DK145801B - Fremgangsmaade til dyrkning af en svamp hoerende til slaegten coriolus - Google Patents

Description

(19) DANMARK

^ (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT (11) 145801 B

DIREKTORATET FOR PATENT- 06 VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 3^7^/77 (51) IntCI.1 C 12 N 1/14 (22) Indleveringsdag 3· aug. 1977 (24) Løbedag 3. aug. 1977 (41) Aim. tilgængelig 4. feb. 1978 (44) Fremlagt 7. mar. 1 9¾ (86) International ansøgning nr. -(86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag -(62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 3. aUg. 1976, 51/9307^, JP 30. aug. 1976, 51/103380, JP

(71) Ansøger KUREHA KAGAKU K0GY0 KABUSHIKI KAISHA, Tokyo, JP.

(72) Opfinder Chikao Yoshikumi, JP: Toshihiko Wada, JP: Hlromitsu

Makita, JP: KAnzaburo Suzuki, JP: Azuraa Ohkubo, JP: m. fl.

(74) Fuldmægtig ingeniørfirmaet Lehmann & Ree.

(54) Fremgangsmåde til dyrkning af en svamp hørende til slægten Coriolus.

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til dyrkning af en svamp hørende til slægten Coriolus fortrinsvis Coriolus versicolor (Fr.) Quél., Coriolus consors (Berk.) Imaz., Coriolus hir-sutus (Fr.) Quél e]].er Coriolus pargamenus (Fr.) Pat. under submerse betingelser med beluftning og omrøring og under anvendelse af et vandigt væskeformigt næringssubstrat indeholdende saccharid som carbonkilde og herudover mindst ét stof valgt blandt gærekstrakt,

S

_ pepton, casaminosyre og kødekstrakt.

Generelt er de vandige væskeformige substrater af den X) ^ type, der indeholder mindst ét stof valgt blandt gærekstrakt, pep- £ ton, casaminosyre og kødekstrakt som næringskilde (nitrogenkilde) og yderligere indeholder saccharid (såsom glucose, stivelse, fruc-£ tose m.v.) som carbonkilde og et eller flere uorganiske salte (såsom 2 145801 phosphat, magnesiumsalt o.s.v.) egnet til brug ved dyrkning af Basidiomyceter, men når en svamp hørende til slægten Coriolus,underkastes submers dyrkning under anvendelse af et sådant vandigt væskeformigt substrat, finder der en kraftig skumning sted på overfladen af det væskeformige medium under dyrkningen, og følgelig viser det sig yderst vanskeligt at gennemføre dyrkningen effektivt og ensartet under anvendelse af en stor mængde medium i en fermentor.

Ved gennemførelse af submers dyrkning af en svamp hørende til slægten Coriolus under anvendelse af et vandigt væskeformigt medium med skumningstilbøjelighed som nævnt ovenfor, er det derfor nødvendigt at nedsætte fødningen af substrat i fermentoren (til et niveau omkring 40-60% af fermentorens kapacitet). Da et betydeligt antal dage imidlertid normalt er nødvendige til dyrkning af Basidiomyceter, fører denne reduktion af substratfødningen til produktivitetsnedsættelse, hvilket er en alvorlig økonomisk ulempe.

Der findes forskelligt udstyr til regulering af skumningen, således er et skumdæmpningsapparat blevet monteret på omrøre-ren i fermentoren, men der er ikke noget af dette udstyr, der er i stand til at undertrykke substratets skumningstendens i en sådan grad, at det gøres muligt at øge substratfødningen. Man har også forsøgt at regulere skumning ved at nedsætte beluftnings- og omrøringshastighederne i substratet, men denne fremgangsmåde er også uønskelig, da den nedsætter væksthastigheden for myceliet af Basi-diomyceterne. Man har endvidere foreslået at fortynde det væskeformige substrat for derved at undertrykke skumningen og øge substratchargen, men dette forsøg lider af den ulempe, at mycelieudbyttet pr. batch reduceres i uacceptabel grad.

Der er nu blevet gennemført yderligere undersøgelser af det skumningsfænomen, som optræder tinder dyrkning af svampe af slægten Coriolus under anvendelse af et vandigt væskeformigt substrat som nævnt ovenfor, og på basis af disse undersøgelser nåede man frem til den betydningsfulde erkendelse, at skønt skumningen er kraftig i dyrkningens begyndelsesstadium, falder den hurtigt, når dyrkningsfor-løbet når til et bestemt stadium, og hvis mediet eller i det mindste én komponent i mediet derfor tilføres supplerende i passende portioner på de tidspunkter, hvor skumningsfænomenet aftager under dyrkningen af Basidiomyceterne, kan myceliet tilvejebringes i overraskende højt udbytte.

Formålet med opfindelsen er således at tilvejebringe en ny fremgangsmåde til dyrkning af svampe hørende til slægten Coriolus, ved hvilken fremgangsmåde dyrkningsmediets skumning styres således, 3 145801 at der sikres et glat forløb af dyrkningen, og således at der opnås en bedre udnyttelse af fermentorens kapacitet.

Dette opnås med en fremgangsmåde ifølge opfindelsen af den i indledningen omhandlede art, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at startchargen af næringssubstrat indstilles således, at den er mindre end ca. 70% af den anvendte fermentors rumindhold, og at substratet eller i det mindste én af substratets næringskomponenter tilføres supplerende, efterhånden som skumningen i substratet aftager i løbet af dyrkningsperioden.

Det iøjnefaldende træk ved opfindelsen ligger i, at det vandige væskeformige substrat, der benyttes ved dyrkningen af Basi-diomyceterne, ikke altsammen indføres i fermentoren på én gang, som tilfældet er ved den sædvanlige fremgangsmåde, men til at begynde med indføres i en mængde på ca. 70% af den anvendte fermentors kapacitet, og at substratet eller i det mindste en komponent af næringssubstratet tilføres på passende måde, når det tidspunkt, hvor skumningsfænomenet aftager med dyrkningens videre forløb, nås.

Ved den foreliggende opfindelse er begyndelseschargen af substratet, skønt den varierer noget med sammensætningen af det anvendte medium, fermentorens størrelse og udformning, omrøringshastigheden under dyrkningen og andre faktorer, sædvanligvis beliggende i området fra ca. 40 til 70% af det indre rumindhold af den anvendte fermentor.

Tiden for og mængden af hver yderligere charge af substratet eller den i det mindste ene komponent af mediet, som udgør en næringskilde, bestemmes passende i løbet af dyrkningsperioden ved at iagttage skumningsforholdene i substratet gennem et vindue tilvejebragt i fermenterens øvre del. Det anbefales at tilføre en supplerende mængde af mediet eller den i det mindste ene komponent på et tidspunkt, hvor skumningsfænomenet er aftaget i et bestemt omfang. Sådanne supplerende tilførsler af mediet eller den i det mindste ene komponent kan gennemføres enten batchvis eller kontinuerligt under iagttagelse af skumningsforholdene. Disse supplerende fyldninger kan forøge den totale fødning af mediet til ca. 85% af fermenterens rumindhold.

v ed dyrkning af svampe af slægten Coriolus ser man ikke store fremskridt i mycelievæksten i de tidlige stadier af dyrkningen,og den mængde næringsmidler i substratet, der bruges af Basidiomyceterne, er begrænset, således at der kun sker en ringe forandring i mediets sammensætning, medens den kraftige skumning optræder under dyrkningens initiale fase, men det har vist sig, at der derefter sker et kraftigt 4 145801 fald i skumningen med hurtig vækst af Basidiomyceterne. Selv hvis substratfødningen derfor er reguleret til at forblive under ca. 70% af fermenterens rumindhold under dyrkningens indledende stadium, hvor kraftig skumning forekommer, forbedres slutudbyttet af myceliet, når en tilstrækkelig tilførsel af substrat eller en komponent af substratet tilvejebringes ved de supplerende charger i dyrkningens sidste stadium,hvor væksten af Basidiomyceterne bliver hurtig. I tilfælde af, at substratet benyttes til supplerende charger, foretrækkes det at indstille begyndelseschargen, således at den er mindre end ca.

60% af rumindholdet af den anvendte fermenter.

Det vandige væskeformige substrat, der benyttes ved den foreliggende opfindelse, indeholder saccharid, såsom glucose, lactose, stivelse o.s.v. som carbonkilde og mindst ét element fra gruppen bestående af gærekstrakt, pepton, casaminosyre og kødekstrakt som næringskilde, og denne næringskilde er fortrinsvis til stede i en mængde på mere end 0,1 vægtprocent. Et sådant vandigt væskeformigt medium har, når det benyttes til submers dyrkning af Basidiomyceter, tilbøjelighed til at give kraftig skumning på det væskeformige substrats overflade. Betegnelsen "substratkomponent(er)", der tilføres mediet supplerende i overensstemmelse med dyrkningens fremskriden, betyder næringskilden, d.v.s. mindst ét valgt blandt gærekstrakt, pepton, casaminosyre og kødekstrakt.

De anvendte svampe af slægten Coriolus er velkendte indenfor fagområdet, og deres mycologiske egenskaber er forklaret i "COLORED ILLUSTRATION OP FUNGI OF JAPAN" af Rokuya Imazeki og Tsuguo Hongo, bind I, 1974, og bind II, 1975.

Det skal også bemærkes, at polysaccharid dannes som et væsentligt kulturprodukt i det fremkomne mycelium af de anvendte svampe af slægten Coriolus og i substratet. Dette polysaccharid har forskellige farmakologiske virkninger og også mange anvendelsesmuligheder som tilsætningsstof ved levnedsmiddeltilvirkning. Specielt når de arter, der er omtalt ovenfor som foretrukne, benyttes, kan der tilvejebringes polysaccharid med særdeles god antitumorigen effekt.

Sådant polysaccharid kan fraskilles og udvindes ved at ekstrahere det mycelium, der opnås ved dyrkning ifølge opfindelsen, og det fermenterede substrat med et vandigt opløsningsmiddel.

Opfindelsen vil nu blive beskrevet mere detaljeret ved hjælp af nogle udførelsesformer.

Eksempel 1; 5 145801 1000 liter af et vandigt væskeformigt substrat indeholdende 10 vægtprocent glucose, 1,5 vægtprocent gærekstrakt, 0,2 vægtprocent maltekstrakt, 0,1 vægtprocent MgSO^^71^0 og 0,1 vægtprocent KE^PO^ fyldtes i en fermenter formet som en vertikal beholder (fremstillet af Marubishi Physicochemical Industry Co., Ltd.) med et rumindhold på 3 2 m og en fladbladet turbineomrører med blade i to niveauer, og efter sterilisering på kendt måde inokuleredes mediet med 20 liter op-slemning af mycelium af Coriolus versicolor (Pr.) Quél., der på forhånd var dyrket som podekultur i en 50 liters glasfermenter, og derefter påbegyndtes dyrkningen omgående med en beluftningshastighed på 500 1/min. (0,5 liter lufttilførsel pr. liter substrat pr. minut, d.v.s. 0,5 1/1/min.), en turbinehastighed på 150 rpm og en dyrkningstemperatur på 26°C. Der dannedes skum, som steg op til fermenterens øverste del under det indledende dyrkningsstadium, men skummet begyndte at aftage efter 15-20 timer. I den 24. time fra dyrkningens start tilsattes derfor supplerende 200 liter af det steriliserede substrat med samme sammensætning som angivet ovenfor over en periode på én time, og dyrkningen fortsattes, idet beluftningshastigheden indstilledes til 600 1/min. Man iagttog igen skum, der steg op, men da dette med tiden var aftaget, tilsattes igen supplerende 200 liter substrat under samme betingelser som den første supplerende charge i den 48. time fra dyrkningens start, idet dyrkningen yderligere fortsattes under regulering af beluftningshastigheden til 700 1/min. Skum steg op for tredie gang men aftog igen med tiden, således at der i den 72. time fra dyrkningens begyndelse tilsattes 200 liter medium under samme betingelser som ved første og anden supplerende tilsætning, og dyrkningen fortsattes yderligere under regulering af beluftningshastigheden til 800 1/min. Disse tre supplerende tilsætninger af substrat bevirkede, at den totale mængde tilført substrat udgjorde 1600 liter eller 80% af fermenterens rumindhold, hvilket omtrent udgjorde den begrænsende mængde fødning, således at dyrkningen fortsattes under disse betingelser og ophørte på den 7. dag efter dyrknin- 6 145801 gens start. Ved dyrkningens afslutning centrifugalsepareredes myceliet fra substratet og tørredes. Udbyttet var 15,6 g/1.

Eksempel 2: 1000 liter vandigt væskeformigt substrat indeholdende 15 vægtprocent glucose, 2,25 vægtprocent gærekstrakt, 0,2 vægtprocent maltekstrakt, 0,1 vægtprocent MgSO^-TH^O og 0,1 vægtprocent KI^PO^ fyldtes i en fermenter i form af en vertikal beholder med et rumind- o hold på 2 m og med en fladbladet turbineomrører med blade i 2 etager (fremstillet af Marubishi Physicochemical Ind.), og efter sterilisering på kendt måde inokuleredes substratet med 20 liter opslemning af mycelium af Coriolus versicolor (Fr.) Quél., der på forhånd var dyrket som podekultur i en 50 liters glasfermenter, og derefter påbegyndtes dyrkningen omgående. med en beluftningshastighed på 500 1/min. (0,5 liter lufttilførsel pr. liter medium pr. minut, d.v.s. 0,5 1/1/ min.), en turbinehastighed på 150 rpm og en dyrkningstemperatur på 26°C. Der steg skum op til den øverste del af fermenteren under den første fase af dyrkningen, men dette begyndte at aftage efter 30-40 timers forløb, således at der i den 48. time fra dyrkningens start supplerende tilsattes 200 liter steriliseret substrat af samme sammensætning som det oprindeligt påfyldte substrat, og dyrkningen fortsattes, idet beluftningshastigheden reguleredes til 600 1/min. Igen steg der skum op, men dette aftog med tiden, således at der i den 72. time fra dyrkningens start igen supplerende tilsattes 200 liter substrat under samme betingelser som første supplerende charge, og dyrkningen fortsattes yderligere, idet beluftningshastigheden reguleredes til 700 1/min. For tredie gang sås skum, der steg op, men igen aftog det med tiden, således at der i den 96. time fra dyrkningens start igen supplerende tilsattes 200 liter substrat under samme betingelser som for de foregående første og anden suppleringer, og beluftningshastigheden indstilledes til 800 l/min. Disse tre supplerende tilsætninger bevirkede, at den totale mængde tilført substrat udgjorde 1600 liter eller 80% af fermenterens rumindhold. Da dette var nær ved grænsen for den mængden fødning, der kunne tilføres, fortsattes dyrkningen uden yderligere tilførsel af substrat og afsluttedes på den 7. dag fra dyrkningens start. Efter dyrkningens afslutning centrifugalsepa-reredes myceliet fra mediet og tørredes, hvorved der opnåedes et totalt udbytte på 18,4 g/1.

Til sammenligningsformål gennemførtes også nedenstående forsøg.

Sammenligningseksempel 1; 7 145801 1200 liter substrat med samme sammensætning som i Eksempel 1 tilførtes på én gang til en beholderformet fermenter som den i Eksempel 1 anvendte, og efter sterilisering på kendt måde inokuleredes substratet med 20 liter opslemning af mycelium af Coriolus versicolor (Fr.) Quél., der i forvejen var dyrket som podekultur i en 50 liters glasfermenter, hvorefter dyrkningen straks startedes med en beluft-ningshastighed på 500 Ι/min., en turbinehastighed på 150 rpm og en dyrkningstemperatur på 26°C, og dyrkningen opretholdtes i 7 dage. Udbyttet af mycelium tilvejebragt på samme måde som i Eksempel 1 efter dyrkningens afslutning var 16,9 g/1.

De fremkomne resultater viser, at udbyttet af mycelium pr. mængde enhed substrat snarere er højere i Sammenligningseksempel 1 end i Eksempel 1, men i førstnævnte var det umuligt at tilføre substratet i en samlet mængde på over 60% af fermenterens rumindhold som følge af kraftig skumning i substratet, hvorved dannelsen af mycelium pr. batch blev mindre end i Eksempel 1. Resultaterne er vist i nedenstående Tabel 1.

Sammenligningseksempel 2:

Dyrkningen gennemførtes efter samme fremgangsmåde som i Sammenligningseksempel 1 med undtagelse af, at der tilførtes 1000 liter substrat med samme sammensætning som i Eksempel 2 på én gang. Det var i praksis umuligt at indføre mere end 1000 liter substrat som følge af for voldsom skumning i substratet. Resultaterne er vist i Tabel 1.

Sammenligningseksempel 3:

Der gennemførtes dyrkning efter samme fremgangsmåde som i Sammenligningseksempel 1 med undtagelse af, at der på én gang tilførtes 1600 liter substrat indeholdende 5 vægtprocent glucose, 0,75 vægtprocent gærekstrakt, 0,2 vægtprocent maltekstrakt, 0,1 vægtprocent MgS0^*7H20 og 0,1 vægtprocent I dette tilfælde ækvivaleredes mængden af substrattilførsel med den totale tilførsel i eksemplerne 1 og 2 ved fortynding af det anvendte substrat. Det vil sige, at skumningsfænomenet nedsattes ved at anvende det fortyndede medium. De fremkomne resultater var som vist i Tabel 1.

8 145801

Dl O' £ H m νο cm r^niHH or- % * * * O ** •Η H LOOOOO O VD r-

H Φ 00 1-( H

ej a Qj ε B oi <0 X Ui 0) D1 tn

•h m O

£ CN CN CN Η Η ο σι φ » - » - O - •HH in cn o o o o o o Η Φ H m h cn G a

Φ B

I 0) ε di (0 x m φ D1 O'

.5 CO

£ H m CN Η Η Ο CN

*►·»*» * o **·

•Γ-j η O^OOO OC^ O

H (D H VD H CN

g a gj £ I a) ε di <β · CQ <U S> O' h <g 13 H CN ^ <ϋ r- Λ H m

ra φ CN CN Η H O -sp M

£h ' Qj · · · · O - Q) g in cn ο ο o ο vo σι > 0 H 00 H CN 0 m H 2 « Ή

^ -H

H VO +) 0) tn οι η Η ο σι fi, o - Φ

s OHOOO O VO H

a) H 00 H CN H

01 <0

X

Η df> 01 ^ ai tj\ — +>

G Ό Sh M

•Η (d φ «I

G M +> G <y +) O' -Η O g ilj -P 0] Η ·Η Φ 01 +) X 01--+1 £

G KUO G X G

φ id £ in -H O' 3 Φ B +> M +> K G G Ό bi BG<U+>Din' Ό -H 0

mil 31 ui ^ · ίρ ·©. G £ —. G

01 Ο Ο Αί Φ "3* O <H Ό a+3 Φ +> 0 Ο Φ +> O ft © go 01

cd £ £ £ Η ω cn O' <£ G+i G

h a H 1¾ cd O' S3 -H -H Cd -H

+)+1 u u a s « η η ηλ g 01 O' Φ <d φ\ A3

Λ a) 10 +1 0 O' G

£ > GO >iAi >1

Ui — W Eh S — Q

Eksempel 3: 9 145801 I dette eksempel benyttedes en substratkomponent som næringsmiddelkilde til supplerende tilførsel i stedet for selve substratet.

35 liter af det væskeformige substrat indeholdende glucose og gærekstrakt som vist i Tabel 2 tilførtes til en 50 liters fermenter med form af en lodret beholder, og efter sterilisering på kendt måde inokuleredes substratblandingen med en opslemning af mycelium (0,01% målt som mycelium) af Coriolus versicolor (Fr.) Quél. CM-101, som var deponeret i the Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Chiba, Japan, under deponeringsnummeret FERM-P nr. 2412 den 25. december 1973, hvilken opslemning var fremkommet fra en rystekultur, og dyrkningen påbegyndtes straks med en beluftningshastighed på 0,5 1/1/min., en omrørerhastighed på 250 rpm og en dyrkningstemperatur på 25 + 2°C. Der steg skum op til den øverste del af fermenteren under dyrkningens indledende stadium, men det begyndte at aftage efter 15-20 timers forløb, således at der 24 timer efter dyrkningens start supplerende tilsattes 2 liter af en vandig opløsning indeholdende gærekstrakt, og dyrkningen fortsattes, idet beluftningshastigheden reguleredes til 0,6 1/1/min. Skum steg igen op men aftog med tiden, således at der 48 timer efter dyrkningens start igen tilsattes 2 liter af den vandige opløsning, og dyrkningen fortsattes, idet beluftningshastigheden indstilledes til 0,6 1/1/min. Tilsvarende tilsattes igen en gang supplerende 2 liter af den vandige opløsning 72 timer efter dyrkningens start, og dyrkningen fortsattes yderligere.

Disse tre supplerende tilsætninger af vandig opløsning plus den oprindelige charge bevirkede, at den totale fødning af substrat udgjorde 41 liter eller 82% af fermenterens rumindhold. Da dette omtrent var grænsen for fødningsmængden fortsattes dyrkningen med denne substratmængde og afsluttedes på den 7. dag efter dyrkningens start.

Efter dyrkningens afslutning centrifugalsepareredes myceliet fra substratet og tørredes. Udbyttet og produktionen var henholdsvis 19,8 g/1 og 810 g som vist i nedenstående Tabel 2.

Til sammenligningsformål dyrkedes myceliet af Coriolus versicolor (Fr.) Quél. i samme fermenter som den, der benyttedes i Eksempel 3 uden yderligere tilsætning af gærekstrakt til det vandige væskeformige substrat, der var blandet med en forholdsvis stor mængde gærekstrakt sammenlignet med glukose som vist i Tabel 2. I dette tilfælde var det umuligt at tilføre mere end 25 liter medium som følge 10 165801 af for kraftig skumning. Udbyttet af mycelium efter 7 dages dyrkning var 22,0 g/1, og produktionen var 550 g.

Disse resultater viser, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i stand til at forøge myceliumproduktionen væsentligt under forhold, hvor samme fermenter anvendes.

145801 11 ©

Di

rH

p p tn © h © T3 h H ID H Pi ft φ Dir-* fU © g ft ro P D> © g lo H fi m © Γ'· Ό Η ·Η ,¾ co co η -P C Φ Λ! H O +} ® φ Λ Pi © tø Di MTjrø ΦΦϋ Duo ti

Di H C P Di O Di DiH -Η

c o Η H (d CM Φ -H C

•H P p Η Ό O Λ P Dl

6 τι Μ +1 lo -H

Di ti (d in r* ιη-ΗΦΗ •η ·η Pi cm m Ό ti Η Φ +1 CM P ti © ti co co id α) s φ o Μ μ μ g i ϋ φ Ρ 0) (0 g 2 Ch co η ιη

Id rH ffi Λ ft WOO d ftp v ID d CO φ Φ D>

H Ρ Φ M

Pi Ό rd

in © P

cm ρ Ρ o _______rH (0 +1 •H id P Ή Pi

Η Η Τ3 P

D> H P d 2

CM CM CM © fti P

O CM id > 3

H DiO · · CD

φ CM —·. Η Φ ,q o · D> · D> · Di tJ © cd β o to · ti © Ό

Eh φ OH ^O o^o CD H d cn roo © o ο © o tig© H Ρ ΡιΗΦΗΡιΗ Pi 0 »0 Φ >d od Φ Pi Φ ΦΦΟ h to Φ to Hd d'dd'dd'd P D>0 Di ρ h d 0·Η φ H d Η φ Η -H CdCM Id ti Ό •rl Λ +> CO 0 © 0 IQ 0 H Id o P (!) d Ρ Όϋ ΛΙΙΡ ί +1 Η ΡΌ·Η ft did ρό d ρό η r- oo d^ ο ·ηρι ddPiddd μ- m ©ΰ φρί g ·Η φ ·Η g -Η CM Odd) φ CD CD Hpgp-Hp ddT)

DiOPPPPPPP 0 ti

Η0Φ (tiP>(dcd .¾ 0 P

OP <iP P(MP Φ P

4H Η ίϋ CM Ρ 00 P P to +> d H OO '—' CO "«3· ID — tD ΟΙΰΦ M O P d φφφφφ d ρ o

P P d P H Pt HdH

H COfBdfB'dW Di © P

Pi DiO Dl Φ Ο O (d in •Si'-'d'-'Pi'-' PitiPi

ro ft) <! EH Id 0 P

> X d --- +) Φ I Di I ΗΛΟ p d (d (D id d Φ fO -Η i I Pi Λ P 0

Di CDdPl Η Φ id Ρ P

Pi H IQ ft} -H ft I -PCD

fd -H-SiDi P Id 6 p P P Di P PH Ρ P © ti ti ΦΦ0 Ο ΛΦ ©id Eh Eh P tl nd Pi P φ 0 X) V Pi -- 0 d ft) d ©id >d d Dip i Pi φ D> φ topi d ρ © tico id i ft ο© co.

dp ©DOP ft} Λ DIH g P Dih c#p ©co ριηλ: gd d© d id o ©m tiP ©PiOid co -HD« -H ti Ό - ©d h ©d p h dd rH ©'tin

H CO ft D< © P CdP Ρ P ©ti i> <*> P

Ό ftdTdifl Pd pippi uo o in p pi d P ti P ti P o©. >i © © >iP 'ft ©

Hid W ti P © Eh P QPifl gp H C'- O > 12 145801

Eksempel 4 :

Mycelium af Coriolus versicolor (Fr.) Quél. CM-101 dyrkedes v.ed samme fremgangsmåde og under anvendelse af samme 50 liters fermenter som i Eksempel 3 . 30 Liter af et substrat sammensat af glucose og gærekstrakt som vist i Tabel 3 påfyldtes til at begynde med og inokuleredes med opslemningen af Coriolus mycelium. Ved den 48. og 72. time fra dyrkningens start tilsattes supplerende 5 liter gæreks-trakt, og dyrkningen af myceliet fortsattes yderligere. Resultaterne er vist i Tabel 3.

Som sammenligningseksempel gennemførtes en lignende dyrkning under anvendelse af et substrat blandet med en stor mængde gær-ekstrakt i forhold til glucose og uden at gennemføre nogen yderligere tilførsel af gærekstrakt til substratet. I dette tilfælde forekom kraftig skumning, som tilfældet var for sammenligningseksemplet til Eksempel 3, og dette gjorde det umuligt at tilføre mere end 20 liter substrat. Som følge heraf var myceliumproduktionen så lav som angivet i nedenstående Tabel 3.

13 14-5801 tn η o 0) tnm ft ro 6 <=> <U O Ttf ω o h d X cm O dj <U _ Φ x! -P tn tn

03¾¾ -Η (ϋ O

t n H C Η Ό O to

β O -H OH

Η ,ΰ -P in r* cm vo d Ti X m t n d (tf

•H -ri M

i—I <U 4-1 d tn in tu ox i o tu g d d

13 η (B

co o o

--rJ

H

O

CM

H

tn co in h o i—i tno · in <D ^ · -N · ,q o · t n · t n (tf d o

Eh tu oh ^ o o tn ro o iilo^o η Λ d cm <U H d

Φ Ti t) (Ud (U <U

Ti hr d t) tu +> tn tn d 0-H (U H d Η -H (tf Ό

-H Xi -P tn O J) 0 H fl 0 O

1) -1¾.¾ Xi 03 Xi VD H

O) d Id d ttf Ό O r·" CM H

o -H d tu d d d -tf h

<U -P g H (UH

tu tn tn η +j g +J

t n o X +i X H .¾ Η ϋ (U (0 -P (0 ·& d d co d d td H fB ^ 4-1 CM +1 h O C5 — in r~- tn ^ M '-r ϋί tu tu tu -P d d d h tn iB O) « d t5 Ti O o ·&·— d -- ro h i tn i -P d (tf tu ftj -H i i d

t n tn d d Η <U

d h tn fB η a i

(tf -H-ø-tn -P ti g d .M

Xi -PH +J-H(Ud d O ft(U <U(0 gi^-P Ti •P tu o Ti Ti d - o <u (tf τ! d tn-P i d

Tid d m tu dtn tni ft d-P α)ΐΰτΐ+) (ΒΛ tnn g 0) tn d h ,¾ g d dtu d τί Λ tu d O (tf tn -H tn h tud Htuxid h dd h h tn fttntu-P (tf-P λ!·η tud

Ti ftCntfin +) d d-Pd o O

cm d-Hd-M 019. >i (U 0) >rH

h (tf tn d d (U Entp Q-Qtn 2 +) 145801 1 4

Til yderligere eksperimentel belysning af anvendeligheden af fremgangsmåden ifølge opfindelsen til dyrkning af svampe hørende til slægten Coriolus er nedenstående forsøg blevet udført. Ved disse dyrkningsforsøg blev svampearterne Coriolus consors (Berk.) Imaz., Coriolus hirsutus (Fr.) Quél. og Coriolus pargamenus (Fr.)

Pat. anvendt.

Ved en tilsvarende procedure som den i eksempel 1 beskrevne blev der dyrket tre stammer af de respektive svampearter Coriolus consors (Berk.) Imaz., Coriolus hirsutus (Fr.) Quél. og Coriolus pargamenus (Fr.) Pat., som er deponeret offentligt under de respektive deponeringsnumre FERM-P 988, 2711 og 2712. Også dyrkningsmediet var som det i eksempel 1 benyttede.

De opnåede resultater, der er anført i nedenstående tabel, omfattede mycelieudbytte, udvundet mængde proteinbundne polysaccha-rider opnået fra de respektive mycelier ved samme fremgangsmåde som den i eksempel 1 benyttede samt grundstofanalytiske data for de således tilvejebragte polysaccharider.

Svampearter: Coriolus consors Coriblus hirsutus Coriolus pargamenus

Deponeringsnr.: FERM-P 988 FERM-P 2711 FERM-P 2712

Eksempel: 567

Opnået mycelie- mængde (g/1) 1,65 1,50 1,60

Udvundet mængde proteinbundet polysaccharid (g) 3,1 2,7 2,9

Grundstofanalyse (%)

Carbon 40,1 38,6 39,2

Hydrogen 6,5 6,6 6,2

Nitrogen 2,4 2,1 2,0

Ovenstående resultater viser, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen ikke blot er anvendelig til dyrkning af svampearten Coriolus versicolor (Fr.) Quél. men er generelt anvendelig til dyrkning af svampearter hørende til slægten Coriolus.