DE943006C

DE943006C - Tissue preparations for carrying out the Abderhalden reaction

Info

Publication number: DE943006C
Application number: DET8143A
Authority: DE
Inventors: Dr Med Ernst Tetzner
Original assignee: ERNST TETZNER DR MED
Current assignee: ERNST TETZNER DR MED
Priority date: 1953-07-22
Filing date: 1953-07-22
Publication date: 1956-05-09

Description

Gewebepräparate zur DurifAhrung der Abderhaldensdien Reaktion Die Diagnose auf Grund von Abbaureaktionen in Blut oder Harn ist in verschiedener Richtung versucht worden. So behandelt das österreichische Patent I50 o7g ein Verfahren zur Herstellung von Reagenzien für Diagnosezwecke, wobei die Erkrankung von Organen durch Ausfallerscheinungen sonst auftretender Reaktionen nach Behandlung des zu untersuchenden Harns oder Blutes mit organspezifischen Reagenzien nachgewiesen wird. Im Gegensatz dazu arbeitet die Abderhaldensche Reaktion auf der Grundlage des Nachweises von Abbaufermenten durch spezifische Fermentwirkungen in Harn oder Blut von Kranken zufolge von Substratzerlegungen. Unstreitig ist ein wichtiger Sonderfall die Prüfung der bei menschlichen Tumoren insbesondere im Harn auftretenden Abbaufermente zum Zwecke der Tumordiagnose.Tissue preparations for carrying out the Abderhaldensdien reaction The diagnosis Attempts have been made in various directions on the basis of degradation reactions in the blood or urine been. The Austrian patent I50 o7g deals with a manufacturing process of reagents for diagnostic purposes, the disease of organs by failure phenomena otherwise occurring reactions after treatment of the urine or blood to be examined is detected with organ-specific reagents. In contrast, the Abderhalden's reaction based on the detection of degradation ferments by specific fermentation effects in the urine or blood of the sick as a result of the deposition of substrates. It is undisputed that an important special case is the examination of human tumors In particular, degradation ferments occurring in the urine for the purpose of tumor diagnosis.

Nun ist zweifellos - wie es E. Abderhalden in einer seiner letzten Veröffentlichungen zum Substratproblem formuliert hat - die Substratfrage bei der Abderhaldenschen Reaktion (AR) der »wunde Punkt« (E. Abderhalden und G. Fabian: Fermentforschung, I7, 457 [I945]). Auch andere Forscher haben die großen Schwierigkeiten in dieser Hinsicht betont (K. H ins berg : Fermentforschung, I6, 335 [I942]; R. Merten: Z. klinische Med., I43, 287 [I943]; derselbe: Z. experimentelle Med.> I 3>I [i943J). Für die Ausführung der AR werden nämlich ausschließlich Gewebesubstrate aus menschlichem Geschwulstgewebe, das durch Operation oder Sektion gewonnen ist, verwendet (E. Abderhaiden: Abwehrfermente; Die Abderhaldensche Reaktion, 1944, 5. 124 bis I27; R. Abderhalden: Die Abwehrproteinasen, Ergebnisse der Enzymforschung, Bd. II, S. I bis 66; Geest und Portig, I950; R. Merten:-Die Klinik und Chemie der Proteinasen des menschlichen und tierischen Organismus, ihre besondere Bedeutung in seinen Abwehrleistungen und in der klinischen Diagnostik, Ergebnisse der inneren Med. und Kinderheilkunde, N. F. Bd. II, S. 49 bis I44 [95']). Now there is no doubt - as E. Abderhalden did in one of his last Has formulated publications on the substrate problem - the substrate question in the Abderhalden's reaction (AR) the "sore point" (E. Abderhalden and G. Fabian: Fermentforschung, I7, 457 [I945]). Other researchers also have great difficulties emphasized in this respect (K. H insberg: Fermentforschung, I6, 335 [I942]; R. Merten: Z. Klinische Med., I43, 287 [1943]; same: Z. experimental med.> I 3> I [1943J). For execution the AR are namely exclusively Tissue substrates made from human tumor tissue obtained through surgery or dissection is obtained, used (E. Abderhaiden: defense ferments; The Abderhaldensche reaction, 1944, pp. 124 to I27; R. Abderhalden: The defense proteinases, results of enzyme research, Vol. II, pp. I to 66; Geest and Portig, 1950; R. Merten: -The clinic and chemistry of the Proteinases of the human and animal organism, their special meaning in its defense and in clinical diagnostics, internal results Med. And Paediatrics, N. F. Vol. II, pp. 49 to I44 [95 ']).

Tatsächlich bringt die Verwendung von Substraten aus menschlichem Operations- oder Sektionsmaterial ganz erhebliche Schwierigkeiten mit sich. Sehr häufig sind die anfallenden Gewebemengen so gering, daß eine Aufarbeitung einschließlich chemischer und biologischer Durchprüfung der Substrate, wie sie für verantwortliches Arbeiten unerläßlich ist, nicht lohnt. Menschliches Sektionsmaterial ist meist stark zersetzt und dann schlecht verwendbar. Eine gewerbliche Großherstellung, die allein die Gewähr einwandfreier, gleichmäßiger Substrate geben kann und die allein die stets und überall zugängliche Versorgung mit solchen Präparaten zur Durchführung der Geschwulsdiagnose ermöglichen könnte, ist also bei Verwendung von menschlichen Gewebesubstraten nicht durchführbar. Die Ansicht der Fachwelt ist aber die, daß die AR eine so »spezifische« Reaktion ist, daß sie für den Menschen eben nur mit Krebseiweißsubstraten durchführbar ist, die aus Operations- oder Sektionsmaterial vom Menschen hergestellt worden sind (E. Abderhalden: Abwehrfermente; Die Abderhaldensche Reaktion, 7. Aufl.. Indeed, the use of substrates brings out human Surgical or dissection material entails considerable difficulties. very The amount of tissue produced is often so small that processing is included chemical and biological testing of the substrates, as they are responsible for Working is essential, not worth it. Human dissection material is mostly strong decomposed and then difficult to use. A large-scale commercial manufacture that alone the guarantee of flawless, uniform substrates and that alone Always and everywhere accessible supply of such preparations for implementation which could enable tumor diagnosis is so when using human Fabric substrates not feasible. But the opinion of the professional world is that the AR is such a "specific" reaction that for humans it only comes with Crab protein substrates can be made from surgical or dissection material have been produced by humans (E. Abderhalden: defense ferments; Die Abderhaldensche Reaction, 7th ed.

1944, S.I24bis 127).1944, pp. I24 to 127).

Im Gegensatz dazu wird erfindungsgemäß die Herstellung von Substraten aus tierischem Tumorgewebe für die Durchführung der AR vorgeschlagen. Die fortschrittliche Lehre der Erfindung besteht in der Erkenntnis, daß entgegen der bisherigen Ansicht die im Harn (oder im Blut) krebskranker Menschen auftretenden Abbaufermente nicht nur Gewebetumorsubstrat vom Menschen angreifen, sondern daß auch eine zuverlässige Fermentwirkung auf Substrate aus tierischem Tumorgewebe erfolgt. In contrast, according to the invention, the production of substrates from animal tumor tissue suggested for performing AR. The advanced The teaching of the invention consists in the knowledge that contrary to the previous view the degradation ferments that occur in the urine (or blood) of people with cancer are not attack only tissue tumor substrate from humans, but that also a reliable one Fermentation takes place on substrates from animal tumor tissue.

Die erfindungsgemäße- Verwendung von Substraten aus Tiertumorgewebe zur Durchführung der AR ist ein entscheidender Fortschritt. Bisher konnte eine gewerbliche Herstellung von Substraten für die Krebsdiagnostik mittels der AR, wie schon oben dargelegt, nicht vorgenommen werden. Der Anfall an menschlichem Gewebematerial ist zu gering und zu ungleichmäßig, um darauf eine gewerbliche Produktion abzustellen. Demgegenüber kann die Herstellung von Substraten aus Tiergeschwulstgeweben mit allen Garantien der Großherstellung durchgeführt werden; es können große Serien einheitlichen Substratmaterials unter sorgfältiger chemischer und- biologischer Prüfung auf seine Brauchbarkeit hin erfolgen, und das für die Diagnose benötigte Substrat.steht überall und stets zur Verfügung. Erst durch die erfindungsgemäße Überwindung des Vorurteils der Fachwelt gegen die Verwendung von Substraten aus Tiertumorgewebe - ein Vorurteil, das sich infolge der außerordentlichen Schwierigkeit des Gebietes nur in langjähriger Forschungsarbeit widerlegen ließ -ist eine Ausweitung der praktischen Anwendungsmöglichkeit der AR ermöglicht. Erfindungsgemäß wird also zur an sich bekannten Durchführung der AR unter Verwendung von Harn (bei Blutverwendung liegen die Dinge entsprechend) zur Diagnose von Geschwülsten beim Menschen nicht wie bisher Substrat aus menschlichem Gewebe verwendet, sondern Tiertumormaterial, z. B. Ehrlichkarzinom von geimpften Mäusen, Brown-Pearce-Tumor von geimpften.Kaninchen oder Spontanmammakarzinom der Maus. Das - für die erfindungsgemäßen Substrate verwendete Tumorgewebe soll möglichst frisch und darf nicht nekrotisch sein, wie es z. B. bei dem die Gewinnung eines Arzneimittels zur Behandlung von krankhaftem- Zellenwachstum betreffenden deutschen Patent 890 562 vorgeschrieben wird. Das Tumorgewebe wird unmittelbar nach der Tötung der Tiere sorgfältig frei präpariert, feinst zerkleinert und in fließendem Wasser auf einem feinsten Sieb oder in einem kleinen Stoffsäckchen gewässert und so von Blutbeimengungen befreit. The inventive use of substrates from animal tumor tissue to carry out the AR is a crucial step forward. So far, a commercial Production of substrates for cancer diagnostics using AR, as above outlined, not to be made. The attack on human tissue is too little and too unevenly to be used for commercial production. In contrast, the production of substrates from animal tumor tissues can be used with all Guarantees of large-scale manufacture are carried out; large series can be standardized Substrate material under careful chemical and biological testing for its Usefulness, and the substrate required for diagnosis is everywhere and always available. Only by overcoming the prejudice according to the invention experts against the use of substrates made from animal tumor tissue - a prejudice, which, due to the extraordinary difficulty of the area, only changes over many years Research work refuted - is an extension of the practical application the AR enables. According to the invention is therefore known per se implementation the AR using urine (when using blood things are accordingly) for the diagnosis of tumors in humans not as before from human substrate Tissue used, but animal tumor material, e.g. B. Honest cancer from vaccinated Mice, Brown-Pearce tumor of vaccinated. Rabbits or spontaneous breast carcinoma of the Mouse. The tumor tissue used for the substrates according to the invention should as far as possible fresh and must not be necrotic, as it is e.g. B. in which the extraction of a Medicinal product for the treatment of pathological cell growth-related German Patent 890 562 is prescribed. The tumor tissue appears immediately after killing of the animals carefully prepared, finely chopped and immersed in running water soaked on a fine sieve or in a small cloth bag and so off Blood admixtures released.

Danach wird unter Zusatz von etwas Essigsäure -20 Minuten lang gekocht. Das Kochwasser wird abgegossen und durch physiologische Kochsalzlösung ersetzt. Es folgt wiederholtes Aufkochen mit physiologischer Kochsalzlösung, zwischendurch Aufquellung des Gewebes für I bis 2 Tage im Brutschrank, um möglichst alle mit Ninhydrin reagierenden Stoffe zu entfernen. Das Kochwasser darf zuletzt nach Versetzen mit der gleichen Menge I°/oiger Ninhydrinlösung auch beim Einkochen auf die Hälfte seines Volumens keine Blaufärbung ergeben. Jetzt wird abzentrifugiert und mit Aceton, Aceton-Äther und Äther getrocknet, dann wird der Rückstand im Mörser oder in einer Kugelmühle zerkleinert und gesiebt (400 bis I600 Maschen/cm2). Then boil for -20 minutes with the addition of a little acetic acid. The cooking water is poured off and replaced with physiological saline solution. This is followed by repeated boiling with physiological saline solution, in between Swelling of the tissue for 1 to 2 days in the incubator, as much as possible all with ninhydrin to remove reacting substances. The cooking water may last after adding the same amount of 1% ninhydrin solution when boiled down to half its size Volume do not show any blue color. Now it is centrifuged off and with acetone, acetone-ether and ether dried, then the residue is put in a mortar or in a ball mill crushed and sieved (400 to 1600 meshes / cm2).

Man kanff auch die fertig ausgekochten Substrate in steriler, physiologischer Kochsalzlösung unter Toluol aufbewahren. Vor Gebrauch sind die Substrate wiederholt aúfzukochen und ihre Brauchbarkeit chemisch und'im biologischen Versuch zu prüfen. Die chemische Untersuchung besteht vor allem in der Durchführung einer Stickstoffbestimmung an dem sorgfältig getrockneten Gewebepulver. Das Präparat ist brauchbar, wenn ein Stickstoffgehalt von 10 bis I40/o vorliegt. Bei der biologischen Prüfung muß sich in vergleichenden Versuchen eine durchschnittliche Trypsinangreifbarkeit ergeben, bei Ansätzen mit in an sich bekannter Weise vorbereitetem Harn Krebskranker müssen positive, bei Ansätzen mit Harn anderer Kranker negative Resultate erzielt werden. The ready-boiled substrates can also be stored in a sterile, physiological form Store saline under toluene. The substrates are repeated before use to boil and to test their usefulness chemically and in biological experiments. The chemical investigation consists primarily of carrying out a nitrogen determination on the carefully dried tissue powder. The preparation is useful if a Nitrogen content of 10 to I40 / o is present. The biological test must be in comparative tests show an average susceptibility to trypsin, in the case of approaches with urine prepared in a manner known per se, cancer patients must positive results can be achieved with approaches with the urine of other patients.

Das beschriebene, den erfindungsgemäßen Gedanken der Verwendung von Geschwulstgewebe tierischer Herkunft benutzende Herstellungsver- fahren bewirkt lediglich eine Denaturierung des Eiweißes. Die Erfindung beschränkt sich aber keineswegs auf diese spezielle Art der Substratgewinnung. Vielmehr geht die erfinderische Lehre ganz allgemein darauf hinaus, Substrate zur Durchführung der AR aus Geschwulstgeweben tierischer Herkunft zu gewinnen, wobei man die mannigfaltigsten, an sich bekannten Herstellungsverfahren und demgemäß die unterschiedlichsten Substrate gewinnen kann. Dem Fachmann sind vielerlei Aufarbeitungsmethoden bekannt, die hier ohne weiteres Anwendung finden können. Man kann erfindungsgemäß in an sich bekannter Weise Feuchtsubstrate herstellen oder flüssige Substrate benutzen bzw. das Gewebepulver in ein Maschengitterwerk pressen und zu Plättchen zerschneiden. The described, the inventive idea of the use of Manufacturing processes using tumor tissue of animal origin travel only causes a denaturation of the protein. The invention is limited but by no means on this special type of substrate extraction. Rather, it goes inventive teaching in general to the substrates for carrying out the Obtaining AR from tumor tissues of animal origin, using the most diverse, known manufacturing processes and accordingly the most varied of substrates can win. A variety of work-up methods are known to the person skilled in the art can easily find application. According to the invention, one can use a method known per se The way to produce moist substrates or use liquid substrates or tissue powder Press into a mesh and cut into small plates.

Claims

PATENT CLAIMS: I. Tissue preparations (so-called substrates) for implementation Abderhalden's reaction using urine in humans in particular, characterized in that the substrates according to known processing methods for substrates from human tumor tissue, from tumor tissue of animal Origin, e.g. B. from animal spontaneous tumors or from so-called animal vaccine tumors getting produced.

2. Process for the production of the preparations according to claim 1, characterized in that characterized in that comminuted pieces of tissue are used to produce the substrates from tumor tissue of animal origin after cleaning and soaking with acetic acid boils and the residue after repeated boiling with physiological saline solution dries, grinds and sieves in a manner known per se with ether and acetone.

3. tissue preparation according to claim I, characterized in that as animal spontaneous tumor spontaneous breast carcinoma of the mouse is used.

4. tissue preparation according to claim I, characterized in that as animal vaccine tumor, mouse honest carcinoma or rabbit Brown-Pearce tumor is used.

Attached documents: Austrian patent specification No. I50 og7; German patents No. 890 562, 442 426.