungen von chitosanoligosacchariden
US6897348B2 (en) 2001-12-19 2005-05-24 Kimberly Clark Worldwide, Inc Bandage, methods of producing and using same
KR20030082619A (ko) * 2002-04-17 2003-10-23 종근당건강 주식회사 면역 활성 증강용 조성물
US6908907B2 (en) * 2002-04-22 2005-06-21 El-Naggar Mawaheb M. Prevention and treatment of tumor growth, metastasis, and thromboembolic complications in cancer patients
US6890913B2 (en) 2003-02-26 2005-05-10 Food Industry Research And Development Institute Chitosans
US20080075691A1 (en) * 2004-09-15 2008-03-27 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Permucosal Composition and Method of Improving Permucosal Absorption
WO2011114346A1 (en) * 2010-03-18 2011-09-22 Chetan Balar Chitin and related compounds for use in treating bacterial and viral infections
EP3436467A4 (en) 2016-03-30 2020-03-18 Ayuvis Research, Inc. INNOVATIVE COMPOSITIONS AND THERAPEUTIC PROCEDURES
DE102017110933A1 (de) * 2017-05-19 2018-11-22 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Immunstimulierende hochreine Oligosaccharide
DE102017110935A1 (de) * 2017-05-19 2018-11-22 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Anti-inflammatorische hochreine Oligosaccharide
US20230105103A1 (en) * 2019-12-26 2023-04-06 Centre For Cellular And Molecular Platforms Therapeutic molecules for combating sepsis

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1906159A1 (de) * 1969-02-07 1970-08-20 Balassa Leslie L Zusammensetzung zur Foerderung der Heilung von Wunden
US3914413A (en) * 1971-02-10 1975-10-21 Leslie L Balassa Process for facilitating wound healing with N-acetylated partially depolymerized chitin materials
US4186194A (en) * 1973-10-23 1980-01-29 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Water soluble agents effective as immunological adjuvants for stimulating, in the host the immune response to various antigens and compositions, notably vaccines containing said water soluble agents
JPS53127824A (en) * 1977-04-13 1978-11-08 Chisso Asahi Hiryo Controlling agent fusarium phatogenic bacillus and fertilizer containing same
JPS5441326A (en) * 1977-09-08 1979-04-02 Nissan Chem Ind Ltd Pesticide for plant viral disease
JPS5543041A (en) * 1978-09-25 1980-03-26 Eisai Co Ltd Immunity raising agent
US4199565A (en) * 1979-03-26 1980-04-22 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
JPS5927826A (ja) * 1982-08-10 1984-02-14 Masuko Suzuki 抗感染症剤
JPS5946223A (ja) * 1982-08-30 1984-03-15 Daito Koeki Kk 抗菌性組成物
US4605623A (en) * 1982-11-08 1986-08-12 Malette William Graham Method of altering growth and development and suppressing contamination microorganisms in cell or tissue culture
JPS60142923A (ja) * 1983-12-28 1985-07-29 Lion Corp 歯周病薬
CA1261264A (en) * 1984-11-29 1989-09-26 Shigeo Suzuki Immunopotentiating agents and method
JPH0927826A (ja) * 1995-07-11 1997-01-28 Nec Corp 送信速度最適化装置及び輻輳制御装置

Also Published As

Publication number Publication date
CA1261264A (en) 1989-09-26
DK550685A (da) 1986-05-30
EP0183556A2 (en) 1986-06-04
DE3583217D1 (de) 1991-07-18
EP0183556B1 (en) 1991-06-12
US4971956A (en) 1990-11-20
EP0183556A3 (en) 1987-09-16
DK550685D0 (da) 1985-11-28
DK165731C (da) 1993-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK165731B (da) Anvendelse af chitin eller chitosanoligomerer til fremstilling af immunopotenserende midler
JP2958774B2 (ja) アンホテリシンｂリポソームの改良調整法
JP4598908B2 (ja) カチオン性リポソームとポリデオキシリボヌクレオチドとの複合体
EP2271661B3 (en) Derivatives of muramylpeptide
JPS60502205A (ja) 単一相中で調製された脂質小胞類
JPH0526767B2 (da)
EP3703718B1 (fr) Formulation liposomale de lipopolysaccharide bactérien combinée à un agent cytotoxique, et son utilisation en therapie anti-tumorale
MX2007009177A (es) Composiciones inmunologicamente activas.
JP5961551B2 (ja) 多糖リポソーム、その調製法及びその使用
JP2017531669A (ja) Ｐｅｇ化リン脂質を担体とするポリペプチドワクチンミセル
US5084441A (en) Acetylated low density lipoproteins: a delivery system to phagocytic cells for stimulating immunologic response and host resistance
EP0227400B1 (en) Inhibition of post-surgical adhesion formation by the topical administration of tissue plasminogen activator
JP2006519262A (ja) リポソームにより誘導される補体活性化の減少のためのリポソーム組成物
CN112370529B (zh) 一种治疗肺动脉高压的复方制剂与制备方法
JPH07501825A (ja) 高められた抗真菌活性を有するアンフォテリシンｂ組成物
JPH07505616A (ja) マラリア処置
CN103154012B (zh) 聚丙基醚亚胺的糖树状聚体
EP0165123A2 (fr) Dérivés lipophiles de muramylpeptides ayant des propriétés d&#39;activation des macrophages, compositions les contenant et procédé pour les obtenir
CN110898231B (zh) 一种功能化拉洛他赛脂质体及其制备方法与应用
EP0213523A2 (de) Pharmazeutische Zusammensetzungen mit acylierten Phospholipiden
JP4643009B2 (ja) 癌治療のための新規化合物
CN114099692B (zh) 一种抗菌肽-细胞膜复合物、制备方法和应用
CN114788811A (zh) 一种盐酸吉西他滨壳聚糖胶束及其制备方法
US9655847B1 (en) Therapeutic liposome and method of treating a subject having cancer
CN110951072A (zh) 一种具有诱导细胞钙化能力的化合物、其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed

Country of ref document: DK