DE835499C

DE835499C - Process for the production of islet hormone in crystalline form

Info

Publication number: DE835499C
Application number: DEN2597A
Authority: DE
Inventors: Karl Petersen
Original assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Current assignee: Novo Terapeutisk Laboratorium AS
Priority date: 1945-05-17
Filing date: 1950-10-01
Publication date: 1952-03-31

Description

Verfahren zur Herstellung von Inselhormon in kristallinischer Form Das Inselhormon wurde in kristallinischer Form zum erstenmal von Abel (i926) isoliert. Die Kristallisation erfolgte in einem Ammoniumacetatpuffer, dem große Mengen von Brucin und Pyridin zugesetzt worden waren, und man meinte, ein derartiges Medium sei besonders zweckmäßig zur Erzielung einer am isoelektrischen Punkt übersättigten Inselhormonlösung, die die Bildung der Kristalle ermöglichte. Später wurde von S c o t t (i934) nachgewiesen, daß Inselhormonkristalle nur in der Gegenwart gewisser Metallionen (Zink, Nickel, Kadmium und Kobalt) erscheinen konnten und daß diese Metallionen dem Inselhormon in dessen kristallinischer Form beigelagert zu finden waren. Diese Beobachtungen wurden später von Scott und Fischer (r935) näher beleuchtet, indem nachgewiesen wurde, daß eine Inselhormonlösung mit einem Inhalt von Phosphatpuffer und Zinkchlorid, etwa io()/o Aceton, und zwar auf p$ etwa 6,2 eingestellt, für die Auskristallisation des Inselhormons besonders geeignet. war.Process for the production of islet hormone in crystalline form The island hormone was first isolated in crystalline form by Abel (1926). Crystallization took place in an ammonium acetate buffer containing large amounts of Brucine and pyridine had been added and were believed to be such a medium is particularly useful for achieving a supersaturated at the isoelectric point Island hormone solution that allowed the crystals to form. Later, S c o t t (1934) demonstrated that island hormone crystals only exist in the presence of certain Metal ions (zinc, nickel, cadmium and cobalt) could appear and that this To find metal ions attached to the island hormone in its crystalline form was. These observations were later elucidated by Scott and Fischer (r935), by demonstrating that an islet hormone solution containing phosphate buffer and zinc chloride, about io () / o acetone, adjusted to about 6.2 for the Crystallization of the island hormone is particularly suitable. was.

Die Anwendung eines Kristallisationsmediums, das Phosphatpuffer und Zinkchlorid enthält, ist jedoch mit dem Nachteil behaftet, daß der Kristallisationsprozeß bei der Anwendung in der Fabrikation nicht selten dadurch Schwierigkeiten macht, daß er schwer einzuleiten ist oder eine unbefriedigende Ausbeute oder ein Produkt von unbefriedigender Qualität ergibt. Die erhaltenen Inselhormonkristalle bekommen außerdem in der Regel einen recht hohen Aschengehalt infolge der Unlöslichkeit des Zinkphosphats, und sie enthalten zugleich oft einige organische Verunreinigungen. Zur Erzielung von Inselhormonkristallen von niedrigerem Aschengehalt und größerer Reinheit ist daher in den meisten Fällen eine Rekristallisation erforderlich, und S c o t t und Fischer haben zu diesem Zweck die Anwendung eines Kristallisationsmediums mit Ammoniumacetatpuffer in Vorschlag gebracht. Durch die Rekristallisation wird aber die Ausbeute an kristallinischem Inselhormon reduziert.The application of a crystallization medium, the phosphate buffer and Contains zinc chloride, but has the disadvantage that the crystallization process not infrequently causes difficulties when used in production, that it is difficult to initiate or an unsatisfactory yield or product of unsatisfactory quality. Get the obtained island hormone crystals also usually a very high ash content due to the insolubility of the Zinc phosphate, and they often contain some organic impurities at the same time. To achieve island hormone crystals of lower ash content and greater purity, therefore, recrystallization is required in most cases, and S c o t t and Fischer use a crystallization medium for this purpose with ammonium acetate buffer suggested. The recrystallization will but the yield of crystalline island hormone is reduced.

Die Anwendung von Puffern bei den Arbeiten dieser Forscher wie auch in späteren Abhandlungen über die Kristallisation des Inselhormons scheint nur auf dem Wunsch nach einer guten Fixierung des px-Wertes der Lösungen während der Kristallisation begründet zu sein.The use of buffers in the work of these researchers as well in later treatises on the crystallization of the island hormone only appears the desire for a good fixation of the px value of the solutions during the crystallization to be justified.

Jetzt hat sich aber erwiesen, daß, ganz wie S c o t t nachweisen konnte, daß gewisse Metallionen ein integrierender Teil der Inselhormonkristalle sind, auch Säurereste für die Kristallbildung erforderlich sind und in die Kristalle eingehen.But now it has been shown that, just as S c o t t was able to demonstrate, that certain metal ions are an integral part of the islet hormone crystals, too Acid residues are required for crystal formation and go into the crystals.

Bei den bereits bekannten Verfahren zur Kristallisation von Inselhormon hat daher der angewandte Puffer eine bisher unbeachtete Rolle als Lieferant der für die Kristallisation notwendigen Anionen gespielt. Nach den Untersuchungen, die der vorliegenden Erfindung zugrunde liegen, hat aber die Art de% Säurerestes, besonders in Verbindung mit der Anwendung des Kristallisationsprozesses in der Fabrikation, einen entscheidenden Einfluß auf die Kristallisationsfähigkeit des Inselhormons und die Zusammensetzung der hierdurch erzielten Kristalle, und es hat sich erwiesen, daß die Anwesenheit von Zitrationen während der Kristallisation eine weit günstigere Einwirkung auf dieselbe ausübt als die Anwesenheit anderer Anionen.In the already known method for crystallizing islet hormone Therefore, the applied buffer has a previously neglected role as a supplier of the anions necessary for crystallization are played. According to the research that the present invention are based, but has the type de% acid residue, in particular in connection with the use of the crystallization process in manufacturing, a decisive influence on the crystallization ability of the island hormone and the composition of the resulting crystals, and it has been shown that the presence of citrations during crystallization is a far more favorable one Acts on it than the presence of other anions.

Nach der vorliegenden Erfindung geht man daher bei der Herstellung von Inselhormon in kristallinischer Form durch Auskristallisation von einer Lösung, welche kristallisationsfördernde Kationen, wie z. B. Zinkionen, enthält, in der Weise aus, daß die Auskristallisation aus einem Kristallisationsmedium erfolgt, das zugleich Zitrationen enthält. Bei der Anwendung eines derartigen Kristallisationsmediums vermeidet man die vorgenannten Nachteile, indem die Kristallisation spontan unter Bildung von Inselhormonkristallen mit einem niedrigeren Gehalt an Aschestoffen und farbigen organischen Verunreinigungen als bei den bisher bekannten Verfahren eintritt.The present invention therefore goes in manufacturing of island hormone in crystalline form through crystallization from a solution, which crystallization-promoting cations, such as. B. zinc ions, contains in the Way that the crystallization takes place from a crystallization medium, which also contains citrations. When using such a crystallization medium one avoids the aforementioned disadvantages by the crystallization spontaneously under Formation of island hormone crystals with a lower content of ash and colored organic impurities than occurs with the previously known processes.

Die Erfindung wird nachstehend durch ein Ausführungsbeispiel noch näher veranschaulicht werden. Beispiel Zu 5o cm' Inselhormonlösung, die etwa i g Hormon enthält, setzt man i g Citronensäure, 8o mg Zinkchlorid und 16 cm3 Aceton hinzu, wonach die Lösung mit Wasser bis zu einem Totalvolumen von ioo cm3 aufgefüllt und dann alkalisiert wird. Bei der Einstellung der Lösung auf einen pH-Wert von 6,1o tritt spontane Kristallbildung ein. Nach angemessen langem Stehenlassen werden die Kristalle ausgeschieden und werden zunächst mit Wasser, dann mit Aceton gewaschen, wonach sie im Vakuum über Schwefelsäure getrocknet werden. Die Ausbeute beträgt 0,92 g Inselhormonkristalle, die eine Aktivität von 24 int. Einheiten zeigen, und deren wichtigste analytische Daten die folgenden sind: H20-Gehalt . . . . . . . . . . . 3,4 0;`0, Aschengehalt .. . . . . .. .. i,1 0,/0, N-Gehalt ............. 14,73°%o, ZN-Gehalt .. .. . .. . .... 0,380;". The invention will be illustrated in more detail below by means of an exemplary embodiment. EXAMPLE To 50 cm 'of islet hormone solution, which contains about 100 cm of hormone, one liter of citric acid, 80 mg of zinc chloride and 16 cm3 of acetone are added, after which the solution is made up to a total volume of 100 cm3 and then made alkaline. When the solution is adjusted to a pH of 6.1o, spontaneous crystal formation occurs. After standing for a reasonable length of time, the crystals are precipitated and washed first with water, then with acetone, after which they are dried in vacuo over sulfuric acid. The yield is 0.92 g of islet hormone crystals, which show an activity of 24 int. Units, and the main analytical data of which are as follows: H20 content. . . . . . . . . . . 3.4 0; `0, Ash content ... . . . .. .. i, 1 0, / 0, N content ............. 14.73% o, ZN content .. ... ... .... 0.380; ".

Claims

PATENT CLAIM: Process for the production of island hormone in crystalline form Form by crystallization from a solution which promotes crystallization Contains cations, characterized in that the crystallization from a crystallization medium takes place, which also contains citrations.