DK164224B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7alfa-methoxy-7beta-(4-methylen-1,3-dithietan-2-yl)carboxamido-3-heterocyclylthiomethyl-delta3-cephem-4-carboxylsyre-forbindelser eller salte deraf og mellemprodukter til anvendelse herved - Google Patents

Description

i

DK 164224 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 7e-methoxy-70-(4-me- thylen-1,3-dithietan-2-yl)carboxamido-3-heterocyclylthio-3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-forbindelser med den i 5 krav 1's indledning angivne almene formel I eller farmaceutisk acceptable salte deraf og mellemprodukter til anvendelse herved.

Man har i de sidste tiår undersøgt forskellige antibioti-10 ca og anvendt dem til behandling af forskellige infektionssygdomme hos dyr, inklusive mennesker, men eftersom der i mange tilfælde optræder resistente bakterier, er der nogle infektionssygdomme, som ikke har kunnet behandles med kendte antibiotica.

15

Derudover forsker man stadig efter nye antibiotica til supplering og udvidelse af lægens armamentarium, især til behandling af infektioner, der involverer pathogene organismer, som er blevet resistente over for de hidtil an-20 vendte kemoterapeutiske midler.

Man kender forskellige cephalosporiner, og i et antal publikationer, såsom DE offentliggørelsesskrift nr.

2 356 388, angives en række forskellige cephalosporiner 25 eller heterocycliske acylgrupper meget bredt, men ingen af dem specificerer forbindelserne, der fremstilles ifølge den foreliggende opfindelse.

Ifølge denne opfindelse fremstilles hidtil ukendte cepha-30 losporiner med den almene formel I

η 0CH-, /S. ! J /S.

r2><s>-C0-—rj

35 N\>£^CH2S--R3 I

C00H

2

DK 164224 B

12 3 hvori R , R og R har den i indledningen til krav 1 angivne betydning eller farmaceutisk acceptable salte af sådanne forbindelser ved en fremgangsmåde, som er særegen ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

5

Cephalosporinforbindelserne fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse udviser fremragende antibakteriel virkning, især over for Gram-negative bakterier.

10 I det følgende beskrives foretrukne udførelsesformer af opfindelsen.

I denne beskrivelse med krav betyder "lavere alkyl" en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-4 carbonato-15 mer, såsom methyl, ethyl, isopropyl, n-butyl, tert.-butyl etc.

3 R i den almene formel I, betyder som defineret i krav 1 en med lavere alkyl substitueret tetrazolylgruppe, eller 20 en med lavere alkyl substitueret thiadiazolylgruppe, og eksempler på tetrazolylgrupper er lH-tetrazol-5-yl, 2H-tetrazol-5-yl etc., og eksempler på thiadiazolylgrupper er 1,3,4-thiadiazolyl, 1,2,5-thiadiazolyl, 1,2,4-thiadia-zolyl, etc.

25

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser tilhører 7-methoxycephalosporinderivaterne, som vist ved den almene formel I, og det mest fremtrædende træk ved disse derivater er, at acylgruppen i 70-stil-30 lingen stammer fra en 4-substitueret methylen-l,3-dithi-etan-2-carboxylsyre. Acyleringen med en 4-leddet ring-carboxylsyre er indtil nu ukendt inden for cephalosporin-kemien, og specielt er den 1,3-dithietancarboxylsyre, der anvendes ved en af fremgangsmåderne til fremstilling af 35 forbindelserne med formlen I som vist i det følgende, en hidtil ukendt forbindelse, som ikke er beskrevet i litteraturen.

DK 164224 B

3

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen beskrives nærmere i det følgende:

Fremgangsmåde (a): 5

I denne fremgangsmåde fremstilles forbindelserne ifølge opfindelsen med den almene formel I ved, at man omsætter en 4-(substitueret methylen)-l,3-dithietancarboxylsyre med den almene formel II

10 /S,

\ / \_C00H II

R2/ ''''S/ 15

hvori R1 og R2 er som defineret i krav 1, med en 70-amino-7a-methoxy-3-heterocyclylthiomethyl-A3-cephem-4-carboxylsyre med den almene formel III

20 OCH,

h2m--III

25

C00H

O

hvori R er som defineret i krav l's indledning.

30

Ved omsætning af forbindelsen med den almene formel II og forbindelsen med den almene formel III, kan man bringe forbindelserne til at reagere direkte med hinanden i nærvær af et kondensationsmiddel, såsom N,Ν'-dicyclohexyl-35 carbodiimid etc., men det er gunstigt at anvende forbindelsen med den almene formel II efter indførelse af kend-te beskyttelsesgrupper på R og R i overensstemmelse med 4

DK 164224 B

1 2 egenskaberne af R og R , og ligeledes at anvende forbindelsen med den almene formel III efter indførelse af en kendt beskyttelsesgruppe på carboxylgruppen i 4-stil- 1 2 lingen. Når f.eks. R og/eller R i forbindelsen med 5 formlen II er en carboxylgruppe, så beskyttes carboxylgruppen i forbindelsen såvel som carboxylgruppen i 4-stillingen af forbindelsen med formlen III, forinden ved hjælp af en triphenylmethylgruppe, en tert.-butylgruppe, en benzhydrylgruppe etc., og carboxylsyren i 2-stillingen 10 af forbindelsen med formlen II eller aminogruppen i 7/5-stillingen af forbindelsen med formlen III, omdannes yderligere til de reaktionsdygtige derivater, før man gennemfører omsætningen. Foretrukne eksempler på reak-tionsdygtige derivater af carboxylsyren er et syrehaloge-15 nid, et blandet syreanhydrid, en aktiv ester, et aktivt amid, et syreanhydrid, et syreazid etc.

Forbindelserne med den almene formel II er hidtil ukendte forbindelser, og de fremstilles ved at omsætte 2,2'-sub-20 stitueret ethylen-1,1-dithiol med den almene formel IV

R1 SH

IV

R2-"''^ SH

25 1 2

hvori R og R er som defineret i krav l’s indledning, og en dihalogeneddikesyre eller en lavere alkylester deraf med den almene formel V

30

J^CH-COOR1 V

hvori X betyder halogen og R betyder hydrogen eller en 35 lavere alkylgruppe, og derpå, hvis forbindelsen med formlen VI er den lavere alkylester, frigivelse af alkylgrup-pen eller omdannelse af den til et reaktionsdygtigt deri-

DK 164224 B

5 vat.'

Omsætningen af forbindelsen med formlen 11 og forbindelsen med formlen III eller det reaktionsdygtige derivat 5 deraf udføres normalt i et inert opløsningsmiddel under opvarmning eller afkøling, men for at undgå epimerisering af methoxygruppen i 7a-stillingen under omsætningen, foretrækker man at udføre omsætningen ved lav temperatur, især ved temperaturer under -20 °C.

10

Den således dannede forbindelse kan omdannes til forbindelsen med den almene formel I, ved fjernelse af beskyttelsesgruppen, eller beskyttelsesgrupperne, på kendt måde.

15

Fremgangsmåde (b):

Ifølge denne fremgangsmåde fremstilles forbindelserne med den almene formel I ved, at man omsætter 3-acetoxymethyl-20 eller 3-carbamoylmethyl-7a-(4-substitueret-l,3-dithi- 3

ethan-carboxamido) - 7 α-methoxy-Δ -cephem-4-carboxylsyre med den almene formel VI

ocn, —r ί ..

0

CCOH

30 1 2 hvori R og R er som defineret i krav l's indledning, og R^ betyder en acetylgruppe eller en carbamoylgruppe, og en heterocyclisk thiol med den almene formel VII 35

R3 - SH VII

6

DK 164224 B

3 hvori R er som defineret i krav 1' s indledning, eller den tilsvarende alkalimetalforbindelse med alkalimetal på hydrogenatomets plads i mercaptogruppen.

5 Omsætningen udføres ved stuetemperatur eller under op varmning, sædvanligvis i et inert opløsningsmiddel. Eksempler på inerte opløsningsmidler er acetone, dimethyl-formamid, methanol, ethanol, vand og en phosphatpuffer, og, om nødvendigt anvender man en blanding af sådanne.

10 Når forbindelsen med den almene formel VII anvendes i fri tilstand, foretrækker man at udføre omsætningen i nærvær af en base, såsom et alkalimetalhydroxid, et alkalimetal-carbonat, et alkalimetalhydrogencarbonat, trialkylamin, pyridin, dimethylanilin etc. Efter at omsætningen er til- 15 endebragt, isoleres forbindelsen med formlen I ved, at man gør reaktionsblandingen sur og opsamler det således dannede bundfald, eller ved at man underkaster reaktionsblandingen en opløsningsmiddelekstraktion.

20 Forbindelsen med formlen VI, der anvendes ved fremgangsmåden, kan endvidere fremstilles ved, at man omsætter en forbindelse med den almene formel II som anvendt i fremgangsmåde (a) og 70-amino-7a-methoxycephalosporansyre (R^ i formlen betyder her acetyl) eller 7/5-amino-3-carbamoyl- 3 6

25 oxymethyl-7e-methoxy-A -cephem-4-carboxylsyre (R i formlen betyder her -CONl·^) med den almene formel VIII

OCH.

! 3 S

30 H2N ^ VIII

Κ\γ^0Κ20Η6

C00H

35

DK 164224B

7 hvori har samme betydning i ved den almene formel VI, og under lignende reaktionsbetingelser som ved fremgangsmåde (a).

5 Fremgangsmåde (c):

Forbindelserne ifølge opfindelsen med den almene formel I kan også fremstilles ved, at man under basiske reaktionsbetingelser behandler et 7a-methoxy-3-heterocyclisk thio-10 methylcephalosporinderivat med den almene formel IX

0._/ r [ ?ch3

15 R^'^S'^SC^COKH--f^SV^l IX

J/ N\^'^CH2SR3

C00H

2 3 20 hvori R og R er som defineret i krav l’s indledning, og g R betyder hydrogen eller en substitueret eller usubsti-tueret alkylgruppe.

g Når yderligere R i den almene formel IX betyder hydro-25 gen, inkluderer derivatet med den formel den tautomere forbindelse med den følgende formel H° ^ ^R2 li ii ?CH’ 30 N JL * ! ' 3CH2C0NH —j-^ ^ IX,

C00H

2 3 hvori R og R er som defineret i krav l's indledning.

35 8

DK 164224 B

Egnede baser til anvendelse ved denne fremgangsmåde er svage baser, såsom natriumhydrogencarbonat, kaliumhydro-gencarbonat, natriumcarbonat etc. Omsætningen udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel ved stuetemperatur el-5 ler under afkøling. Ethvert opløsningsmiddel, som ikke influerer på omsætningen, kan anvendes, men man anvender fortrinsvis vand eller et organisk opløsningsmiddel, som er blandbart med vand, såsom methanol, acetone, tetra-hydrofuran, dimethylformamid etc., der anvendes alene 10 eller i sammensætninger. Isoleringen og oprensningen af produktet ud fra reaktionsblandingen udføres ved kendt teknik, såsom ved ekstraktion med organisk opløsningsmiddel, ved krystallisation, ved søjlekromatografi etc.

15 De ved fremgangsmåden anvendte forbindelser med den almene formel IX udviser i sig selv en udmærket antibakteriel virkning, ligesom de er anvendelige som mellemprodukter ved fremstilling af forbindelserne med formlen I. Et yderligere formål for denne opfindelse er derfor at til-20 vejebringe disse mellemprodukter, som har udmærket antibakteriel virkning og er anvendelige til fremstilling af forbindelserne med formlen I, og også at angive en fremgangsmåde til fremstilling af disse mellemprodukter.

25 Forbindelserne med den almene formel IX fremstilles f.eks. ved følgende fremgangsmåder:

Fremgangsmåde A: 30 Forbindelsen med den almene formel III kan omsættes med en tilsvarende isothiazolylthioeddikesyre eller et reaktionsdygtigt derivat af denne i overensstemmelse med fremgangsmåde (a) ifølge opfindelsen. Det vil sige, at omsætningen sædvanligvis udføres i et inert opløsnings-35 middel, såsom fortrinsvis acetone, chloroform, methylen-chlorid, ethylenchlorid, tetrahydrofuran, dimethylforma-mid, acetonitril, ethylacetat, ethylformiat etc. Disse

DK 164224 B

9 opløsningsmidler kan anvendes hver for sig eller i blanding eller kan, hvis opløsningsmidlet er vandopløseligt, anvendes i blanding med vand, såfremt der ikke optræder nogen hindring af reaktionen.

5

De foretrukne eksempler på reaktionsdygtige derivater ved den endestillede carboxylgruppe i isothiazolylthioeddike-syre er et syrehalogenid, et blandet syreanhydrid, en aktiv ester, et aktivt amid, et syreanhydrid, et syreazid 10 etc. Når den endestillede carboxylgruppe optræder som frit radikal, er det egnet at anvende et kondensationsmiddel, såsom N,N'-dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-diethyl- 2 carbodiimid etc. Endvidere foretrækker man, når R i iso-thiazolylthioeddikesyren er en reaktionsdygtig gruppe, 15 som kan hindre reaktionen, såsom en carboxylgruppe, hy-droxymethylgruppe etc. at anvende isothiazolylthioeddike-syre ved omsætningen efter indførelse af en konventionel beskyttelsesgruppe for den reaktionsdygtige gruppe. I dette tilfælde foretrækker man at frigøre beskyttelses-20 gruppen, efter at man har fremstillet forbindelsen med formlen IX, eller efter at man har omdannet forbindelsen med formlen IX til forbindelsen med formlen I.

Fremgangsmåde B: 25

Forbindelsen med den almene formel IX kan også fremstilles ved, at man omsætter forbindelsen med den almene formel VIII og den tilsvarende isothiazolylthioeddikesyre eller et reaktionsdygtigt derivat deraf og derpå omsætter 30 reaktionsproduktet med forbindelsen med den almene formel VIII i overensstemmelse med fremgangsmåde (b).

Fremgangsmåde C: 35 Forbindelsen med den almene formel IX kan yderligere fremstilles ved, at man under basiske reaktionsbetingelser omsætter den kendte 7 a-amino-70-halogenacetamido-3- 3 10

DK 164224 B

heterocyclylthiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre med den almene formel X

OCH, c : 3 , X-CHgCORH-^

_/1-3 X

// r \^^ch2s-rj

COOH

10 3

hvori R er som defineret i krav l's indledning, og X betyder halogen, og en forbindelse med den almene formel XI

15 V_/R2 „ Γ λΙ

2 8 20 hvori R er som defineret i krav l’s indledning, og R

betyder hydrogen eller en substitueret eller usubstitu- eret alkylgruppe.

g Når R i den almene formel XI betyder hydrogen, omfatter 25 forbindelsen med formlen XI desuden den tautomere forbindelse vist ved følgende formel HO. K1 30 Ύ“ΊΓ

n JL

35 hvori R er som defineret i krav l's indledning.

11

DK 164224 B

Omsætningen udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel ved stuetemperatur eller under afkøling. Man kan uden begrænsninger anvende ethvert opløsningsmiddel, som ikke deltager i omsætningen, men man anvender sædvanligvis 5 vand, methanol, acetone, tetrahydrofuran, dimethylformamid eller en blanding deraf. Forbindelsen med formlen XI kan almindeligvis anvendes i form af alkalimetalsaltet ved mercaptogruppen, men hvis forbindelsen XI anvendes som den foreligger, udføres omsætningen i nærvær af en 10 alifatisk, aromatisk eller heterocyclisk base, såsom tri- ethylamin, N,N-dimethylanilin, N-ethylmorpholin, pyridin, collidin, 2,6-lutidin etc., eller et alkalimetalcarbonat eller alkalimetalhydrogencarbonat, såsom natriumcarbonat, kaliumcarbonat, natriumhydrogencarbonat, kaliumhydrogen-15 carbonat etc.

De således dannede forbindelser med den almene formel IX er hidtil ukendte forbindelser. De forbindelser, der har en isothiazolylacetamidgruppe i 7-stillingen er tidligere 20 kendt inden for cephalosporin-kemien som beskrevet i f.eks. US patentskrift nr. 3 464 999, men de forbindelser med den specifikke struktur, der har en isothiazolylthio-acetamidgruppe, som kan omdannes til en 1,3-dithietan-carboxamidgruppe, er hidtil ukendte.

25

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser udviser fremragende antibakteriel virkning særligt overfor Gramnegative bakterier som vist i den efterfølgende tabel. 1 35 12

DK 164224 B

TABEL

Minimal inhiberende koncentration (M.I.C.) (Mg/ml)

Eks. Esche- Esche- Klebsiel- Klebsiel- Proteus Proteus Proteus Serratia nr. richia richia la pneu- la pneu- vulga- morga- rettge- marces- 5 coli coli moniae moniae ris nii ri cens NIHJ Ebara ATCC V-17 OXK US Kono Y-l 10031 1 0,2 0,2 1,56 1,56 3,13 2 0,78 1,56 3,13 12,5 6,25 4 0,78 0,78 3,13 6,25 6,25 5 0,09 0,39 0,09 0,19 0,78 1,56 3,13 0,78 10 6 0,09 0,19 0,09 0,09 0,39 0,78 1,56 0,39 7 0,78 1,56 0,39 3,13 0,78 6,25 6,25 6,25 8 0,09 0,39 0,09 0,09 0,39 0,39 0,78 0,39 9 0,19 0,39 0,19 0,39 0,78 0,78 0,78 11 0,19 0,19 0,19 0,19 1,56 0,39 0,19 0,39 12 0,78 0,39 0,78 14 0,19 0,78 0,19 0,39 1,56 1,56 1,56 0,78 15 15 0,19 0,78 0,19 0,39 1,56 3,13 3,13 0,78 16 0,39 0,78 0,39 0,39 0,78 6,25 6,25 6,25 17 0,39 1,56 0,39 0,78 0,78 0,39 6,25 12,5 18 0,78 0,78 3,13 19 0,19 0,39 0,09 0,39 0,78 0,39 1,56 1,56 21 0,19 0,39 0,19 0,78 22 0,78 0,78 0,39 0,39 0,78 3,13 3,13 3,13 23 1,56 1,56 1,56 6,25 6,25 20 24 0,39 1,56 0,39 0,78 0,78 3,13 1,56 0,78 25 0,19 0,39 0,09 0,39 0,78 0,39 0,39 0,39 26 0,78 1,56 0,39 1,56 1,56 1,56 1,56 0,78 27 0,09 0,19 0,09 0,19 29 0,78 1,56 0,78 0,78 1,56 6,25 12,5 1,56 30 0,09 0,20 0,78 32 0,20 0,39 0,20 0,19 0,78 0,78 0,78 0,39 25 Kendte forbindelser:

Cefoxitin 1,56 0,78 12,5 6,25 50 50

Cefme- tazol 0,78 0,78 0,78 3,13 50 6,25 1 35

DK 164224 B

13

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med den almene formel I kan let omdannes til farmaceutisk acceptable, ikke-toxiske og effektive salte deraf. Disse salte omfatter alkalimetalsaltene, såsom na-5 trium- eller kaliumsalte (f.eks. dannet under anvendelse af natrium- eller kalium-2-ethylhexanoat), ammoniumsaltene og saltene med organiske aminer, såsom procain eller ethanolamin, der kan fremstilles af en fagmand på kendte måder.

10

Forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan indgives peroralt, rektalt eller ved injektion, såsom subcutant, intramuskulært eller intravenøst.

15 Den foretrukne indgivningsmetode er injektion af passende tilberedte sterile opløsninger eller suspensioner, der indeholder en effektiv, men ikke-toxisk mængde af en cephalosporin- forbindelse fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

20

Doseringen af de omhandlede cephalosporinforbindelser er normalt fra 250 til 3000 mg pr. dag for en voksen person og kan varieres afhængigt af sygdommen samt patientens alder, vægt og tilstand. j 25 i

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil blive belyst mere detaljeret gennem de efterfølgende eksempler.

EKSEMPEL 1 30 270 mg 4-carboxy-5-ethylthio-3-hydroxyisothiazol blev suspenderet i 10 ml flydende ammoniak. Efter afkøling af suspensionen til -50 °C og tilsætning af 100 mg metallisk natrium blev blandingen omrørt i 30 minutter ved tempe-35 raturer på fra -50 til -33 °C.

14

DK 164224 B

Flydende ammoniak blev afdestilleret fra reaktionsblandingen, og det dannede bundfald blev opløst i 20 ml methanol, hvorpå 10 ml af en methanolisk opløsning af 600 mg 7 β-bromacetamido-7 α-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)- 3 5 thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre blev sat til opløsningen dråbe for dråbe under isafkøling, og efter omrøring af blandingen i 30 minutter under isafkøling blev blandingen omrørt i yderligere 30 minutter ved stuetemperatur. Efter at reaktionen var fuldført, blev reaktions-10 blandingen indstillet til pH 4 med 4 normal saltsyre, og reaktionsopløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk.

Til den dannede inddampningsrest blev tilsat vand, og ef-15 ter indstilling af blandingen til pH 1 med 4 normal saltsyre blev produktet ekstraheret med 50 ml af en blanding af butanol og ethylacetat i volumenforholdet 1:1. Det dannede organiske lag blev vasket 2 gange med vand, derpå 1 gang med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret 20 over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. Til inddamp-ningsresten blev sat 30 ml ether, og det dannede bundfald blev isoleret ved filtrering, vasket 3 gange med hver 20 ml ether og tørret under reduceret tryk, hvilket gav 560 25 mg pulver af 70-(4-carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thio-acetamido-7 a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)-thiome- 3 thyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR spektrum (Dg-DMSO) 30 δ(ppm): 3,41 (3H), 3,58 (2H), 3,93 (3H), 3,99 (2H), 4,28 (2H), 5,10 (IH).

35

DK 164224 B

15 EKSEMPEL 2 il0TTæ2 :5¾ /S.

JJ_sch2c°nh--f > r k

c s i Π »I

b J-'K —CH0S—

o T I

COOH CH, >? 10 Efter afkøling af 40 ml flydende ammoniak til -70 °C blev 183 mg 4-amino-5-ethylthio-3-hydroxyisothiazol og derpå 55 mg natrium sat til den flydende ammoniak. Blandingen blev omrørt i 10 minutter ved samme temperatur, og derpå blev den flydende ammoniak afdestilleret. Til inddamp-15 ningsresten blev sat 15 ml methanol efterfulgt af afkøling til 2 °C. Derpå tilsattes dråbevis 15 ml af en me-thanolisk opløsning af 300 mg 75-bromacetamido-7a-me- 3 thoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-a -cephem-4-carboxylsyre i løbet af 30 sekunder efterfulgt af om-20 røring i 10 minutter ved samme temperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og efter tilsætning af 15 ml vand til inddampningsresten blev j blandingen indstillet til pH 2,5 ved tilsætning af 5% saltsyre. Det dannede bundfald blev ekstraheret med 100 25 ml af en blanding af n-butanol og ethylacetat i volumenforholdet 1:1, og ekstrakten blev vasket med vand og derpå med en mættet vandig natriumchloridopløsning og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev af-destilleret, og den dannede inddampningsrest blev under-30 kastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en blanding af chloroform, methanol og myresyre i volumenforholdet 8:2:0,2 som elueringsmiddel, hvilket gav 180 mg 75-(4-amino-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido-75-me- 3 thoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-a -cephem-4-3 5 carboxylsyre.

16

DK 164224 B

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ(ppm): 3,36 (3H), 3,54 (2H), 3,58 (2H), 3,94 (2H), 4,30 (2H), 5,09 (IH).

5 EKSEMPEL 3 K0^ ^ HHC00C9Hr PCH, „ ^ il 2 5

ji IUscii2cohh —|—r > K—N

s > 1! Il 10 J-CH2S -Λν/Ν

0 I

COOH CH^

Ved at følge samme procedure som i eksempel 2 blev der ud 15 fra 300 mg 4-ethoxycarbonyl-amino-5-ethylthio-3-hydroxy- isothiazol og 300 mg 7 β-bromacetamido-7 a-methoxy-3- (1 - 3 methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre fremstillet 50 mg 7/5-(4-ethoxycarbonylamino-3-hydroxyiso-thiazol-5-yl)thioacetamido-7a-methoxy-3-(1-methyltetra- 3 20 zol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 1,14 (3H), 3,38 (3H), 3,60 (2H), 3,81 (2H), 3,92 (3K), 4,06 (2H), 4,29 (2H), 5,11 (IH).

25 EKSEMPEL 4 K0^-—CONHNHp 00H, c » 1'v ^ II '1 ch2s —V» ° C00H CH3

Ved at følge samme procedure som i eksempel 2 blev der ud fra 220 mg 4-carbazoyl-5-ethylthio-3-hydroxyisothiazol og 35

DK 164224B

17 400 mg 7Æ-bromacetamido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre fremstillet 100 mg 70-(4-carbazoyl-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido- 3 7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-5 4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,39 (3H), 3,63 (2H), 3,90 (2H), 3,93 (3H), 4,30 (2H), 5,13 (IH).

10 EKSEMPEL 5 0CH, HOOCv. i '

/C=< CH00M—.-S' N K-H

15 c’d2 I || 11 /J- 0 T i C00H CH^ 20 (a). I 15 ml methylenchlorid blev opløst 0,340 g 4-[l-(tert.-butoxycarbonyl)ethyliden]-1,3-dithietan-2-carbox-ylsyre og 0,206 g pyridin. Mens opløsningen blev omrørt i et is-vandbad, blev 0,284 g phosphorpentachlorid sat til 25 opløsningen. Omsætningen blev udført i 1 time ved en temperatur under 10 °C, og efter afkøling af reaktionsblandingen til -50 °C blev der dråbevis sat en opløsning af 0,690 g 7/5-amino-7a-methoxy-3-( l-methyltetrazol-5-yl )- 3 thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 10 30 ml methylenchlorid til opløsningen, og derpå blev der dråbevis tilsat 1,6 ml pyridin, og blandingen fik lov at reagere i 1 time ved temperaturer på fra -30 til -40 °C.

Efter at reaktionen var fuldført, sattes dråbevis 10 ml 35 normal saltsyre til reaktionsblandingen ved en temperatur under 0°C, og produktet blev ekstraheret med et methylenchlorid. Ekstrakten blev vasket med en mættet vandig na- 18

DK 164224 B

triiimchlor idopløsning, tørret over vandfrit calciumchlo-rid, og methylenchloridet blev afdestilleret, hvilket gav 1,1 g inddampningsrest. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en 5 blanding af ethylacetat og n-hexan i volumen-forholdet 1:1 som elueringsmiddel, hvorved der blev opnået 0,490 g (udbytte 47%) karamellignende 7Æ-{4-[l-(tert.-butoxycar-bonyl )ethyliden] -1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-me- 3 thoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-10 carboxylsyre-benzhydrylester.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 1,44 (9H, tert.-butyl), -00C^ 15 gh>=)’ 3 3,49 (3H, ---0CH3), 3,90 (3H, ), ch3

20 5,10 (IH) / _^S

5,15 (IH) J H fra C6 <* 6,92 (IH, -CH(C5H5)2), 9,68 (IH, -C0NH-).

25 (b). I 25 ml anisol blev opløst 0,44 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt, og under afkøling af opløsningen til under 5 °C med isvand blev der dråbevis sat 7,5. ml trifluoreddikesyre til opløsningen. Reaktionen 30 blev gennemført i 1 time ved 5-10 °C, hvorefter anisol og overskydende trifluoreddikesyre blev afdestilleret under formindsket tryk, og inddampningsresten blev bragt på pulverform ved tilsætning af ether. Efter opsamling af pulveret ved filtrering blev pulveret grundigt vasket med 35 ether, hvilket gav 0,271 g (udbytte 86,7%) 70-[4-(l-car-boxyethyliden )-1,3 -di thietan- 2-yl ] carboxamido-7 a -methoxy- 3 3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxyl-

DK 164224 B

19 syre i form af et lysegult pulver.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3.,56 (3H, ^£^=), (3H,---OCH,), 5 ° 3 3 3,93 (3H, ),

CH

3 ^-S- 5,13 (2H, H fra C6 og >CH-), _ 9,57 (IH, -C0NH-) S" 10 IR-spektrum -1 (KBr) (cm"1) 1870 (lactam).

REFERENCEEKSEMPEL 1: 15 I en trehalset kolbe på 100 ml blev anbragt 40 ml di-methoxyethan og 10 ml tetrahydrofuran, og begge væsker blev befriet for oxygen ved destillation. Under afkøling af blandingen til under -70 °C med et tøris/acetonebad og i en nitrogenstrøm blev 1 ml n-isopropylcyclohexylamin og 20 3,43 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-hexan-opløsning sat til blandingen. Efter yderligere tilsætning af 0,65 g tert.-butylpropionat blev reaktionen udført i ca. 30 minutter ved en temperatur under -70 °C og under omrøring.

Til reaktionsblandingen blev dråbevis tilsat 0,332 ml 25 carbondisulfid ved en temperatur på fra -75 til -73 °C i løbet af ca. 30 minutter. Reaktionen blev udført i yderligere 10 minutter ved en temperatur under -70 °C, og derpå blev 3,4 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-hexan-op-løsning dråbevis sat til reaktionsblandingen ved en tem-30 peratur under -70 °C i løbet af ca. 30 minutter. Efter gennemførelse af reaktionen i 15 minutter ved en temperatur under -70 °C blev natriumdiiodacetat, som var fremstillet i forvejen ved omsætning af 0,24 g 50% olieagtigt natriumhydrid og 1,56 g diiodeddikesyre i 10 ml dimeth-35 oxyethan under isafkøling sat til reaktionsblandingen under isafkøling og blandingen blev omrørt natten over ved stuetemperatur.

20

DK 164224 B

Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra reaktionsblandingen under reduceret tryk, og efter tilsætning af kold ether til inddampningsresten og efter syrning af denne med 1 normal saltsyre, blev produktet ekstraheret med 5 ether. Etherekstrakten blev vasket grundigt med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og derpå blev etheren afdestilleret, hvilket gav 1,42 g af et brunt olieagtigt produkt. Dette produkt blev underkastet silicagel-søjlekromatografi 10 under anvendelse af en blanding af chloroform, methanol og myresyre i volumenforholdet 95:5:2 som elueringsmiddel, og der blev opnået 0,5 g 4-[l-(tert.-butoxycarbonyl) -ethyliden] -1,3-dithietan-2-carboxylsyre i form af en olieagtig væske.

15 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 1,42 (9H, tert.-butyl) -00C.

1,53 (3H, ">=·),

CH-T

20 5 5,14 (IH, >CH- ) 25 IR spektrum (cm-1): 2970 (tert.-butyl), 2520-2650 (-C00H), 1640-1740 (-C00-tert.-butyl, -C00H), 30 1360, 1250 og 840 (tert.-butyl).

35

DK 164224 B

21 EKSEMPEL 6 OCil' H00Cv i

5 V=CC^ /CHCOKH-V V N-N

CHJ>' ] |j |j 3 /-‘\<^0HzS-‘kB^·

o T I

COOH in3 10 (a). I 5 ml tetrahydrofuran blev opløst 0,7 g 70-amino- 3 7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem- 4-oarboxylsyre-benzhydrylester og 0,35 g 4-[(tert.-but-oxycarbonyl) (methoxy )methylen] -1,3-dithietan-2-carboxyl-15 syre, og efter tilsætning dertil af 0,3 g Ν,Ν'-dicyclo-hexylcarbodiimid under isafkøling blev blandingen omrørt i 2 timer ved stuetemperatur. Uopløseligt materiale blev frafiltreret, og filtratet blev inddampet under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet søjlekromatografi, og 20 man opnåede 0,36 g 70-{4-[(tert.-butoxycarbonyl)(methoxy) -methylen]-1,3-dithietan-2-yl}-carboxamido-7a-meth- 3 oxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 85:15 25 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDClg) 6 (ppm): 1,50 (9H, tert.-butyl)

3,59 (3H) ) -00CL

_n f---0CH, fra C7 og ✓=- 30 3,64 (3H) j 3 7 CHjO' 3,82 (3H, N/ ch3 4,38 (2H, -CHpS- fra C,), 35 3 22

DK 164224 B

4,77 (1Η,-=χ >CH-), 5,07 (IH, H fra Cg), 6,92 (IH, -CH(CgH5)2), 5 7,2-7,5 (10H, -CH(CgH5)2).

(b). I 1,7 ml anisol blev opløst 0,23 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt, og under afkøling af opløsningen til en temperatur på fra -5 til -10 °C blev der 10 gradvis tilsat 5,1 ml trifluoreddikesyre efterfulgt af omrøring i 30 minutter ved 0-8 °C.

Reaktionsblandingen blev inddampet under vakuum, ether blev sat til inddampningsresten, og det dannede svagt 15 brune pulver blev opsamlet ved filtrering. Pulveret blev vasket grundigt med ether og tørret under vakuum, hvilket gav 0,12 g 7 /5 - { 4 - [ (carboxy) (me thoxy) methyl en ]-1,3-di-thietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3- (1-methyl-tetrazol- 3 5-yl )thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 3,42 (3H, -00¾ fra C„) 5 7

-00CV

3,55 (3H, y=), 25 CH3° 3,85 (3H, XN^ ), ch3 5,16 (2H, H fra Cg og =<^ ^'CH- 30 9,59 (IH, -C0NH-).

35

DK 164224 B

23 REFERENCEEKSEMPEL 2: (CHj-COOC^

^CHCOOH

5 CH30^

En blanding af 4,5 g tert.-butyl-methoxyacetat og 10 ral 10 tetrahydrofuran blev sat til en lithiumdiisopropylamin-opløsning, der var fremstillet ved at sætte 18,2 ml af en 15% n-butyl-lithium/hexan-opløsning til en blanding af 3 g diisopropylamin og 20 ml tetrahydrofuran ved en temperatur på fra -40 til -70 °C, og efter tilsætning af 0,9 15 ml carbondisulfid ved en temperatur under -40 °C blev den således fremkomne blanding holdt under omrøring i 20 minutter ved denne temperatur. Til den således opnåede reaktionsblanding blev der sat lithiumdiisopropylamin-opløsning i en mængde svarende til halvdelen af den 20 tidligere angivne og carbondisulfid i halvdelen af den tidligere angivne mængde ved en temperatur på fra -40 til -70 °C til omsætning, og derefter blev der yderligere tilsat lithiumdiisopropylamin-opløsning i en mængde på en fjerdedel af den tidligere angivne og carbondisulfid i en 25 mængde på en fjerdedel af den tidligere angivne til omsætning, og endelig blev tilsat 9 g natriumdiiodacetat til reaktionsblandingen efterfulgt af gradvis hævning af temperaturen under omrøring i 1 time ved 0-5 °C efterfulgt af yderligere 1 time ved stuetemperatur. Den 30 opnåede reaktionsblanding blev inddampet under vakuum, og efter tilsætning af 20 ml 10% saltsyre til den dannede inddampningsrest blev produktet ekstraheret med 100 ml benzen. Ekstrakten blev vasket med vand og inddampet under vakuum. Den dannede inddampningsrest blev 35 underkastet silicagel-søj lekromatografi og der blev opnået 5,6 g 4-[ (tert. -butoxycarbonyl) (methoxy )- methylen]-l,3-dithietan-2-carboxylsyre under anvendelse 24

DK 164224 B

af ' en blanding af chloroform og ethanol i rumfangsforholdet 10:2-5.

NMR-spektrum (CDCl^) 5 * (ppm): 1,52 (9H, (CH^COOC-), 3,67 (3H, CH30-), 4,88 (IH, -C< JTCH- ) 10 8,64 (IH, -C00H).

EKSEMPEL 7 ?CH3 15 H00C>v /-S. ; s o~oc s j— ° I i C00H CH3 20 (a). Ved behandling af 0,8 g 7/5-amino-7a-methoxy-3-( 1-me- 3 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester og 0,8 g 4-[(benzoyl)(tert.-butoxy-carbonyl)-raethylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre analogt 25 med eksempel 6-(a) blev der opnået 0,35 g 70-{4-[(benzoyl )(tert.-butoxycarbonyl)methylen]-1,3-diethietan-2-yl}-carboxamido-7«-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiome- 3 thyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester. 1 35 3 NMR-spektrum (CDClg) 6 (ppm): 1,24 (9H, tert.-butyl), 3,60 (3H, OCHj), 3,82 (3H, XB/ ), CH, 25

DK 164224 B

4,39 (2H, -CH2S- fra 5,00 (IH) Ί V H fra Cr og —\ ^CH- 5,09 (IH) J 5 5 6,92 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,2-7,6 (15H, H fra aromatisk ring), 7,77 (IH, -C0NH-).

(b). Ved behandling af 0,23 g af det ovenfor i trin (a) 10 fremstillede produkt analogt med eksempel 6-(b) blev der opnået 0,13 g lt> -{4- [(benzoyl )(carboxy) -methylen] -1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3- (1-methyl-te- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

15 NMR-spektrum (Dg-DMSO) * (ppm): 3,46 (3H, ---OCH^ ), 3,95 (3H, ), CH* 4,32.(2H, -CH2- fra C2 ), 20 5,19 (IH, H fra C6 ), 5,41 (IH, >CH- ), xs- 7,48 (5H, C6H5-OC- ), 25 9,72 (IH, -C0NH- ).

REFERENCEEKSEMPEL 3: 30 (CH^COOC^

^oc/C = c CKC0CH

35

DK 164224 B

26 I en blanding af 2,2 g tert.-butylbenzoylacetat og 20 ml tert.-butanol blev opløst 0,24 g natriumhydrid (50% i olie), og 0,6 ml carbondisulfid blev sat til opløsningen ved 15-20 °C efterfulgt af omrøring i 40 minutter, og 5 derpå blev 0,24 g natriumhydrid (50% i olie) sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 1 time. Til den således dannede reaktionsblanding blev tilsat 1,52 g natrium-dichloracetat efterfulgt af omrøring i 4 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev inddampet under va-10 kuum, og efter tilsætning af 30 ml 1 normal saltsyre til inddampningsresten blev produktet ekstraheret med 30 ml benzen. Ekstrakten blev vasket med vand, tørret og inddampet under vakuum. Ved tilsætning af en blanding af benzen og n-hexan i rumfangsforholdet 3:1 til inddamp-15 ningsresten blev der opnået 0,9 g 4-[(benzoyl)(tert.-but-oxycarbonyl) methylen] -1,3 -dithiethan-2-carboxylsyre i form af gullige krystaller.

EKSEMPEL 8 20 OCR.

K0CC>. J N--N ' J^C=CC ^CHCOKH—-f 1 i ||

CH3S^ _η Λ— CHpS—il ^-N

25 o7/ ! ϋ COOK Cri3 (a). I 10 ml vandfrit tetrahydrofuran blev opløst 0,3 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)(methylthio)methylen]-1,3-di-30 thietan-2-carboxylsyre, 0,2 g N,N'-dicyclohexylcarbodi-imid og 0,5 g 7/5-amino-7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5- 3 yl)-thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester. Opløsningen blev derpå omrørt i 1 time ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum.

35 Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, og der blev opnået 0,3 g 7/)-(4-[(tert.-butoxycarbonyl )(methylthio)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carbox- 27

DK 164224 B

3 amido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 9:1 som elueringsmiddel.

5 NMR-spektrum (CDClg) 6 (ppm): 1,52 (9H, tert.-butyl) 2,22 (3H, CH3S- ), 3,78 (5H, —OCHj og -CH2 fra C2), 10 3,82 (3H, M'' ch3 4,24 (2H, -CH2S- fra C3), /-S.

15 4,72 (IH, ^CH- ), 5,08 (IH, H fra C6), 6,92 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,35 (10H, -CH(C6H5)2 ), 20 7,80 (IH, -C0NH-).

(b). I 1,5 ml anisol blev opløst 0,3 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt, og under omrøring af op-25 løsningen ved -5 °C blev 5 ml trifluoreddikesyre dråbevis sat til opløsningen ved en temperatur på fra -5 til -3 °C efterfulgt af omrøring i 1 time ved 0-3 °C. Reaktions-blandingen blev inddampet til tørhed under vakuum, og ether blev sat til den således dannede inddampningsrest.

30 Bundfaldet blev opsamlet ved filtrering, vasket grundigt med ether og tørret over phosphorpentoxid under vakuum, hvilket gav 0,17 g 70-{4-[(carboxy)(methylthio)methylen]- 1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methylte- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

35

DK 164224 B

28 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 1,16 (3H, CH^S- ), 3,43 (3H, OCH3 ), 3,62 (2H, -CH2- fra C£ ), 5 3,94 (3H, ), , - i*, 4,30 (-CH2S- fra C3 ), 5,09 (IH, H fra Cg ), 10 5,16 (IH, -V >CH- ), 9,65 (IH, -CONH- ).

REFERENCEEKSEMPEL 4: 15 (CH.kCOOO.

J = cCT ^CKCOOH

CH3S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 2 I 14 ml vandfrit tetrahydrofuran blev suspenderet 0,96 g 3 natriumhydrid (50% i olie). Efter dråbevis tilsætning af 4 en blanding af 20 ml tert.-butanol og 15 ml vandfrit te 5 trahydrofuran til suspensionen blev blandingen omrørt i 6 10 minutter ved stuetemperatur. Til blandingen blev derpå 7 tilsat en blanding af 1,62 g tert.-butylmethylthioacetat 8 og 5 ml vandfrit tetrahydrofuran ved 3-5 °C, og efter 30 9 minutter blev 0,6 ml carbondisulfid sat til blandingen 10 ved samme temperatur efterfulgt af omrøring i 50 minut- 11 ter. Derpå blev 3,34 g natriumdiiodacetat sat til blan 12 dingen ved en temperatur under 7 °C, og komponenterne fik 13 lov at reagere i 50 minutter under isafkøling. Opløs 14 ningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, inddamp- 15 ningsresten blev opløst i 50 ml isvand, og opløsningen 16 blev vasket 2 gange med ether. Det vandige lag blev skilt fra, indstillet til pH 2 med 10% saltsyre, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og etheren blev derpå afdestil- 29 lerét under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, og der blev opnået 1,3 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)(methylthio)methylen]-1,3-dithi-etan-2-carboxylsyre i form af en olie under anvendelse af 5 en blanding af chloroform, methanol og myresyre i rumfangsforholdet 95:5:2 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 1,52 (9H, (CH^COOC- ), 10 2,22 (3H, CH3S- ), 4,74 (IH, —C >CH- ), 9,12 (IH, -C00H ).

15 EKSEMPEL 9

Pch3 /C=CC /CHCONH-J-S > ” f CH30H2S S _t! ^-CH2S-J\ s#

20 // 2 H

0 I i C00H CH3 (a). Ved behandling af 0,15 g 4-[(tert.-butoxycarbo-25 nyl)(ethylthioJmethylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre, 0,1 g Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid og 0,26 g 7Æ-amino-7a- 3 methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester analogt med eksempel 8(a) blev der opnået 0,14 g 7Æ-{4-[(tert.-butoxycarbonyl)-30 (ethylthio)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a- 3 methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester. | NMR-spektrum (CDCl^) 35 δ (ppm): 1,22 (3H, CHjCHgS- ), 1,52 (9H, tert.-butyl ), 30

DK 164224 B

2,β8 (2H, CH3CH2S- ), 3,58 (5H, -CH2~fra C2 og — OCH^ ), 3,82 (3H, —OCH3 ), 4,38 (2H, -CH2- fra C2 ), 5 4,70 (IH, >CH- ), 5.08 (IH, H fra Cg), 6,92 (IH, -CH(CgH5)2 ), 10 7,32 (10H, -CH(CgH5)2 ), 7,79 (IH, -CONH-T.

(b). Ved behandling af en blanding af 0,14 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt, 1,5 ml anisol og 15 5 ml trifluoreddikesyre analogt med eksempel 8(b) blev der opnået 0,07 g 70-{4-[(carboxy)(ethylthio)methylen]- 1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-( 1-methylte- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 1,14 (3H, CH3CH2S- ), 2,62 (2H, CH^CH2S- ), 3^ 43 (3H, ---0CH3 ), 3,61 (2H, -CH2- fra C2 ), 25 3,94 (3H, ), CH, 3 4,28 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5.08 (IH, H fra Cg ), 30 5,14 (IH, =<" >CH- ), 9,64 (IH, -C0NH- ).

35

DK 164224 B

31 REFERENCEEKSEMPEL 5: (CHO,C00 Cv = cC J^CHCOOH ch3ch2s^ ^ S ^ 5

Ved behandling af 3,4 g tert.-butylethylthioacetat analogt med referenceeksempel 4 blev der opnået 4,05 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)-(ethylthio)methylen]-1,3-dithi-10 etan-2-carboxylsyre i form af en olieagtig væske.

NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 1,42 (3H, CH3CH2S- ), 1.52 (9H, (CH3)3COOC- ), 15 2,68 (2H, CH3CH2S- ), 4,76 (IH, =C<"S^>CH- ), 9.52 (IH, -C00H ).

20 EKSEMPEL 10 OCR.

ch.jOoc \ i 3 0=0 ; CONH---Γ 1 '--fi CH.OOC^ I I _ ! !j 25 3 // CH2S ^ 0 I i cooh ch3 : I 5 ml methylenchlorid blev opløst 400 mg 4-[bis(meth-30 oxycarbonyl)methylen]-l,3-dithietan-2-carboxylsyre. Efter tilsætning af 180 mg pyridin og yderligere 290 mg phos-phorpentachlorid under isafkøling blev blandingen omrørt i 30 minutter. Blandingen blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 500 mg 7/3-amino-7a-methoxy-3-( 1- 3 35 methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre- benzhydrylester i 10 ml methylenchlorid og afkøling af opløsningen til -20 til -30 °C, og blandingen blev derpå

DK 164224 B

32 omrørt i 1 time ved samme temperatur. Reaktionsblandingen blev vasket i rækkefølge med 10 ml vand, 5 ml fortyndet saltsyre og 5 ml vand og blev derefter tørret over vandfrit magnesiumsulfat og destilleret under vakuum. Ind-5 dampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 450 mg 75-[4-{bis(methoxycarbonyl)-methylen}-l, 3-dithietan-2-yl] -carboxamido-7a-methoxy-3- 3 (1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxyl-syre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af 10 chloroform og ethylacetat i rumfangs forholdet 6:1 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDCl^) 6 (ppm): 3,58 (5H, CH^O- fra Cy og -CHg- fra Cg ), 15 3,80 (6h, -C00CH3 ),

N—N

3.83 (3H, ch3 2o 4,20 (2H, -CHgS- fra C3 ), /S.

4.84 (IH, >CH- ), 5,07 (IH, H fra Cg ), 25 6,93 ( IH, -CH(C6H3)2 ), 7,3^ (10H, H i phenyl fra -CH(CgH3)g )· I en blanding af 4 ml tri fluoreddikesyre og 1 ml anisol 30 blev opløst 400 mg 75-[4-{bis(methoxy-carbonyl)methylen}- 1,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3-( 1-methylte- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhy-drylester. Opløsningen blev omrørt i 1 time under isafkøling. Reaktionsblandingen blev inddampet til tørhed, og 35 inddampningsresten blev blandet med ether. Produktet blev opsamlet ved filtrering, vasket grundigt med ether og tørret natten over over phosphorpentoxid under vakuum, 33 hvilket gav 200 mg 70-[4-{bis(methoxycarbonyl)methylen}- 1,3 -di thietan- 2 -y 1 ] car boxamido- 7 a -methoxy- 3 - (1 -me thyl te -trazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

5 NMR-spektrum (Dg-DMSO) * (ppm): 3,44 (3H, CH^O- fra Cy ), 3,70 (6h, -COOCHj ),

N— N

10 3.93 (3H, ), ch3 4,29 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5,08 (IH) 7 .S.

f =C >CH- og H fra CA.

15 5,16 (IH) J 6 REFERENCEEKSEMPEL 6: CH-,000^.

20 3 /C = C. ^CHCOOH

CH^OOC ^ \5 ^ I 10 ml vandfrit tetrahydrofuran blev suspenderet 2,1 g 25 dinatrium-2,2-bis(methoxycarbonyl)ethylen-l,l-dithiolat.

Efter tilsætning af 2,2 g natriumdibromacetat til suspensionen blev blandingen omrørt i 2 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum, og inddampningsresten blev op-30 løst i 5 ml vand. Opløsningen blev indstillet på pH 3,5- 4,0 med fortyndet saltsyre og ekstraheret med ethylace-tat. Ekstrakten blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev blandet med ether og filtreret, 35 hvilket gav 1,5 g 4- [bis(methoxycarbonyl )methylen] -1,3- dithietan-2-carboxylsyre.

DK 164224 B

34 NMR-spektrum (Dg-DMSO) CH-.OOC\ δ (ppm): 3,70 (6H, 3 ), CH,00C^ 3 5 ^ 5,20 (IH, —C j:CH- ), EKSEMPEL 11 10 PCH3 H00C^: c=c^S>hcohk--ΪΓ^ίί H00C S 0//—!’\^CH.2S 15 C00H · CH3 (a). X 5 ml methylenchlorid blev opløst 500 mg [4-bis-(tert. -butoxycarbonyl) methy len-1,3 -di thiet an-2 -yl ] car-20 boxylsyre. Efter tilsætning af 226 mg pyridin og yderligere 360 mg phosphorpentachlorid til opløsningén under isafkøling blev blandingen omrørt i 30 minutter. Blandingen blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 500 mg 70-amino-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5- 3 25 yl)-thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 10 ml methylenchlorid og afkøling til en temperatur på fra -20 til -30 °C, og blandingen blev omrørt i 1 time ved samme temperatur. Reaktionsblandingen blev vasket i rækkefølge med 10 ml vand, 5 ml fortyndet saltsyre og 5 30 ml vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og derpå blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum. Ind-dampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en blanding af chloroform og ethylacetat i rumfangsforholdet 6:1 som elueringsmiddel, 35 hvilket gav 300 mg 70-[4-{bis(tert.-butoxycarbonyl )methy-len}-l, 3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3-( 1-me- 3 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-a -cephem-4-carboxylsyre-

DK 164224B

35 benzhydrylester.

NMR-spektrum (CDClg) * (ppm): 1,50 (18H, t-C^ ), 5 3,60 (5H, CH^O- fra Cy og -CHg- fra C2 ),

N—N

3,86 (3H, ch3 10 4,40 (2H, -CH2-S- fra C3 ), 4,82 (IH, —\ /CHr ), 5,10 (IH, H fra Cg ), 15 6>94 (IH, -CH(CgH5)2 ), 7,38 (10H, H i phenyl fra. -CH(CgH3)2 ).

(b). I en blanding af 4 ml trifluoreddikesyre og 0,5 ml 20 anisol blev opløst 200 ml 70-[4-{bis(tert.-butoxycarbo-nyl)methylen}-l,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy- 3 3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxyl- ! syre-benzhydrylester. Opløsningen blev omrørt i 1 time under isafkøling. Opløsningsmidlerne blev derpå afdestil-25 leret under vakuum, og ether blev sat til den således dannede inddampningsrest til dannelse af et bundfald, som blev opsamlet ved filtrering. Efter vask af bundfaldet med ether blev der opnået 100 mg 7d —[4—(dicarboxymethy-len)-1,3-dithietan-2-yl]-carboxamido-7a-methoxy-3-(1-me- 3 30 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,44 (3H, CH30- fra C? ), 3,64 (2H, -CH?- fra C9 ), 35 ^

N—N

3,93 (3H, ji.N,N ), ch3

DK 164224 B

36 4,30 (2H, -CH2-S- fra C3 ), 5,16 (IH) 1 5 H fra Cfi og < ) CH- 5,24 (IH) j 6 - .

REFERENCEEKSEMPEL 7: io (oh3),cooo ,s

^ Nc = CX ^CHGOOH

(CHjJjCOOG^ 15 Ved den samme procedure som i referenceeksempel 6, men under anvendelse af dinatrium-2,2-bis(tert.-butoxycarbo-nyl)ethylen-l,1-dithiolat, blev der opnået 4-[bis(tert.-butoxycarbonyl)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 1,46 (9H, (CH^COOC- ), 5,18 (IH, JTCH- ).

25 EKSEMPEL 12 OCH , /Sx j ? „ >? p t_,/CsC\s/CHC0:Cii i i i ii b _L ^ΐ-αι,Β-κ. β o I i C00H CH^ ·/ (a). I 12 ml tetrahydrofuran blev opløst 370 mg 70- 3 amino-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -35 cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester, 150 mg N,N'-dicyclohexylcarbodiimid og 150 mg 4-[(carbamoyl)(cyano)-methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre efterfulgt af om-

DK 164224 B

37 røring i 2 timer ved stuetemperatur. Det dannede bundfald blev frafiltreret, og opløsningsmidlet blev afdestilleret fra filtratet under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse 5 af en blanding af chloroform og 2-propanol i rumfangsforholdet 9:1 som elueringsmiddel, hvilket gav 190 mg 75-[4-{(carbomoyl)(cyano)-methylen}-l, 3-dithietan-2-yl-carbox- 3 amido]-7e-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester.

10 NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 3,55 (3H, 2H, —CHjO og -CHg- fra C£ ),

>=N

3,83 (3H, CH,-N^ j 15 ^ XN=N

4,32 (2H, -CH2- fra C3 ), 5,08 (IH) H fra C og — x CHC0- 5,20 (IH) 6,92 (IH, ^2CH- ), 20 7,30 (10H, (C6H5)2CH- ).

25 (b). I 10 ml methylenchlorid blev opløst 160 mg af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt. Efter tilsætning dertil af 0,5 ml anisol blev blandingen afkølet til -20 °C. Efter dråbevis tilsætning af 25 ml trifluoreddikesyre til blandingen ved en temperatur på fra -20 til -10 °C 30 blev blandingen omrørt i 1 time ved fra -10 til 0°C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, og efter tilsætning af 15 ml ether til inddampningsresten blev blandingen omrørt i 20 minutter. Blandingen blev derpå filtreret under vakuum, og det frafiltrerede bundfald 35 blev vasket omhyggeligt med ether og tørret under vakuum, hvilket gav 80 mg 75-[4-{(carbomoyl)(cyano)methylen}-l,3-dithietan-2-yl-carboxamido]-7a-methoxy-3-(1-methyltetra-

DK 164224 B

38 3 zol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 3,44 (3H, ZYL^Q- ), 5 3,84 (2H, -CH2- fra C£ ), 3,95 (3H, CH,-N ^ f ), 4,32 (2H, -CH2- fra ), 10 5,17 (IH, H fra C6 ), /S.

5,51 (IH, — C C ^CHCO- ).

15 REFERENCEEKSEMPEL 8: NC.

= C. N3HC00C(CHj,

HgNOC^ J J 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 2 I 50 ml dimethylsulfoxid blev opløst 4,8 g dinatrium-2- 3 carbomoyl-2-cyano-ethylen-l,1-dithiolat. Efter tilsætning 4 af 6,28 g tert.-butyldibromacetat til opløsningen blev 5 blandingen omrørt i 48 timer ved stuetemperatur. Opløs- 6 ningsmidlet blev afdestilleret fra den dannede reaktions 7 blanding under vakuum, og produktet blev ekstraheret med 8 ethylacetat. Ekstrakten blev vasket med vand og derpå med 9 en vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit 10 magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev derpå afdestil- 11 leret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet 12 silicagel-søjlekromatografi, og der blev opnået 0,8 g 13 tert.-butyl-4-[(carbomoyl)(cyano)methylen]-1,3-dithietan- 14 2-carboxylat under anvendelse af en blanding af chloro 15 form og ethylacetat i rumfangsforholdet 7:1 som elu- 16 eringsmiddel.

DK 164224 B

39 NMR-spektrum (D^-DMSO) δ (ppm): 1,47 (9H, (CH^COOC- ), 5,42 (IH, — C C" > CH- ).

5 S' REFERENCEEKSEMPEL 9: . __ NC\

io = C. ✓CHCOOH

HgKOC^ 15 Til 0,4 g tert.-buty1-4-[(carbomoyl)(cyano)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylat fremstillet som beskrevet i referenceeksempel 7 blev tilsat 2 ml anisol og 8 ml trifluor-eddikesyre. Blandingen blev omrørt i 1 time ved stuetemperatur. Opløsningsmidlerne blev afdestilleret under va-20 kuum, og inddampningsresten blev blandet med 10 ml ether efterfulgt af omrøring i 1 time. Det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med ether og tørret under vakuum, hvilket gav 0,15 g 4-[(carbomoyl)(cyano)-methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre.

25 EKSEMPEL 13 OCR.

FP ς 1 J

^C=C XHCONH-h__/N K---N

30 XC' I II i I .

-N ^i-CH2S~i^ 0 I j" C00H CH, 35 (a). I 12 ml methylenchlorid blev opløst 0,43 g 7/5-amino- 3 7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem- 4-carboxylsyre-benzhydrylester. Efter afkøling af opløs- 40

DK 164224 B

ningen til -40 °C blev 0,65 g pyridin tilsat. Derpå tilsattes dråbevis en opløsning, fremstillet ved opløsning af 0,2 g 4-(dicyano-methylen)-l,3-dithietan-2-carboxyl-syre i 8 ml methylenchlorid, tilsætning af 0,21 g phos-5 phorpentachlorid og omrøring af blandingen i 25 minutter ved stuetemperatur, til den ovenfor fremstillede blanding ved en temperatur på fra -40 til -25 °C, og den samlede blanding blev omrørt i 1 time ved fra -30 til -20 °C. Efter fuldførelse af reaktionen blev 60 ml chloroform sat 10 til reaktionsblandingen, og blandingen blev vasket med 1% saltsyre, vand og derpå en mættet vandig natriumchlorid-opløsning. Det organiske lag blev skilt fra og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlerne blev afdestilleret under vakuum, og inddampningsresten blev 15 underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,37 g 70-[4-(dicyanomethylen)-1,3-dithietan-2~yl]carboxamido- 3 7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem- 4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af chloroform og 2-propanol i rumfangsforholdet 20 40:1 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDCl^) s (ppm): 3,54 (5H, -CH2- fra Cg og ---0CH* ), 3,86 (3H, ), 25 4h3 4.30 (2H, -CHgS- fra C, ), 5,06 (2H, H fra Cg og ), 30 6,90 (IH, -CH(CgH5)2 ), 7.30 (10H, -CH(C6H5)2 ).

(b). I 10 ml methylenchlorid blev opløst 0,37 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt. Efter tilsætning 35

DK 164224 B

41 af 0,5 ml anisol til opløsningen blev blandingen afkølet til -20 °C. Derpå blev 2 ml tri fluoreddikesyre dråbevis sat til blandingen ved fra -20 til -10 °C, og den resulterende blanding blev omrørt i 30 minutter ved fra -10 5 til -5 °C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, og 20 ml ether blev sat til inddampningsresten efterfulgt af omrøring i 30 minutter. Blandingen blev filtreret under vakuum, og det opsamlede bundfald blev vasket grundigt med ether og tørret under vakuum, hvilket 10 gav 0,21 g 70-[4-(dicyanomethylen)-l,3-dithietan-2-yl]-carboxamido-7a-methoxy-3-( 1-methyl tetrazol-5-yl )thio- 3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 15 δ (ppm): 3,44 (3H, ---OCH^ ) 3,64 (2H, -CH2- fra C2 ), 3,94 (3H, ), 6h3 20 4,30 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5,18 (IH, H fra C6 ), 5,62 (IH, =. JCH- ).

25 REFERENCEEKSEMPEL 10: hCv. S v.

">0 = CCT /CKC00C(CK,),

NC^ -5 J

30

Til 15 ml methylenchlorid blev tilsat 0,28 g tert.-butyl- 4-[(carbamoyl)(cyano)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylat 35 fremstillet som i referenceeksempel 7. Efter tilsætning af 0,33 g pyridin og 0,43 g phosphorpentachlorid blev blandingen omrørt i 30 minutter ved stuetemperatur. Derpå 42

DK 164224 B

blev 30 ml chloroform sat til reaktionsblandingen, og blandingen blev vasket med 1 normal svovlsyre, 5% vandig carbonatopløsning og derpå en mættet vandig natriumchlo-ridopløsning. Blandingen blev derefter tørret over vand-5 frit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,23 g tert.-butyl-4-dicyanomethylen-l, 3-dithietan-2-carboxylat under anvendelse af chloroform som elueringsmiddel.

10 NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,54 (9H, -C00C(CH3)3 ), 5,02 (IH, —C JCH- ).

15 S/ REFERENCEEKSEMPEL 11: NC /S-.

on = C C ^CHCOOH

Til 0,23 g tert. -butyl-4-dicyanomethylen-l, 3-dithietan-2-carboxylat fremstillet som i referenceeksempel 9, blev 25 tilsat 2 ml anisol og 6 ml trifluoreddikesyre, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer. Opløsningsmidlerne blev afdestilleret under vakuum, og 10 ml hexan blev blandet med inddampningsresten efterfulgt af omrøring i 10 minutter. Opløsningsmidlet blev fjernet ved 30 dekantering. Derpå blev samme procedure anvendt to gange på den således dannede rest. Resten blev derpå tørret under vakuum, hvilket gav 0,8 g 4-dicyanomethylen-l,3-di-thietan-2-carboxylsyre.

35

DK 164224 B

43 EKSEMPEL 14 G OH} S * ^ r*

s H00CCH<s>!CC-Hjj (I

)—h/m I I.

COOli Cn3 10 (a). I 20 ml methylenchlorid blev opløst 0,714 g 4-(tert. -butoxycarbonylmethylen) -1,3-dithietan-2-carboxyl-syre. Derpå blev 0,454 g pyridin sat til opløsningen efterfulgt af afkøling til en temperatur under 5 °C. Der-15 efter blev 0,630 g phosphorpentachlorid sat til blandingen til frembringelse af reaktion i 1 time ved en temperatur under 10 °C. Den opnåede reaktionsblanding blev afkølet til ca. -50 °C, og til reaktionsblandingen blev dråbevis tilsat en opløsning fremstillet ved opløsning af 20 1/5 g 70-amino-7a~methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)-thio- 3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 15 ml methylenchlorid. Derpå blev 3 ml pyridin tilsat, og reaktionen blev gennemført i 1 time ved fra -30 til -35 °C.

Efter fuldførelse af reaktionen blev 20 ml 6 normal salt-25 syre sat til reaktionsblandingen ved en temperatur under 0°C. Det dannede methylenchloridlag blev skilt fra, og det vandige blev yderligere ekstraheret med 20 ml methylenchlorid. Ekstrakten blev forenet med methylenchlo-ridlaget, og blandingen blev vasket 2 gange med hver 20 30 ml mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev af destilleret til opnåelse af 1,89 g af en brun karamelagtig inddampningsrest. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,308 g 7/>-[(4-3 5 tert. -butoxycarbonylmethylen )-1,3 -di thietan- 2 -yl ] carbox- 3 amido-7a-methoxy-3-( 1-methyltetrazol-5-yl )thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af 44

DK 164224 B

en blanding af ethylacetat og n-hexan i rumfangsforholdet 2:1 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 5 δ (ppm): 1,40 (9H, tert.-butyl), 3,44 (3H, ---OCHj ), 3.88 (3H, ), 4h3 10 5,23 (IH, H fra C6 ), 5,33 (IH, -=C >CH- ), 6.88 (IH, -CH(C6H5)2 ), 15 9,66 (IH, -C0NH- ).

(b). I 1,7 ml anisol blev opløst 0,3 g af det i trin (a) fremstillede produkt. Efter afkøling af opløsningen til en temperatur under -5 °C blev 5,1 ml trifluoreddikesyre 20 dråbevis sat til opløsningen ved en temperatur under 0°C. Derefter blev reaktionen gennemført i 30 minutter ved 0-5 °C, og derpå i yderligere 30 minutter ved 5-10 °C. Efter fuldførelse af reaktionen, blev anisol og trifluoreddikesyre afdestilleret under vakuum, og inddampningsresten 25 omdannet til pulver ved tilsætning af ether. Pulveret blev vasket grundigt med ether og tørret, hvilket gav 0,1584 g svagt lysegult pulveragtigt 70-[4-(carboxy-methylen)-1,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7 a-methoxy-3-(1- 3 methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

30 NMR-spektrum (Dg-DMSO) s (ppm): 3,43 (3H, — OCH^ ), 35

DK 164224 B

45 3,94 (3H, ^ΓΓ" ), ch3 5,17 (IH, H fra C6 ), 5 5,33 (IH, J>CH- ), 5,84 (IH, -CH=-< \ ), 10 9,63 (IH, -CONH- ).

REFERENCEEKSEMPEL 12: 15 En blanding af 80 ml dimethoxyethan og 20 ml tetrahydro-furan, som begge var befriet for oxygen ved destillation, blev afkølet til under -70 °C i en nitrogenstrøm, og efter tilsætning af denne blanding af 2 ml N-isopropyl-cyclohexylamin og 6,86 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-20 hexan-opløsning blev 1,16 g tert.-butylacetat tilsat blandingen dråbevis. Reaktionen blev gennemført i 30 minutter ved en temperatur under -70 °C, og derpå blev 0,664 ml carbondisulfid sat til reaktionsblandingen i løbet af ca. 30 minutter ved en temperatur under -72 °C.

25 Reaktionsblandingen udviste en lysegul farve. Efter at reaktionen var forløbet i 20 minutter ved en temperatur under -70 °C, blev 6,8 ml 15% n-butyl-lithium/n-hexan-opløsning dråbevis sat til reaktionsblandingen i løbet af 15 minutter ved en temperatur under -72 °C. Derefter blev 30 reaktionen yderligere gennemført i 20 minutter ved en temperatur under -70 °C, og derpå blev en opløsning indeholdende krystaller af natriumdiiodacetat fremstillet ud fra 0,48 g 50% natriumhydrid og 3,12 g diiodeddikesyre i 15 ml dimethoxyethan sat til reaktionsblandingen. Reak-35 tionsblandingens temperatur fik lov at stige til stuetemperatur, og reaktionsblandingen fik yderligere lov til at reagere natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret,

DK 164224 B

46 og det opnåede sortbrune olieagtige materiale blev ekstraheret ved tilsætninger af 50 ml kold ether og 20 ml 1 normal saltsyre.

5 Det vandige lag blev yderligere ekstraheret ved tilsætning af 30 ml kold ether, og ekstrakterne blev kombineret. Denne blanding blev vasket to gange med hver 30 ml mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og etheren blev derpå afdestilleret 10 til opnåelse af 3 g af et brunt olieagtigt produkt. Produktet blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,564 g 4-(tert.-butoxycarbonylmethylen)-1,3-dithietan-2-carboxylsyre under anvendelse af en blanding af chloroform, methanol og myresyre i rumfangsforholdet 15 95:5:2 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 1,45 (9H, tert.-butyl), __ 2o 5,03 (XH, /CH- ),

S

5,69 (IH, -CH "> ).

'S·^ 25 EKSEMPEL 15 CCH- K00Cx i 5 tt « >J=C / CliCONii —!-s' > K---f CH.S0,/ j ! Il 30 3 2 J--:;^^>-ch2s— CC0H- . Cii3 (a). I 8 ml methylenchlorid blev opløst 0,32 g 7/5-amino-35 7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem- 4-carboxylsyre-benzhydrylester. Efter afkøling af opløsningen til -30 °C blev 0,48 g pyridin sat til opløs-

DK 164224 B

47 ningen. Derpå blev en opløsning fremstillet ved opløsning af 0,37 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)(methylsulfonyl)methy-len]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre i 8 ml methylenchlorid og tilsætning dertil af 0,25 g phosphorpentachlorid og 5 0,18 g pyridin dråbevis sat til opløsningen ved en tempe ratur på fra -40 til -30 °C. Efter omrøring af blandingen i 1 time ved fra -30 til -20 °C blev 50 ml chloroform sat til blandingen, og den resulterende blanding blev vasket med 1% saltsyre, vand og derpå mættet vandig natrium-10 chloridopløsning og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, og ind-dampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,25 g 75-{4-[(tert.-butoxycarbonyl ) - (methylsulfonyl )methylen] -1,3-dithietan-2~yl }car-15 boxamido-7a-methoxy-3-( l-methyltetrazol-5-yl )thiomethyl~ 3 Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af chloroform og 2-propanol i rumfangsforholdet 40:1 som elueringsmiddel.

20 NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,54 (9H, tert.-butyl), 3.18 (3H, v 3.18 (3H, CH3S0p= ), 3,58 (3H, ---0CH3 ), 25 3,84 (3H, ), ch3 4,16 (2H, -CH2- fra C3 ), 5,07 (IH, H fra C6 ), 30 /S.

5,31 (IH, =< >CH ), 6,91 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,30 (10H, -CH(C6H5)2 ).

OO

DK 164224 B

48 (b). Til 2,5 ml anisol blev tilsat 0,2 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt. Opløsningen blev afkølet til -20 °C, og derpå blev dråbevis tilsat 10 ml trifluor-eddikesyre ved fra -20 til -10 °C. Efter omrøring af 5 blandingen i 20 minutter ved samme temperatur blev blandingen yderligere omrørt i 40 minutter ved 10 °C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, inddamp-ningsresten blev blandet med 30 ml ether, og blandingen blev omrørt i 20 minutter. Reaktionsblandingen blev fil-10 treret under vakuum, og det opsamlede bundfald blev vasket grundigt med ether og tørret under vakuum, hvilket gav 0,08 g 7 0-{4-[(carboxy)(methylsulfonyl)-methylen]- 1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7 a-methoxy-3-(1-methylte- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

15 NMR-spektrum (Dg-DMSO) « (ppm): 3,20 (3H, CH s0> ), D <- 3,45 (3H, 0CH3 ), 20 3,62 (2H, -CH2- fra C2 ), 3,94 (3H, ), ch3 4,30 (2H, -CH2- fra C3 ), 25 5,13 (IH) 7 H fra Cr og >CH- .

5,17 (IH) 6 REFERENCEEKSEMPEL 13: 30

(CH.hCOOC* , 5X

/C = / CHC00H

CK^SOo ^ S" 35 I 65 ml tert.-butanol blev opløst 2,05 g tert.-butyl-methylsulfonylacetat. Efter tilsætning af 1,32 g kalium tert.-butylat blev blandingen omrørt i 5 minutter. Der-

DK 164224 B

49 efter blev der dråbevis sat 0,91 g carbondisulfid til blandingen efterfulgt af omrøring i 5 minutter, hvorpå 1,32 g kalium tert.-butylat blev sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 1 time. Derpå blev 3,8 g diiod-5 eddikesyre og 1,32 g kalium tert.-butylat sat til blan dingen, og den resulterende blanding blev omrørt natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum. Inddampningsresten blev vasket med vand, indstillet på pH 2 med 10% saltsyre og ekstra-10 heret med ethylacetat. Ekstrakten blev vasket med vand og derpå med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 1,7 15 g 4[(tert.-butoxycarbonyl)(methylsulfonyl)methylen]-l,3- dithietan-2-carboxylsyre under anvendelse af en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 50:1 som elueringsmiddel.

20 NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,52 (9H, (CH3)3C00C- ), 3,20 (3H, CH3S02- ).

EKSEMPEL 16 25 CO- H00C\ Γ*3 „

/r~\ >=C. >nC0?;H-^ \ N-N

Η0-/Λ/ { j Il //— o' j f 1 2 3 4 5 6 CC0H CK~ 2 < 3 -j 4 (a). I 1,5 ml methylenchlorid blev opløst 0,6 g 4-(4-tert. -butoxy-a-tert. -butoxycarbonylbenzyliden )-l, 3-dithi- 5 etan-2-carboxylsyre. Efter tilsætning af 0,2 ml pyridin 6 og yderligere 0,285 g phosphorpentachlorid under isafkøling blev blandingen omrørt i 7 minutter. Opløsningen blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 50

DK 164224 B

0,5 g 7/J-amino-7a-methoxy-3-( 1-methyl tetrazol-5-yl )thio- 3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 15 ml methylenchlorid, afkøling til -30 til -40 °C og tilsætning af 0,45 ml pyridin, og blandingen blev omrørt i 20 5 minutter ved samme temperatur.

Reaktionsblandingen blev blandet med 60 ml chloroform, vasket med ca. 30 ml vand, ca. 30 ml 1-2% saltsyre og derpå 30 ml vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, 10 og opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,4 g 70-[4-(4-tert.-but-oxy-a-tert.-butoxycarbonylbenzyliden)-!,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thio- 3 15 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 11:2 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDClg) 20 δ (ppm): 1,35 (9H), Ί f tert.-butyl 1,47 (9H), ) 3,60 (5H, OCHj og -CH2- fra C2 ), 3.83 (3H, nN-" ), 25 iH3 /S\ 4.83 (IH, ^ ), xs 5,08 (IH, H fra Cg ), 30 6,92 (IH, -CH(CgH5)2 ), 6·* <«) JH- 7.« <210 j J-<t 35

DK 164224 B

51 (b). I en blanding af 10 ml trifluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst 0,4 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt under isafkøling. Blandingen blev omrørt i ca. 30 minutter ved 10 °C. Opløsningsmidlet blev af-5 destilleret under vakuum, og 40 ml ether blev sat til inddampningsresten til dannelse af bundfald, som blev opsamlet ved filtrering og vasket med ether, hvilket gav ca. 0,2 g 7Æ-[4-( a-carboxy-4-hydroxybenzyliden)-l,3-di-thietan-2-yl] carboxamido-7a-methoxy-3- (1-methyltetrazol- 3 10 5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3j42 (3H> —0CH5 ), 3,94 (3H, XN^ ),

15 I

ch3 /S V.

5,15 (2H, H fra C6 og =\ >CH- ),

S

20 6'74(2H) ] H0 -H-

7,03 (2H) J W

H· ri REFERENCEEKSEMPEL 14: 25 (CH.KCOOC^.

3 3 \c= C C JxCHCOOH

(ch3)3co^Q^ 1 2 3 4 5 6 2

Til 8,6 ml af en 15% kalium tert.-butylat/tert.-butanol- 3 opløsning blev tilsat 2,5 g tert.-butyl-4-tert.-butoxy- 4 phenylacetat og 25 ml vandfrit tetrahydrofuran under om 5 røring ved stuetemperatur. Efter omrøring af blandingen i 6 2-3 minutter blev 0,6 ml carbondisulfid dråbevis sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 10 minutter. Derpå blev 8,6 ml af en 15% kalium tert.-butylat/tert.-butanol- 52

DK 164224 B

opløsning sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 5 minutter, yderligere 8,6 ml af en 15% kalium tert.-buty-lat/tert.-butanolopløsning blev sat til blandingen, og endelig blev 1,22 g dichloreddikesyre dråbevis sat til 5 blandingen ved ca. 30 °C efterfulgt af omrøring i 40 minutter ved stuetemperatur.

Efter tilsætning af dichloreddikesyre til reaktionsblandingen, indtil denne blev svagt alkalisk, blev opløs-10 ningsmidlet afdestilleret under vakuum, og inddampnings-resten blev blandet med isvand efterfulgt af vask med ether. Derpå blev 0,5 ml 3 normal saltsyre sat til blandingen, og produktet blev ekstraheret med ether. Til ekstrakten blev yderligere sat 0,5 ml 3 normal saltsyre.

15 Produktet blev ekstraheret med ether, og denne procedure blev gentaget en gang til. Hver ekstraktfraktion blev efterprøvet ved silicagel-tyndtlagskromatografi, og de fraktioner, der indeholdt slutproduktet, blev opsamlet og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Derpå blev opløs-20 ningsmidlet afdestilleret under vakuum, hvilket gav 1,3 g 4-(4-tert.-butoxy-a-tert.-butoxycarbonylbenzyliden)-1,3-dithietan-2-carboxylsyre.

NMR-spektrum (D^-DMSO) 25 * (ppm): 1,35 (9H) - (CH,),C- , 1,48 (9H) J 3 3 4,85 (IH, >CH- ), 30 6,93 (2H) i o-M- 7,15 (2H) J >—<

Η H

35

DK 164224 B

53 EKSÉMFEL 17 OCH, HOOC .Sv ! -3 s

,τ-Λθ*(< y CHCONH —-^ \ N-N

fy N/ Il i il 0 T i COOH CH3 (a). I 15 ml methylenchlorid blev opløst 0,5 g 4-(a-10 tert. -butoxycarbonylbenzyliden) -1,3-dithietan-2-carboxyl- syre. Efter tilsætning af 0,2 ml pyridin og yderligere 0,285 g phosphorpentachlorid under isafkøling blev blandingen omrørt i ca. 20 minutter. Derpå blev der ved behandling af reaktionsblandingen som i eksempel 16(a), 15 men under anvendelse af en blanding af benzen og ethyl-acetat i rumfangsforholdet 9:2 som elueringsmiddel for silicagel-søjlekromatografi, opnået ca. 0,4 g 7ί-[4-(α-tert. -butoxycarbonylbenzyliden)-l, 3-dithietan-2-yl]car-boxamido-7a-methoxy-3- (l-methyltetrazol-5-yl )thiomethyl- 3 20 δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester.

NMR-spektrum (CDClg) * (ppm): 1,46 (9H, tert.-butyl ), 3,58 (5K, —0CH3 og -CH2- fra C2 ), 25 3,80 (3H, ), ch3 4,85 (IH, >CH- ), 30 5,08 (IH, H fra C6 ), 6,93 (IH, -CH(C6H5)2 ), omtrentlig 7,34 (15H, Cg^- og (CgH^CH- ).

35 (b). Ved behandling af 0,4 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt analogt med eksempel 16(b) blev der opnået ca. 0,2 g 7Æ-[4-(a-carboxybenzyliden)-l,3-dithi-

DK 164224 B

54 etari-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol- 5 - 3 yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 5 6 (ppm): 3,41 (3H, ---OCH^ ), 3,92 (3H, ), ch3 5,16 (IH) Ί f H fra Cc og ---- . CH-

10 5,19 (IH) J

7,28 (5H, C6H5- ).

REFERENCEEKSEMPEL 15: 15 (ch3)3cooc

- C\ ^ CHCOOH

20

Til 15,6 g af en 15% kalium tert.-butylat/tert.-butanol-opløsning blev tilsat 4 g tert.-butyl-phenylacetat og derpå 1,6 g carbondisulfid under omrøring ved stuetemperatur. Efter omrøring af blandingen i 15 minutter blev 20 25 ml vandfrit tetrahydrofuran og derpå 31,2 g af en 15% kalium tert.-butylat/tert.-butanolopløsning sat til blandingen, og derpå blev der ved 30-40 °C dråbevis sat 2,7 g dichloreddikesyre til blandingen efterfulgt af omrøring i 30 minutter ved samme temperatur til afslutning af omsæt-30 ningen.

Efter tilsætning af dichloreddikesyre til reaktionsblandingen, indtil blandingen blev svagt alkalisk, blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum, og inddamp-35 ningsresten blev blandet med isvand efterfulgt af vask med ether. Derpå blev 0,5 ml 3 normal saltsyre sat til blandingen, og produktet blev ekstraheret med ether. Til

DK 164224 B

55 ekstrakten blev yderligere sat 0,5 ml 3 normal saltsyre. Produktet blev ekstraheret med ether, og proceduren blev gentaget endnu en gang. Hver af de opsamlede fraktioner blev efterprøvet ved silicagel-tyndtlagskromatografi, og 5 de fraktioner, der indeholdt det ønskede materiale, blev opsamlet og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Derpå blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum, hvilket gav ca. 1 g 4-(α-tert.-butoxycarbonylbenzyliden)-l,3-di-thietan-2-carboxylsyre.

10 NMR-spektrum (Dg-DMSO) i (ppm): 1,40 (9H, (CHJ.COOC- ), 5,17 (IH, =C), 15

HH

omtrentlig 7,30 (5H, H ~vZV ).

Η H

20 EKSEMPEL 18 OCH, H00Cn i - .Sv. vj w.

/C=C ^CHCONH—*-S \ (H^C)pNCO^ I I I i i!

25 3 2 J-CH2S-4^ N

0 T I

. COOH CH3 (a). I 15 ml methylenchlorid blev opløst 500 mg 4-30 (tert.-butoxycarbony1-N,N’-dimethylcarbomoylmethylen) - l,3-dithietan-2-carboxylsyre. Efter tilsætning af 0,19 ml pyridin og yderligere 163 mg phosphorpentachlorid under isafkøling blev blandingen omrørt i ca. 5 minutter. Opløsningen blev sat til en opløsning fremstillet ved op-35 løsning af 500 mg 7Æ-amino-7a-methoxy-3-(1-methyltetra- 3 zol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre i 15 ml methylenchlorid og efterfølgende tilsætning af 0,3 ml pyri-

DK 164224 B

56 din 'til opløsningen under afkøling af denne til -30 °C, og den samlede blanding blev omrørt i ca. 30 minutter ved denne temperatur.

5 Til reaktionsblandingen blev sat ca. 60 ml chloroform. Blandingen blev vasket med ca. 30 ml vand, ca. 30 ml 1-2% vandig saltsyre, og derpå tre gange med hver ca. 30 ml vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, og inddampnings-10 resten blev underkastet silica-gel søjlekromatografi, hvilket gav 200 mg 70-[(4-tert.-butoxycarbonyl-N,N-dime-thylcarbamoylmethylen)-1,3-dithietan-2-yl-carboxamido]- 3 7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem- 4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en 15 blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 3:2 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,48 (9H, tert.-C^Hg- ), on 2,96 (6tt, (CH3)2NC0- ), 3,60 (5H, CH^O og -CH2- fra C2 ), 3,84 (3H, CH,-N< I ),

* ^N = N

25 4,93 (IH, —C ^TCHCO- ), 5,06 (IH, H fra C6 ), 6,90 (IH, -CH(C6H5)2 ).

30 (b). I en blanding af 10 ml tri fluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt under isafkøling. Blandingen blev omrørt i ca. 30 35 minutter ved 15 °C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, 30 ml ether blev sat til inddampningsres-ten, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering 57

DK 164224 B

og vasket med ether, hvilket gav 100 mg 70-[(4-carboxy- N, N-dimethylcarbamoylmethylen) -1,3-dithietan-2-yl-carbox-amido]-7a-methoxy-3-( 1-methyltetrazol-5-yl)-thiomethyl- 3 Δ -cephem-4-carboxylsyre.

5 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 2,87 (6h, (CH^NCO- ), 3,43 (3H, CH30- ),

in >=^N

3 94 (3H, CH,-N^ I ),

5 ^N—N

5,16 (IH) ) f H fra C og 5,25 (IH) 3 s 15 REFERENCEEKSEMPEL 16: (CHJ7C00C\

p«·3 -3 = C C / CHCOOH

CH3^-Mor,/

20 vHOC

ch3^

Ved behandling af tert. -butyl-dimethylcarbamoylacetat som i referenceeksempel 15 blev der fremstillet 4-[(tert.-25 butoxycarbonyl) (dimethylcarbamoyl )methylen] -1,3-dithi- etan-2-carboxylsyre.

NMR-spektrum (CDClg) a (ppm): 1,50 (9H, (CH^COOC- ), 30 3,02 (6H, ^ >N- ), ch3^ 4,97 (IH, =C >CH- ).

35 58

DK 164224 B

EKSEMPEL 19 OCH3 5 HOOCv M w >C=C^ ^CHCONH—-f >, N,-ft 0 T i COOH CH3 10 (a). I 15 ml methylenchlorid blev opløst 0,87 g 4-[(acetyl )(tert.-butoxycarbonyl)methylen]-1,3-dithietan-2-car-boxylsyre. Efter tilsætning af 0,474 g pyridin og yder-15 ligere 0,624 g phosphorpentachlorid under isafkøling blev blandingen omrørt i 30 minutter. Denne opløsning blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 0,6 g 70- 3 amino-7«-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 20 ml methylen-20 chlorid, afkøling af opløsningen til -30 °C og tilsætning af yderligere 1 ml pyridin, og den samlede blanding blev omrørt ved samme temperatur i 1 time. Til reaktionsblandingen blev tilsat 10 ml vand, 1 ml 1 normal saltsyre og 30 ml chloroform. Chloroformlaget blev skilt fra, vasket 25 grundigt med 1% saltsyre til fuldstændig fjernelse af pyridin, derpå vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-sø j lekromatografi, hvilket gav 0,55 g 7/5 - {4 - [ ( acetyl) -30 (tert.-butoxycarbonyl)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}car- boxamido-7o-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl- 3 δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 10:2 som elueringsmiddel.

35

DK 164224B

59 NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,53 (9H, tert.-butyl ), 2,45 (3H, CH3OC- ), 3,56 (5H, ---OCH3 og -CH2- fra C2 ), 3,82 (3H, ), CH^ 4,37 (2H, -CH2S- fra ), 10 4,94 (IH, ">CH- ), 5,09 (IH, H fra Cg ), 6.94 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,20-7,50 (10H, -CH(CgH5)2 ).

(b). I en blanding af 12 ml tri fluoreddikesyre og 3 ml anisol blev opløst 0,55 g af det ovenfor i trin (a) frem-20 stillede produkt ved -5 °C. Blandingen blev omrørt ved 15 °C i 20 minutter. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, 20 ml ether blev sat til inddampningsresten, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med ether, hvilket gav 0,33 g 7Æ-{4-[(acetyl)- 25 (carboxy)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a- 3 methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMS0) 30 * (ppm): 2,38 (3H, CH30C- ), 3,43 (3H, —0CH3 ), 3.94 (3H, ), ch3 35 4,32 (2H, -CH2S- fra C3 ),

DK 164224 B

60 5,16 (IH) ) ί H fra C og —\ ^CH-.

5,30 (IH) j REFERENCEEKSEMPEL 17; 5 (CH^) ^COOCv

/C = cC / CHCOOH

ch3oct , ^ 10 Til 150 ml tert.-butanol blev tilsat 4,8 g natriumhydrid (50% i olie). Derpå blev 15,8 g tert.-butylacetoacetat gradvis tilsat blandingen. Efter yderligere tilsætning af 7,6 g carbondisulfid under isafkøling blev blandingen omrørt i 18 timer ved stuetemperatur. Derpå blev der grad-15 vist under isafkøling tilsat 4,8 g natriumhydrid (50% i olie), og efter omrøring af blandingen i 2 timer ved stuetemperatur blev 16,7 g kaliumdichloracetat sat til blandingen efterfulgt af omrøring i yderligere 2 timer.

Den opnåede reaktionsblanding blev inddampet under va-20 kuum. Inddampningsresten blev blandet med 300 ml ethyl-acetat og 200 ml isvand, og blandingen blev indstillet på pH 3-4 med 1 normal saltsyre. Det organiske lag blev vasket med en vandig natriumchloridopløsning, og ekstraheret med en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning.

25 Ekstrakten blev vasket med 50 ml ethylacetat, indstillet på pH 3-4 med 1 normal saltsyre og ekstraheret med 200 ml ethylacetat. Ethylacetatekstrakten blev vasket med en vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og derpå inddampet. Inddampningsresten blev 30 vasket med 50 ml af en blanding af petroleumsether og ether i rumfangsforholdet 10:1 og opløst i 5 ml ether.

Derpå blev 50 ml petroleumsether gradvist sat til opløsningen, og de udfældede krystaller blev opsamlet ved filtrering, hvilket gav 10 g 4-[(acetyl)(tert.-butoxycarbo-35 nyl )methylen] -1,3-dithietan-2-carboxylsyre.

DK 164224 B

61 NMR--spektrum (CDC13) δ (ppm): 1,53 (9H, (CH^COOC- ), 2,49 (3H, CH3OC- ), 5 4,94 (IH, — C<" ">CH- ).

EKSEMPEL 20 OCH, 10 HOOCv. I N „ N-N><s>0H00NH-rY^ T-il ^ Jy J—LJ-on2s-\ n

o T I

CO OH CH3 15 (a). I 20 ml methylenchlorid blev opløst 1,1 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)(5-methylthio-1,3,4-thiadiazol-2-yl)methy-len]-l,3-dithietan-2-carboxylsyre. Efter tilsætning af 0,462 g pyridin og yderligere 0,606 g phosphorpentachlo-20 rid under isafkøling blev blandingen omrørt i 30 minutter. Denne opløsning blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 0,9 g 7/3-amino-7a-methoxy-3-( 1-me- 3 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 30 ml methylenchlorid, afkøling af op-25 løsningen til -30 °C og tilsætning af 0,75 ml pyridin, og den samlede blanding blev omrørt i 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev blandet med 10 ml vand og 40 ml chloroform. Derpå blev det dannede chloroformlag vasket omhyggeligt med 1% saltsyre til fuldstændig fjer-30 nelse af pyridin, og derpå vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silica-gel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,2 g 70-{4-[(tert.-butoxycarbonyl)(5-methylthio-l,3,4-thiadiazol-2-yl)methy-35 len]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7«-methoxy-3-(1- 3 methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af benzen

DK 164224 B

62 og ethylacetat i rumfangsforholdet 10:2 som elueringsmid-del.

NMR~spektrum (CDClg) 5 δ (ppm): 1,58 (9H, tert.-butyl ), 2,72 (3H, CH3S- ), 3,58 (3H, ---0CH3 ), 3,80 (3H, ), 10 ^H3 4,36 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5,03 (IH)) f H fra Cc og J^CH- 5,09 (IH) J 6 15 6.90 (IH, -CH(CgH5)2 ), 7,10-7,50 (10H, -CH(C6H5)2 ) (b). I en blanding af 8 ml trifluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst 0,2 g af det ovenfor i trin (a) frem- 20 stillede produkt ved -5 °C efterfulgt af omrøring i 1 time ved 17-18 °C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, 20 ml ether blev sat til inddampningsres- ten, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med ether, hvilket gav 0,05 7l3-{4-[(carboxy)(5- 25 methyl thio-1,3,4-thiadiazol-2-yl )methylen] -1,3-dithietan- 2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)-3 thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 30 δ (ppm): 2,75 (3H> CH^S. )} 3,45 (3H, ---0CH3 ), 3,94 (3H, ), ch3 35 4,30 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5,19 (IH) Ί i H fra Cr og =·^ ^CH-5,35 (IH) j s

DK 164224B

63 REFERENCEEKSEMPEL 18: (CH3)-COOCv s

v _ ^CHCOOH

5 å y s I 100 ral tert.-butanol blev opløst 1,58 g metallisk kalium. Efter tilsætning af 10 g tert.-butyl-5-methylthio-10 l,3,4-thiadiazol-2-acetat blev blandingen omrørt i 20 minutter. Derpå blev der dråbevis tilsat 3,25 g carbondi-sulfid i løbet af 10 minutter. Efter omrøring af blandingen i 1 time blev der gradvis tilsat 4,55 g kalium-tert.-butylat efterfulgt af omrøring i 20 minutter, og 15 derpå blev der sat 6,83 g kaliumdichloracetat til blandingen efterfulgt af omrøring i 18 timer. Reaktionsblandingen blev inddampet under vakuum, og inddampningsresten blev blandet med 300 ml ethylacetat og 200 ml isvand. Blandingen blev indstillet på pH 3-4 med 1 normal salt-20 syre, og det organiske lag blev vasket med en vandig na-triumchloridopløsning og derpå ekstraheret med 1000 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Ekstrakten blev vasket med 100 ml ethylacetat, indstillet på pH 3-4 med 5 normal saltsyre, og derpå ekstraheret med 25 200 ml ethylacetat. Ethylacetatekstrakten blev vasket med en vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet. Inddampningsresten blev underkastet silica-gel søjlekromatografi, hvilket gav 1 g 4-[(tert.-butoxycarbonyl)(5-methylthio-l,3,4-thiadiazol-30 2-yl)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre under anvendelse af chloroform og derpå chloroform og methanol i rumfangsforholdet 50:1 som elueringsmidler.

35

DK 164224 B

64 NMR-'spektrum (CDClg) s (ppm): 1,59 (9H, (CH^COOC- ), 2,79 (3H, CH3S- ),

5 , / S

4,99 (IH, — C'T ^CH- ).

EKSEMPEL 21 10 OCH, HOOCv /S x !

/C=C^ ^CKCONH—-r ] N-N

15 0 I I

COOH CH, (a) . I 12 ml vandfrit tetrahydrofuran blev opløst 0,2 g 4-[(benzhydryloxycarbonyl)(sulfamoyl)methylen]-1,3-dithi-etan-2-carboxylsyre, 0,25 g 70-amino-7a-methoxy-3-(1-me- 3 20 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre- benzhydrylester og 0,1 g N,N'-dicyclohexylcarbodiimid. Opløsningen blev omrørt natten over ved stuetemperatur. Uopløselige bestanddele blev frafiltreret, og opløsningsmidlet blev afdestilleret fra filtratet under vakuum.

25 Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekroma tografi, hvilket gav 0,095 g 70-{4-[(benzhydryloxycarbonyl )(sulfamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxami- 3 do-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af 30 en blanding af chloroform og 2-propanol i rumfangsforholdet 9:1 som elueringsmiddel. 1 . I 10 ml methylenchlorid blev opløst 0,095 g af det ovenfor i trin (a) dannede produkt. Efter tilsætning af 35 0,5 ml anisol blev blandingen afkølet til -20 °C. Derpå blev 2 ml trifluoreddikesyre sat til blandingen dråbevis ved fra -20 til -15 °C, og efter omrøring af blandingen i

DK 164224 B

65 30 minutter ved samme temperatur blev den resulterende blanding yderligere omrørt i 1 time ved 0-3 °C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum, og 15 ml ether blev sat til inddampnings-5 resten efterfulgt af omrøring i 30 minutter- Reaktionsblandingen blev derpå filtreret under vakuum, og det dannede bundfald blev grundigt vasket og tørret under vakuum, hvilket gav 0,034 g 70-{4-[(carboxy)(sulfamoyl)-methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1- 3 10 methyltetrazol-5-yl )thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,42 (3H, 0CH3 ), 3,94 (3H, •"Ν'" ), 15 1 CH3 4,30 (2H, -CH2- fra C3 ), 5,12 (IH) ) _ > H fra Cr og . CH-

5,17 (IH) J

0 9,66 (IH, -NHCO- ).

REFERENCEEKSEMPEL 19: 25 NH2*°2\ .Sv

(r^ C = C ^ CKCOOH

q-yomov S 1 2 3 4 5 6 2

Til 1,12 g benzhydrylsulfamoylacetat blev tilsat 30 ml 3 vandfrit tetrahydrofuran og 20 ml tert.-butanol. Efter 4 afkøling af blandingen til -20 °C blev 0,177 g natrium- 5 hydrid (50% i olie) sat til blandingen efterfulgt af om- 6 røring i 15 minutter. Til blandingen blev så tilsat 0,3 g carbondisulfid. Den samlede blanding blev omrørt i 30 minutter ved -10 °C til -5 °C. Derpå blev der sat 0,354 g

DK 164224 B

66 natriumhydrid (50% i olie) og 1,05 g diiodeddikesyre til blandingen. Efter omrøring af blandingen i 20 minutter ved fra -10 til 0 °C blev blandingen omrørt natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret 5 fra reaktionsblandingen under vakuum, og efter indstilling af inddampningsresten på pH 2 ved tilsætning af isvand og 5% saltsyre blev reaktionsblandingen ekstraheret med ethylacetat. Ekstrakten blev vasket to gange med mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit 10 magnesiumsulfat, og derpå blev opløsningsmidlet afdestil-leret under vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,2 g 4-[(benz-hydryloxycarbonyl)(sulfamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre under anvendelse af en blanding af chloro-15 form og methanol i rumfangsforholdet 10:1 som eluerings-middel.

NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 4,66 (IH, .S.

20 4>66 (1H> ^CCS^CH" 6,96 (IH, (C6H5)2CH- ), 7,33 (10H, (C6H5)2CH- ).

25 EKSEMPEL 22 OCH* H00C\ p „ ^V°=<S>HC0SH —I—O Ί

30 M J-Nv^-CHgS

C00H Ah3 (a). I 40 ml methylenchlorid blev opløst 800 mg 4- 35 [(tert.-butoxycarbonyl)(2-pyridyl)methylen]-1,3-dithi- etan-2-carboxylsyre. Efter tilsætning af 0,3 ml pyridin og yderligere 440 mg phosphorpentachlorid under isafkø- 67

DK 164224 B

ling' blev blandingen omrørt i ca. 15 minutter. Opløsningen blev sat til en opløsning fremstillet ved opløsning af 0,8 g 7Æ-amino-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre i 25 ml methylen-5 chlorid og tilsætning hertil af 0,7 ml pyridin ved -30 °C, og den samlede blanding blev omrørt i 20 minutter ved samme temperatur. Derpå blev 200 ml chloroform sat til reaktionsblandingen, og blandingen blev vasket to gange med 150 ml af en vandig 1,3% eddikesyreopløsning og der-10 efter to gange med 100 ml vand og derpå tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, og inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav ca. 400 mg 7A-{4-[(tert.-butoxycarbonyl) (3-pyridyl)methylen]-1,3-dithi-15 etan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 2:1 som elueringsmiddel.

20 NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 1,47 (9H, t-C^Hg- ), 3,59 (5H, CH30- og -CH2- fra C2 ), 3,83 (3H, ^N-CH3 ), 25 4,91 (IH, / CH- ),

S

5,08 (IH, H fra Cg ), 6,93 (IH, -CH(C6H5)2 ), 30 8’5° (1H’ QCS >.

8,53 (H, jjjQf )· (b). I en blanding af 15 ml trifluoreddikesyre og 3 ml anisol blev opløst 400 mg af den ovenfor i trin (a) frem- 35 68

DK 164224 B

stillede forbindelse under isafkøling efterfulgt af omrøring i 40 minutter ved 10-15 °C. Opløsningsmidlet blev af destilleret under vakuum, og ca. 50 ml ethér blev sat til inddampningsresten til dannelse af bundfald, som blev 5 opsamlet ved filtrering og vasket med ether. Bundfaldet blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav ca. 100 mg 7 J5 — {[4-(carboxy) (3-pyridyl)methylen]-l,3-di-thietan-2-yl}carboxamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol- 3 5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre under anvendelse 10 af en blanding af chloroform, methanol og myresyre i rumfangsforholdene 50:7:1 som elueringsmiddel.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): omtrentlig 3,41 (3H, CH^O- ), 15 3,93 (3H, CHjNC ), 5,15 (IH) i H fra Cc og —/CH- ), 5,24 (IH) s 20 7,39 (IH, - ),

H

7,67 (IH, LjT ).

N

25 HXi )- 30 REFERENCEEKSEMPEL 20: (CH.KCOOCv^ /Sv.

^ C = Cif /CHC00H

ςτ 35

DK 164224B

69

Ved behandling af tert.-butyl-3-pyridylacetat som i referenceeksempel 15 blev der fremstillet 4-[(tert.-butoxy-carbonyl)(3-pyridyl)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxylsyre.

5 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): lj42 (9H, CH^COOC- ), 5,22 (IH, ~ C<" / CH- ), 10 7,40 (IH) 'j jj 7,66 (IH) ( 8,45 (2H) J H · 15 EKSEMPEL 23 ° ?ch3 N,-" h2noc/ ^ Li

20 // Y I

C00H CH^ (a). I 55 ml vandfrit tetrahydrofuran blev opløst 0,22 g 4-[(acetyl)(carbamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-carboxyl-25 syre, 0,496 g 70-amino-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester og 0,194 g N,N'-dicyclohexylcarbodiimid. Opløsningen blev omrørt i 2 timer ved stuetemperatur. Uopløselige bestanddele blev frafiltreret, og filtratet blev inddampet under 30 vakuum. Inddampningsresten blev underkastet silicagel- søjlekromatografi, hvilket gav 0,35 g 7Æ-{4-[(acetyl)-(carbamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a- 3 methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af først en 35 blanding af chloroform og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1 og derpå en blanding af chloroform og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:3 som elueringsmidler.

DK 164224 B

70 (b).' I en blanding af 8 ml tri fluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst 0,35 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt ved -20 °C efterfulgt af omrøring i 30 minutter ved 0°C. Reaktionsblandingen blev inddampet, og 5 inddampningsresten blev blandet med ether efterfulgt af omrøring i 30 minutter. Det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med ether, hvilket gav 0,09 g 7Æ-{[4-(acetyl)(carbamoyl)methylen]-l,3-dithietan-2- yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thio-3 10 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) q 6 (PPm): 2,32 (3H, H3C-C- ), 15 3,42 (3H, CH^O- fra C? ),

N— N

3’93 (3Ηί λΝ-Ν ch3 20 4,30 (2H, -CH2S- fra C3 ), 5,17 (IH) ) _ 5,26 (IH) J b 25 REFERENCEEKSEMPEL 21:

HzC0G\ * ^c=cCT J>CHC00H HgNOCT 1 2 3 4 5 6 2 (a). I 50 ml tert.-butanol blev opløst 5,76 g kalium- 3 tert.-butylat og 50 ml vandfrit tetrahydrofuran blev sat 4 til opløsningen. Efter yderligere opløsning deri af 2,6 g 5 acetoacetatamid blev der dråbevis under isafkøling sat en 6 opløsning fremstillet ved opløsning af 1,96 g carbondi-sulfid i 5 ml vandfrit tetrahydrofuran til opløsningen.

Til den således dannede reaktionsblanding blev tilsat 100

DK 164224B

71 ml vandfrit tetrahydrofuran efterfulgt af omrøring i 1,5 timer ved stuetemperatur. Derpå blev en suspension fremstillet ved omsætning af 8 g diiodeddikesyre og 1,3 g na-triumhydrid (50% i olie) i 100 ml vandfrit tetrahydrofu-5 ran under isafkøling sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 2,5 timer ved stuetemperatur.

Reaktionsblandingen blev inddampet, og inddampningsresten blev blandet med 50 ml 1 normal saltsyre og ekstraheret 10 med 100 ml ethylacetat. Ekstrakten blev vasket med 50 ml vandig natriumchloridopløsning, og det organiske lag blev ekstraheret med 100 ml af en mættet vandig natriumhydro-gencarbonatopløsning. Ekstrakten blev indstillet på pH 2-3 med koncentreret saltsyre og derpå ekstraheret med 100 15 ml ethylacetat. Ekstrakten blev vasket med 50 ml vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat og inddampet.

Inddampningsresten blev opløst i 30 ml methylenchlorid, 20 og efter tilsætning af 5 g diphenyldiazomethan under isafkøling blev blandingen omrørt i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev inddampet, og det dannede bundfald blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 0,6 g 4-[(acetyl)(carbamoyl)methylen]-1,3-di-25 thietan-2-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse først af chloroform og derpå af en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 10:2 som elueringsmidler.

NMR-spektrum (CDClg) 30 δ (ppm): 2,32 (3H, H^OC- ), 4,99 (IH, =C /CH- ), 6,97 (IH, -COOCH(C6H5)2 ), 35 7,2-7,4 (10H, -C00CH(C6H^)2 ).

DK 164224 B

72 (b).' I en blanding af 8 ml tri fluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst 0,6 g af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt ved -20 °C, og reaktionsblandingens temperatur blev hævet til 10 °C i løbet af 20 minutter. Der-5 på blev reaktionsblandingen inddampet, og 10 ml af en blanding af ether og petroleumsether i rumfangsforholdet 1:1 blev sat til inddampningsresten til dannelse af et bundfald, som blev opsamlet ved filtrering, hvilket gav 0,2 g 4- [ (acetyl) (carbamoyl )methylen] -1,3-dithietan-2-10 carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMS0) δ (ppm): 2,31 (3H, H^COC- ), 15 5,20 (IH, =<" J^CH- ).

EKSEMPEL 24 20 tt c 0CH.

°2H5\ XS\ 5 3 .S.

^0=0^ \hC0NH.--S ^ N-N

HCXXT s J_n J^CHpS -4! ’ N

25 0 · Y » 25 COCH CH3 (a). I 15 ml tetrahydrofuran blev opløst 610 mg 4-iltert, -butoxycarbonylpropy liden )-1,3-dithietan-2-carboxyl-syre. Efter tilsætning af 1,05 g 70-amino-7a-methoxy-3- 3 30 (l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxyl- syre-benzhydrylester og 0,5 g N,N*-dicyclohexylcarbodi-imid blev blandingen omrørt i 2 timer ved stuetemperatur til fuldførelse af reaktionen. Efter at reaktionen var tilendebragt, blev det udskilte N,N’-dicyclohexylurinstof 35 frafiltreret, og opløsningsmidlet blev afdestilleret fra filtratet under vakuum til dannelse af en karamelagtig inddampningsrest. Inddampningsresten blev opløst i 50 ml

DK 164224 B

73 ethylacetat, og opløsningen blev vasket med 30 ml 1 nor-' mal saltsyre, derpå med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum til dannelse af 450 mg af en brun karamelagtig 5 inddampningsrest. Denne inddampningsrest blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af 30 g silicagel, og produktet blev elueret under anvendelse af benzen, en blanding af benzen og ethylacetat i rumfangsforholdet 95:5 og derpå en blanding af benzen og ethyl-10 acetat i rumfangsforholdet 90:10 som elueringsmidler, og de fraktioner, der indeholdt produktet, blev opsamlet, hvilket gav ca. 10 mg 70-[4-(l-tert.-butoxycarboxypropy-liden)-l,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3-(1-me- 3 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-15 benzhydrylester.

NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 1,62 (3H, CH^, t ), 2,08 (SH, (CH3)5C- ), 2,66 (2H, -CH2-, q ), 4,22 (3H, -0CH3, s ) 4,44 (3H, >N-CH3, s ), 25 5,40 og 5,47 (H fra C6 og =<^ ^CH- ), 7,54 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,8-8,2 (10H, -CH(C6H^)2 ), 8,30 (IH, -NH-C0- ).

30 (b). I 1,1 ml anisol blev opløst 200 mg af det i ovennævnte trin fremstillede karamelagtige produkt, og opløsningen blev afkølet ca. 5 °C i et isvandbad. Til opløs-35 ningen blev dråbevis tilsat 3,3 ml trifluoreddikesyre ved en temperatur under 10 °C, og derpå blev blandingen holdt under omrøring i 1 time ved 5-10 °C til fuldførelse af

DK 164224 B

74 reaktionen. Derpå blev anisol og overskydende trifluor-eddikesyre afdestilleret under vakuum ved en temperatur under stuetemperatur, og inddampningsresten blev blandet med 10 ml vand og ekstraheret med en blanding af n-bu-5 tanol og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1. Det organiske lag blev skilt fra, vasket med en mættet vandig natri umchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og derpå blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev tritureret med 10 ml 10 ether, hvilket gav 54 mg 70-[4-(l-carboxypropyliden)-l,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methyltetra- 3 zol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 15 δ (ppm): ο,9β (3H, -CH^, t ), 2,00 (2H, -CH2-, q ), 3,41 (3H, -0-CH3, s ), 3,92 (3H, ✓N-CEU, s ), -

20 D

5,10 og 5,16 ( H fra Cg og ^CH- ),

S

9,60 (IH, -NHC0- ).

25 REFERENCEEKSEMPEL 22: CH-jCHp^ .

-3 HC0CH

30 (CH3)3C00C/

En blanding af 120 ml dimethoxyethan og 30 ml tetrahydro-35 furan blev afkølet til -74 "C i et tøri s/acetonebad, og derpå blev 4,0 ml N-isopropylcyclohexylamin og derefter 13,72 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-hexanopløsning sat

DK 164224B

75 til blandingen, hvorved temperaturen steg fra -73 °C til -62 °C. Efter tilsætning af 3,17 g tert.-butyl-butylat og efter at reaktionen havde fundet sted i 30 minutter ved fra -74 til -75 °C, blev 0,664 ml carbondisulfid dråbevis 5 sat til blandingen i løbet af 20 minutter efterfulgt af omsætning i 20 minutter ved denne temperatur. Derpå blev 6,86 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-hexanopløsning dråbevis sat til reaktionsblandingen ved en temperatur under -72 °C i løbet af 10 minutter, og komponenterne fik derpå 10 lov at reagere i 30 minutter. Derpå blev 0,332 ml carbondisulfid sat til reaktionsblandingen i løbet af 10 minutter, og reaktionen fandt sted i 20 minutter. Derefter blev yderligere 3,43 ml af en 15% n-butyl-lithium/n-hexanopløsning dråbevis sat til reaktionsblandingen ved 15 en temperatur under -72 °C i løbet af 13 minutter, og derpå fandt reaktionen yderligere sted i 20 minutter ved fra -74 til -73 °C. Derpå blev 0,166 ml carbondisulfid sat til reaktionsblandingen ved ca. -74 °C i løbet af 6 minutter, og reaktionen fandt sted i ca. 20 minutter.

20 Derefter blev til reaktionsblandingen tilsat natrium-diiodacetat fremstillet ved omsætning af 0,84 g 50% natriumhydrid og 5,46 g diiodeddikesyre i 25 ml dimeth-oxyethan efterfulgt af omsætning i 30 minutter ved 0-5 °C, og endelig blev reaktionen yderligere fortsat natten 25 over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum fra reaktionsblandingen, og inddamp-ningsresten blev ekstraheret ved tilsætning af 50 ml kold ether og 40 ml 1 normal saltsyre. Etherlaget blev ekstraheret to gange med 20 ml mættet vandig natriumhydro-30 gencarbonatopløsning. De vandige ekstrakter blev kombineret og indstillet på pH 1 med 1 normal saltsyre og ekstraheret to gange med henholdsvis 30 ml og 20 ml ether. Ekstrakterne blev forenet og vasket med vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og etheren derpå af-35 destilleret til opnåelse af 1,08 g af et olieagtigt produkt. Det olieagtige produkt blev underkastet silicagel-søjlekromatografi, og de fraktioner, der indeholdt pro-

DK 164224 B

76 duktet, blev opsamlet under anvendelse af en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 10:1 som elue-ringsmiddel, hvilket gav 630 mg 4-(1-carboxypropyliden)- 1,3-dithietan-2-carboxylsyre i form af et brunt olieag-5 tigt produkt.

NMR-spektrum (CDClg) δ (ppm): 1,24 (3H, -CH^, t ), 1,47 (9H, (CH,),C-, s ), 10 2,01 (2H, -CH2-, q ), 4,87 (IH, >CH- , s ).

15 EKSEMPEL 25 0CH-3 · * H00CCHU\

20 X0HC0HH-S > N--N

ηοοοχ I I 11 0 J j C00H CH^ 25 (a). I 10 ml tetrahydrofuran blev opløst 350 mg 4-[1,2-bis(tert.-butoxycarbonyl)ethyliden]-1,3-dithietan-2-car-boxylsyre. Efter tilsætning af 0,5 g 7Æ-amino-7a-methoxy- 3 3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxyl-30 syre-benzhydrylester og 219 mg N, N'-dicyclohexylcarbodi-imid fik reaktionen lov at foregå i 2 timer ved stuetemperatur. Efter frafiltrering af det derved dannede N,N'-dicyclohexylurinstof blev opløsningsmidlet afdestilleret fra filtratet, og inddampningsresten blev underkastet 35 silicagel-søjlekromatografi, og de fraktioner, der inde holdt produktet, blev opsamlet under anvendelse af først benzen og derpå en blanding af benzen og ethylacetat i 77

DK 164224 B

rumfangsforholdet 9:1 som elueringsmidler, hvilket gav 120 mg 7Æ-{4-[1,2-bis-(tert.-butoxycarbonyl)ethyliden]- 1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methylte- 3 trazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-benz-5 hydrylester.

NMR-spektrum (CDClg) « (ppm): 1,42-1,48 (18H, (CH^C- ), 2.58 (2H, -CH?- ), 10 * 3.59 (3H, -0CH3 ), 3,80 (3H, ^N-CH3 ), 4,3β (2H, -CH2- fra C2 , q ), g 15 4,87 og 5,09 ( H fra Cβ og ^>CH- ), 6,92 (IH, -CH(C6H5)2 ), 7,2-7,6 (10H, -CH(C6H5)2 ).

20 (b). I 1 ml anisol blev opløst 115 mg af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt. Efter afkøling af opløs-25 ningen til en temperatur under 10 °C i isvandbad blev 3 ml trifluoreddikesyre dråbevis sat til opløsningen ved en temperatur under 10 °C. Efter omrøring af blandingen i 1 time ved 5-10 °C blev overskydende trifluoreddikesyre og anisol afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum 30 ved stuetemperatur, og inddampningsresten blev tritureret med 5 ml ether, hvilket gav 73,7 mg 70-[4-(l,2-dicarboxy-ethyliden)-l,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7a-methoxy-3- 3 (l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxyl-syre.

35

DK 164224 B

78 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,94 ^n-CH3 ), • 4,30 (2H, -CH2- fra C2 ), 5 5,16 0g 5,20 (H fra C6, JCE- ),

"S

hoocch2 ^ \ ^ C= overlappede DMSO-toppen, -0CH-, overlappede toppen for vand.

10 REFERENCEEKSEMPEL 23: 15 (CH ) COOCv.

5 0 ^C=C^ ^CHCCOH

(ch3)3cooch2c^ 20

Til en blanding af 80 ml diethylenglycoldimethylether og 20 ml tetrahydrofuran blev tilsat 1,54 ml diisopropyl-amin. Blandingen blev afkølet til -74 °C med et tøris/-acetonebad. Derpå blev 6,86 ml af en 15% n-butyl-25 lithium/n-hexanopløsning sat til blandingen efterfulgt af reaktion i 10 minutter ved fra -72 til -74 °C. Derpå blev 2,3 g tert.-butylsuccinat sat til reaktionsblandingen, og reaktionen blev yderligere gennemført i 30 minutter ved -74 °C. Derpå blev 0,332 ml carbondisulfid dråbevis sat 30 til reaktionsblandingen i løbet af ca. 15 minutter, og omsætningen blev fortsat i 15 minutter ved -74 °C. Derpå blev 3,43 ml af en 15% n-butyllithium/n-hexanopløsning dråbevis sat til reaktionsblandingen ved en temperatur under -71 °C i løbet af 20 minutter, og reaktionen blev 35 gennemført i 20 minutter ved den samme temperatur. Derefter blev 0,166 ml carbondisulfid dråbevis sat til reaktionsblandingen i løbet af 13 minutter ved en temperatur

DK 164224 B

79 under -72 °C, og reaktionen blev gennemført i 17 minutter ved denne temperatur. Derpå blev 1,715 ml af en 15% n-butyllithium/n-hexanopløsning dråbevis sat til reaktionsblandingen i løbet af 10 minutter ved en temperatur under 5 -71 °C. Endelig blev 0,083 ml carbondisulfid dråbevis sat til reaktionsblandingen i løbet af 10 minutter, og reaktionen blev yderligere gennemført i 20 minutter ved fra -72 til -74 °C.

10 En suspension af natriumdiiodacetat, der forinden var fremstillet ud fra 432 mg 50% natriumhydrid og 2,8 g di-iodeddikesyre i 20 ml diethylenglycoldimethylether, blev dråbevis sat til den ved den ovenstående reaktion opnåede reaktionsblanding, hvorved temperaturen i systemet steg 15 fra -74 °C til -64 °C. Derpå fik temperaturen lov til at stige, og efter gennemførelse af reaktionen i 1 time ved 0-5 °C blev blandingen omrørt natten over ved stuetemperatur til frembringelse af yderligere reaktion. Derefter blev opløsningsmidlet afdestilleret ved stuetemperatur 20 under vakuum til dannelse af en brun inddampningsrest. Inddampningsresten blev blandet med 50 ml ether og 20 ml kold 10% svovlsyre og ekstraheret med ether. Det dannede etherlag blev ekstraheret to gange med hver 50 ml mættet natriumhydrogencarbonatopløsning. Det dannede vandige lag 25 blev blandet med 50 ml 10% svovlsyre og ekstraheret med henholdsvis 50 ml og 30 ml ether. Etherekstrakterne blev kombineret og vasket to gange med hver 30 ml mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og etheren blev afdestilleret, hvilket gav 30 1,83 g af et olieagtigt produkt. Det olieagtige produkt blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af 70 g silicagel elueret med først chloroform og derpå en blanding af chloroform og methanol i rumfangsforholdet 50:1, og de fraktioner, der indeholdt pro-35 duktet, blev opsamlet, hvilket gav 700 mg 4-[1,2-bis(tert.-butoxycarbonyl)]-l,3-dithietan-2-carboxylsyre.

DK 164224 B

80 NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 1,22 (18H, 2 x c_ ^ 2,58 (2H, -CHg- ), 5 , 4,91 (IH, ).

S

Massespektrum: m/e: 3^2 M+ 10 EKSEMPEL 26 OCH-i 15 HOOC^ /S j

^G=cC /CHCONH--f N N_N

CH^NHOCCT S I , jj COOH CH3 20 (a). Til en opløsning fremstillet ved opløsning af 500 mg 7 0-amino-7 a -methoxy-3 - (1 -methy 1 tetrazol - 5 -y 1) thiome- 3 thyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester i 35 ml te-trahydrofuran blev tilsat 500 mg 4-[(tert.-butoxycarbo-25 nyl)(N-methylcarbamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-carbox- ylsyre og ca. 400 mg N,N'-dicyclohexylcarbodiimid, og blandingen blev omrørt i 3,5 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum, og inddampningsresten blev underkas-30 tet silicagel-søjlekromatografi, hvilket gav 300 mg 70-{4-[(carboxy)(N-methylcarbamoyl)methylen]-1,3-dithietan- 2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)- 3 thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester under anvendelse af en blanding af chloroform og ethylacetat i 35 rumfangsforholdet 4:1 som elueringsmiddel.

DK 164224B

81 NMR-spektrum (CDCl^) • δ (ppm): 1,52 (9H, t-C^Hg- ), 2.83 (3H, CH3NHCO- ), 3,60 (5H, CH30- og -CH2- fra C2 ),

Æ— N

3.84 (3H, CH*N< | ),

0 >-= N

.S.

4,82 (IH, ":CH- ), 10 5,08 (IH, H fra Cg ), 6,93 (IH, -CH(C6H5)2 ).

15 (b). I en blanding af 10 ml tri fluoreddikesyre og 2 ml anisol blev opløst 300 mg af det ovenfor i trin (a) fremstillede produkt under isafkøling. Opløsningen blev omrørt i ca. 1 time ved 15 °C. Opløsningsmidlet blev af destilleret fra reaktionsblandingen under vakuum, og ind-20 dampningsresten blev blandet med ether efterfulgt af om røring. Det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og vasket med ether, hvilket gav 170 mg 70-{4-[(carboxy)-(N-methylcarbamoyl)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carbox- 3 amido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -25 cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 2,68 (3H, CH^NHCO- ), 3,42 (3H, CH,0- ), 30

N = N

3,94 (3H, CH,-N<f I ),

0 —= N

ca. 5,12 (2H, H fra C c og ^CH- ).

35

DK 164224 B

82 REFERENCEEKSEMPEL 24: TSUMHOO ^ 3 yc=c^ CHCOOri g (ch3)3cooc/ Nr ·

Til 3 ml 15% kalium-tert.-butylat/tert. -butanolopløsning blev tilsat 540 mg tert. -butyl-N-methylmalonamat og 12 ml vandfrit tetrahydrofuran under omrøring ved stuetempera-10 tur. Efter omrøring af blandingen i 5 minutter blev der dråbevis sat 0,0935 ml carbondisulfid til blandingen efterfulgt af omrøring i 10 minutter. Derpå blev 1,5 ml 15% kalium-tert. -butylat/tert. -butanolopløsning sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 10 minutter, 0,046 ml 15 carbondisulfid blev dråbevis sat til blandingen efterfulgt af omrøring i 10 minutter, og den samme procedure blev yderligere gentaget under anvendelse af 0,8 ml 15% kalium-tert. -butylat/tert. -butanolopløsning og 0,023 ml carbondisulfid. En suspension af natriumdiiodacetat, som 20 var fremstillet separat ved opløsning af 0,98 g diiod-eddikesyre i 7 ml vandfrit tetrahydrofuran og tilsætning af 115 mg 50% natriumhydrid til opløsningen under omrøring og afkøling, blev sat til den ovenfor beskrevne reaktionsblanding efterfulgt af omrøring i 1 time ved 25 stuetemperatur til fuldførelse af reaktionen.

Efter at opløsningsmidlet var afdestilleret under vakuum blev der tilsat 150 ml ether og 50 ml 0,2 normal saltsyre, der forinden var afkølet til 0 °C, og produktet 30 blev ekstraheret med ether og derpå vasket to gange med hver 50 ml vand. Etherlaget blev derpå ekstraheret med 50 ml 2% natriumhydrogencarbonat, og det vandige lag blev neutraliseret til pH ca. 7,5 med 1 normal saltsyre og ekstraheret med 100 ml ether. Til det vandige lag blev 35 yderligere tilsat 0,5 ml 1 normal saltsyre, og det blev ekstraheret med 100 ml ether. Denne procedure blev gentaget. Hver enkelt etherekstrakt blev underkastet silica-

DK 164224 B

83 gel ‘tyndtlagskromatografi under anvendelse af en blanding af acetonitril, ethylacetat og vand i rumfangsforholdet 3:1:1 som elueringsmiddel, og de fraktioner, der indeholdt produktet, blev opsamlet, og opløsningsmidlet afde-5 stilleret under vakuum, hvilket gav 600 mg 4-[(tert.-butoxycarbonyl) (methylcarbamoyl )methylen] -1,3-dithietan- 2-carboxylsyre i form af en olie.

NMR-spektrum (CDClg) 10 « (ppm): 1,52 (9H, (CH^C- ), 2,84 (3H, CH3NH- ), 4,83 (IH, =< ^CH- ).

15 EKSEMPEL 27 - OCH^ HOOC-c=cCS>oohh-^% n_n

V'00 S

° i . L

COOH 0ii3 25 I 8 ml af en vandig 5% natriumhydrogencarbonatopløsning blev opløst 200 mg 7Æ-(4-carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido-7a-methoxy-cephalosporansyre. Opløsningen blev omrørt i 2 timer ved stuetemperatur. Efter fuldførelse af reaktionen blev reaktionsblandingen indstillet 30 på pH 1 med 2 normal saltsyre og derpå ekstraheret to gange hver med en blanding af n-butanol og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1. Det organiske lag blev vasket med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev af-35 destilleret, hvilket gav 180 mg (90% udbytte) hvidt pulver af 70-{4-[(carbamoyl)(carboxy)methylen]-l,3-dithi- 3 etan-2-yl}-carboxamido-7e-methoxy-A -cephalosporansyre.

DK 164224 B

84 NMR-spektrum (D,-DMSO)

O JJ

δ (ppm): 5,20 (IH, , 9 - h 5,12 (IH, =. CH- , s ), 5 4,82 (2H, /S\^H , q ), 3,48 (2H, sl-CH?0- , q ), 10 3,44 (3H, ---0CH3 , s ), 2,04 (3H, -OCOCH^ , s ).

15 (b). 300 mg 70 -[ 4- (carbamoyl) (carboxy )methylen-l, 3-di- thietan-2-yl]carboxamido-7 α-methoxy-cephalosporansyre, 67,2 mg 5-mercapto-1-methyltetrazol og 146 mg natrium-20 hydrogencarbonat blev sat til 6 ml vand efterfulgt af omrøring i 16 timer ved 60-62 °C. Reaktionsblandingen blev indstillet på pH 1 med 2 normal saltsyre under isafkøling, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og tørret over phosphorpentaoxid under vakuum, hvil-25 ket gav 75 mg lysegult pulver af 70-[4-(carbamoyl)-(carboxy)methylen-l,3-dithietan-2-yl]carboxamido-7α-meth- 3 oxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-car-boxylsyre.

30 EKSEMPEL 28

H0v /C00H

A-A 0CH3 :sCHgCONH—-f ^ N · 7AU »V· o T i C00H CH5

DK 164224 B

85 (a).' I 60 ml methanol blev opløst 6,1 g 7/5-bromacetami-do-7α -methoxy-cephalosporansyre. Derpå blev 15 ml af en isafkølet vandig opløsning af 4,3 g trinatriumsalt (tri-hydratet) af 4-carboxy-3-hydroxy-5-mercaptoisothiazol 5 dråbevis sat til opløsningen ved 0-5 °C. Efter omrøring af blandingen i 30 minutter ved samme temperatur blev methanolet afdestilleret under vakuum. Inddampningsresten blev blandet med 40 ml vand, indstillet på pH 3 med 2 normal saltsyre, og vasket med ethylacetat. Det vandige 10 lag blev yderligere indstillet på pH 1 med 2 normal saltsyre og derpå ekstraheret to gange med hver en blanding af n-butanol og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1. Det organiske lag blev vasket med en mættet vandig natrium-chloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, 15 og opløsningsmidlet blev afdestilleret til opnåelse af et pulverformet råprodukt. Dette produkt blev opløst i en lille mængde methanol, og opløsningen blev afkølet ved hjælp af is til dannelse af krystaller. Krystallerne blev opsamlet ved filtrering, hvilket gav 4,8 g (64,2% udbyt-20 te) rensede hvide krystaller bestående af 7/5-(4-carboxy- 3-hydroxy-isothiazol~5-yl)thioacetamido-7a-methoxy-cepha-losporansyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO)

25 6 (ppm): 5,20 (IH, —’ S

— fil 4,84 (2H, , q ),

>H

30 4,02 (2H, H2C0- , s ), 3,52 (2H, ^CH20- , q ), 0CH-2 35 3,44 (3H, j ? , s ), 2,04 (3H, -0C0CH3 , s ).

DK 164224 B

86 (b). Ved den samme procedure som i eksempel 27(b), men under anvendelse af 70-(4-carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetoamido-7a-methoxy-cephalosporansyre og 5-mer-capto-l-methyltetrazol, blev der fremstillet 70-(4-5 carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetoamido-7a-meth- 3 oxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-car-boxylsyre.

EKSEMPEL 29 10 OCH, H00C\ J VS \ M w

/CHCONH—-f N-N

HoNoc^ ^ I NI

2 -N ^l-CHS-U i—GH,

// J

15 C00H

En blanding af 300 mg 70-(4-carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido-7a-methoxycephalosporansyre, 76,5 mg 2-mercapto-5-methyl-l,3,4-thiadiazol, 146 mg natriumhy- 20 drogencarbonat og 6 ml vand blev omrørt i 12 timer ved 58-60 °C. Reaktionsblandingen blev afkølet, indstillet på pH 1 med 2 normal saltsyre under isafkøling, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og tørret over phosphorpentaoxid under vakuum, hvilket gav 95 mg (27,8% 25 udbytte) lysegult pulver af 70-{4-[(carbamoyl)(carboxy)- methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(5-

Q

methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-car-boxylsyre.

30 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 5,16 (IH, S , s ),

— N

5>12 (IH, ^-CH- , s ), 35 s 4,34 (2H S f q

DK 164224 B

87 3,58 (2H, /cH20- . Q )> 3,40 (3H, —0CH3 , s ),

— N

5 2,60 (3H, il , s ).

5 EKSEMPEL 30 10 och3

HOOC^ /Sv _/1 2 3 4 5\, N-M

>C^/CH00NH I II i' H2N0^ ^ ° T i 15 C00H CH3 en blanding af 40 ml methanol og 300 ml af en 5% vandig 2 natriumhydrogencarbonatopløsning blev opløst 6,0 g 7/5-(4- 20 carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl )thioacetamido-7a-meth- 3 4 oxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-car- 5 boxylsyre. Opløsningen blev omrørt i 5 timer ved stuetemperatur. Opløsningen blev vasket med 300 ml ethylacetat, gjort sur med fortyndet saltsyre og ekstraheret to gange 25 med hver 200 ml af en blanding af n-butanol og ethylacetat i rumfangsforholdet 1:1 og yderligere en gang med 100 ml af den samme blanding. De organiske lag blev kombineret, vasket to gange med hver 50 ml mættet vandig na-triumchloridopløsning, tørret over vandfrit magnesiumsul-30 fat, og derpå blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum. Til inddampningsresten blev sat 50 ml ether, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering, vasket med ether og tørret til opnåelse af råt produkt. Det rå produkt blev renset ved silicagel-søjlekromatografi under 35 anvendelse af en blanding af chloroform, methanol og myresyre i rumfangsforholdene 100:20:1,5 som eluerings-middel.

DK 164224 B

88

De fraktioner, der indeholdt produktet, blev opsamlet, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under vakuum, hvilket gav 3,5 g 7/5-{4-[(carbamoyl)(carboxy)methylen]-1,3-dithi-etan-2-y1}carboxamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol- 5 - 3 5 yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (D^-DMSO) s (ppm): 3,40 (3H, C^O- fra C? ), 3,61 (2H, -CH2- fra C2 ),

N -N

3,92 (3H, I} l| ), ch3 g ^,30 (2H, ^LcH2- ^ 5,H (IH) /S.

H fra Cr og ^>CH- 5,14 (IH) 6,00 (IH, -C00H ), 20 “ 7,50 (2H -C0NH2 ), 9,60 (IH, -C0NH —i-{ ).

I—n 25 EKSEMPEL 31

En blanding af 300 mg 7/5-(4-carboxy-3-hydroisothiazol-5-yl)thioacetamido-7a-methoxycephalosporansyre, 57,2 mg 5-30 mercapto-1-methyltetrazol, 146 mg natriumhydrogencarbonat og 6 ml vand blev omrørt i 12 timer ved 58-60 °C. Reaktionsblandingen blev afkølet, indstillet på pH 1 med 2 normal saltsyre under isafkøling, og det dannede bundfald blev opsamlet ved filtrering og tørret over phosphorpen-35 taoxid under vakuum, hvilket gav 70 -{4[(carbamoyl)(carboxy )methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy- 3 3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-a -cephem-4-carboxyl- EKSEMPEL 32

DK 164224B

89 syre.

5 PCH.

HOOCv .Sx ! j/Sv

^CHCONH—-f η N-N

N<r I i ij

,-N -N

o' Y 2 ^ COOH CH-, io 3 (a). I en blanding af 50 ml chloroform og 10 ml acetone blev suspenderet 1,0 g 70-{4-[(carbamoyl)(carboxy)methylen] -l,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1-me- 3 15 thyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

Derpå blev en opløsning fremstillet ved opløsning af ca.

700 mg diphenyldiazomethan i 5 ml chloroform dråbevis sat til suspensionen. Blandingen blev omrørt i 30 minutter ved stuetemperatur, og derpå blev opløsningsmidlet afde-20 stilleret fra reaktionsblandingen. Inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en blanding af chloroform og ethylacetat i rumfangsforholdet 2:1 som elueringsmiddel til isolering og oprensning af produktet. De fraktioner, der indeholdt 25 produktet, blev opsamlet, og opløsningsmidlet blev af destilleret under vakuum, hvilket gav 0,8 g 70-{4-[(benz-hydryloxycarbonyl) (carbamoyl )methylen] -1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7or-methoxy-3-( 1-methyl tetrazol-5-yl )thio- 3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester.

30 NMR-spektrum (CDCl^) s (ppm): 3,52 (5H, H fra C2 og CH^O- fra Cy ),

N- N

3.76 (3H, An-N >.

35 éH, 4,35 (2H, -CH2-S- fra C3 ), 90

DK 164224 B

4,86 (IH, >CH- ), S ^ 5 5,00 og 5,03 (IH, H fra Cg ), 6,90 (IH) 7 [ -CHiCz-Hj-)« ), 7,00 (IH) J ” 6 5 2 7,30 (10H, -CH(CgH5)2 ).

10 (b). I 10 ml chloroform blev opløst 1,0 g 75-{4-[(benzhydryloxycarbonyl)(carbamoyl)methylen]-1,3-dithi-etan-2-y1}carboxamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester.

15 Mens opløsningen blev omrørt under isafkøling blev der tilsat 0,3 ml pyridin og 0,45 g phosphorpentachlorid efterfulgt af omrøring i yderligere 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev derpå afkølet med is, og 3 ml vand blev sat til blandingen. Det dannede organiske 20 lag blev adskilt fra det vandige lag, vasket med 2 ml vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og derpå blev opløsningsmidlet afdestilleret under vakuum, hvilket gav 0,5 g 75-{4-[(benzhydryloxycarbonyl)(cyano)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7e-methoxy-3-(1-methyltetra- 3 25 zol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydryl- ester.

NMR-spektrum (CDCl^) δ (ppm): 3,45 (5H, H fra C2 og CH,0- fra C? ),

30 N-----N

3>8°(3H> Ar» ch3 4,32 (2H, -CH2-S- fra C3 ), 35

DK 164224B

91 /S.

5,02 (2H, H fra Cg og ^CH- ), 6,85 (2H, -CH(C6H5)2 )» 7,30 (10H, -CH(C6H5)2 ).

(c). I 2 ml methylenchlorid blev opløst 0,5 g 7/5-{4-[(benzhydryloxycarbonyl)(cyano)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}carboxamido-7a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)-thio- 3 methyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-benzhydrylester. Efter 10 tilsætning af 5 ml af en blanding af trifluoreddikesyre og anisol i rumfangsforholdet 4:1 ved -10 °C blev blandingen omrørt i 30 minutter ved den samme temperatur. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret fra reaktionsblandingen under vakuum og ved lav temperatur. Inddamp-15 ningsresten blev tritureret med ether og blev opsamlet ved filtrering og tørret, hvilket gav 0,2 g pulverformig 70-{4-[(carboxy)(cyano)methylen]-1,3-dithietan-2-yl}car-boxamido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl- 3 Δ -cephem-4-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMS0) δ (ppm): 3,44 (3H, _ CH^O- fra C? ), 3,62 (2H, H fra C2 ), 25 4,30 (2H, -CH2-S- ), 5,16 (IH, H fra Cg ), 5,52 (IH, =<^ ^CH- ).

30

Ved samme procedure som i eksempel 1 blev der fremstillet følgende forbindelser: 35

DK 164224B

EKSEMPEL 33 92 7Æ-( 4-cyano-3-hydroxyisothiazol-5-yl )thioacetamido-7a-me- 3 thoxy-3-(1-methy1tetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-5 carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,39 (3H), 3,59 (2H), 3,92 (3H), 4,11 (2H), 4,28 (2H), 5,10 (IH) 10 EKSEMPEL 34 7/5-(3-hydroxy-4-phenylisothiazol-5-yl )thioacetamido-7a- 3 methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-15 carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,40 (3H), 3,56 (2H), 3,87 (2H), 3,92 (3H), 4,27 (2H), 5,05 (IH).

20 EKSEMPEL 35 7/5-(3-amino-4-cyanoisothiazol-5-yl)thioacetamido-7a-me- 3 thoxy-3-(i-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-25 carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,40 (3H), 3,60 (2H), 3,95 (3H), 4,08 (2H), 4,31 (2H), 5,11 (IH).

30 EKSEMPEL 36 7/5-(4-dimethylcarbamoyl-3-hydroxyisothiazol-5-yl )thio-acetamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl- 3 35 δ -cephem-4-carboxylsyre.

93

DK 164224 B

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 2,88 (6H), 3,38 (3H), 3,56 (2H), 3,90 (5H), 4.26 (2H), 5,04 (IH).

5 EKSEMPEL 37 75-(3-hydroxyisothiazol-4-y1)thioacetamido-7 a-methoxy-3- 3 (l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxyl-syre.

10 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 3,39 (3H), 3,48 (2H), 3,66 (2H), 3,94 (3H), 4.26 (2H), 5,11 (IH), 7,59 (IH).

15 EKSEMPEL 38 7 5-(4-cyano-2-methyl-3-oxo-2,3-dihydroisothiazol-5-yl)-thioacetamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5-yl)thio- 3 methyl-δ -cephem-4-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,40 (3H), 3,64 (2H), 3,92 (8H), 4,30 (2H), 5,16 (IH).

25 EKSEMPEL 39 75-[4-cyano-2-(2-hydroxyethyl)-3-oxo-2,3-dihydroisothia-zol-5-y1]thioacetamido-7 a-methoxy-3-(1-methyltetrazol-5- 3 yl)thiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre.

30 NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 3,40 (3H), 3,5-3,6 (3H), 3,76 (2H), 3,93 (3H), 4,16 (2H), 4,32 (2H), 5,14 (IH).

35 EKSEMPEL 40 94

DK 164224 B

7Æ-(4-carbamoyl-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido- 3 7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-5 4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) 6 (ppm): 3,39 (3H), 3,49 (2H), 3,64 (2H), 3,93 (3H), 4,28 (2H), 5,07 (IH).

10 EKSEMPEL 41 7fi- (3-hydroxy-4-hydroxymethylisothiazol-5-yl) thioacet- 3 amido-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -15 cephem-4-carboxylsyre.

NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,40 (3H), 3,58 (2H), 3,83 (2H), 3,92 (3H), 4,12 (2H), 4,30 (2H), 5,10 (IH).

20 EKSEMPEL 42 I 7 ml methylenchlorid blev opløst 300 mg 7Æ-amino-7a- 3 methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-25 carboxylsyre-benzhydrylester, opløsningen blev afkølet til -30 °C, og der blev tilsat 460 mg pyridin. Samtidigt blev fremstillet en syrechloridopløsning ud fra en suspension af 240 mg kalium-(4-cyano-3-methoxyisothiazol-5-yl)thioacetat i 10 ml methylenchlorid, 170 mg oxalylchlo-30 rid og en dråbe dimethylformamid. Syrechloridopløsningen blev dråbevis sat til den ovenfor omtalte opløsning ved fra -30 til -20 °C, og blandingen blev omrørt i 1 time ved samme temperatur. Til reaktionsblandingen blev sat 30 ml chloroform, og den blev vasket to gange hver med 2% 35 saltsyre og to gange hver med mættet natriumhydrogencar-bonatopløsning, hvorpå det organiske lag blev skilt fra og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Det organiske 95

DK 164224 B

lag blev inddampet under vakuum, og inddampningsresten blev underkastet silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en blanding af chloroform og 2-propanol i rumfangsforholdet 10:1 som elueringsmiddel, hvilket gav 5 190 mg 7Æ-(4-cyano-3-methoxy-isothiazol-5-yl)thioacetami- 3 do-7a-methoxy-3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -ce-phem-4-carboxylsyre-benzhydry1ester.

Den ovenstående produkt blev opløst i 2 ml methylenchlo-10 rid, og en blanding af 1,6 ml tri fluoreddikesyre og ani-sol (rumfangsforhold 3:1) blev tilsat dråbevis ved fra -15 til -5 "C, hvorpå blandingen blev omrørt i 40 minutter ved samme temperatur. Derpå blev opløsningsmidlet af-destilleret under vakuum, og inddampningsresten blev tri-15 tureret med 10 ml ether, filtreret og tørret under vakuum, hvilket gav 120 mg pulver af 7Æ-(4-cyano-3-meth-oxyisothioazol-5-yl)thioacetamido-7a-methoxy-3-(1-methyl- 3 tetrazol-5-yl)thiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre.

20 NMR-spektrum (Dg-DMSO) δ (ppm): 3,40 (3H), 3,58 (2H), 3,92 (3H), 3,99 (3H), 4,15 (2H), 4,18 (2H), 5,12 (IH).

25 1 35

Claims (6)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 7a-methoxy-5 75-(4 -methylen-1,3 -dithiet an- 2 -yl) carboxamido-3 -hetero- 3 cyclylthiomethyl-Δ -cephem-4-carboxylsyre-forbindelser med den almene formel

1 OCEL 1° K\_/SX ; 3 ^ s2/-\s>-crøa— J-N J-CH-S-53 0 ώ . COOH 15 hvori R1 betyder carboxyl, lavere alkoxycarbonyl, cyan, 2 20 carbamoyl eller mono- eller di(lavere alkyl)carbamoyl, R betyder hydrogen, lavere alkyl, som eventuelt er substitueret med en carboxylgruppe eller en hydroxygruppe, la- 4 4 vere alkoxy, en gruppe R S(0)n (hvori R betyder lavere alkyl, og n betyder 0, 1 eller 2), lavere alkanoyl, pne-25 nyl, som eventuelt er substitueret med en hydroxygruppe, benzoyl, carboxyl, lavere alkoxycarbonyl, cyan, carbamoyl, mono- eller di(lavere alkyl)carbamoyl, lavere alkenyl, sulfamoyl, pyridyl eller thiadiazolyl, som eventuelt 3 er substitueret med en lavere alkylthiogruppe, og R be-30 tyder en med lavere alkyl substitueret tetrazolyl-gruppe eller en med lavere alkyl substitueret thiadiazolyl-grup-pe, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at 35 (a) en 4-(substitueret methylen)-l,3-dithietan-2-carbox- ylsyre med den almene formel DK 164224 B ^ S = — COOH x! 5 1 2 hvori R og R har den ovenstående betydning, eller et funktionelt derivat deraf omsættes med en 7/5-amino-7e-me- 3 thoxy-3-heterocycly1thiomethy1 -δ -cephem-4-carboxylsyre 10 med den almene formel OCHs

2 J ) 15 q # • CCQH 3 20 hvori R har den ovenstående betydning, eller (b) en 3-acetoxymethyl-(eller 3-carbamoyloxymethyl)-7a-methoxy-70-[4-(substitueret methylen)-l,3-dithietan-2- 3 yl]carboxamido-A -cephem-4-carboxylsyre med den almene 25 formel i OCR- 2/ = ^ >— CONH -1-f > R VI

30 QJ-N\^~C:V0r6 COOK 12. hvori R og R har den ovenstående betydning, og R° betyder acetyl eller carbamoyl, omsættes med en heterocyclisk 35 DK 164224 B thiol med den almene formel HS - R3 3 5 hvori R har den ovenstående betydning, eller (c) et 7a-methoxy-3-heterocyclylthiomethyl-cephalosporin-derivat med den almene formel

10 O*._A2 ΓΊΤ ?C3, o τΡ' "'B scHjCo:;:-:-j-S' IX J^Ji^-ca2-s-Pp

15 COOH 2 3 8 hvori R og R har den ovenstående betydning, og R bety- 20 der hydrogen eller lavere alkyl, behandles med base til dannelse af en forbindelse med formlen I, hvori R1 er mono (lavere alkyl)carbamoyl, hvorpå den dannede forbindelse med formlen I, om ønsket, 25 omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf. 2. 70-(4-substitueret-3-oxo-2H-isothiazol-5-yl)thioacet- 3 amido-7a-methoxy-3-heterocyclylthiomethyl-A -cephem-4-carboxylsyre-forbindelser med den almene formel 30 ° -i/ ?CH, sch0co:;h-f ^ R S 2 I 35 - "v^^-cHr8-»5 COOH · DK 164224 B 2 3 hvori R og R har den i krav l's indledning angivne be- O tydning og R betyder hydrogen eller lavere alkyl, til anvendelse som udgangsmateriale ved fremgangsmåde (c) ifølge krav 1. 5 3. 75-(4-carboxy-3-hydroxyisothiazol-5-yl)thioacetamido- 3 7a-methoxy-3-(l~methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-A -cephem- 4-carboxylsyre ifølge krav 2. 10 15 20 25 1 35