DK146539B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7alfa-methoxycephalosporin-derivater - Google Patents

Description

i 146539

Opfindelsen angår en analogi fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 7a-methoxycephalosporin-derivater med den i krav l's indledning angivne almene formel (II') eller farmaceutisk acceptable estere deraf.

Beslægtede 7a-methoxycephalosporiner med samme virkningsretning er kendt fra dansk patentansøgning nr. 2918/71.

Den bedste af disse forbindelser er den, der nu forhandles kommercielt under navnet cefoxitin, og som har en formel 2 svarende til den i krav 1 angivne formel (II'), hvori R er carbamoyloxymethyl, men hvor gruppen R^-S- er erstattet med en 2-thienylgruppe.

Det ses af den efterfølgende tabel, at de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser har væsentligt bedre anti-bakteriel aktivitet, især over for Gram-negative bakterier, såsom E. coli, end cefoxitin. Selv om der er et eller to tilfælde, hvor den minimale inhiberende koncentration af forbindelser, fremstillet ifølge opfindelsen, over for visse bakterier er den samme eller lidt højere end af cefoxitin, er de minimale inhiberende koncentrationer af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser over for E. coli i det hele taget væsentligt lavere end den minimale inhiberende koncentration af cefoxitin over for den samme bakterie. I betragtning af den væsentlige rolle, som spilles af E. coli ved forskellige sygdomme, og af behovet for at finde nye antibiotics, som er mere effektive over for denne organisme, repræsenterer de her omhandlede forbindelser et væsentligt fremskridt i forhold til dem, der er angivet i ansøgning nr. 2918/71.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

r 2 146539 at den ikke ødelægger cephemringen under eller efter kondensationsreaktionen, og forudsat at den let kan afspaltes fra cephemringen. Egnede estere inkluderer for eksempel alkylsilylestere, såsom trimethylsilylestere, benzylestere, p-methoxybenzylestere, benzhydrylestere, phenacylestere, p-bromphenacylestere og 2,2,2-trichlorethylestere. Når er en esterificeret carboxylgruppe, omfatter fremgangsmåden ifølge opfindelsen fortrinsvis det yderligere trin at deesterificere reaktionsproduktet.

X er et halogenatom, fortrinsvis chlor eller brom.

Thiolforbindelsen med formlen (I) kan anvendes som sådan, eller den kan fortrinsvis anvendes i form af et metalsalt, f.eks. et alkalimetal- eller jordalkalimetalsalt, såsom natrium-, kalium-, lithium-, calcium- eller bariumsaltet.

Af disse er natrium-, kalium og lithiumsaltene de foretrukne .

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan let udføres ved simpelthen at bringe 7a-methoxycephalosporin-udgangsforbin-delsen med formlen (III1) i kontakt med thiolforbindelsen med formlen (I) eller med et metalsalt deraf. Ethvert opløsningsmiddel, som ikke deltager i reaktionen, kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, herunder vand og mange organiske opløsningsmidler. Eksempler på egnede organiske opløsningsmidler inkluderer dialkylketoner, f. eks. acetone eller methylethylketon, halogenerede alkaner, f.eks. chloroform, methylenchlorid eller dichlorethan, lavere alkanoyler, f.eks. methanol eller ethanol, og di-methylformamid. Blandinger af to eller flere opløsningsmidler kan også anvendes. Hvis 7a-methoxycephalosporin-derivatet med formlen (III1) har en carboxylgruppe i instilling, foretrækkes det at anvende en blanding af vand og et organisk opløsningsmiddel som reaktionsmedium.

3 146539

Thiolen (I) eller metalsaltet deraf skal normalt anvendes i en ækvimolær mængde eller i et svagt overskud i forhold til 7a-methoxycephalosporin-derivatet. Således kan molforholdet mellem thiolen (I) og 7a-methoxycephalosporin-ud-gangsmaterialet for eksempel være fra 1:1 til 1,1:1.

Selv om reaktionen vil forløbe ved en tilnærmelsesvis neutral pH-værdi, forløber den mere glat under svagt alkaliske betingelser. Derfor foretrækkes det, hvis thiolen (I) selv anvendes, at sætte et alkali til reaktionsblandingen, for at reaktionen kan gennemføres under alkaliske betingelser.

Egnede alkalier, som kan anvendes, inkluderer natriumhydroxid, kaliumhydroxid, natriumcarbonat, kaliumcarbonat, na-triumhydrogencarbonat og kaliumhydrogencarbonat.

Reaktionstemperaturen er ikke kritisk for fremgangsmåden ifølge opfindelsen, og reaktionen udføres derfor normalt ved omkring stuetemperatur, selv om reaktionen vil forløbe ved temperaturer højere eller lavere end stuetemperatur.

Den tid, som kræves for reaktionens gennemførelse vil variere afhængigt af reaktionstemperaturen, reagenserne og andre betingelser, men reaktionen vil normalt være fuldført inden for fra 20 til 30 timer. Hvis X i 7a-methoxy-cephalosporin-udgangsmaterialet er et chloratom, vil reaktionen normalt tage relativt lang tid, dvs. fra 10 til 30 timer.

Når reaktionen er fuldført, kan det ønskede produkt med formlen (II1), udvindes fra reaktionsblandingen ved konventionelle metoder. Hvis der for eksempel er en carboxyl-gruppe til stede i 4-stillingen af forbindelsen, gøres reaktionsblandingen først sur, og hvis der er anvendt et andet opløsningsmiddel end vand til reaktionen, fjernes opløsningsmidlet ved destillation, hvorefter reaktionsproduktet ekstraheres med et egnet opløsningsmiddel (f.eks. ethylacetat), og ekstrakten vaskes med vand og tørres. Op- 146539 4 løsningsmidlet fjernes derpå ved destillation til opnåelse af det ønskede produkt. Om nødvendigt kan dette yderligere renses ved konventionelle midler, f.eks. ved chromatografi.

Hvis den fremstillede forbindelse har en esterificeret car-boxylgruppe i 4-stilling, er reaktionsmediet, som angivet ovenfor, fortrinsvis en blanding af vand og et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel. Dette organiske opløsningsmiddel fjernes først fra reaktionsblandingen ved destillation, hvorefter remanensen ekstraheres med et med vand ublandbart opløsningsmiddel. Ekstrakten vaskes derpå med vand, og opløsningsmidlet fjernes ved destillation til opnåelse af den esterificerede forbindelse. Denne forbindelse kan yderligere renses ved konventionelle metoder, f. eks. chromatografi, men i almindelighed foretrækkes det direkte at underkaste den en deesterificering til opnåelse af den ønskede forbindelse. Deesterificeringen kan udføres ved enhver konventionel metode, afhængigt af esterens art.

Egnede deesterificeringsprocesser inkluderer alkalisk hydrolyse, sur hydrolyse og reduktion med hydrogen. Efter fuldførelse af deesterificeringen udvindes det ønskede produkt fra reaktionsblandingen på den ovenfor beskrevne måde.

Mange af 7a-methoxycephalosporin-derivatérne med formlen (II') har værdifuld antibakteriel aktivitet over for forskellige pathogene bakterier. Repræsentative eksempler på disse forbindelser og deres antibakterielle aktiviteter (udtrykt som minimale inhiberende koncentrationer) er anført i den følgende tabel. Til sammenligningsformål er også anført de minimale inhiberende koncentrationer over for de samme bakterier af tre kendte forbindelser, cefoxitin, 3-carbamoyloxymethyl-7a-methoxy-7|3-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre og cefalotinum.

5 146539

Som det vil ses af tabellen, er de mest foretrukne forbindelser fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, de, hvori er cyanmethyl, 1-cyanethyl og 2-hydroxyethy 1.

' . · 6 148539 *

Jj 4J

c u c u

m 03 03 ΙΛ m M

CM <3 ΙΛ ΙΛ OO CO pj * *-

. +1 - - - - - - · "T ^ M VO

BU O O —I --I O O E i! --1 iH 03 ^ m co co CO ™ cn o cn u “ •ri CO CM CvJ CM Ή 7*

tilA ~ r. * ~ ΙΛ CVJ

• CO ·* ΟνΟνΰνΟΙΛ · „ ·* CM ·» jJ CH i-H 4J ^ ΓΛ νβ O -—c O ^ u o u ? Q_ =» O. > co vo o ooooo co vo o o o r-i-d-O OOOOO H<f o o o

i—f CO M <t <t M <t M rHOOM <t M

® Λ f\ Λ ® 03 ®

o -Q

l)\0 (O m ΙΛ >-l ΙΛ ΙΛ ωνΟΉ ιΛ M

—I o ·> ·· «· *· “ ·. i—I O ~ M

^COO i—I ι-ι ΙΛ Ή —I CO ΙΛ \0

r-1 M

£ Of ·Η ·* \ T x in ^ σ t-1 o 03 cu

3 / \ O C C

\ cn 'V- cj x x —\ / ø CO ιΛ i—ί ί—(I—I ιΛ 03 Ή LfS ιΛ 7 I—(CO ** ·%Λ·ν»·Λ H CO ** * ·.

C ΓΛ L_ Μ O ι-l ΙΆ ΙΆ ΙΛ <-l U-ΜΙΛ MM

O X <-< -f

•J CJ

JJ O.--- X -C

to V . tn cn u x ' 4-> X O —' c o oo “c 03 u w ^ O I _ CM o CO I—ΙιΛιΑΙΛιΑ OS ι—I ιΛ ιΛ

O X —i C3 - ~ - - - - --:0 - CN CM

_|_i£CJ i—I VO O ΙΛ ι—I ι—I ι—I Ή i—ΙνΟΓΛ LU I O ° cd cu cn ϋ cj < x> i _ μ— c I—I . n CO ιΛιΛιΛΙΑιΛ ·Γ-3·-Ι ιΛΜ 03 QO LdX ·> - --- - Ld X ·" Μ »· ¢4 ι—ΙΟ *—! i—li—I i—I i—I >—i ΙΛ vo 03 z z:

X

•ri x C oo co in —i co oo irv ·—i —i •η cooo·' - - - - coo;·'·.».

o O Ο—ΙΙΛΟΟ 3 ι-l .ΙΛ o i—I 03 H3 CO Li C-1 £3 =>

•H - CO CL CO X

c Os M <fOOOOM-d· OS 00 CO rH

· Q * n »u ·* r> *\ ·□·*♦»«* S cnMO ooooo tnMOoo Μ ΙΛ

1Λ XX X=X. ΙΛ III

Z“Z X Z CJ I \ X HH*i

I *Z -CJ O O I Z-CJ >1 >| I

x_*/· = = cj c_> z—j x c ε Μ ~l O O I +3 03 03 oj o: tn mm cn cuxx COM XXM £0.0.

—IX CJ CJ X >s I 03

03 CJ I I CJ X -3, O

O I I O Is I 03 c - 03 i—I I ΙΛ Cn £ •π cn >. >. i >, 3 JO I r-1 C O X O CO c U M — 03 'i-l S O X ι-l —i

o 3T X X 0] X*H >. 4J

Ll. i CJ I I i C'HX-PEXo Μ I ΙΛ Μ Μ Μ Z-1 —I x Li 03 CO O i—[ X X X X X X \ X O CO EX X co CJ CJ-CJ CJ CJ cj cn c* l. o i 03 l, u_ i—I CJ CJ O CJ CJ / O 03 1 3 CJ CO ø

oo X Z XXX zx/ tx. CJ ΙΛ r~ CO O CJ

7 UG539

Forbindelserne udviser således udmærket aktivitet over for både Gram-positive og Gram-negative bakterier, især over for Gram-negative bakterier.

Forbindelserne med formlen (III'), der anvendes som udgangsmaterialer ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er også hidtil ukendte forbindelser, men disse kan let fremstilles ved kendte metoder. Selv om de i sig selv har en antibak-teriel aktivitet, er de mere værdifulde som udgangsmaterialer for fremstillingen af forbindelserne med formlen (II1), som har meget højere antibakterielle aktiviteter.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved de følgende eksempler. Fremstillingen af visse hidtil ukendte udgangsmaterialer er også belyst i de følgende Præparationer 1-4.

EKSEMPEL 1 3-carbamoyloxyn)ethyl-7ot-methoxy-7[3-(l,3, 4-thiadiazol_-2-yl-thioacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre

En opløsning af 117 mg 7p-bromacetamido-3-carbamoyloxyme-thyl-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre i 0,2 ml IN natriumhydroxidopløsning sattes til en opløsning af 23,6 mg 2-mercapto-1,3,4-thiadiazol i 0,2 ml IN natriumhydroxidopløsning, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 timer. pH-værdien blev derpå indstillet til 2,5 ved tilsætning af 2N phosphorsyreopløsning. Opløsningen blev derpå ekstraheret fem gange, hver gang med 15 ml ethylacetat, og de kombinerede ethylacetatekstrakter blev tørret over natriumsulfat, og opløsningsmidlet blev derefter afdestil-leret, hvorved der blev opnået 69 mg af et amorft råt produkt. Dette blev delt på en silicagelplade under anvendelse af en blanding af methanol og chloroform i volumenforholdet 50:50 og derpå ekstraheret med methanol. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra ekstrakten, hvorved der blev 8 1465*39 opnået 34 mg 3-carbamoyloxymethyl-7a-methoxy-78-(l,3,4-thiadiazol-2-yl-thioacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre i form af et pulver.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D2O), <SppmJ 9,30 (singlet, H i thiazol) 5,03 (singlet H ved 6-stilling) 4,16 (singlet, S-CH^-CO-) 3,46 (singlet, OCH^ ved 7-stilling).

Ultraviolet absorptionsspektrum (phosphorsyrepuffer, pH 6,86), X nm: 263.

max

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr), Vcm”"^: 1760.

Tyndtlagschromatografi (silicagel): (a) Udviklingsmiddel (n-butanol/eddikesyre/vand, volumenforhold 5:4:1): R^ værdi = 0,49.

(b) Udviklingsmiddel (methanol/chloroform, volumenforhold 1:1):

Ry værdi = 0,29.

Mår denne procedure blev gentaget, undtagen at 7|3-bromacet-amido-3“Carbamoyloxymethyl-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxyl-syren blev erstattet med det tilsvarende 7p-chloracetamido-derivat, blev der opnået lignende resultater.

Eksempler på forbindelser, fremstillet på samme måde som i de foregående eksempler, og deres egenskaber er anført nedenfor.

Undtagen hvor andet er anført, blev de fysiske egenskaber målt som følger: 9 146539

Magnetisk kerneresonansspektrum (i CD^CN + D20), It ppm.

Ultraviolet absorptionsspektrum (i phosphorsyrepuffer med pH 6,86), \ nm. r ’ 4. max

Infrarødt absorptionsspektrum (i KBr),Vcm-*.

Tyndtlagschromatografi (TLC) på silicagel: (a) Rp værdi opnået ved anvendelse af en blanding af n-butanol/eddikesyre/vand i volumen-forholdet 5:4:1.

(b) Rj. værdi opnået ved anvendelse af en blanding af methanol/chloroform i volumenforholdet 1:1.

3-carbamoyloxymethy1 — 7 β — cyanmethylthioacetamido-7a-methoxy- 3-cephero-4-carboxylsyre NMR-spektrum (DMSO-d^), <fppm: 5,06 (singlet, H ved 6-stilling) 3,58 (singlet, NC-CH2SCH2) UV-spektrum, I nm: 246, 265.

v 4. max IR-spektrum, : 1720, 1775.

EKSEMPEL 2 3-acetoxymethyl-7a-methoxy-7B-(l,3,4-thiadiazol-2-yl-thio acetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre 33 mg 2-mercapto-l,3,4-thiadiazol blev opløst i 0,24 ml IN vandig natriumhydroxidopløsning, og til den resulterende opløsning sattes en opløsning af 0,27 millimol (100 mg) 3-acetoxymethyl-7|3-chloracetatamido-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre i 0,5N natriumhydrogencarbonatopløsning. Bian- 146539 ίο dingen blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer, og pH-værdien derpå indstillet til 2,3 ved tilsætning af 0,1N phosphorsyreopløsning. Blandingen blev derpå ekstraheret tre gange med ethylacetat, og de kombinerede ethylacetat-ekstrakter blev tørret over natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra den tørrede ethylacetatopløs-ning, hvorved der blev opnået 113 mg af et amorft råt produkt. Dette blev delt på en silicagelplade under anvendelse af chloroform indeholdende 40% methanol som opløsningsmiddel og derpå ekstraheret med methanol. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra ekstrakten, hvorved der blev opnået 69 mg af det ønskede produkt.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D^O), δ ppm: 9,23 (singlet, H i thiadiazol) 5,00 (singlet, H ved 6-stilling) 4,73 (dublet, CHZ ved 3-stilling) 4,11 (singlet) S-CHz-C0-) 3,42 (singlet, OCHj ved 7-stilling) 1,98 (singlet, 0-CQ-CHj).

Ultraviolet absorptionsspektrum (phosphorsyrepuffer med pH 6,86),) nm: 263 (£ = 8789).

Γ λ. max

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr),V cm"1: 1769.

Tyndtlagschromatografi (silicagel):

Udviklingsmiddel (methanol/chloroform, volumenforhold 1:1): værdi: 0,45.

Eksempler på andre forbindelser, fremstillet på den samme måde som i det foregående eksempel, sammen med deres egenskaber (bestemt som beskrevet i eksempel 1) er anført nedenfor: 146539 11 3-acetoxymethyl-7|3-cyanmethylthioacetamido-7oi-m ethoxy-3-cephem-4-carboxylsyre NMR spektrum (CD^CN), Jppm: 5,06 (singlet, H ved 6-stilling) 4,76 - 5,06 (kvartet, -CH^OCO- ved 3-stilling) 3,60 (singlet, NCCH2S eller SCH2C0) 3,52 (singlet, OCH^ ved 7-stilling) 3,42 (singlet, NCCH2S eller SCH2C0) 3,32 - 3,55 (kvartet, H2 ved 2-stilling) 2,02 (singlet, OCOCH^).

UV spektrum,^ mgx nm: 247 (£ = 8000) 267 (& - 8400).

IR spektrum, Ycm”*: 1775.

EKSEMPEL 3 7a-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-7|B- (l,3,4-thiadiazol-2-yl-thioacetamido)-3-cephem-4-carboxyl- syre 33 mg 2-mercapto-l,3,4-thiadiazol blev opløst i 0,24 ml IN natriumhydroxidopløsning, og til den resulterende opløsning sattes en opløsning af 117 mg (0,27 millimol) 7j3-chlor-acetamido-7a-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiome-thyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 0,5N natriumhydrogencarbo-natopløsning. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer, og pH-værdien derpå indstillet til 2,5 ved tilsætning af 0,1N phosphorsyreopløsning. Blandingen blev ekstraheret tre gange med ethylacetat, og de kombinerede ekstrakter blev tørret over natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, hvorved der blev opnået 125 mg 146539 12 af et amorft produkt. Dette blev delt på en silicagelplade under anvendelse af en blanding af methanol og chloroform i volumenforholdet 50:50 og ekstraheret med methanol. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra ekstrakten, hvorved der blev opnået 70 mg af det ønskede produkt i form af et amorft pulver.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D^O), <?ppm: 9,28 (singlet, H ved 5-stilling i thiadiazol).

Ultraviolet absorptionsspektrum (phosphorsyrepuffer med pH 6,86) V nm: 266 (<? = 9270).

Amax

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr),Vcm-^: 1760.

Tyndtlagschromatografi (silicagel):

Udviklingsmiddel (chloroform/methanol, volumenforholdet 1:1)

Rf værdi = 0,38.

Eksempler på forbindelser, fremstillet på den samme måde som i det foregående eksempel, og deres egenskaber (målt som beskrevet i eksempel 1) er anført nedenfor: 7i3-cyanmethylthioacetamido-7a-methoxy-3-(l-inethyl-lH-tetra- zol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre NMR spektrum, <Sppm: 5,10 (singlet, H ved 6-stilling) 4,3 - 4,6 (kvartet, CH2-S ved 3-stilling) 3,98 (singlet, CH^ ved 1-stilling i tetrazolring) 3,70 (singlet, -NCCH2S eller -SCH2C0) 3,5 - 3,7 (kvartet, H2 ved 2-stilling) 3,60 (singlet, -NCCH2S eller -SCH2C0) 3,50 (singlet, OCH^ ved 7-stilling).

146539 13 UV spektrum,! nm: 274 (£ = 9000).

Γ Λ max EKSEMPEL 4 7|3-(2-hydroxyethylthioacetamido)-7a-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 434 mg 7β-οίι1θΓ8θβΐ3π^ο-7α-πιβ1Ι·ιοχγ-3-(1-ιηβ11ηγ1-1Η-1εΐΓ3-zol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre blev opløst i 20 ml vand indeholdende 84 mg natriumhydrogencarbonat, og der tilsattes 156 mg thioglycol. Den resulterende blanding blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer, medens pH-værdi-en holdtes ved 8,0 - 8,5 ved tilsætning af en. IN natriumhydroxidopløsning. pH-værdien blev derpå indstillet til 2,0 - 2,5 ved tilsætning af IN saltsyre, og blandingen blev frysetørret. Remanensen blev ekstraheret med methanol, og opløsningsmidlet afdestilleret. Den resulterende remanens blev derpå renset ved præparativ silicagel-chromatografi under anvendelse som udviklingsmiddel af en blanding af n-butanol/eddikesyre/vand (volumenforhold 4:1:1), hvorved der blev opnået 360 mg af det ønskede produkt som et pulver.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D^O), <?ppm: 5,20 (singlet, 6-stilling, H ) Ύ

sA

4,15 - 4,25 (kvartet, 3-stilling, v CH2-S-) 3,90 (singlet, 3-stilling, tetrazol JU ’ 0 ™3 3,44 (singlet, 7-stilling, S-CH^-C-) 3,68 og 2,74 (triplet, 7-stilling, HO-Ch^Ct^-S-).

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr),Vcm A 1740, 1675.

146539 14

Ultraviolet absorptionsspektrum (phosphorsyrepuffer, pH 6,86),^ mgx nm: 270 (£ = 9450).

PRÆPARATION 1 7|3-bromacetamido-3-carbamoyloxymethyl-7oi-methoxy-3-cephem- 4-carboxylsyre 1 et bægerglas fyldtes 808 mg bromacetylbromid.og 1,030 g bis-(trimethylsilyl)trifluoracetamid, og den resulterende blanding fik lov at stå ved stuetemperatur i 20 minutter.

Derpå sattes 5 ml methylenchlorid til blandingen efterfulgt af en opløsning af 879 mg dibenzhydryl-7|3-(D-5-t-butoxy- carbonylamino-5-carboxyvaleramido(-3-carbamoyloxymethyl-7ct-methoxy-3-cephem-4-carboxylat i 5 ml methylenchlorid. Bægerglasset blev vasket med 10 ml methylenchlorid, og vaskeopløsningerne blev kombineret med blandingen. Blandingen fik lov at stå ved stuetemperatur under fugtige betingelser i 2 timer. Derpå sattes 1 g natriumhydrogencarbonat til reaktionsblandingen under afkøling med is/natriumchlorid, og derefter sattes 20 ml af en 5¾ vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat til reaktionsblandingen, som blev omrørt i 30 minutter. Methylenchloridfasen blev kombineret med vaskeopløsningerne, opnået ved vaskning af vandfasen med 10 ml methylenchlorid, og blandingen blev vasket to gange med 20 ml af en 20¾ vandig opløsning af natriumchlo-rid. Den organiske fase blev tørret over natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdestilleret under formindsket tryk, hvorved der blev opnået 1,194 g råt dibenzhydryl-7|3-[(D-5-t-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleryl)-bromacetylamino]- 3-carbamoyloxymethyl-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxylat i form af et gult amorft produkt.

Dette gule produkt blev opløst i 1 ml anisol og 2 ml tri-fluoreddikesyre, og den resulterende opløsning fik lov at stå ved stuetemperatur i 5 minutter, hvorefter opløsnings- 146539 15 midlet blev afdestilleret under formindsket tryk; Den resulterende gule viskøse pasta blev opløst i 20 ml ethyl-acetat og 20 ml af en 0,2M phosphorsyrepuffer (pH 7,5), og opløsningen blev derpå overført til en skilletragt og omrystet godt. Efter faseseparation, blev den vandige fases pH-værdi indstillet til 2,5 med IN saltsyre, og den vandige fase blev ekstraheret fem gange med 20 ml ethylacetat. Ekstrakterne blev tørret over natriumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret under formindsket tryk.

Der blev opnået 300 mg af den ønskede forbindelse i form af et råt amorft produkt.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D^oij^ppm: 5,12 (singlet, H ved 6-stilling) 3,95 (singlet, BrCH2C0) 3,53 (singlet, OCH-j ved 7-stilling).

Ultraviolet absorptionsspektrum (CH^OH), ^max nm: 263.

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr),Vcm 1780, 1700.

Tyndtlagschromatografi (silicagel): (a) Udviklingsmiddel (n-butanol/eddikesyre/vand, volumenforhold 5:4:1):

Rp værdi = 0,53.

(b) Udviklingsmiddel (methanol/chloroform, volumenforhold 1:1): R^ værdi = 0,44.

PRÆPARATION 2 3- carbamoyloxymethyl-7ji-chloracetamido-7oi-methoxy-3-cephem- 4- carboxylsyre

Den i præparation 1 beskrevne procedure blev gentaget, undtagen at der anvendtes chloracetylchlorid i stedet for brom- 146539 16 acetylbromidet. Adskillelse og rensning fandt sted som beskrevet i præparation 1 til opnåelse af den ønskede forbindelse i form af et råt amorft produkt.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN + D^O) , <$ ppm' 5,1 (singlet, H ved 6-stilling) 3,48 (singlet, OCH^ ved 7-stilling) 4,11 (singlet, C1CH2C0).

Ultraviolet absorptionsspektrum (phosphorsyrepuffer, pH 6,86),^ max nm: 264.

Infrarødt absorptionsspektrum (KBr),Vcm-^: 1780, 1700.

Tyndtlagschromatografi (silicagel):

Udviklingsmiddel (metha'nol/chloroform, volumenforhold 1:1): R^. værdi = 0,35).

PRÆPARATION 3 3-acetoxymethyl-7|j-chIoracetamido-7a-methoxy-3-cephem-4- carboxylsyre 438,5 mg benzhydryl-3-acetoxymethyl-7P-chloracetamido-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxyIat blev opløst i 0,4 ml anisol, og der sattes 0,8 ml trifluoreddikesyre til den resulterende opløsning. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 5 minutter. Reaktionsblandingen blev derpå straks inddampet til tørhed, og remanensen blev vasket med n-hexan og opløst i 5 ml 0,25N phosphorsyrepuffer (pH 7,5). Den resulterende opløsning blev neutraliseret med en 5?ί vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og vasket med ethylace-tat. Den vandige fases pH-værdi blev indstillet til 2,0 med 60/0 phosphorsyre, og det olieagtige stof, som udfælde-des, blev ekstraheret med ethylacetat. Ekstrakten blev 146539 17 vasket med vand og tørret over vandfrit natriumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret til opnåelse af 276 mg af den ønskede forbindelse i form af et amorft pulver.

Magnetisk kerneresonansspektrum (CD^CN'+ D^O), <fpppm: 5.08 (singlet, H ved 6-stilling) 4.08 (singlet, C1CH2C0) 3,55 (singlet, OCH^ ved 7-stilling).

Tyndtlagschromatografi (silicagel):

Udviklingsmiddel (chloroform/methanol, volumenforhold 9:1):

Rværdi = 0,41).

PRÆPARATION 4 7|3-chloracetamido-7ffl-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl- (thioniethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 27,6 g dinatrium-7p-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carba-moyloxymethyl-7a-methoxy-3-cephem-4-carboxylat blev opløst i 1 090 ml af en 5?ό vandig opløsning af dikaliumphosphat, og der sattes 715 ml acetone til den resulterende opløsning.

Derpå sattes 8,1 g 4-dimethylaminopyridin til opløsningen, hvis pH-værdi blev indstillet til 9,5 ved tilsætning af 2,5N vandig natriumhydroxidopløsning, hvorefter der tilsattes 34,5 ml t-butoxycarbonylazid, og blandingen blev om-rørt ved stuetemperatur i 4 timer, medens pH-værdien holdtes ved 9,0 - 9,5. Reaktionsblandingen fik lov at stå ved 4 °C natten over, hvorefter der tilsattes 1 000 ml ethyl-acetat, og blandingen blev omrystet godt. Den vandige fase blev opsamlet, og endnu 1 000 ml ethylacetat sattes dertil, hvorefter den vandige fases pH-værdi blev indstillet til 2,5 ved tilsætning af koncentreret saltsyre, medens temperaturen holdtes ved 0-2 °C. Den organiske fase blev skilt 146539 18 fra, og den vandige fase blev yderligere ekstraheret to gange med 1 200 ml ethylacetat. De organiske faser blev kombineret og vasket med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, indtil vaskevandets pH-værdi nåede 4-5, hvorefter de blev tørret med vandfrit natriumsulfat. Ved afdestillation af opløsningsmidlet fra opløsningen blev der opnået 22,1 g 7p-(D-5-t-butoxycarbonylamido-5-carboxy-valeramido)-3-carbamoyloxymethyl-7ffi-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre.

Denne forbindelse sattes til en phosphorsyrepuffer med pH 7,0 indeholdende 10 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol, og blandingen blev omrørt ved 95 °C i 30 minutter, hvorefter pH-værdien blev indstillet til 2,5 ved tilsætning af saltsyre under isafkøling. Reaktionsblandingen blev derpå ekstraheret med ethylacetat, og ekstrakterne blev vasket med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, indtil vaskevandets pH-værdi nåede 4-5, hvorefter ekstrakterne blev tørret over vandfrit natriumsulfat. En opløsning af 20 g diphenyldiazomethan i ether sattes til de tørrede ekstrakter, og blandingen blev omrørt i 2 timer, hvorefter den blev vasket først med en 20?ά vandig opløsning af natriumchlorid og derpå med en 5?ό vandig opløsning af natriumhy-drogencarbonat. Den vaskede blanding blev tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlerne afdestilleret. Remanensen blev opløst i chloroform, absorberet på en søjle pakket med silicagel og elueret med chloroform indeholdende 1 volumenprocent methanol. Afdestillation af opløsningsmidlet fra eluatet gav dibenzhydryl-7p-(D-5-t-butoxy-carbonylamino-5-carboxyvaleramido)-7oi-methoxy-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat.

5 millimol af denne forbindelse blev opløst i 50 ml chloroform, og opløsningen sattes til en blanding af 2,26 g chlor-acetatchlorid og 2,26 g bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid, som i forvejen havde fået lov at stå ved stuetemperatur i 146539 19 30 minutter, og den resulterende blanding fik lov at stå ved 40 °C i 100 timer. Reaktionsblandingen blev derpå hældt ud i en 5% vandig opløsning af natriumhydrogencarbo-nat, og blandingen blev omrørt i 30 minutter. Den organiske fase blev opsamlet og vasket med en 20¾ vandig opløsning af natriumchlorid og derpå tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra den vaskede opløsning, og remanensen blev opløst i 5 ml anisol og 10 ml trifluoréddikesyre. Denne opløsning blev rystet ved stuetemperatur i 3 minutter og derpå inddampet til tørhed under formindsket tryk. Remanensen blev opløst i 1M phosphorsyrepuffer (pH 7,5) og ekstraheret med ethylacetat.

Den vandige fase blev opsamlet, og dens pH-værdi indstillet til 2,5 ved tilsætning af IN saltsyre. Den blev derpå ekstraheret med ethylacetat. Ekstrakten blev tørret over vandfrit natriumsulfat, og opløsningsmidlet afdestilleret til opnåelse af 7|3-chloracetamido-7a-methoxy-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i form af et amorft pulver.

Claims (2)

146539

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 7a-methoxy-cephalosporin-derivater med den almene formel f)CH R -S-CH2-C0-NH--< η (II.) )-N\>^“r2 G T C00H hvori R1 betyder cyanmethyl, 1-cyanethyl, 2-hydroxyethyl 2 eller 1,3,4-thiadiazol-2-yl, og R betyder acetoxymethyl, carbamoyloxymethyl eller (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thio-methyl, eller farmaceutisk acceptable estere deraf, kendetegnet ved, at et 7a-methoxycephalosporin-derivat med formlen 0CH3 i /S. X-CH9-C0.NH_.s' \ z I J (III·) 0>-NV'R2 P