DK153554B - Fremgangsmaade til fremstilling af 7-aminocephalosporansyrederivater - Google Patents

Description

DK 1535548

Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af 7-aminocephalosporansyrederivater med formlen HOOC- (CH0) t-CONH -/ \ 2 2 I (III) '^Vch2x

COQM

hvor X betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy eller pyridinio, og M betyder hydrogen eller, når X betyder pyridinio, en negativ ladning, idet der gås ud fra cephalosporin C eller et derivat deraf

DK 153554B

2 med formlen S.

OOC-CH- (CH„) -rr>NR ^ \ ' + 1 3 I I (I) NH_ i v ' 3 _N J.

COOM

hvori X og M har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf.

Formålet med opfindelsen er at tilvejebringe en kommercielt anvendelig, billig og let gennemførlig fremgangsmåde til fremstilling af de omhandlede 7-aminocephalosporansyrederivater, som er udgangsmaterialer ved fremstillingen af antibiotika af cephalo-sporintypen med lav toksicitet og bredspektret farmakologisk virkning .

Det er kendt at fremstille 7-aminocephalosporansyrederiva-ter (III) ved omdannelse af cephalosporinforbindelsen (I), eller et salt deraf, dannet ved fermentering, til 7-aminocephalosporan-syrederivatet (III) under anvendelse af D-aminosyreoxidase, jf. belgisk patentskrift nr. 736934, fremlagt japansk patentbeskrivelse nr. 39595/72 og japansk patentpublikation nr. 7158/75. Ved disse kendte fremgangsmåder dannes der store mængder a-ketoadipoyl--7-aminocephalosporansyre eller derivater deraf (i det følgende kaldet a-ketoadipoyl-7-ACA-derivat) med formlen

.S

H00C-C- (CH0) ,-CONH—-/ N.

, 2 3 f

O J-N A

<y 'Y^'"ch2x

COOH

hvor X har den ovenfor angivne betydning, som mellemprodukt. For at formindske dannelsen af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet er det blevet forsøgt at anvende natriumazid eller lignende enzyminhibitorer i reaktionssystemet.

Der er imidlertid væsentlige ulemper ved de kendte fremgangsmåder, idet disse kræver et enormt stort apparatur til kommerciel produktion af D-aminosyreoxidase, og idet natriumazidet

DK 153554B

3 eller en tilsvarende enzyminhibitor, der er skadelig for mennesker, skal anvendes i store mængder. Endvidere er det vanskeligt at opnå en stabil produktion af slutproduktet, således at de kendte fremgangsmåder ikke altid er fordelagtige i kommerciel målestok.

På baggrund af ovennævnte ulemper ved de kendte fremgangsmåder er det i forbindelse med den foreliggende opfindelse blevet forsøgt at udvikle en helt ny fremgangsmåde til fremstilling af de omhandlede 7-aminocephalosporansyrederivater, og det har vist sig, at disse kan fremstilles i høje udbytter véd omsætning af cephalosporinforbindelsen med α-ketoderivatet med påfølgende tilsætning af hydrogenperoxid.

I overensstemmelse hermed er fremgangsmåden ifølge opfindelsen, der er af den i det foregående angivne art, ejendommelig ved, at forbindelsen (I) eller dens salt omsættes med et a-keto-derivat, der er valgt blandt glyoxylsyre, pyrodruesyre, phenyl-glyoxal, a-ketophenyleddikesyre, glyoxylsyreamid, a-keto-n-bu-tansyre, natrium-a^keto-n-butanoat og natriumglyoxylat, hvorefter der tilsættes hydrogenperoxid eller et hydrogenperoxid-dannende stof til omdannelse af det fremkomne mellemprodukt med formlen HOOC-C-(CH2)3-CONH__/ \ l I (IV)

u _N

ch9x I 2

.C.QQM

hvor X og M har den ovenfor angivne betydning, til den ønskede forbindelse med formlen (III).

Dannelsen af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet ud fra cephalosporinforbindelsen gennemføres således ved at omsætte cephalosporinforbindelsen i en vandig opløsning med α-ketoderivatet, medens fremstillingen af 7-aminocephalosporansyrederivatet gennemføres ved at omsætte a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet i en vandig opløsning i nærværelse af hydrogenperoxid.

Selv om der dannes et 7-aminocephalosporansyrederivat ved reaktionen til dannelse af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet ved omsætning af cephalosporinforbindelsen med α-ketoderivatet, er det som mellemprodukt dannede a-ketoadipoyl-7-ACA-derivat yderst usta-

DK 153554B

4 bilt i kemisk, henseende. Ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fås der ud fra det dannede intermedial a-ketoadipo-yl-7-ACA-derivat det stabile, ønskede 7-aminocephalosporansyrede-rivat ved tilstedeværelse af hydrogenperoxid til reaktionssystemet, hvorved 7-aminocephalosporansyrederivatet fås selektivt og i højt udbytte.

1) Reaktionen til dannelse af a-ketoadipoyl-7-ACA-deriva-tet ud fra. cephalosporinforbindelsen gennemføres ved at omsætte cephalosporinforbindelsen i en vandig opløsning med a-ketoderiva-tet.

, Som α-ketoderivat ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis glyoxylsyre, pyrodruesyre, phenylglyoxal, glyoxylsyreamid, α-ketophenyleddikesyre og natrium-a-keto-n-buta-noat. Blandt disse er glyoxylsyre det mest foretrukne med henblik på udbyttet af 7-aminocephalosporansyre. Reaktionen forløber bedst ved en pH-værdi i området fra 3,0-8,0, især ved en pH-værdi fra 3,5 til 6,0. Såfremt pH-værdien under reaktionen bliver større end 8,0, bliver cephalosporinforbindelsen og a-ketoadipoyl-7-ACA- v -derivatet ustabilt og sønderdeles som følge af bireaktioner, hvilket bevirker, at udbyttet af det ønskede a-ketoadipoyl-7-ACA--derivat eller 7-aminocephalosporansyrederivatet bliver uønsket lavt. α-Ketoderivatet anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen i mindst ækvimolær mængde i forhold til udgangscephalosporin-forbindelsen, men mængden deraf kan forøges under hensyntagen til andre betingelser, f.eks. typen af den pågældende cephalosporin-forbindelse, reaktionstemperaturen samt arten og mængden af tilstedeværende urenheder, og der anvendes fortrinsvis 1-50 mol pr. mol cephalosporinforbindelse. Anvendelsen af en unødvendig stor mængde α-ketoderivat er ikke økonomisk, selv om dette ikke har nogen særlig virkning på reaktionen. ‘ -

Ved den foreliggende- fremgangsmåde er det særligt effektivt at fremme reaktionshastigheden ved omsætningen af cephalosporinforbindelsen med α-ketoderivatet ved tilsætning af et salt af et metal såsom kobber, mangan, calcium, aluminium, jern, nikkel eller cobalt og en syre såsom svovlsyre, eddikesyre, propionsyre eller saltsyre. Metalsaltet anvendes fortrinsvis i en mængde på fra 0,1 til 20 mol pr. mol cephalosporinforbindelse. Om ønsket kan der anvendes en orga- 5 DK 1535548 nisk base i kombination med eller i stedet for metalsaltet for at afkorte reaktionstiden. I dette tilfælde kan dannelsen af biprodukter inhiberes, hvorved opnås mere fordelagtige resultater. Organisk base anvendes fortrinsvis i form af en tertiær cyclisk amin såsom pyridin, en sekundær cyclisk amin såsom imidazol eller en ikke-cyclisk amin såsom triethylamin, dimethylamin eller me-thylamin. Mængden af den tilsatte organiske base bestemmes under hensyntagen til den anvendte type base og andre reaktionsbetingelser, men sædvanligvis anvendes 1-30 mol base pr. mol cephalo-sporinforbindelse. Anvendelse af en unødvendig stor mængde organisk base vanskeliggør rensningen af det ønskede 7-aminocephalo-sporansyrederivat og er derfor ikke ønskelig.

Ved den foreliggende fremgangsmåde gennemføres reaktionen ved en temperatur i området 0-50°C. Den som udgangsmateriale anvendte cephalosporinforbindelse og det som mellemprodukt dannede a-ketoadipo-yl-7-ACA-derivat er imidlertid kemisk ustabil, og det er derfor ikke fordelagtigt at gennemføre reaktionen ved en unødvendig høj temperatur. Reaktionen gennemføres mest økonomisk ved en temperatur under den såkaldte stuetemperatur. Endvidere bestemmes reaktionstiden ved en foreliggende fremgangsmåde under hensyntagen til andre reaktionsbetingelser, f.eks. fraværelsen eller tilstedeværelsen af metalsaltet eller den organiske base, hydrogenionkoncentrationen på reak-tionstidspunktet og reaktionstemperaturen. Såfremt der ikke anvendes metalsalt eller organisk base, er reaktionstiden 3-24 timer, medens reaktionen ved tilstedeværelse af metalsalt eller organisk base er afsluttet i løbet af kort tid, f.eks. fra 5 minutter til 4 timer.

Reaktionstid Udbytte af 7-aminocepha-Metalsalt Organisk base (timer) losporansyrederivat i %

Nej Nej 5,0 56,4

Nej Ja 2,0 77,1

Ja Nej 2,0 77,3

Ja Ja 1,0 92,0 2) Som tidligere anført er a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet yderst ustabilt i kemisk henseende, og det omdannes til et 7-amino-cephalosporansyrederivat ved behandling med syre eller ved forlængelse af reaktionstiden. a-Ketoadipoyl-7-ACA-derivatet forsvinder imid-

DK 153554B

6 lertid ikke fuldstændigt fra reaktionsvæsken, og adskillelsen deraf er temmelig vanskelig. Når der derfor Ønskes fremstillet et 7-amino-cephalosporansyrederivat omsættes det i reaktionsvæsken tilstedeværende a-ketoadipoyl-7-ACA-derivat med hydrogenperoxid.

Inkorporeringen af hydrogenperoxid i reaktionssysternet kan ske på vilkårlig måde til tilsætning af hydrogenperoxid eller en vandig opløsning deraf eller en forbindelse, som er i stand til at danne hydrogenperoxid i reaktionssysternet, f.eks. natriumperborat.

Den anvendte mængde hydrogenperoxid varierer noget afhængigt af de andre betingelser såsom reaktionsblandingens pH-værdi, reaktionstemperaturen samt arten og koncentrationen af den som udgangsmateriale anvendte cephalosporinforbindelse, men fortrinsvis anvendes 1-30 mol pr. mol cephalosporinforbindelse. Udgangscephalosporinfor-bindelsen og slutproduktet 7-aminocephalosporansyrederivatet oxideres let under spaltning af cephemringene. Det er derfor ikke ønskeligt at anvende en unødvendig stor mængde hydrogenperoxid. Reaktionen til dannelse af 7-aminocephalosporansyrederivatet ved omsætning af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet med hydrogenperoxid forløber bedst ved en pH-værdi i området 2,0-6,0, fortrinsvis 3,0-5,5. Det er ret fordelagtigt, at den optimale pH-værdi ved reaktionen til dannelse af 7-ami-nocephalosporansyrederivatet ud fra a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet er praktisk taget identisk med den optimale pH-værdi ved reaktionen til dannelse af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet ud fra cephalosporinforbin-delsen. Det er endvidere fordelagtigt, at metalsaltet eller den organiske base, der eventuelt anvendes ved reaktionen til dannelse af 7-aminocephalosporansyrederivatet ud fra cephalosporinforbindelsen, ikke har nogen skadelig virkning på reaktionen til dannelse af 7-amino--cephalosporansyrederivatet ved omsætning af a-ketoadipoyl-7-ACA-deri-vatet med hydrogenperoxid. Reaktionshastigheden ved omsætningen af a-ketoadipoyl-7-ACA-derivatet og hydrogenperoxid bliver mindre ved en alkalisk pH-værdi, og hydrogenperoxidet bliver mindre opløseligt i reaktionssystemet og frigøres. På den anden side er a-ketoadipoyl--7-ACA-derivatet ustabilt ved en pH-værdi under 2,0, hvilket resulterer i, at der opnås en uønsket formindskelse af udbyttet af det ønskede 7-aminocephalosporansyrederivat.

Det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte hydrogenperoxid tilsættes efter dannelsen af a-ketoadipoyl-7-ACA-deriyatet 7

DK T53554B

ud fra.cephalosporinforbindelsen, men det kan dog også foreligge ved starten af reaktionen mellem cephalosporinforbindelsen og a--ketoderivatet, og det dannede a-ketoadipoyl-7-ACA-derivat omdannes til 7-aminocephalosporansyrederivatet. Da det som mellemprodukt dannede a-ketoadipoyl-7-ACA-derivat er kemisk ustabilt, er det ikke altid ønskeligt at omsætte hydrogenperoxid med dette derivat efter rensning.

Reaktionen afbrydes ved at sænke reaktionsvæskens pH-værdi til mindre end 2,0. Når der anvendes hydrogenperoxid, reagerer restindholdet af hydrogenperoxid med 7-aminocephalosporansyrederivatet i reaktionsvæsken, hvorved der opstår sidereaktioner. Det foretrækkes derfor, at eventuelt resterende hydrogenperoxid fjernes forinden ved reduktion. Imidlertid bevirker tilsætning af et gængst reduktionsmiddel reduktionsreaktioner med udgangscephalosporinforbindelsen og slutproduktet 7-aminocephalosporansyrederivatet, hvilket bevirker en kemisk ændring i cephemkernen deri. Det er derfor nødvendigt at anvende thiosvovlsyre eller et salt deraf.

I overensstemmelse med den mest foretrukne udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen omsættes cephalosporinforbindelsen (I) med et α-ketoderivat i nærværelse af hydrogenperoxid, hvorpå der isoleres i nærværelse af thiosvovlsyre eller et salt deraf, hvorved det ønskede 7-aminocephalosporansyrederivat (III) kan fås selektivt og i yderst højt udbytte. Den mest fordelagtige udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er en fremgangsmåde, ved hvilken en vandig opløsning indeholdende cephalosporinforbindelsen omsættes med et α-ketoderivat i nærværelse af hydrogenperoxid, hvorefter det omsættes med thiosvovlsyre eller et salt deraf til dannelse af 7-aminocephalosporansyreder ivatet. Ved denne udførelsesform kan 7-aminocepha-losporansyrederivatet fås selektivt ved at opløse hydrogenperoxid i en vandig opløsning indeholdende cephalosporinforbindelsen, hvorefter α-ketoderivatet sættes til opløsningen, og den fremkomne blanding omsættes i et fastlagt tidsrum, hvorefter der sættes thiosvovlsyre eller et salt deraf til reaktionsvæsken.

Det karakteristiske for denne udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen ligger i, at cephalosporinforbindelsen omsættes med et α-ketoderivat i nærværelse af hydrogenperoxid, hvorpå der omsættes med thiosvovlsyre eller et salt deraf, hvorved 7-aminocephalo-sporansyrederivatet fås selektivt uden dannelse af biproduktet.

DK 153554B

8

Ved denne udførelsesform varierer mængden af tilsat thiosvovl-syre eller et salt deraf noget afhængigt af de andre reaktionsbetingelser, f.eks. den tilsatte mængde hydrogenperoxid, brintionkoncentrationen, reaktionstemperaturen samt arten og koncentrationen af ce-phalosporinforbindelsen, der anvendes som udgangsmateriale. Sædvanligvis anvendes imidlertid højst en med mængden af det anvendte ækvimolær mængde.

7-Aminocephalosporansyrederivatet fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan renses på gængs måde, f.eks. ved ekstraktion fra reaktionsopløsningsmidlet under anvendelse af et organisk opløsningsmiddel, f.eks. ethylacetat, butylacetat eller n-butanol.

Et andet karakteristisk træk ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen består i, at reaktionen kan gennemføres i en vandig opløsning.

7-Aminocephalosporansyrederivatet kan således fremstilles direkte ud fra f.eks. en dyrkningsvæske for cephalosporinforbindelsen uden isolering og rensning af cephalosporinforbindelsen. Dette er særdeles fordelagtigt ved den praktiske udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede 7-amino-cephalosporansyrederivater kan ved anvendelse af f.eks. iminoethermeto-den overføres i f.eks. 3-substituerede methyl-7β-aminocephalosporan-syrer, der anvendes som udgangsmaterialer ved fremstillingen af lægemidler.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere i de følgende eksempler.

Eksempel 1 4 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed i på 74,2% og 3,3 g kobberacetat opløses i 120 ml vand. På dette trin er pH-værdien i reaktionsvæsken 3,9. Til denne blanding sættes dråbevis 120 ml af en vandig opløsning indeholdende 6,24 g glyoxylsyre og 5,5 ml pyridin i løbet af 1 time under omrøring ved stuetemperatur. Efter endt reaktion er pH-værdien i reaktionsvæsken 4,6. Derpå indstilles reaktionsvæsken på en pH-værdi på 3,0 ved tilsætning af 3 1 N svovlsyre, og der tilsættes dråbevis i løbet af 1 time 60 cm af en 15%'s vandig hydrogenperoxidopløsning. Reaktionsvæsken omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 1,5 ved 9

DK 153554B

tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der findes et råudbytte af 3-acet-oxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem—4-carboxylsyre på 92%.

Der konstateres intet indhold af 3-acetoxymethyl-73-(5-carboxy-5--oxopentanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Den fremkomne reaktionsvæske ekstraheres med 3 gange 500 ml ethylacetat, og ekstrakterne hældes sammen. De sammenblandede ethyl-acetatekstrakter koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på ca. 200 ml, hvorefter der tørres natten over med vandfri natriumsulfat. Væsken filtreres, og remanensen vaskes med en smule ethylacetat. Filtratet kombineres med vaskevæsken, og den fremkomne væske koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på 10 ml, hvorpå den dråbevis sættes til 200 ml petroleumsether under kraftig omrøring. Denne væske centrifugeres, og den ovenstående væske dekanteres. Derpå suspenderes bundfaldet i petroleumsether, og den fremkomne suspension centrifugeres atter. Efter dekantering af den ovenstående væske tørres bundfaldet hurtigt over aluminiumoxid i vakuum, og der fås 2,38 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73~(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4--carboxylsyre i en renhed på 96,9%.

Alternativt tilsættes der ved den ovennævnte reaktion 21,9 g natriumthiosulfat til fjernelse af resterende inden sænkningen af pH-værdien til 1,5 til fuldendelse af reaktionen. Efter yderligere 10 minutters omrøring, sænkes pH-værdien til 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen, efterfulgt af samme behandling som anført ovenfor til dannelse af 2,43 g 3-acetoxy-methyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre som lysegule krystaller i en renhed på 98,9%.

Eksempel 2 1,5 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 406 mg kobbersulfat opløses i 100 ml vand. Opløsningen har en pH-værdi på 3,9. Til denne væske sættes hver 40. minut 20 ml af 100 ml vandig opløsning indeholdende 2,3 g glyoxyl-syre og 1,5 ml triethylamin. 10 minutter efter hver tilsætning tilsættes 3 ml 20%'s vandig hydrogenperoxidopløsning, og der omsættes

DK 153554B I

10 * under omrøring i 30 minutter. Efter endt omsætning er reaktionsvæskens pH-værdi 3,5. Efter omrøring i yderligere 30 minutter indstilles reaktionsvæskens pH-værdi på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl--7β-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre på 87,8%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 2 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 0/86 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73.(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre i en renhed på 95,1%.

Alternativt tilsættes der ved den ovennævnte reaktion 6,29 g natriumthiosulfat til fjernelse af resterende inden pH-værdien sænkes til 1,5 til fuldendelse af reaktionen. Efter yderligere 10 minutters omrøring sænkes pH-værdien til 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen, efterfulgt af samme behandling som anført ovenfor til dannelse af 0,88 g 3-acetoxy-methyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre som lyse- · gule krystaller i en renhed på 97,1%. ;

Eksempel 3

En fermenteringsvæske fra dyrkningen af Cephalosporium acre-monium filtreres ved fjernelse af cellerne, hvorefter der foretages syrebehandling (pH-værdi 2,8) til sønderdeling af penicillin N, hvorefter der filtreres 1 gang, og remanensen vaskes. Filtratet kombineres med vaskevæsken, hvorved fås 4,6 liter væske indeholdende 3223y/ml cephalosporin C. Denne væske ledes gennem og adsorberes på en søjle af aktivt kul, vaskes med vand, hvorpå der elueres med 7 liter 3%'s n-butanol indeholdende 700 ml 0,3 N natriumhydroxid til udvinding ‘ af en ønsket fraktion. Denne fraktion indstilles på pH-værdien 6,0, hvorpå den koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C, hvorved fås 275 ml af en lysegul opløsning indeholdende 40 mg/ml cephalosporin C. 100 ml af denne opløsning indstilles på pH-værdien 6,5 ved tilsætning af natriumhydroxid, hvorpå der tilsættes 2,1 g zinkacetat. Til den fremkomne væske sættes dråbevis i løbet af 1,5 timer under omrøring ved stuetemperatur 500 ml af en vandig opløsning indeholdende 4,6 g glyoxylsyre og 9,6 ml γ-picolin. Under reaktionen tilsættes natriumhydroxid, således at reaktionsvæsken har

IK 153554B

11 en pH-værdi på 5,0. I dette tilfælde udtages en del af reaktionsvæsken og underkastes papirchromatografi, og der konstateres råudbytter af henholdsvis 3-acetoxymethyl-73-(5-carboxy-5-oxopentanamido)-3-cephem--4-carboxylsyre og 3-acetoxymethyl-7|3- (4-carboxybutanamido)-3-cephem--4-carboxylsyre på 61 og 18%.

Reaktionsvæsken omrøres i yderligere 30 minutter, hvorefter pH-værdien sænkens til 3,0 ved tilsætning af svovlsyre. Derpå tilsættes dråbevis 60 ml 35%'s vandig hydrogenperoxidopløsning. Efter omrøring i yderligere 15 minutter indstilles væskens pH-værdi på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre på 76,1%. Der konstateres intet indhold af 3-acetoxymethyl-73-(5-carb-oxy-5-oxopentanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, og der fås 3,38 g lysegule krystaller af 3-acetoxy-methyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 78,8%.

Eksempel 4

En fermenteringsvæske fra dyrkning af Cephalosporium acre-monium filtreres til fjernelse af cellerne, hvorefter der foretages behandling med syre (pH-værdi 2,8) til spaltning af penicillin N indeholdt i væsken, hvorpå der atter filtreres, og remanensen vaskes. Filtratet og vaskevæskerne kombineres, og der fås 3 liter opløsning indeholdende 4762 γ/ml cephalosporin C. 200 ml af denne opløsning indstilles på en pH-værdi på 7,0 ved tilsætning af natriumhydroxid, der tilsættes 350 mg cobaltsulfat og 194 mg piperazin, hvorefter der opvarmes til 37°C. Til denne væske sættes dråbevis i løbet af 1 time under omrøring 3,4 g phenylglyoxal. I dette tilfælde tilsættes natriumhydroxid-svovlsyre, således at reaktionsvæskens pH-værdi er 5,0. Væsken omrøres yderligere ved 37°C i 30 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 3,0 ved tilsætning af svovlsyre. Til denne væske sættes dråbevis 43,9 ml mættet vandig natriumperboratopløsning. Efter omrøring i yderligere 10 minutter indstilles væskens pH-værdi på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen.

På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et rå-

DK 153554B

12 udbytte af 3-acetoxymethyl-70-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carb-oxylsyre på 70,1%.

Denne reaktionsvæske oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 790 mg gule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 72,2%.

Eksempel 5 1,25 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 791 mg nikkelsulfat opløses i 100 ml vand. Til denne væske sættes 2,16 g glyoxylsyre og 204 mg imidazol under omrøring ved 5°C. Reaktionsvæskens pH-værdi indstilles på 5,0 ved tilsætning af vandig natriumhydroxidopløsning. Efter omrøring af væsken i 2 timer tilsættes dråbevis 53,0 ml mættet vandig natriumperboratopløs-ning. Væsken omrøres i yderligere 30 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af saltsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-7&-(4-carboxybutanamido)-3-cephem--4-carboxylsyre på 81,4%.

Denne reaktionsvæske oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 822 mg lysegule krystaller af 3-acetoxymethy1-7β-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 80,3%.

Der gås frem som beskrevet ovenfor, idet der dog i stedet for nikkelsulfat anvendes nedenstående metalsalte. Arten og mængden af de anvendte metalsalte samt råudbyttet anføres nedenfor.

Metalsalt - ,, ..

Raudbytte

Art_Mængde (mg) (mg)

PeCl3*2H20 436 838 A1C13*6H20 725 838

CaCl2-2H20 442 811

FeS04'7H20 836 834

MnS04*H20 509 831

13 DK 153554 B

Eksempel 6 2,3 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% opløses i 300 ml 2 M phosphatpuffer (pH-værdi 4,6).

Til denne væske sættes gradvis og dråbevis i løbet af 30 minutter under omrøring ved 5°C 300 ml 2 M phosphatpuffer (pH-værdi 4,6) indeholdende 4,7 g natriumglyoxylat. Denne væske omrøres og omsættes i 2 timer, idet der kontinuert tilføres 33 ml 15%'s vandig hydrogen-peroxidopløsning, derpå omrøres i yderligere 15 minutter, hvorpå pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)--3-cephem-4-carboxylsyre på 76,4%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 1,65 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73- (4-carboxybutanamido) -3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 68,7%.

Eksempel 7 375 mg krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 237 mg nikkelsulfat opløses i 45 ml vand. Til denne væske sættes 620 mg pyrodruesyre og 61,2 mg imidazol under omrøring ved stuetemperatur. Reaktionsvæsken indstilles på en pH-værdi på 5,0 ved tilsætning af en vandig natriumhydroxidopløsning. Efter omrøring af væsken i 2 timer tilsættes dråbevis 15,9 ml mættet vandig kalium-perboratopløsning. Væsken omrøres i yderligere 30 minutter, hvorpå pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73_(4-carboxybutanamido)--3-cephem-4-carboxylsyre på 77,6%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 238 mg lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 79,6%.

Eksempel 8

Der gås frem analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 3 g krystallinsk natriumsalt af deacetylcephalosporin C med en renhed på 56,3% i stedet for det krystallinske natriumsalt af cephalosporin C. Der opnås et råudbytte af 3-hydfoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre i reaktionsvæsken på 90%. Ved oparbejdning fås 1,2 g lysegule krystaller af 3-hydroxymethyl-73“(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxyl- _______ ____Λ ___ _____1_ _ -I __ O r\ Ι-Λ

14 DK 153554B

Eksempel 9

Der gås frem analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 5 g krystallinsk natriumsalt af deacetoxycephalosporin C med en renhed på 83% i stedet for det krystallinske natriumsalt af cephalosporin C. Der konstateres et råudbytte af 3-methyl-7f5- (4-carboxybutanamido) -3-cephem-4-carboxylsyre i reaktionsvæsken på 95,2%. Efter oparbejdning fås 3,0 g lysegule krystaller af 3-methyl-73“(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxyl-syre med en renhed på 96,7%.

Eksempel 10

Der gås frem analogt med den i eksempel 1. beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 3 g krystallinsk N-[7-D-(5-amino-adipinamido)-3-cephem-3-ylmethyl]-pyridinium-4-carboxylsyre med en renhed på 83,9% i stedet for det krystallinske natriumsalt af cephalosporin C. Der konstateres et råudbytte af N-[7-(4-carboxybutanamido) -3-cphem-3-ylmethyl]-pyridinium-4-carboxylsyre på 82,0%. Efter oparbejdning fås 2,1 g lysegule krystaller af N-[7-(4-carboxybutanamido)- 3-cephem-3-ylmethyl]-pyridinium-4-carboxylsyre med en renhed på 86,0%.

Eksempel 11

Der gås frem analogt med den i eksempel 6 beskrevne fremgangsmåde, idet der dog anvendes 4,6 g glyoxylsyreamid i stedet for natriumglyoxylatet. Der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl--73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre i reaktionsvæsken på 75,9%. Efter oparbejdning fås 1,65 g lysegule krystaller af 3-acet-oxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cphem-4-carboxylsyre med en renhed på 67,9%.

Eksempel 12 1,3 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% opløses i 250 ml vand. I denne væske inkorporeres 441 mg kobberacetat, og væskens pH-værdi holdes på 5,0. Til denne væske sættes under omrøring ved stuetemperatur 506 mg glyoxylsyre. Efter omrøring i 2 timer indstilles væskens pH-værdi på 3,0 ved tilsætning af 1 N svovlsyre, hvorefter der tilsættes 1,9 ml 15%'s vandig hydrogen-peroxidopløsning. Væsken omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethy1-73“(4-carboxybutanamido)--3-cephem-4-carboxylsyre på 77,3%.

DK 153554B

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 892 mg lysegule' krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 68,8%.

Eksempel 13 1,9 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% opløses i 350 ml vand. Til denne væske sættes 2 ml pyri-din, og væskens pH-værdi holdes på 4,6. Til væsken sættes under omrøring ved stuetemperatur 736 mg glyoxylsyre. Efter omrøring i 2 timer indstilles væskens pH-værdi på 3,0 ved tilsætning af 1 N svovlsyre, hvorpå der tilsættes 2,5 ml 25%1 s vandig hydrogenperoxidopløsning. Væsken omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien indstil les på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73.(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxyl syre på 77,1%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 1,3 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 68,3%.

Eksempel 14

En fermenteringsvæske fra dyrkning af Cephalosporium acremo-nium filtreres til fjernelse af cellerne, hvorpå der tilsættes syre (pH-værdi 2,8) til spaltning af det i væsken indeholdte penicillin N, hvorpå der atter filtreres, og remanensen vaskes. Filtratet og vaskevæskerne kombineres, hvorved fås 3 liter af en opløsning indeholdende 4762 γ/ml cephalosporin C. 100 ml af denne opløsning indstilles på pH-værdien 7,0 ved tilsætning af natriumhydroxid, der tilsættes 175 n cobaltsulfat og 97 mg piperazin, hvorpå der opvarmes til 37°C. Til denne væske sættes dråbevis i løbet af 1 time under omrøring 1,9 g α-ketophenyleddikesyre, idet pH-værdien holdes på 5,0. Væsken omrøres i yderligere 30 minutter ved 37°C, hvorefter den indstilles på en pH-værdi på 3,0. Til denne væske sættes dråbevis 22 ml mættet vandig natriumperboratopløsning. Efter omrøring i yderligere 10 minutter indstilles væsken på en pH-værdi på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæskei og der analyseres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido) -3-cephem-4-carboxylsyre på 60,3%.

16 DK 153554B

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 355 mg gule krystaller af 3-acet-oxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 68,7%.

Eksempel 15 6,7 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 51,3% og 1,6 g kobberacetat opløses i 600 ml 2 M phosphatpuf-fer (pH-værdi 4,6). Til denne væske sættes gradvis og dråbevis i løbet af 30 minutter under omrøring ved 5°C 600 ml 2M phosphatpuffer (pH-værdi 4,6) indeholdende 8,4 g natrium-a-keto-n-butanoat. Væsken omrøres og omsættes i 30 minutter under gradvis tilsætning af 30 ml 35%'s vandig hydrogenperoxidopløsning, hvorefter der omrøres i yderligere 10 minutter, hvorpå pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73” -(4-carboxybutamido)-3-cephem-4-carboxylsyre på 63,2%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 1,92 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 66,3%.

Eksempel 16 4 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 3,3 g kobberacetat opløses i 120 ml vand. På dette trin har reaktionsvæsken en pH-værdi på 3,9. Til reaktionsvæsken sættes dråbevis i løbet af 1 time under omrøring ved stuetemperatur 120 ml vandig opløsning indeholdende 6,24 g glyoxylsyre og 5,5 ml pyridin. Efter endt reaktion har reaktionsvæsken en pH-værdi på 4,6. Derpå indstilles reaktionsvæskens pH-værdi på 3,0 ved tilsætning af 1 N svovlsyre, og der tilsættes dråbevis i løbet af 1 time 60 cm 15%'s vandig hydrogenperoxidopløsning. Væsken omrøres i 10 minutter under tilsætning af 21,9 g natriumthiosulfat, hvorefter der omrøres i yderligere 10 minutter, hvorpå pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl--73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre på 92%. Der konstateres intet indhold af 3-acetoxymethyl-73-(5-carboxy-5-oxopentanamido) --3-cephem-4-carboxylsyre.

DK 153554B

Reaktionsvæsken ekstraheres med 3 gange 500 ml ethylacetat, og ekstrakterne kombineres. De kombinerede ethylacetatekstrakter kon." centreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på ca. 200 ml, hvorefter der tørres natten over under anvendelse af det vandfri natriumsulfat. Væsken filtreres, og remanensen vaskes med en smule ethylacetat. Filtratet kombineres med vaskevæsken, og den fremkomne væske koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på 10 ml, hvorpå denne væske dråbevis sættes til 200 ml petroleumsether under kraftig omrøring. Væsken centrifugeres, og den ovenstående væske dekanteres. Derpå suspenderes bundfaldet i petroleumsether, og den fremkomne sus~ pension centrifugeres. Efter dekantering af den ovenstående væske tørres bundfaldet hurtigt over aluminiumoxid i vakuum, og der fås 2,43 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutan-amido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 98,9%.

Eksempel 17 1,5 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 406 mg kobbersulfat opløses i 100 ml vand. På dette trin har reaktionsvæsken en pH-værdi på 3,9. Til denne væske sættes hvert 30. minut 200 ml af 100 ml vandig opløsning indeholdende 2,3 g lyoxylsyre og 1,5 ml triethylamin under omrøring ved stuetempe- ' ratur. 10 minutter efter hver tilsætning tilsættes 3 ml 20%'s vandig hydrogenperoxidopløsning, og væsken omsættes under omrøring i 30 minutter. Reaktionsvæskens pH-værdi er 3,5 efter endt afslutning. Efter omrøring i yderligere 30 minutter sættes 6,29 g natriumthiosulfat til reaktionsvæsken, der omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-70-(4-carboxybutanamido)--3-cephem-4-carboxylsyre på 87,7%.

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 16 beskrevne fremgangsmåde, hvorved fås 0,88 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 97,1%. < · - .........-

Eksempel 18 4 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 3,3 g kobberacetat opløses i 120 ml vand. På dette trin er reaktionsvæskens pH-værdi 3,9. Til reaktionsvæsken sættes dråbevis i løbet af 1 time under omrøring ved stuetemperatur 120 ml vandig opløsning indeholdende 6,24 g glyoxylsyre og 5,5 ml pyridin.

18

DK 153554B

Reaktionsvæskens pH-værdi er 4,6 efter afslutning af reaktionen.

Derpå indstilles reaktionsvæsken på en pH-værdi på 3,0 véd tilsætning af 1 N svovlsyre, og til væsken sættes dråbevis i løbet af 1 time 3 60 cm 15%'s vandig hydrogenperoxidopløsning. Reaktionsvæsken omrøres i 10 minutter under tilsætning af 21,9 g natriumthiosulfat, penta-hydrat, omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien indstilles på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4--carboxylsyre på 92%. Der konstateres intet indhold af 3-acetoxyme-thyl-7£-(5-carboxy-5-oxopentanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Reaktionsvæsken ekstraheres 3 gange med ethylacetat, og ekstrakterne kombineres. De kombinerede ethylacetatekstrakter koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på ca. 200 ml, hvorefter der tørres natten over under anvendelse af vandfri natriumsulfat. Væsken filtreres, og remanensen vaskes med en smule ethylacetat. Filtratet kombineres med vaskevæsken, og den fremkomne væske koncentreres under formindsket tryk ved en temperatur under 40°C til et rumfang på 10 ml, hvorefter denne væske dråbevis sættes til 200 ml petroleumsether under kraftig omrøring. Den fremkomne væske centrifugeres, og den ovenstående væske dekanteres.

Derpå suspenderes bundfaldet i petroleumsether, og den fremkomne suspension centrifugeres. Efter dekantering af den ovenstående væske tørres bundfaldet hurtigt over aluminiumoxid i vakuum, og der fås 2,43 g lysegule krystaller af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)--3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 98,9%.

Eksempel 19 1,5 g krystallinsk natriumsalt af cephalosporin C med en renhed på 74,2% og 406 mg kobbersulfat opløses i 100 ml vand. På dette trin er reaktionsvæskens pH-værdi 3,9. Til denne væske sættes hvert 30. minut under omrøring ved stuetemperatur 20 ml af 100 ml vandig opløsning indeholdende 2,3 g glyoxylsyre og 1,5 ml triethylamin.

10 minutter efter hver tilsætning tilsættes 3 ml 20%'s vandig hydrogenperoxidopløsning, og væsken omsættes under omrøring i 30 minutter. Reaktionsblandingens pH-værdi er 3,5 efter endt reaktion. Efter yderligere omrøring i 30 minutter sættes 6,29 g natriumthiosulfatpenta-hydrat til reaktionsvæsken, der omrøres i yderligere 10 minutter, hvorefter pH-værdien sættes på 1,5 ved tilsætning af svovlsyre til afslutning af reaktionen. På dette trin analyseres reaktionsvæsken, og der konstateres et råudbytte af 3-acetoxymethyl-73-(4-carboxybutanamido) -3-cephem-4-carboxylsyre på 87.8%.

19 , DK 153554B

Reaktionsvæsken oparbejdes analogt med den i eksempel 18 beskrevne fremgangsmåde, og der fås 0,88 g lysegule krystaller af 3-acet-oxymethyl-73-(4-carboxybutanamido)-3-cephem-4-carboxylsyre med en renhed på 97,1%.

Claims (12)

1. I (HD <y COOM hvor X betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy eller pyridinio, og M betyder hydrogen eller, når X betyder pyridinio, en negativ ladning, idet der gås ud fra cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen "ooc-ch- (ch2) 3-conh. ,.p ./X ”3+ ch2x (i) COOM hvor X og M har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf, kendetegnet ved, at forbindelsen (I) eller dens salt omsættes med et α-ketoderivat, der er valgt blandt glyoxylsyre, pyro-druesyre, phenylglyoxal, α-ketophenyleddikesyre, glyoxylsyreamid, a-keto-n-butansyre, natrium-a-keto-n-butanoat og natriumglyoxylat, hvorefter der tilsættes hydrogenperoxid eller et hydrogenperoxid--dannende stof til omdannelse af det fremkomne mellemprodukt med formlen HOOC-C-(CH2) 3-conh—I-/ N (IV) o 1_N Jl Vs Ύ ®2x COOM hvor X og M har den ovenfor angivne betydning, til den ønskede forbindelse med formlen (III). DK 153554B

1. Fremgangsmåde til fremstilling af 7-aminocephalosporan-syrederivater med formlen HOOC- (CH-) --CONH*--/S\.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at reaktionsblandingen yderligere omsættes med thiosvovl-syre eller et salt deraf til sønderdeling af uomsat hydrogenper-oxid.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at α-ketoderivatet anvendes i en mængde på 1-50 mol pr. mol cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf.

4. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-3, ken detegnet ved, at omsætningen af cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I), eller et salt deraf med a-ketode-rivatet gennemføres ved en pH-værdi på 3,0-8,0. *

5. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-4, kendetegnet ved, at omsætningen af cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf med a-ketode-rivatet gennemføres i nærværelse af en divalent eller trivalent metalion, der er valgt blandt kobber-, mangan-, calcium-’, aluminium-, jern-, nikkel-, cobalt- og zinkioner.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den anvendte mængde metalion er 0,1-20 mol pr. mol cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf.

7. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-6, k e n-detegnet ved, at omsætningen af cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf med a-ketode-rivatet gennemføres i nærværelse af en organisk base, der er valgt blandt tertiære cycliske aminer, sekundære cycliske aminer og ikke-cycliske aminer.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved, at den organiske base er valgt blandt pyridin, picoliner, imidazol, piperazin og triethylamin. DK 153554B

9. Fremgangsmåde ifølge krav 7 eller 8, kendetegnet ved, at den anvendte mængde organiske base er 1-30 mol pr. mol cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf.

10. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-9, kendetegnet ved, at omsætningen af cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf med a-ketode-rivatet gennemføres ved en temperatur på 0-50°C.

11. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-9, kendetegnet ved, at omsætningen af cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller et salt deraf med a-ketode-rivatet gennemføres i et tidsrum på fra 5 minutter til 24 timer.

12. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1-11, kendetegnet ved, at den anvendte mængde hydrogenperoxid er 1-30 mol pr. mol cephalosporin C eller et derivat deraf med formlen (I) eller salt deraf.