DK162170B - Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter - Google Patents
Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter Download PDFInfo
- Publication number
- DK162170B DK162170B DK304490A DK304490A DK162170B DK 162170 B DK162170 B DK 162170B DK 304490 A DK304490 A DK 304490A DK 304490 A DK304490 A DK 304490A DK 162170 B DK162170 B DK 162170B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- atcc
- merozoites
- hybridoma
- antibody
- monoclonal antibodies
- Prior art date
Links
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 claims description 31
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims description 31
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 30
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 claims description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 claims description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 108700039855 mouse a Proteins 0.000 claims 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 17
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 14
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 10
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 10
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 6
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 241000223934 Eimeria maxima Species 0.000 description 3
- 241000499563 Eimeria necatrix Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 241000223931 Eimeria acervulina Species 0.000 description 2
- 241000499566 Eimeria brunetti Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
DK 162170 B
Den foreliggende opfindelse angår monoklonale antistoffer, der reagerer specifikt mod merozoitter og sporozoit-ter fra parasitiske Eimeriaarter samt en fremgangsmåde til deres fremstilling. Disse antistoffer fås ved hybridomatek-5 nologi ved hjælp af hybridomakulturer, der frembringer antistoffer mod Eimeriaarter, specielt E. tenella. Ved den foreliggende opfindelse er der identificeret og karakteriseret merozoitantigener, der sammen med visse monoklonale antistoffer er effektive til forebyggelse og behandling af coc-10 cidiose. Antistofferne ifølge opfindelsen er derfor anvendelige til fremstilling af vacciner mod coccidiose.
Coccidiose er en sygdom hos dyr, der fremkaldes af en række forskellige parasitiske protozoer. Fuglecoccidiose er en ødelæggende fjerkræsygdom, der forårsages af arter af 15 slægten Eimeria. Denne sygdom har en kompliceret cyklus, der omfatter både kønnede og ukønnede stadier. Kyllinger inficeres til at begynde med med lidelsen efter indtagelse af fritlevende oocyster, der i reglen findes i forbindelse med fækalier. Oocyster udvikler sig til invaderende, ukønnede 20 sporozoitter i kyllingens mavetarmkanal. Sporozoitterne inficerer epithelceller og udvikles til flerkernestrukturer, der kaldes schizonter. Hver schizont modnes og frigør efterhånden mange invaderende, ukønnede strukturer, der kaldes merozoitter. Disse merozoitter forlader de inficerede celler 25 og invaderer igen andre epithelceller. De mangfoldige, invaderende, ukønnede stadier, der omfatter sporozoitter og merozoitter, er ansvarlige for meget af coccidiosens patologi. Coccidioses kønnede cyklus begynder, når merozoitterne diffenrentierer til gametocytter. Der sker befrugtning, og 30 produkterne heraf, der kaldes oocyster, frigøres i fæces. Parasittens livscyklus er således sluttet. Hos kyllinger afsluttes cyklussen for Eimeria tenella, der er en repræsentativ art, i løbet af ca. 7-9 døgn.
På grund af de kolossale økonomiske tab, som fjerkræ-35 industrien påføres af Eimeriaarter, er en vaccine yderst ønskværdig. Imidlertid er det på grund af parasittens kom-
DK 162170 B
2 plekse livscyklus og på grund af den varierende mængde antigener, der er til stede i hvert stadium, tidligere blevet iagttaget, at inaktiverede eller dræbte parasitter ikke har frembragt konsekvent immunitet. En løsning på dette problem 5 er at isolere og karakterisere særlige antigener fra parasitten og indgive dem i tilstrækkelig mængde til, at de kan fungere som immuniseringsmiddel. Sådanne antigener vil fortrinsvis yde beskyttelse mod infektion med alle vigtige arter. Man ved, at forskellige Eimeria-arter samt forskellige 10 stadier i denne arts livscyklus har både fælles og specifikke antigener [Z. Cerna, Folia Parasitologica (Prag), 17, 135-140 (1970), Davis m.fl., Immunol. 34, 879-888 (1978), M.E.
Rose, Immunol. 2, 112-122 (1959), Rose m.fl. Immunol., 5, 79-92 (1962), og Tanielian m.fl., Acta Parasitol. Yugosl.
15 7, 79-84 (1976)]. Man ved også, at udvikling af immunitet over for Eimeria er artsspecifik, og hos nogle arter tamfjerkræ er der klar stammespecifik immunitet [T.K. Jeffers, P.L. Long m.fl. udg., i Avian Coccidiosis, side 57-125,
Proc. 13. Poultry Sci. Symp. (1978), L.P. Joyner, Parasitol.
20 59, 725-732 (1969), P.L. Long, Parasitol. 69, 337-347 (1974), og Long m.fl., Parasitol. 79, 451-457 (1979)]. Indtil nu er immunogener af Eimeriaarter, der kan stimulere beskyttende immunitet hos fugle- og pattedyrværter, ikke blevet isoleret eller identificeret. Sådanne Eimeriaimmunogener vil sandsyn-25 ligvis give en vellykket immunisering mod coccidiose.
Udviklingen af lymphocyt-hybridomateknologi udgør et værktøj til frembringelse af forholdsvis store mængder specifikke antistoffer mod en række forskellige Eimeriaanti-gener. Ved at fusionere celler, som producerer et speci-30 fikt antistof (miltceller), med celler fra en myelomatumor, er det muligt at fremstille hybridomaceller, der udskiller monoklonale antistoffer rettet specifikt mod det oprindelige sensibiliseringsantigen (Kohier & Milstein, Nature (London) 256, 495-497 (1975)]. Hvis der kunne fås monoklonale anti-35 stoffer mod parasitten, ville det måske være muligt at overføre sådanne antistoffer til inficeret eller modtageligt
DK 162170 B
3 fjerkræ og således bibringe værtsorganismen et vist omfang af passiv immunitet. Når først sådanne hybridomakulturer, der producerer monoklonale antistoffer, er opnået, er det muligt ved hjælp af forskellige metoder at benytte sådanne 5 antistoffer til at isolere og identificere specifikke antigener, der igen kan benyttes som vaccine, således at værtsorganismer får et system af aktiv immunitet. Der kendes en række patentskrifter vedrørende hybridomakulturer og monoklonale antistoffer, nemlig US patentskrifterne nr.
10 4.172.124, 4.196.265, 4.271.145, 4.361.549, 4.631.550, 4.364.932, 4.364.933, 4.364.934, 4.364.935, 4.364.936, 4.381.292 og 4.381.295.
På baggrund af den ovennævnte omtale af coccddiosens økonomiske virkninger inden for dyrehold og især fjerkræin-15 dustrien, er en bekæmpelse af protozoparasitten yderst påkrævet. Det er således opfindelsens formål at tilvejebringe nye og værdifulde monoklonale antistoffer mod imerozoitter af slægten Eimeria. Endvidere er det opfindelsens formål at isolere og identificere specifikke E. tenellél-antigener, 20 der kan anvendes til fremstilling af en vaccineii til bekæmpelse af fjerkræcoccidiose.
I overensstemmelse hermed angår den foreliggende opfindelse monoklonale antistoffer, som er ejendommelige ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
25 Ved en udførelsesform for opfindelsen er de her om handlede, monoklonale antistoffer ejendommelige ved det i den kendetegnende del af krav 2 angivne, specielt ved det i den kendetegnende del af krav 3 angivne.
De her omhandlede, monoklonale antistoffer fremstilles 30 ved en fremgangsmåde, som er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 4 eller 5 angivne.
Eimeria tenella, den art, der inficerer coecum hos kyllinger, er en særlig ødelæggende parasit, der forårsager svære blødende læsioner hos inficerede dyr. E. tenella har 35 to merozoit-stadier i sin livscyklus, der betegnes merozoit-ter af hhv. første og anden generation. Man ved, at immunitet
DK 162170 B
4 over for E. tenella udvikles under denne livscyklus' ukønnede merozoitstadier (P. Long, (udg.)/ The Biology of the Coc-cidia, University Park Press, Baltimore, MD (1982).
Der anvendes et præparat af E. tenella-merozoitter 5 til at immunisere mus, for at de efterhånden kan fremstille monoklonale antistoffer ifølge Kohiers og Milsteins metode, som beskrevet nedenfor. De monoklonale antistoffer anvendes til at identificere parasittens antigener. Monoklonale antistoffer bedømmes endvidere for at fastslå deres evne til at 10 neutralisere væksten af parasitten in vivo. Antigenerne, der frembringer monoklonale antistoffer, der reagerer med mindst én Eimeriaart eller med enten merozoitter eller sporozoitter og udviser neutralisering af parasitvækst, betragtes som beskyttende antigener. De beskyttende antigener, 15 der forekommer hos forskellige arter af Eimeria, anses som mulige kandidater til udvikling af en vaccine mod fuglecocci-diose.
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere beskrevet ved hjælp af eksempler.
20
Eksempel 1
Kvantitativ radioimmunanalyse
Til at bedømme antistoffers kvalitet er der udviklet en kvantitativ radioimmunanalyse. Glutaraldehydfikserede 25 sporozoitter eller merozoitter (i reglen 2-5 x 105 pr. fordybning) centrifugeres på polyvinylchlorid med 96 fordybninger eller "Removawell"®-plader (Dynatech) ved 1400 x G i 10 minutter for at binde organismen til bunden af fordybningerne. Sporozoitter eller merozoitter, der hænger fast 30 på pladens bund, omsættes med serumprøver af mus immuniseret med parasit- eller monoklonalt antistof i ovenpå flydende hybridomakultur. Inkubering med antistoffer sker i 16-18 timer ved 4°C eller i to timer ved stuetemperatur. Det bundne antistof påvises med et radioaktivt mærket andet antistof, 35 187.1, der er et monoklonalt rotteantistof, der er specifikt for muse-k-let-kæde. Anti-muse-k-let-kæde-antistoffet mærkes
DK 162170 B
5 biosyntetisk med 35S-methionin [D.E. Yelton m.fl., Hybridoma, 1, 5-11 (1982)]. Radioaktiviteten overvåges ved væskescin-tillationstælling. Radioimmunanalysemetoden anvendes derpå på overflademembraner, der fås fra E. tenella-sporozoitter, 5 for at sikre reaktiviteten af antistoffer i immune musesera med membranproteiner.
Eksempel 2
Opbygning af hybridomakulturer 10 Primære kulturer af kyllingenyreceller inficeres med frisk excysterede sporozoitter ved hjælp af kendte metoder. Merozoitter, der er frigjort i mediet fem døgn efter infektion, høstes ved centrifugering ved 350 x G i 10j minutter.
18 uger gamle BALB/c-hunmus immuniseres intraperitonealt 15 (i.p.) med 1 x 107 intakte eller fragmenterede E. tenella- -merozoitter i Freund's komplette adjuvans. Dyrene forstærkes med to i.p.-injektioner af merozoitter i medium 199 (Gibco) med to mellemrum på 5 uger efter indledende immunisering.
Det serum, der fås tre døgn efter hver forstærkning^, kontrol-20 leres for tilstedeværelse af antistoffer mod E. tenella--merozoitter ved indirekte immunfluorescensanalyse (IFA) og radioimmunanalyse (RIA). Begge disse analyser udføres på glutaraldehydfikserede parasitter.
Hybridomaer derivatiseres ved hjælp af gængse metoder 25 [Kwan m.fl. (1980), Genetic Engineering, udg. af J.K. Setlow & A. Hollander, Plenum Publishing Corp., New York, side 31-96]. Miltceller fra to mus, der er immuniseret med E. tenel-la-merozoitter, fusioneres med en ikke-sekreterende klon af P3-myeloma, P3-x 63.Ag-8.653 i nærvær af 30% polyethylen-30 glycol ("PEG 1000" fra Baker Chemical) i 8 minutter. Sammensmeltede celler fordeles i vævskulturskåle med 96 fordybninger (Linbro) og holdes i HAT-selektionsmedium [J.W. Littlefield, Science, 145, 709-710 (1964)]. HAT-Mediet fremstilles i Dulbecco's modificerede Eagle's medium indeholdende 35 20% kalvefosterserum (Gibco) og 10% NCTC 109 (Microbiological
Associates). Hybrider dyrkes i en inkubator ved 37"C og 10%
DK 162170 B
6 co2.
Kulturer analyseres med mellemrum for tilstedeværelse af antistof, der er reaktivt med E. tenella-merozoitter ved hjælp af IFA- og RIA-metoder. Positive kulturer flyttes til 5 vævsdyrkningsskåle med 24 fordybninger i et medium uden hypoxanthin, aminopterin og thymidin. Hybridomaer klones i blød agarose over et rotte-embryo-fibroblast-tilførselslag [Coffins m.fl., J. Cell Physiol., 79, 429-440, (1972)].
Positive hybridomakloner får et underklonnummer (dvs. en 10 klon 15.84.4 er en underklon nr. 4 af et hybridoma betegnet 15.84). Klasse og underklasse af immunoglobulin, der ud-sondres af velbeskrevne underkloner, bestemmes ved hjælp af en agardobbeltdiffusionsmetode. Detergent-(,,NP-40”)-opløselige ekstrakter af hybridomaer anvendes sammen med rotte-15 anti—muse-antistof-reagenser (Meloy).
Eksempel 3
Karakteristik af anti-merozoit-monoklonale antistoffer
Karakteristika for 8 anti-merozoit-monoklonale anti-20 stoffer er vist i tabel I. Størstedelen af de monoklonale antistoffer reagerer med merozoitter samt med sporozoitter ved IFA og RIA. Monoklonale antistoffer 1.90 og 4.76 reagerer ikke med sporozoitter ved IFA og lejlighedsvis ved RIA (jfr.
* i tabel I). Monoklonalt antistof 15.84 reagerer ikke med 25 merozoitter ved IFA, men reagerer lige godt med sporozoitter og merozoitter ved RIA. De data, der er anført i tabel I, viser, at alle de monoklonale antistoffer, der er afledt ud fra antimerozoit-fusionen er krydsreaktive med sporozoitter og merozoitter fra E. tenella.
30 35 7
DK 162170 B
Tabel I
Karakteristik af anti-merozoit-monoklonale antistoffer 5
Specificitet IFA RIA
Monoklonalt antistof Mero Sporo Mero Sporo 10 Ml (1.90) + + * M2 (4.76) + + * M3 (2.03) + + + + M4 (13.90) + + + + M5 (10.08) + + + + 15 M6 (10.84) + + + + M7 (8.03) + + + + M8 (15.84) + + + 20 Eksempel 4
Anti-merozoit-monoklonale antistoffers reaktivitet mod spo-rozoitter fra forskellige arter
De monoklonale antistoffer analyseres ved IFA mod sporozoitter stammende fra fem fugle-coccidia-parasitarter, 25 der har økonomisk interesse. Data fra disse forsøg findes i tabel II. 6 monoklonale antistoffer, der i IFA omsættes med sporozoitter stammende fra E. tenel la, anvendes til at undersøge arternes krydsreaktivitet. Resultaterne viser, at 5 monoklonale antistoffer krydsreagerer med sporozoitter stam-30 mende fra E. necatrix og E. maxima, og et monoklonalt antistof (15.84) reagerer med alle fem afprøvede Kimeria-arter.
35
Tabel II
Anti-merozoit-monokloners reaktivitet mod sporozoitter fra 5 forskellige arter DK 1621708 δ
Monoklonalt antistof E.tenella E.necatrix E.acervulina E.Maxima E.brunetti 10 M3 (2.03) + + + M4 (13.90) + + - + M5 (10.08) + + + M6 (10.84) + + - 4/* M7 (8.03) + + - + 15 M8 (15.84) + + + + +
Eksefltpel 5 20 In-vjjvo-neutraliseringsanalvse
En in-vivo-metode til analyse af monoklonale antistoffer anvendes til at bedømme de monoklonale antistoffer. Tre monoklonale antistoffer, der reagerer med E. tenella-sporo-zoitter, bedømmes ved denne prøve. Frisk isolerede sporozoit-25 ter inkuberes under sterile betingelser med varmeinaktiveret ascitesvæske stammende fra tre forskellige hybridomaer. o .
Inkubationstiden er 1 time ved stuetemperatur. Sporozoitteme indføres derpå i 3 uger gamle kyllingers coecum ad kirurgisk vej. Parasitudviklingen får lov at forløbe i 5 døgn efter 30 inokulering. Ved afslutningen af dette tidsrum gives læsionerne points for at bedømme infektionens omfang. Resultaterne af disse forsøg udtrykkes som procent beskyttelse, som det monoklonale antistof yder, og er anført i tabel III. Disse data viser, at hvert antistof er i det mindste delvis beskyt-35 tende under visse betingelser i dette prøvesystem.
DK 162170 B
9
Tabel III
In-vivo-neutraliserinasprøve med E. tenella-sporozoitter oa anti-merozoit-monokloner 5 Antal % beskyttelse
Behandling dyr Ingen Delvis Fuld I. Let infektion (200 sporozoitter/dyr) 10 Kontrol 14 65 35 M6 (10.84) 13 15 85 M8 (15.84) 18 5 17 78 II. Svær infektion (1000 sporozoitter/dyr) 15 Kontrol 7 100 M4 (13.90) 9 89 11 M6 (10.84) 8 75 25 M8 (15.84) 9 33 44 23 III. Svær infektion 20 (3000 sporozoitter/dyr)
Kontrol 7 100 M6 (10.84) 7 86 14= M8 (15.84) 4 100 25
Eksempel 6
Antiaenkarakteristik E. tenella-antigener, der erkendes af monoklonale antistoffer, identificeres ved SDS-polyacrylamid-gelelektro-30 phorese (PAGE) efterfulgt af en nitrocellulosepletdannelses-metode [Towbin m.fl., Proced. Natl. Acad. Sci. (USA), 76, 4350-4354 (1979)].
E. tenella-sporozoitter og -merozoitter lyseres og ekstraheres med 1% "Nonidet® P-40" (Bethesda Research Labo-35 ratory), i 10 mM Tris-puffer (pH 7,5) indeholdende 155 mM NH4C1, 1,5 mM MgAC2 med proteaseinhibitorerne leupeptin og antipain ved 30 jug/ml, 4 mM phenylmethylsulfonylfluorid og
DK 162170 B
10 aprotinin (2 trypsininhiberende enheder/ml). Denne lysemeto-der omfatter inkubation i 30 minutter ved 0°C efterfulgt af centrifugering ved 2.500 x G i 30 minutter. Pellet'en kasseres, og det opløseliggjorte materiale anvendes derpå til 5 gel-elektrophorese. SDS-polyacrylamid-gelelektrophorese af prøver reduceret med 2-mercaptoethanol udføres i et diskontinuerligt Tris-glycinsystem på 7-15%'s polyacrylamidgradi-entgeler.
De ved SDS-PAGE adskilte proteiner overføres elektro-10 phoretisk til et nitrocellulosefilter i 45 minutter. Nitrocellulosefilteret omsættes derpå enten med ascitesvæsken (1:100 fortynding) eller brugt dyrkningsvæske fra hybridomaer i 16-18 timer ved 4“C. Normalt kaninserum medtages i en koncentration på 10% i alle inkubationer med antistoffer.
15 Det bundne monoklonale antistof påvises ved omsætning med et 125I-mærket kanin-antimuse-IgG-antistof (New England Nuclear). Reaktionen med det andet antistof varer i reglen 3-5 timer ved stuetemperatur. Det ubundne andet antistof fjernes ved vask. Nitrocellulosefiltrene eksponeres derpå 20 med "Kodak® XAR-5" eller "SB-5" røntgenfilm.
Alternativt fremkaldes pletterne ved en ELISA-metode, hvorved der anvendes peberrodsperoxidasekoblet kanin-an-timuse-IgG (Miles) og chlomaphthol (Aldrich) og H2O2 (Baker) som substrater. Proteinantigenernes molekylvægt bestemmes i 25 forhold til molekylvægtstandarder.
De antigener, der erkendes af det monoklonale antistof 15.84, er illustrerende. Monoklonalt antistof 15.84 reagerer med en dublet med en omtrentlig molekylvægt på 130 ± 20 kd. Imidlertid er beregningen af proteiners molekylvægt i stør-30 relsesordenen 100 kd underkastet variation afhængigt af de anvendte molekylvægtstandarder. Foruden 130 ± 20 kd-typeme reagerer 15.84 også med det bånd, der har en tilsyneladende molekylvægt på 300 ± 50 kd. Det største molekylvægtbånd udgør ca. 15-20% af antigenet og er måske enten et aggregat 35 eller en polymer form af 130 ± 20 kd-typerne. Et kontrolforsøg med et monoklonalt antistof, om hvilket man ved, at
DK 162170 B
11 det reagerer med proteinantigener, anvendes til at bevise anti-merozoit-antistoffernes specificitet. Desuden viser andre kontrolforsøg, at de monoklonale antistoffer er parasit-specifikke og ikke reagerer med det værts-specifikke 5 protein.
I tabel IV findes anført molekylvægtdata for antigener, der erkendes af forskellige antistoffer. Det signifikante træk er tilstedeværelsen i E. tenella-merozoitter af immungenetiske antigener med en molekylvægt i enten < 20 10 kD- eller > 100 kD-interval.
Tabel IV Molekylvæatdata
Anti-merozoit- 15 monoklonalt antistof Antigens omtr. molekylvægt Ml (1.90) M2 (4.76) 300 ± 50 kD.
M6 (10.84) 130 ± 20 kD.
20 M8 (15.84) M3 (2.03) M4 (13.90) 18+3 kD.
M5 (10.08) M7 (8.03) 25 -
Monoklonalt antistof 15.84 betragtes som et neutraliserende antistof, og antigenet, der erkendes, anses for et beskyttende antigen. Desuden er 15.84-antistoffet krydsreak-30 tivt med merozoitter og sporozoitter fra E. tenella samt sporozoitter isoleret fra E. maxima, E. necatrix, E. acer-vulina og E. brunetti.
De nye monoklonale antistoffer 1.90, 15.84, 13.90, 10.84, 8.03 og 2.03, der er isoleret ovenfor, er blevet 35 deponeret hos American Type Culture Collection (ATTC), Rockville, Maryland, og er blevet indlemmet i den permanente samling. Nr. 1.90 har fået tildelt nummeret HB8336, nr.
DK 162170 B
12 15.84 har fået tildelt nummeret HB8335, nr. 13.90 har fået tildelt nummeret HB8337, nr. 10.84 har fået tildelt nummeret HB8387, nr. 8.03 har fået tildelt nummeret HB8388, og nr.
2.03 har fået tildelt nummeret HB8389. Antistofferne er 5 tilgængelige for offentligheden, når der er udstedt patent på grundlag af prioritetsansøgningen.
Nr. 1.90 HB8336, 15.84 HB8335 og 13.90 HB8337 blev deponeret hos ATCC 16. august 1983. Nr. 10.84 HB 8287, 8.03 HB8388 og 2.03 HB8389 blev deponeret hos ATCC 20. oktober 10 1983.
Claims (6)
1. Monoklonale antistoffer, kendetegnet ved, at de er produceret af hybridomaer dannet ved fusion af celler fra en musemyelomalinie og miltceller fra en mus, 5 der i forvejen er immuniseret med Eimeria tenella-merozoit-ter, og som (a) reagerer specifikt med antigener fra Eimeriaarters sporozoitter eller merozoitter og (b) reagerer specifikt med antigener af Eimeria tenella 10 med en molekylevægt fra 15 til 350 kD.
2. Monoklonale antistoffer ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de er fremstillet ud fra hybridomaer dannet ved fusion af P3x63.Ag8.653-myelomaceller og miltceller fra BALB/c-mus, der forud er immuniseret med E. tenella- 15 merozoitter.
3. Monoklonalt antistof ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det er produceret af hybridomaet betegnet klon nr. 1.90 og deponeret som ATCC nr. HB8336, at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 20 4.76, at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 2.03 og deponeret som ATCC nr. HB8389, at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 13.90 og deponeret som ATCC HB8337, 25 at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 10.08, at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 10.84 og deponeret som ATCC nr. HB8387, at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 30 8.03 og deponeret som ATCC nr. HB8388, eller at det er fremstillet ud fra hybridomaet betegnet klon nr. 15.84 og deponeret som ATCC HB8335.
4. Monoklonalt antistof ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er fremstillet ved en fremgangsmåde 35 ifølge hvilken (a) mus immuniseres med E. tenella-merozoitter, DK 162170 B (b) milten hos disse mus udtages, og der fremstilles en suspension heraf, (c) miltcellerne fusioneres med musemyelomceller i nærvær af en fusionspromotor, 5 (d) de fusionerede celler fortyndes og dyrkes i sepa rate fordybninger i et medium, der ikke fremmer vækst af ikke-fusionerede myelomceller, (e) det ovenstående lag i hver fordybning indeholdende et hybridoma bedømmes for tilstedeværelse af antistof, 10 der er reaktivt med E. tenella-sporozoitter og -mero- zoitter, (f) et hybridoma, der producerer antistof, der er reaktivt med E. tenella-sporozoitter eller -merozoitter, udvælges og klones, og 15 (g) antistoffet udvindes fra klonerne.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af monoklonale antistoffer ifølge krav 1, kendetegnet ved, at klon nr. 1.90 (ATCC HB8336), 4.76, 2.03 (ATCC HB8389), 13.90 (ATCC HB8337) , 10.08, 10.84 (ATCC HB8387) , 8.03 (ATCC HB8388) 20 eller 15.84 (ATCC HB8335) dyrkes i et passende medium, og at antistoffet udvindes fra det ovenstående lag i en sådan hybridomakultur, eller at der i en mus injiceres en hybrido-makultur betegnet klon nr. 1.90 (ATCC HB8336), 4.76, 2.03 (ATCC HB8389), 13.90 (ATCC HB8337), 10.08, 10.84 (ATCC
25 HB8387), 8.03 (ATCC HB8388) eller 15.84 (ATCC HB8335), og at antistoffet udvindes fra musens ascites eller serum.
6. Monoklont antistof, kendetegnet ved, at det er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 5.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52495383A | 1983-08-19 | 1983-08-19 | |
| US52495383 | 1983-08-19 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK304490D0 DK304490D0 (da) | 1990-12-21 |
| DK304490A DK304490A (da) | 1990-12-21 |
| DK162170B true DK162170B (da) | 1991-09-23 |
| DK162170C DK162170C (da) | 1992-03-16 |
Family
ID=24091317
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK396884A DK163062C (da) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose |
| DK304490A DK162170C (da) | 1983-08-19 | 1990-12-21 | Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK396884A DK163062C (da) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135073A3 (da) |
| JP (2) | JPS6072827A (da) |
| KR (1) | KR850001698A (da) |
| AU (1) | AU571249B2 (da) |
| CA (1) | CA1241924A (da) |
| DK (2) | DK163062C (da) |
| ES (4) | ES8701786A1 (da) |
| FI (1) | FI84186C (da) |
| IL (1) | IL72629A (da) |
| NO (1) | NO162797C (da) |
| NZ (1) | NZ209076A (da) |
| PT (1) | PT79076A (da) |
| ZA (1) | ZA846436B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
| US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
| US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
| US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
| DE3650540T2 (de) | 1985-12-03 | 1997-02-27 | Solvay | Antigene Proteine und diese enthaltende Impfstoffe zur Verhütung von Kokzidiose |
| CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
| US5824656A (en) * | 1988-01-15 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Recombinant and native group B eimeria tenella immunogens useful as coccidiosis vaccines |
| NZ227597A (en) * | 1988-01-15 | 1991-11-26 | Merck & Co Inc | Eimeria tenella group b immunogens and their production |
| US5122471A (en) * | 1988-02-12 | 1992-06-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response |
| ZA889230B (en) * | 1988-02-12 | 1989-08-30 | Us Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response and method of producing the same |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| ZA894726B (en) * | 1988-06-27 | 1990-03-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| ZA9010461B (en) * | 1990-01-26 | 1991-10-30 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines-5-7 eimeria surface antigen |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| JP3995541B2 (ja) * | 2002-06-28 | 2007-10-24 | 株式会社ゲン・コーポレーション | 抗鶏コクシジウム症組成物 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
| EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108926A patent/EP0135073A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31333/84A patent/AU571249B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209076A patent/NZ209076A/xx unknown
- 1984-08-09 IL IL72629A patent/IL72629A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-08-09 FI FI843143A patent/FI84186C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-13 PT PT79076A patent/PT79076A/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-08-16 ES ES535202A patent/ES8701786A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 ZA ZA846436A patent/ZA846436B/xx unknown
- 1984-08-17 DK DK396884A patent/DK163062C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-17 JP JP59170519A patent/JPS6072827A/ja active Pending
- 1984-08-17 NO NO843294A patent/NO162797C/no unknown
- 1984-08-17 CA CA000461243A patent/CA1241924A/en not_active Expired
- 1984-08-18 KR KR1019840004995A patent/KR850001698A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545606A patent/ES8606900A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551495A patent/ES8900150A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551494A patent/ES8802163A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304490A patent/DK162170C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208553A patent/JPH05284993A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK304490D0 (da) | 1990-12-21 |
| AU571249B2 (en) | 1988-04-14 |
| FI84186B (fi) | 1991-07-15 |
| FI843143A0 (fi) | 1984-08-09 |
| ES551494A0 (es) | 1988-04-01 |
| AU3133384A (en) | 1985-02-21 |
| DK304490A (da) | 1990-12-21 |
| KR850001698A (ko) | 1985-04-01 |
| FI843143A (fi) | 1985-02-20 |
| EP0135073A3 (en) | 1987-05-27 |
| ZA846436B (en) | 1985-04-24 |
| DK396884A (da) | 1985-02-20 |
| ES535202A0 (es) | 1986-12-16 |
| ES545606A0 (es) | 1986-05-16 |
| FI84186C (fi) | 1991-10-25 |
| ES8900150A1 (es) | 1989-03-16 |
| DK396884D0 (da) | 1984-08-17 |
| JPS6072827A (ja) | 1985-04-24 |
| NO843294L (no) | 1985-02-20 |
| DK163062B (da) | 1992-01-13 |
| CA1241924A (en) | 1988-09-13 |
| NZ209076A (en) | 1989-01-06 |
| ES8606900A1 (es) | 1986-05-16 |
| CA1261286C (da) | 1989-09-26 |
| ES8701786A1 (es) | 1986-12-16 |
| DK163062C (da) | 1992-06-15 |
| JPH05284993A (ja) | 1993-11-02 |
| IL72629A (en) | 1989-02-28 |
| NO162797C (no) | 1990-02-21 |
| PT79076A (en) | 1984-09-01 |
| ES8802163A1 (es) | 1988-04-01 |
| NO162797B (no) | 1989-11-13 |
| DK162170C (da) | 1992-03-16 |
| IL72629A0 (en) | 1984-11-30 |
| EP0135073A2 (en) | 1985-03-27 |
| ES551495A0 (es) | 1989-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4650676A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp. | |
| DK162170B (da) | Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter | |
| DK162171B (da) | Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling | |
| Kovacs et al. | Monoclonal antibodies to Pneumocystis carinii: identification of specific antigens and characterization of antigenic differences between rat and human isolates | |
| Teixeira et al. | Stage-specific surface antigens of metacyclic trypomastigotes of Trypanosoma cruzi identified by monoclonal antibodies | |
| Quakyi et al. | The 230-kDa gamete surface protein of Plasmodium falciparum is also a target for transmission-blocking antibodies. | |
| US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
| US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
| Perrin et al. | Plasmodium falciparum: characterization of defined antigens by monoclonal antibodies | |
| Fenton et al. | Polymorphism of a 35–48 kDa Plasmodium falciparum merozoite surface antigen | |
| DANFORTH et al. | Specificity and crossreactivity of immune serum and hybridoma antibodies to various species of avian coccidia | |
| Sasai et al. | Characterization of a chicken monoclonal antibody that recognizes the apical complex of Eimeria acervulina sporozoites and partially inhibits sporozoite invasion of CD8+ T lymphocytes in vitro | |
| EP0390267B1 (en) | Coccidiosis vaccine | |
| Crane et al. | Passive protection of chickens against Eimeria tenella infection by monoclonal antibody | |
| Ardeshir et al. | Expression of Plasmodium falciparum surface antigens in Escherichia coli. | |
| Jendoubi et al. | Characterization of one polypeptide antigen potentially related to protective immunity against the blood infection by Plasmodium falciparum in the squirrel monkey. | |
| Whitmire et al. | Inhibition of penetration of cultured cells by Eimeria bovis sporozoites by monoclonal immunoglobulin G antibodies against the parasite surface protein P20 | |
| CA1233134A (en) | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies directed against trichomonas vaginalis determinants | |
| CA1261286A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of eimeria spp | |
| Crandall et al. | Plasmodium falciparum: naturally occurring rabbit immunoglobulins recognize human band 3 peptide motifs and malaria-infected red cells | |
| Deans | Protective antigens of bloodstage Plasmodium knowlesi parasites | |
| Ortiz-Ortiz et al. | Entamoeba histolytica: specific antigen recognized by a monoclonal antibody | |
| Procell et al. | Circumsporozoite protein of the human malaria parasite Plasmodium ovale identified with monoclonal antibodies | |
| Handunnetti et al. | The characterization of two monoclonal antibodies which react with high molecular weight antigens of asexual Plasmodium falciparum | |
| US5502168A (en) | Monoclonal antibodies to a continuous and cross-reactive epitope and an isolated protein of a sexual stage of P. falciparum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |