DK145497B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af cephalosporansyrederivater - Google Patents

Description

(19) DANMARK

É| nå) FREMLÆGGELSESSKRIFT ου 145497 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 4295/77 (51) Irrt.CI.3 C 07 D 519/00 (22) Indleveringsdag 28. sep. 1977 (24) Løbedag 28. sep. 1977 (41) Aim. tilgængelig 6. okt. 1978 (44) Fremlagt 29 · nov. 1982 (86) International ansøgning nr. - (86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 5. apr. 1977* 784885* US

(71) Ansøger BRISTOL-MYERS COMPANY, New York, US. .

(72) Opfinder Takayuki Naito, JP: Jun Okuraura, JP: Haj i me Kamachl, JP: Seiji LLmura, JP: Hideaki Hoehi, JP: Masahisa Oka, JP.

(74) Fuldmægtig Th. Ostenfeld Patentbureau A/s.

(54) Analogifremgangsmåde til fremstil=

Ung af cephalosporansyrederivater.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte cephalosporansyrederivater, som er særligt velegnede ved behandling af bakterielle infektioner, herunder infektioner forårsaget af Shig. dysenteriae og anthracis.

De omhandlede forbindelser har den almene formel /s\ » ^-NH-CH-CH CH- Sr p “-?

3 III N ' JS -(CH2) COOH

Γ c —n ^jc-ch2s—/ \ / 2 n

7 II 1 N V

f o \ 2 7 U C-ORZ n t || ° o (I) 3 2 145497 hvori n er 1 eller 2, og R1 betegner _. ch2nhr' ch2nhr· _.ch2nhr·

R CH2C0_ eller [Μ] eller I

_y 2 *\/·*-<:η2(:ο- \ —ch2co- hvori R er hydrogen, hydroxy eller methoxy, og R' er hydrogen eller methyl, og R2 er hydrogen eller en konventionel, farmaceutisk acceptabel, let hydrolyserbar esterdannende gruppe, eller et ikke- . toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Cephalosporinerne er en velkendt gruppe af semisyntetiske anti-bakterielle midler, som oprindeligt fremstilledes f.eks. ved acylering af 7-aminogruppen i kernen 7-aminocephalosporansyre (7-ACA), og senere ved lignende acylering af kerner afledt derfra, som f.eks. ved modifikation af substituenten i 3-stillingen. Der findes en omfattende tilgængelig litteratur om cephalosporiner med forskellige substituen-ter i 3- og 7-stillingeme. Af særlig interesse i forhold til de ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede forbindelser er tysk fremlæggelsesskrift nr. 2.538.804 og den tilsvarende danske patentansøgning nr. 3910/75, som beskriver cephalosporansyrederivater med den almene formel:

f S

Ara-W'"1 I if cH 2-s

°' C00H (CH2)n-C00H

hvori R^ er acyl eller H, R3 er H eller methoxy, n er 1-9, eller farmaceutisk acceptable salte deraf. Blandt disse forbindelser foretrækkes især natrium-7-(2-aminomethylphenylacetamido)~3-(1-carboxy-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der i det følgende omtales som BL-S786.

Som det vil fremgå nærmere af det følgende, har de ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede forbindelser en uventet højere antibakteriel aktivitet over for visse bakteriestammer, end BL-S786 og Cefamandol, som er en kommerciel cephalosporin med formlen 3 145497 CH,

i π S

OH O

Estrene af forbindelserne med formel I er f.eks. de estre, som indeholder gruppen;

-CH

hvori Z betegner (lavere)alkanoyl, benzoyl, naphthoyl, furoyl, thenoyl, nitrobenzoyl, methylbenzoyl, halogenbenzoyl, phenylbenzoyl, N-phthal-imido, N-succinimido, N-saccharino, N-(lavere)alkylcarbamoyl, (lavere)-alkoxy, (lavere)alkylthio, phenoxy, carbalkoxy, carboberizoxy, carbamoyl, benzyloxy, chlorbenzyloxy, carbophenoxy, carbo-tert.-butoxy eller (lavere)alkylsulfonyl, når W betegner hydrogen, og Z betegner carbalkoxy, når W betegner carbalkoxy, og Z betegner benzoyl eller cyano, når W betegner phenyl, eller hvori W og Z tilsammen betegner 2-oxocycloalkyl indeholdende fra 4 til 8 carbonatomer. Foretrukne estre af de omhandlede forbindelser indbefatter pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, methoxymethyl-, acetonyl-, phenacyl-, p-nitrobénzyl-, β,β,β-trichlor-ethyl-, 3-phthalidyl- og 5-indanyl-estrene.

Saltene af de omhandlede forbindelser omfatter de ikke-toxiske ' carboxylsyresalte deraf, indbefattet ikke-toxiske metalsalte,'såsom natrium-, kalium-, calcium-og aluminiumsaltehe, ammoniumsaltet og substitueret ammoniumsalte, f.eks. salte af sådanne ikke-toxiske aminer, som trialkylaminer indbefattet triethylamin, procain, dibenzylamin, N-benzyl^-phenethylamin, 1-ephenamin, N,N'-dibenzylethylendiamin, dehydroabietylamin, N,N'-bis-dehydroabietylethylendiamin, N-(lavere)-alkylpiperidin, f.eks. N-ethylpiperidin, og andre aminer, som er blevet anvendt til dannelse af salte med beriz^pfettté-i^ll^i, samt de ikke-toxiske syreadditionssalte deraf (d.v.s. aminsaltene), indbefattet minéralsyre-additionssaltene, såsom hydrochloridet, hydrobromidet, hydroiodid&t, u0 sulfatet, sulfamatet og phosphatet, og de organiske syreadditidhssalte, såsom maleatet, acetatet, citratet, oxålatetj, shOcinatet, benzoatet, tartratet, fumaratet, malatet, mandelatet> 4iscort'atet og lignende.

xo n po 4 145497

Foretrukne forbindelser/ som fremstilles ifølge opfindelsen, er sådanne, hvor i formel (I) R1 er CELNH, I 2 l^^J— ch2co- og n er 1 R·^ er aCH2NH-CH3 ch2co- og n er 1 R1 er ch0nh-ch3 OH—Y jl 2 CH2CO- og n er 1 R1 er -r— CH_NH0

I I

IL J— CHoC0- og n er 1 r1 er - —-CH0NH-CH3

II

I Jj—ch2co- og n er 1 r1 er . .

—CH2NH2 11 JJ—ch2co- og n er 1 r1 er f&'j)-CH-NH-CH- -CH2CO- og n er 2.

145497 5 samt de ikke-toxiske, farmaceutisk acceptable salte deraf. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man a) omsætter en forbindelse med den almene formel s / \ 1 ’ Y-NH-CH-CH CH0 , 0

I I I II

X-N. .C-CH-O-C-CH-, / N/' 2 3

COOH

Λ~· hvori Y er H eller R1, hvor har den ovenfor anførte betydning, eller et salt eller en let hydrolyserbar ester deraf, med en forbindelse med den almene formel

N-(CH0) COOH

hs^n' V 2 n , . J

0 hvori n er 1 eller 2, og, såfremt Y i den resulterende forbindelse er H, behandler denne med et acyleringsmiddel med den almene formel R1 - X ' : "·' 1 ' ' hvori X er et halogenid eller en funktionel ækvivalent deraf, og R·*· har den ovenfor anførte betydning, eller et amino-beskyttet derivat deraf, hvorefter en eventuel amino-beskyttende gruppe fjernes, eller b) omsætter en forbindelse med den almene formel XS\

NH,-CH-CH CH- -M

2 I I I 2 J~|

.C-N^ X-CH--S—k K I

(/ f » \^Μ-(ΟΗ2)ηΟΟΟΗ χι I o

COOH

6 145497 hvori n har den ovenfor anførte betydning, eller et salt, en let hydrolyserbar ester eller en Schiff-base deraf, med et eventuelt amino-beskyttet acyleringsmiddel med den almene formel

R1 - X

hvori R1 og X har de ovenfor anførte betydninger, hvorefter en eventuel amino-beskyttende gruppe fjernes, og om ønsket omdanner den resulterende frie syre, det resulterende salt eller den resulterende let hydrolyserbare ester af en forbindelse med formel (I) til den tilsvarende ester eller tilsvarende ikke-toxiske farmaceutisk acceptable salt deraf, eller om ønsket omdanner et resulterende salt eller en resulterende let hydrolyserbar ester af en forbindelse med formel (I) til den tilsvarende frie syre af forbindelsen med formel (I).

Ved fremgangsmådevariant a) kan omsætningen udføres i opløsning, såsom i vand eller vandig acetone, ved en temperatur på i det mindste stuetemperatur og fortrinsvis indenfor området på ca. 50-100°C i nærværelse af en mild base, såsom natriumhydrogen-carbonat, f.eks. fortrinsvis i nærheden af neutralitet, såsom ved pH-værdi på ca. 6. Et overskud af thiolen anvendes fortrinsvis. Reaktionsproduktet isoleres ved omhyggelig forsyring af reaktionsblandingen efterfulgt.af ekstraktion med et med vand ublandbart organisk opløsningsmiddel .

Ved fremgangsmådevariant b) kan som salte, estere eller Schiff-baser af forbindelserne med formel XI anvendes de estere eller Schiff-baser, som er onhandlet af USA-patentskrift nr. 3.284.451 og britisk patentskrift nr. 1.229.453, og en hvilken som helst af de i U.S.A. patentskrift nr. 3.249.622 beskrevne silylestre til anvendelse med 7-amino-penicillansyre og anvendt ifølge britisk patentskrift nr. 1.073.530, og især pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, methoxymethyl-, acetonyl-, phenacyl-, p-nitrobenzyl-, β,β,β-trichlorethyl-, 3-phthaiidyl- og 5-indanylestrene.

7 145497

Som acyleringsmiddel kan ud over halogeniderne f.eks. anvendes de tilsvarende syreanhydrider, indbefattet blandede anhydrider og især de blandede anhydrider fremstillet ud fra stærkere syrer, såsom de lavere alifatiske monoestre af carbonsyre, eller alkyl- og arylsulfonsyrer eller af mere sterisk hindrede syrer, såsom diphenyleddikesyre. Tillige kan et syreazid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-nitro-phenol, 2,4-dinitrophenol, thiophenol, thioeddikesyre) anvendes, eller den frie syre kan i sig selv kobles med forbindelsen II efter forudgående omsætning af denne frie syre med N^'-dimethylchlorformiminium-chlorid [se britisk patentskrift nr. 1.008.17Q og Novak og Weichet, Experientia XXI, 6, 360 (1965)] eller ved anvendelse af enzymer eller af et N,N'-carbonyldiimidazol eller et Ν,Ν'-carbonylditriazol [se beskrivelsen til sydafrikansk patentskrift nr. 63/2684] eller et Carbo-diimidreagens [især N,N'-dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-diisopropylcarbo-diimid eller N-cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)carbodiimi^; se Sheehan og Hess, J. Amer. Chem. Soc., 77, 1967 (1955)1 eller af alkynylamin-reagens [se R. Buijle og H.G. Viehe, Angew. Chem. International Edition 2/ 582, (1964)] eller af et isoxazoliumsaltreagens [se R.B. Woodward, R.A. Olofson og H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc., 83, 1010 (1961)] ellér"" af et keteniminreagens [se C.L. Stevens og -M.E. Munk, J. Arner. Chem»-Soc., 80, 4065 (1958)] eller af hexachlorcyclotriphosphatriazin eller hexabromcyclotriphosphatriazin (se U.S.A. påtentskrift rir. 3.651.050) eller af diphenylphosphorylazid [DPPA; J. Amer. Chem. Soc., 94, 6203-6205 (1972)] eller af diethylphosphorylcyanid [DEPC; Tetrahedron Létters No. 18, pp. 1595-1598 (1973)] eller af diphenylphosphit [Tetrahedron Letters No. 49, pp. 5047-5050 (1972)]. En anden med syrechloridet ækvivalent forbindelse er et tilsvarende azolid, d.v.s. et amid af u den tilsvarende syre, hvis amidnitrogen er et element i en kvasiaroma-tisk, 5-leddet ring indeholdende i det mindste to nitrogenatafter, d.v.s. imidazol, pyrazol, triazolerne, benzimidazol, benzotriazol og deres substituerede derivater. Som et eksempel på den almene fremgangsmåde til fremstilling af et azolid omsættes N,N*-carbonyldiimidazol med en carboxylsyre i ækVimolære forhold ved stuetemperatur i tetra-hydrofuran, chloroform, dimethylfonnamid eller et lignende inert opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyreimidazolidet i praktisk taget kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og et mol imidazol. Dicarboxylsyre giver diimidazolid. Biproduktet, imidazol, udfælder og kan adskilles, hvorpå imidazolidet kan isoleres, men dette er ikke 8 145497 væsentligt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse omsætninger til fremstilling af en cephalosporin og de til isolering af den således fremstillede cephalosporin anvendte fremgangsmåder er velkendte i teknikken.

Ovenfor omtaltes anvendelse af enzymer til kobling af den frie syre med forbindelse II. Indenfor s-ådanne fremgangsmåders rammer er anvendelsen af en ester, f.eks. methylesteren, af denne frie syre sammen med enzymer, tilvejebragt ved hjælp af forskellige mikroorganismer, f.eks. de mikroorganismer, som er beskrevet af T. Takahashi et al,, J. Amer. Chem. Soc., 94(11) , 4035-4037 (1972) og T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan) 24 (5), 321-323 (1971) samt i U.S.A. patentskfift nr. 3.682.777.

Med henblik på koblingen af den organiske carboxylsyre som ovenfor beskrevet med forbindelse II (eller et salt eller fortrinsvis en let hydrolyserbar ester eller Schiff-base, såsom med benzaldehyd, deraf) er det også bekvemt og effektivt at gøre anvendelse af phosphor-nitrilchlorid-trimer som koblingsmiddel (J. Org. Chem., 33(7), 2979-81 1968) eller N-ethoxy-1,2-dihydroquinolin (EEDO) som beskrevet i J.

Amer. Chem. Soc., 90, 823-824 og 1652-1653 (1968) samt i U.S.A. patentskrift nr. 3.455.929. Omsætningen udføres fortrinsvis ved 30-35°C i benzen, ethanol eller tetrahydrofuran under anvendelse af omtrent ækvimolære mængder af alle tre reagenser efterfulgt af konventionel isolering og fjernelse ved konventionelle fremgangsmåder af alle eventuelt tilstedeværende blokerende grupper.

Til beskyttelse af aminogrupper ved de førnævnte reaktioner kan fx. anvendes grupper såsom 2-iodethoxycarbonyl (se britisk patent-skrift nr. 1.349.673), t-butoxycarbonyl, carbobenzyloxy, formyl, o-nitrophenylsulfenyl, β,β,β-trichlorethoxycarbonyl, 4-οχο-2-pentenyl-2 og l-carbomethoxy-l-propenyl-2-. I særlig grad er i sådanne blokerende grupper indbefattet ketonerne (især acetone) og aldehyderne (især formaldehyd og acetaldehyd), fx. omtalt i U.S.A. patentskrifterne nr. 3.198.804 og 3.347.851, samt β-ketoestrene og β-diketonerne, fx. omtalt i U.S.A. patentskrift nr. 3.325.479, samt β-ketoamiderne, omtalt i japansk patentskrift nr. 71/24714 (Farmdoc 47,321S).

De foretrukne pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, methoxy-methyl-, acetonyl- og phenacylestre kan fremstilles ved velkendte fremgangsmåder. En udmærket fremgangsmåde er den i U.S.A. patentskrift nr. 3.284.451 omhandlede, hvorved natriumcephalothin esteri-ficeres ved omsætning med den tilsvarende aktive chlor- eller bromforbindelse (fx. phenacylbromid, chloracetone, chlormethylether, 9 145497 pivaloyloxymethylchlorid [også benævnt chlorraethylpivalat], acetoxy-methylchlorid) og derefter fjernes thienyleddikesyresidekæden enzymatisk som beskrevet i samme patentskrift eller kemisk som beskrevet -; i U.S.A. patentskrift nr. 3.575.970 og i Journal of Antibiotics, ; XXIV (LL), 767-773 (1971). Ved en anden god fremgangsmåde omsættes triethylaminsaltet af 7-aminocephalosporansyre direkte med den aktive halogenforbindelse, som fx. beskrevet i britisk patentskrift nr. 1.229.453.

Til fjernelse af den eventuelt tilstedeværende esterificerende gruppe i slutproduktet kan f.eks. anvendes vandig eller enzymatisk -hydrolyse (f.eks. ved menneske- eller dyreserum) eller sur eller basisk hydrolyse eller behandling med natriumthiophenoxid som beskrevet i USA-patentskrift nr. 3.284.451 og for penicillinrækkens vedkommende af Sheehan et al. J. Org. Chem. 29(7), 2006-2008 (1964).

Ved behandling af bakterielle infektioner i mennesker administreres de omhandlede forbindelser parenteralt i en mængde på fra ca. 5 til 200 mg/kg/dag og fortrinsvis ca. 5 til 20 mg/kg/dag i opdelt dosering, f.eks. 3-4 gange pr. dag. Forbindelserne administreres i doseringsenheder, som f.eks. indeholder 125, 250 eller 500 mg aktiv bestanddel sammen med passende fysiologisk acceptable bærere eller exeipienser. Doseringsenhederne er i form af flydende præparater, såsom opløsninger eller suspensioner.

De til fremstilling af de omhandlede forbindelser anvendte andre reagenser kan syntetiseres, enten som beskrévet i teknikken (f.eks. som i de ovenfor anførte patentskrifter og publikationer) eller ved nøje analoge fremgangsmåder. Imidlertid er der til belysning herunder anført nogle specifikke eksempler på sådanne synteser, f.eks. til fremstilling af carboxylsyrer indeholdende en fri aminogruppe, som er blokeret med tert.-butoxycarbonyl.

2-aminomethyl-l,4-cyclohexadienyleddikesyre

En opløsning af 16,5 g (0,1 mol) o-aminomethylphenyleddikesyre i 1,5 liter flydende ammoniak (som er blevet behandlet med 50 mg lithium til fjernelse af et spor af fugt) fortyndedes langsomt med 500 ml tør t-BuOH. Til opløsningen sattes i små portioner 3,4 g (0,5 gatam) Li 10 145497 over en periode på 4 timer, og blandingen omrørtes i 16 timer ved stuetemperatur under fjernelse af den flydende ammoniak i et stinkskab og inddampedes til sidst til tørhed under 40°C. Remanensen opløstes i 500 ml vand, og opløsningen kromatograferedes på en søjle af "IR-120" (H+, 700 ml) -harpiks og elueredes med 1% NH^OHr-opløsning. Ninhydrin-positive fraktioner af eluatet kombineredes og inddampedes til tørhed. Remanensen udvaskedes med fire 50 ml portioner af varm acetone og omkrystalliseredes fra 500 ml ethanol-vand (1:1) til dannelse af 11,2 g (67%) farveløse nåle, a-(2-aminomethy1-1,4-cyclohexadienyl)eddikesyre. Smeltepunkt 183°C.

IR:S)^ 1630, 1520, 1380, 1356 cm”1, max NMR: i °2° + K2C03 2,72 (4H, s, H^cO , 3,01 (2H, s, CH2CO) , 3,20 (2H, s, CH2-N), 5,78 (2H, s, -J>C=).

Analyse beregnet for CgH^2N02: C: 64,65; H: 7,84; N: 8,38.

Fundet: C: 64,77; H: 8,06; N: 8,44.

Forbedret fremgangsmåde til fremstilling af a-(2-aminomethy1-1,4-cyclohexadienyl)-eddikesyre CH_NH0 /22

f/ λ Li, tert. BuOH

(' CH-COpH -^ \ / NH3 - TEA,HC1 w CH2NH2

Den af Welch, Dolfini og Giarrusso i U.S.A. patentskrift nr. 3.720.665 (eksempel 1) beskrevne fremgangsmåde til fremstilling af D-2-amino-2-(1,4-cyclohexadienyl)eddikesyre tilpassedes. En opløsning af 830 ml destilleret flydende ammoniak tørredes med 40 mg lithium under argon-atmosfære. Til denne omrørte opløsning sattes 11,0 g (0,07 mol) 2-aminomethylphenyleddikesyre og 340 ml tert. butylalkohol.

En totalmængde på 1,6 g (0,225 mol) lithium sattes til den kraftigt 11 145497 omrørte opløsning over en periode på 2 timer. Den grå blanding behandledes derefter med 35 g (0,215 mol) triethylamin (TEA) -hydrochlorid og omrørtes natten over ved stuetemperatur i 18 timer. Tert. butylalkoholen fjernedes ved 40°C (15 mm Hg) til dannelse af en hvid remanens, som tørredes i vakuum over ?2°5 natten over. Faststoffet opløstes i 30 ml i 1:1 methanol-vand og sattes under omrøring til 3,5 liter 1:1 chloroform-acetone ved 5°C. Blandingen omrørtes i 20 minutter, og aminosyren, a-(2-aminomethy1-1,4-cyclohexadienyl)eddikesyre opsamledes og tørredes i 16 timer i vakuum over P2°5 dannelse af 6,3 g (58%) hvide krystaller, smeltepunkt 190°C, dekomponering. IR- og NMR-spektrene var konsistente for strukturen.

2-(tert.-butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyleddikesyre

En opløsning af 19,31 g (0,135 mol) tert.-butoxycarbonylazid i 152 ml tetrahydrofuran (THF) sattes til en omrørt opløsning af 14,89 g (0,09 mol) 2-aminomethy1-1,4-cyclohexadienyleddikesyre og 7,20 g (0,18 mol) natriumhydroxid i 281 ml vand. Opløsningen omrørtes i 18 timer ved 25°C og filtreredes derpå gennem diatoméjord ("Super-cel"). THF'en fjernedes ved 40°C (15 mm Hg), og den resterende opløsning udvaskedes med ether (2 x 175 ml) og gjordes sur med 6 N saltsyre (HC1) . Blandingen omrørtes i et is-bad, og bundfaldet opsamledes og tørredes i 18 timer i vakuum over E*2®5 ve<^ 25°C til dannelse af 17,3 g (72,6%) 2-(tert.-butoxycarbonylaminomethyl)-l,4-cyclohexadienyleddikesyre som et hvidt pulver. IR- og NMR-spektrene var konsistente for denne struktur.

Fremstilling af 3-aminomethyl-2-thiopheneddlkesyre ,_/^2^2

I I

A) Thiophen-3-carboxaldehyd-dimethylacetal (2a)

En blanding af thiophen-3-carboxaldehyd ^ (322 g, 2,9 mol), trimethoxymethan (636 g, 6 mol) og "IR-120"-harpiks (H+, 6 g) i methanol (200 ml) opvarmedes under tilbagesvaling over en periode på 4 timer. Harpiksen fjernedes, og filtratet inddampedes under formindsket tryk til dannelse af en farveløs olie, som destilleredes under reduceret tryk. Udbytte 423 g (94%), kogepunkt 90-95°C, 13 mm Hg.

IR: -J1?^ 3150, 1045, 1025 cm"1.

NMR: å 3,21 (6H, s, OCH,) , 5,43 (IH, s, CH^ ), 7,0-7,4

PP1*1 J

(3H, m, thiophen-H).

S. Gronowitz, Arkev. kemi., 8, 411 (1955).

12 145497 B) .2-formylthiophen-3-carboxaldehyd-dimethylacetal (3a)

Til en omrørt opløsning af forbindelse 2a (423 g, 2,68 mol) i vandfri ether (1 liter) sattes dråbevis over 1 time en frisk fremstillet opløsning af n-butyllithium (27 mol) i ether under opvarmning til forsigtig tilbagesvaling under tør ^. Idet opvarmningen under tilbagesvaling fortsattes i 0,5 time, sattes dråbevis en opløsning af DMF (dimethyl-formamid) (432 g, 6 mol) i vandfri ether (0,8 liter) til blandingen over en periode på 0,75 time under kraftig omrøring. Efter fuldstændig tilsætning omrørtes blandingen natten over, hældtes på knust is (1 kg) under omrøring og henstilledes til opnåelse af stuetemperatur. Det organiske lag fraskiltes, og vandlaget mættedes med NaCl og ekstrahe-redes grundigt med ether (2 x 200 ml). Etherekstrakterne kombineredes, tørredes Over MgSO^ og koncentreredes. Remanensen destilleredes under formindsket tryk, og den blege gule olie opsamledes ved 100 - 125°C, 0,7 mm Hg. Udbytte 227 g (56%).

IR: iliq 3110, 1660, 1100 cm"1, max ' NMR: S 3,40 (6H, s, OOLj) , 5,86 (IH, s, C<q j , 7,27 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηβ), 7,81 (IH, d-d, J=l,5 og 6Hz, thiophen-Ηα), 10,34 (IH, d, J=l,5 Hz, -CHO).

C) l-methylsulfinyl-l-methylthio-2-(3-carboxaldehydethylenacetal- 2-thienyl)ethylen (4b)

Fremstilling af forbindelse 4b udførtes ved en fremgangsmåde i lig- 4) hed med den af K. Ogura et al. beskrevne. "Triton B" (40% i methanol, 2. ml) i THF (tetrahydrofuran) (5 ml) sattes til en opløsning af methyl- 2) methylthiomethylsulfoxid (2,5 g, 20 mmol) og 2-formyl-3-thiophencar-boxaldehyd-ethylenacetal3^ (3b). Blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i ca. 1 time og koncentreredes under formindsket tryk. Remanensen opløstes i benzen (150 ml) og ekstraheredes med vand (3 x 20 ml).

Det organiske lag tørredes over MgSO^ og inddampedes til tørhed under formindsket tryk. Remanensen søjle-kromatograferedes på silicagel (80 g), idet der elueredes med benzen (500 ml) og chloroform (500 ml) i rækkefølge. Fra chloroformeluatet isoleredes 4,9 g (85%) af produktet 4b som en bleggul olie.

IR: i)1;Lq 3110, 1600 cm-1, max

fTiH

NMR: $ 3 2,42 (3H, s, S-CH.J , 2,78 (3H, s, SO-CH,), 4,15 (4H, m,

ppm o V

13 145497 CH2CH2-), 6,12 (IH, s, ChC£ )/ 7,34 (IH, d, J=4,5Hz, thiophen-HØ), 7,40 (IH, d, J=4,5Hz, thiophen-Ηα), 8,28.(IH, s, -CH=).

Halv-carbazonen af forbindelse 4 fremstilledes ved en sædvanlig fremgangsmåde og udkrystalliseredes fra ethanol-DMF. Smeltepunkt 212-213°C.

Analyse beregnet for C: 39,58? H: 4,32? Ns 13,85? S:31,70.

Fundet: C: 39,46? H: 4,24? N: 14,05? S:31,63.

2) K. Ogura, et al., Bull. Chem. Soc. (Japan), 45, 2203 (1972).

3) D.W. McDowell et al., J. Org. Chem. 31, 3592 (1966).

4) K. Ogura, et al., Tetrahedron Letters, 1383 (1972).

D) l-methylsulfinyl-l-methylthio-2-(3-carboxaldehyddimethylacetal- 2-thienyl)ethylen (4a)

Forbindelsen 4a fremstilledes ved en lignende fremgangsmåde, scan den for forbindelse 4b anvendte. "Triton B" (40% i methanol, 50 ml) sattes til en opløsning af methyl-methylthiomethylsulfoxid (72 g, 0,58 mol) og forbindelse 3a (108 g, 0,58 mol) i THF (300 ral), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 4 timer. Adskillelse ved søjlekromatografi med silicagel (400 g), idet der elueredes med chloro->: form (5 liter) gav 130,5 g (78%) af forbindelse 4a som en bleggul olie.

IR: ^max 3100' 1580' 1100' 1050-1.

PPI

NMR: 2,42 (3H, s, S-CH,) , 2,70 (3H, -S, SO-CH,) , 3,34 (6H„ s, ppm λ 3 j 0CH3), 5,56 (IH, s, CH<~ ), 7,20 (IH, d, J=6Hz, thiophen-HØ), 7,40 .

(IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηα), 8,12 (IH, s, -CH=).

E) Ethyl-3-formyl-2—thlenylacetat4^ (5) Tør hydrogenchlorid (33 g) absorberedes i vandfri ethanol (500 ml)· Til denne opløsning sattes forbindelse 4a (130 g, 0,45 mol), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 5 minutter. Reaktionsb lander gen fortyndedes med vand og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen ekstraheredes med benzen (2 x 100 ml), og benzenekstrakterne kombineredes, udvaskedes med vand (50 ml), tørredes over MgSO^ og inddampedes til tørhed. Den olieagtige remanens søjle-kromatogråferedes på silicagel (400 g), idet der elueredes med chloroform (5 liter). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt kombineredes og koncentre 145497 14 redes. Den resterende olie (60 g) destilleredes under formindsket tryk til tilvejebringelse af 23 g (23%) af forbindelse 5, som kogte ved 120-126°C/1 mm Hg).

IR: V liq 3110, 1730, 1670 cm"1, max mpi NMR: S 3 1,30 (3H, t, J=6Hz, -CH-CH-J , 4,25 (2H, q, J=6Hz, ppm 4 “j -CH2CH3), 4,26 (2H, s, -CH2C0), 7,25 (IH, d, J=5Hz, thiophen-HØ), 7,48 (IH, d, J=5Hz, thiophen-Ηα), 10,15 (IH, s, CHO).

Den analytiske prøve af forbindelse 5 fremlagdes som 2,4-dinitro-phenylhydrazonen, som omkrystalliseredes fra chloroform. Smeltepunkt 178-179°C.

IR: ^ n“3o1 1720, 1610, 1570 cm"1, max

Analyse beregnet for C-^H-^N^OgS: C: 47,62; H: 3,73; N: 14,81; S: 8,47. Pundet: C: 47,33; H: 3,47; N: 14,77; S: 8,68.

Ved den samme fremgangsmåde behandledes 2,2 g (7,6 mmol) af ethylenacetalen 4b med 1,1 g tør hydrogenchlorid i 800 ml vandfri ethanol til tilvejebringelse af forbindelse 5, som rensedes ved søjlekromatografi på silicagel (30 g). Eluering med chloroform gav 663 mg (44%) af forbindelse 5 som en bleggul olie.

P) Ethyl-3-formyl-2-thienylacetat-oxim (6)

Natriumcarbonat (1,7 g, 16 mmol) sattes til en opløsning af aldehydet 5, (3,14 g, 16 mmol) og hydroxylamin-hydrochlorid (2,2 g, 32 mmol) i 50% vandig ethanol (40 ml) ved 5°C under omrøring. Reaktionsblandingen opvarmedes til stuetemperatur. Efter 2,5 timer koncentreredes reaktionsblandingen under formindsket tryk. Remanensen ekstrahe-redes med benzen (3 x 50 ml). Benzenekstrakterne udvaskedes med vand (10 ml), tørredes over MgSO^ og inddampedes under formindsket tryk. Adskillelse ved søjle-kromatografi på silicagel (60 g) gav 2,7 g (80%) farveløs olie 6.

IR: vliq 3400, 1730, 1620 cm"1, max NTdR: 5 pp®t0n_d6 1,23 (3H, t, J=7,5Hz, -CH2CH3) , 4,01 (2H, s, -CH2C0), 4,14 (2H, q, J=7,5Hz, -CH2CH3), 7,31 (2H, s, thiophen-H), U5497 (2H, s, thiophen-H), 8,26 (IH, s, -CH=N), 10,15 (IH, s, NOH, forsvandt ved tilsætning af D20).

G) j-lactamen af 3-aminomethyl-2-thienyleddikesyre (7)

Fremgangsmåde A: Katalytisk reduktion.

En blanding af oximen 6 (2,65 g, 12,4 mmol) 10% palladium-på-trækul, tør hydrogenchlorid (1,4 g, 37,2 mmol) i vandfri ethanol (68 ml) hydrogeneredes natten over under atmosfærisk tryk ved stuetemperatur.. Katalysatoren udskiftedes 2 gange, og omsætningen udførtes over en periode på 3 dage. Katalysatoren fjernedes, og filtratet koncentreredes under formindsket tryk. Til remanensen sattes vand (10 ml), og blandingen udvaskedes med ethylacetat (2 x 10 ml). Det vandige lag ihstilledes til pH-værdien 9 med natriumcarbonat, mættedes med natriumchlorid, og ekstraheredes med ethylacetat (3 x 20 ml). Ethylacetatekstrakterne tørredes over MgSO^, behandledes med trækul og inddampedes under formindsket tryk. Omkrystallisation fra ethylacetat gav 417 mg (22%) farveløse nåle 7, som smeltede ved 194 - 195°C.

IR: V KBr 3200, 1650, 1480 cm"1, max NMR: i -°-«6 3,53 (2H, t, J=3Hz, -CH2CO-) , 4,36 (2H, d-t, J=3, 1,5Hz, skiftede til en triplet ved tilsætning af D20, J=3Hz, CH2N), 6,95 (IH, d, J=4,5Hz, thiophen-H£), 7,45 (IH, d, J=4,5Hz, thiophen-Ηα), 8,0 (IH, m, forsvandt ved tilsætning af D20, NH).

Analyse beregnet for C^H^NOS: C: 54,88? H: 4,61; N: 9,14; S: 20,93.

Fundet: C: 55,04; H: 4,45; N: 9,13; S: 20,50.

Fremgangsmåde B: Zn-støy reduktion.

Til en opløsning af oximen 6 (18,3 g 86 mmol) i eddikesyre (200 ml) sattes portionsvis zinkstøv (17 g, 258 nmtol) over en periode på 1 time ved 40-50°C under kraftig omrøring. Reaktionsblandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur og opvarmedes til 60°C i 4 timer. Indhold det frafiltreredes, og filtratet koncentreredes under formindsket tryk. Til remanensolien sattes vand (100 ml), og blandingen udvaskedes med ether (2 x 50 ml). Den vandige opløsning faseadskiltes med ethylacetat (100 ml) og indstilledes til pH-værdi 10 med natriumcarbonat. Bundfal*· det frafiltreredes. Filtratet ekstraheredes med ethylacetat. Ethyl-acetatekstrakterne udvaskedes med vand (10 ml), tørredes over MgSO^ og inddampedes under formindsket tryk. Det resterende faststpf tritur 15 145497 reredes med benzen. Krystallisation fra ethylacetat gav 2,7 g (21%) af lactamen 7, som var identisk med det ved fremgangsmåde A fremstillede produkt med hensyn til IR- og NMR-spektrene.

H) 3-aminomethyl-2-thienyleddikesyre (8)

En blanding af lactamen 7 (2,88 g, 18,8 mmol) og 6N saltsyre (50 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 3 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes under formindsket tryk. Til remanensen sattes vand (20 ml), og blandingen behandledes med trækul og inddampedes under formindsket tryk. Triturering af remanensen med THF gav aminosyre 8 hydrochlo-rid (3,72 g, 95%, smeltepunkt 171-172°C, IR (KBr) cm”1: 3450, 3000, 1700, 1200; NMR (C20)ppm: 4,80 (2H, s, -CH2C0), 4,27 (2H, s, CH2~N), 7,26 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηβ), 7,53 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηα). Hydro-chloridet (3,71 g, 17,9 mmol) opløstes i vand (10 ml), kromatografere-des på en søjle af "IR-120" (H, 30 ml) og elueredes i rækkefølge med vand (100 ml) og 5N NH^OH (2 liter). Ammoniakeluatet inddampedes til tørhed. Remanensen udkrystalliseredes fra vandig acetone til dannelse af 3,0 g (98%) af forbindelse 8, smeltepunkt 223-225°C.

IR: 3000, 1620, 1520 cm”1.

NMR: SD20-Na2C°3 3,20 (2H, s, -CH-CO), 4,13 (2H, s, CH-N), PPIU 4 7,04 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηβ), 7,30 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηα).

Analyse beregnet for C^HgNC^S: C: 49,10; H: 5,30; N: 8,18; S: 18,73. Fundet: C: 48,53; H: 5,22; N: 7,98; S: 18,97.

3-t-butoxycarbonylaminomethyl-2-thienyleddikesyre (9)

En blanding af 3-aminomethyl-2-thienyleddikesyre (3 (3,1 g, 18 mmol) og triethylamin (8 g, 80 mmol) i 50% vandig acetone (80 ml) tilsattes dråbevis t-butoxycarbonylazid (5,7 g, 40 mmol) over en periode på 20 minutter ved 0°C Under kraftig omrøring. Reaktionsblandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur og koncentreredes under formindsket tryk. Koncentratet udvaskedes med ether (2 x 20 ml), indstilledes til pH-værdi 2 med koncentreret HC1 og ekstraheredes med ethylacetat (2 x 50 ml). Ethylacetatekstrakterne udvaskedes med mættet vandig natriumchlorid, tørredes over MgSO^, behandledes med trækul og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med n-hexan og udkrystalliseredes fra n-hexan og benzen til dannelse af 4,5 g (92%) farveløse nåle 9^, o der smeltede ved 62-63 C.

17 145497 IR: * nujo1 3350, 1700 cm"1, max NMR: 1,43 (9H, s, BOC-H), 3,27 (2H, s, CH-CO) , 4,16 (2H, .

ppm *” * d, J=6Hz, CH2"N, en singlet, når D20 tilsattes), 5,00 (IH, br, -NH-, forsvandt ved tilsætning af D20), 6,30 (IH, bred s, -COOH, forsvandt ved tilsætning af D20), 6,86 (IH, d, J^eHz, thiophen-Ηβ), 7,06 (lH,dr J=6Hz, thiophen-Ηα).

Analyse beregnet for C]_2H17N04^: C: 52,89? H: 6,29? N: 5,14? S: 11,77. Fundet: C: 53,30?. H: 6,39; N: 5,13; S: 11,72.

Fremstilling af 2-N-methylamlnomethyl-4-methoxy-(og 4-hydroxy-)phenyl-eddikesyrer H0“fi^j|-CH2NH2 Ts_cl HO-^^^jpCHgNH-Ts CH T 1^>-CH2C02H > —J j, 1 2 CH, j 5 HJC°TirCH2l<'TS Na/flydenSe H^CO-fi^^^-OHpNH-CB, n„3 ^ k^CHjCCyi 1 k& HBr

VK

ho-t^Vg^nh-c:^

.^jJ-CH2C02H

Vb 18 14S497 2-N-tosylaminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre (2)

Til en opløsning af 14,56 g (0,08 mol) 2-aminomethyl-4-hydroxy-phenyleddikesyre (1) (se U.S.A. patentskrift nr. 3.823.141) og 13 g (0,32 mol) natriumhydroxid i 200 ml vand sattes dråbevis under omrøring ved 65-70°C en opløsning af 18,5 g (0,097 mol) p-toluensulfonylchlorid (Ts-Cl) i 50 ml tør ether, og blandingen henstilledes ved samme temperatur i 1 time. Efter afkøling af blandingen fraskiltes det vandige lag, som udvaskedes med ether (2 x 50 ml), gjordes surt med 6N HCl og ekstra-heredes med 400 ml ethylacetat. Ekstrakten udvaskedes med vand og en mættet vandig NaCl-opløsning, tørredes over Na^O^ og behandledes med aktivt carbon (1 g). Filtratet koncentreredes til tørhed, og remanensen udkrystalliseredes fra ethylacetat til dannelse af 11,0 g (40,5%) af forbindelse 2, som smeltede ved 212-215°C.

IR: $ ;KBr 3240, 1700, 1380, 1330, 1150 cm"1.

IQclX

OV: a1%K2C03 230 nm (6: 7,750) max NMR: 2,47 (3H, s, Ar-CH-), 3,60 (2H, s, CH-CO), 3,93 ppm <3 & (2H, d, J=6,0 Hz, CH2N), 6,6-8,2 (7H, m, phenyl-H).

2-(N-methyl-N-tosylamino)methyl-4-methoxyphenyleddikesyre (3)

En blanding af 11 g (0,033 mol) af forbindelse 2, 10,3 ml (0,17 mol) methyliodid og 9,2 g (0,24 mol) natriumhydroxid i 100 ml vand opvarmedes ved 80-90°C i 45 minutter i et forseglet rør med lejlighedsvis omrystning. Blandingen udvaskedes med ethylacetat (30 ml), og vandlaget gjordes surt med 6N HCl og ekstraheredes med ethylacetat (3 x 30 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med vand (30 ml) og en mættet vandig NaCl-opløsning (30 ml), behandledes med aktivt carbon (1 g) og tørredes over Na2S04· Filtratet inddampedes til tørhed, og remanensen udkrystalliseredes fra benzen til dannelse af 8 g (66,5%) af Ν,Ο-dimethylderivatet 3, som smeltede ved 146-150°C.

IR: 9 S?r 1690, 1500, 1340, 1280, 1150 cm"1, max UV: 2 ?Ϊ°Η 229 nm («: 20500), 278 nm (£: 2400).

ΙϊΙαΧ NMR: ipp^°"d6 2,52 (3H, s, N-CH3), 2,47 (3H, s, Ar-CH3), 3,67 (2H, s, CH2C0), 3,74 (3H, s, 0CH3), 4,10 (2H, s, CH2N), 6,7-7,8 (7H, m, Ar-H), 11,5 (IH, br-s, COOH).

145497 19

Analyse beregnet for ci8H2iN05®: C: 59,49; H: 5,82; N: 3,84; S: 8,82. Fundet: C: 59,48; H: 5,68; Ns 3,37; S: 9,22.

2-N-methylainlnomethyl-4-inethoxyphenyleddlkesyre (4a) ,

Til en opløsning af flydende ammoniak (300 ml) sattes 9,4 g (0,026 mol) af forbindelse _3 ved -50°C, og blandingen.omrørtes, indtil en. klar opløsning opnåedes ved samme temperatur. Til opløsningen sattes 3,3 g (0,14 gatom) Na i små stykker ved -40°C, og blandingen omrørtes i 2 timer. Ammoniak afdampedes, og remanensen opløstes omhyggeligt i 100 ml vand. Til opløsningen sattes 100 ml "Amberlite IR-C 50" (ammoniumtype), og blandingen omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur. Harpiksen fjernedes, og filtratet behandledes med bariumacetat, indtil der ikke mere bemærkedes udfældning. Bundfaldet frafiltreredes, og filtratet kromatograferedes med en søjle af "IR-120"-ionbyggerharpiks (H , 100: ml), idet der elueredes med 5-10% ammoniak. Eluatet (2 timer) indeholdende det ønskede produkt, inddampedes til tørhed under 50°C, og remanensen tritureredes med acetone til dannelse af 4,4 g (81%) af forbindelse _4a, smeltepunkt 225-227°C.

IR: S> KBr 1590, 1380, 1260, 1035 cm"1, max NMR: å°2? 2,77 (3H, s, N-CH.J , 3,6 (2H, s, CH9C0) , 3,87 (3H, s, ppm «3 4 0CH3), 4,18 (2H, s, CH2N), 6,8-7,4 (3H, m, phenyl-H).

2-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre (4b)

En blanding af 2,9 g (0,014 mol) af forbindelse 4a i 30 ml 48% hydrogenbromidsyre opvarmedes under tilbagesvaling i 5 timer,, og opløsningen inddampedes til tørhed. Remanensen opløstes i 50 ml vand. Opløs- 4* ningen kromatograferedes på en søjle af "Amberlite IR^120" (¾ ,50 ml), idet der elueredes med 5-10% ammoniak. Eluatet opsamledes i 250 ml fraktioner. Fraktioner indeholdende produktet kombineredes og inddampedes til tørhed under 50°C. Remanensen tritureredes med acetone til dannelse af 1,3 g (48,5%) af forbindelse 4b, som udkrystalliseredes fra 80% ethanol. Smeltepunkt 218-221°0.

IR: ) ΚΒί 2000-3400, 1610, 1540, 1460, 1380, 1270 cm'1.-

IticlX

UV: A1%K2C03 243 nm (£: 4700), 297 nm fe : 1350).

IUclX

NMR: fB2°+Na0H 2,64 (3H, s, N-CH-), 3,47 (2H, s, CH,CO), 3,94 ppm j 4 20 1A5497 (2H, s, N-CH2), 6,5-7,2 (3H, m, phenyl-H).

Analyse beregnet for C^qH^NO^: C: 61,53 ; H: 6,71; N: 7,17.

Fundet: C: 61,44; H: 6,81; N: 7,20.

2-N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-inethoxyphenyleddikesyre (5, R = CH3)

En blanding af 1,05 g (5 mmol) af forbindelse 4a, 1,43 g (6 mmol) t-butyl-4,6-dimethylpyrimidin-2-ylthiolcarbonat og 1,4 ml triethylamin i 40 ml 50% THF omrørtes ved stuetemperatur i 20 timer. Det meste af THF'en afdampedes, og den resulterende vandige opløsning (ca. 20 ml) udvaskedes med ether. Vandlaget gjordes surt med 6N HCl og ekstrahere-des med ether (3 x 10 ml). De etheriske ekstrakter udvaskedes med vand (10 ml), og en mættet vandig NaCl-opløsning (10 ml), behandledes med en lille mængde aktivt carbon og tørredes over Na2SO^. Filtratet inddampedes til tørhed til dannelse af 1,0 g (77,5%) af forbindelse _5 (R = CH3) som en olie.

NMR:& pp^X3 1,47 (9H, s, BOC-H), 2,77 (3H, s, N-CH3), 3,60 (2H, s, CH2C0), 3,79 (3H, s, 0-CH3), 4,49 (2H, s, CH2N), 6,1-7,3 (3H, m, phenyl-H).

2-N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre (5, R = H) .

En blanding af 1 g (4,78 mmol) af forbindelse 4b, 1,5 g (6,3 mmol) t-butyl-4,6-dimethylpyrimidin-2-ylthiolcarbonat og 2,1 ml triethylamin i 50 ml 50% vandig THF-opløsning omrørtes ved stuetemperatur i 20 timer. Blandingen koncentreredes til 20 ml under formindsket tryk. Koncentratet udvaskedes med ether (10 ml), gjordes surt med 6N HCl og ekstraheredes med ethylacetat (2 x 100 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med vand (30 ml) og en mættet vandig NaCl-opløsning (2 x 30 ml), behandledes med en lille mængde aktivt carbon og tørredes over vandfri Na2SO^. Filtratet inddampedes til tørhed til dannelse af 1,3 g (92%) af forbindelse _5 (R = H) som en olie.

IR: -).1^ 3000-3600, 1670, 1260, 1150 cm"1.

NMR: ^p^13 1,44 (9H, s, C(CH3)3), 2,73 (3H, s, N-CH-j), 3,54 (2H, s, CH2CO), 4,38 (2H, s, CH2N), 6,5-7,3 (3H, m, phenyl-H).

\_ 21 145497

Fremstilling af ortho-N-methylaminomethyl-phenyleddikesyre CH2NH2 CH5~4 >302c1 CH2C02H -1=1--» r^CH^SOj-^VcH, c ht CH2C02H '—' 1-* 2 CHj |<ii:^CH2NS02·-/ V-CH^ _HBr_^ U>, JL CH9C0oH '-' eller * d d , Na/f lydende NH3 3 CH, CH, j 3 j, 3

J^^j'pCHgNH _ CHgM-BOC

kACH2C°2H kJ-CK2C02H

i S

CH, I 5 BOC : CH,-C-0C0-' ~ 5 i CH, · 3 22 145497 o- (p-toluensulfonylaminomethyl) phenyleddikesyre {2)

Til en omrørt opløsning af o-aminomethylphenyleddikesyre,hydrochloric! (7,50 g, 37 mmol) og natriumhydroxid (4,74 g, 118 mmol) i vand (100 ml) sattes p-toluensulfonylchlorid (7,64 g, 40 mmol) i portioner ved 60°C. Blandingen omrørtes i 1 time ved samme temperatur og gjordes sur med saltsyre. Blandingen ekstraheredes med ethylacetat (4 x 50 ml). De kombineredes ekstrakter udvaskedes med vand, behandledes med en lille mængde carbon og tørredes. Opløsningsmidlet afdampedes under formindsket tryk, og remanensen udkrystalliseredes fra ethylacetat til tilvejebringelse af forbindelse 2 som farveløse prismer. Udbytte 9,84 g (84%). Smeltepunkt 155-156°C.

IR: S)nuj 3300, 1705, 1335, 1170 cm"1, max NMR: Spp®°"d6 2,38 (3H, s, CHj) , 3,65 (2H, s, CH2CO), 3,97 (2H, d, J=5Hz, CH2N), 7,1-8,2 (9H, m, phenyl-H & NH).

Analyse beregnet for C^gH^NO^S: C: 60,17} H: 5,37} N: 4,39; S: 10,10.

Pundet: C: 60,11, Ht 5,43, N: 4,28, S: 9,72, 60,15} 5,40} 4,30} 9,80.

o- (N-p-toluensulfony1-N-methylaminomethyl)phenyleddikesyre (3)

En blanding af forbindelse 2 (9,0 g, 28 mmol) natriumhydroxid (6,0 g) og methyliodid (6 ml) i vand (60 ml) opvarmedes i et forseglet rør i 30 minutter ved 70°C. Efter afkøling gjordes reaktionsblandingen sur med saltsyre til udskillelse af bleggult bundfald, som udkrystalliseredes fra ethylacetat-n-hexan til dannelse af farveløse prismer 3^. Udbytte 8,5 g (91%). Smeltepunkt 162-163°C.

IR: v>fBr 2700-2300, 1700, 1600, 1345, 1200, 925 cm"1.

iuoX

NMR: iD20+K0H 2,37 (3H, s, CEU), 2,49 (3H, s, CH,), 3,80 (2H, s, ppm o CH2CO), 4,18 (2H, s, CH2N), 7,0-8,0 (8H, m, phenyl-H).

Analyse beregnet for C^H^NC^: C: 61,24} H: 5,74} N: 4,20} S: 9,61.

Fundet: C: 61,31, H: 5,73, N: 4,51, S: 9,63, 61,36; 5,71; 4,29; 9,55.

N-methylaminomethylphenyleddikesyre (4)

Fremgangsmåde A (hvor der anvendes hydrogenbromidsyre).

En blanding af 28,6 g (0,086 mol) af forbindelse 3 og 20 g (0,213 23 145497 mol) phenol 1 260 ml 48% hydrogenbromldsyre opvarmedes under tilbage^, svaling i 30 minutter. Blandingen afkøledes, fortyndedes med samme rumfang vand og udvaskedes med ethylacetat (2 x 50 ml). Det vandige lag inddampedes til tørhed under formindsket tryk til dannelse af en olie, som kromatograferedes på en søjle af "Amberlite IR-120" (H+ form, 200 ml), idet der elueredes med 5% ammoniumhydroxidopløsning. Eluatet (2,5 liter) opsamledes og inddampedes til tørhed under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med acetone og udkrystalliseredes fra ethanol til tilvejebringelse af 6,7 g (43,5%) af forbindelse 4^ som farveløse nåle, som smeltede ved 168-170°C (dekomponering).

Fremgangsmåde B (hvor der anvendes metallisk natrium i flydende ammoniak).

Til en blanding af forbindelse (35 g, 0,105 mol) i flydende ammoniak (1000 ml) sattes 13,3 g (0,578 g atom) natrium i små stykker under kraftig omrøring over en periode på 2 timer. Ammoniakken afdampedes under omrøring på vand-bad i et godt ventileret stinkskab og slutteligt under formindsket tryk til dens fuldstændige fjernelse. Remanensen opløstes i isvand (400 ml), og opløsningen omrøres med ion-bytterharpiks 'lRC-50n (H+ form, 400 ml) i 0,5 time ved stuetemperatur. Harpiksen frafiltreredes, og til filtratet sattes en vandig 1 M opløsning af bariumacetat, indtil der ikke mere dannedes bundfald (ca. 50 ml af bariumacetatopløsningen krævedes). Blandingen filtreredes, og fil-tratet kromatograferedes på en søjle af "IR-120" (H form, 400 ml) som i fremgangsmåde A til dannelse af 13,6 g (72%) af forbindelse 4_.

o- (N-methyl-N-t-butoxycarbonylaminomethyl) phenyleddikesyre (f>) t-butyl-4,6-dimethylpyrimidin-2-ylthiolcarbonat (11 g, 0,048 mol) sattes i én portion til en blanding af forbindelse £ (7,2 g, 0,04 mol) og 1,1,3,3-tetramethylguanidin (6,9 g, 0,06 mol) i 50% vandig THF, og blandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur. Idet THF'en afdampedes under formindsket tryk, gjordes den vandige opløsning sur til pH-værdi 2 med fortyndet saltsyre og ekstraheredes med ethylacetat (2 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med vand, behandledes med en lille mængde aktivt carbon og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med hexan og udkrystalliseredes fra n-hexan-ether til tilvejebringelse af 9,2 g (83%) af forbindelse 5/ som farveløse prismer. Smeltepunkt 96-98°C. ' IR: 1730' 163°/ 143°/ 1830, 1250 cm-1·

lUclX

24 U5497 NMRj 1,49 (9H, s, t-butyl) , 2,78 (3H, s, N-CH3) , 3,72 (2H, s, CH2CO), 4,25 (2H, S, CH2N), 7,28 (4H, s, phenyl), 9,83 (IH, s, -COOH).

Analyse beregnet for cy5^21^4: C: ®^'50; Hs 7,58; N: 5,01.

Fundet: C: 64,69; H: 7,66; N: 4,89.

Fremstilling af 3-N-methylaminomethyl-2-thienyleddikesyre

Π-rrCH-NOH Π-NaH, CH,I

USWs-» UJ« ~> 1 .2 uC? —. gci? ‘ /‘ CH-j I 3

(1-rrCHcH-B0C

^ s JJ-CH2C00H

5 3-aminomethyl-2-thienyleddikesyre-/-lactam (2)

Iseddike (140 ml) sattes dråbevis under omrøring til en blanding af 2-ethoxycarbonylmethylthiophen-3-carboxaldehyd-oxim (1) (41 g, 0,19 mol) og zinkstøv (65,4 g, 1 mol) i methanol, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling og omrørtes i 4 timer. Blandingen afkøledes, og uopløselige rester fjernedes ved filtrering og udvaskedes med methanol (3 x 50 ml). Filtratet kombineredes med vaskevæskerne og inddampedes i vakuum til tørhed, hvorpå remanensen ekstraheredes med methanol (5 x 100 ml). Methanolekstrakterne kombineredes og inddampedes under U5497 formindsket tryk. Til remanensen sattes vand (50 ml), og blandingen indstilledes til pH-værdi 10 med Na2C02 og ekstraheredes med chloroform (3 x 100 ml). De kombinerede chloroformekstrakter udvaskedes med vand (10 ml), tørredes over MgS04 og inddampedes under formindsket tryk. Remanen so lien (30 g) triturerede® med varm benzen (150 ml). De farveløse nåle opsamledes ved filtrering og omkrystalliseredes fra ethylacetat til dannelse af lactamen 2 (7,7 g, 26%), som smeltede ved 195-196°C.

232 ran (£: 6500).

Analyse beregnet for CyHyNOS: C: 54,88? H: 4,61? N: 9,14? S: 20,93. Fundet: C: 55,04? H: 4,45? N: 9,13? S: 20,50.

3-N-methylaminomethyl-2-thlenyleddlkesyre-^-lactam (3)

Til en opslæmning af natriumhydrid (50% i paraffin# 1,82 g, 38 mmol) i absolut benzen (500 ml) sattes lactamen 2 (4,85 g, 32 mmol) under omrøring under nitrogenatmosfære, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 2 timer. Methyliodid (22,7 g, 160 mmol) tilsattes i én portion ved stuetemperatur, og blandingen opvarmedes igen under tilbagesvaling i 2 timer. Is-vand (50 g) sattes til blandingen, og organisk lag fraskiltes. Det vandige lag ekstraheredes i rækkefølge med benzen (2 x 50 ml) og chloroform (50 ml). Ekstrakterne kombineredes og tørredes over MgSO^. Opløsningsmidlet afdampedes under formindsket tryk.

Til remanensen sattes en varm blanding af benzen-n-hexan (1?1, 100 ml) til udvinding af forbindelse 2 som nåle (2,02 g, 42%). Filtratet, inddampedes, og remanensen udkrystalliseredes fra benzen-n-hexan t}.l tilvejebringelse af farveløse plader 3. Udbytte: 2,7 g (51%). Smeltepunkt 98-100°C.

IR: ^nu3o1 1620 cm vmax NMR: £chc13 3/15 (3Hf S/ N-ch ), 3,72 (2H, t, J=3Hz, CH-GO), max V * 4,53 (2H, t, J=3Hz, -CH2-N), 6,87 (IH, d, J=4,5Hz, thiophen-H§), 7,30 (IH, d, J=4,5Hz, thlophen-Ηα).

UV: A Me0H 232 nm (£ : 6700). max

Analyse beregnet for CgH^NOS: C: 57,46? H: 5,42? N: 8,38? S: 19,17. Fundet: C: 57,56? H: 5,26? N: 8,31? S: 19,13.

26 145497 3-(N-methylaminomethyl)-2-thienyleddikesyre (4)

En blanding af lactamen ^ (3,5 g, 21 mmol) og 6N HCl (100 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 12 timer. Blandingen behandledes med carbon og koncentreredes til tørhed under formindsket tryk. Remanensolien opløstes i vand (10 ml) og kromatograferedes på en søjle af "IR-120" (H+, 50 ml). Søjlen elueredes med vand (200 ml) og 5N NH^OH (3 liter). Aminosyren _4 (3,0 g, 77%) isoleredes ved inddampning af ammoniakeluaterne efterfulgt af udkrystallisation fra vandig acetone. Smeltepunkt 181-182°C.

IR: S>'KBr 1570, 1360 cm-1.

'max NMR:J D2° 2,21 (3H, s, N-CH,) , 3,80 (2H, s, CH-CO), 4,20 (2H, s, ppltl <5 * CH2-N), 7,19 (IH, d, J=6Hz, thiophen-HØ), 7,46 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ha).

UV: A®2° 237 nm (£: 7600).

ItlcLX

Analyse beregnet for C8HnN02S: C: 51,87; H: 5,99; N: 7,56; S; 17,31. Fundet: C: 51,67; H: 6,50; N: 7,28; S: 16,69.

3- (N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl) -2-thienyleddikesyre (5)

Til en blanding af 3-N-methylaminomethyl-2-thienyleddikesyre £ (2,7 g, 14,6 mmol) og triethylamin (6 g, 60 mmol) i 50% vandig acetone (60 ml) sattes dråbevis t-butoxycarbonylazid (4,2 g, 29,2 mmol) over en periode på 20 minutter ved 0°C under kraftig omrøring. Reaktionsblandingen omrørtes natten over ved stuetemperatur og koncentreredes under formindsket tryk. Koncentratet udvaskedes med ether (2 x 20 ml), indstilledes til pH-værdi 2 med koncentreret HCl og ekstraheredes med ethylacetat (2 x 50 ml). Ethylacetatekstrakterne udvaskedes med en mættet vandig NaCl-oplØsning, tørredes over MgSO^, behandledes med trækul og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med n-hexan og udkrystalliseredes fra n-hexan-benzen til dannelse af 3,68 g (88%) af farveløse nåle j>, som smeltede ved 82-83°C.

IR: y^01 1730, 1640 cm *".

(TIPI

NMR:S „3 1,47 (9H, s, BOC-H), 2,78 (3H, s, N-CH.J , 3,87 (2H, ppm j s, CH2-CO), 4,48 (2H, s, CH2“N), 6,91 (IH, d, J=6Hz, thiophen-H£), 7,20 (IH, d, J=6Hz, thiophen-Ηα), 10,63 (IH, s, C02H, forsvandt ved 27 145497 tilsætning af D20).

Analyse beregnet for C^H^NC^S: C: 54,72? H: 6,71; N: 4,91; S: 11,24. Fundet: C: 54,91; H: 6,85; N: 4,92; S: 11,19.

Anvendelsen af en "en-amin"-blokerende gruppe i en vordende 7-sidekæde, som indeholder en fri aminogruppe,.forud for acylering af en kerne, såsom.II heri, er velkendt, f.eks. fra U.S.A. patentskrift nr. 3.223.141, U.S.A. patentskrift nr. 3.813.390, U.S.A. patentskrift nr. 3.813.391, U.S.A. patentskrift nr. 3.823.141 og belgisk patentskrift nr. 773.773.

Natrium-2-[N-(l-carbethoxypropen-2-yl) amlnomethyl]-1,4-cyclo-hexadlenylacetat

Til en omrørt opløsning af 460 mg (0,02 g atom) metallisk natrium i 100 ml absolut EtOH sattes 3,34 g (0,02 mol) 2-aminomethyl-l,4-cyclohexadienyleddikesyre og 3,1 g (0,024 mol) ethylacetoacetat, og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 4 timer under omrøring. Den varme reaktionsblanding filtreredes, og filtratet henstilledes med henblik på at holde det koldt natten over til dannelse af 2,0 g farveløse nåle, som smeltede ved 264°C. Yderligere produkt (3,3 g) opnåedes ved koncentrering af moderluden. Totaludbyttet var 5,3 g (88%).

IR: ^ 3300, 1635, 1600, 1570, 1300, 1275, 1170, 1090 cm"1.

NMR: $ °2° 1,23 (3H, t, 7Hz, CH2CH3), 1,96 & 2,25 (3H, a, -C*C-Cf3, cis & trans), 2,70 (4H, s, H2C O, 3,04 (2H, s, CH2CO), 3,66 & 3,95 (2H, s, CH2~N, cis & trans), 4,07 (2H, q, 7Hz, CHjCH-j) ,. 4,45 & 4,56 (IH, s, =^”H, cis & trans), 5,76 (2H, s, )

Analyse beregnet for C^H^NO^Na: C; 59,79: H: 6,69; N: 4,64.

Fundet: C: 59,69; H: 6,76; N: 4,75.

2-t-butoxycarbonylaminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre fremstilles f.eks. ved fremgangsmåden ifølge U.S.A. pal^entskrift nr. 3.823.141. .....

O- (N-methylaminomethyl) phenyleddlkesyre-<g-lactam 1 OOc™3 28 145Λ97

Natriuiuhydrid (57% i paraffin, 4,3 g, 0,11 mol) udvaskedes med tør n-hexan og opslæmmedes i tør benzen (100 ml). Til opslæmningen sattes en opløsning af o-aminometh.ylphenyleddikesyre-£-lactam (se U.S.A. patentskrift nr. 3.796.716) (14,7 g, 0,1 mol) i tør benzen eller xylen (200 ml) under omrøring under nitrogenatmosfære. Blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time og afkøledes derefter til stuetemperatur. Til blandingen sattes methyliodid (18 ml) i én portion, og blandingen opvarmedes igen under tilbagesvaling i 1,5 time. Reaktionsblandingen afkøledes til stuetemperatur og hældtes i is-vand (100 ml). Det vandige lag adskiltes fra det organiske lag og ekstraheredes med CHC13 (2 x 50 ml). Ekstrakterne kombineredes med det organiske lag og tørredes over MgSO^. Opløsningsmidlet fjernedes, og den olieagtige remanens destilleredes i vakuum til tilvejebringelse af 14,9 g (92%) o-(N-methylaminomethyl)phenyleddikesyre-^-lactam, som kogte ved 130-135°C/ 2 mm Hg, smeltepunkt 35-37°C.

IR: J ^ 3300, 1620, 1490 cm"1, rnn NMR: 3 3,12 (3H, s), 3,59 (2H, t, J=l,5 Hz), 4,48 (2H, t, J-l,5 Hz), 7,21 (4H, br-s).

Analyse beregnet for C^H^NO, 1/4H20: C: 72,49; H: 6,84; N: 8,45.

Fundet: C: 72,78, H: 6,76, N: 8,49, 72,70; 6,81; 8,51.

o-N-methylaminomethylphenyleddikesvre Q^HCi,

^Nx^S'CH2COOH

En blanding af det ved fremgangsmåden ovenfor fremstillede o-(N-methylaminomethyl)-phenyleddikesyre-cf-lactam (5,0 g, 0,031 mol) og koncentreret saltsyre (500 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 40 timer. Blandingen inddampedes under formindsket tryk, og remanensolien opløstes i vand (20 ml) og behandledes med en lille mængde aktivt carbon. Filtratet udvaskedes med benzen (50 ml) og inddampedes til tørhed. Remanensolien udkrystalliseredes ved triturering med THF (eller acetone) til dannelse af farveløse nåle af o-N-methylaminomethylphenyleddike-syre,hydrochlorid (4,5 g, 67%).

29 1A5497

Analyse beregnet for cioHi3N02'HC1: C: 55,69* H: 6,54; N: 6,49; Cl:16,44. Fundet: C: 55,65, 55,74; H, 6,62, N: 6,53, Cl:16,36. 6,60; 6,53;

Noget uomsat udgangsmateriale udvandtes fra benzenlaget og det til udvaskning anvendte THF (1,2 g, 24%, kogepunkt 140-143°C/2mm Hg)V

En vandig opløsning af o-N-methylaminométhylphenyleddikesyre,hydro-chlorid (5 g) søjlekromatograferedes med "iR-120"-ionbytterharpiks (H+, 70 ml) og elueredes med 3N ΝΗ,ΟΗ (2 liter) til tilvejebringelse af 3,9 g (93%) af o-N-methylaminomethylphenyleddikesyre som nåle.

IR: ^ max 1650' 1470 b*"1· _Fremstilling af 7-amlno-3-(2-carboxymethyl-2,3-dlhydro-s^ triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre N NaH/DMF ·

Γ I ClCHoCOOC-Hc I I

σ1“^Ν-Ν-γΝΗ ---^ Cl-^N.N^k-CH2COOC2H5 0 0 1 . 2

NaSH . I 1=71) · 7-ACA a —-> H3—1<;n^Nvv^/'N-CH2C00H ^ o H2M— 0 I 0 i

C02H

b 30 145497 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin- 3-on (2)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem., _8, 415 (1971)] (forbindelse 1, 1,00 g, 5,9 mmol) i tør DMF (30 ml) sattes natriumhydrid (50% i paraffin, 0,3 g, 6,3 mmol) under omrøring og under dannelse af gule krystaller- Til blandingen sattes ethylchloracetat (1,4 ml, 13 mmol), og blandingen opvarmedes ved 90°C i 8 timer under omrøring. Efter afkøling hældtes reaktionsblandingen i vand (50 ml), og der ekstrahe-redes med toluen (5 x 40 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen udkrystalliseredes med benzen-n-hexan til dannelse af gule nåle af forbindelse 2 (1,16 g, 77%), smeltepunkt 114-115°C (litteratur 110°C).

IR: V KBr 1735, 1710 cm-1, max UV: Λ Et0H 231 nm (€ , 26000). max NMR: * cdc13 7 58 (IH, d, J=10Hz, pyridazin-H), 6,98 (IH, d, J=10 Hz, ppm pyridazin-H), 4,80 (2H, s, -CH2C0), 4,27 (2H, q, J=7,5 Hz, CH2CH3), 1,29 (3H, J=7,5 Hz, CH2CH3).

Analyse beregnet for CgH^N^OjCl: C: 42,12; H: 3,53; N: 21,83; Cl: 13,81.

Fundet: C: 41,54, H: 3,22, N: 21,51, Cl: 13,88, 41,46; 3,49; 21,53; 13,99.

2-carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (3)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (forbindelse 2, 30 g, 0,12 mol) i ethanol (900 ml) sattes NaSH,2H20 (70% rent, 45,9 g, 0,36 mol), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 0,5 time. Reaktionsblandingen inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen opløstes i vand (200 ml) og koncentreret HC1 sattes til opløsningen til indstilling af pH-værdien til 2. Bundfaldet (forbindelse _3) opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte 18,3 g (69%).

IR: 7>KBr 900, 2450, 1750, 1660 cm"1, max UV: i l%NaHC03aq. 260 nm (f , 19500), 313 nm (£, 7000).

max 31 H5497 ^.^DMSO-dg 7^88 (1H/ ^ J=10 HZf pyridazin-H), 7,45 (IH, d,

IucLX

J=10 Hz, pyridazin-H), 4,72 (2H, s, CI^CO).

Analyse beregnet for CyHgN^O^S: C: 37,17; Ή: 2,67; N: 24,77; S: 14,17.

Fundet: C: 37,35, Hs 2,26, N: 23,58, S: 14,32.

37,23; 2,28; 23,69; 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyrldazin-3- 1 on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (£)

Til en opslæmning af 7-aminocephalosporansyre (8,79 g, 32,2 mmol) i 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 7, 149 ml) sattes NaHCO-j (8,14 g, 97,0 mmol) og thiolen 2 (7/30 g, 32,2 mmol) under omrøring. Blandingen opvarmedes ved 80°C i 0,5 time under ^-strøm. Blandingen behandledes med aktivt carbon og indstilledes til pH-værdl 3 med koncentreret -HC1L Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand til dannelse af 7,59 g (54%) af forbindelse 4.

IR: V max 1800' 1720, 1600' 1540' 1470 cm"1· UV: ^maxfer (PH ?) 252 *** (£' 1950°)/ '298 nm (£, 8400).

NMRi Sppm+K2C°3 7,56 (1H' d' J=9 Hz' Pyridazin-H), 7,05 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 5,45 (IH, d, J=5 Hz, 6-H), 5,05 (IH, d, 5 Hz, 7-H), 4,43 (IH, d, J=14 Hz, 3-0¾) , 4,04 (IH, d, J=14 Hz, 3-0¾) , : 3,88 (IH, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (IH, d, J«18 Hz, 2-H) . ' v,

De følgende eksempler skal nærmere belyse aen foreliggende opfindelse. Alle temperaturer er i °C. 7-aminocephalofpp-ransyre er forkortet som 7-ACA, -ACA- betyder den del, som har:struktur en : -NH-CH-CH CH„ li I 2 C-N C-CH0~ 2

COOH

O

II

og således kan 7-ACA betegnes som H-ACA-O-C-CHj. Methylisobutylketon er betegnet som MIBK. "Skellysolve B" er en petroleumsetherfraktion med kogepunkt 60-68°C, og som i det væsentlige består af n-hexan.

32 U5497 "LA.-1"-harpiks er en blanding af sekundære aminer, hvori hver sekundær amin har den almene formel: R1 2 CB3(CH2)10CH2NH? - r2 R3 12 3 hvori R / R og R er et monovalent, alifatisk carbonhydridradikal, og 12 3 hvori R , R og R indeholder tilsammen fra 11 til 14 carbonatomer.

Denne særlige blanding af sekundære aminer, som der i disse eksempler sommetider henvises til som "flydende aminblanding nr. II" er en klar ravgul væske med de følgende fysiske kendetegn: viskositet ved 25°C på 70 cP, massefylde ved 20°C på 0,826 g/cm3, brydningsindeks ved 25°C på 1,4554, destillationsinterval ved 10 mm: op til 170°C - 0,5%, 170-220°C - 3%, 220-230°C - 90% og over 230°C - 6,5%.

"IR-120" kaldes også "Amberlite IR-120" og er en stærk kationbytter-harpiks, som indeholder sulfonsyreradikaler. "Amberlite IR-120" er en kommercielt tilgængelig kationbytterharpiks af polystyren-sulfonsyre-type. Det er således en kernesulfoneret polystyrenharpiks, som er tværbundet med divinylbenzen og opnået ved fremgangsmåden ifølge Kunin,

Ion Exchange Resins, 2. udgave (1958), John Wiley and Sons, Inc.. Se f.eks. siderne 84 og 87 deri.

"Amberlite IRC-50" er en kommercielt tilgængelig kationbytterharpiks af carboxylsyretypen. Det er en copolymer af methacrylsyre og divinylbenzen.

Dicyclohexylcarbodiimid er forkortet som DCC, tetrahydrofuran som THF, tyndtlagskromatografi som TLC, p-toluensulfonyl som Ts og methanol som MeOH.

Når de følgende instrumentelle aflæsninger er anført, skrives for infrarødt spektrums vedkommende ny som ^ , for ultraviolet spektrums vedkommende lambda som i , med molær absorptionsevne som epsilon (S ) og for kernemagnetisk resonansspektrums (NMR) vedkommende delta som S og tau som Ύ (<f = 10- *Τ).

de følgende reaktionsskemaer 1 og 2 belyses fremstillingen 2 af de foretrukne forbindelser ifølge eksemplerne 1-5.

33 145497

Skema Fremstilling af 7-[(o-amlnomethylphenyl)-acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazln-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyrer R1 2, 4-DNF/DCC_ 5 R1 RN-BOC + h l^JJs^OOO-^^-HOg > NOj 6 R1 C^Jis^CONH —f ^

N\^“ CHg-S-l^N<,N^N-CH2C00H

q/ I 1 co2h o

Ί- TFA

R1 χ/ r2~Ts C°NH -T-f ^

Å~~ NsXiJ—CH2S—^Ν^Γκ^Ν -CH2C00H

o T I

C02H o 8 a: R1 = H, R2 = H 8a: BB-S469 b: R1 = CH^ R2 = H 8b: BB-S479 c: R1 = CHj, R2 = OH 8c: BB-S^78 34 145497

Skema 2. Fremstilling af 7-(3-aminomethyl-2-thien.ylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyrer - R 1 Π j" N-BOC 2,4-DNP/DCC_^

'LgA^/COOH

9

R

[Π^'βΥλ +1 xV“N02--Z-), NO 2

10 R

li—tt^i-boc

Nv>j^1-CH2S -^^N^^N-CHgCOOH

0 T s C02H u

11 CE^COOH R

i nr m &

^ sA^comh -pf > F

CH2S -1¾ / n-ch2cooh

c°2h I

12 a: R = H 12a: BB-S^S? b: R = CHj 12b; BB-Sif-72 145497 35

Eksempel 1

Fremstilling af BB-S469 1^>L-ch2conh σΗ2-3-Λ^ΝΧΝγ.Ν-0Η2000Η C02H o 8a, BB-S^69 2/4-dinitrophenyl-o-(N-butoxycarbonylaminomethyl)phenylacetat (6a)

Til en blanding af o-(N-butoxycarbonylaminomethyl)-phenyleddike-syre (forbindelse 5a, 13 g, 49 mmol) og 2,4-dinitrophenol (9,02 g, 49 mmol) i tør ethylacetat (123 ml) sattes dicyclohexylcarbodiimid (D€C) (10,1 g, 49 mmol) under vandafkøling (5-l5°C), og blandingen omrørtes i 30 minutter ved samme temperatur og derefter i 40 minutter ved stuetemperatur. Det resulterende bundfald frafiltreredes, og filtratet inddampedes til dannelse af 23,9 g af den aktive ester 6a, som anvendtes i den følgende acyleringsomsætning uden yderligere rensning.

IR: ^ max 1775' 1700' 1600» 1530 cm"1.

36 H5497 7-[o-(N-butoxycarbonylaminomethyl)phenylacetamido]-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre (7a)

Til en kold (0°C) blanding af forbindelse _4, 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, (4,38 g, 10 irunol) , Et^N (4,5 ml, 30 mmol), CH^CN (20 ml) og vand (20 ml) sattes en opløsning af 2,4-dinitrophenyl-o-(N-butoxycarbonylaminomethyl)phenylacetat (forbindelse 6a, 4,79 g) i THF (tetrahydrofuran) (20 ml). Efter omrøring ved stuetemperatur natten over fjernedes THF og CHgCN i reaktions-blandingen ved formindsket tryk, og den resulterende vandige opløsning indstilledes til pH-værdi 2 med fortyndet HC1 og ekstraheredes med ethylacetat (10 x 30 ml). De organiske ekstrakter tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen kromatograferedes på en søjle af sili-cagel (60 g) og elueredes med CHClg og 3% MeOH-CHCl3 i rækkefølge til dannelse af 2,40 g (37%) af forbindelse 7a, smeltepunkt >161°C (dekom-ponering).

IR: -9 KBr 1780, 1720 cm”1, max UV: Λ pH 7 puffer 252 nm (£ , 19800), 298 nm (S, 8900). max NMR: S pp^0+D2° 7,67 (IH, d, J=9,0 Hz, pyridazin-H), 7,10 (4H, s, phenyl-H), 7,05 (IH, d, J=9,0 Hz, pyridazin-H), 5,66 (IH, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,07 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,71 (2H, s, N-CH2~CO), 4,4-4,0 (4H, m, 3-CH2 & CH2-N), 3,8-3,5 (4H, m, 2-H & CH2CO), 1,42 (9H, s, t-butyl-H).

Analyse beregnet for C28H31N7°7S2'^H20: d: 49,97 C: 49,62; H: 5,20; N: 14,46; S: 9,46. Fundet: C: 49,97, H: 4,79, N: 14,00, S: 9,37.

49'95 4,62 13,84 9,32.

37 145497 BB-S469; 7-[(o-(amlnomethylphenyl)acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3- dlhydro-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre (8a)

Trifluoreddikesyre (3,4 ml) sattes til forbindelse 7a (2,33 g) ved 0°C, og blandingen omrørtes i 15 minutter ved stuetemperatur. Til blandingen sattes tør ether (100 ml), og bundfaldet opsamledes ved filtrering og udvaskedes med tør ether (2 x 50 ml). Faststoffet opløstes i en blanding af CH^CN (100 ml) og vand (14 ml), og opløsningen indstilledes til pH-værdi 4-5 med koncentreret NH^OH til tilvejebringelse af et bundfald, som opsamledes ved filtrering og udvaskedes med CH3CN (2 x 50 ml) til dannelse af 1,75 g (82%) af forbindelse 8a som ammoniumsaltet deraf. Smeltepunkt >160°C (dek.).

IR: “i KBr 1765, 1710, 1640, 1590 cm-1, max UV: Æ7 puffer 252 nm (£, 23900), 298 nm (£, 10900).

IuaX

Analyse beregnet for C24H22N7°7S2'NH4,H20: C* 46,51; H: 3,96; N: 18,08; S: 10,35.

Fundet: C: 46,52, H: 4,15, N: 17,60, S: 10,89, 46,26; 4,19; 17,48; 10,41.

Fremstilling af BB-S469-mononatriumsalt

Til en opslæmning af forbindelse 8a (1,58 g) i 50% acetone-vand (30 ml) sattes en 10% opløsning til indstilling af pH-værdien til 7,7.

En yderligere mængde acetone tilsattes, og bundfaldet opsaml^des ved filtrering og udvaskedes med acetone til dannelse af 1,38 g (87%) mononatriumsalt af forbindelse 8a, smeltepunkt )170°C (dek.).

IR: -J 1765, 1710, 1640, 1600, 1540, 1485 cm-1.

IQaX

UV: λ „Hv7 puffer 252 nm (?, 20600), 298 nm (f, 9200).

ulaX

NMR: ip2°+K2C03 7,52 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,27 (4H, s, phenyl-H), 7,03 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 5,62 (IH, d, J-4,5 Hz, 7-H), 5,07 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H).

Analyse beregnet for C^H^N-yO^Na, 2H20: r C: 44,79; H: 4,07; N: 15,23; S: 9,96. ”

Fundet: C: 44,44, H: 3,68, N: 16,50, S: 10,38, 44,95; 3,90; 16,67; 10,45.

38 145497

Eksempel 2

Fremstilling af BB-S472 r--r- CH-NHCH, ς tgJJ-CHjGWIH—pf' "i

ρϊίγ^ CH2-S-l^ j.^K^N-CHpCOOH

co2h o 12b, BB-S472 7-(3-N-t-butoxycarbonvl-N-methylaminomethvl-2-thienvlacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dih.ydro-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthlomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (11b)

En blanding af den BOC-beskyttede aminosyre (forbindelse 9b, 513 mg, 1,8 mmol), 2,4-dinitrophenol (400 mg, 2,16 mmol) og DCC (445 mg, 2,16 mmol) i THF (5 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 12 timer. Det udfældede urinstof fjernedes, og filtratet sattes til en blanding af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on- 6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (£, 800 mg, 1,8 mmol) og tri-ethylamin (0,76 ml, 5,4 mmol) i vand (5 ml) ved 0°C under omrøring. Omrøringen fortsattes, indtil aktiv ester var forsvundet ved TLC (sili-cagelplade, Rf-værdi 0,95, opløsningsmiddelsystem, CHCl^MeOH = 3:1). Reaktionsblandingen fortyndedes med vand (20 ml), faseadskiltes med ethylacetat (50 ml) og indstilledes til pH-værdi 2 med koncentreret ' HC1 ved 5°C. Det organiske lag fraskiltes, og det vandige lag ekstra-heredes med ethylacetat (3 x 50 ml). Ethylacetatekstrakterne kombineredes, udvaskedes med mættet vandig NaCl-opløsning, tørredes over MgSO^ og koncentreredes under formindsket tryk. Remanensolien (1,9 g) kromatograferedes på silicagel (40 g). Søjlen elueredes i rækkefølge med CHC13 (400 ml), 3% MeOH-CHCl3 (100 ml) og 10% MeOH-CHCl3 under overvågning med TIC (silicagelplade, opløsningsmiddelsystem MeOH:CHCl3 = 1:2, påvist med I^J· Fra CHCl3-eluatet udvandtes en blanding af 2,4-DNP og den BOC-beskyttede aminosyre 9^, og fra 3% MeOH-CHCl3-eluatet 50 mg af forbindelse 9^. Det ønskede produkt (11b) (Rf-værdi 0,4, opløsningsmiddelsystem CHCl3:MeOH = 3:1) opnåedes ved inddampning af eluatet med 10% MeOH-CHCl3. Udbytte 490 mg (39%). Smeltepunkt 215-220°C.

IR: *>>KBr 3400, 1780, 1720, 1680, 1550 cm"1, max 39 145497 UV; Λ pH 7 Puffer 245 nm (S, 23000), 260 nm (£, 18000), max 300 nm (£, 7900).

NMR: SDMS0-d6 χ 42 (9H, S, BQC-H), 275 (3H, s, N-CH,), ppm J

380 (4H, br-s, 2-H & sA>c0 )» 4,35 (4H br-s, H\/H

” hXh jn & 3-CH2), 4,72 (2H, s, BOC-N-CH2), 5,10 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,70 (IH, d-d, J=4,5 & 10,5 Hz, skiftede til en dublet J=4,5 ved tilsætning af D20, 7-H), 6,85 (IH, d, J=4,5 Hz, thiphen Ηβ), 7,19 (IH, J=9 Hz, pyridazin H), 7,34 (IH, d, J=4,5 thiophen Ha), 7,72 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 9,11 (IH, d, J=10,5 Hz, forsvandt ved tilsætning af ^2,0^ NH) .

Analyse beregnet for C28H31N7°9S3'H20: C: 46,46; H: 4,60; N: 13,55; S: 13,29. Fundet: C: 46,67; H: 4,71; N: 12,79; S: 12,81.

BB-S472; 7-(3-methylaminomethyl-2—thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre (12b)

Trifluoreddikesyre (0,4 ml) sattes til forbindelse 11b (400 mg, 0,57 mmol) ved 0°C, og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 15 minutter. Til reaktionsblandingen sattes vandig ether (10 ml) med henblik på udskillelse af bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vandfri ether (2 x 10 ml) og opslæmmedes i acetonitril (10 ml). Opslæmningen indstilledes til pH-værdi 4 med koncentreret NH^OH og omrørtes i 10 minutter. Faststoffet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetonitril (2x5 ml) og tørredes ved 60°C (1 mm Hg i 7 timer til tilvejebringelse af 310 mg (90%) af forbindelse 12b, som smeltede ved 188-191°C (dek.).

IR: ^ 3400, 1770, 1720, 1680, 1550 cm"1, max UV: * £!L7 puffer 245 nm (£, 22400), 260 nm (£, 18700), 300 nm max (£, 8600).

Analyse beregnet for C23H23N7°7S3,3H20: C: 41,87; H: 4,43; N; 14,86; S: 14,58. Fundet: C: 42,03; H: 3,59; N: 14,79; S: 14,35.

40 145497

Fremstilling af BB-S472-mononatriumsalt

Til en opslæmning af forbindelse 12b (230 mg, 0,38 mmol) i 0,5 ml deioniseret vand sattes N NaOH til indstilling af pH-værdien til 8,9. Acetone (15 ml) sattes til opløsningen. Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetone (2 x 5 ml) og tørredes ved 60°C /1 mm Hg i 7 timer til tilvejebringelse af 170 mg (71%) af mononatriumsalt af BB-S472, smeltepunkt >210°C (dek.).

lR:9KBr 3400, 1765, 1710, 1680, 1600 cm-1, max UV: APj 7 Pllffer 245 nm (£, 21800), 260 nm (2, 18500), 300 nm

IuaX

(£-', 7800) .

NMR:S°2° 2,72 (3H, s, N-CH-,) , 3,45 (IH, d, J=18 Hz, 2-H) , 3,75 ppm o *

(IH, d, J=18 Hz, 2-H), 3,95 (2H, s, S^CH2CO) , 4,18 (4H, m, ^^CH2N

& 3-CH2), 4,57 (2H, s, N-CH2), 5,00 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,53 (IH, . d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,97 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,03 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen-Ηβ), 7,34 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen-Ηα), 7,48 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C23H22N^O^S2Na,l/2 H20: C: 43,40; H: 3,64; N: 15,40; S: 15,11. Fundet: C: 43,26; H: 4,08; N: 14,18; S: 13,91.

Eksempel 3

Fremstilling af BB-S478 ho-^N-ch2nh-ch3 s

L JJ_ch2conh—i—s N

^Nvy^CH2-S"^Nj'NYN“CH2C°0H co2h 0 8c, BB-S478 7-[2-(N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-4-hydroxyphenylacetamido]- 3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,5-b]PV^idazin-3-on-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (7c)

En blanding af 2-N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-hydroxy-phenyleddikesyre (5c), (708 mg, 2,4 mmol), 2,4-dinitrophenol (478 mg, 2,6 mmol) og DCC (536 mg, 2,6 mmol) i tør THF (20 ml) omrørtes ved 4i 145497 stuetemperatur i 2 timer. Det udfældede urinstof fjernedes ved filtrering. Filtratet sattes til en opløsning af 7-amino-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo [4,5-b].pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre (4) (876 mg, 2 mmol) i 20 ml vand indeholdende triethyl-amin (0,84 ml, 6 mmol), og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 18 timer. Efter koncentrering til 20 ml udvaskedes den vandige opløsning med ether, gjordes sur med 6N HC1 og ekstraheredes med 200 ml ethylacetat. Ekstrakten filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer, udvaskedes med vand og en mættet vandig NaCl-opløsning og tørredes. Opløsningen inddampedes til tørhed, og den olieagtige remanens kromato-graferedes på en silicagelsøjle ("Wakogel C-200", 25 g), idet der elueredes med chloroform og 3% chloroform-methanol. Fraktionerne indeholdt det ønskede produkt (påvist ved TLC, Rf-værdi 0,3, opløsningsmiddelsystem, CHCl3:MeOH=2:1) opsamledes og inddampedes til tørhed.

Den olieagtige remanens tritureredes med ether-n-hexan til dannelse af 630 mg (44%) af produktet 7c, der smeltede ved 200-210°C (langsom dek.).

IR: * 1780, 1720, 1660, 1400, 1240, 1150 cm"1, max UV: puffer 252 nm (£, 13000), 300 nm (c, 5400).

ΠΙαΧ MR: Sp^°~d6 1»39 (9H, s, C-CH3) , 2,73 (3H, s, N-CHg) , 3,3-3,9 (4H, m, CH2C0 & 2-H), 4,35 (4H, m, CH2N & 3-H), 4,48 (2H, s, NCH2CO), 5,03 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,61 (IH, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,4-7,2 (3H, m, phenyl-H), 6,98 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 7,61 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 8,87 (IH, d, 8 Hz, NH).

Analyse beregnet for C30H33N7° 10S2: C: 50,34; H: 4,65; N: 13,70; S: 8,96. Fundet: C: 50,98; H: 5,36; N: 11,88; S: 7,60.

BB-S478; 7-(2-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(2-N- carboxymethyl-2,3-dihydro-s-trlazolo[4,5-b)pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (8c)

En blanding af forbindelse 7c (570 mg, 0,8 mmol) og trifluoreddi-kesyre (1,5 ml) omrørtes ved 10°C i 30 minutter, og blandingen fortyndedes med ether (50 ml) med henblik på fraskillelse af trifluoraceta-tet af forbindelse 8c, som opsamledes ved filtrering og derefter opløstes i en blanding af 10 ml acetonltril og 5 ml vand og derefter filtreredes. Filtratet indstilledes til pH-værdi 6 med koncentreret ammonium- 42 U5497 hydroxid, og blandingen fortyndedes med acetonitril (100 ml). Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetonitril og tørredes i vakuum over P2°5 dannelse af 370 mg (75%) af forbindelse j3c, som smeltede ved 215-220°C (dek.).

IR: -J KBr 1770, 1710, 1600, 1380, 1350 cm”1.

ItlcLX

UV: Λ 7 puffer 252 nm (£, 19000), 300 nm (£, 9100).

ItlaX

NMR:S p2°+K2C°3 2,75 (3H, s, N-CH3), 2,9-3,3 (4H, m, CH2C0 & 2-H), 4,0-4,3 (4H, m, CH2N & 3-H), 4,57 (2H, s, NCH2CO), 4,81 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,53 (IH, d, 4,5 Hz, 7-H), 6,6-7,5 (5H, m, phenyl-H & pyridazin-H).

Analyse beregnet for C25H25N7°8S2'5/2H2°: C: 45,45; H: 4,58; N: 14,84; S: 9,71. Fundet: C: 45,69; H: 4,21; N: 15,03; S: 9,46.

Fremstilling af mononatriumsalt af BB-S478

Til en opslæmning af forbindelse 8c (308 mg, 0,5 mmol) i vand (2 ml) sattes 0,3 - 0,4 ml N NaOH, og blandingen omrørtes ved stuetemperatur, den resulterende opløsning var 9,2. Acetone (20 ml) sattes langsomt til opløsningen. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetone (10 ml) og tørredes i vakuum over F2°5 til dannelse af 290 mg (91%) af mononatriumsaltet af BB-S478, som smeltede ved 230-235°C (dek.).

IR: -5 KBr 1770, 1700, 1600, 1390, 1350 cirf1.

IllclX

UV: A E? 7 puffer 250 nm (£, 18000), 300 nm (£ , 8400).

IrlciX

Analyse beregnet for C25H24N7°8S2Na' 5/2H20: C: 43,98; H: 4,28; N: 14,36; S: 9,39. Fundet: C: 43,96; H: 4,14; N: 13,51; S: 9,34.

Eksempel 4.

Fremstilling af BB-S479 aCH2NH-CH3 g CHgCONH-1-{ N Γ^^=τΓί

^^v^l-CH2-S-^N^Nv^tr-CH2C00H

co2h 0 8b, BB-S479 43 145497 7-[o-(N-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetamido]-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (7b)

Til en kold (0°C) blanding af forbindelse 4 (5,4 g, 12 mmol),

EtjN (5,5 ml), CHgCN (25 ml) og vand (25 ml) sattes en opløsning af 2,4-dinitrophenyl-o-(N-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetat (6b) i THF [fremstillet fra o-(N-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-phenyleddikesyre (5b) (3,48 g, 13,5 mmol), 2,4-dinitrophenol (2,49 g, 13.5 mmol) og DCC (2,79 g, 13,5 mmol) i tør THF (37 ml)]. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over. THF og CH^CN fjernedes fra reaktionsblandingen ved afdampning under formindsket tryk, og den resulterende vandige opløsning udvaskedes med ether (3 x 30 ¢1), ind- . stilledes til pH-værdi 2-3 med fortyndet HCl og ekstraheredes med ethylacetat (4 x 30 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen kromatograferedes på en søjle af Si02 (100 g). Efter udvaskning med CHCl^ elueredes søjlen med 3% MeOH i CHC13 til tilvejebringelse af en ønsket fraktion indehol-ende forbindelse 7b. Udbytte 3,8 g (45%), smeltepunkt >200°C (dek.).

IR: * KBr 1780, 1720, 1680 cm"1, max UV: X 7 Puffer 250 nm (£, 18800), 297 nm £, 8400). '

IUaX

NMR: h p^0+D2° 7,62 (IH, d, J=10,5 Hz, pyridazin-H) , 7,14 (4H, s, phenyl-H), 6,98 (IH, d, J=10,5 Hz, pyridazin-H), 5,61 (IH, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,03 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,67 (2H, s, N-CH2), 4,42 (2H, s, CH2-N), 4,4-4,0 (2H, m, 3-(¾) , 3,8-3,4 (4H, m, 2-H & CH2-CO), 2,72 (3H, s, N-CH3), 1,38 (9H, s, BOC-H).

Analyse beregnet for C30H33N7Q9S2'5/2H2O: C: 48,38; H: 5,14; N: 13,16; S: 8,61.

Fundet: C: 48,25, H: 4,52, N: 12,93, S: 8,68.

48,23; 4,46; 12,86; BB-S479; 7-[o-(methylaminomethyl)phenylacetamido]-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3-pn^-6^ylthlomethyl)-3-cephaii-4-carboxylsyre (8b)

Trifluoreddikesyre (7 ml) sattes til t-BOC-derivatet 7b (3,8 g, .

5.5 mmol) ved 0°C, og blandingen omrørtes i 20 minutter ved stuetempe- 1 ratur. Tør ether (100 ml) sattes til blandingen. Det resulterende bund- 44 . 145497 fald opsamledes ved filtrering og udvaskedes med tør ether (3 x 100 ml). Bundfaldet opløstes i en blanding af CH^CN (120 ml) og vand (18 ml), og opløsningen indstilledes til pH-værdi 5-6 med koncentreret NH^OH til dannelse af et olieagtigt bundfald, som tritureredes med CH^CN til dannelse af fast materiale. Produktet 8b opsamledes ved filtrering, udvaskedes med CH^CN og tørredes. Udbytte 2,55 g (77%).

IR: >) KBr 1770, 1710, 1600, 1550 cm"1, max

Fremstilling af mononatriumsalt af BB-S479

Til en opløsning af BB-S479 (8b) (2,54 g, 4,3 mmol) i vand (25 ml) sattes N NaOH (ca. 3 ml) under afkøling (pH-værdien af opløsningen var 10). En stor mængde acetone sattes til opløsningen, og bundfaldet opsamledes ved filtrering og udvaskedes med acetone til dannelse af 1,94 g (84%) af mononatriumsalt af BB-S479. Smeltepunkt >200°C (dek.).

IR: KBr 1770, 1710, 1600, 1550 cm"1.

IHclX

UV: λ 7 Puffer 250 nm ( , 19400), 297 nm ( , 8700). max

Analyse beregnet for C25H24N7°7S2Na'^^2°5 C: 47,61; H: 4,00; N: 15,55; S: 10,17.

Fundet: C: 47,43, H: 4,67, N: 15,97, S: 9,25, 47,43; 4,68; 15,70; 9,84.

Eksempel 5

Fremstilling af BB-S483 \nrCEzm* ^ /v

CHgCONH—I—p η N

N-CHgCOOH

co2h 0 12a, BB-483 7-(3-N-t-butoxycarbonylamlnomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (11a)

En blanding af den BOC-beskyttede aminosyre (9a, 410 mg, 1,56 mmol),

2,4-dinitrophenol (313 mg, 1,7 mmol) og DCC (353 mg, 1,7 mmol) i THF

45 145497 (5 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 12 timer. Det udfældede urinstof fjernedes, og filtratet sattes til en blanding af 7-amino-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (.4, 683 mg, 1,56 mmol) og triethylamin (0,62 ml, 4,68 mmol) i vand (5 ml) ved 0°C under omrøring. Omrøringen fortsattes ved stuetemperatur, indtil den aktive ester forsvandt ved TLC (silica^ gelplade, Rf-værdi 0,95, opløsningsmiddelsystem, CHClg :MeOH=*3:1) . Rea)?-tionsblandingen fortyndedes med vand (20 ml), faseadskiltes med ethyl-acetat (50 ml) og indstilledes til pH-værdl 2 med koncentreret HC1 ved 5°C. Det organiske lag fraskiltes, og det vandige lag ekstraheredes med ethylacetat (3 x 50 ml). Ethylacetatekstrakterne kombineredes, udvaskedes med mættet vandig NaCl-opløsning, tørredes over MgSO^ og koncentreredes under formindsket tryk. Remanensolien (1,8 g) kromato-graferedes på silicagel (40 g). Søjlen elueredes i rækkefølge med CH€13 (400 ml) og 3% MeQH-CHClg (500 ml). Eluatet overvågedes med TLC (silica-gelplade, opløsningsmiddelsystem CHCl3:MeOH=2:l, påvist med ϊ2· Dét ønskede produkt 11a (Rf-værdi 0,2) opnåedes ved inddamphing af MeOH-CHCl3-eluatet. Udbytte 450 mg (42%), som smeltede ved 155-160°C.

IR: ϊ) 3300, 1775, 1720, 1680 cm"1, max UV: pH 7 Puffer 245 nm (£, 23900), 260 nm (6, 19200), 300 nm max (£, 8700) .

NMR: &p^°”d6 1,39 (9H, s, BOC-H), 3,76 (4H, br-s, 2-H & S CH2CO) , 4,05 (2H, d, J=6 Hz, skiftede til singlet ved tilsætning af D20, BOCNH-CH2), 4,20 (2H, m, 3-CH2), 4,69 (2H, s, N-CH2CC>2), 5,06 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,62 (IH, d-d, J=4,5 & 9 Hz, skiftede til en dublet J=4,5 Hz ved tilsætning af D20, 7-H), 6,83 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen- Ηβ), 7,00 (IH, m, forsvandt ved tilsætning af D20, NHBOC), 7,04 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,12 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen-Ηα), 7,65 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 8,97 (IH, d, J»9 Hz, forsvandt ved tilsætning af D20, 7-NH).

Analyse beregnet for c2yH29N^OgS3: C: 46,88$ H: 4,23$ N: 14,17$ S: 13,90.

Fundet: C: 46,42$ H: 4,37; N: 13,49; S: 13(,61.

BB-S483; 7-(3-aminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3- dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazln-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4- , carboxylsyre (12a) "

Trifluoreddikesyre (0,4 ml) sattes til forbindelse 11a (410 mg, 46 145497 0,59 mmol) ved 0°C, og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 15 "minutter. Til reaktionsblandingen sattes vandfri ether (10 ml) med henblik på udskillelse af et bundfald, som opsamledes ved filtrering, ud-vaskedes med vandfri ether (2 x 10 ml) og opslæmmedes i acetonitril (10 ml). Opslæmningen indstilledes til pH-værdi 4 med koncentreret NH^OH og omrørtes i 10'minutter. Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetonitril (2 x 5 ml) og tørredes ved 60°C/1 mm Hg i 7 timer til tilvejebringelse af 310 mg (88%) af forbindelse 12a, som smeltede over 200°C (langsom dek.).

IR: ? KBr 3400, 3150, 1760, 1700, 1680, 1600 cm”1, max ' UV: λ pH 7 puffer 245 nm (€, 17100), 260 nm (S-, 14100), 300 nm max • (£, 6500) .

Analyse beregnet for ¢22^21^7^7^3^1½^1 C: 40,90; H: 4,21; N: 15,17; S: 14,89. Fundet: C: 40,39; H: 3,62; N: 15,87; S: 14,35.

Fremstilling af mononatriumsalt af BB-S483

Til en opslæmning af forbindelse 12a (280 mg, 0,47 mmol) i 0,5 ml deioniseret vand sattes N NaOH til indstilling af pH-værdien til 9,5, og uopløseligt materiale opsamledes ved filtrering. Acetone (15 ml) sattes til filtratet med henblik på udskillelse af bundfaldet, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med acetone (2x5 ml) og tørredes ved 70°C/1 mm Hg i 7 timer til tilvejebringelse af 220 mg (76%) af mononatriumsalt af forbindelse 12a. Smeltepunkt >210°C (langsom dek.).

IR: 3400, 3250, 1760, 1710, 1650, 1600, 1550 cm”1.

ItlaX

UV: Λ 7 puffer 245 nm (£, 19900), 260 nm (s, 16400), 300 nm

IllaX

(£, 6900).

NMR:$B2° 3,60 (2H, m, 2-H) , 3,91 (2H, s, CH-CO) , 4,12 (2H, s, ppiu 4 CH2-NH2), 4,20 (2H, m, 3-CH2), 4,55 (2H, s, N-CH2CO), 4,95 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,50 (IH, d, J=4,5 Hz 7-H), 6,94 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 6,99 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen-Ηβ), 7,28 (IH, d, J=4,5 Hz, thiophen-Ha), 7,32 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C22H20^7^7B3Na,1/^B3<"'O<''H3: C: 43,92; H: 3,61; N: 15,26; S: 14,97. Fundet: C: 43,48; H: 4,56; N: 15,28; S: 13,91.

47 145497

Opløseligehed

Alle mononatriumsaltene i denne række udviste mere end 10% opløselighed i vand.

Nephrotoxicitet

En foreløbig nephrotoxicitetsundersøgelse udførtes ved administrering af testforbindelsen til en gruppe på 2 kaniner ved 100 mg/kg intravenøst. De med BB-S469 og BB-S479 opnåede resultater viste, at de kunne have lille nephrotoxisk potential.

In vitro-aktivitet (tabel 1) MIC-værdierne bestemtes ved rækkefortyndingsmetoden under anvendelse af Mueller-Hinton agar mod 51 Gram-positive og 96 Gram-negative bakterier. De 147 testorganismer klassificeredes i 16 grupper i overensstemmelse med slægt og type af antibiotisk modstandsdygtighed, 5 grupper for Gram-positive og 11 for Gram-negative bakterier. I tabel I er vist in vitro-aktivitet udtrykt som geometrisk middelværdi af MIC-værdierne. BB-S472 og BB-S479 udviste bedre generel aktivitet end disse forbindelsers ikke-N-methylerede analoge, henholdsvis BB-S483 og BB-S469. BB-S479 var bedre end BB-S472 overfor nogle arter af Gram-* negative bakterier. Sammenlignet med cefamandol var BB-S479 mere aktiv mod visse af testorganismerne med undtagelse af Provldencla-arter og Staphylococci.

Λ 48 UB497 * a VO 2 00 oo _ - Λ

[—^ ro o cm o o' ro ro t^avt^ vf oo p* -U

tø k k ^ V »· *> * kkk k k v ,—|

1 rH <o COOOO σι Η P· Ο O σι rH Ο O O

Λ 'Φ CM 00 I

pq η ld I 0

g rH «a* N

(OOH Ό1 μ* o cm co Γ' o t- VO to co p- «a< ro ccj

|U ITj *» «k. <k Ik ». ». »» ^ * *· * ** *“· K v M

λ ø d o o cm ο ο ο tn h o* o o co o cm rp ο jj rl O 00 ?) e 2

\ H

Oi ro λ

B 00 in co ^ , JZ

vs.'31 · CO ' rH O O ro ro N C- Ί1 H rH σι +3 —' W Dl ·· k kkk - ' ' - k k * 0 I X o H OOOOO I-Μ H tn Ο Ο Γ" CM I-I H o g PQ (D 'ί CM HOO >, O ffl'-' * Η o a -s

CTl —· H

-H ^ «a1 •a1 to lO^f.COOl OOCM VO in Η 1Λ N COCMVD *a< o u m ui * «.k k k k kkk kkk k i sjl^jo ο tnooo cm ο cmoo ^^οιη ο ,_{ !> ffl a) co ^ S' r H CQ'— .5 1 0 £ co Μ Ό C 1 Ο) Ό co- r -r· d >rf (η *v0

o OOCM 00 VOO'CO ro oo VO (O-JJ rQ

•H m Vi ·*► ·*> ·* »* *- *» ^ Η *H

£ I X o rH OOOO o O <M O O f^^OO O0 g njmpq® tn rH ^ ^ d

Dl -rl m ~ _,,+} t_i sj "a* ø 8 ΰ 2 s +1 0 CM -k H (0

m g [k. cm tn tn H

OJO-m···^ cn oocm co CM co ro rococo "a* · >t +) a) tn tn ' k kkk k kkk *· k *. k ø d ϋΐώο ο ooooo tn H tooo 000*00 ow φ

ρ· (Hø tn Η Sm-S

3« pq k_* cm 0) (¾

rH Η H

£ >1 iH CTl r-k ft -fj 0 VO r-H tn CO +* +> in « . cm 0 0 co 0 h to n cm 01 p· tn φ i-l CfltDkk kkk kkkk kk k(0g, φ I ίί ο 1-H OOOO rH rH 0*0 0 HM’OO © S Q +> >. pqd) ro Η H ro d d (0 0 «W ' . H 3H 2¾

+) *β 3 X

0) }H 2^: I 0 -U 0 5 o' CM Λ •pH pH g ^ J_| t> ¢1 vf co tnocTiro ρ» ro ρ- vo μ1 mmcMvo » w \ ι id -Η +><3 rHt-HrHrH Η ΗΗ , Ο fk ο

JJ d +) ' Η Ο II

5 ** + (d(U0i§l 1 I 0) Η +> Π) · ·Η g 0 rk rH + Μ S ® JO S -ri r— (d'-k'-k'W (ΰιΰκΜ+ι,ο; 4J §0 oz -k (I) di++d S-SRSOft H cd-tH i fiol ή d* 0 0 -p (B Cd) > rHd d Od MHrHrH'HQ)· gi) fi H o Ø-QlO ·Η 003 d OOOOUOiauirH+l "ΗΟΐμ, d g ih & H nj r) -riM ShOjOOOO ødd-HW.øco 2 m w w hm-hisv hø ørodddftd øwuio 1 -ri -k -rlØdtlH rH-P-k+JO'H'H'HØ-HdO'-' BHvo^k drato+moflOk- -riofiOH'-'k—k—Qu^oj k ø>00r^ • niddOd-riøfi odonsd HdHøøø ητθ·ι>.>, h tTøømøjiDid-H'H-HXimÆÆwwwdoaiO'OH h 1 01 λ

μ U Md iH-μ O ØrHrHfl 0H OOtd 3 3d fl Ή HiJrH øu 14J rH oddddai>tdooaid'SvMø(D<i)(Dft'Hød'dai SHpJO

0 +1 « «Tt mg Bl ft O -OPt ®n øo +1 +1 +1 0 > λ g fitn aa (Ug

n m H —·+) —0 0 00 0 <U d'H

φ φ.. · ...· c g Sh!L)!h d ^ k. x

Eh B Μ M CQ M Q η Μ Η H Bi ft ft CliiiJWfflOTK

49 145497

Eksempel 6

Fremstilling af BB-S493

æNH-BOC

COOH *

æNH-BOC

c™-rfSvl ο^Νν^-CH^A^Y-K-CHgCO^ co2h i 2 ίιΎ^""2 ,

Uvco«-rf "i ()/''Y'Cll2S'^»/,V,,'C,2C¥ co2h 0 3^, BB-S493 7-[(2-N-t-butoxycarbonylaminomethyl-l,4-cyclohexadienyl)-acetamido]- 3-(2-N-carboxymethyl-s-triazolo[4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethvl)-3-cephem-4-carboxylsyre (2)

En blanding af 2-N-t-butoxycarbonylaminomethyl-l,4-cyclohexadienyl-eddikesyre (1, 640 mg, 2,4 mmol), 2,4-dinitrophenol (422 mg, 2,4 mmol) og DCC (494 mg, 2,4 mmol) i 10 ml tør THF omrørtes i 1,5 time ved stuetemperatur. Det udfældede urinstof fjernedes ved filtrering. Filtratét sattes i én portion til en opløsning af 7-amlno-3-(2-N-carboxymethyl-s-triazol[4,5-b]pyridazin-3-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 10 ml vand indeholdende triethylamin (0,56 ml, 4 mmol), og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes til 10 ml under formindsket tryk, udvaskedes med ether (3 x 10 ml), gjordes sur med 6N saltsyre og ekstraherede»; med ethylacetat (5 x 10 ml).

50 145497

De kombinerede ekstrakter udvaskedes med en mættet saltvandsopløsning og tørredes med vandfri Na2S04· Opløsningsmidlet afdampedes, og remanensen kromatograferedes på silicagel ("Wako-gel C-200", 30 g), idet der elueredes med chloroform-methanol (0-50%). Fraktionerne indeholdende det ønskede produkt opsamledes. Opløsningsmidlet fjernedes, og remanensen tritureredes med ether-n-hexan til dannelse af 410 mg (30%) af produktet 2. Smeltepunkt 110°C (dek.).

IR: 4 KBr 1780, 1730, 1610, 1530, 1250, 1160 cm"1.

ITlclX

UV: λ pu5fer (pH 7) 252 nm (£, 19000), 300 nm (E, 8600, sh). msx

Analyse beregnet for C29H33N7°9S2'2H20: C: 48,12; H: 5,15} N: 13,54; S: 8,86. Fundet: C: 48,07; H: 4,64; N: 12,70; S: 8,39.

BB-S493; 7-[(2-aminomethyl-l,4-cyclohexadienyl)acetamido]-3-(2-N- carboxymethyl-s-triazolo[4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (3)

Den N-BOC-beskyttede cephalosporin 2 (350 mg, 0,51 mmol) behandledes med trifluoreddikesyre (TFA) (1 ml) i 30 minutter ved stuetemperatur. Til blandingen sattes ether ( 50 ml) til dannelse af TFA-saltet af forbindelse _3, der opsamledes ved filtrering og derefter isoleredes i en blanding af acetonitril (5 ml) og vand (2 ml). Opløsningen behandledes med en lille mængde aktivt carbon, indstilledes til pH-værdi 6 med koncentreret ammoniumhydroxid. Bundfaldet opsamledes, udvaskedes med acetonitril (5 ml) og tørredes i vakuum til tilvejebringelse af 235 mg (78%) af forbindelse 2· Smeltepunkt 220-230°C (dek.).

IR: 1770, 1740, 1710, 1650, 1600, 1550 cm"1.

IllaX

(pH 7) 252 te, 20000), 300 nm (f, 9000, sh) .

max

Analyse beregnet for C24H25N7°7S2,H20: C: 47,60; H: 4,49; N: 16,19; S: 10,59. Fundet: C: 47,77; H: 4,06; N: 16,49; S: 10,64.

51 145497

In vitro-aktibakterlel aktivitet af BB-S493 sammenlignet mød BB-S479 og cefamandol (bestemt ved Steers' agarfortyndingsmetode på Mueller-Hinton agarplade) _MIC yug/ml_

Organisme BB-S493 BB-S479 Cefamandol S. aureus Smith A9537 0,4 0,4 0,1 S. aureus A9497 0,2 0,1 0,05 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,4 0,2

St. faecalis A9536 100 100 50 E. coli NIHJ 0,1 0,05 0,025 E, coli ATCC 8739 0,2 0,05 0,05 Ξ. coli Juhl A15119 0,2 0,1 0,4 E. coli BX-1373 0,4 0,2 0,4 E. coli A15810 0,2 0,1 0,2 E. coli A9660 0,1 0,05 0,1 E. coli A15147 6,3 3,1 3,1

Kl. pneumoniae A9678 0,4 0,4 1,6

Kl. pneumoniae A9977 0,2 0,1 0,4

Kl. pneumoniae A15130 0,2 0,1 0,4

Kl. pneumoniae A9867 0,2 0,1 0,8

Pr. vulgaris A9436 0,4 0,1 0,2

Pr. vulgaris A9699 6,3 0,8 25

Pr. mirabilis A9554 0,2 0,1 0,8

Pr. mirabilis A9900 0,2 0,1 0,8

Pr. morganii A9553 >100 >100 >100

Pr. morganii A20031 0,4 0,1 0,8

Pr. rettgeri A15167 0,1 0,1 0,1

Ps. aeruginosa A9930 >100 >100 >100

Ps. aeruginosa A9843 >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,05 0,025 0,2

Shig. flexneri A9684 25 12,5 3,1

Shig. sonnei A9516 0,05 0,025 0,05

Serr. marcescens A20019 100 25 50

Enterob. cloacae A9656 6,3 1,6 3,1

Sal. enteritidis A9531 0,1 0,05 0,1

Sal. typhosa A9498 0,1 0,05 0,1 B. anthracis A9504 0,0125 0,025 0,2 52 145497

CO

co ro m -=11 ό ro in ιο σι r- in w o> ^ ό *3< m ^ ro co -**** » *-*·** I ooooo o o o o h1 cq

i—I

0

tJ

C n ^ in 3 si^ 10 os co σι r" co cm co g ^ K <h <k < ·*»*»**·*

(3 OOOO O OrHHCNO

Ή 0)

U

m σι σι t''

^< CM <N

CO *· 1 o o cq cq o tn ro ^ co ^ m

» tji <3< co H

ω A co 3 \ i o o g tn Λ ^ g ffl

H

Φ o σι tn in η» vo cm »mm

r—i Q rI i—I CM i—IrHiH

ID fil CO «.·»« ----- >0 I o o o o o o

C! S

-H CQ

A H

o oo IH f— CO co o o (D CO - - -3 10 o

φ CQ

+1 PQ

tn «

iH CM

tn t'· cm σι

Φ -31 Η H

A ω * I o o

.tn CQ

0 CQ

σι r- σι νοσιΌσι οι <» in CO ^THHCMCM ri (Μ ri 1 co*· *·*··· - - - fil i o o o o o o o cq 3

CQ

IH

(0 +1 Φ

•Η A

•H +1 > -ri

•Hg H

+) CO Λ Λ 3 φ Φ tn Ό I g 3 o tn φ ·η > -Η Η Η •Η S3 Ο >33 Ο &ι C 5η · Η Ο CQ Η 53 145497

Yderligere udgangsforbindelser 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2/3-dlhydro-s-triazolo[4,3 —b]pyrldazln-3-on

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem. 8, 415 (1971)] (17 g, 0,1 mol) i tør DMF (300 ml) sattes kalium-tert-butoxid (0,5 g, 4,5 mmol) under omrøring. Acrylonitril (6,6 g, 0,12 mol) i tør DMF (10 ml) satteis til blandingen. Blandingen omrørtes ved 100-110°C i 24 timer, hældtes derefter i vand (700 ml) og ekstraheredes med ethylacetat (5 x 400 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over Na-^SO^ og inddampedes. Remanensen udkrystalliseredes fra ethylacetat til dannelse af lysegule nåle af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on (2,5 g, 11%). Smeltepunkt 166-168°C.

IRi,5ntax 2230' 1720' 1550' 1500 cm-1· UV:Adl0Xan 373 nm (£, 2000). max ' NMR: &DMf0-d6 3,03 (2H, t, J=6,0 Hz, CH.J , 4,21 (2H, t, J=6,0 Hz, ppm CH2), 7,23 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,93 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgHgN,-OCl: C: 42,97; H: 2,70; N: 31,32; Cl: 15,86.

Fundet: C: 42,73, H: 2,57, N: 31,36, Cl: 15,96, 42,56; 2,50; 31,68; 1S-/81.

2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-trlazolo[4,3-b]pyridazin-3-on En opløsning af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo- , [4,3-b]pyridazin-3-on (724 mg) i 6N-HC1 (15 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 6 timer. Reaktionsblandingen ekstraheredes med ethylacetat (10 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med mættet \ vandig natriumchlorid (50 ml), tørredes over Na2SO^ og inddampedes til dannelse af lysegult, fast 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo [4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 72%). Smeltepunkt >170°C (sublimation) .

IR: KBr 3400-2400, 1730, 1710, 1540 cm"1.

rtlclX

UV: χ dioxan 377 ^ ^ 1500) .

max NMR: $D2ppJJaHC03 2,70 (2H, t, J-7,0 Hz, CH2), 4,24 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2), 7,17 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,70 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridaziii-H).

54 145497

Analyse beregnet for CgH-^O-jCl: C: 39,60; H: 2,91; N: 23,09; Cl: 14,61.

Pundet: C: 39,62, H: 2,97, N: 23,05, Cli 13,93, 39,48; 2,67; 22,70; 14,12.

2- (2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3- on

En blanding af 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 2,34 mmol) og 70% natriumhydrogensulfid, dihydrat (924 mg, 7,02 mmol) i vand (10 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen indstilledes i rækkefølge til pH-vaerdi 1 med koncentreret HC1, til pH-værdi 10 med NaOH og derefter til pH-værdi 1 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald af 2—(2— carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo £4,3 —b]pyridazin-3-on opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 418 mg (74%). Smeltepunkt 174-176°C.

IR: ^ 3600-2600, 2440, 1730, 1720 (skulder) cm-1, max UV s λ 7 puffer 262 nm (i, 17000), 318 nm (£, 6600).

IuaX

NMR: 5 ?~°_d6 2,73 (2H, t, J=7,0 Hz, CH9), 4,07 (2H, t, J=7,0 Hz, ppiIL ”4 CH2), 7,30 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,74 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgHgN403S: C: 40,00; H: 3,36; N: 23,32; S; 13,35.

Fundet: C: 39,08, H: 3,12, N: 22,65, S: 14,23, 39,06; 3,20; 22,70; 14,29.

7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo14,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre

En blanding af 7-ACA (405 mg, 1,49 mmol), thiolen 2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3-on (357 mg, 1,49 mmol) og NaHC03 (375 mg, 4,47 mmol) i 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 7, 8 ml) omrørtes ved 80°C 9 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Filtratet indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald, 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre, opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 519 mg (77%).

55 145Λ97 IR: ^ 3600-2200, 1800, 1725, 1620, 1550, 1480 cm"1.

ΠΙαΧ UV: Λ pH 7 Puffer 253 niti (£, 20000), 298 nm (£, 10000). max NMR: <5 D2°^2C03 2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH,) , 3,40 (IH, d, J=17,5 ppm

Hz, 2-H), 3,85 (IH, d, J=17,5 Hz, 2-H), 4,00-4,50 (4H, m, 3-0¾ og N-CH2-), 5,01 (IH, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,40 (IH, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,94 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,44 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin- H).

Analyse beregnet for C^gH^gNgOgS2,3/2^0: C: 40,09; H: 3,99; N: 17,52; S: 13,37.

Fundet: C: 40,06, H: 3,33, N: 16,96, S: 13,87, 40,12; 3,34; 16,98; 13,98.

7-ACA henviser til 7-aminocephalosporansyre og DMF til dimethyl-formamid.

Eksempel 7 7-[o- (N-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetamido]-3-12-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-trlazolo[4,3“b}pyridazin-3-on-6-ylthio- methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre

Til en blanding af 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triåzolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre (452 mg, 1 mmol) og triethylamin (0,46 ml, 3,3 mmol) i 50% vandig acetonitril (4 ml) sattes en THF-opløsning (3 ml) af 2,4-dinitrophenyl-o-(N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetat fremstillet ud fra o-(N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenyleddike&yre (283 mg, 1,1 mmol), 2,4-dinitrophenol (202 mg, 1,1 mmol) og DCC (227 mg, 1,1 mmol). Blandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over og koncentreredes under formindsket tryk til fjernelse af organiske opløsningsmidler. Det vandige koncentrat udvaskedes med ether (3 x 20 ml), gjordes surt med koncentreret HC1 til pH-yærdi 1-2 og ekstraheredes med ethylacetat (5 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter tørredes over vandfri Na2S0^ og inddampedes til tørhed. Remanensen kromatograferedes på en søjle af silicagel ("Wajco-gel 0200", 10 g), idet der elueredes med en blanding af MeOH-CHCl^ (MeOH: 0 - 3%). De kombinerede eluater, som indeholdt det ønskede produkt, inddampedes til dannelse af 359 mg (50%) af titelforbindelsen. Smeltepunkt >150°C (dek.).

IR: ^ KBr 3600-2400, 1780, 1720, 1680, 1550, 1490 cm"1, max '/'tf 56 145497 UV: λρΗ„7 puffer 253 nm (€ , 19800), 298 nm (€, 9400). max NMR:£PS°“d6 1,37 (9H, s, t-Bu-H), 2,70 (3H, s, N-CH,), 2,70

UUJ.IL 1 "”J

(2H, t, J=7,0 Hz, -CH2-), 3,2 - 4,5 (10H, m), 5,01 (IH, d, J=5 Hz, 6-H), 5,60 (IH, d-d, J=5 & 8 Hz), 8 Hz-koblingen forsvandt ved tilsætning af D20, 7-H), 6,93 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,58 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C31H35N7°9 S2'5/2H2°5 C: 49,08? H: 5,31; N: 12,92; S: 8,45.

Fundet: C: 49,32, H: 4,70, N: 12,52, S: 8,44, 49,36; 4,63; 12,53; 8,43.

BB-S525; 7-[o-(N-methylaminomethyl)phenylacetamido]-3-[2-(2-carboxy- ethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyrldazin-3-on-6-ylthiomethylI -3-cephem-4-carboxylsyre

En blanding af trifluoreddikesyre (1 ml) og den ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde fremstillede BOC-beskyttede cephalosporin (302 mg, 0,42 mmol) henstilledes ved stuetemperatur i 15 minutter og fortyndedes derefter med ether (10 ml). Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering og udvaskedes med tør ether (2 x 10 ml) til tilvej ebringelser af 263 mg faststof, som opløstes i en blanding af vand (6 ml) og acetonitril (3 ml). Den omrørte opløsning indstilledes til pH-værdi 4 med 1 N-NaOH (0,36 ml) og fortyndedes med acetonitril (100 ml) til dannelse af et bundfald (187 mg), som opslænmedes i vand (4 ml) og indstilledes til pH-værdi 9 med natriumhydroxid (IN, 0,3 ml). Opløsningen behandledes med en lille mængde aktivt carbon og frysetørredes til efterladelse af mononatriumsaltet af BB-S525. Udbytte 106 mg (39%). Smeltepunkt 180°C (dek.).

IR: O f3600 " 2400' 1770' 1710' 1600/ 1490, 1400 cm-1.

ΓΠαΧ UV: Λ p? 7 puffer 253 nm (£, 19800), 298 nm (€, 8800).

ΙΠαΧ NMR:5mix 2,70 (2H/ m' ~CH2~)1 2,75 (3H' s' N"CS3^ 4/4 - 3,4 (Γ0Η, m), 4,92 (IH, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,55 (IH, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,93 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 7,28 (4H, s, Ph-H), 7,40 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C26H26N7°7S2/Na,3H20: C: 45,28; H: 4,68; N: 14,22; S: 9,30.

Fundet: C: 45,34, H: 4,01, N: 14,14, S: 9,76.

44,84. 3,85. 14,08 145497 57

In vitro-antibakteriel aktivitet af BB-S525 sammenlignet med BB-S479 og cefamandol (bestemt ved Steers' agarfortyndingsmetode på Mueller-Hinton agarplade) MIC (yug/ml)

Oqanisme BB-S525 BB-S479 Cefamandol S. aureus Smith 0,4 0,4 0,2 S. aureus 0,2 0,2 0,05 S. aureus BX-1633 0,8 0,8 0,2

St. faecalis >100 >100 100 E. coli NIHJ 0,2 0,1 0,1 E. coli ATCC 8739 6,3 3,1 6,3 E. coli Juhl 0,4 0,2 0,4 E. coli BX-1373 0,4 0,2 0,2 E. coli 0,2 0,1 0,1 E. coli 0,2 0,05 0,05 E. coli 6,3 3,1 1,6

Kl. pneumoniae 1,6 0,8 3,1

Kl. pneumoniae 0,2 0,1 0,2

Kl. pneumoniae 0,2 0,2 0,8

Kl. pneumoniae 0,2 0,2 0,8

Pr. vulgaris 0,2 0,2 0,2

Pr. vulgaris 3,1 0,8 50

Pr. mirabilis 0,4 0,1 0,4

Pr. mirabilis 0,2 0,1 0,2

Pr. morganii >100 >100 3,1

Pr. morganii 0,2 0,2 0,8

Pr. rettgeri 0,8 0,8 0,1

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,1 0,1 0,1

Shig. flexneri 12,5 12,5 3,1

Shig sonnei 0,1 0,1 0,2

Serr. marcescens 25 12,5 50

Enterob. cloacae 3,1 3,1 1,6

Sal. enteritidis 0,2 0,1 0,1

Sal. typhosa 0,2 0,1 0,1 B. anthracis 0,2 0,2 0,05

Claims (6)

58 145497

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af cephalosporan-syrederivater med den almene formel R1-NH-CH-CH CH2 ^^=====:Vi '1 i. r„ , L N S -(CH,) COOH / - 2 ^*1,' \/ 0 e-OR2 '' II 0 0 (i) hvori n er 1 eller 2, og R1 betegner *CH-NHr' CH-NHR» ch2nhr* /=< 2 W „ π—^ R Vv jy~CH,CQ- eller | eller V_/ 2 li^-C^CO- ^s^~CE2C0- hvori R er hydrogen, hydroxy eller methoxy og R' er hydrogen eller o ' methyl, og R er hydrogen eller en konventionel, farmaceutisk acceptabel, let hydrolyserbar esterdannende gruppe, eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med den almene formel

59 U5497 /\ Y-NH-CH-'-CH CH, O II I II .c -N. ,C-CH,0-C-CH, / 2 3 COOH hvori Y er E[ eller R^, hvor har den ovenfor anførte betydning, eller et salt eller en let hydrolyserbar ester deraf, med en forbindelse med den almene formel f^>=N 9S”^Ν-%^”“(εΗ2)ηί:00Η 0 hvori n er 1 eller 2, og, såfremt Y i den resulterende forbindelse er H, behandler denne med et acyleringsmiddel med den almene formel R1 - X hvori X er et halogenid eller en funktionel ækvivalent deraf, og R1 har den ovenfor anførte betydning, eller et amlno-beskyttet derivat deraf, hvorefter en eventuel amino~beskytten.de gruppe fjernes, eller b) omsætter en forbindelse med den almene formel /S\ NH-pCH-CH CH, -M 11. f ά I .C-N. .C-CH,-S—U N I // 1 N \^N-(CH2)nCOOH I O COOH hvori n har den ovenfor anførte betydning, eller et salt, en let hydrolyserbar ester eller en Schiff-base deraf, med et eventuelt aminobeskyttet acyleringsmiddel med den almene formel R1 - X hvori R1 og X har de ovenfor anførte betydninger, hvorefter en eventuel amino-beskyttende gruppe fjernes,

60 U5497 og om ønsket omdanner den resulterende frie syre, det resulterende salt eller den resulterende let hydrolyserbare ester af en forbindelse med formel (I) til den tilsvarende ester eller tilsvarende ikke-toxiske farmaceutisk acceptable salt deraf, eller om ønsket omdanner et resulterende salt eller en resulterende let hydrolyserbar ester af en forbindelse med formel (I) til den tilsvarende frie syre af forbindelsen med formel (I).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-[<o-(aminomethylphenyl)acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre/ eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man anvender tilsvarende udgangsmaterialer, hvori er <^^CE2m2 — CH2CO- og n er 1,

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-[o-(methylaminomethyl)phenylacetamido]-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man anvender tilsvarende udgangsmaterialer, hvori R1 er — ch2nh-ch3 —ch2co- og n er 1. 61 145497

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-(2-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(2-N-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man anvender tilsvarende udgangsmaterialer, hvori R^- er CH2HH-CH3 kJJ— ch2co- og n er 1.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-(3-aminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3—b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre, eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man anvender tilsvarende udgangsmaterialer, hvori R1 er Γ 2 2 -ch2co- og n er 1.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-(3-methylaminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl- 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man anvender tilsvarende udgangsmaterialer, hvori R1 er r--CH.,NH-CH, I I 2 3 U J— CH-CO- * og n er 1.