DK154048B - Fremgangsmaade til rensning af liposomsuspensioner for ikke-indesluttet laegemiddel - Google Patents

Description

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til rensning af suspensioner for ikke-indesluttet lægemiddel.

Liposomer er farmaceutiske sammensætninger, hvori lægemidler er indeholdt i partikler, der består af vandige lag og lipidlag i koncentrisk anordning. Lægemidlet kan være indeholdt såvel i det vandige lag som i lipidlaget. Lipidlaget består i almindelighed af et phospholipid, såsom licithin og sfingomyelin, et steroid, såsom cholesterol, og et io-nisk grænsefladeaktivt stof såsom dicetylphosphat, steary-lamin og phosphatidsyre. Liposomernes diameter er 0,01 til Den til fremstilling af liposomer anvendte fremgangsmåde omfatter sædvanligvis to hovedtrin: 1. Fremstilling af liposomer:

Lipidkomponenterne opløses i chloroform, som derefter af-dampes i vakuum. Til kolben, der indeholder remansen som et tyndt lag, sættes lægemiddelopløsningen, og det hele omrystes i 30 sekunder til 12 timer med ultralyd. Den således opnåede liposomsuspension indeholder en vigtig fraktion af ikke-indesluttet lægemiddel, som må skilles fra liposomer-ne.

2. Fraskillelse af liposomerne fra ikke-indesluttet lægemiddel :

Denne fremgangsmåde sker ved søjlekromatografi med en molekylærsigte, Sepharose 6B®, der er gelharpikser, der virker som molekylærsigte med den egenskab, at de adsorberer stoffet gennem porer og tilbageholder eller holder stoffet i henhold til støreiser og molkylevægt.

Liposomerne elueres først, mens det frie lægemiddel holdes tilbage af Sepharosen.

En anden egnet fremgangsmåde er ultracentrifugering ved 100 000 G og efterfølgende vask, stadig under ultracentri fuge-ring, med pufferopløsning.

Det har vist sig, at liposomerne hos dyr kan transportere antitumoralt aktive lægemidler selektivt til neoplastiske celler.

Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til rensning af liposomsuspensioner for ikke-indesluttet lægemiddel uden at anvendelse af kromatografi er nødvendig. Fremgangsmåden er ejendommelig ved, at liposomsuspensionen bringes i kontakt med ionbytterharpikser, der enten er i aktiveret form eller i ikke-aktiveret form, hvor den ikke-aktiverede er i saltform, hvorefter ionbytterharpiksen med det derpå tilbageholdte ikke-indesluttede lægemiddel fra-filtreres, og den rensede liposomsuspension stabiliseres eventuelt ved frysetørring.

Ionbytterharpiksen sættes til lægemiddelliposomsuspensio-nen, som skal renses, og det hele omrystes i 1 til 120 minutter. Den rene liposomsuspension opnås efter filtrering gennem et porøst lag, som tilbageholder harpiksen, hvorpå det frie lægemiddel er blevet fastholdt. Denne nye rensningsfremgangsmåde, hvorved der anvendes ionbytterharpik-ser, viser den store fordel, at man kan opnå meget koncentrerede liposomsuspensioner (indtil 4mg/ml af f.eks. adria-mycinhydrochlorid), hvilket ikke kan opnås ved kromatografi med en molkylærsigte (maksimalt 200

/ml). Den således op nåede liposomsuspension er meget stabil og har, i modsætning til de suspensioner, der opnås ved centrifugering med høj omdrejningshastighed, ikke tilbøjelighed til sedimentation. Den definitive kemiske stabilisering opnås ved frysetørring af liposomsuspensionen. De følgende eksempler skal belyse opfindelsen nærmere.

Eksempel 1: I en forsæbningskolbe opløstes 1,5 g æggeleci-thin, 0,4 g cholesterol og 0,2 g dicetylphosphat i chloroform, og opløsningen inddampedes til tørhed. En adriamycin-hydrochloridopløsning (koncentration 20 mg/ml) i 0,007 N phosphatpuffer tilsattes derpå, og opløsningen omrystedes i 1 minut med ultralyd. Derefter henstod suspensionen ved stuetemperatur under nitrogenatmosfære i 30 minutter, hvorpå der tilsattes 2 g BDH

1 IR-50-harpiks (en granules polymer harpiks fremstillet af Rohm-Hass, og som er svag katio-nisk), som forinden var aktiveret i natriumformen (vægten angiver tørvægten og svarer til 5 ml opsvulmet harpiks). Kolbens indhold omrystedes i 30 minutter. Derefter filtre-redes suspensionen gennem et porøst lag (sintret glasfilter GI porestørrelse 100-160 micrometer). Der opnåedes liposo-mer med en varierende størrelse på 0,5 til 2

tog med et indhold på 60¾ af den anvendte mængde adriamycin. De stabiliseredes ved frysetørring.

Eksempel 2: Fremgangsmåden var som i eksempel 1, og der anvendtes de samme mængder adriamycin og lipider, idet omrystningen med ultralyd udstraktes til 10 minutter for at opnå liposomer med en størrelse på under 1

. Der valgtes en ikke-granuleret harpiks, der ligeledes havde en sigtes funktion, da liposomernes størrelse ikke var helt ensartet. Følgelig anbragtes 10 ml Dowex

50W-X 4 (100-200 "mesh") harpiks (en polymer macroreticular harpiks fremstillet af Dow; Chemicals, og som er kationisk), som forinden var aktiveret i natriumformen i kolben. Efter filtrering opnåedes en suspension, der indeholdt liposomer med en størrelse på 0,2 til 0,f

[/samt 75¾ af det anvendte adriamycin. Derefter stabiliseredes liposomerne ved frysetørring.

Eksempel 3: En opløsning af 5-fluoruracil med en koncentration på 10 mg/ml i 0,007 N phosphatpuffer og med Ph-værdi på 8 hældtes i en forsæbningskolbe, som indeholdt lipidfa-sen, der var fremstillet som beskrevet ovenfor. Suspensio nen behandledes som i eksempel 1, idet der som filtrerhar-piks anvendtes 10 ml Amberlite

IRA-400 (Cl) (en granules polymer harpiks fremstillet af Rohm-Hass, og som er stærk anionisk), der forinden var aktiveret som chlorhydrat. De således opnåede liposomer stabiliseredes ved frysetøring.

Eksempel 4: Liposomer af 5-fluoruracil fremstilledes som beskrevet ovenfor under anvendelse af 1,5 g æggelicithin, 0,4 g cholesterol og 0,2 g stearylamin. Som rensningssystem anvendtes 10 ml Dowex

-1-harpiks (50 til 100 "mesh") (en granules polymer harpiks fremstillet af Dow Chemicals, og som er kationisk), som forinden var aktiveret. De således opnåede liposomer stabiliseredes ved frysetørring.

Eksempel 5: Under de samme betingelser og under anvendelse af de samme mængder som beskrevet i eksempel 2 fremstilledes en adriamycin-liposomsuspension, som rensedes under an- > vendelse af 15 g adsorberende Rohm og Haas XAD 7-harpiks (en granuløs polymer harpiks fremstillet af Rohm-Haas, og som er kationisk), der anbragtes direkte i fremstillings-kolben. Efter 40 minutters omrystning og filtrering gennem et sintret glasfilter G 1 opnåedes en liposomsuspension, der indeholdt ca. 50¾ af den anvendte mængde adriamycin; denne suspension stabiliseredes ved frysetørring.

Claims (4)

1. Fremgangsmåde til rensning af liposomsuspensioner for ikke-indesluttet lægemiddel kendetegnet ved, at liposomsuspensionen bringes i kontakt med ionbytterharpikser, der enten er i aktiveret form eller i ikke-aktiveret form, hvor den ikke-aktiverede er i saltform, hvorefter ionbytterharpiksen med det derpå tilbageholdte ikke-indesluttede lægemiddel frafiltreres, og den rensede liposomsuspension stabiliseres eventelt ved frysetørring.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 kendetegnet ved, at der anvendes absorberende polymere stoffer.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 kendetegnet ved, at der anvendes stærke eller svage harpikser af aniontypen.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 kendetegnet ved, at der anvendes stærke eller svage harpikser af kationtypen.