DK141170B - Fremgangsmåde til fremstilling af 9,3",4"-trialkanoyl SF-837 M1-derivater. - Google Patents

Description

(11) FREMLÆGGELSESSKRIFT 141 170 DANMARK (51) Intel.3 c 07 H 17/08 (21) Ansøgning nr. 3273/75 (22) Indleveret den 18. jul. 1975 f(23) Løbedeg 18. jul. 1975 (44) Ansøgningen fremlagt og Oo iQon fremlaeggelsesskriftet offentliggjort den · J · y DIREKTORATET FOR .

PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET (30) Prioritet begæret fra den ,

27. aug. 1974, 97^85/74, JP

(71) MEIJI SEIKA KAISHA LTD., No. 8, 2-chome, Kyobashi, Chuo-ku, Tokyo, 7P.

(72) Opfinder: Shlgeharu Inouye, No. 16—2, Tsutsujigaoka, Midori-ku, Yokohama-shi, Kanagawa-ken, JP: Shoji Omoto, No. 4-3-14-407» Kami Osakl, ?hina= gawa-ku, Tokyo, JP: KatsuyoshT Iw amat bu, No. 149O-6, Kami Tsuchidana, Ayase-machi, Ko hz a-gun, Kanagawa-ken, JP: Takashi Tstiruoka, No. 2-88, Tode-cho, Salwai-ku, Kawasaki-shl, Kanagawa-ken, JT: Taro Niida, No.

127, Naka Kibogaoka, Asahi-ku, Yokohama-shi, Kanagawa-ken, JP: Toyoaki Kawasaki, No. 1-10-15, Momoi, Suginami-ku, Tokyo, JP.

(74) Fuldmægtig under sagens behandling:

Dansk Patent Kontor ApS,_ (54) Fremgangsmåde til fremstilling af 9,3”,4"-trialkanoyl SF-837 M1-deri= vater.

Opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af 9,3",4"-trial-kanoyl SF-837 M^-derivater, der er hidtil ukendte og nyttige forbindelser. De omhandlede 9 > 3" ,4"-trialkanoylderivater af SF-837 er nyttige ved terapeutisk behandling af infektioner, der skyldes gramnegative og gram-positive bakterier, og de er på fordelagtig måde fri for den ubehagelige bitre smag, som stamforbindélsen, antibiotikumet SF-837 og de kendte 9-alksmoylderivater deraf er i besiddelse af.

1Al 170 2

Antibiot ikumet Sl-837 er et kendt nyttigt, makrolidt antibiotikum (se f.eks. USA-patent nr. 3.761.588 og "Journal of Antibiotic", vol.24, nr. 7> side 460-475 (juli 1971)) og er en forbindelse, der indeholder tre hydroxylgrupper i 9~> 2'- og 3"-stillingen i molekylet og har formlen

0Ξ 18 CH CH

f30 0 5 o_1 \ &Γ 2lo-/ )-0-/ 4\-0C002H5

\ /oooo2h5 ίΤκ(0Η) ^C°H

(i) OH, o 5 S1-837 Γί-j. er hendt som el metabolisk produkt, der fremstilles ved at give Sl-837 oralt til rotter og isoleres fra rotternes urin eller fås fra en "fordøjet" opløsning af Sl-837 med et leverhomogenat. SF-837 M·^ er et pulverprodukt med et smeltepunkt på 123-125°0 og [a]p^ -56° (c=l, ethanol). SF-837 er blevet identificeret som 4"-depropionyl-Sl-837 (se "Chemical and Pharmaceutical Bulletin", vol. 2o, nr. 11, side 2366-2371 (I972), og "Journal of Antibiotic", vol.24, nr. 8, sile 555 (1971)), og indeholder fire hydroxylgrupper i 9-5 2'-, 3"- og 4"-stillingen i molekylet. 9-hydroxyl- og 21-hydroxylgruppen i SF-837-molekylet er relativt reaktionsdygtige, medens den tertiære 3"-hydroxyl-gruppe deri er mindre reaktiv for acylering (eller forestering) med en alkansyre. 9,2'-Di-acetyl-SF-837 er beskrevet i ovennævnte USA-patent nr. 3*761.588, og 9-mono-acetyl-SF-837 er beskrevet i USA-patent nr. 3-792.035· SF-837 såvel som 9^2'-di-acetyl-SF-837 og 9-mono-acetyl-Sl-837 er ganske vist nyttige som midler til terapeutisk behandling af bakterielle infektioner, men disse forbindelser lider af den ulempe, at de har en ubehagelig langvarig smag ved oral indgift og derfor ikke er egnet til at blive formuleret til flydende præparater, som er bestemt til at blive givet oralt til børn, som ofte er ude af stand til at nedsvælge et tablet- eller kapselpræparat, eller til personer, som ikke kan lide lægemidlets bitre smag.

Ved de til grund for opfindelsen liggende undersøgelser har man studeret reaktiviteten hos de tre hydroxylgrupper, dvs. 9-? 2'- og 3"-hydroxylgruppen i SF-837 og 4"-hydroxylgruppen i SF-837 med hensyn 5 141170 til acylering. Det liar nu vist sig, at 9- °g 2'-hydroxylgruppen i SF-837 kan acyleres ved at omsætte SF-837 med et alkansyreanhydrid ved stuetemperatur, og at 4"-hydroxylgruppen i SF-837 ligeledes kan acyleres ved at omsætte med et alkansyreanhydrid ved stuetemperatur.

Det har nu overraskende vist sig, at når SF-837 eller et 4"-alkanoyl-SF-837 M1 (dvs. 4"-alkanoyl-4"-depropionyl-SF-837) omsættes med et overskud af et alkansyreanhydrid med 2-5 carbonatomer ved en forhøjet temperatur på 50°C til 120°C i nærværelse af en organisk hase, såsom pyridin, picolin eller triethylamin, så acyleres 9- °g 2'-hydroxy1-gruppen deri med nævnte alkansyreanhydrid, men 4"-alkanoylgruppen i 4"-alkanoyl-SF-837 \ forskydes til 3"-hydroxylgruppen fra 4"-stil-lingen, medens 4"-stillingen samtidig acyleres med det nævnte anvendte alkansyreanhydrid, hvorved der dannes et 9,2',4"-trialkanoyl-3"-propionyl-SF-837 ud fra SF-837 og et 9,2',3",4"-tetraalkanoyl-SF-837 ^ ud fra 4"-alkanoyl-SF-837 M-L· Det har også vist sig, at det således fremstillede 9,2' ,4"-trialkanoyl-3,,-propionyl-SF-837 eller 9,2',3",4"-tetraalkanoyl SF-837 kan yderligere acyleres ved omsætning med en yderligere mængde alkansyreanhydrid ved en temperatur på 50-120°C i en længere reaktionstid eller ved en højere temperatur på 110-120°C, således at endog aldehydgruppen i 18-stilling i SF-837 eller SF-837 molekylet acyleres med nævnte alkansyreanhydrid, hvorved fås det tilsvarende 9,18,2',4"-tetraalkanoyl-3n-propionyl-SF-837 eller det tilsvarende 9,18,2',3",4"-pentaalkanoyl-SF-837 Desuden har det vist sig, at 9,2',4"-trialkanoyl-3"-propionyl-SF-837 og 9,2' ,3",4"-tetraalkanoyl-SF-837 henholdsvis kan omdannes til det tilsvarende 9,4"-dialkanoyl-3"-propionyl-SF-837 og det tilsvarende 9,3",4"-trialkanoyl-SF-837 ved at blive underkastet en partiel og selektiv hydrolyse i vandigt acetone eller i en vandig alkanol, såsom en alkanol med 1-4 carbonatomer, f.eks. methanol, ethanol, propanol eller butanol, der indeholder vand, til udførelse af selektiv fjernelse af 2'-alkanoylgruppen. 9,18,2',4"-Tetraalkanoyl-3"-propionyl-SF-837 Μ}, og 9,18,2',3",4"-pentaalkanoyl-SF~837 kan ligeledes omdannes til henholdsvis det tilsvarende 9,4"-dialkanoyl-3,,"-propionyl-SF-837 og det tilsvarende 9,3",4"-trialkanoyl-SF-837 ved at blive underkastet en partiel og selektiv hydrolyse på samme måde som nævnt ovenfor til udførelse af selektiv fjernelse af 2'- og 18-alkanoylgruppen derfra.

1Λ1170 4

Der er således overraskende tilvejebragt en fremgangsmåde, ved hvilken man ud fra et udgangsprodukt, der indeholder en 4"-acetyl- eller propionyloxy-gruppe, kan fremstille et produkt, der nu har denne gruppe i 3"-stillingen og eventuelt har en helt anden acyloxygruppe i 4"-stillingen, idet man ved gennemacylering af udgangsproduktet overfører den til den 4"-stillede hydroxygruppe bundne acylgruppe til den 3"-stillede hydroxygruppe og efterfølgende uden påvirkning af de 3"-og 4"-stillede alkanoylgrupper frigør den 2'-stillede hydroxygruppe ved hydrolyse. Man kan altså overraskende selektivt indføre en alka-noylgruppe i en af en alkanoylgruppe allerede optaget 4 "-stilling i et SF-837 M-j-derivat.

På denne måde er det lykkedes at syntetisere følgende hidtil ukendte acylderivater (estere) af SF-837· 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-SP-837 M-^, 9,3"-diacetyl-4"-propioriyl-SP-837 M-p 9-propionyl-4"-acetyl-3"-propio-nyl-SF-837 Mp 9,3",4"-tripropionyl-SF-837 Mp 9-acetyl-4"-isobutyl-3"-propionyl-SF-837 Mp 9-acetyl-3",4"-dipropionyl-SP-837 M^ og 9-acetyl-4"-isovaleryl-3"-propionyl-SP-837 Mp hvis fysiske data fremgår af udførelseseksemplerne. Det har vist sig, at disse hidtil ukendte forbindelser, nemlig disse 9,3",4"-trialkanoyl-SF-837 M^derivater praktisk taget ikke viser nogen bitter smag ved oral indgift af dem, men udøver forbedret terapeutisk virkning ved behandling af bakterielle infektioner i forhold til det oprindelige SF-837 °g har en nedsat akut toksicitet ved oral indgift til mus.

Opfindelsen angår derfor en fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 9,3",4"-trialkanoyl-SF-837 M-j-derivater med formlen 0E1

CH OH

A /Λ OHO 5 ^ S 9\ A \ I o_1 0-tr X. i SLo_/ X—o-/ 4X-0E5 < CH3 Ww Λ ZOCOCÆ OH it(oh_)5 oh, ΛοΛ 5 3 rø

oh2 O

3 5 141170 14 3 hvori R og R hver er en acetyl- eller propionylgruppe, og R-' er en acetyl-, propionyl-, n-butyryl-, isobutyryl- eller isovalerylgruppe.

Eksempler på forbindelser med formlen (II) er nævnt nedenfor.

(1) 9,4"-Diacetyl-3"-propionyl-SF-837 ML» der er en forbindelse med formlen (II), hvori R og Ή? hver er acetyl, og R er propionyl.

Stoffet har i det væsentlige ikke nogen bitter smag og er et farveløst krystallinsk produkt med et smeltepunkt på 228-23CTC (under de-komponering). [a]p -60,0°(c = l, chloroform). Denne forbindelse kan også benævnes 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-4"-depropionyl-SF-837· (2) 9,3"-Diacetyl-4"-propionyl-SF-837 M-, , der er en forbindelse

Ί Zl 7L

med formlen (II), hvori R og R hver er acetyl, og Ry er propionyl.

Stoffet har praktisk taget ingen bitter smag og er et farveløst krystallinsk produkt med et smeltepunkt på 198°-203°C (under dekompone-ring). Denne forbindelse kan også benævnes 955"-diacetyl-SE-837· (3) 9-Acetyl-4"-isobutyryl-3"“propionyl-SE-837 , som er en for- 1 i ·*· bindelse med formlen (II), hvori ά er acetyl, R^ er isobutyryl, og R^ er propionyl. Stoffet har i det væsentlige ikke nogen bitter smag og er et farveløst amorft produkt med et smeltepunkt på 140-145^0 (fugtig). Forbindelsen kan også benævnes 9-acetyl-4n-isobutyryl-4M-depropionyl-3"-propionyl-SF-837· : (4) 9~4cetyl-4"-isovaleryl-3"-propionyl-SF-837 M,, der er en for- 1 7c -i· bindelse med formlen (II), hvori Rx er acetyl, Έτ er isovaleryl, og R4 er propionyl. Stoffet har i det væsentlige ikke nogen bitter smag og er et farveløst amorft produkt med et smeltepunkt på 135-140°C.

Denne forbindelse kan også benævnes 9-acetyl-4"-isovaleryl-4"-depro-piony1-3"-propionyl-SF-837· (5) 9,3"-Dipropionyl-4"-acetyl-SF-837 der er en forbindelse med formlen (II), hvori R^ og R^ hver er propionyl, og R^ er acetyl.

Stoffet viser i det væsentlige ikke nogen bitter smag og er ep farve- løst krystallinsk produkt med et smeltepunkt på 205-208°C (under de-komponering). Denne forbindelse kan også benæroes 93n-d.ipΓopionyl-4"-acetyl-4"-depΓopionyl-SF-837· . · -5¾. , 6 141170 (6) 9-Acetyl-3",4"-dipropionyl-SF-837 Μ, , der er en forbindelse med formlen (II), hvori R1 er acetyl, og R* og R^ er propionyl.

Stoffet har i det væsentlige ikke nogen hitter smag og er en farveløs krystallinsk forbindelse med et smeltepunkt på 222-224°0. Denne forbindelse kan også kaldes 9-acetyl-3"-propionyl-Si’-837· (7) 9,3",4"-Tripropionyl-S3?-837 M, , der er en forbindelse med formlen (II), hvori R , Έ? og R hver er propionyl. Stoffet er en farveløs amorf forbindelse med et smeltepunkt på 150-160°C (fugtig).

Nar det krystalliseres, giver det et farveløst krystallinsk produkt med et smeltepunkt på 195-197°C (under let farvning). Denne forbindelse kan også kaldes 9,3"-dipropionyl-SR-837·

Det har vist sig, at 9,3",4"-trialkanoylderivaterne af SF-837 med formlen (II) udøver en høj antibakteriel virkning overfor gramnegative og gram-positive bakterier i mindst lige så høj grad som stamforbindelsen SF-837 selv og kan anvendes som antibakterielle midler på samme måde som SF-837, 9,2'-diacetyl-SF-837 eller 9-mono-acetyl-SF-837 "til terapeutiske formål med den fordel, at forbindelserne med formlen (II) kan indgives oralt i form af flydende præparater uden at give en anstødelig bitter smag. Desuden har det vist sig, at 9,3",4"-trialkanoylderivaterne af SF-837 ^ med formlen (II) giver en højere kurativ effekt end det oprindelige SF-837, når det gives oralt til mus, der intraperitonealt er inficeret med Staphylococcus aureus.

De antibakterielle spektre for 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. l), 9,3"-<3-iacetyl-4"-propionyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. 2), 9 ~ a c ety 1-4"-isobutyry 1-3"-propionyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. 3), 9-acetyl-4n-isovaleryl-3"-propionyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. 4), 9,3"-dipropionyl-4"-acetyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. 5), 9-acetyl-3",4"-dipropionyl-SF-837 (forkortet som forbindelse nr. 6) og 9,3",4"-tripropionyl-SF-837 M-j_ (forkortet som forbindelse nr. 7) er vist i tabel 1 nedenfor sammen med de antibakterielle spektre for det oprindelige SF-837, 9,2'-diacetyl-SF-837 og 9-monoacetyl-SF-837 til sammenligningsformål. De minimale ihhiberende koncentrationer (mcg/ml) af disse forbindelser overfor forskellige mikroorganismer blev bestemt ifølge en standardseriefortyndingsmetode under anvendelse af infusionsmedium som inkuberingsmedium, og bedømmelsen af væksten η 1170 7 af forsøgsorganismerne blev foretaget efter 24 timers intubation ved 37°C.

8 141170 i i Ο H C'- ο -μ oo ωωοοοο>Λσ>^0Γ>4-^-α> ^ a ø i inLrNC'-C'-'A^^^oo in lp

i OCq - * *· ·* - *· ^ ^ _Γ ,-Γ ,-Γ T

CT> P 02 hhoohohooooh

-Η I

Η Η IN

's. J -p 00 mocpmcmo-'Mc^O'^'COOJ

&D C\J CD I IPIPKNIAHHIPHOOC'-H

O r« O Eej i'r,i'r‘r,r>f'r’ Z' _** . (τΓ*

d CPP02 HHOHIPOHOOOO IP

W COlOONCO^CT'^t^^^COjS

f, |[V 0-LT\H IN IP O IP O O O IN IP

0) Co k\

fj cq 00 OHOOHOi—lOOOOH

O I

•rl r-) le i ρ ^ οο'χιοο'χιοοσ'ωσ'σ^σ'οο^

f_l · [x. P IN P IN H Ρ Ο Η O IN P

-Ρ Ο H CD ft *- *· ·* ^ " ** ** "

pj [ί, p ra ft O ι-l Ο Ή Ο Ο Η Ο Ο Ο O.H (D I

Ο H

o ] -ft ^ vOCMcPOCOPOOPPg'COig

Μ p ft · LPHPPINHiNHOOINP

Q.J 0 rs «Ν **. c* Τ» CN ·» *·* C» ^ r. r*

Φ p [Q fj Η Ρ Ο Η Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο H

'ft I

P 1-1 ia p ii§ νοοΜοο^οοοΓ'ΟοσΝσ'σ^ωω m oft · PHINPCNPINH Ο O Lf\Lf\ _Q Ο «Η (D £-1 *» *» ** ** ** ** *“ ♦* ·** ^ ** r

Η ρ ,α ra ft HIPOHOOOOOOHH

Η Ί H

Ϊ t if * KIRiRiRRiKSSSSSK

§ a p,Spft hhhhooOooooh eh a · i

•Η H

H | -ft vOCMONVDOOC^OO^O'^opvg

g p ft · iPHPPINHiNHOOC'-P

^ Ο H CD ft *· " " " " " ^ " Λ ^ ” ρ jo ED ft Η Ρ Ο H O Ο Ο Ο Ο Ο Ο Η Γ~\

ι -ft IXIOJCJNOOOCT'COC^^C^CO'O

£_l pj * la i—1 A A CN- i—I CN i—! O O CN A

Ο·Η0)Ρ-! ** ** ** ^ i' ** ** ** ** ** ^ **

rQ tø £j H AO Η Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο H

r~\

,.§ H ocxic^vocoo'.coiPcr'Cr'COM

Oft · A Η P ITS IN H IN Η Ο O IN· P

Ο H CD ft «·· ** «* r ** ^ ^ ^ ^ ^ ^

Pq,orap H l^o Η Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο H

H

ΙΑ Η ΓΑ d- Η Η ΚΛ O Pd Ο σ' Vg a oo ο σ' (døhuo ramdmm o

p pH p P raoraowncoco h> !>i O

O on Oil O pop P PiA -p +3 Η O OCUOPOHOojOEHOKOtQOI CQ Μ O Ej OCT'OP OH OO 0«qj op op OP po po Ph -aj CD ooocuodooo OOOOO Ο (ί O ti hip ooj op 002 o cm ora oh oh ora oh oh rara rara m p φ Η Η H HHOHO-PO-POCDOpOppHpH >od h.ra h.ra o> -PH -p^-Ph.Hp oo oo HH hh QOm iippppppra pn5 PH pH ρω og og Η Η Η Η ΡΡΗ ρ,ωρωρωρρωοωοωοω60ΗΡΗΡΗ-ΡΗ-ρ Ρ2χΐΡ ΡΡ ΡΡ ΡΡ ΡΡ Ρο Ρ Ε PS Ρο ρω ρω ορ υρ <ρηρ ρ ρ -ρΡ -ΡΡ -ΡΗ -ΡΡ -ρω -ρω -Pi>jHp η s ρ Ρ ρ Ρ

<3^&0 02 Ρ CQP 02 Ρ 02P ΜΗ 02Ρ 02·Ρ CQ Ρ Ο Ρ R ft Wtfl PCQ

9 141170 iΟ (Τ' CT (Τ'

LP\ i—I i—I O

*· rf' r-

Η Ο Ο O

CD (T <T (T

LT\ ΙΆ Η H

r> #> η ο ο o : oo σ\ σ' on

I> i—I [Η O

#« r1 ft rt o o o o CO (Τ' (T< 0s·

D- Η Η O

r rt rt rt o o o o CO CA O' (Τ'

0- i—I iH O

ft C» ft ft o o o o co ca cr> crt

A- i—I i—! O

r- C i' o o o o CD (Τ' (T (Τ'

LT\ i—I i—I O

#- ft ft f'

Η Ο Ο O

cd ca ο σ'

LA i—I i—I O

ft r r> ft H o o o

co (T er (T

H rH O

rt ft ft ft o o o o

CO (Τ' (Τ' (T

tN H HO

01000 (T ra

Hi

1— ^ 1H

-Η ·Η Φ Π3 h fL to (H s 0 £φφ·ηφφρ-ρ -P co > -p ce φ i ra υ ·η cd ο ·η p> η (Λ H d Ρ p «ini ίο p φ Μ ,Ο Φ·Η C0 Η (ί (DiJ Φ in d HP d -Ρ Φ d -Ρ Φ <rl

•Hil |>3ii Pi Piii P O

OH Ρ Ρ !>ΐ P P >s P

Cfl d OHP> OH-P ffi

pq Φ O Ό O Ό CQ

1A1170 lo

Den kurative effekt af 9,3",4"-trialkanoylderivaterne af SF-837 med formlen CII) ved en terapeutisk behandling af Staphylococcus aureus 209?-infektioner hos mus blev afprøvet på følgende måde:

En vandig suspension af en patogen Staphylococcus aureus 209P i en vandig opløsning af 5% mave-mucin blev indsprøjtet intraperitonealt i mus i en dosis, der hver gang var 100 gange større end LD^Q-mæng-den af nævnte stamme. Husene blev inddelt i grupper på hver 10 mus.

En dosis på 100 mg/kg eller 200 mg/kg af forsøgsforbindelsen, suspenderet i en vandig opløsning af 2% gummi arabicum, blev så givet oralt til de inficerede mus umiddelbart efter podningen. De således behandlede mus blev derpå holdt på sædvanlig måde i 7 dage, og den 7· dag efter indgiften af forsøgsforbindelsen blev antallet af overlevende mus i hver gruppe talt. De opnåede forsøgsresultater er vist i tabel 2 nedenfor.

Tabel 2

Antal overlevende mus i hver gruppe

Eorsøgsforbindelse *) Dosering: Dosering: 100 mg/kg_200 mg/kg

Forbindelse nr. 1 6/10 10/10

Forbindelse nr. 2 8/10 10/10

Forbindelse nr. 3 4/10 10/10

Forbindelse nr. 4 0/10 3/10

Forbindelse nr. 5 4/10 8/10

Forbindelse nr. 6 6/10 10/10

Forbindelse nr. 7 5/10 10/10 SF-837 (til sammenligning) 0/10 6/10 9,2'-diacetyl-SF-837 (til sammenligning) 0/10 6/10 9-mono ac e tyl-SF-837 (til sammenligning) 5/10 8/10 *) I tabel 2 er forbindelserne nr. 1 til 7 de samme som angivet i tabel 1 ovenfor. Som det ses klart af resultaterne i tabellerne ovenfor, er 9,3"-diacetyl-4"-propionyl-SF-837 H-^ (forbindelse nr. 2, der også kan benævnes 9,3"-diacetyl-SF-837) mest foretrukket blandt forbindelserne med formlen (II).

Ved bestemmelse af akut toksicitet ved oral indgift til grupper af mus, hver på 5 mus, viste det sig, at de omhandlede 9?5",4"-trialka- 11 141170 noylderivater af SF-837 havde en LDq-værdi på mere end 3*200 mgAg, medens det oprindelige SF-837 (fri hase) havde en LD^-værdi på 3.200 mgAg* Desuden har de omhandlede 9,3",4"-trialkanoylderivater af SF-837 ikke eller praktisk taget ikke den hitre smag, som sædvanligvis hæfter ved de makrolide antibiotika, således at de omhandlede forbindelser fordelagtigt er egnet til at blive formuleret som flydende præparater, der er bestemt til at blive givet oralt til børn.

I betragtning af alle de ovennævnte mikrobiologiske og fysiologiske egenskaber hos de omhandlede 9,3",4"-trialkanoylderivater af SF-837 vil det være klart, at de har væsentligt forbedrede egenskaber som antibakterielle midler i forhold til det oprindelige SF-837* De omhandlede 9,3",4"-trialkanoylderivater af SF-837 ^an formuleres til en vandig opløsning eller suspension ved konventionelle farmaceutiske metoder til oral indgift og også til injektion, og de kan naturligvis foreligge i forskellige andre formuleringer, såsom tabletter, kapsler, pulvere og granulater, sammen med kendte farmaceutisk acceptable bærere, såsom stivelse, lactose eller calciumcarbonat på samme måde som SF-837 selv.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af 9,3",4"-trialka-noylderivaterne af SF-837 ^ med formlen (II) er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del angivne.

9,2',3",4"-Tetraalkanoylderivaterne af SF-837 med formlen (III) og 9,18,2',3",4"-pentaalkanoylderivaterne af SF-837 med formlen (IV) er selv hidtil ukendte stoffer. Generelt kan de fremstilles ved at omsætte et tilsvarende alkansyreanhydrid med en forbindelse udvalgt blandt SF-837 (se "Journal of Antibiotics" ,vol. 24, side 46o (1971)), 9,2'-diacetyl-SF-837) 9-propionyl-SF-837, 9,21-dipropionyl-SF-837 og 9,2*,4"-triace-tyl-SF-837 (kendt fra "Journal of Antibiotics", vol. 24, henholdsvis side 437, 473 og 534 (197l))i hvor reaktionen til acylering af nævnte udgangsstof udføres ved en temperatur på 50^120°C i et organisk opløsningsmiddel i nærværelse af en organisk base af amintypen, udvalgt blandt pyridin, quinolin, a-picolin, diethylanilin, F-ethylmor-pholin og triethylamin. Det har vist sig, at 9- og 2'-hydroxylgruppen i SF-837 såvel som 9-, 2'- og 4"-hydroxylgruppen i SF-837 ^ er relativt meget reaktive for acylering med et alkansyreanhydrid, såsom ed-dikesyreanhydrid eller propionsyreanhydrid, at den tertiære 3'Vhy-droxylgruppe i SF-837 og i SF-837 er relativt mindre reaktiv for 12 141170 acylering, og at når SE-837 acyleres ved omsætning med et alkansyre-anhydrid, såsom eddikesyreanhydrid, ved en forhøjet temperatur på f.eks. 50-120°C i nærværelse af en egnet organisk base, såsom pyri-din, under vandfrie betingelser, bliver 9- og 2'-hydroxylgruppen deri let acyleret med nævnte alkansyreanbydrid,og 4"-propionylgrup-pen i SF-837 forskydes til 3 ''-hydroxylgruppen, så denne omdannes til en 3M-propionyloxygruppe, medens ^-''-stillingen acyleres med nævnte alkansyreanbydrid. Hår 9,2'-diacetyl- eller 9,2'-dipropionyl-SP-837 eller 9,2',4"-triacety1-81-837 acyleres med et alkansyreanbydrid på den samme måde som angivet ovenfor, finder forskydningen af 4"-propionylgruppen eller 4"-acetylgruppen til 3"-bydroxylgruppen sted samtidig med acyleringen af 4"-stillingen med nævnte alkansyreanhy-drid.

Fremstillingen af de som mellemprodukter .anvendte 9,18,2' ,3",4"-pentaalkanoy Ideri vater af SP-837 med formlen (IV) kan ske på lignende måde ved at acylere 81-837» 9 »2' ,4"-triacetyl-S3?-837 9»2'- diacetyl-Sl-837, 9-propionyl-SF-837 eller 9,2'-dipropionyl-SF-837 med den almeneformel (V) med et tilsvarende alkansyreanhydrid med formlen (VI) ved en temperatur på 50-120°0 i et længere tidsrum eller ved en temperatur på 100-120°C og i nærværelse af en organisk base af aminty-pen som nævnt ovenfor. Således kan f.eks. 9,2',4"-triacetyl-3"-propio-nyl-Sl-837 og 9,18,2',4"-tetraacetyl-3"-propionyl-SF-837 fremstilles ved at acylere SF-837 med eddikesyreanhydrid ved en temperatur på 50-120°C i nærværelse af en organisk base af en sådan art som pyridin, quinolin, α-picolin, diethylanilin, H-ethylmorpholin og tri-ethylamin. 9,2',3"-Iriacetyl-4"-propionyl-SF-837 M-j_ (nemlig 9,2',3"-triacetyl-rSF-837) og9,2' ,3"-triacetyl-4",l8-dipropionyl-SF-837 (nemlig 9,2',3"-triacetyl-18-propionyl-SF-837) kan fremstilles ved at acylere 9,2'4"-triacetyl-SF-837 med propionsyreahbydrid ved en temperatur på 50-120°C i nærværelse af en organisk base af amin-typen som nævnt ovenfor.

Hår SF-837 anvendes som begyndelsesmateriale, der skal acyleres med acyleringsmidlet med formlen (Vi), skal dette acyleringsmiddel være eddikesyreanhydrid eller alternativt propionsyreanhydrid, og der dannes et 9,2' ,3",4"-tetraalkanoylderivat af SF-837 M-^med formlen (III), hvori 3"-alkanoylgruppen er propionylgruppen forskudt fra 4"-stillingen, medens 9-, 2'- og 3"-alkanoylgrupperne, der er til stede 13 141170 deri, er identiske og er de samme som eddikesyre- eller propionsyre-resten i det anvendte acyleringsmiddel med formlen (Vi). Hvis 9,2'-diacetyl-SF-837 eller 9,2'-dipropionyl-SF-837 anvendes som begyndelsesmateriale, der skal acyleres med acyleringsmidlet med formlen (VI), kan dette acyleringsmiddel være et sådant med formlen (VI), hvori R3 er en acetyl-, propionyl-, n-butyryl-, isobutyryl- eller isovaleryl-gruppe, og der dannes et 9 >2', 3” ,4"-tetraalkanoylderivat af SF-837 ^ med formlen (III), hvori 3"-alhanoylgruppen er propionylgruppen forskudt fra 4"-stillingen, 9~ °S 2*-alkanoylgrupperne er de samme acetyl- eller propionylgrupper, og 4"-alkanoylgruppen er identisk med alkanoylgruppen i det anvendte acyleringsmiddel. Når 9,2' ,4"-triace-tyl-SF-837 anvendes som hegyndelsesmateriale, der skal acyleres,kan det anvendte acyleringsmiddel være et sådant med formlen (VI),.hvori R3 er en acetyl-, propionyl-, n-butyryl-, isobutyryl- eller isovale-rylgruppe, og der dannes et 9,2r,3",4"-tetraalkanoyl-SF-837 med formlen (III), hvori 9-, 2'- og 3"-alkanoylgrupperne er den samme acetylgruppe, og 4"-alkanoylgruppen er identisk med alkanoylgruppen i det anvendte acyleringsmiddel.

Acyleringen af begyndelsesmaterialet med formlen (V) med acyleringsmidlet med formlen (VI) kan bekvemt udføres i et organisk opløsningsmiddel, der er inaktivt overfor acyleringsreaktionen, og det er fortrinsvis et relativt højt kogende organisk opløsningsmiddel, såsom diglym (nemlig bis-(2-methoxy-ethyl)-ether),ethylenglycoldimethyl-ether og toluen. Naturligvis kan et lavere kogende organisk opløsningsmiddel, såsom benzen, anvendes som reaktionsopløsningsmiddel, hvis reaktionstrykket er højere. Et overskud af pyridin, der anvendes som ovennævnte organiske base af amintypen, kan lejlighedsvis også tjene som reaktionsopløsningsmiddel. På den anden side kan et overskud af alkansyreanhydridet, der anvendes som acyleringsmiddel, såsom eddikesyreanhydrid og propionsyreanhydrid,også anvendes som reaktionsopløsningsmiddel, forudsat at en tilstrækkelig mængde af den organiske base er til stede i reaktionssystemet. Alkansyreanhydridet med formlen (VI), der anvendes som acyleringsmiddel, kan være eddikesyreanhydrid, propionsyreanhydrid, n-butansyreanhydrid, isobutansyre- eller isovalerianésyreanhydrid. I stedet for disse syreanhydrider kan der anvendes et funktionelt ækvivalent reagens til syreanhydridet med formlen (VI), f.eks. en blanding af syre-chloridet og et metalsalt af den tilsvarende: syre.

14 141170

Re aktions temperatur en ved acy leringen. kan i almindelighed være en forhøjet temperatur på 50-120°C. Når reaktionstemperaturen overstiger 100°C, må det forventes, at der dannes forøgede mængder af uønskede biprodukter. Når reaktionstemperaturen på den anden side er mindre end 50°C, er den reaktionstid, der kræves for at fuldføre acyleringen, ca. 7 dage. Det er derfor ønskeligt at udføre acylerin-gen ved en temperatur på 80-100°C og i en reaktionstid på 10-20 timer. Når begyndelsesmaterialet med formlen (V) acyleres med alkan-syreahhydridet med formlen (VI) ved en reaktionstemperatur på 65-85°C i en reaktionstid på 10-15 timer under anvendelse af acyle-ringsmidlet (VI) i en mængde på 1,5 til 2,0 ækvivalenter i forhold til begyndelsesmaterialet (V), dannes så godt som udelukkende et 9, 2' ,3",4"-tetraalkanoyl-SF-837 M1 (III), medens der så godt som ikke dannes et 9,18,2' ,5",4-"-pentaalkanoyl-S]?-837 (IV). Når acyleringen udføres ved en temperatur på 85-95°C, dannes et 9*2',3",4-"-tetraalkanoy 1-31-837 med formlen (III) som hovedprodukt, og et 9,18,2' ,3" ,4"-pentaalkanoyl-Si'-837 med formlen (IV) dannes i mindre mængde. Når acyleringen udføres ved en relativt høj temperatur på f.eks. 110-120°C og i relativt lang tid, kan 18-aldehydgruppen i lac-tonringen i begyndelsesmaterialet (V) acyleres, og der fås en forøget mængde 9,18,21,3",4-"-pentaalkanoyl-Sl-837 (-^)· 9,2',3",4w-tetraalkanoyl-Sl-837 % (III) eller 9,18,2',3",4"-penta-alkanoyl-SI-837 M1 (IV) eller en blanding deraf, der er blevet fremstillet på ovennævnte måde, kan så isoleres fra reaktionsblandingen ved derfra at skille overskuddet af ureageret acyleringsmiddel, ure-ågeret begyndelsesmateriale og reaktionsopløsningsmidlet. Til dette formål er det bekvemt, at man blander reaktionsblandingen med samme volumen eller mere benzen, toluen eller ethylacetat sammen med vand og vandigt natriumhydrogenearbonat, omrører den resulterende blanding godt for at overføre acyleringsprodukterne til benzen-, toluen- eller ethylacetatlaget, fjerner dette benzen-, toluen- eller ethylacetat-lag, der indeholder acyleringsprodukterne i opløsning, fra den vandige fase af blandingen og derpå vasker det med vandigt natriumhydro-gencarbonat og med vand og til sidst koncentrerer til tørhed ved afdampning af det organiske opløsningsmiddel for at få udfældet acyleringsprodukterne af 31-837- På denne måde kan 9:2',3",4"-tetraalkano-ylderivatet af SI-837 (III) isoleres fra reaktionsblandingen. Hvis reaktionsblandingen indeholder 9,18,2',3",4"-pentaalkanoylderivat af H1170 15 SF-837 M1 (IV), kan en "blanding af 9,2',3",4"-tetraalkanoylderivat af SF-837 Mjl (III) og 9,18,2' ,3",4"-pentaalkanoylderivat af SF-837 (IV) isoleres ved ovennævnte procedure. Det isolerede 952',3",4M-te-traalkanoylderivat af SF-837 (III) kan renees yderligere ved kromatografi på en silicagelsøjle med en blanding af benzen-acetone som udviklingsvæske eller ved omkrystallisation af isopropanol eller ved en kombination af disse rensningsprocedurer. Isoleringen af 9»2', 3",4"-tetraalkanoy1-81-837 (III) fra 9>18,2',3",4"-pentaalkanoyl- s:f-837 (IV) kan opnås ved at underkaste blandingen af disse stoffer en konventionel søjlekromatografi på silioagel med benzen-acetone som udviklingsvæske. Om ønsket er det imidlertid muligt at anvende blandingen af 9,2' ,3",4"-tetraalkanoyl-SI'-837 (III) og 9,18,2', 3" ,4"-pentaalkanoyl-Si’-837 M-j_ (IV) som sådan som udgangsmateriale, der skal hydrolyseres partielt og selektivt ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, fordi begge disse stoffer (III) og (EV) giver det ønskede 9,3" ,4"-trialkanoy 1-814-837 med formlen (il) efter selektiv fjer nelse af 2'-alkanoylgruppen og 18-alkanoylgruppen derfra ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Den partielle og selektive hydrolyse af 9,2',3",4"-tetraalkanoylderi-vaterne af S]?-837 med formlen (III) og/eller 9,18,2' ,3",4"-penta-alkanoylderivaterne af SF-837 me<^· formlen (IV) kan udføres véd, at 9,2',3",z»-"-tetraalkanoyl-SI,-837 (III) og/eller 9,18,2' ,3",4"-pentaalkanoyl-SF-837 opløses i det vandige medium, der består af en vandig alkanol, fortrinsvis en alkanol med 1-4 carbonatomer indeholdende vand, f.eks. vandigt methanol, vandigt ethanol, vandigt propanol, vandigt butanol, eller vandigt acetone, hvorpå den resulterende opløsning opvarmes eller får lov at stå ved en temperatur på fra stuetemperatur til 100°C. Denne hydrolysereaktion afsluttes i løbet af 2-4 dage ved stuetemperatur, medens den kan afsluttes i løbet af 6-10 timer eller mindre ved forhøjet temperatur på fra 60°C op til kogepunktet for det anvendte opløsningsmiddel.

Når det drejer sig om selektiv hydrolyse af 9?1$»2',3",4"-pentaalka-noyl-Si-837 (IV), kan denne hydrolyse udføres enten ved først at lade en opløsning, der indeholder 9,18,2',3",4"-pentaalkanoyl-SF-837 i det vandige medium, nemlig vandigt acetone eller en vandig alkanol, henstå ved stuetemperatur til udførelse af den overvejende fjernelse af 2'-alkanoylgruppen,hvorpå man opvarmer den partielt hydro- 16 141170 lyserede reaktionsblanding til en forhøjet temperatur på 60-100°C til udførelse af fjernelsen af 18-alkanoylgruppen; eller ved at opvarme opløsningen, der indeholder 9518:21,5"^"-pentaalkanoyl-SI'-SJ? fra "begyndelsen af til en forhøjet temperatur på 60-100°C, fortrinsvis i nærværelse af en lille mængde (f.eks. 1-10 vægt-%) af en svag "base, såsom et alkalimetalhydrogencarbonat, f.eks. natri-umcarbonat; og en tertiær amin, f.eks. triethylamin, pyridin, N-me-thylpiperazin eller E-methylmorpholin, til udførelse af den overvejende fjernelse af "både 2'-alkanoylgruppen og 18-alkanoylgruppen på en gang. En "blanding af 9 ?2' ,3" ,4"-tetraalkanoyl-SE-837 (III) og 9,18,2',3",4"-pentaalkanoyl-SF-837 (IV) kan hydrolyseres selektivt til det ønskede 9,3" ,4"-trialkanoyl-SE-837 (H) ved at opvarme en opløsning af nævnte "blanding i et vandigt medium ved en forhøjet temperatur på 60-100°C i nærværelse af en svag "base, såsom en af de ovennævnte. Den vandige alkanol eller acetone kan passende indeholde 10-30 volumen-^ vand. Isoleringen af det ønskede produkt (II) fra reaktionshlandingen kan "bekvemt udføres ved at ekstrahere reaktions-"blandingen med et organisk opløsningsmiddel, såsom benzen eller ethyl-acetat, vaske ekstrakten med vand og derpå koncentrere den ved afdampning af det organiske opløsningsmiddel for at afsætte det ønskede produkt.

De følgende eksempler belyser fremgangsmåden ifølge opfindelsen nærmere .

Eksempel 1 (a) SF-837 (10 g) opløses i en blanding af 6o ml pyridin og 3o ml eddikesyreanhydrid, og den resulterende opløsning opvarmes ved 100°C i 10,5 timer og får så lov at henstå ved stuetemperatur i 1 dag for at fuldføre acyleringsreaktionen. En prøve udtages fra reaktionsblandingen, undersøges ved tyndtlagskromatografi på silicagelplade under anvendelse af en blanding af benzen-acetone (4:1) som udviklingsvæske (farvet med svovlsyre), og det konstateres, at acyleringsprodukterne af SE-837 indeholder 9,2',4"-triacetyl-3"-propionyl-SE-837 som hovedbestanddel og mindre mængder 9,21-diacetyl-SE-837 og 95l852',4"-tetra-acetyl-3"-propionyl-SE-837 M-^.

Eeaktionsblandingen koncentreres til tørhed under reduceret tryk, og remanensen ekstraheres med benzen, og derpå vaskes den resulterende 17 141170 benzenekstrakt med vand. Den således opnåede benzenekstrakt koncentreres til tørhed, og remanensen optages i et lille volumen benzen.

Den resulterende opløsning i benzen ledes gennem en' søjle af silica-gel, der så udvikles med et blandet opløsningsmiddel af benzen-acetone (14:1). Eluatet opsamles i lo ml fraktioner, fraktionerne nr.

55 til 80 forenes og koncentreres til tørhed, og der fås 2,5 g af et pulverprodukt af 9il8,2',4"-tetraacetyl-3"-propionyl-SF-837 M^. Smeltepunkt 105-110°C

Molekylvægt (bestemt ved massespektro-metri) 981 N.M.E.-spektrum (i deuterochloro- form) Intet signal for gruppen -CHO iagttages.

Dette produkt har så godt som ingen antibakteriel aktivitet.

(b) fraktionerne nr. 90 til 135 af ovennævnte eluat forenes og koncentreres til tørhed, og der fås 4,9 g af et pulver, der består af 9>2',4"-triacetyl-3"-propionyl-SP-837 M^· Dette pulver krystalliseres af isopropanol, og der fås renset 9,2',4"-triacetyl-3"-propio-nyl-Sf-837 M^ med følgende egenskaber:

Smeltepunkt 218-222°C (under dekomponering og farvning)

Molekylvægt (bestemt ved massespektrerne tri) 959 N.M.E.-spektrum (i deuterochloro- form) Signal for gruppen -CHO ved 9185

Dette produkt har en antibakteriel aktivitet, men den er lavere end aktiviteten af 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-SP-837 M-^. 11 · (c) fraktionerne nr. 81 til 89 fra ovennævnte eluat forenes og koncentreres til tørhed, og der fås 1,0 g af et pulver, der indeholder en blanding af 9,18,2' ,4''-tetrascetyl-3n-propionyl-SF-837 M^ og 9»2', 4"-triacetyl-3"-propionyl-SP-837 M-^.

(d) 9,2',4"-Triacetyl-3"-propionyl-SP-837 M^ (4,0 g) opnået ved ovennævnte procedure (b) opløses i 5o ml vandigt 90%'s methanol (dvs.

18 141170 methanol indeholdende lo volumen-% vand), og den resulterende opløsning opvarmes ved 60°C i 10 timer for at udføre partiel og selektiv hydrolyse af nævnte 9,2' ,4"-triacetyl-3"-propionyl-Si'-837 M^. Den således opnåede reaktionsblanding blandes med 250 ml vand og 250 ml benzen, og det vandige lag af den resulterende blanding indstilles på pH 8 ved tilsætning af vandigt natriumhydrogencarbonat. Blandingen rystes så kraftigt og henstilles så i nogen tid. Benzenfasen skilles fra den vandige fase, vaskes med vand og koncentreres så til tørhed, og der fås 3,6 g af et krystallinsk produkt af 9,4-"-diacetyl-3"-propionyl-rSi,-837 M-^. Dette produkt omkrystalliseres af isopropa-nol, og der fås et produkt med følgende egenskaber:

Smeltepunkt 228-230°C (under dekomponering)

Molekylvægt (bestemt ved massespektrerne tri) 897

Specifik optisk [a]^p -60,0° drejning (tf, CHOlj) N. M. R.-spektrum (i deuterochloroform) . Signal for gruppen -CHO ved 9567 (e) 3,° g af blandingen af 9,18,2',4"-tetraacetyl-3"-propionyl-81-837 og 932' ,4"-triacetyl-3"-propionyl-SI’-837 M^, opnået ved ovennævnte procedure (c), opløses i 300 ml vandigt 80%'s ethanol (nemlig ethanol indeholdende 20 volumen-% vand), og den resulterende opløsning opvarmes ved 80°C i 20 timer til partiel og selektiv hydrolyse. Den således opnåede reaktionsblanding indstilles så på pH 8,0 ved tilsætning af vandigt natriumhydrogencarbonat og ekstraheres derpå med benzen. Den resulterende ekstrakt i benzen vaskes med vand og koncentreres til tørhed, og der fås 2,0 g af et krystallinsk produkt af 9,4"-diacetyl-3n-propionyl-SI‘-837 M^. Dette produkt omkrystalliseres af isopropanol, og der fås et produkt med samme egenskaber som nævnt ved procedure (d), (f) 0,6 g 9,18,2',4"-tetraacetyl-3"-propionyl-SF-837 opnået ved ovennævnte procedure (a), opløses i 100 ml s vandigt methanol, og den resulterende opløsning får lov at henstå ved stuetemperatur i ca. 16 timer. En stor del af ovennævnte acylerede SE-837 omdannes herved til 9,18,4"-triacetyl-3n-propionyl-SF-837 M^, der har et smeltepunkt på 113-116°0 og en molekylvægt på 939? målt ved 19 141170 massespektrometri. Dette produkt har ingen antibakteriel aktivitet.

Dette 9,18,4"-triacetyl-3"-propionyl-SF-837 (0¾5 g) opløses igen i 20 ml vandigt 80$'s ethanol, der indeholder 5 volumen-# triethyl-amin, og den resulterende opløsning opvarmes på vandbad i 6 timer under tilbagesvaling for at fjerne 18-acetylgruppen ved hydrolyse.

Den således opnåede reaktionsblanding koncentreres til tørhed under reduceret tryk, og der fås 0,45 g af et farveløst krystallinsk produkt af 9,4"-diacetyl-5"-propionyl-SJ'-857 Dette produkt omkrystalliseres af isopropanol, og man får 9,4''-diaoetyl-3"-propionyl-SF-837 smeltepunkt 228 til 230°C (under dekomponering).

Eksempel 2 (a) 9,2',4"-triacetyl-SE-837 (2 g) (der ep kendt som 2’,4",9-tri-O-acetyl-4'’-depropionyl-SP-837 og beskrevet i "Journal of Antibiotics", vol. 24, side 534-535 (1971)) blandes med en blanding af 8 ml pyridin og 8 ml propionsyreanhydrid, og blandingen opvarmes ved 100°C i 50 timer. Eeaktionsblandingen hældes i et stort rumfang isvand, som derpå ekstraheres tre gange med 100 ml portioner af benzen.

De resulterende ekstrakter i benzen forenes, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres.

Den koncentrerede opløsning kromatograferes på en søjle af silica- gel (3 x 20 cm) under anvendelse af en blanding af benzen-acetone (15:1) som udviklingsvæske. Eluatet fra søjlen opsamles i 10 g fraktioner. Fraktionerne nr. 25-33 forenes og koncentreres, og der fås 800 mg af et pulverprodukt af 9,2',3"-trfacetyl-4"-propionyl-S]?- 837 (nemlig 9,2',3"-triacetyl-SF-837).

Smeltepunkt 90-95°C (fugtig)

Molekylvægt (bestemt ved massespektrometri) 939 (b) Det rensede 9,2',3"-'triaoetyl-4,,-propionyl-SF-837 M^ (800 mg), opnået ved ovennævnte procedure (a), opløses i 30 ml vandigt 90$'s methanol (dvs. methanol indeholdende 10 volumen-# vand), og den resulterende opløsning får lov at henstå ved 40°C i ca. 16 timer til hydrolyse. Eeaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk, og den sirupsagtige remanens blandes med isopropanol, og der udfældes 600 mg af et krystallinsk produkt af 9,3"-diacetyl-4"-propionyl-S]?-857 M1 (dvs. 9,3"-diacetyl-SF-837)· Dette produkt.omkrystalliseres af iso- 141170 2ο propanol, og der fås et rent produkt med følgende egenskater:

Smeltepunkt 198-203°C (under dekomponering)

Molekylvægt ("bestemt ved massespektr metri) 897 (c) Fraktionerne nr. 6-22, opnået ved søjlekromatografien, der "blev udført i ovennævnte procedure (a), forenes og koncentreres, og der fås 850 mg af et pulver, der indeholder en "blanding af 9,2',3"-triacetyl-18-propionyl-SF-837 og 9»2', 3"-triacetyl-SF-837· Dette pulver opløses i 40 ml 80%'s vandigt ethanol, der indeholder 5 volumen-% triethylamin, og den resulterende opløsning opvarmes ved 65°C i 8 timer til partiel hydrolyse. Den således opnåede reaktionshlanding koncentreres, og den sirupsagtige remanens "blandes med 5 ml isopropanol, og der udfældes 400 mg af et pulver af 9,3"-diacetyl-SF-837 som et yderligere produkt. Smeltepunkt 198-203°C (dek.).

Eksempel 3 (a) 9,2'-Diacetyl-SF-837 (1,0 g) opløses i en blanding af 5 ml pyridin og 4 ml eddike syre anhydrid, og den resulterende opløsning opvarmes ved 105-110°C i 60 timer til aeetylering af 9,2'-diacetyl-SF-837· Reaktionsblandingen hældes i et stort rumfang isvand, som så ekstrahe-res to gange med 100 ml-portioner af benzen. De forenede benzenekstrakter vaskes med en vandig opløsning af 5% kaliumhydrogensulfat, derpå med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og til sidst med vand. Benzenopløsningen (de vaskede ekstrakter) koncentreres til tørhed, og der fås 0,9 g af et farveløst pulver, der består af 9,18,2',4"-tetraacetyl-3"-propionyl-SF-837 M^.

(b) Det rensede 9,18,2',4,t-tetraacetyl-3"-propionyl-SF-837 (0,98 g), opnået ved ovennævnte procedure (a), opløses i 80 ml vandigt 80%'s ethanol, indeholdende 5 volumen-% triethylamin, og den resulterende opløsning opvarmes i 8 timer under tilbagesvaling til hydrolyse. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed, og der fås 0,8 g af et krystallinsk produkt af 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-SF-837 ^melte-punkt 228-230°C (dek.).

21 141170

Eksempel 4 (a) 9-Propionyl-S]?-837 (20 g) opløses i en blanding af 80 ml pyri-din og 40 ml eddikesyreahhydrid, og den resulterende opløsning opvarmes ved 100°C i 20 timer til acylering af 9-propionyl-SF-837. Den således opnåede reaktionsblanding hældes så i 200 ml vand, der indeholder 50 g is, hvilket så neutraliseres ved tilsætning af vandigt natriumcarbonat og ekstraheres tre gange med 100 ml-portioner af ethyl-acetat. De resulterende ekstrakter i ethylacetat forenes, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres ved afdampning af opløsningsmidlet, og der fås 21 g af en sirupsagtig remanens, der indeholder 9-propionyl-2',4n-diacetyl-3n-propionyl-SE-837 og en mindre mængde 9-propionyl-18,2',4"-triacetyl-3"-propionyl-SP-837 E^.

(b) Den sirupsagtige remanens, opnået ved ovennævnte procedure (a), hældes i 280 ml vandigt 90%'e methanol, og den resulterende opløsning opvarmes ved en temperatur på 65°0 i 5 timer, blandes med 6 ml triethyl-amin og opvarmes så ved en temperatur på 65°C i yderligere 9 timer.

Den således opnåede hydrolysereaktionsblanding koncentreres til tørhed, og remanensen opløses i 3° JfL isopropanol. Den resulterende opløsning får lov at køle af og henstå, og der udfældes et krystallinsk produkt. Dette produkt (12 g) isoleres ved filtrering og identificeres som 9-propionyl-4"-acetyl-3"-propionyl-SF-837 Dette produkt omkrystalliseres af isopropanol, og der fås et produkt med et smeltepunkt på 205-208°C (dek.) og en molekylvægt på 9H, bestemt ved massespektrometri.

Eksempel 5 9,2'-Diacetyl-SE-837 (1,0 g) opløses i en blanding af 50 Hil pyridin og 10 ml isobutansyreanhydrid, og den resulterende opløsning opvarmes ved 100°C i 48 timer. Den således opnåede reaktionsblanding, der indeholder 9,2'-diacetyl-4"-isobutyryl-3"-propionyl-SE-837 og en mindre mængde 9,2'-diacetyl-18,4"-di-isobutyryl-3"-propionyl-SI'-837 ^ forarbejdes derpå på samme måde som angivet i eksempel 4 (a) og (b), og der fås 0,25 S af et pulveragtigt produkt af 9-acetyl-4"-isobutyryl-3"-propionyl-SE-837 Dette pulverprodukt har et smeltepunkt på 140-145°C (fugtig) og en molekylvægt på 925» bestemt ved massespektrometri.

22 141170

Eksempel 6 9,21-Diacetyl-SF-837 (1,0 g) opløses i 50 ml pyridin, til hvilket der derpå sættes 10 ml isovalerianesyreanhydrid. Blandingen opvarmes ved 100°G i 48 timer. Den således opnåede acyleringsreaktionsblanding, der indeholder 9,2,-diacetyl-4"-isovaleryl-3"-propionyl-Sli,-837 M-^ og en mindre mængde 9,2' -diacetyl-18,4"-diisovaleryl-3 "-propionyl-SF-837 M-^, oparbejdes derpå som angivet i eksempel 4 (a) og (b), og der fås 0,2 g af et pulver af 9-ace‘i;yl“,i|',I-iso'v'aLle:!?yl-3"-propionyl-SF-837 M-^.

Smeltepunkt 135-14-0°C

Molekylvægt (bestemt ved massespektro-metri) 939 Μ. M. E. -sp ekt rum (i deuterochlo- roform) Signal for gruppen -0H0 ved 9,67

Eksempel 7 (a) SE-837 (100 g) opløses i en blanding af 600 ml pyridin og 300 ml eddikesyreanhydrid, og den resulterende opløsning opvarmes ved 100°C i 23 timer til acetylering af Sl-837· Den således opnåede reaktionsblan- | ding hældes i 2,5 1 is-vand, som derpå neutraliseres ved tilsætning af vandigt natriumhydrogencarbonat og derpå ekstraheres med 1 1 benzen. Den således opnåede benzenekstrakt vaskes med en vandig opløsning af 1090 kaliumhydrogensulfat, derpå med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat og til sidst med vand og tørres derefter over vandfrit natriumcarbonat, hvorpå koncentreres under reduceret tryk. Der fås en sirupsagtig remanens (120 g), der indeholder 9,21,4"-triacetyl-3"-propionyl-SE-837 M^ og en mindre mængde 9,18,2',4"-tetraacetyl-3n-pra-pionyl-SE-837 M^.

(b) Remanensen opnået ved ovennævnte procedure (a) opløses i 500 ml vandigt 80%’s methanol, og den resulterende opløsning får lov at stå ved 60°C i 7 timer. Eeaktionsopløsningen henstilles til udfældning af 41 g af et krystallinsk produkt af 9,4"-diacetyl-3"-propionyl-SE-837 Smeltepunkt 228-230°C (dek.).

23 141170 (c) Moderluden, fra hvilken nævnte krystallinske produkt er fjernet, koncentreres derpå og blandes med 300 ml vandigt 80%'s ethanol og 20 ml triethylamin. Den således opnåede blanding - opvarmes ved 65°C i 8 timer til partiel hydrolyse. Den således opnåede reaktionsblanding får lov at henstå i kulden, og der udfældes yderligere 39 g af et krystallinsk produkt af 9 ,4"-diacetyl-3"-propionyl-SF~837 M^. Smeltepunkt 228-230°C (dek.).

Eksempel 8 (a) Isovalerianesyre (18,6 g) opløses i 100 ml methanol, der indeholder 9,2 g natriumhydroxid, og den resulterende opløsning koncentreres til tørhed, og den faste remanens optages i benzen. Blandingen koncentreres igen til tørhed, og remanensen blandes med 22 g isovalerylchlo-rid under køling. Efter 1 time blandes den opnåede blanding med 12 g 9,2'-diacetyl-SB-837 og opvarmes så ved 100°C i 36 timer. Den således opnåede acyleringsreaktionsblanding, der indeholder 9»2'-diacetyl-4 isovaleryl-3"-propionyl-S3?-837og en mindre mængde 9,2'-diacetyl-4% 18-diisovaleryl-3"-propionyl-SF-837 M-j., hældes i et stort rumfang isvand, som derpå neutraliseres ved tilsætning af natriumhydrogencarbo-nat og så ekstraheres med 250 ml benzen. Benzenekstrakten vaskes med vand og koncentreres. Den resulterende koncentrerede opløsning ledes til en søjle af silicagel (4 x 28 cm) til kromatografi, og søjlen udvikles med benzen-acetone (volumenforhold 20:1). Eluatet fra silicagel-søjlen opsamles i 8 ml fraktioner. Fraktionerne nr.43-53 forenes og koncentreres til tørhed, og der fås 3 »6 g af en remanens, der hovedsagelig indeholder 9»2'-diacetyl-4"-isovaleryl-3"-propionyl-SF-837 M-j_- (b) 9,2'-Diacetyl-4"-isovaleryl-3"-propionyl-SF-837 M^ (3,5 g) »opnået ved ovennævnte procedure (a), opløses i 100 ml vandigt acetone (dvs. en blanding af acetone og vand i et volumenforhold på 7-3)*

Den resulterende opløsning opvarmes ved en temperatur på 50°C i ca.

16 timer under omrøring. Den således opnåede hydrolysereaktionsblanding koncentreres så til tørhed under reduceret tryk, og der fås 3,0' g af et pulverprodukt af 9-acety1-3"-propionyl-4"-isovaleryl-SF-837 M-^. Smeltepunkt 135-140°C.

Eksempel 9 (a) En blanding af 5 g 9»2'-diacetyl-SF-837» 100 ml pyridin og 40 ml 24 141170 pr op ionsy re anhy dr id opvarmes ved 100°C i 16 timer. Reaktionsblandingen i form af en sort farvet opløsning hældes så i et stort rumfang isvand, og "blandingens vandige fase indstilles på pH 8,0 ved tilsætning af vandigt natriumhydrogencarbonat. Blandingen ekstraheres så med "benzen, og "benzenekstrakten vaskes med vand og koncentreres til tørhed. Remanensen optages i et lille rumfang henzen, og benzenopløsningen kromatograferes ved, at man leder den til en søjle af silicagel (4 x 20 cm) og udvikler med en blanding af benzen-acetone (10:l). Elu-atet opsamles i 8 g-fraktioner, og fraktionerne nr. 35-44 forenes og koncentreres til tørhed, og man får 1,1 g 9,2,-diacetyl-18,3"-di-pro-pionyl-SI-837, der har følgende egenskaber:

Smeltepunkt 95-101°C (fugtig)

Molekylvægt (bestemt ved massespektrumanalyse) 1009

Kernemagnetisk resonansabsorption (i CDClp Intet signal for CHO-gruppen iagttaget.

Antibakteriel aktivitet Så godt som ingen iagttaget.

Ira fraktionerne nr. 47-58 af eluatet isoleres 1,0 g 9,2'-diacetyl-3"- propionyl-SI-837, som har følgende egenskaber:

I Smeltepunkt 106-108°C

Molekylvægt (bestemt ved massespektrum-analyse) 955

Kernemagnetisk resonansabsorption (i CDCl^j Signal for CHO-gruppen ved 9,67 iagttaget.

Antibakteriel aktivitet Lavere end aktiviteten af 9-ace"fcyl-3"-pFo- pionyl-SI-837· (b) 9i2'-Diacetyl-3"-propioi]yl-SI-837 (0,5 g) opløses i 100 ml vandigt 90%'s methanol (en blanding af methanol og vand i et volumenforhold på 9:1), og opløsningen opvarmes ved 60°C i 8 timer for at udføre selektiv hydrolyse. Reaktionsblandingen blandes med et stort rumfang vand, neutraliseres med vandigt natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med ethylacetat. Den resulterende ethylacetatekstrakt vaskes med vand 25 141170 og koncentreres til tørhed, og der fås 0,35 g 9-e.cetyl-3",4"-dipropio-nyl-SF-837 M^ (nemlig 9_acetyl-3"-propionyl-SJ?-837) , som har følgende egenskaber:

Smeltepunkt 222-224°C

Molekylvægt (bestemt ved massespektrumanalyse) 911

Kememagnetisk resonans-absorption (i CDClj) Signal for CHO-gruppen ved 9,68 iagttaget.

(c) Endvidere opløses 9,2'-diacetyl-18,3"-di-propionyl-SP-837 (1,0 g) i 40 ml vandigt 90%'s methanol, og opløsningen får lov at stå ved stuetemperatur i 2 dage. Reaktionsopløsningen koncentreres så til tørhed, og man får 0,85 g af et pulveragtigt produkt af 9-ace'kyl“18,5,,“dipro-pionyl-SF-837, der har følgende egenskaber:

Smeltepunkt 103-106°C

Molekylvægt (bestemt ved massespektrum-analyse) 9^7

Antibakteriel aktivitet Ikke iagttaget.

Dette 9“Scetyl-18,3"-dipropionyl-SF-837 opløses i 60 ml vandigt 80%'s ethanol, der indeholder 5$ triethylamin, og opløsningen opvarmes ved 80°C i 10 timer. Reaktionsblandingen neutraliseres med vandigt natrium-hydrogenearbonat og ekstraheres så med benzen. Benzenekstrakten vaskes med vand og koncentreres til tørhed, og der fås 0,5 g af et krystallinsk produkt af 9-acetyl-3",4"-dipropionyl-SF-837 (nemlig 9-acetyl-3"~ propionyl-SE-837) som yderligere materiale.

Eksempel 10 (a) SE-837 (5,0 g) opløses i en blanding af 50 ml pyridin og 15 ml propionsyreanhydrid, og den således opnåede blanding opvarmes ved 100°C i 16 timer. Reaktionsblandingen hældes i et stort rumfang is-vand, og der udfældes acyleringsprodukter af SE-837 (en blanding af 9,18,2',3"-tetrapropionyl-SF-837 og 9,2',3"-tripropionyl-SF-837), som isoleres ved filtrering og derpå vaskes med vand.

26 141170 (b) De således opnåede acyleringsprodukter opløses straks i 100 ml vandigt 80%'s ethanol, og til den resulterende opløsning sættes 5,0 g pulveriseret natriumhydrogencarbonat. Blandingen opvarmes ved 80 C i 16 timer for at udføre hydrolysereaktion. Reaktionsblandingen ledes gennem en søjle af aktivt kul (50 cc) og ekstraheres /så med benzen, og benzenekstrakten vaskes med vand og koncentreres til tørhed. Der fås 0,9 g af et amorft produkt af 9>3",4"-tripropionyl-SE-837 (nemlig 9,3"-dippopionyl-SF-837)5 som har følgende egenskaber:

Smeltepunkt 150-160°C (fugtig)

Molekylvægt (bestemt ved massespektrumanalyse) 925

Kernemagnetisk resonansabsorption (i CDClp Signal for gruppen -OHO ved 9,68.

Eksempel 11 (a) En blanding af SE-837 (180 mg) og propionsyreahhydrid (0,5 ml) i pyridin (5 ml) rystes i et forseglet rør ved 28°C i 5 dage. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed, og remanensen opløses i chloroform. Efter vask med vand og tørring over natriumsulfat afdampes chloroformlaget, og der fås et hvidt pulver (210 mg). Det har en hovedplet ved Rf 0,6 og en mindre plet ved Rf 0,5 på silicagel-tyndtlags-kromatogram, udviklet med benzen-acetone (5=1). Den første skilles fra den sidste ved hjælp af præparative silicagelplader Tinder anvendelse af samme opløsningsmiddelsystem som nævnt ovenfor.

Hovedbåndet, der indeholder 9,21-dipropionyl-SE-857, ekstraheres med methanol, og ekstrakterne inddampes, og der fås et hvidt pulver (95 mg). Krystallisation af carbontetraehlorid giver farveløse nåle af 9,2’-di-propionyl-SE-857 (60 mg).

Elementaranalyse.

Beregnet for C^yHy^HO-^y (molekylvægt 951): C 60,95, H 8,16, H 1,51% Rundet; C 60,82, H 8,02, N 1,46% (b) 9,2'-Dipropionyl-SF-857 (4 g) opløses i en blanding af 50 ml pyridin og 50 ml propionsyreanhydrid, og blandingen opvarmes ved 100°C i 16 timer.

Claims (1)

1. 27 141170 Reaktionsblandingen hældes i et stort rumfang is-vand, hvorpå neutraliseres med natriumhydrogencarbonat. Acyleringsproduk terne (en blanding af 9»18,2',3"-tetrapropionyl- og 9,2'^"-tripropionyl-SR-ej?) ekstraheres to gange med 150 ml portioner af benzen. Den således opnåede benzenopløsning inddampes under reduceret tryk. (c) Den således opnåede remanens opløses så i 100 ml vandigt 80%'s ethanol, der indeholder 5 g natriumhydrogencarbonat. Blandingen opvarmes ved 80°C i 16 timer for at udføre hydrolyse, der fjerner 18- og 2'-acylgrupperne. Reaktionsblandingen ledes så gennem en søjle af aktiveret kul (50 ml) og ekstraheres derpå med benzen, og beazenekstrakten vaskes med vand og koncentreres til tørhed. Den faste remanens omkrystalliseres af iso- propanol, og man får et krystallinsk produkt af 9,3 T'-dipropionyl-SP- 837 (2,3 g), som har følgende egenskaber: Smeltepunkt 192-195°C (let farvet) Molekylvægt (bestemt ved massespektrum-analyse) 925 Fremgangsmåde til fremstilling af 913" ,h"-trialkanoyl-SP-837 M-^-deri-vater med formlen OR1 ^ CHO CIS CH3 0-1 0-1 > <2, >—0—<( *V<*3 o <4C0C2H5 0H K(CHj)2 OHj ch3 o 3 28 141170 1 lL 5 hvori R og R hver er en acetyl- eller propionylgruppe, og Ir er en acetyl-, propionyl-, n-butyryl-, isohutyryl- eller isovalerylgruppe, hende tegnet ved, at man acyl er er en forbindelse udvalgt fra gruppen bestående af SF-837, 9,2',4"-triacetyl-SF-837 Μχ, 9,2'-diacetyl-SF-837, 9-propionyl-SF-837 og 9,2'-dipropionyl-SF-837 med formlen τ' orx , - CHO ?H3 OH <V>J /-Λ /-I > ™3<—_°_< >-o-/ \-or3 \ >-0OH3 ^^<0H Λ <4)cog2h5 or^ r(gh )2 / ^0H x y° 3 YY cv) CH 0 9 1' 2’ 3' 1' hvori R og R hver er et hydrogenatom og R propionyl, eller R , 2*3' 11 2' 3' R og R hver acetyl, eller R og R hver acetyl og R propionyl, 1' 3' 2' 1' eller R og R hver propionyl og R et hydrogenatom, eller R , 2' 3' R og ~Br hver propionyl, med et alkansyreanhydrid med formlen r3-0-E5 W 3 hvori Br er en acetyl-, propionyl-, n-hutyryl-, isohutyiyl- eller isovalerylgruppe, idet dog R^ kun kan være acetyl eller propionyl, 1' 2' o såfremt R og R er hydrogen, ved en temperatur på 50 til 120 C og i nærværelse af en organisk hase, udvalgt blandt pyridin, quinolin, α-picolin, diethylanilin, ΙΊ- ethylmorpholin og triethylamin, i et tilstrækkeligt tidsrum til at-danne et 9,2' ,3",4-"-tetraalkanoyl-SF-837 med formlen OR1 I ' CHO ?H3 CH3 Yv\j °—i o_1 < >o^Vy \ /σθσ2Η5 or2 jf(cH ) CH, <^0^^ 32 > (III) GH 0 2