DK158310B

DK158310B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af substituerede 2,4-diamino-5-piperazinyl-pyrimidiner samt mellemprodukter til brug herved

Info

Publication number: DK158310B
Application number: DK407383A
Authority: DK
Inventors: Leslie M Werbel; Jocelyn H Hung
Original assignee: Warner Lambert Co
Priority date: 1982-09-09
Filing date: 1983-09-08
Publication date: 1990-04-30
Also published as: ES8504775A1; GR79058B; ES525490A0; IE56148B1; EP0103464A3; ES531004A0; IE831920L; DK407383D0; DK407383A; CA1251447A; AU560971B2; AU568997B2; ES8502989A1; US4532240A; AU1869983A; EP0103464A2; DE3378469D1; EP0103464B1; AU6878787A; DK158310C

Description

i

DK 158310 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte substituerede 2,4-diamino-5-piperazinyl-pyrimidiner med den almene formel I

m2 10 hvor er (C^-Cg)alkyl, og er hydrogen, halogen, nitro, cyano, trifluormethyl, (Cj-Cg)alkanoy 1, NH2, COOH, COO(C1-Cg)alkyl, -CONHR1(), hvor R^g er (C^-Cg)alkyl, (C^-Cg)alkyl substitueret 15 med én eller to carboxylgrupper eller (C^-Cg)alkyl substitueret med én eller to (Cj-Cg)carbalkoxygrup-per, eller R^ er -S02 (C^-Cg)alkyl eller -S02N[{C1-C6)alkyl]2, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilken 20 fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 1's kendetegnende del anførte.

Endvidere angår opfindelsen substituerede 2,4-di7 amino-5-piperazinyl-pyrimidiner til anvendelse som udgangsmateriale ved den omhandlede analogifremgangsmåde 25 og ejendommelige ved det i krav 2's kendetegnende del anførte.

De ved den omhandlede fremgangsmåde fremstillede forbindelser har antibakterielle og antitumor-egenskaber.

Som specifikke kemiske forbindelser, der frem-30 stilles ved den omhandlede fremgangsmåde, kan nævnes følgende forbindelser: 4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-benzoesyre, 4- [4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-35 benzoesyre’-ethylester, 5- [4-(4-cyanophenyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimi-dindiamin,

DK 158310 B

2 N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-ny1]benzoyl]-L-glutaminsyre, N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre-diethylester, 5 6-methyl-5-[4-(4-nitrophenyl)-l-piperazinyl]-2,4-pyrimi-dindiamin, 5-[4-(4-acetylphenyl)-l-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyri-midindiamin, 4- [4-(2/4-diamino-6-methyl-pyrimidinyl)-l-piperazinyl]-10 N-methyl-benzamidf N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]glycin, N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]glycin-methylester, 15 6-methyl-5-[4-[4-(methylsulfonyl)phenyl]-l-piperazinyl]- 2,4-pyriraidindiamin, 5- [4-(4-cyanophenyl)-l-piperazinyl]-6-ethyl-2,4-pyrimi-dindiamin, 4-14-(2,4-diamino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-l-piperazinyl]-20 benzoesyre, N- [4- [4- (2,4-diamino-6-ethyl’-5-pyrimidinyl) -l-piperazinyl] benzoyl]-L-glutaminsyre, N-[4-[4-(2,4-diamino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-l-piperazinyl] benzoyl]-L-glutaminsyre-diethylester, 25 5-[4-(4-cyanophenyl)-l-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimi-dindiamin, 4-[4-(2,4-diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-benzoesyre, N-(4-[4-(2,4-diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-30 nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre, N-[4-[4-(2,4-diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre-diethylester, 4- [4-(2,4-diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-benzoesyre-ethylester, 35 6-methyl-5-(4-phenyl-l-piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin-hydrochlorid, 5- [4-(4-chlorphenyl)-l-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimi-dindiamin,

DK 158310 B

3 5- [4- (4-aminophenyl)-l-piperazinyl] -6-meth.yl-2,4-pyrimi-dindiamin, N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-glycin, 5 4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-N,N-dimethyIbenzensulfonamid, 6- methyl-5-[4-[4- (trif luormethyl) phenyl] ’-1-piperazinyl] - 2,4-pyrimidindiamin og farmaceutisk acceptable salte deraf.

10 Forbindelserne med formlen I som ovenfor define ret eller farmaceutisk acceptable salte deraf kan anvendes til behandling af bakterieinfektioner hos pattedyr med behov for sådan behandling, ved indgift af en effektiv mængde af en farmaceutisk komposition indeholdende 15 den aktive forbindelse i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

Den omhandlede fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen I eller farmaceutisk acceptable salte deraf er ejendommelig ved, at 20 a) en forbindelse med formlen II

25 rø2

hvor R.j er som ovenfor defineret, omsættes med en substitueret fluorphenylforbindelse med formlen III

^~R4 ΠΙ

20 hvor er som ovenfor defineret, i et polært organisk opløsningsmiddel i nærværelse af en base, eller b) et 5-bromuracil-derivat med formlen IV

35 w

OB

hvor R.| er som ovenfor defineret, omsættes med en forbindelse med formlen V

4

DK 1583 10 B

H-N v w \~/4

5 hvor R^ er som ovenfor defineret, til dannelse af en forbindelse med formlen VI

TO \

OB

hvorefter nævnte forbindelse med formlen VI omdannes til en forbindelse med formlen I ved chlorering og aminering, og den ved fremgangsmåde a) eller b) opnåede forbindelse 15 med formlen I, om ønsket, overføres i et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Fremgangsmåden a) gennemføres i polære organiske opløsningsmidler, såsom dimethylsulfoxid, i nærværelse af en base, såsom kaliumcarbonat.

20 Forbindelserne med formlen II, hvor er som ovenfor defineret, er hidtil ukendte forbindelser, der udgør de af opfindelsen omfattede substituerede 2,4-diamino-5-piperazinyl-pyrimidiner til anvendelse som udgangsmateriale ved analogifremgangmåde a). Forbindel-25 serne med formlen II kan fremstilles ved nedennævnte reaktionstrin.

6-Alkyl-uracil bromeres i eddikesyre ved en temperatur inden for området fra stuetemperatur til 50°C i 15-20 timer til dannelse af den 5-brom-analoge, der kon-30 denseres med 1-benzylpiperazin i nærværelse af kaliumfluorid, fortrinsvis ved temperaturer mellem 100°C og 150°C, i perioder på ca. 48-72 timer.

Det resulterende piperazin-substituerede uracil chloreres ved omsætning med phosphoroxychlorid i nærvæ-35 relse af en base, såsom Ν,Ν-dimethylanilin, under tilbagesvaling i en periode på ca, 2-10 timer. Chlor-substitu-enterne erstattes med amingrupper, fortrinsvis ved behandling med ammoniak i ethanol ved temperaturer på 130-

DK 158310B

5 170°C i perioder på ca, 12-18 timer.

Benzyl-blokeringsgruppen fjernes fra piperazin-de-len ved hydrogenolyse over palladium/trækul-katalysator i eddikesyre til dannelse af forbindelsen med formlen IX.

5 Dette reaktionsforløb er vist i nedenstående ske ma, hvor er som ovenfor defineret.

fflO-CH2C6H5 w· iv'W' —► w* OH OH OH u ai2c6H5 CH2C6H5 CH2C6H5

II

25

De passende substituerede fluorphenyl-forbindelser med formlen III fremstilles ved metoder, der er velkendte inden for den organiske kemi.

I det særlige tilfælde, hvor forbindelsen III er 30 cyanofluorbenzen, kan cyanogruppen omdannes til opnåelse af omhandlede forbindelser, hvor R4 er carboxyl, carb-oxylsyresalt og carbalkoxy (estergruppe), ved sur hydrolyse af cyanogruppen til carboxylsyregruppen efterfulgt, om ønsket,af saltdannelse med en farmaceutisk acceptabel 35 metal- eller aminkation eller esterificering med en alkohol .

DK 158310 B

6

Alternativt kan carboxylsyren omdannes til amid eller aminosyreamid ved omsætning.med den ønskede amin eller aminosyre ved metoder, der er velkendte inden for den organiske kemi.

5 Den til slut i fremgangsmåde b) gennemførte chlo- rering af forbindelsen med formlen VI kan foregå ved omsætning med phosphoroxychlorid, og den efterfølgende erstatning af chlorsubstituenterne med aminogrupper kan gennemføres ved behandling med ammoniak.

10 Ved "alkylgruppe" skal der i den foreliggende sam menhæng, med mindre andet er anført, forstås grupper med både lige og forgrenet carbonkæde. Ved "alkoxy"- eller "alkoxyl"-gruppe skal forstås en alkylgruppe som ovenfor 15 defineret bundet til hovedmolekylet gennem et enkelt oxygenatom. Alkoxygrupper kan betragtes som afledt af en alkohol ved at fjerne det alkoholiske hydrogenatom.

Sådanne grupper omfatter for eksempel methoxy (-OCH^) eller ethoxy (-OCI^CH^). Ved "alkanoyl" skal for- 20 stås en alkylgruppe som ovenfor defineret bundet til hovedmolekylet gennem en carbonylgruppe (dvs. -C-). Alkali noylgrupper kan betragtes som afledt af et aldehyd ved fjernelse af aldehyd-hydrogenatornet. Sådanne grupper om-25 fatter for eksempel formyl, acetyl eller propionyl.

Ved "carbalkoxy" eller "carbalkoxyl” skal her forstås carboxylgruppen af en organisk syre esterificeret med en lavere alkohol. Sådanne grupper omfatter for eksempel carbomethoxy eller carbethoxy.

30 De omhandlede forbindelser danner, når er en sur funktion, farmaceutisk acceptable salte med organiske og uorganiske baser. Eksempler på egnede uorganiske baser er ammoniumhydroxid, natriumhydroxid, kaliumhydroxid, natriumcarbonat, calciumcarbonat eller na-35 triumbicarbonat. Farmaceutisk acceptable salte dannes også med aminkationer afledt af organiske nitro-genholdige baser, der er stærke nok til at danne kationer.

DK 158310 B

7

De farmaceutisk acceptable salte af syren fremstilles for eksempel ved at suspendere syren i vand og indstille pH med den farmaceutisk acceptable base eller ved at omsætte forbindelsen med ét ækvivalent af den 5 farmaceutisk acceptable base i et opløsningsmiddel og fjerne opløsningsmidlet under reduceret tryk.

Ved angivelsen farmaceutisk acceptabel metalkation skal forstås de positivt ladede ioner, der er afledt af sådanne metaller som natrium, kalium, calcium, magnesium, 10 aluminium, zink eller jern. Saltene fremstilles ved at bringe den frie form af forbindelsen i kontakt med en ækvivalent mængde af den ønskede base på sædvanlig måde. De frie former kan regenereres ved at behandle saltformen med en syre.'For eksempel kan fortyndede van-15 dige syreopløsninger anvendes til at regenerere den frie form fra et respektivt salt. Fortyndet vandig saltsyre er egnet til dette formål. De frie former afviger noget fra deres respektive saltformer i henseende til visse fysiske egenskaber, såsom opløselighed i polære opløs-20 ningsmidler, men saltene er i øvrigt ækvivalente med deres respektive frie baseformer, hvad angår formålene for opfindelsen.

Ved farmaceutisk acceptabel aminkation forstås den positivt ladede ammoniumion og analoge ioner afledt af 25 organiske nitrogenholdige baser, der er stærke nok til at danne sådanne kationer. Baser, der kan anvendes til det formål at danne farmakologisk acceptable ikke-toxi-ske additionssalte af sådanne forbindelser indeholdende frie carboxylgrupper, udgør en klasse, hvis grænser let 30 erkendes af fagmanden. Til illustration kan de siges, i kationisk form, at omfatte dem med formlen ®^Ra H-N—-—Rb 35 c hvor Ra, Rtø og Rc uafhængigt er hydrogen, alkyl med fra ca. 1 til ca. 6 C-atomer, cycloalkyl med fra ca. 3 til

DK 15831GB

s ca. 6 C-atomer, aryl med ca, 6 C-atomer, aralkyl med fra ca. 7 til ca. 11 Oatomer, hydroxyalkyl med fra ca. 2 til ca. 4 C-atomer eller monoarylhydroxylalkyl med fra ca. 8 til ca. 15 C-atomer, eller to vilkårlige fra Ra, og 5 Rc kan sammen med det nitrogenatom, hvortil de er bundet, udgøre en del af en 5- til 6-leddet heterocyclisk ring indeholdende carbon, hydrogen, oxygen eller nitrogen, hvorhos nævnte heterocycliske ringe og nævnte arylgrup-per er usubstituerede eller mono- eller dialkyl-substi-10 tuerede, og nævnte alkylgrupper indeholder fra ca. 1 til ca. 6 C-atomer.

De omhandlede forbindelser danner farmaceutisk acceptable salte med.både organiske og uorganiske syrer. Eksempler på egnede syrer til saltdannelse er salt-, 15 svovl-, phosphor-, eddike-, citron-, oxal-, malon-, salicyl-, æble-, fumar-, rav-, ascorbin-, malein-, methansul-fon-, isethion-, mælke-, glucon-, glucuron-, sulfamin-, benzoe-, vin--eller pamoin-syre. Saltene fremstil les ved at bringe den frie baseform i kontakt med en æk-20 vivalent mængde af den ønskede syre på konventionel måde.

De frie baseformer kan regenereres ved at behandle saltformen med en base. For eksempel kan fortyndede vandige baseopløsninger anvendes. Fortyndede vandige natriumhydroxid-, kaliumcarbonat-, ammoniak- og natriumbicarbonat-25 opløsninger er egnede til dette formål. De frie baseformer afviger noget fra deres respektive saltformer i henseende til visse fysiske egenskaber, såsom opløselighed i polære opløsningsmidler, men saltene er i øvrigt ækvivalente med deres respektive frie baseformer, hvad angår 30 formålene for den foreliggende opfindelse.

De omhandlede forbindelser kan foreligge både i ikke-solvaterede og solvaterede former omfattende hydra-tiserede former. I almindelighed er de solvaterede former, med farmaceutisk acceptable opløsningsmidler, såsom 35 vand-eller ethanol, ækvivalente med de ikke-solva- terede former, hvad angår formålene for den foreliggenr de opfindelse.

DK 158310 B

9

Til fremstilling af farmaceutiske kompositioner ud fra de omhandlede forbindelser kan indifferente, farmaceutisk acceptable bærere være enten faste eller flydende. Præparater i fast form omfatter pulvere, tabletter, 5 dispergerbare granuler, kapsler, oblatkapsler og suppositorier. En fast bærer kan være ét eller flere stoffer, der også kan fungere som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløseliggøren'de stoffer, smøremidler, suspenderingsmidler, bindemidler eller tablet-disintegrationsmidler. De 10 kan også være et indkapslende materiale. I pulvere er bæreren et findelt fast stof, der foreligger i blanding med den findelte aktive forbindelse. I tabletter er den aktive forbindelse blandet med bærer, der har de nødvendige bindemiddelegenskaber, i passende mængdeforhold og 15 komprimeret i den ønskede form og størrelse. Pulvere og tabletter indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca.

70% af den aktive bestanddel. Egnede faste bærere er f.eks. magnesiumcarbonat, magnesiums tear at, talkum, sukker, lactose, pectin, dextrin, stivelse, gelatine, tragacanth, me-20 thylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose, et lavt-smeltende voks eller kakaosmør. Angivelsen "præ parat" skal omfatte en komposition af den aktive forbindelse med indkapslende materiale som bærer under tilvejebringelse af en kapsel, hvori den aktive komponent (med 25 eller uden andre bærere) er omgivet af bæreren, der på denne måde er kombineret med den aktive komponent. Tilsvarende er omfattet oblatkapsler. Tabletter, pulvere, oblatkapsler og kapsler kan anvendes som faste dosisformer egnede til oral brug.

20 Flydende præparatformer omfatter opløsninger, sus pensioner og emulsioner. Som eksempel kan nævnes vandeller vand/propylenglycol-opløsninger til parenteral injektion. Flydende præparater kan også foreligge som opløsning i vandig polyethylenglycolopløsning. Vandige op-35 løsninger egnede til oral brug kan fremstilles ved at opløse den aktive komponent i vand og tilsætte egnede farvningsmidler, smagsstoffer, stabiliseringsmidler og fortykningsmidler, som ønsket. Vandige suspensioner egnede

DK 158310B

10 til oral brug kan fremstilles ved at dispergere den findelte aktive komponent i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummiarter, harpikser, methyl-cellulose, natriumcarboxymethylcellulose og andre vel-5 kendte suspenderingsmidler.

Topiske præparater omfatter pudder, cremer, lotioner, geler og spray-produkter. Disse forskellige topiske præparater kan sammensættes ved velkendte metoder. Se for eksempel Remington's Pharmaceutical Sciences, kapi-10 tel 43, 14.udgave, 1970, Mack Publishing Co., Easton Pennsylvania 18042, USA.

Det farmaceutiske præparat foreligger fortrinsvis i enhedsdosisform. I en sådan form er præparatet opdelt i enhedsdoser indeholdende passende mængder af den akti-15 ve komponent. Enhedsdosisformen kan være et emballeret præparat, idet emballagen indeholder separate præparatmængder, for eksempel emballerede tabletter, kapsler og pulvere i medicinflasker eller ampuller. Enhedsdosisformen kan også være en kapsel, oblatkapsel eller tablet i 20 sig selv, eller den kan være det passende antal af enhver af disse emballerede former.

Mængden af aktiv forbindelse i en præparat-enheds-dosis kan varieres eller indstilles fra 50 mg til 500 mg alt efter den foreliggende anvendelse og styrken af den 25 aktive bestanddel.

Ved terapeutisk anvendelse som antibiotiske og an-tifungale midler anvendes de til den omhandlede farmaceutiske fremgangsmåde benyttede forbindelser i en indledende dosis på fra ca. 0,1 mg til ca. 50 mg pr.kg. Et 30 dosisområde fra ca. 0,5 mg til ca. 10 mg pr.kg foretrækkes. Doserne kan imidlertid varieres alt efter patientens behov, tilstandens alvor og den anvendte forbindelse. Fastlæggelse af den rette dosis i en given situation er velkendt for fagmanden. Behandling indledes i alminde-35 lighed med mindre doser, der er mindre end den optimale dosis af forbindelsen. Derefter hæves dosen med små stigninger, indtil der er opnået optimal effekt under de givne omstændigheder. Det kan være hensigtsmæssigt at

DK 158310 B

11 opdele den totale daglige dosis og indgive den i portioner i dagens løb.

De aktive forbindelser kan også anvendes parente-ralt eller intraperitonealt. Opløsninger af den aktive 5 forbindelse som fri base eller farmaceutisk acceptabelt salt kan fremstilles i vand, passende blandet med et overfladeaktivt middel, såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstilles i glycerol, flydende polyethylenglycoler og blandinger deraf og i olier.

10 Under normale betingelser for lagring og brug indeholder disse præparater et præserveringsmiddel for at hindre vækst af mikroorganismer.

De til injektion egnede farmaceutiske former omfatter sterile vandige opløsninger eller dispersioner og 15 sterile pulvere til fremstilling på bestilling af sterile injicerbare opløsninger eller dispersioner. I alle tilfælde skal formen være steril og skal være flydende i en sådan grad, at der foreligger let sprøjtelighed.

Formen skal være stabil under betingelserne for fremstil-20 ling og lagring og skal være præserveret mod forurenende indvirkning af mikroorganismer, såsom bakterier og fungi. Bæreren kan være et opløsningsmiddel eller dispersionsmedium indeholdende for eksempel vand, ethanol, polyol (for eksempel glycerol, propylenglycol eller flydende poly-25 ethylenglycol), egnede blandinger deraf og vegetabilske olier. Den rette flydeevne kan opretholdes for eksempel ved anvendelse af en belægning, såsom af lecithin, ved opretholdelse af den ønskede partikelstørrelse i tilfælde af dispersion og ved anvendelse af over-30 fladeaktive midler. Hindring af indvirkning fra mikroorganismer kan opnås ved hjælp af forskellige antibakte-rielle og antifungale midler, for eksempel parabener, chlorbutanol, phenol, sorbinsyre eller thimerosal.

I mange tilfælde foretrækkes det at inkludere isotoniske 35 midler, for eksempel sukkerarter eller natriumchlorid. Langvarig absorption af de injicerbare kompositioner kan opnås ved anvendelse i kompositionerne af midler, der forhaler absorption, for eksempel aluminiummonostearat og gelatine.

DK 158310B

12

Sterile injicerbare opløsninger fremstilles ved at inkorporere den aktive forbindelse i ønsket mængde i det passende opløsningsmiddel sammen med forskellige af de andre ovennævnte bestanddele, som ønsket, efterfulgt af 5 sterilfiltrering. Dispersioner fremstilles i almindelighed ved at inkorporere den steriliserede aktive bestanddel i et sterilt vehikel, der indeholder det basiske dispersionsmedium og de ønskede andre bestanddele blandt de ovenfor omtalte. X tilfælde af sterile pulvere til 10 fremstilling af sterile injicerbare opløsninger er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuumtørrings- og frysetørring s teknik, der giver et pulver af den aktive bestanddel plus enhver ønsket yderligere bestanddel ud fra en forud sterilfiltreret opløsning deraf.

15 "Farmaceutisk acceptabel bærer" skal i den forelig^ gende sammenhæng omfatte hvilke som helst opløsningsmidler, dispersionsmedier, belægningsmidler, antibakteriel-le og antifungale midler, isotoniske og absorptionsforhalende midler. Anvendelse af sådanne medier 20 og midler til farmaceutisk aktive stoffer er velkendt. Undtagen hvor et konventionelt medium eller middel er uforeneligt med den aktive bestanddel, er dets anvendelse i de terapeutiske kompositoner omfattet. Supplerende aktive bestanddele kan også inkorporeres i kompositio-25 nerne.

Det er særligt fordelagtigt at fremstille parente-rale kompositioner i dosisenhedsform for at lette anvendelse og opnå ensartethed i dosering. Dosisenhedsform skal her betyde fysisk separate enheder egnede til en-30 hedsdosering til de behandlede pattedyr, idet hver enhed indeholder en forud fastsat mængde af aktivt materiale beregnet til at frembringe den ønskede terapeutiske effekt i kombination med den ønskede farmaceutiske bærer. Specifikationen for de omhandlede, hidtil ukendte dosis-35 enhedsformer er dikteret af og direkte afhængig af (a) de særlige karakteristika for det aktive materiale og den særlige terapeutiske effekt, der skal opnås, og (b) den begrænsning, der ligger i kompositionsmulighederne

DK 158310 B

13 for et sådant aktivt materiale til behandling af sygdom i levende organismer med en sygdomstilstand, hvor helbredet er svækket, som detaljeret omtalt.

Den aktive hovedbestanddel bliver til hensigtsmæs-5 sig og effektiv anvendelse blandet i effektive mængder med en egnet farmaceutisk acceptabel bærer i dosisenhedsform som ovenfor omtalt. En enhedsdosisform kan for eksempel indeholde den aktive hovedbestanddel i mængder på fra ca. 0,1 til ca. 500 mg, idet fra ca. 0,5 til ca. 250 10 mg foretrækkes. Udtrykt i mængdeforhold er den aktive forbindelse i almindelighed til stede i fra ca, 0,1 til ca. 500 mg/ml af bærer. I tilfælde af kompositioner indeholdende supplerende aktive bestanddele bestemmmes doserne i henhold til den sædvanlige dosis af og anvendel-15 sesmåden for nævnte bestanddele. De daglige parenterale doser til pattedyr, der skal behandles, ligger fra 0,1 mg/kg til 100 mg/kg. Den foretrukne daglige dosis ligger fra 0,3 mg/kg til 10 mg/kg.

De ved den omhandlede fremgangsmåde fremstillede 20 forbindelser udviser antimikrobiel og antitumor-aktivitet ved standard-prøvemetoder.

In vitro-antitumor-screening af omhandlede forbindelser på L1210 muse-leukæmicellelinier.

25 L1210-celler, en muse-leukæmicellelinie, blev dyr ket i RPMI 1640 suppleret med 5% kvægfosterserum og gentamicin (50 }jig/ml) .

Lægemiddelfortyndinger blev fremstillet i det passende opløsningsmiddel, og 20 yl af hver fortynding blev 30 sat til 24-rums Linbro-vævskulturplader efterfulgt af tilsætning af 2,0 ml af cellesuspension indeholdende 4 3 x 10 celler pr.ml. Opløsningsmiddel- og medium-kon-trolprøver var inkluderet i hvert forsøg. Efter inkubation ved 37°C i tre dage i 5% C02 blev indholdet i hvert 35 rum fjernet, og cellerne blev talt i en ZBI Coulter-tæl-ler. Procentuel vækst blev beregnet i forhold til kontrolprøverne, og lægemiddel-aktivitetsniveauerne blev udtrykt som ID50 i mol pr.liter under anvendelse af pro-bitpapir.

DK 158310B

14

Resultaterne af disse forsøg er anført i Tabel I.

Tabel X

In vitro-aktivitet af 2,4-pyrimidindiaminer 5 over for Ll210-leukæmi hos mus.

„ L1210- Leukæmi

Ri R4 in vitro __ ID50 molær 15 CH3 4-H 1,5 x ΙΟ-7 CH3 4-Cl 2,8 x 10~8 CH3 4-NH2 8,0 x 10~8 CH3 4-CN 1,5 x 10~6 CH3 4-C02C2H5 5 x ΙΟ"8 20 CH3 4-COCH3 5 x 10“9 CH3 4-S02CH3 5,6 x 10-9 CH3 4-N02 1,5 x 10-8 CH3 4-CONHCH3 2,5 x 10“9 CH- 4-CONHCH2COOCH3 1,7 x 10“8 25 C2H5 4-CN 7,7 x 10-9 C7H5 4-C02E. . 1,0 x 10"8 C-H, 4-CONH-CH(CH,,) „COOC~Kc 3,2 x 10"9 Z -> I Z Z 4 5 ' cooc2h5 C2H5 4-CONH-CH(CH9)2COOH 2,0 x 10“8

COOH

C3H? 4-CN 8,9 x ΙΟ-9 C3H7 4-COOH 4,3 x 10"8

CtH? 4-COOC2H5 9,3 x 10-9 C-,Η-, 4-CONHCH(CH^ ) ^COCC~Hr-

0 1 I £0 4* Λ* O

COOC2H5 35 C-,Η- 4-CONHCH (CH_ ) nCOOH 7.5 x 10-9 6 / f Δ l f

COOH

15

DK 158310B

Foruden deres anvendelighed som antileukæmi-midler udviser nogle af de omhandlede forbindelser in vitro aktivitet over for alvorlige tumorer, når de undersøges ved følgende metode: 5 HCT-8 (human colon-adenocarcinoma)-celler blev trypsineret med Trypsin-EDTA. En enkeltcelle-suspension blev opnået ved at lade cellerne passere gennem en 26 3 gauge nål med en 20 cm sprøjte. En cellesuspension blev fremstillet ved anvendelse af RPMI 1640 + 10% FCS + 50 10 iig/ml garamycin med en cellekoncentration på ca, 30.000 celler/ml. Cellesuspensionen blev fordelt i 24-rums Lin-bro-plader med 1 ml/rum. Pladerne blev inkuberet i ca.

48 timer ved 37°C i en 5% CC^-atmosfære. På dette tidspunkt blev forsøgsforbindelser tilsat i den passende 15 koncentration. Fem μΐ af en 200 ug/ml lageropløsning blev sat til hvert rum ved et primært forsøg. Ti yl af den passende fortynding blev sat til hvert rum til et titreringsforsøg. Pladerne blev geninkuberet i yderligere 60-65 timer ved 37°C i en 5% CC^-atmosfære. Forsøget 20 blev aflæst ved at lysere cellerne med en blanding af kationisk overfladeaktivt middel, iseddikesyre og natri-umchlorid. To ml af den lyserede cellesuspension fra hvert rum blev sat til 8 ml fortyndingsmiddel. Hver prøve blev aflæst på Coulter-tæller (ZBI-model). Aktivite-25 ten af hver prøve måltes som en procentdel af kontrolprøverne, og data blev registreret som ID^q, dvs. den molære mængde af lægemiddel, der krævedes for at dræbe 50% af tumorcellerne.

Ved anvendelse af denne metode blev der opnået de 30 i Tabel II anførte resultater for repræsentative forbindelser blandt de omhandlede.

35 16

DK 15831 OB

Tabel II

In vitro-aktivitet af 2,4-pyrimidindiaminer over for human colon-adenocarcinoma.

rø2 10

Rj__R4_ IP5Q molær CH, 4-C1 3,5 x IC"7 CH3 4-CN > 1 x 10“6 CH3 ‘ 4-C02C2H5 4,9 x 1Q"8 15 CH3 4-COCH3 5,1 x 10-7 CH3 4-S02CH3 5,1 x 10-8 CH3 4-N02 > 1 x 10"6 CH3 4-CONHCH3 6,7 x 10“8 CH3 4-CONHCH2COOCH3 8,0 x 10"7 20 C2H5 4-CN 8,9 x 10"8 C2H5 4_c02H 5,7 x 10“7 C2Hs 4-CONH-CH(CH2)2COOC2H5 2,6 x 1Q“8 COOC-,Η,-

£* D

C2H5 4-C0NH-CH(CH,;)oC00H 1,2 x 10-7

25 ioOH

C3H? 4-CN 1,2 x 10”7 C3H7 4-C02H 2,8 x 10"7 C3H? 4-C02C2H5 2,1 xlO-7 C3H? 4-CONH-CH(CH2)2COOH 8,5 x 10“8

3° C°0H

DK 158310 B

17

In vivo-lymfocytisk leukæmi P388-prøven blev gennemført med prøvesystemet fra The United States National Cancer Institute. De anvendte dyr var CD2F^-hanmus eller -hunmus. Der var 6-7 dyr i hver forsøgsgruppe. Tumor-5 transplantationen foregik ved intraperitoneal injektion af fortyndet ascites-væske indeholdende celler af lymfo-cytisk leukæmi P388. Forsøgsforbindelserne blev indgivet intraperitonealt i to enkeltdoser med et interval på fire dage mellem doser ved forskellige dosisniveauer efter 10 tumor-inokulation. Dyrene blev vejet, og overlevende blev registreret regelmæssigt i 30 dage. Et overlevelsetidsforhold for behandlede dyr (T)/kontroldyr (C) blev beregnet. Kriteriet for effektivitet er T/C x 100 > 125%.

Den positive kontrolforbindelse ved dette forsøg var 5-15 fluoruracil. Se Cancer Chemotherapy Reports, Del 3,\3, 1 (1972)., for nærmere omtale af protokollen.

Ved anvendelse af denne metode blev der opnået de i Tabel III anførte resultater for repræsentative forbindelser blandt de omhandlede.

18

DK 1583 1 0 B

Tabel III

In vivo antileukæmi-aktivitet af 2,4-pyrimidin-diaminer over for P388 leukæmi hos mus.

HH2 ^ 0 _ ". ?3S8 r^uicasnu hos mus DOSIS m/n x

Ri R4 (m^/kg) (overlevelse-forhold ___efter 3Q dage)__ CH, 4-CONHCH (CO-H }CH -'CH, CO-, H 50 1?8 222 * * - “ 25 172 175 12.5 155 163 6.25 144 127 1C CH. 4-CO-H =0 253 ·;3/6) 15 3 25 137 12.5 175, 227 6.25 141, 146 CH, 4-SO.CH, 50 198 25 140 12.5 131 6.25 128 CH, 4-COC3- 50 250 20 25 181 12.5 144 6.25 123 C2H- 4-CN , 50 126 C2H5 4-CONHCHCH2CH2COOC2H5 50 258 (S/6) i00C2H5 25 241 (2/6) 12.5 183 6> 25 163 25 C H 4-COOC-H- 50 149 25 120

De omhandlede forbindelser er hidtil ukendte kemi-30 ske forbindelser af værdi som farmakologiske midler til behandling af bakterieinfektioner hos varmblodede dyr. De kan også anvendes som antiseptiske midler. Den antibak-terielle aktivitet af repræsentative forbindelser blandt de omhandlede er påvist ved den nedenfor beskrevne scree-35 ningsmetode.

19

DK 158310 B

Fremstilling af bakterielle inokula

Vegetative bakterielle isolater holdtes på agar-skråsubstrater eller i flydende medier, i det følgende betegnet inokulum-medier. Kulturerne blev med regelmæs-5 sige mellemrum overført i sådanne medier. (Se Tabel IV for det til hver kultur svarende inokulum-medium.) Organismerne blev i almindelighed overført enten til agar-skråsubstrater eller til flydende inokulum-medier og inkuberet ved 37° (ved 28°C med Xanthomonas sp.) natten 10 over (18-20 timer).

De mikrobielle celler fra de overnattede agar-skrå-substrater blev derefter afskrabet og suspenderet i saltopløsning (0,85% NaCl). De mikrobielle koncentrationer blev indstillet til en lystransmission på 8,6% under an-15 vendelse af et PerkinElmer Model 35-spektrofotometer (550 nm). Til de organismer, der holdtes i flydende medier, fulgtes den ene af to metoder; 1) Kultur-suspensionen blev først centrifugeret ved 5000 rpm i fem minutter.

Den vundne pellet blev gensuspenderet i 0,85% saltopløs-20 ning til 8,6% lystransmissionsevne. 2) En portion af kultursuspensionen blev sat direkte til forsøgsmediet.

Rendyrkede sporesuspensioner (Bacillus sp.) holdtes ved 4°C. Disse suspensioner tjente som inokulum-medier for forsøgene.

25

Fremstilling af forsøgsplader

Et givet smelteagar-forsøgsmedium, holdt i en kolbe ved ca. 45°C, blev inokuleret med 0,16-10 ml af en passende celle- eller spore-suspension pr.100 ml medium. Af 30 det inokulerede medium blev 50 ml hældt i en Bio-Assay-skål (A/S Nunc, Gibco Laboratories Catalog-nummer 240835) og spredt ensartet over bunden og derefter henstillet til størkning ved stuetemperatur. Hver agarskål blev vendt om og sat i køleskab indtil brug.

35

DK 158310 B

20

Udpladning af prøver

Forsøgs-forbindelserne eller -prøverne blev opløst i egnede opløsningsmidler, f.eks. alkoholer, dimethylsul-foxid eller Ν,Ν-dimethylformamid. Prøverne blev i almin-5 delighed opløst således, at den endelige koncentration af opløsningsmidlet var <10%*. Forbindelserne blev undersøgt ved forskellige koncentrationer: 3.000, 1.000, 500, 100 og 10 mcg/mg. Papirplader (12,7 mm i diameter) mættet med en given koncentration af forsøgsforbindelse blev 10 med et par pincetter anbragt på de podede agarskåle.

(*Hvis forbindelsen ikke forblev i opløsning ved <10% alkohol, anvendtes den fulde styrke alkohol. De imprægnerede plader blev imidlertid lufttørret, før de blev lagt på de podede agarplader.) 15

Fortolkning af resultater

De med plade forsynede agarskåle blev inkuberet ved 37°C (28°C for Xanthamonas sp.) i 18-20 timer. Aktive forbindelser viste en hæmningszone rundt om pladen.

20 Diameteren af zonen blev målt i mm. Zonediameteren for aktive forbindelser lå fra et minimum på 13,5 mm til 60 mm. Størrelsen af zonediameteren viser i almindelighed aktiviteten af forbindelsen, idet jo større zonen er, desto større er aktiviteten.

25

DK 158310 B

21

Tabel IV

w 14. v Inokulum- Inokulum- S Kultur Nmraner medium η ml/100 ml

Bacillus 04555 Spore- 0,5 subtilis suspension

Branhamella 03596 T. Soja-agar 1 catarrhalis 10----

Streptococcus 05045 Folinsyre- 2 faecalis prøvesuppe

Micrococcus 05064 AM-07-suppe 0,16 luteus •^5 Xanthomonas 06002 T. Soja-agar 1 . phased!

Ved anvendelse af den ovenfor beskrevne metode 20 blev der opnået de i Tabel V anførte resultater for repræsentative forbindelser blandt de omhandlede.

22

DK 158 310 B

Ha O O O OS O O o o o o Q v* w r r d λ »*· ^ *s <* • O m m r* #n rt m « m m m •4QWWW WWW·«- w w«»«# E £ o o o oooo m ooo v. α ______ __ __ ZL- ________ —. m ο -η o oooo in -i -« o

. * Φ (· l\ ^ ·· ^ *% (k *· #* -l »V

M OCfl.u «">©*"> ©?η©© © © O -* 2ί δ -*

>h ' _vf © tn o « o >e σ* 'β* vø<^gO

•f-| o ^ «* ^ ^ id g to — — —- ~ —< _ —. — —. —· — •H —.—»-.o-ioco-ioo-· π-i « « e λ r. ί-w «s ^ -· ·* P ZQOO^OOO© O OO© S a s —---- — rH KC (D q ιαηΟ.οφφ/. «* in in ve X I Jj \w H <S »M —4 —4 «* —* ·“* «* k -S Γ3 r "Γ « I- II Jj * © in o -i in t n © o m -4 -h >1 IV 11 l] J* fk o » r Γ n ► « ^ ^

Q. V* Ό · U m O O OOOO O OOO

1 ----------- ^ _ 0¾ H N fS -« rs Γί -4 *» -4 tM /*V m ° > m Γ ^ Sn—=-— ----------

'Τΐ^ L J ,ζ-2 O ΙΛ O -Η O ~H -. —< OOO

CD r ^ rs ^ - — Λ * .

Γ) _p J> & > —< /Ή o O OOOO O m n m tdo) , g®£ ~ '---------- B +* I d |2 a o m μ n w o φ o ooo

•H fli I BJ Wn -|Π CM CN -( -t (N

i i6r Γ ΐ η T § lig Φ X I « u o § H Cl 8 ?C n rv n n « 1 — ^ am* s -9 I« ™ U X U y O i05 = _ . nnn n μ I u£ x o X x s χ ^ . «8 « 8 8 88 .*8 8 -Η | U-o « x y-y 0-0 n 5—8

O S ΛΧ X u i I x XCJE

S χ8§80~8ΙΒ33§ -P i yoooaooSS u y

Ph fl JL L. ' i i i i i i i i rfi I ·β·<ΓΗΓ rr *r «r *r *r HT HT » | 8 . ιΛ ιΛ ir> f- n i

il T? -η-,λ -· -> x x x xx* I

D æ XXX XX N Μ Μ η n § jj juuy cjuUu y υ y> y |

DK 158310 B

23

Opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler.

Eksempel 1 5 4-[4-(2,4-Diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]- benzoesyre-hydrochlorid.

En opløsning af 12,10 g (0,026 mol) 5-[4-(4-cyano-phenyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimidindiamin i 200 ml saltsyre blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 10 timer. Opløsningen blev derefter afkølet og hældt i 500 ml isvand. Det dannede faste stof blev indsamlet og vasket med vand. Det faste stof blev genopløst i 1000 ml IN vandig natriumhydroxidopløsning, og den resulterende opløsning blev filtreret. pH-Værdien af filtratet blev 15 indstillet på pH 2 ved tilsætning af 6N saltsyre, og det udfældede faste stof blev indsamlet, vasket med vand og methanol og tørret i vakuum natten over ved 67°C, hvorved vandtes 8,38 g af produktet som et hvidt pulver, smp. > 310°C.

20 5-[4-(4-Cyanophenyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimi dindiamin.

En blanding af 12,5 g (0,060 mol) 6-methyl-5-(1-piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin, 7,27 g (0,060 mol) i 4-fluorbenzonitril og 8,28 g (0,060 mol) kaliumcarbonat 25 blev opvarmet ved 100°C i 2 timer i 10Q ml dimethylsulf-oxid. Blandingen blev derefter afkølet og hældt i 500 ml isvand. Det faste stof, der udskilte, blev tritureret med varmt dimethylsulfoxid og derefter tørret i vakuum natten over ved 67°C, hvorved vandtes 15,56 g af produk-30 tet som et hvidt fast stof, smp. > 310°C.

6-Methyl-5-(1-piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin.

En opløsning af 43,73 g (0,147 mol) 6-methyl-5-[4·-(benzyl)-1-piperazinyl]-2,4-pyrimidindiamin i 800 ml eddikesyre blev hydrogenolyseret over 4 g 2Q% palladium på 35 trækul ved 3,5 atmosfærer hydrogen i 21,6 timer. Opløs-· ningsmidlet blev fjernet i vakuum, og inddampningsresten

DK 158310 B

24 blev opløst i 1000 ml isvand og neutraliseret med 50% vandig natriumhydroxidopløsning til et slut-pH på 8. Det udskilte faste stof blev indsamlet, vasket med vand og derefter med en lille mængde methanol. Det faste stof 5 blev tørret i vakuum natten over ved 67°C, hvorved vandtes 23,13 g af produktet som et gråhvidt fast stof. Om-krystallisation af acetonitril gav 0,85 g rent materiale, smp. 226-228°C.

6-Methyl-5-[4-(benzyl)-1-piperazinyl]-2,4-pyrimidindi-10 amin.

2,4-Dichlor-6-methyl-5-[4-(benzyl)-1-piperazinylJ-pyrimidin (3,4Q g, 0,01 mol) blev opløst i 30 ml kold ethanol, der forud var mættet med ammoniak. Opløsningen blev opvarmet i en lukket stålbeholder ved 160°C i 16 15 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 200 ml kold IN vandig natriumhydroxidopløsning. Det faste stof blev indsamlet, vasket med vand og derefter omkrystalliseret seks gange af ethanol, hvorved vandtes Q,99 g af produktet som skinnende beige-farvede plader, smp.209-210¾.

2 0 2,4-Dichlor-6-itiethyl-5- [4- (phenylitethyl) -1-piperazinyl] -pyrimidin.

En opløsning af 4,0 g (0,013 mol) 6-methyl-5-[4-(phenylmethyl)-1-piperazinyl]-2,4(IH,3H)pyrimidindion og 1 ml Ν,Ν-dimethylanilin i 50 ml phosphoroxychlorid blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer. Det tilbagevæ-25 rende overskud af phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum, og det gummiagtige faste stof, der blev tilbage, blev hældt i 200 ml isvand indeholdende 20 g natriumcar-bonat. Det dannede faste stof blev indsamlet, vasket med vand og tørret i vakuum ved 60°C, hvorved vandtes 3,42 g 30 af produktet som et brunligt fast stof, der anvendtes uden yderligere rensning.

6-Methyl-5-[4-(phenylmethyl)-1-piperazinyl]-2,4(IH,3H)-pyrimidindion.

En blanding af 20,5 g (0,10 mol) 5-brom-6-methyl-35 2,4(IH,3H)pyrimidindion og 10,3 g (0,11 mol) kaliumflu- orid-dihydrat i 130 ml 1-benzylpiperazin blev opvarmet under tilbagesvaling i 72 timer. Reaktionsblandingen

DK 158310 B

25 blev derefter afkølet og hældt i 800 ml isvand. Det dannede faste stof blev indsamlet og vasket med vand, hvorved vandtes 8,10 g af produktet som et grålighvidt fast stof. En portion på 1,0 g af det rå produkt blev omkry-5 stalliseret af methanol, hvorved vandtes et grålighvidt fast stof, smp. 263°C.

5-Brom-6-methyl-2,4(IH,3H)pyrimidindion.

Brom (39,97 g, 0,25 mol) blev dråbevis sat til en afkølet blanding af 31,5 g (0,25 mol) 6-methyl-2,4 (1H,3H).

10 -pyrimidindion i 200 ml iseddikesyre. Den resulterende blanding blev omrørt ved stuetemperatur i 16 timer og derefter filtreret. Det indsamlede faste stof blev vasket: med vand og tørret i vakuum natten over ved 69°C, hvorved vandtes 39,9 g af produktet som et hvidt fast stof, smp.

15 254°C (dek.l.

r

Eksempel 2 N- [4- [4- (2,4-Diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl) -1-piperazi-nyl]benzoyl]-L^glutaminsyre-diethylester.

2Q En blanding af 4,27 g (0,01137 mol) 4-[4-(2,4-di- amino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperaz inyl]benzoesyre-hydrochlorid, 6,12 g (0,0375 mol) diethylphosphorcyanidat og 7,0 ml (0,050 mol), triethylamin i 300 ml forud tørret dimethylformamid blev omrørt ved stuetemperatur i 5 ti-25 mer og derefter ved 80°C i 5 minutter. Opløsningen blev afkølet til stuetemperatur, og en opløsning af 3,00 g (0,0125 mol) L-glutaminsyre-diethylester-hydrochlorid og 1,74 ml (0,0125 mol) triethylamin blev tilsat. Den resulterende blanding blev omrørt i 2 timer ved stuetempera-30 tur. Opløsningsmidlet blev fjernet i højvakuum ved 40°C, og den gummiagtige inddampningsrest blev fordelt mellem 500 ml dichlormethan og 500 ml 5% natriumbicarbonatopløsning. Det organiske lag blev fraskilt, vasket med vand og derefter med mættet natriumchloridopløsning og tørret 35 over magnesiumsulfat. Den tørrede opløsning blev koncentreret i vakuum, hvorved vandtes et gult fast stof. Omkrystallisation af acetonitril gav 3,9 g af produktet som et gulbrunt fast stof, smp. 224°C (dek.).

DK 158310 B

26

Eksempel 3 N-[4-[4-(2,4-diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl] benzoyl]-L-glutaminsyre.

En blanding af 3,00 g (0,0058 mol) N-[4-[4-(2,4-5 diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]benzoyl]-L-glutaminsyre-diethylester og 12,5 ml IN vandig natriumhydroxidopløsning i 150 ml methanol blev omrørt ved stuetemperatur i 4 timer. Methanolet blev fjernet i vakuum ved 23°C, og inddampningsresten blev opløst i 100 10 ml isvand og derefter neutraliseret ved tilsætning af 2,5 g (0,0129 mol) citronsyre. Det faste bundfald blev indsamlet, vasket med vand og derefter tritureret adskillige gange med ethanol. Det tilbageværende faste stof blev tørret natten over i vakuum ved 67°C, hvorved 15 vandtes G,75 g af produktet som et hvidt pulver, smp.

270°C (dek.l.

Eksempel 4 6-Methyl-5-[4-(4-nitropheny1)-1-piperazinyl]-2,4- 20 pyrimidindiamin, hydrat (10;1).

En blanding af 2,08 g (0,010 mol) 6-methyl-5-(1-piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin, 1,69 g (0,012 mol) p-fluornitrobenzen og 1,38 g (0,010 mol) kaliumcarbonat i 100 ml ethanol blev opvarmet under tilbagesvaling i 16 25 timer. Ethanol blev fjernet i vakuum ved 40°C. Den faste inddampningsrest blev vasket med 50 ml vand. Triturering med 50 ml kogende Ν,Ν-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 67°C i 16 timer gav 2,01 g af produktet som et matgult fast stof solvatiseret med 0,1 ækvivalent vand, 3Q smp. } 300°C.

Eksempel 5 5-[4-(4-Acetylphenyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimir dindiamin, hydrat (100:18).

35 En blanding af 1,0 g (5,0 mmol) 6-methyl-5-(1-pi perazinyl )-2,4-pyrimidindiamin, 0,7 g (50 mmol) p-fluor*· acetophenon, 0,7 g (5,0 mmol) cuprioxid, 0,7 g (5,0 mmol)

DK 158310 B

27 kaliumcarbonat i 20 ml dimethylsulfoxid blev opvarmet under tilbagesvaling ved 150°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og filtreret. Det faste stof blev tritureret med 200 ml kogende Ν,Ν-dimethylformamid og 5 filtreret. Filtratet blev kraftigt afkølet i køleskab i 16 timer. Krystallerne blev indsamlet og tritureret med 2Q ml varm methanol og tørret i vakuum ved 78°C i 5 timer, hvorved vandtes 1,0 g af produktet som et grålighvidt fast stof solvatiseret med 0,18 ækvivalent vand, 10 smp, > 30Q°C.

Eksempel 6 4- [4-(2,4-Diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl) -l-piperazinyl]-benzoesyre, ethylester.

15 En blanding af 5,0 g (0,016 mol) 5—14^-(4-cyanpphe- nyl) -1-piperazinyl] -6-methyl-2,4-pyrimidindiamin, 30 ml '95% -ethanol og 30 -ml .-svovlsyre blev opvarmet under til-fesg©svali®g .13(0¾ il 4 ttimer og afkølet. Opløsningen blev .hældt :i 400 g is. ;Det faste stof blev indsamlet, 20 vasket .først med 5N vandig nafriumcarbonatopløsning og derefter med 50 ml vand. Omkrystallisation af N,N-dime-thylformamid gav 1,72 g af produktet som et grålighvidt fast stof, smp. 281-285°C.

25 Eksempel 7 4-[4-(2,4-Diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl) -1-piperazinyl]-N-methyl-benzamid, hydrat (100*45),

En blanding af 2,6 g (8,0 mmol) 4-[4-(2,4-diamino- 6-methyl-5-pyrimidinyl). -1-piperazinyl] benzoesyre, 4,3 g 30 (26,4 mmol) diethylphosphorcyanidat og 3,7 ml (26,4 mmol) triethylamin i 50Q ml Ν,Ν-dimethylformamid (tørret over 4Å molekularsigter natten over) blev omrørt ved stuetemperatur i 5 timer. Luftformig monomethylamin blev ledt ind i suspensionen i 1 time. Suspensionen blev til at 35 begynde med en klar opløsning, og derefter dannedes et bundfald. Opløsningsmidlet blev fjernet i højvakuum (0,1 mm, tøris/2-propanol-opfanger). Den gummiagtige inddamp-

DK 158310 B

28 ningsrest blev opløst i 200 ml isvand og neutraliseret til pH 7 ved tilsætning af mættet natriumcarbonatopløs-ning. Det faste stof blev indsamlet og omkrystalliseret af Ν,Ν-dimethylf ormamid, hvorved vandtes 15 g af produk-5 tet som et grålighvidt fast stof, smp. 305°C (dek,).

Eksempel 8 N-[4-[4-(2,4-Diamino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]glycin, methylester.

10 En blanding af 3,9 g (0,012 mol) 4-[4-(2,4-diamino-

6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]benzoesyre, 6,5 g (0,039 mol) diethylphosphorcyanidat og 6,6 ml (0,047 mol] triethylamin i 500 ml N,N-dimethylformamid (tørret over 4Å molekularsigter natten over) blev omrørt ved stuetem-15 peratur i 5 timer. En blanding af 1,8 g (0,014 mol) gly-cinmethylester-hydrochlorid, 2 ml (0,014 mol) triethylamin og 10 ml N,N-dimethylformamid blev sat til suspensionen, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i y-derligere 2 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet i høj-20 vakuum (0,1 mm, tøris/2-propanol-opfanger) ved 48°C. Den faste inddampningsrest blev opløst i 200 ml isvand og neutraliseret med mættet natriumcarbonatopløsning til pH

8. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand. Omkrystallisation af acetonitril gav 2,6 g af pro-25 duktet som et bleggult fast stof, smp. 255°C (dek.).

Eksempel 9 6-Methyl-5- [4- [4-tnethylsulfonyl) phenyl] -1-piperazinyl] - 2,4-pyrimidindiamin, hydrat (10;2).

30 En blanding af 7,8 g (0,02 mol) 6-methyl-5-(l-pi-

perazinyl)-2,4-pyrimidindiamin-triacetat, 3,8 g (0,022 mol) p-fluorphenylmethylsulfon, 11,70 ml (0,084 mol] triethylamin og 150 ml dimethylsulfoxid blev opvarmet under tilbagesvaling ved 140°C i 16 timer. Reaktionsblandingen 35 blev afkølet og hældt i 500 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand. Omkrystallisation af Ν,Ν-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 89°C

DK 158310 B

29 i 16 timer gav 1,9 g af produktet som et mørkt fast stof solvatiseret med 0,2 ækvivalent vand, smp. >-310°C.

Eksempel 10 5 5-[4-(4-Cyanophenyl)-1-piperazinyl]-6-ethyl-2,4-pyrimi- dindiamin.

En blanding af 2,2 g (0,010 mol) 6-ethyl-5-(1-pipe-razinyl)-2,4-pyrimidindiamin, 1,33 g (0,011 mol) af et 4-fluorbenzonitril og 1,52 g (0,011 mol) kaliumcarbonat 10 i 20 ml dimethylsulfoxid blev opvarmet under tilbagesvaling ved 140°C i 2 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 100 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og omkrystalliseret af Ν,Ν-dimethylformamid, hvorved vandtes 2,21 g af produktet som et hvidt fast stof, 15 smp. > 31Q°C.

6-Ethyl-5-(1-piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin.

En opløsning af 33,5 g (0,107 mol) 6-ethyl-5-[4-* (phenylmethyl)-1-piperazinyl]-2,4-pyriinidindiamin i 400 ml eddikesyre blev hydrogeneret over 2 g 20% palladium 20 på trækul i 3,5 atmosfærer hydrogen i 23 timer og filtreret. Filtratet blev inddampet til tørhed i vakuum.

Den faste inddampningsrest blev hældt i 1 liter 2N natriumhydroxidopløsning. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 500 ml vand. Omkrystallisation af acetonitril 25 og tørring i vakuum ved 59°C i 16 timer gav 19,0 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. 204-2Q7°C.

6-Ethyl-5- [4- (phenylmethyl).-1-piperazinyl] -2,4-pyrimidin-diamin.

En blanding af 4Q,Q g (0,11 mol) 2,4-dichlor-6-30 ethyl-5-[4-(phenylmethyl)-1-piperazinyl]-pyrimidin og 200 ml mættet ammoniak i ethanolopløsning blev opvarmet ved 190°C i en højtryksbeholder af rustfrit stål i 14 timer og afkølet. Ethanol blev fjernet, og den faste inddampningsrest blev vasket først med 200 ml IN vandig na-35 triumhydroxidopløsning og derefter med 4Q0 ml vand. Omkrystallisation af ethanol og tørring i vakuum ved 55°C i 16 timer gav 33,8 g af produktet som et grålighvidt fast stof solvatiseret med 0,1 ækvivalent vand, smp. 174-175°C.

DK 158310B

30 2,4-Dichlor-6-ethyl-5-[4-(phenylmethyl)-l-piperazinyl]-pyrimidin.

En blanding af 50,0 g (0,159 mol) 6-ethyl-5-[4-(phenylmethyl)-l-piperazinyl]-2,4(IH,3H)pyrimidindion, 5 26,1 g (0,175 mol) Ν,Ν-diethylanilin og 400 ml phosphor- oxychlorid blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 timer og afkølet. Phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum.

Den olieagtige inddampningsrest blev hældt i 2 liter isvand, neutraliseret med mættet vandig natriumcarbonat-10 opløsning og ekstraheret med ethylacetat (1,5 liter x 2).

Det organiske lag blev fraskilt, vasket successivt med vand (2 liter) og mættet natriumchloridopløsning, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed i vakuum.

Den olieagtige inddampningsrest blev afkølet kraftigt i 15 køleskab i 3 timer, og det dannede faste stof blev indsamlet og vasket med 2Q0 ml petroleumsether, hvorved vandtes 39,0 g af produktet som et bleggult fast stof..

Det anvendtes i næste reaktionstrin uden yderligere rensning.

20 6-Ethyl-5-[4-(phenylmethyl)-l-piperazinyl]-2,4(IH,3H)py-’ dimidindion.

En blanding af 57,0 g (0,260 mol). 5-brom-6-ethyl-2,4(IH,3H)pyrimidindion og 26,6 g (0,286 mol) vandfrit kaliumfluorid i 176 ml (1 mol) 1-benzylpiperazin blev 25 opvarmet under tilbagesvaling ved 140°C i 4 timer og afkølet. Reaktionsblandingen blev hældt i 1000 ml isvand.

Det faste stof blev indsamlet og vasket med vand. Omkrystallisation af Ν,Ν-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 59°C i 16 timer gav produktet som et grålighvidt 30 fast stof, smp. 255-256°C.

Eksempel 11 4-[4-(2,4-Diamino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-l-piperazinyl]-benzoesyre.

35 En opløsning af 10,0 g (0,031 mol) 5-[4-(4-cyano- phenyl)-l-piperazinyl]-6-ethyl-2,4-pyrimidindiamin i 150 ml saltsyre blev opvarmet under tilbagesvaling i 4

DK 158310B

31 timer. Opløsningen blev afkølet og hældt i 500 ml isvand.

Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand.

Det faste stof blev suspenderet i 300 ml isvand, og der blev dråbevis tilsat 50% vandig natriumhydroxidopløsning, 5 indtil der indtrådte opløsning. Opløsningen blev filtreret, og filtratet blev syrnet med 10% vandig citronsyre til pH 5. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand. Omkrystallisation af Ν,Ν-dimethylf ormamid og tørring i vakuum ved 89°C i 16 timer gav 9,60 g af 10 produktet som et hvidt pulver, smp. > 300°C.

Eksempel 12 N-[4-[4-(2,4-Diamino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre, diethylester.

15 En blanding af 4,1 g (0,012 mol) 4-[4-(2,4-diamina- 6-ethyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]benzoesyre, 6,5 g (0,040 mol) diethylphosphorcyanidat og 5,6 ml (0,040 mol) “ triethylamin i 500 ml Ν,Ν-dimethylformamid (tørret over 4Å molekularsigter natten over) blev omrørt ved stuetem-20 peratur i 2 timer. Til den resulterende klare opløsning blev der sat en blanding af 3,2 g (0,013 mol) L-diethyl-glutamat-hydrochlorid og 1,8 ml (0,013 mol) triethylamin i 10 ml Ν,Ν-dimethylformamid, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer. Opløsningsmidlet blev fjer-25 net i højvakuum (0,1 mm,tøris/2-propanol-opfanger) ved 40°C. Den gummiagtige inddampningsrest blev hældt i 3,00 ml isvand og indstillet på pH 8 ved tilsætning af en mættet natriumcarbonatopløsning. Det faste stof blev indsamlet og omkrystalliseret af acetonitril, hvorved vand-30 tes 2,8 g af produktet som et grålighvidt pulver, smp. 226-228°C,

DK 158310B

32

Eksempel 13 N-[4-[4-(2,4-Diamino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre.

En blanding af 2,0 g (3,85 mol) N-[4-[4-(2,4-di-5 amino-6-ethyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]benzoyl]-L-glutaminsyre-diethylester og 0,6 g (7,70 mmol) af en 50% vandig natriumhydroxidopløsning i 100 ml methanol blev omrørt ved stuetemperatur i 16 timer. Methanol blev fjernet i vakuum ved en temperatur lavere end 23°C. Inddamp-10 ningsresten blev opløst i 50 ml isvand og filtreret. Filtratet blev syrnet med citronsyre til pH 5. Det faste bundfald blev indsamlet, vasket med vand og tritureret med kogende ethanol. Efter tørring i vakuum ved 67°C i 16 timer vandtes 1,3 g af produktet som et hvidt pulver, 15 smp. 275°C (dek,).

Eksempel 14 5-[4-(4-Cyanophenyll-1-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimi-. dindiamin.

2Q En blanding af 9,6 g (0,Q4Q7 mol] 5-(1-piperazi- nyl]-6-propyl-2,4-pyrimidindiamin, 5,4 g (0,0448 mol) 4-fluorbenzonitril og 6,18 g (0,0448 mol] natriumcarbonat i 20Q ml dimethylsulfoxid blev opvarmet ved 140°C i 2 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 500 ml 25 isvand. Det faste stof blev indsamlet og omkrystalliseret af N,N-dimethylformamid, hvorved vandtes 11,7 g af produktet som et hvidt fast stof, smp, > 300°C.

5-(1-Piperazinyl)-6-propyl-2,4-pyrimidindiamin.

En opløsning af 28,6 g (0,088 mol) 5-[4-(phenyl-3Q methyl]-1-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimidindiamin i 50Q ml eddikesyre blev hydrogeneret over 2 g 20% palladium på trækul under 3,5 atmosfærer hydrogen i 18,7 timer og filtreret. Filtratet blev inddampet til tørhed i vakuum. Den olieagtige inddampningsrest blev hældt i 1 35 liter isvand og neutraliseret med 50% vandig natriumhydroxid til pH 8. Det faste stof blev indsamlet, vasket med vand (5Q0 ml] og omkrystalliseret af acetonitril, 33

DK 15831 OB

hvorved vandtes 17,0 g af produktet som et hvidt fast ' stof, smp. 175-176°C.

5-[4-(Phenylmethyl)-1-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimi-dindiamin.

5 En blanding af 70 g 2,4-dichlor-5-[4-(phenylmethy]) -1-piperazinyl]-6-propyl-pyrimidin (fra det foregående trin, formodet at være 0,159 mol) og 400 ml af en mættet opløsning af ammoniak i ethanol blev opvarmet ved 185°C i en trykbeholder af rustfrit stål i 14 timer. Reaktionsblandin-10 gen blev afkølet kraftigt i et isbad, og det faste stof blev indsamlet og vasket med vand (200 ml). Omkrystallisation af acetonitril og tørring i. vakuum ved 59°C gav 30,8 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. 157-160°C.

15 2,4-Dichlor-5-[4-(phenylmethyl)-1-piperazinyl]-6-propyl- pyrimidin.

En blanding af 52,5 g (0,159 mol) 5-[4-(phenylme-> thyl)’-Ί-piperazinyl] -6-propyl-2,4 (lH,3H)pyrimidindion, 26,1 g (0,175 mol) Ν,Ν-diethylanilin og 500 ml phosphor-20 oxychlorid blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 timer og afkølet. Phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum.

Den olieagtige inddampningsrest blev hældt i 1,5 liter isvand og neutraliseret med mættet natriumcarbonatopløs-ning til pH 7. Den vandige blanding blev ekstraheret to 25 gange med 1 liters portioner af ethylacetat, Det organiske lag blev fraskilt, vasket successivt med vand (1 liter] og mættet natriumchloridopløsning (400 ml), tørret (magnesiumsulfat] og koncentreret i vakuum til opnåelse af 70 g af en olieagtig inddampningsrest. Denne anvend-3Q tes i det næste reaktionstrin uden yderligere rensning.

5-[4-(Phenylmethyl)-1-piperazihyl]-6-propyl-2,4(1H,3H)-pyrimidindion.

En blanding af 53,3 g (0,229 mol) 5-brom-6-propyl-2,4(IH,3H)pyrimidindion og 23,7 g (0,252 mol) vandfrit 35 kaliumfluorid i 176 ml (1,0 mol) 1-benzylpiperazin blev opvarmet under tilbagesvaling ved 140 C i 14 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet til 8Q°C, og der blev til- 34

DK 1583 ΊΟB

sat 100 ml ethanol. Blandingen blev hældt i 1 liter isvand. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 1 liter vand. Omkrystallisation af ethanol og tørring i vakuum ved 59°C i 16 timer gav 44,1 g af produktet som et grå-5 lighvidt fast stof, smp. 233-235°C.

Eksempel 15 4-[4-(2,4-Diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]-benzoesyre, 10 En opløsning af 10,0 g (0,030 mol) 5-[4-(4-cyano- phenyl)-1-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimidindiamin i 150. ml saltsyre blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 timer. Opløsningen blev afkølet og hældt i 500 ml isvand.

Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand.

15 Det faste stof blev suspenderet i 300 ml isvand, og 50% natriumhydroxidopløsning blev tilsat dråbevis, indtil der var dannet en klar opløsning. Opløsningen blev filtreret, og filtratet blev syrnet med 10% citronsyre til pH 5, Det faste stof blev indsamlet og vasket med 1Q0 ml 20 vand. Omkrystallisation af N,N-dimethylformamid og tør- -ring i vakuum ved 89°C i 16 timer gav 9,57 g af produktet som et hvidt pulver, smp. 285°C (dek.).

Eksempel 16 25 N" [ 4 [ 4 - (2,4-D iamino - 6 -propyl - 5 -pyr imidiny1) -1-p iper az i-nyl] benzoyl] -L-glutaminsyre,· diethylester.

En blanding af 3,2 g (0,0091 mol) 4-[4-(2,4-diami-no-6-propyl-5-pyrimidinyl]-1-piperazinyl]benzoesyre, 4,9 g (Q,030 mol) diethylphosphorcyanidat og 4,2 ml (0,03Q 3Q moli triethylamin i 2QQ ml N,N-dimethylformamid (tørret over 4A molekularsigter natten overI blev omrørt ved stuetemperatur i 2 timer. Til den resulterende klare opløsning blev der sat en blanding af 2,4 g (0,010 mol) di-ethylglutamat-hydrochlorid og 1,4 ml (0,010 mol) tri-35 ethylamin i 1Q ml Ν,Ν-dimethylformamid, og opløsningen blev omrørt i yderligere en time. Opløsningsmidlet blev fjernet i højvakuum (0,1 mm, tøris/2-propanol-opfanger) ved 40°C, Den gummiagtige inddampningsrest blev hældt i

DK 158310 B

35 100 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og omkrystalliseret af Ν,Ν-dimethylformamid, hvorved vandtes 1,9 g af produktet som et grålighvidt pulver, smp. 175-180°C.

5

Eksempel 17 N-[4-[4-(2,4-Diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazi-nyl]benzoyl]-L-glutaminsyre.

En blanding af 1,3 g (2,47 mmol) N-[4-[4-(2,4-di-1Q amino-6-propyl-5-pyrimidinyl] -1-piperazinyl] benzoyl] -L-glutaminsyre-diethylester og Q,4 g (4,94 mmol) af en 50% vandig natriumhydroxidopløsning i 300 ml methanol blev omrørt ved stuetemperatur i 4 timer. Én dråbe 50% natriumhydroxidopløsning blev tilsat, og reaktionsblandingen 15 blev en klar opløsning, Methanol blev fjernet i vakuum ved en temperatur lavere end 23°C. inddampningsresten blev opløst i 200 ml isvand og filtreret. Filtratet blev ‘ syrnet med citronsyre til pH 6, Bundfaldet blev indsam let, vasket med vand og tritureret med kogende ethanol, 20 Efter tørring i vakuum ved 78°C i 16 timer vandtes 0,9 g af produktet som hvidt pulver, smp, 280-284°c.

Eksempel 18 4-[4-(2,4-Diamino-6-propyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl ]-25 benzoesyre, ethylester.

En blanding af 1,Q g (2,96 mmol] 5-[4-(4-cyanophe-nyll-l-piperazinyl]-6-propyl-2,4-pyrimidindiamin, 15 ml 95% ethanol og 15 ml svovlsyre blev opvarmet under tilbagesvaling ved 1QQ°C i 4 timer og afkølet. Opløsningen 30 blev hældt i 200 ml isvand og filtreret. Filtratet holdtes koldt og blev neutraliseret med-. 50% vandig natriumhydroxidopløsning til pH 7. Det faste stof blev indsamlet og vasket med 5Q. ml vand. Omkrystallisation af N,N-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 78°C i 16 timer 35 gav 0,7 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. 215-216°C.

DK 158310B

36

Eksempel 19 5-[4-(4-Cyanophenyl)-l-piperazinyl]-6-methyl~2,4-pyrimi-dindiamin.

En blanding af 8,0 g (0,023 mol) 2,4-dichlor~5-[4-5 (4-cyanophenyl)-l-piperazinyl]-6-methylpyrimidin og 200 ml af en mættet opløsning af ammoniak i ethanol blev opvarmet ved 190°C i en trykbeholder af rustfrit stål i 14 timer og afkølet. Ethanol blev fjernet i vakuum, og den faste inddampningsrest blev vasket med 200 ml vand.

10 Omkrystallisation af Ν,Ν-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 78°C i 16 timer gav 4,8 g af produktet som et grålighvidt, fast stof, smp, > 300°C.

2,4-Dichlor-5-[4-(4-cyanophenyl) -l-piperazinyl] -6-methyl-pyrimidin.

15 En blanding af 9,0 g (0,029 mol) 5-[4-(4-cyanophe nyl 1-l-piperazinyl]-6-methyl-2,4(IH,3H)pyrimidindion, 4,8 g (Q,Q32 mol). N,N-diethylanilin og 300 ml phosphor-oxychlorid blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer og afkølet. Phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum.

20 Den olieagtige inddampningsrest blev fordelt mellem ethylacetat (5Q0 mil og 500 ml kold 5N natriumcarbonat-opløsning« Det organiske lag blev fraskilt, vasket successivt med 5QQ ml vand og 20Q ml mættet natriumchlorid-opløsning, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til 25 tørhed i vakuum. Den olieagtige inddampningsrest blev afkølet kraftigt i køleskab i 16 timer, og det dannede faste stof blev indsamlet og vasket med 200 ml petroleums-ether, hvorved vandtes produktet som et lysegult fast stof.

30 5-[4-(4-cyanophenyl]-l-piperazinyl]-6-methyl-2,4(1H,3H)- pyrimidindion.

En blanding af 20,5 g (0,10 mol) 5-brom-6-methyl-2, 4 (IH, 3H) pyrimidindion, 18,1 g (0,10 mol) 4-(4-cyano-phenyllpiperazin, 6,4 g (0,11 mol) vandfrit kaliumflu- 35 orid, 15,2 g (Q,1 mol) pulveriseret kaliumcarbonat i 100 ml hexamethylphosphoramid blev opvarmet ved 140°C i 24 timer. Blandingen blev afkølet og hældt i 500 ml isvand.

DK 158310 B

37

Det faste stof blev indsamlet og vasket med 100 ml vand. Omkrystallisation af Ν,Ν-dimethylformamid og tørring i vakuum ved 78°C i 16 timer gav 9,3 g af produktet som et mørkt fast stof.

5 4-(4-Cyanophenyl)piperazin.

En blanding af 20,0 g 4-[1-(4-phenylmethyl)pipera-zinyl]benzonitril i 400 ml methanol blev hydrogeneret over 2 g 20% palladium på trækul under 3,5 atmosfærer hydrogen i 20 timer og filtreret. Filtratet blev inddam-1Q pet til tørhed i vakuum. Inddampmingsresten anvendtes i næste reaktionstrin uden yderligere rensning.

4- [ 1- (4-Pheny lmethy 1} -piperazinyl] benzonitril.

En blanding af 17,6 g (0,10 mol) N-benzylpiperazin, 12,1 g (0,10 mol) p-fluorbenzonitril, 13,8 g (0,01 mol) 15 kaliumcarbonat i 100 ml dimethylsulfoxid blev opvarmet ved 140°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 500 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og “ omkrystalliseret af ethanol, hvorved vandtes 22,0 g af produktet.

20

Eksempel 20 6-Methyl-5- (4-ph.enyl-l-piperazinyl) -2,4-pyrimidindiamin, hydrochlorid (5;1),

Det rå 2,4-dichlor-6-methyl-5-(4-phenyl-l-piperazi-25 nyiipyrimidln (2,1 g, 6,5 mmol) blev sat til 50 ml af en mættet opløsning af ammoniak i ethanol. Den resulterende blanding blev opvarmet i en stålbombe ved 180°C i 16 timer. Ethanol blev fjernet, og den faste inddampningsrest blev vasket med 5N vandig natriumcarbonatopløsning og 3Q derefter med vand og filtreret. Omkrystallisation af methanol to gange gav Q,87 g af produktet som et mat grålighvidt fast stof, smp. 247-248°C.

2,4-Dichlor-6-methyl-5-(4-phenyl-l-piperazinyl) -pyrimi-din, 35 En blanding af 5,72 g (0,020 mol) 6-methyl-5-(4- phenyl-l-piperazinyi)-2,4(lH,3H)pyrimidindion, 5 ml N,N-dimethylanilin og 30 ml phosphoroxychlorid blev opvarmet 38 .

DK 158310 B

ved 80°C i 16 timer. Overskud af phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum, og den olieagtige inddampningsrest blev hældt i 200 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet, vasket med vand og tørret i vakuum ved 62°C natten 5 over, hvorved vandtes 6,20 g af produktet som et cremefarvet fast stof, der anvendtes direkte i det næste reaktionstrin uden yderligere rensning.

6-Methyl-5-(4-phenyl-l-piperazinyl) -2,4 (lH,3H)pyrimidin-dion, hydrat (13:11.

1Q En blanding af 20,5 g (0,10 mol) 5-brom-6-methyl- 2,4(lH,3Hlpyrimidindion og 10,3 g (0,11 mol) kaliumflu-orid-dihydrat i 150 ml 1-phenylpiperazin blev opvarmet under tilbagesvaling ved 105°C i 72 timer og afkølet. Reaktionsblandingen blev hældt i 200 ml isvand. Det fa-15 ste stof blev indsamlet, vasket med vand og omkrystalliseret af methanol, hvorved vandtes 7,12 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. > 300°C.

Eksempel 21 2Q 5- [4- (4-Chlorphenyl) -1-piperazinyl] -6-methyl-2,4-pyrimi-dindiamin.

En blanding af 5,40 g (0,0168 mol) 5-[4-(4-chlor-phenyl)-1-piperazinyl] -6-methyl-2,4 (1H,3H) pyrimidindion, 5 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 100 ml phosphoroxychlorid 25 blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 timer. Phosphoroxychlorid blev fjernet i vakuum. Den olieagtige inddampningsrest blev hældt i 200 ml isvand, neutraliseret med 50% natriumhydroxidopløsning til pH 8 og ekstraheret to gange med 2QQ ml's portioner af ethylacetat. Ekstrakter-3Q ne blev vasket først med vand og derefter med mættet na-triumchloridopløsning, tørret over magnesiumsulfat og koncentreret i vakuum, hvorved vandtes 5,80 g af en sort olieagtig blanding. Dette materiale blev opløst i 30 ml kold mættet opløsning af ammoniak i ethanol og opvarmet i 35 en stålbombe ved 185°C i 16 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum, og den faste inddampningsrest blev vasket med vand, Qmkrystallisation af det rå faste stof af 39 .

DK 158310 B

Ν,Ν-dimethylformamid og tørring ved 67°C natten over gav 2,95 g af produktet som et mat . grålighvidt fast stof, smp. 285°C (dek.).

5-[4-(4-Chlorphenyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4(1H,3H)-5 pyrimidindion.

En blanding af 20,50 g (0,100 mol) 5-brom-6-methyl-2,4(IH,3H)pyrimidindion, 26,96 g (0,100 mol) l-(4-chlor-phenyll-piperazin, 10,35 g (0,110 mol) kaliumfluorid-di-hydrat og 41,4Q g (0,300 moll kaliumcarbonat i 200 ml 10 dimethylsulfoxid blev opvarmet ved 80°C i 72 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 1 liter isvand.

Det faste stof blev indsamlet, vasket med vand og omkrystalliseret af ethanol, hvorved vandtes 6,05 g af produktet som et matgult fast stof« 15

Eksempel 22 5- [4- (4-Aminoph.enyl)-1-piperazinyl]-6-methyl-2,4-pyrimi-* dindiamin.

En suspension af 8,0 g (0,024 moll 6-methyl-5-i4-20 (4-nitropheny 1)-•1-piperazinyl] -2,4-pyrimidindiamin i 100 ml eddikesyre blev hydrogeneret over 0,5 g 5% palladium på trækul under 3,5 atmosfærer hydrogen i 18 timer og filtreret« Filtratet blev inddampet til tørhed i vakuum.

Den faste inddampningsrest blev opløst i 500 ml isvand 25 og neutraliseret med ammoniumhydroxid til pH 8, Det faste stof blev indsamlet og vasket med 2Q ml vand. Omkrystallisation af N,N-dimethyl formamid og tørring i vakuum ved 89°C i 16 timer gav 6,1 g af produktet som lysebrunt fast stof, smp. 237-239°C,.

30

Eksempel 23 N-[4-[4-(2,4-Diamtno—6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl] benzoyl]-glycin.

En blanding af 1,5 g (3,76 mmol) N-[4-[4-(2,4-di-35 amino-6-methyl-5-pyrimidinyl)-1-piperazinyl]benzoyl]-glycin-methylester og 3,8 ml (3,8 mmol) af en IN vandig natriumhydroxidopløsning i 5Q0 ml methanol blev omrørt 40 .

DK 158310 B

ved stuetemperatur i 16 timer. Reaktionsblandingen forblev uklar. En opløsning af 0,4 ml IN natriumhydroxid i 200 ml methanol blev tilsat, og reaktionsblandingen blev omrørt i yderligere 2 timer og blev en klar opløsning.

5 Methanol blev fjernet i vakuum. Den faste inddampnings-rest blev opløst i 200 ml vand og filtreret. Filtratet blev syrnet med citronsyre til pH 6. Bundfaldet blev indsamlet, vasket med vand og tritureret med 200 ml kogende methanol. Efter tørring i vakuum ved 78°C i 16 timer 1Q vandtes 1,30 g af produktet som hvidt pulver, smp. > 310°G

Eksempel 24 4-[4-(2,4-Diamino-6-me thy 1-5-pyrimidiny1) -1-piperazinyl] -N,N-dimethylbenzensulfonamid.

15 En blanding af 10,4 g (0,05 mol) 6-methyl-5-(1- piperazinyl)-2,4-pyrimidindiamin-triacetat, 10,1 g (0,05 mol) 4-fluor-N,N-dimethylbenzensulfonamid, 6,4 g (0,055 moll vandfrit kaliumfluorid og 27,6 g (0,2 mol) pulveriseret kaliumcarbonat i 100 ml dimethylsulfoxid blev op-20 varmet ved 12Q°C i 4 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 300 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og vasket med vand.

Omkrystallisation af N,N-dimethylformamid gav 6,5 g af produktet som et grålighvidt fast stof, smp,301-304°C.

25 4-Fluor-N,N-dimethylbenzensulfonamid,

En opløsning af 38,9 g (0,20 mol) 4-fluor-benzen-sulfonylchlorid i 20 ml methylenchlorid blev langsomt sat til 300 ml af en 40% vandig dimethylaminopløsning i løbet af 0,5 time. Reaktionen var exoterm. Efter at re-30 aktionsblandingen var afkølet, udfældede et gult fast stof. Det faste stof blev indsamlet, opløst i 300 ml ethylacetat og tørret over magnesiumsulfat. Opløsningen blev koncentreret til 1QQ ml, og der dannedes en lysegul krystal. Krystallen blev indsamlet og lufttørret, hvor-35 ved vandtes 39 g af produktet, smp, 4Q-43°C.

Claims

41 . DK 158310 B Eksempel 25
6-Methyl-5-[4-[4-(trifluormethyl)phenyl]-1-piperazinyl]- 2,4-pyrimidindiamin. En blanding af 1,9 g (5fQ mmol) 6-methyl-5-(1-pi-5 perazinyl)_-2,4^pyrimidindiamin-'-triacetat, 0,8 g (5,0 mmol) l’-fluor’-4^(trifluormethyl)benzen, 0,4 g (6,0 mmol) vandfrit kaliumfluorid og 3,31 g 12,4 mmol) kaliumcarbo-nat i 20 ml dimethylsulfoxid blev opvarmet ved 130°C i 16 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 10 150 ml isvand. Det faste stof blev indsamlet og vasket jned vand. Omkrystallisation af N,Ν’-dime thyl formamid gav Q,4 g af produktet som et grålighvidt fast stof, smp. 255-258°C.
15 PATENTKRAV
1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af sub-‘ stituerede 2,4-diamino-5-piperazinyl-pyrimidiner med den almene formel I m2 hvor
25 R1 er (C1-Cg)alkyl, og R^ er hydrogen, halogen, nitro, cyano, trifluormethyl, (C^-Cg)alkanoyl, NH2, COOH, COO(C1-Cg)alkyl, -CONHR1(), hvor R1q er (-Cg)alkyl, (C^-Cg)alkyl substitueret med én eller to carboxylgrupper eller (C1-Cg)alkyl 30 substitueret med én eller to (C^-Cg)carbalkoxygrup-per, eller er -S02(C.j-Cg)alkyl eller -S02N[(C1-Cg)alkyl]2, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at 35 a) en forbindelse med formlen II DK 158310 B Rj 42 NH2 5 hvor er som ovenfor defineret, omsættes med en substitueret fluorphenylforbindelse med formlen III ^>-R^ III hvor er som ovenfor defineret, i et polært organisk 10 opløsningsmiddel i nærværelse af en base, eller b) et 5-bromuracil-derivat med formlen IV
15 OB hvor R.j er som ovenfor defineret, omsættes med en forbindelse med formlen V „ ”0—0«. hvor R^ er som ovenfor defineret, til dannelse af en forbindelse med formlen VI . OH hvorefter nævnte forbindelse med formlen VI omdannes til en forbindelse med formlen I ved chlorering og aminering, 30 og den ved fremgangsmåde a) eller b) opnåede forbindelse med formlen I, om ønsket, overføres i et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
2. Substituerede 2,4-diamino-5-piperazinyl-pyri-midiner til anvendelse som udgangsmateriale ved analogi-35 fremgangsmåde a) ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de har den almene formel II DK 158310 B ¥VM!
5. M rø2 ^»Ή hvor R.j er (C^-Cg)alkyl.