DE862581T1 - Heparinchromatographie von erythropoietinen - Google Patents
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- &Lgr; ^ ~»&eegr; &ggr;^1 &tgr;« : :·· ·; ·· ...-.VOSSiUSS PARTNER P 0 8 02 DO I &Igr;\ : : .· · ; · :.·..:.··. Patentanwälte-W W fe J. ■·.* ..*·..· SIEBERTSTR. 4V 81675 MÜN<Gfe0 2. OktEP 96 936680.6 "HOECHST MARION ROUSSEL, INC.
u.Z.: C 1535 EPPatentansprüche(Deutsche Übersetzung nach Art. 67 EPÜ)1. Verfahren zur Reinigung von Erythropoietinen, das die folgenden Schritte umfaßt:a) Inkontaktbringen einer erythropoietinhaltigen biologischen Flüssigkeit mit einem Heparin-Chromatographieträger, so daß die Erythropoietine an den Heparin-Chromatographieträger binden,b) Eluieren der Erythropoietine mit einem Elutionspuffer undc) Gewinnen der Erythropoietine. - 2. Verfahren nach Anspruch 1 zum Einbau an einem beliebigen Punkt eines Mehrschrittverfahrens zur Reinigung von Erythropoietinen.
- 3. Verfahren nach Anspruch 2, das der erste Chromatographieschritt bei der Reinigung von Erythropoietinen ist.
- 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zum Entfernen von Erythropoietine verunreinigenden Proteinen.
- 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 4, wobei das Mehrschrittverfahren einen oder mehrere Chromatographieschritte einschließt, die ausgewählt sind aus Ionenaustausch-, hydrophobe Wechselwirkungs-, Größenausschluß-, Umkehrphasen- oder Affinitätschromatographie.
- 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die biologische Flüssigkeit filtriert, ultrafiltriert, zentrifugiert oder dialysiert wird, bevor die biologische Flüssigkeit mit dem Heparinaffinitätsträger in Kontakt gebracht wird.
- 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, das weiter die Klärung der biologischen Flüssigkeit vor dem Inkontaktbringen der biologischen Flüssigkeit mit dem Heparinaffinitätsträger umfaßt.
- 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, das weiter die Bindung der Erythropoietinmoleküle in einem Äquilibrierungspuffer umfaßt.
- 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die Bindung der Erythropoietinmoleküle bei einem ungefähren pH-Wert von 4,9 bis 8,0 stattfindet.
- 10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, das weiter die Elution der Erythropoietine durch Veränderung des Elutionspuffers umfaßt.
- 11. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, wobei der Puffer zusätzlich ein Antiadsorptionsmittel enthält.
- 12. Verfahren nach Anspruch 10, das weiter die Elution der Erythropoietine durch Erhöhung der Salzkonzentration eines Alkalihalogenids umfaßt.
- 13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei die biologische Flüssigkeit eine Kulturflüssigkeit ist.
- 14. Verfahren nach Anspruch 13, wobei die Kulturflüssigkeit geklärt wird.
- 15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 14, wobei bei der erythropoietinhaltigen biologischen Flüssigkeit oder der erythropoietinhaltigen gewonnenen Flüssigkeit der Puffer ausgetauscht wird.
- 16. Verfahren nach Anspruch 15, wobei der Pufferaustausch bei einem pH-Wert von 6 bis 8 durchgeführt wird.
- 17. Verfahren nach Anspruch 15, wobei der Pufferaustausch durch einen Puffer mit 0 bis 200 mM Salz erfolgt.
- 18. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 17, wobei der Heparinaffinitätsträger im Handel erhältlich ist.
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