DE69902234T2

DE69902234T2 - Matrixprotein enthaltende zusammensetzungen zur wundheilung

Info

Publication number: DE69902234T2
Application number: DE69902234T
Authority: DE
Inventors: Christer Andersson; Stina Gestrelius; Tomas Hammargren; Lars Hammarstroem; Petter Lyngstadaas; Ivan Slaby
Original assignee: BIORA BIOEX MALMOE AB
Current assignee: Institut Straumann AG
Priority date: 1998-02-27
Filing date: 1999-02-26
Publication date: 2003-03-27
Anticipated expiration: 2019-02-27
Also published as: CA2640994C; DK1153610T3; IS5591A; ES2183510T3; JP2011088927A; DE69910622D1; DK1059934T3; JP2007291115A; IL137869A0; KR20010041408A; JP5024866B2; AU740468B2; PL202536B1; DE69902234D1; EP1059934A2; WO1999043344A2; WO1999043344A3; EP1059934B1; ATE247483T1; BR9908182A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendungen von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen als therapeutische oder prophylaktische Mittel. Die Substanzen sind als Wundheilungsmittel wirksam.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Schmelzmatrixproteine, wie z. B. die, die in der Schmelzmatrix vorliegen, sind am besten als Vorstufen für Schmelz bekannt. Schmelzproteine und Schmelzmatrixderivate wurden bereits früher in der Patentliteratur zur Induzierung der Bildung von hartem Gewebe (d. h. Schmelzbildung, US-Patent Nr. 4 672 032 (Slavkin)) oder zur Bindung zwischen harten Geweben (EP-B-0 337 967 und EP-B-0 263 086) beschrieben. Somit konzentriert sich der Stand der Technik auf die Regeneration von harten Geweben, während die vorliegende Anmeldung sich mit vorteilhaften Effekten auf die Wundheilung bei weichem Gewebe beschäftigt, die unerwartete Feststellungen sind.

OFFENBARUNG DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung basiert auf der Feststellung, dass Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine (der Ausdruck "eine aktive Schmelzsubstanz" wird im Folgenden auch für eine Schmelzmatrix, ein Schmelzmatrixderivat oder ein Schmelzmatrixprotein verwendet) vorteilhafte Mittel für die Verstärkung oder Verbesserung der Heilung von Wunden in weichen Geweben (d. h. nicht-mineralisierten Geweben), wie z. B. Kollagen- oder Epithel-enthaltenden Geweben, einschließlich Haut und Schleimhaut, Muskeln, Blut- und Lymphgefäße, Nervengewebe, Drüsen, Sehnen, Augen und Knorpel, sind. Wie im experimentellen Abschnitt dieser Beschreibung gezeigt wird, üben die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine besonders günstige Effekte auf die Heilung oder Prophylaxe von Wunden in weichem Gewebe aus.
Dementsprechend betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Zubereitung einer aktiven Schmelzsubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen oder kosmetischen Zusammensetzung i) zur Heilung einer Wunde, ii) zur Verbesserung der Heilung einer Wunde und/oder iii) zur Regeneration und/oder Reparatur von weichem Gewebe.

Wundheilung

Wunden und/oder Geschwüre werden normalerweise aus der Haut herausragend oder an einer Schleimhautoberfläche oder als Resultat eines Infarkts in einem Organ ("Schlag") gefunden. Eine Wunde kann das Resultat eines Defekts im weichen Gewebe oder einer Läsion oder eines darunterliegenden Krankheitsbildes sein. Die Regeneration von experimentell hervorgerufenen periodontalen Wunden wurde bereits früher von den Erfindern beschrieben und soll nicht im Rahmen der vorliegenden Erfindung liegen. Im vorliegenden Kontext bezieht sich der Ausdruck "Haut" auf die äußerste Oberfläche des Körpers eines Tieres, einschließlich eines Mensches, und umschließt intakte oder fast intakte Haut, wie auch eine verletzte Hautoberfläche. Der Ausdruck "Schleimhaut" bezieht sich auf die nicht-beschädigte oder beschädigte Schleimhaut eines Tiers, wie z. B. eines Menschens, und kann die orale, bukkale, aurale, nasale, Lungen-, Augen-, gastrointestinale, vaginale oder rektale Schleimhaut sein.
Im vorliegenden Kontext bezeichnet der Ausdruck "Wunde" eine körperliche Verletzung mit Unterbrechen der normalen Integrität von Gewebestrukturen. Der Ausdruck soll auch die Ausdrücke "Abszess", "Läsion", "Nekrose" und "Geschwür" (bzw. "Ulcus") mit umfassen. Normalerweise ist der Ausdruck "Abszess" ein poplulärer Ausdruck für fast jede Läsion der Haut- oder Schleimhaut-Membranen und ist der Ausdruck "Geschwür" (bzw. "Ulcus") eine lokale Störung oder Exkavation der Oberfläche eines Organs oder Gewebes, die durch Abwerfen von nekrotischem Gewebe produziert wird. Läsion betrifft im Allgemeinen irgendeine Gewebestörung. Nekrose bezieht sich auf totes Gewebe, das aus einer Infektion, Verletzung, Entzündung oder Infarkten resultiert.
Der Ausdruck "Wunde", wie er im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung verwendet wird, bezeichnet irgendeine Wunde (siehe unten zur Klassifikation von Wunden) und in einem beliebigen besonderen Stadium im Heilungsprozeß, einschließlich des Stadiums, bevor eine Heilung initiiert wurde oder sogar bevor eine spezifische Wunde, wie ein chirurgischer Einschnitt, erfolgt ist (prophylaktische Behandlung).
Beispiele für Wunden, die gemäß der vorliegenden Erfindung verhindert und/oder behandelt werden können, sind z. B. aseptische Wunden, Quetschwunden, Schnittwunden, Risswunden, Nicht-Penetrationswunden (d. h. Wunden, bei denen es kein Aufbrechen der Haut gibt, allerdings eine Verletzung der darunterliegenden Strukturen vorliegt), offene Wunden, Penetrationswunden, Perforationswunden, Punktionswunden, septische Wunden, subcutane Wunden, usw. Beispiele für Abszesse sind Dekubitus, Krebsabszesse, Chromabszesse, Erfrierungen, Druckabszesse, usw. Beispiele für Geschwüre sind z. B. Ulcus pepticum, Ulcus duodeni, Magengeschwür, Gichtgeschwür, Diabetesgeschwür, ischämisches Ulcus, Stauulcus, Krampfadergeschwür (venöses Ulcus), sublinguales Ulcus, submuköses Ulcus, symptomatisches Ulcus, trophisches Geschwür, Ulcus tropicum, Schankergeschwür, z. B. verursacht durch Gonorrhoe (einschließlich Urethritis, Endocervicitis und Proctitis). Krankheitsbilder, die mit Wunden oder Abszessen in Verbindung stehen und die gemäß der Erfindung erfolgreich behandelt werden können, sind Verbrennungen, Anthrax, Tetanus, Gasbrand, Scalantina, Wundrose, Bartflechte, Follikulitis, Impetigo contagiosa oder Impetigo bullosa, usw. Es gibt oft eine gewisse Überlappung zwischen der Verwendung der Ausdrücke "Wunde" und "Geschwür" und "Wunde" und "Abszess", und darüber hinaus werden die Ausdrücke oft beliebig verwendet. Demnach umfasst, wie es oben bereits genannt wurde, der Ausdruck "Wunde" im vorliegenden Kontext den Ausdruck "Geschwür", "Läsion", "Abszess" und "Infarzierung"; die Ausdrücke werden, wenn nichts anderes angegeben ist, unterschiedslos eingesetzt.
Die Arten der Wunden, die gemäß der Erfindung zu behandeln sind, umfassen auch i) allgemeine Wunden, z. B. chirurgische, traumatische, infektiöse, ischämische, thermische, chemische und bullöse Wunden; ii) Wunden, die für die Mundhöhle spezifisch sind, z. B. Wunden nach Extraktion, endotonische Wunden, insbesondere im Zusammenhang mit der Behandlung von Zysten und Abszessen, Geschwüre und Läsionen bakteriellen, viralen oder autoimmunologischen Ursprungs, mechanische, chemische, thermale, infektiöse und lichenoide Wunden; Herpesgeschwüre, Stomatitis aphthosa, akute nekrotisierende ulzerative Gingivitis und das Syndrom des Brennens im Mund sind spezifische Beispiele; und iii) Wunden auf der Haut, z. B. Neoplasma, Verbrennungen (z. B. chemische, thermische), Läsionen (bakterielle, virale, autoimmunologische), Bisswunden und chirurgische Einschnitte. Ein weiterer Weg zur Klassifizierung von Wunden ist i) geringer Gewebeverlust infolge chirurgischer Einschnitte, geringere Abschabungen und kleinere Bisse oder ii) siginifikanter Gewebeverlust. Die letztgenannte Gruppe umfasst ischämische Geschwüre, Druckabszesse, Fisteln, Risswunden, schwere Bisse, thermische Verbrennungen und Spenderwunden (in weichen und harten Geweben) und Infarzierungen.
Es wurde gefunden, dass die heilende Wirkung einer aktiven Schmelzsubstanz im Zusammenhang mit Wunden, die in der Mundhöhle vorhanden sind, interessant ist. Solche Wunden können körperliche Verletzungen oder Traumata sein, die mit Oralchirurgie, einschließlich periodontaler Chirurgie, Zahnextraktion(en), endotonischer Behandlung, Einsatz von Zahnimplantaten, Anwendung und Verwendung einer Zahnprothese, und dergleichen, in Verbindung stehen. Im experimentellen Abschnitt wurde hier die vorteilhafte Wirkung einer aktiven Schmelzsubstanz auf solche Wunden bewiesen. Darüber hinaus wurde eine heilende Wirkung auf weiches Gewebe beobachtet.
Die Heilung von Wunden in der Mundhöhle, wie aphthösen Wunden, traumatischen Wunden oder Herpes in Verbindung mit Wunden, wird nach Anwendung einer aktiven Schmelzsubstanz verbessert. Die traumatischen Wunden und die mit Herpes verbundenen Wunden können sich natürlich auch an anderen Teilen des Körpers als der Mundhöhle befinden.
Nach anderen Aspekten der Erfindung ist die Wunde, die verhindert und/oder behandelt werden soll, aus der Gruppe, bestehend aus aseptischen Wunden, Infarzierungen, Quetschwunden, Schnittwunden, eingerissenen Wunden, Nicht-Penetrationswunden, offenen Wunden, Penetrationswunden, Perforationswunden, Punktionswunden, septischen Wunden und subcutanen Wunden ausgewählt ist.
Weitere Wunden, die in Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung von Bedeutung sind, sind Wunden, wie ischämische Geschwüre, Druckabszesse, Fisteln, schwere Bisse, thermische Verbrennungen und Spenderwunden.
Ischämische Geschüre und Druckabszesse sind Wunden, die normalerweise nur sehr langsam heilen, und speziell in solchen Fällen ist eine verbesserte und schnellere Heilung für den Patienten natürlich von großer Bedeutung. Darüber hinaus werden die Kosten, die bei einer Behandlung von Patienten, die an solchen Wunden leiden, auftreten, deutlich reduziert, wenn die Heilung verbessert ist und schneller vonstatten geht.
Spenderwunden sind Wunden, die z. B. im Zusammenhang mit einer Entfernung von hartem Gewebe aus einem Teil des Körpers in einen anderen Teil des Körpers auftreten, z. B. im Zusammenhang mit Transplantation. Die Wunden, die aus solchen Operationen resultieren, sind sehr schmerzhaft, und daher ist eine verbesserte Heilung äußerst wertvoll.
Der Ausdruck "Haut" wird in einem sehr breiten Sinn verwendet, der die epidermale Schicht der Haut und in solchen Fällen, in denen die Hautoberfläche mehr oder weniger verletzt ist, auch die dermale Schicht der Haut umfasst. Abgesehen vom Stratum corneum ist die epidermale Schicht der Haut die äußere (epitheliale) Schicht; die tiefere Bindegewebsschicht der Haut wird als Haut (Dermis) bezeichnet.
Da die Haut der am stärksten exponierte Teil des Körpers ist, ist sie für verschiedene Arten von Verletzungen besonders empfindlich, z. B. für Risse, Schnitte, Abschürfungen, Verbrennungen und Frostbeulen oder Verletzungen, die von verschiedenen Krankheiten herrühren. Darüber hinaus wird bei Unfällen oft viel Haut zerstört. Infolge der wichtigen Sperrfunktion und physiologischen Funktion der Haut ist die Integrität der Haut für das Wohlbefinden des Individuums wichtig, und jeder Bruch oder Riss stellt eine Gefahr dar, die vom Körper bekämpft werden muss, um seine weitere Existenz zu schützen.
Abgesehen von Verletzungen der Haut, können Verletzungen auch in allen Gewebearten (d. h. in weichen und harten Geweben) auftreten. Verletzungen an weichen Geweben, einschließlich Schleimhautmembranen und/oder Haut, sind im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung besonders relevant.
Die Heilung einer Wunde an der Haut oder einer Schleimhautmembran unterliegt einer Reihe von Stufen, die entweder zur Wiederherstellung oder Regeneration der Haut oder Schleimhautmembran führen. In den letzten Jahren wurden Regeneration und Reparatur als zwei Heilungstypen, die auftreten können, unterschieden. Die Regeneration kann als biologischer Prozess definiert werden, durch den der Aufbau und die Funktion von verlorengegangenem Gewebe vollständig erneuert werden. Die Reparatur dagegen ist ein biologischer Prozess, durch den die Kontinuität von zerstörtem Gewebe durch neue Gewebe wiederhergestellt wird, welche die Struktur und Funktion der verlorenen nicht replizieren.
Die Mehrheit der Wunden heilt durch Reparatur, was bedeutet, dass das neue gebildete Gewebe sich strukturell und chemisch von dem ursprünglichen Gewebe unterscheidet (Narbengewebe). In der frühen Stufe der Gewebereparatur ist ein Prozess, der fast immer involviert ist, die Bildung eines transienten Bindegewebes im Bereich der Gewebeverletzung. Dieser Prozess beginnt mit der Bildung einer neuen extrazellulären Kollagenmatrix durch Fibroblasten. Diese neue extrazelluläre Kollagenmatrix ist dann während des endgültigen Heilungsprozesses der Träger für ein Bindegewebe. Die endgültige Heilung ist in den meisten Geweben eine Narbenbildung, die Bindegewebe enthält. In Geweben, die regenerative Eigenschaften haben, z. B. Haut und Knochen, umfasst die endgültige Heilung die Regeneration des ursprünglichen Gewebes. Dieses regenerierte Gewebe hat häufig auch gewisse Narbencharakteristika, z. B. eine Verdickung einer geheilten Knochenfraktur.
Unter normalen Umständen stellt der Körper Mechanismen zur Heilung verletzter Haut oder Schleimhaut bereit um die Integrität der Hautbarriere oder Schleimhaut wieder herzustellen. Der Reparaturprozess kann selbst für kleinere Brüche oder Wunden einen Zeitraum, der sich von Stunden und Tagen bis Wochen erstreckt, in Anspruch nehmen. Allerdings kann bei Ulcusbildung die Heilung sehr langsam sein, und die Wunde kann über einen ausgedehnten Zeitraum, d. h. Monate oder sogar Jahre, fortbestehen.
Die Stufen der Wundheilung umfassen normalerweise Inflammation (normalerweise 1 bis 3 Tage), Migration (normalerweise 1 bis 6 Tage), Proliferationen (normalerweise 3 bis 24 Tage) und Maturation (normalerweise 1 bis 12 Monate). Der Heilungsprozess ist ein komplexer und gut organisierter physiologischer Prozess, der die Migration, Proliferation und Differenzierung einer Vielzahl von Zelltypen, wie auch die Synthese von Matrixkomponenten, beinhaltet. Der Heilungsprozess kann in die folgenden drei Phasen aufgeteilt werden:

i) Hämostase und Entzündung (Inflammation)

Wenn Thrombozyten außerhalb des Blutkreislaufsystems vorliegen und Thrombin und Kollagen ausgesetzt werden, werden sie aktiviert und aggregieren. Somit initiieren Thrombozyten den Reparaturprozess, indem sie aggregieren und einen temporären Stopfen bilden um die Hämostase sicherzustellen und ein Eindringen von Bakterien zu verhindern. Die aktivierten Thrombozyten initiieren das Gerinnungssystem und setzen Wachstumsfaktoren, wie Thrombozyten-Wachstumsfaktor (PDGF) und epidermale Wachstumsfaktoren (EGFs) und transformierende Wachstumsfaktoren (TGFs), frei.
Die erste Zellen, die in den Wundbereich eindringen, sind Neutrophile, gefolgt von Monozyten, die durch Makrophagen aktiviert werden.
Die Hauptrolle von Neutrophilen scheint darin zu bestehen, die Wunde zu reinigen oder kontaminierende Bakterien von der Wunde abzuwehren und die Heilung der Wunde durch Entfernung von toten Zellen und Thrombozyten zu verbessern. Die Infiltration von Neutrophilen hört innerhalb der ersten 48 Stunden auf, vorausgesetzt, dass keine bakterielle Kontamination in der Wunde vorliegt. Überschüssige Neutrophile werden durch Gewebemakrophagen, die aus dem Blutkreislaufpool von Monozyten aus Blut herangezogen werden, phagozytiert. Es wird davon ausgegangen, dass Makrophagen für eine effiziente Wundheilung essentiell sind, indem sie auch für die Phagozytose von pathogenen Organismen und eine Entfernung von Gewebezelltrümmern verantwortlich sind. Darüber hinaus setzen sie zahlreiche Faktoren frei, die bei nachfolgenden Ereignissen des Heilungprozesses involviert sind. Die Makrophagen ziehen Fibroblasten an, die mit der Produktion von Kollagen beginnen.

ii) Granulationsgewebebildung und Reepithelisierung

Innerhalb von 48 Stunden nach der Verletzung beginnen Fibroblasten sich zu vermehren und vom Rand der Wunde aus dem Bindegewebe in den Wundraum zu wandern. Die Fibroblasten produzieren Kollagene und Glykosaminoglykane, und inter alia stimuliert eine geringe Sauerstoffspannung an der Wunde die Proliferation endothelialer Zellen. Die endothelialen Zellen bewirken die Bildung eines neuen Kapillarnetzwerks.
Kollagenasen und Plasminogenaktivatoren werden von Keratinozysten sekretiert. Wenn die Wunde in Ruhe gelassen wird und gut mit Sauerstoff und Nährstoffen versorgt wird, werden Keratinozyten über die Wunde wandern. Es wird angenommen, dass Keratinozyten nur über lebensfähiges Gewebe wandern, und dementsprechend wandern die Keratinozyten nur in den Bereich unter dem toten Gewebe und der Kruste der Wunde.
Der Wundbereich wird durch Kontraktion weiter verringert.

iii) Hautnachbildung

Sobald die Reepithelisierung beendet ist, beginnt die Remodellierung des Gewebes. Diese Phase, die mehrere Jahre dauert, stellt die Festigkeit für das verwundete Gewebe wieder her.
Alle oben beschriebenen Heilungsprozesse benötigen eine beachtliche Zeit. Die Heilungsrate wird durch die Freiheit der Wunde von Infektion, dem allgemeinen Gesundheitszustand des Individuums, dem Vorliegen von Fremdkörpern, usw., beeinflusst. Einige pathologische Krankheitszustände, wie Infektion, Mazeration, Flüssigkeitsmangel, schlechte Allgemeingesundheit und schlechte Ernährung, können zur Bildung eines chronischen Geschwürs, wie z. B. ischämischer Geschwüre, führen.
Zumindest bis eine oberflächliche Heilung erfolgt ist, besteht für die Wunde die Gefahr einer fortgesetzten oder neuen Infektion weiter. Daher gilt, je schneller die Wunde heilen kann, desto schneller ist die Gefahr beseitigt.
Damit ist jedes Verfahren, das die Geschwindigkeit der Wundheilung beeinflussen kann oder die Heilung von Wunden günstig beeinflusst, von großem Wert.
Da darüber hinaus fast alle Gewebereparaturprozesse die frühe Bindegewebsbildung einschließen, werden die Stimulation dieser und der nachfolgenden Prozesse als Verbesserung der Gewebeheilung angesehen.
Im vorliegenden Zusammenhang wird der Ausdruck "klinische Heilung" verwendet um eine Situation zu bezeichnen, in der visuell keine Gewebeverletzung beobachtet werden kann und nur schwache Anzeichen einer Entzündung vorliegen, wie z. B. leichte Rötung oder ein geschwollenes Gewebe. Außerdem gibt es keine Beschwerden über Schmerzen, wenn das Organ entspannt oder unberührt ist.
Wie oben beschrieben wurde, betrifft die Erfindung die Verwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen als Mittel zur Wundheilung, d. h. als Mittel, das die Heilung von Haut- oder Schleimhaut-Wunden beschleunigt, stimuliert oder begünstigt. Dementsprechend ist eine wichtige Verwendung auch die Verwendung als Geweberegenerations- und/oder Reparaturmittel. Infolge der Wundheilungswirkung haben Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine darüber hinaus eine schmerzlindernde Wirkung.
Traditionell wurden am häufigsten "Nass-zu-Trocken"-Verbände zur Wundpflege verwendet. Diese werden allmählich durch feuchte Umgebungen unter Verwendung von okklusiven Verbänden ersetzt. Um einen verletzten Körperteil erfolgreich zu reparieren oder zu ersetzen, müssen die Prozesse der Wundheilung, Fibrose und Bakterieninvasion gegeneinander abgewogen werden. Viele Werkzeuge, die eine Infektion abwehren, beeinträchtigen eine Wundheilung. Eine verzögerte Wundheilung oder eine Entzündung können die Fibrose verschlimmern. Darüber hinaus wurde bereits früher nahegelegt, dass Wachstumsfaktoren, wie epidermaler Wachstumsfaktor (EGF), transformierender Wachstumsfaktor-α (TGF-α), Thrombozyten-Wachstumsfaktor (PDGF), Fibroblasten-Wachstumfaktoren (FGFs), einschließlich des sauren Fibroblasten-Wachstumsfaktors (α-FGF) und des basischen Fibroblasten-Wachstumsfaktors (β-FGF), des transformierenden Wachstumsfaktor-β (TGF-β) und der Insulin-artigen Wachstumsfaktoren (IGF-1 und IGF-2), Leiter des Wundheilungsprozesses sind; sie werden häufig als Promotoren der Wundheilung bezeichnet; allerdings können sie tatsächlich die Fibrose begünstigen, die wiederum eine erfolgreiche Heilung verschlechtern kann. Selbst wenn eine beschleunigte Heilung die beste Aussicht zur Reduzierung der Infektionsgefahr und der resultierenden Entzündung, die zur Narbenbildung führen kann, bietet, führten therapeutische Versuche zur Beschleunigung des normalen Wundheilungsprozesses zu relativ geringem Erfolg. Der Grund ist wahrscheinlich der, dass der Reparaturprozess die gemeinsame Involvierung einer Reihe von Faktoren, siehe oben, umfasst.
Zu diesem Zweck haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung beobachtet, dass in verschiedenen Zellkulturen von Fibroblasten (embryonal, dermal, aus dem periodontalen Ligament stammend, Fisch oder Vogel) zweimal so viel TGFβ1 in den Zellkulturen, die mit dem EMDOGAIN® stimuliert wurden, im Vergleich zu nichtstimulierten Kulturen produziert wird, wenn die Analyse, z. B. durch ELISA, in einer Probe aus dem Kulturmedium durchgeführt wird (siehe Beispiel 1 unten). Die Erhöhung ist nach 24-stündiger Kultur vorhanden, ist aber an den folgenden Tagen (Tage 2 und 3) deutlicher. Nach dem zweiten Tag ist auch die Zellproliferation in Zellkulturen, die mit EMDOGAIN® stimuliert wurden, erhöht. Eine ähnliche, aber weniger ausgeprägte Erhöhung der TGFβ1-Produktion wird in humanen epithelialen Zellen beobachtet. Da TGFβ1 bei der Epithelisierung von Oberflächenwunden von zentraler Bedeutung zu sein scheint, stützen diese Feststellungen das Konzept der vorliegenden Erfindung.
In der Mundhöhle ist die Verwendung von Verbänden üblich. Solche Verbände gehören zum traditionellen Typ, z. B. Surgipads um die Blutung zu stoppen, und peridontaler Verband Coe-Pack (Coe Laboratories, the GC Group, Chicago, USA) bei offenen Wunden; Gaze, getränkt in antibiotischer Lösung, wird in Zahnextraktions-Alveolen eingesetzt und erfordert die Entfernung nach wenigen Tagen, wenn die Heilung begonnen hat. Das Spülen mit Antiseptika, wie z. B. Chlorhexidin, wird nach oralchirurgischen Eingriffen regelmäßig angewendet. Manchmal werden auch allgemeine oder topische Antibiotika verschrieben.
Im Allgemeinen müssen spezifische Vorsichtsmaßnahmen im Zusammenhang mit einer Behandlung von Wunden in Betracht gezogen werden, z. B. Sterilitätsbetrachtungen, Kontaminationsprobleme, richtiges Anlegen von Bandagen/Verbänden usw., wobei es normalerweise erforderlich ist, dass die Behandlung/das Anlegen von gut ausgebildeten Schwestern oder dergleichen durchgeführt wird. Damit wird eine Wundbehandlung oft ein sehr teurer Vorgang, wenn das Wundheilungsmittel mehrmals täglich angewendet werden muss. Eine gewünschte Reduzierung bei den Kosten, die bei einer Wundheilungsbehandlung involviert sind, ist daher erzielbar, wenn die Anwendungshäufigkeit reduziert werden kann oder wenn die Heilungsprozesse verbessert werden können, was zu einer Reduzierung des Zeitraums führt, der zur Heilung der Wunde notwendig ist.
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben nun gefunden, dass Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine Wundheilungseigenschaften besitzen. Darüber hinaus gibt es Anzeichen dafür, dass die Anwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen zu einer verbesserten Wundheilung führt. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben insbesondere beobachtet, dass nach Anwendung von Schmelzmatrixproteinen und/oder Schmelzmatrixderivaten die Inflammationsstufe verkürzt wird und die typischen Anzeichen, wie z. B. Wärme, Röte, Ödem und Schmerzen, weniger wahrnehmbar sind und neue Gewebe schneller gebildet werden. Die beobachtete Zeit zur Wundheilung (z. B. nach Operation) wird im Vergleich zu einer Operation ohne die Verwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen deutlich verkürzt.
Die therapeutische und/oder prophylaktische Aktivität von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen kann natürlich durch in vivo-Tests unter Verwendung von Versuchstieren oder von Menschen, bewiesen werden (siehe den experimentellen Abschnitt der Beschreibung). Allerdings können Hinweise für die Wirksamkeit und/oder Aktivität von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen erhalten werden, indem relativ einfache in vitro-Tests, wie z. B. Tests, die Zellkulturen umfassen, durchgeführt werden.
Darüber hinaus gibt es mehrere Parameter, die angewendet werden können um eine Wundheilungswirkung zu beurteilen. Diese umfassen:
- Computerunterstützte Planimetrie (Beurteilung der Heilungsgeschwindigkeit einer offenen Wunde)
- Laserdopplerabbildung (Beurteilung der Wundperfusion)
- Tensiometrie (Beurteilung der Wundenstärke)
- Histopathologie/Zytologie (mikroskopische Beurteilung der Wundgewebe und -fluide)
- Biochemie (HPLC/RIA) (Beurteilung verschiedener Arzneimittel und biochemischer Komponenten der Gewebeheilung)
- Elektrodiagnostik (Beurteilung der Beziehung zwischen Wundheilung und Innervation)
- Szintigraphie (Radionukleotidabbildung von Wundgewebe).
Im Zusammenhang mit einer Behandlung von Wunden/Geschwüren sind ein Débridement und eine Wundreinigung von besonderer Bedeutung. Es wird angenommen, dass die Reinigung und/oder das Débridement von Wunden/Geschwüren eine Voraussetzung für den Heilungsprozess sind, und dass außerdem, wenn Wundheilungsmittel angewendet werden, sie ihre Wirkung auf frisches und vitales Gewebe und nicht auf totes oder kontaminiertes Gewebe ausüben. Ein Débridement von nekrotischem Gewebe kann durch mindestens vier verschiedene Verfahren erfolgen: i) scharfes Débridement, ii) mechanisches Débridement, iii) enzymatisches Débridement, und iv) autolytisches Débridement.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch die Verwendung eines Débridementverfahrens in Kombination mit der Verwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen für die Heilung oder Prävention von Wunden. Eine solche Kombinationstherapie umfasst die folgenden zwei Stufen, nämlich i) ein Débridementverfahren und ii) Anwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen; die beiden Stufen können so oft es gewünscht wird und in geeigneter Reihenfolge durchgeführt werden.
Wenn die Wunde einem Débridement unterworfen wurde, können die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine entweder direkt auf oder in die Wunde aufgetragen werden oder können in Form einer geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzung, z. B. als trockener oder feuchter, sauberer Verband, in den die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine eingearbeitet wurde(n), angewendet werden. Die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine kann/können natürlich in Verbindung mit einem Reinigen der Wunde angewendet werden.
Wie es später diskutiert werden wird, können die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine als solche eingesetzt werden oder kann/können in einem geeigneten Präparat oder einer geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzung verwendet werden.
Ein Bakteriostatikum zur Verwendung in Kombination mit der Schmelzmatrix, mit Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen könnte ein Bakteriostatikum sein, das antimikrobielle Wirkung durch Inhibierung der Zellwandsynthese zeigt, z. B. β- Lactame und Vancomycin, vorzugsweise Penicilline, wie z. B. Amdinocillin, Ampicillin, Amoxicillin, Azlocillin, Bacampicillin, Benzathin-Penicillin G, Carbenicillin, Cloxacillin, Cyclacillin, Dicloxacillin, Methicillin, Mezlocillin, Nafcillin, Oxacillin, Penicillin G, Penicillin V, Piperacillin und Ticarcillin; Cephalosporine, wie z. B. die Arzneimittel der ersten Generation, Cefadroxil, Cefazolin, Cephalexin, Cephalothin, Cephapirin und Cephradin, die Arzneimittel der zweiten Generation, Cefaclor, Cefamandol, Cefonicid, Ceforanid, Cefoxitin und Cefuroxim, und die Cephalosporine der dritten Generation, Cefoperazon, Cefotaxim, Cefotetan, Ceftazidim, Ceftizoxim, Ceflriaxon und Moxalactam; Carbapeneme, wie Imipenem; oder Monobactame, wie Aztreonam.
Andere antimikrobielle Arzneimittel (Bakteriostatika) mit Wirkung durch Hemmung der Proteinsynthese, z. B. Chloramphenicol; andere Tetracycline, vorzugsweise Demeclocyclin, Doxycyclin, Methacyclin, Minocyclin und Oxytetracyclin; Aminoglykoside, wie Amikacin, Gentamicin, Kanamycin, Neomycin, Netilmicyn, Paromomycin, Spectinomycin, Streptomycin und Tobramycin; Polymycine, wie Colistin, Colistimathat und Polymycin B, und Erythromcine und Lincomycine; Bakteriostatika mit Wirkung durch Hemmung der Nukleinsäuresynthese, insbesondere Sulfonamide, wie Sulfacytin, Sulfadiazin, Sulfisoxazol, Sulfamethoxazol, Sulfamethizol und Sulfapyridin; Trimethoprim, Chinolone, Novobiocin, Pyrimethamin und Rifampin.
Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und Schmelzmatrixproteine
Schmelzmatrix ist eine Vorstufe zu Schmelz und kann aus einer beliebigen relevanten natürlichen Quelle, z. B. einem Säuger, bei dem sich Zähne in der Entwicklung befinden, erhalten werden. Eine geeignete Quelle sind sich entwickelnde Zähne von Schlachttieren, z. B. Kälbern, Schweinen oder Lämmern. Ein anderes Beispiel ist z. B. Fischhaut.
Schmelzmatrix kann aus sich entwickelnden Zähnen hergestellt werden, wie es vorher beschrieben wurde (EP-B-0 337 967 und EP-B-0 263 086). Die Schmelzmatrix wird abgekratzt, und Schmelzmatrixderivate werden z. B. durch Extraktion mit einer wässrigen Lösung, z. B. einem Puffer, einer verdünnten Säure oder Base oder einem Wasser/Lösungsmittelgemisch, gefolgt von Größenausschluss, Entsalzungs- oder anderen Reinigungsschritten, gegebenenfalls gefolgt von einer Gefriertrocknung, hergestellt. Enzyme können durch Behandlung mit Hitze oder Lösungsmitteln desaktiviert werden, wobei in diesem Fall die Derivate in flüssiger Form ohne Gefriertrocknung gelagert werden können.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung sind Schmelzmatrixderivate Derivate von Schmelzmatrix, die ein oder mehrere Schmelzmatrixproteine oder Teile solcher Proteine, natürlich hergestellt durch abwechselndes Spleissen oder Bearbeitung oder durch enzymatische oder chemische Spaltung eines Proteins natürlicher Länge oder durch Synthese von Polypeptiden in vitro oder in vivo (DNA-Rekombinationsverfahren oder Kultivierung von diploiden Zellen), umfassen. Schmelzmatrixproteinderivate umfassen auch mit Schmelzmatrix verwandte Polypeptide oder Proteine. Die Polypeptide oder Proteine können an ein geeignetes biologisch abbaubares Trägermolekül, wie z. B. Polyaminosäuren oder Polysaccharide oder Kombinationen daraus, gebunden sein. Darüber hinaus umfasst der Ausdruck Schmelzmatrixderivate auch synthetische analoge Substanzen.
Proteine sind biologische Makromoleküle, die durch Aminosäurereste, welche durch Peptidbindungen aneinander gebunden sind, gebildet werden. Proteine als lineare Aminosäurepolymere werden auch Polypeptide genannt. Typischerweise haben Proteine 50 bis 800 Aminosäurereste und daher Molekulargewichte im Bereich von etwa 6.000 bis etwa mehrere hunderttausend Daltons oder mehr. Kleine Proteine werden Peptide oder Oligopeptide genannt.
Schmelzmatrixproteine sind Proteine, die normalerweise in der Schmelzmatrix vorkommen, d. h. in der Vorstufe für Schmelz (Ten Cate: Oral Histology, 1994; Robinson: Eur. J. Oral Science, Jan. 1998, 106, Ergänzung 1: 282-91); oder sie sind Proteine, die durch Spaltung solcher Proteine erhalten werden können. Im Allgemeinen haben solche Proteine ein Molekulargewicht unter 120.000 Dalton und umfassen Amelogenine, Nicht-Amelogenine, Prolinreiche Nicht-Amelogenine, Ameline (Ameloblastin, Sheathlin) und Tufteline.
Beispiele für Proteine zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung sind Amelogenine, Prolin-reiche Nicht-Amelogenine, Tuftelin, Tufiproteine, Serumproteine, Speichelproteine, Amelin, Ameloblastin, Sheathlin und Derivate davon und Gemische davon. Ein Präparat, das eine aktive Schmelzsubstanz enthält, zur Verwendung gemäß der Erfindung, kann auch mindestens zwei der vorstehend genannten Protein-artigen Substanzen enthalten. Ein handelsübliches Produkt, das Amelogenine und möglicherweise andere Schmelzmatrixproteine umfasst, ist als EMDOGAIN® (Biora AB) auf dem Markt.
Im Allgemeinen sind die Hauptproteine einer Schmelzmatrix als Amelogenine bekannt. Sie stellen etwa 90 Gew.-% der Matrixproteine. Die verbleibenden 10 Gew.-% umfassen Prolin-reiche Nicht-Amelogenine, Tuftelin, Tufiproteine, Serumproteine und mindestens ein Speichelprotein; es können allerdings auch andere Proteine vorhanden sein, z. B. Amelin (Ameloblastin, Sheathlin), die im Zusammenhang mit Schmelzmatrix identifiziert wurden. Darüber hinaus können die verschiedenen Proteine in verschiedenen unterschiedlichen Größen synthetisiert und/oder behandelt worden sein (d. h. unterschiedliche Molekulargewichte haben). So wurde gefunden, dass die dominierenden Proteine in der Schmelzmatrix, die Amelogenine, in mehreren unterschiedlichen Größen vorliegen, die zusammen supramolekulare Aggregate bilden. Sie sind deutlich hydrophobe Substanzen, die unter physiologischen Bedingungen Aggregate bilden. Sie können andere Proteine oder Peptide tragen oder Träger für diese sein.
Es wird auch in Betracht gezogen, dass andere Proteinsubstanzen zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung geeignet sind. Beispiele umfassen Proteine, wie Prolin-reiche Proteine und Polyprolin. Andere Beispiele für Substanzen, von denen angenommen wird, dass sie zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung geeignet sind, sind Aggregate solcher Proteine, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine, wie auch von Metaboliten der Schmelzmatrix, der Schmelzmatrixderivate und der Schmelzmatrixproteine. Die Metabolite können eine beliebige Größe haben, die von der Größe von Proteinen bis zu der von kurzen Proteinen reicht.
Wie oben beschrieben wurde, haben die Proteine, Polypeptide oder Peptide zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung typischerweise ein Molekulargewicht von höchstens etwa 120 kDa, z. B. höchstens 100 kDa, 90 kDa, 80 kDa, 70 kDa oder 60 kDa, wenn es durch SDS-Page-Elektrophorese bestimmt wird.
Die Proteine zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung werden normalerweise in Form eines Präparates dargereicht, wobei der Proteingehalt der aktiven Schmelzsubstanz im Präparat im Bereich von etwa 0,05 Gew.-% bis 100 Gew.-%, z. B. etwa 5 bis 99 Gew.-%, etwa 10 bis 95 Gew.-%, etwa 15 bis 90 Gew.-%, etwa 20 bis 90 Gew.-%, etwa 30 bis 90 Gew.-%, etwa 40 bis 85 Gew.-%, etwa 50 bis 80 Gew.-%, etwa 60 bis 70 Gew.-%, etwa 70 bis 90 Gew.-% oder etwa 80 bis 90 Gew.-% liegt.
Ein Präparat einer aktiven Schmelzsubstanz zur Verwendung gemäß der Erfindugn kann auch ein Gemisch aus aktiven Schmelzsubstanzen mit unterschiedlichen Molekulargewichten enthalten.
Die Proteine einer Schmelzmatrix können in einen Teil mit hohem Molekulargewicht und einen Teil mit niedrigem Molekulargewicht eingeteilt werden, und es wurde festgestellt, dass eine wohldefinierte Fraktion von Schmelzmatrixproteinen wertvolle Eigenschaften bezüglich einer Behandlung von periodontalen Störungen (d. h. periodontalen Wunden) besitzt. Diese Fraktion enthält mit Essigsäure extrahierbare Proteine, die im Allgemeinen als Amelogenine bezeichnet werden und den Teil einer Schmelzmatrix mit niedrigem Molekulargewicht bilden (z. B. EP-B-0 337 967 und EP-B-0 263 086).
Wie oben diskutiert wurde, hat der niedrigmolekulargewichtige Teil einer Schmelzmatrix geeignete Aktivität zur Induzierung einer Bindung zwischen harten Geweben bei periodontalen Störungen. Im vorliegenden Kontext sind allerdings die aktiven Proteine nicht auf den niedrigmolekulargewichtigen Teil einer Schmelzmatrix beschränkt. Derzeit umfassen bevorzugte Proteine Schmelzmatrixproteine, wie z. B. Amelogenin, Amelin, Tuftelin, usw., mit Molekulargewichten (in vitro gemessen mit SDS-PAGE) unter etwa 60.000 Dalton, allerdings haben Proteine mit einem Molekulargewicht über 60.000 Dalton vielversprechende Eigenschaften als Kandidaten zur Wundheilung, als antibakterielle und/oder antiinflammatorische Mittel.
Dementsprechend wird davon ausgegangen, dass die aktive Schmelzsubstanz zur Verwendung gemäß der Erfindung ein Melekulargewicht von bis zu etwa 40.000 hat, z. B. ein Molekulargewicht von zwischen etwa 5.000 und etwa 25.000.
Innerhalb des Rahmens der vorliegenden Erfindung liegen auch Peptide, wie sie in WO 97/02730 beschrieben werden, d. h. Peptide, die mindestens ein Sequenzelement, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den Tetrapeptiden DGEA (Asp-Gly-Glu-Ala), VTKG (Val- Thr-Lys-Gly), EKGE (Glu-Lys-Gly-Glu) und DKGE (Asp-Lys-Gly-Glu), umfassen, und die außerdem eine Aminosäuresequenz umfassen, in der ein fortlaufender Strang aus 20 Aminosäuren zu einem Grad von mindestens 80% mit einem Aminosäurestrang identisch ist, der dieselbe Länge hat und aus der Gruppe bestehend aus der in SEQ ID NO: 1 dargestellten Sequenz und einer Sequenz, die aus den Aminosäuren 1 bis 103 von SEQ ID NO: 1 und den Aminosäuren 6 bis 324 von SEQ ID NO: 2 besteht, ausgewählt ist.
Mit dem Ausdruck "Sequenzidentität" ist gemeint, dass die Identität in der Aminosäuresequenz bezüglich der Identität und Position der Aminosäuren der Peptide übereinstimmt. Ein Spalt wird als Nicht-Identität für eine oder mehrere Aminosäuren gezählt.
Solche Peptide können 6 bis 300 Aminosäuren, d. h. mindestens 20 Aminosäuren, mindestens 30 Aminosäuren, z. B. mindestens 60 Aminosäuren, mindestens 90 Aminosäuren, mindestens 120 Aminosäuren, mindestens 150 Aminosäuren oder mindestens 200 Aminosäuren umfassen.
Ein Verfahren zur Isolierung von Schmelzmatrixproteinen beinhaltet eine Extraktion der Proteine und eine Entfernung von Calcium- und Phosphat-Ionen aus solubilisiertem Hydroxyapatit durch ein geeignetes Verfahren, z. B. Gelfiltration, Dialyse oder Ultrafiltration (siehe z. B. Janson, J-C & Ryden, L. (Herausg.), Protein purification, VCH Publishers 1989 und Harns, ELV & Angal, S., Protein purification methods - A practical approach, IRL Press, Oxford 1990).
Ein typisches lyophilisiertes Proteinpräparat kann hauptsächlich oder ausschließlich bis zu 70 bis 90% Amelogenine mit einem Molekulargewicht (MG) zwischen 40.000 und 5.000 Dalton enthalten, wobei kleinere Peptide, Salze und Restwasser 10 bis 30% ausmachen. Die Hauptproteinbanden liegen bei 20 kDa, 12 bis 14 kDa und etwa 5 kDa.
Durch Trennung der Proteine, z. B. Präzipitation, Ionenaustauschchromatographie, präparative Elektrophorese, Gelpermeationschromatographie, reversed phase- Chromatographie oder Affinitätschromatographie, können die Amelogenine mit verschiedenen Molekulargewichten gereinigt werden.
Die Kombination von Amelogeninen unterschiedlichen Molekulargewichts kann verändert werden, und zwar von einer dominierenden 20 kDa-Verbindung zu einem Amelogeninderivat mit vielen verschiedenen Molekulargewichten zwischen 40 und 5 kDa und zu einer dominierenden 5 kDa-Verbindung. Andere Schmelzproteine, z. B. Amelin, Tuftelin oder proteolytische Enzyme, die normalerweise in Schmelzmatrix gefunden werden, können zugesetzt werden und durch das Amelogeninaggregat getragen werden.
Als alternative Quelle für Schmelzmatrixderivate oder -proteine kann man auch allgemein anwendbare Synthesewege, die einem Fachmann auf diesem Gebiet gut bekannt sind, anwenden oder kultivierte Zellen oder Bakterien, die durch DNA-Rekombinationstechniken modifiziert wurden, verwenden (siehe z. B. Sambrook, J. et al.: Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989).
Physiko-chemische Eigenschaften von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen.
Im Allgemeinen sind die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und die Schmelzmatrixproteine hydrophobe Substanzen, d. h. in Wasser, speziell bei erhöhten Temperaturen, wenig löslich. Im Allgemeinen sind diese Proteine bei nicht-physiologischen pH-Werten und bei einer niedrigen Temperatur, wie z. B. 4 bis 20ºC, löslich, während sie bei Körpertemperatur (35 bis 37ºC) und neutralem pH aggregieren und präzipitieren.
Die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung umfassen auch eine aktive Schmelzsubstanz, bei der mindestens ein Teil der aktiven Schmelzsubstanz in Form von Aggregaten vorliegt oder nach in vivo-Anwendung zur Bildung von Aggregaten fähig ist. Die Partikelgröße der Aggregate liegt in einem Bereich von etwa 20 nm bis etwa 1 um.
Es wird davon ausgegangen, dass die Löslichkeitseigenschaften von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen im Zusammenhang mit der prophylaktischen und therapeutischen Aktivität der Substanzen von Bedeutung sind. Wenn eine Zusammensetzung, die die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine (im Folgenden auch mit dem allgemeinen Ausdruck "aktive Schmelzsubstanz" bezeichnet) enthält, z. B. einem Menschen verabreicht wird, werden die Protein-artigen Substanzen infolge des pHs, der normalerweise unter physiologischen Bedingungen vorherrscht, präzipitieren. Auf diese Weise wird eine Schicht aus Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen an der Anwendungsstelle gebildet, und diese Schicht (die auch in solchen Fällen, wo Aggregate gebildet wurden, eine molekulare Schicht sein kann) ist unter physiologischen Bedingungen schwer abzuspülen. Infolge der bioadhäsiven Eigenschaften der Substanzen (siehe unten) wird außerdem die präzipitierte Schicht auch am Rand zwischen der präzipitierten Schicht und dem Gewebe fest an das Gewebe gebunden. Die Protein-artige Schicht bedeckt somit das Gewebe, auf welches die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine oder Zusammensetzungen davon aufgetragen wurde, und die aktiven Schmelzsubstanzen werden für einen längeren Zeitraum in situ gehalten, d. h. es ist nicht notwendig, die aktive Schmelzsubstanz (die aktiven Schmelzsubstanzen) in kurzen Intervallen zu verabreichen. Darüber hinaus kann die in situ gebildete Schicht fast mit einem okklusiven Verband verglichen werden, d. h. die gebildete Schicht schützt das Gewebe, auf dem die Schicht ausgebildet ist, vor der Umgebung. Im Fall eines Wundgewebes. eines infizierten Gewebes oder eines entzündeten Gewebes schützt eine solche Schicht das Gewebe vor einer weiteren Kontamination durch Mikroorganismen, die in der Umgebung vorliegen. Darüber hinaus kann die Protein-artige Schicht ihre Wirkung durch direkten Kontakt mit dem Gewebe oder mit Mikroorganismen, die in/am Gewebe vorhanden sind, ausüben.
Um es möglich zu machen, dass eine Protein-artige Schicht in situ nach der Anwendung ausgebildet wird, kann es vorteilhaft sein, eine geeignete Puffersubstanz in eine pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung der Schmelzmatrix, der Schmelzmatrixderivate und/oder der Schmelzmatrixproteine einzuarbeiten; der Zweck einer solchen Puffersubstanz könnte darin bestehen, die Auflösung der aktiven Schmelzsubstanz an der Anwendungsstelle zu vermeiden.
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben auch beobachtet, dass die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und die Schmelzmatrixproteine bioadhäsive Eigenschaften besitzen, d. h. sie haben die Fähigkeit, an Haut- oder Schleimhaut-Oberflächen zu haften. Diese Eigenschaften sind in Verbindung mit einer therapeutischen und/oder prophylaktischen Behandlung aus mindestens den folgenden Gründen besonders wertvoll:
- die prophylaktisch und/oder therapeutisch wirksame Substanz(en) kann (können) für einen längeren Zeitraum an der Anwendungsstelle gehalten werden (d. h. i) die Verabreichungshäufigkeit kann reduziert werden, ii) ein kontrollierter Freisetzungseffekt für die aktive Substanz kann erhalten werden und/oder iii) die lokale Behandlung der Anwendungsstelle ist verbessert);
- die Substanzen selbst können als Vehikel für andere prophylaktisch oder therapeutisch aktive Substanzen geeignet sein, da ein Vehikel, das Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine enthält, als bioadhäsives Vehikel formuliert werden kann (d. h. als ein neues bioadhäsives Arzneimittelabgabesystem, das auf den bioadhäsiven Eigenschaften der Schmelzmatrix, der Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine basiert).

Theorien bezüglich des Wirkmechanismus

Schmelzmatrix ist ein Beispiel für eine extrazelluläre Proteinmatrix, die an Mineraloberflächen wie auch an Protein-artigen Oberflächen haftet. Bei physiologischem pH und physiologischer Temperatur bilden die Proteine ein unlösliches supramolekulares Aggregat (Fincham et al. in J. Struct. Biol. März-April 1994; 112(2): 103-9 und in J. Struct. Biol. Juli- August 1995; 115(1): 50-9), das durch proteolytische Enzyme allmählich abgebaut wird (erfolgt sowohl in vivo wie auch in vitro, vorausgesetzt, dass die Proteasen keiner Inaktivierung unterzogen wurden).
Die kürzliche Beobachtung, dass die Schmelzmatrix während der Wurzel- und Wurzelzement-Bildung gebildet wird und vorübergehend vorliegt, kann erklären, wie die Anwendung von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und/oder Schmelzmatrixproteinen die Regeneration von periodontalem Gewebe fördert. Allerdings ist die Beobachtung, die der vorliegenden Erfindung zugrunde liegt, dass Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine auch eine positive Wirkung auf die Heilung von Verletzungen des weichen Gewebes, d. h. auf die Wundheilung, haben, sehr überraschend.
Erfindungsgemäß können eine Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine für Heilzwecke wie auch für präventive Zwecke eingesetzt werden. Darüber hinaus kann Schmelzmatrix, ein Schmelzmatrixderivat und/oder ein Schmelzmatrixprotein zusammen mit anderen aktiven Arzneimittelsubstanzen, wie z. B. antibakteriellen, antiinflammatorischen, antiviralen, antifungalen Substanzen, oder in Kombination mit Wachstumsfaktoren, wie z. B. TGFβ, PDGF, IGF, FGF, Keratinozyten-Wachstumsfaktor oder Peptidanalogen davon (es wird angenommen, dass EGF die Heilung durch Erhöhung der Migration und Zellteilung von epithelialen Zellen fördert; darüber hinaus erhöht EGF die Fibroblastenzahl in Wunden, was zu einer stärkeren Kollagenproduktion führt), verwendet werden. Enzyme, die entweder ursprünglich in der Schmelzmatrix oder einem Präparat davon vorliegen oder zugesetzt werden, können auch in Kombination mit einer Schmelzmatrix, einem Schmelzmatrixderivat und/oder Schmelzmatrixprotein verwendet werden; speziell sind dies Proteasen.
Ein Präparat der aktiven Schmelzsubstanz wird normalerweise als pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung formuliert. Eine solche Zusammensetzung kann natürlich aus dem Protein-artigen Präparat bestehen oder kann außerdem einen pharmazeutisch oder kosmetisch annehmbaren Träger umfassen. Speziell geeignete Träger zur Verwendung in pharmazeutischen oder kosmetischen Zusammensetzungen sind Propylenglykolalginat oder Hyaluronsäure oder Salze oder Derivate davon.

Pharmazeutische und/oder kosmetische Zusammensetzungen

Im Folgenden werden Beispiele geeigneter Zusammensetzungen, die die aktive Schmelzsubstanz (die aktiven Schmelzsubstanzen) enthalten, angegeben. In Abhängigkeit von der Verwendung der aktiven Schmelzsubstanz(en) kann eine Zusammensetzung eine pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung sein. Im Folgenden soll der Ausdruck "pharmazeutische Zusammensetzung" auch kosmetische Zusammensetzungen, wie Euch Zusammensetzungen, die zu der sogenannten Grauzone zwischen Arzneimitteln und Kosmetika gehören, nämlich Kosmezeutika, umfassen.
Zur Verabereichung an ein Individuum (ein Tier oder einen Menschen) werden die Schmelzmatrix, die Schmelzmatrixderivate und/oder die Schmelzmatrixproteine (im Folgenden auch als "aktive Schmelzsubstanz" bezeichnet) und/oder ein Präparat davon, vorzugsweise zu einer pharmazeutischen Zusammensetzung formuliert, die die aktive Schmelzsubstanz und gegebenenfalls ein oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Exzipientien enthält.
Die Zusammensetzungen können in Form z. B. fester, halbfester oder flüssiger Zusammensetzungen vorliegen, z. B. als
biologisch absorbierbare Pflaster, Arzneien, Verbände, Hydrogelverbände, Hydrokolloidverbände, Filme, Schäume, Folien, Bandagen, Pflaster, Abgabevorrichtungen, Implantate,
Pulver, Körnchen, Granulate, Kapseln, Agarose- oder Chitosan-Perlen, Tabletten, Pillen, Pellets, Mikrokapseln, Mikrokügelchen, Nanopartikel,
Sprays, Aerosole, Inhalationsvorrichtungen,
Gele, Hydrogele, Pasten, Salben, Cremes, Seifen, Suppositorien, Vagitorien, Zahnpasta, Lösungen, Dispersionen, Suspensionen, Emulsionen, Gemische, Lotionen, Mundwasser, Shampoos, Klistiere,
Kits, die z. B. zwei getrennte Behälter umfassen, wobei der erste der Behälter die aktive Schmelzsubstanz, gegebenenfalls vermischt mit einer anderen aktiven Arzneimittelsubstanz (mit anderen aktiven Arzneimittelsubstanzen) und/oder pharmazeutisch annehmbare Exzipientien enthält, und der andere Behälter ein geeignetes Medium, das dem ersten Behälter vor Verwendung zuzusetzen ist, um eine gebrauchsfertige Zusammensetzung zu erhalten, enthält;
und in anderen geeigneten Formen, z. B. Implantate oder ein Implantatüberzug, oder in einer Form, die zur Verwendung in Verbindung mit einer Implantation oder Transplantation geeignet ist.
Zusammensetzungen zur Anwendung (beziehungsweise Auftragung) auf die Haut oder die Schleimhaut werden im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung als am wichtigsten angesehen. So kann eine Zusammensetzung, die die aktive Schmelzsubstanz enthält und die verabreicht werden soll, zur Verabreichung über einen geeigneten Weg, z. B. zur topischen (dermalen), oralen, bukkalen, nasalen, aurealen, rektalen oder vaginalen Verabreichung oder zur Verabreichung in eine Körperhöhle, wie z. B. eine Zahnwurzel oder ein Zahnwurzelkanal, angepasst werden. Außerdem kann eine Zusammensetzung zur Verabreichung in Verbindung mit einer Operation, z. B. in Verbindung mit einem Schnitt innerhalb des Körpers, zur Förderung der Heilung von inneren Wunden und Schädigungen des weichen Gewebes, angepasst sein.
Wie oben beschrieben wurde, kann eine Zusammensetzung der aktiven Schmelzsubstanz(en) zur Verwendung während einer Operation, z. B. zum lokalen Auftragen (z. B. in der Mundhöhle) in Form eines Gels, Films oder trockenen Pellets, oder als Spüllösung oder zur Behandlung mit einer Paste oder Creme auf Gewebe oder Oberflächen geeignet sein um einen bakteriellen Angriff zu verhindern. Im Zusammenhang mit einer Operation oder Implantation im Bereich des Zahnwurzelkanals kann eine Paste zum Abschließen der Vertiefung verwendet werden.
Die Zusammensetzungen können nach herkömmlicher pharmazeutischer Praxis formuliert werden, siehe "Remingtons's Pharmaceutical Sciences" und "Encyclopedia of Pharmaceutical Technology", herausgegeben von Swarbrick, J. & J. C. Boylan, Marcel Dekker, Inc., New York, 1988.
Wie oben beschrieben wurde, ist die Anwendung einer Zusammensetzung, die eine aktive Schmelzsubstanz umfasst, für Haut oder Schleimhaut vorgesehen. Andere Anwendungen können natürlich auch relevant sein, z. B. ein Auftragen auf Gebisse, Prothesen, Implantate, und eine Anwendung in Körperhöhlen, wie die Mundhöhle, den Nasenraum und die Vagina. Die Schleimhaut ist vorzugsweise aus oraler, bukkaler, nasaler, auraler, rektaler und vaginaler Schleimhaut ausgewählt. Darüber hinaus kann das Auftragen direkt auf eine Wunde oder andere Verletzungen weichen Gewebes erfolgen.
Darüber hinaus ist eine Anwendung im dentalen/odontologischen Bereich von großer Bedeutung. Relevante Beispiele sind Anwendungen auf periodontale (dentale) Taschen, auf Zahnfleisch oder Zahnfleischwunden, die sich in der Mundhöhle befinden, oder in Kombination mit oraler Chirurgie stehen.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine aktive Schmelzsubstanz umfasst, dient als Arzneimittelabgabesystem. Im vorliegenden Kontext bezeichnet der Ausdruck "Arzneimittelabgabesystem" eine pharmazeutische Zusammensetzung (eine pharmazeutische Formulierung oder Dosierungsform), die nach Verabreichung an den Körper eines Menschen oder eines Tieres die aktive Substanz darreicht. Somit umfasst der Ausdruck "Arzneimittelabgabe-system" einfache pharmazeutische Zusammensetzungen, wie z. B. Cremes, Salben, Flüssigkeiten, Pulver, Tabletten, usw., wie auch verfeinerte Formulierungen, z. B. Sprays, Pflaster, Bandagen, Verbände, Vorrichtungen, usw.
Außer der aktiven Schmelzsubstanz kann eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung der vorliegenden Erfindung pharmazeutisch oder kosmetisch annehmbare Träger umfassen.
Ein pharmazeutisch oder kosmetisch annehmbarer Träger ist eine Substanz, die für das Individuum, dem die Zusammensetzung verabreicht werden soll, im Wesentlichen harmlos ist. Ein solcher Träger erfüllt normalerweise die Anforderungen, die durch nationale Gesundheitsbehörden gestellt werden. Offizielle Pharmakopoen, z. B. die britische Pharmakopoe, die US-Pharmakopoe und die europäische Pharmakopoe, enthalten Standards für pharmazeutisch annehmbare Träger.
Ob ein pharmazeutisch annehmbarer Träger zur Verwendung in einer pharmazeutischen Zusammensetzung geeignet ist, hängt im Allgemeinen von der Art der Dosierungsform ab, die zur Verwendung für eine besondere Wundart gewählt wird. Im Folgenden werden Beispiele für geeignete, pharmazeutisch annehmbare Träger zur Verwendung in verschiedenen Zusammensetzungsarten zur Verwendung gemäß der Erfindung angeführt.
Im Folgenden wird eine Übersicht über relevante pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verwendung gemäß der Erfindung gegeben. Die Übersicht basiert auf dem besonderen Verabreichungsweg. Allerdings wird einzusehen sein, dass in den Fällen, in denen ein pharmazeutisch annehmbarer Träger in verschiedenen Dosierungsformen oder verschiedenen Zusammensetzungen verwendet werden kann, die Anwendung eines besonderen pharmazeutisch annehmbaren Trägers nicht auf einer besondere Dosierungsform oder eine besondere Funktion des Trägers beschränkt ist.
Die Auswahl eines pharmazeutisch annehmbaren Trägers (pharmazeutisch annehmbare Träger) in einer Zusammensetzung zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung und die optimale Konzentration davon kann nicht allgemein vorausgesagt werden und muss auf der Basis einer experimentellen Beurteilung der Endzusammensetzung bestimmt werden. Allerdings kann der Fachmann auf dem Gebiet der pharmazeutischen Formulierungen entsprechende Richtlinien, z. B. "Remingtons's Pharmaceutical Sciences", 18. Ausgabe, Mack Publishing Company, Easton, 1990, finden.

Topische Zusammensetzungen

Zur Anwendung auf die Schleimhaut oder die Haut können die Zusammensetzungen zur Verwendung gemäß der Erfindung herkömmlicherweise nicht-toxische, pharmazeutisch annehmbare Träger und Exzipientien, einschließlich Mikrokügelchen und Liposome, enthalten.
Die Zusammensetzungen zur Verwendung gemäß der Erfindung beinhalten alle Arten fester, halbfester und flüssiger Zusammensetzungen. Zusammensetzungen mit besonderer Bedeutung sind z. B. Pasten, Salben, hydrophile Salben, Cremes, Gele, Hydrogele, Lösungen, Emulsionen, Suspensionen, Lotionen, Einreibemittel, Schampoos, Gelees, Seifen, Stifte, Sprays, Pulver, Filme, Schäume, Pads, Schwämme (z. B. Kollagenschwämme), Pads, Verbände (z. B. absorbierende Wundverbände), Arzneien, Bandagen, Pflaster und transdermale Abgabesysteme.
Die pharmazeutisch annehmbaren Träger können Lösungsmittel, Puffer, Konservierungsmittel, Feuchthaltemittel, Gelatbildner, Antioxidantien, Stabilisatoren, Emulgiermittel, Suspendiermittel, Gel-bildende Mittel, Salbengrundlagen, Penetrationsverstärker, Parfumes und Hautschutzmittel umfassen.
Beispiele für Lösungsmittel sind z. B. Wasser, Alkohole, pflanzliche Öle und Meeresöle (z. B. Speiseöle, wie Mandelöl, Rizinusöl, Kakaobutter, Kokosnussöl, Maisöl, Baumwollsamenöl, Leinöl, Olivenöl, Palmöl, Erdnussöl, Mohnsamenöl, Rapsöl, Sesamöl, Sojabohnenöl, Sonnenblumenöl und Teesamenöl), Mineralöle, Fettöle, flüssiges Paraffin, Polyethylenglykole, Propylenglykole, Glycerin, flüssige Polyalkylsiloxane, und Gemische davon.
Beispiele für Puffermittel sind z. B. Zitronensäure, Essigsäure, Weinsäure, Milchsäure, Hydrogenphosphorsäure, Diethylamin, usw.
Geeignete Beispiele für Konservierungsstoffe zur Verwendung in Zusammensetzungen sind Parabene, z. B. Methyl-, Ethyl-, Propyl-, p-Hydroxybenzoat, Butylparaben, Isobutylparaben, Isopropylparaben, Kaliumsorbat, Sorbinsäure, Benzoesäure, Methylbenzoat, Phenoxyethanol, Bronopol, Bronidox, MDM-Hydantoin, Iodpropinylbutylcarbamat, EDTA, Benzalconiumchlorid und Benzylalkohol, oder Gemische von Konservierungsmitteln.
Beispiele für Feuchthaltemittel sind Glycerin, Propylenglykol, Sorbit, Milchsäure, Harnstoff, und Gemische davon.
Beispiele für Gelatbildner sind Natrium-EDTA und Zitronensäure.
Beispiele für Antioxidantien sind butyliertes Hydroxyanisol (BAA), Ascorbinsäure und Derivate davon, Tocopherol und Derivate davon, Cystein, und Gemische davon.
Beispiele für Emulgiermittel sind natürlich vorkommende Gummis, z. B. Gummi arabicum oder Tragacanthgummi; natürlich auftretende Phosphatide, z. B. Sojabohnenlecitin; Sorbitanmonooleatderivate; Wollfette; Wollalkohole; Sobitanester; Monoglyceride; Fettalkohole; Fettsäureester (z. B. Triglyceride von Fettsäuren); und Gemische davon.
Beispiele für Suspendiermittel sind z. B. Cellulosen und Cellulosederivate, wie z. B. Carboxymethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Carraghenan, Gummi arabicum, Tragacanth, und Gemische davon.
Beispiele für Gelbasen, die Viskosität-erhöhende Mittel oder Komponenten, die fähig sind, Wundabsonderungen aufzunehmen, sind: Flüssiges Paraffin, Polyethylen, Fettöle, kolloidales Siliciumdioxid oder Aluminium, Zinkseifen, Glycerin, Propylenglykol, Tragacanth, Carboxyvinylpolymere, Magnesium-Aluminium-Silicate, Carbopol®, hydrophile Polymere, wie z. B. Stärke oder Cellulosederivate, wie z. B. Carboxymethylcellulose, Hydroxyethylcellulose und andere Cellulosederivate, mit Wasser quellbare Hydrokolloide, Carraghenane, Hyaluronate (z. B. Hyaluronatgel, das gegebenenfalls Natriumchlorid enthält) und Alginate, einschließlich Propylenglykolalginat.
Beispiele für Salbengrundlagen sind z. B. Bienenwachs, Paraffin, Cetanol, Cetylpalmitat, pflanzliche Öle, Sorbitanester von Fettsäuren (Span), Polyethylenglykole und Kondensationsprodukte zwischen Sorbitanestern von Fettsäuren und Ethylenoxid, z. B. Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Tween).
Beispiele für hydrophobe oder wasseremulgierende Salbengrundlagen sind Paraffine, pflanzliche Öle, Tierfette, synthetische Glyceride, Wasser, Lanolin und flüssige Polyalkylsiloxane.
Beispiele für hydrophile Salbengrundlagen sind feste Makrogole (Polyethylenglykole).
Weitere Beispiele für Salbengrundlagen sind Triethanolaminseifen, sulphatierter Fettalkohol und Polysorbate.
Beispiele für Pulverkomponenten sind: Alginat, Kollagen, Lactose, Pulver, das zur Gelbildung fähig ist, wenn es auf Wunden aufgetragen wird (Flüssigkeit/Wund-Exsudat absorbiert). Normalerweise müssen Pulver, die zum Auftragen auf große offene Wunden bestimmt sind, steril sein, und die vorliegenden Partikel müssen mikronisiert sein.
Beispiele für andere Träger sind Polymere, wie Caramelose, Natriumcaramelose, Hydroxypropylmethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Pektin, Xanthangummi, Johannesbrotgummi, Gummi arabicum, Gelatine, Carbomer, Emulgatoren, wie Vitamin E, Glycerylstearate, Cetanylglucosid, Kollagen, Carrageenan, Hyaluronate und Alginate und Kitosane.
Verbände und/oder Bandagen sind wichtige Abgabesysteme für eine aktive Schmelzsubstanz. Wenn Verbände als Dosierungsform verwendet werden, kann die aktive Schmelzsubstanz mit dem anderen Material/den anderen Ingredienzien vor oder während der Herstellung des Verbandes zugemischt werden oder die aktive Schmelzsubstanz kann in gewisser Weise auf den Verband aufgetragen werden, z. B. durch Eintauchen des Verbandes in eine Lösung oder Dispersion der aktiven Schmelzsubstanz oder durch Sprühen einer Lösung oder Dispersion der aktiven Schmelzsubstanz auf den Verband. Alternativ kann die aktive Schmelzsubstanz in Form eines Pulvers auf den Verband aufgetragen werden. Verbände können in Form absorbierender Wundverbände zur Aufnahme von Wundenabsonderungen vorliegen. Verbände können auch in Form von Hydrogelverbänden (z. B. vernetzten Polymeren, wie z. B. Intrasite®, das Carboxymethylcellulose, Propylenglykol oder Polysaccharid, Disaccharid und Proteine enthält) oder in Form von okklusiven Verbänden, z. B. Alginaten, Chitosan, hydrophilem Polyurethanfilm, Kollagenfolien, Platten, Pulvern, Schäumen oder Schwämmen, Schäumen (z. B. Polyurethan oder Silicon), Hydrocolloiden (z. B. Carboxymethylcellulose, CMC), Kollagen und Verbänden auf der Basis von Hyaluronsäure, einschließlich Kombinationen der Genannten, vorliegen.
Alginat-, Chitosan- und Hydrocolloidverbände nehmen Wund-Exsudat auf, wenn sie auf eine Wunde gelegt werden. Wenn dies geschieht, produzieren sie ein wässriges Gel an der Oberfläche der Wunde, und es wird angenommen, dass dieses Gel infolge des Zurückhaltens von Feuchtigkeit in der Wunde für die Heilung der Wunde günstig ist.
Es wird auch ins Auge gefasst, dass die aktive Schmelzsubstanz in einen Gewebeklebstoff eingearbeitet wird, der auch z. B. Fibrinogen und Thrombin und gegebenenfalls Faktor XIII oder einen anderen Plasmakoagulationsfaktor umfasst, um so Hämostase bereitzustellen. Der Gewebeklebstoff kann entweder als Vormischung aus der aktiven Schmelzsubstanz, Fibrinogen und gegebenenfalls Faktor XIII hergestellt werden, wobei Thrombin der Vormischung unmittelbar, bevor der Gewebeklebstoff auf die Wunde aufgebracht wird, zugesetzt wird. Alternativ kann die Vormischung aus Fibrinogen und aktiver Schmelzsubstanz und gegebenenfalls Faktor XIII vor der Anwendung von Thrombin auf die Wunde aufgetragen werden. Thrombin wandelt Fibrinogen in situ in Fibrin um, wodurch der Gerinnungsprozeß, der natürlicherweise bei der Wundheilung auftritt, reproduziert wird. Das Vorliegen der aktiven Schmelzsubstanz im Gewebeklebstoff kann dazu dienen, den Wundheilungsprozeß zu beschleunigen, wie es oben diskutiert wurde. Ein handelsübliches Produkt, das zum Einschluss der aktiven Schmelzsubstanz geeignet ist, ist Tisseel®, ein Zwei-Komponenten-Fibrin-Versiegelungsmittel, das von Immuno, AG, Wien, Österreich, hergestellt wird.
In einer Zahnpasta- oder Mundwasser-Formulierung oder in einer anderen Formulierung zum Aufbringen (bzw. zur Anwendung) auf Zähne oder Zahnwurzeln, kann die aktive Schmelzsubstanz entweder in gelöstem Zustand in einem Vehikel mit leicht saurem pH oder als Dispersion in einem Vehikel mit neutralem pH vorliegen. Es wird erwartet, dass eine Verwendung der aktiven Schmelzsubstanz eine Schutzschicht auf der Oberfläche der Zähne bilden kann.
Die oben beschriebenen Zusammensetzungen für eine topische Verabreichung sind zum Auftragen direkt auf Wunden am geeignetesten oder sie können zur Anwendung auf oder zur Einführung in eine bedeutende Öffnung (bedeutende Öffnungen) des Körpers geeignet sein, z. B. für die rektale, Harn-, vaginale, aurale, nasale oder orale Öffnung. Die Zusammensetzung kann in einfacher Weise direkt auf den zu behandelnden Teil, wie z. B. auf die Schleimhaut, aufgetragen werden oder kann durch einen zweckdienlichen Verabreichungsweg angewendet werden.
Zusammensetzungen, die sich in Verbindung mit einer topischen Anwendung als von großer Bedeutung erwiesen haben, sind die, die thixotrope Eigenschaften haben, d. h. die Viskosität der Zusammensetzung wird z. B. durch Schütteln oder Rühren beeinflusst, so dass die Viskosität der Zusammensetzung zur Zeit der Verabreichung verringert werden kann, und, wenn die Zusammensetzung aufgetragen wurde, die Viskosität so ansteigt, dass die Zusammensetzung an der Anwendungsstelle bleibt.

Zusammensetzungen zur oralen Verwendung oder zum Auftragen auf Schleimhaut oder Haut

Geeignete Zusammensetzungen zur Verwendung gemäß der Erfindung können auch in der Form von Suspensionen, Emulsionen oder Dispersionen dargereicht werden. Solche Zusammensetzungen enthalten die aktive Schmelzsubstanz im Gemisch mit einem Dispergiermittel oder Netzmittel, Suspendiermittel und/oder einem oder mehreren Konservierungsmitteln und anderen pharmazeutisch annehmbaren Trägern. Solche Zusammensetzungen können auch zur Verwendung bei der Abgabe der aktiven Schmelzsubstanz, z. B. an eine intakte oder beschädigte Schleimhaut, wie z. B. die orale, bukkale, nasale, rektale oder vaginale Schleimhaut, oder zur Verabreichung an intakte oder beschädigte Haut oder an Wunden, geeignet sein.
Geeignete Dispergiermittel oder Netzmittel sind z. B. natürlich vorkommende Phosphatide, z. B. Lecithin oder Sojalecithin; Kondensationsprodukte von Ethylenoxid mit z. B. einer Fettsäure, einem langkettigen aliphatischen Alkohol oder einem partiellen Ester, abgeleitet von Fettsäuren und einem Hexit oder einem Hexitanhydrid, z. B. Polyoxyethylenstearat, Polyoxyethylensorbitmonooleat, Polyoxyethylensorbitanmonooleat, usw.
Geeignete Suspendiermittel sind z. B. natürlich vorkommende Gummis, wie z. B. Gummi arabicum, Xanthangummi oder Tragacanthgummi; Cellulosen, wie z. B. Natriumcarboxymethylcellulose, mikrokristalline Cellulose (z. B. Avicel® RC 591, Methylcellulose); Alginate und Chitosane, wie z. B. Natriumalginat, usw.
Geeignete Beispiele von Konservierungsmitteln zur Verwendung in Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung sind dieselben wie die oben genannten.
Zusammensetzungen zur Verwendung gemäß der Erfindung können auch auf oralem Weg verabreicht werden. Geeignete orale Zusammensetzungen können in Form einer partikelförmigen Formulierung oder in Form einer festen, halbfesten oder flüssigen Dosierungsform vorliegen.
Zusammensetzungen zur oralen Verwendung umfassen feste Dosisformen, z. B. Pulver, Körnchen, Granulate, Tütchen, Tabletten, Kapseln, Brausetabletten, Kautabletten, Lutschtabletten, Tabletten mit unvermittelter Freisetzung und Tabletten mit modifizierter Freisetzung, wie auch Fluid- oder Flüssigkeitsformulierungen, wie z. B. Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Dispersionen und Gemische. Darüber hinaus kann die Zusammensetzung in Form von Pulvern, dispergierbaren Pulvern oder Granulaten, die zur Herstellung einer wässrigen Suspension durch Zusatz eines flüssigen Mediums, wie z. B. eines wässrigen Mediums, geeignet sind, vorliegen.
Bezüglich der festen Dosierungsformen für eine orale (oder topische) Verwendung enthält eine Zusammensetzung zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung normalerweise die aktive Schmelzsubstanz und irgendeine weitere aktive Substanz, gegebenenfalls im Gemisch mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern. Diese Träger können z. B. inerte Verdünnungsmittel oder Füllstoffe, z. B. Saccharose, Sorbit, Zucker, Mannit, mikrokristalline Cellulose, Stärken, einschließlich Kartoffelstärke, Calciumcarbonat, Natriumchlorid, Lactose, Calciumphosphat, Calciumsulfat oder Natriumphosphat; Granulierungs- und Trenn-Mittel, z. B. Cellulosederivate, einschließlich mikrokristalliner Cellulose, Stärken, einschließlich Kartoffelstärke, Croscarmellose-Natrium, Alginate oder Alginsäure und Chitosane; Bindemittel, wie z. B. Saccharose, Glucose, Sorbit, Gummi arabicum, Alginsäure, Natriumalginat, Gelatine, Stärke, vorgelatinierte Stärke, mikrokristalline Cellulose, Magnesium- Aluminium-Silicat, Natriumcarboxymethylcellulose, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Ethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylacetat oder Polyethylenglykol; und Chitosane; Gleitmittel, einschließlich Schmiermittel und Antiklebemittel, z. B. Magnesiumstearat, Zinkstearat, Stearinsäure, Siliciumdioxide, hydrierte pflanzliche Öle, oder Kalk sein.
Andere pharmazeutisch annehmbare Träger können Färbemittel, Aromamittel, Weichmacher, Feuchthaltemittel, Puffer, usw., sein.
In den Fällen, in denen die pharmazeutische Zusammensetzung in Form einer festen Dosierungsform in einer Dosierungseinheitsform (z. B. eine Tablette oder eine Kapsel) vorliegt, kann die Dosierungseinheitsform mit einem Überzug, wie einem oder mehreren der im Folgenden genannten Überzüge, versehen sein.
In solchen Fällen, in denen die Zusammensetzung in Form einer Tablette, Kapsel oder Mehreinheitenzusammensetzung vorliegt, kann die Zusammensetzung oder können die einzelnen Einheiten oder eine Tablette oder eine Kapsel, die die einzelnen Einheiten enthalten, überzogen sein, z. B. mit einem Zuckerüberzug, einem Filmüberzug (z. B. auf der Basis von Hydroxypropylmethylcellulose, Methylcellulose, Methylhydroxyethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Carboxymethylcellulose, Acrylatcopolymeren (Eudragit), Polyethylenglykolen und/oder Polyvinylpyrrolidon) oder mit einer darmlöslichen Beschichtung (z. B. auf der Basis von Methacrylsäurecopolymer (Eudragit), Celluloseacetatphthalat, Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, Hydroxypropylmethylcelluloseacetatsuccinat, Polyvinylacetatphthalat, Schellack und/oder Ethylcellulose). Darüber hinaus kann ein Zeitverzögerungsmaterial, wie z. B. Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, verwendet werden.

Rektale und/oder vaginale Zusammensetzungen

Zum Auftragen auf die rektale oder vaginale Schleimhaut umfassen geeignete Zusammensetzungen gemäß der Erfindung, Suppositorien (des Emulsions- oder Suspensionstyps), Klistiere und rektale Gelatinekapseln (Lösungen oder Suspensionen). Geeignete pharmazeutisch annehmbare Suppositoriumgrundlagen umfassen Kakaobutter, veresterte Fettsäuren, glycerinierte Gelatine und verschiedene wasserlösliche oder dispergierbare Basen, wie Polyethylenglykole und Polyoxyethylensorbitanfettsäureester. Es können auch verschiedene Zusatzstoffe, wie z. B. Enhancer oder oberflächenaktive Mittel, eingearbeitet sein.

Nasale Zusammensetzungen

Zur Anwendung auf die Nasenschleimhaut (wie auch auf die Mundschleimhaut) sind Sprays und Aerosole zur Inhalation geeignete erfindungsgemäße Zusammensetzungen. In einer typischen nasalen Zusammensetzung liegt die aktive Schmelzsubstanz in Form einer teilchenförmigen Formulierung, gegebenenfalls in einem geeigneten Vehikel dispergiert, vor. Die pharmazeutisch annehmbaren Vehikel und Träger und gegebenenfalls andere pharmazeutisch annehmbare Materialien, die in der Zusammensetzung vorliegen, z. B. Verdünnungsmittel, Enhancer, Aromamittel, Konservierungsmittel, usw., werden alle entsprechend der herkömmlichen pharmazeutischen Praxis in einer Art und Weise, die Fachleuten auf dem Gebiet der Formulierung von Arzneimitteln geläufig sind, ausgewählt.

Dosierungen von Schmelzmatrix, Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen.

In einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verwendung gemäß der Erfindung auf Haut oder Schleimhaut liegt eine aktive Schmelzsubstanz im Allgemeinen in einer Konzentration im Bereich von etwa 0,01 Gew.-% bis etwa 99,9 Gew.-% vor. Die angewendete Menge der Zusammensetzung wird normalerweise in einer Menge Gesamtprotein pro cm² Wunde/Haut/Gewebebereich resultieren, die zwischen etwa 0,01 mg/cm² und etwa 20 mg/cm², wie zwischen etwa 0,1 mg/cm² und etwa 15 mg/cm² liegt.
Die angewendete Menge der Zusammensetzung hängt von der Konzentration der aktiven Schmelzsubstanz in der Zusammensetzung und der Freisetzungsrate der aktiven Schmelzsubstanz aus der Zusammensetzung ab, liegt aber im Allgemeinen in einem Bereich, der höchstens etwa 15 bis 20 mg/cm² entspricht.
In den Fällen, in denen die aktive Schmelzsubstanz in Form einer flüssigen Zusammensetzung verabreicht wird, liegt die Zusammensetzung der aktiven Schmelzsubstanz in der Zusammensetzung in einem Bereich, der von etwa 0,1 bis etwa 50 mg/ml entspricht. Höhere Konzentrationen sind in einigen Fällen wünschenswert und können auch erhalten werden, z. B. eine Konzentration von mindestens etwa 100 mg/ml.
Wenn die Zusammensetzung auf die Mundhöhle angewendet wird, sind die folgenden Dosen relevant:
Experimentelle Verletzungsbereiche (bei Affen) in der Mundhöhle haben typischerweise eine Größe von 4 · 2 · 5-6 mm, was 50 ul oder von etwa 0,025 bis etwa 0,15 mg Gesamtprotein/mm² oder etwa 2,5 bis 15 mg/cm² entspricht. Üblicherweise werden bis zu 0,5, d. h. z. B. 0,4, 0,3, 0,2 oder 0,1 ml, einer Zusammensetzung, die eine Konzentration von etwa 1 bis 40 mg/ml, z. B. 5 bis 30 mg/ml, hat, angewendet.
Defektbereiche in der Mundhöhle von Menschen und infolge periodontaler Erkrankungen haben typischerweise eine Größe von etwa 5-10 · 2-4 · 5-10 mm, was etwa 200 ul und normalerweise höchstens etwa 0,5 bis 1 ml, z. B. etwa 0,2 bis 0,3 ml pro Zahn, entspricht, werden mit einer Zusammensetzung behandelt, die eine Konzentration von etwa 1 bis 40 mg Gesamtprotein pro ml hat, z. B. werden 5 bis 30 mg/ml aufgetragen. 0,2 bis 0,3 mg/ml entsprechen etwa 6 mg Protein pro 25 bis 100 mm² oder etwa 0,1 mg/mm², wenn nur die Wurzeloberfläche berechnet wird. Normalerweise wird ein überschüssiges Volumen aufgetragen um eine Bedeckung aller Oberflächen zu erlauben. Selbst eine Mehrfachschicht würde nur einen geringen Bruchteil der oben genannten Mengen erfordern.
Im Allgemeinen werden etwa 0,1 bis 0,5 ml, z. B. etwa 0,15 bis 0,3 ml oder etwa 0,25 bis 0,35 ml, einer Zusammensetzung, die die aktive Schmelzsubstanz umfasst, in Defektvolumina in Extraktionsalveoli (Löcher nach Zahnextraktion) aufgetragen. Die Konzentration der aktiven Schmelzsubstanz in der Zusammensetzung ist normalerweise etwa 1 bis 40 mg Gesamtprotein/ml, z. B. 5 bis 30 mg/ml. Wenn 0,3 bis 0,4 ml einer solchen Zusammensetzung für Weisheitszähne angewendet werden, entspricht dieses Volumen etwa 0,1 mg/cm² (Alveolus, errechnet als Zylinder mit einem Radius von 5 mm und einer Höhe von 20 mm).
Die Konzentration der aktiven Schmelzsubstanz in einer pharmazeutischen Zusammensetzung hängt von der spezifischen Schmelzsubstanz, ihrer Wirksamkeit, der Schwere der Krankheit, der vorgebeugt werden soll oder die behandelt werden soll, und dem Alter und dem Zustand des Patienten ab. Methoden, die zur Auswahl relevanter Konzentrationen der aktiven Schmelzsubstanz in der pharmazeutischen Zusammensetzung anwendbar sind, sind dem Fachmann auf diesem Gebiet wohlbekannt und können nach eingführten Richtlinien für eine gute klinische Praxis (GCP) oder nach den Investigational New Drug Exemption ("IND")- Vorschriften, wie sie z. B. in International Standard ISO/DIS 14155 Clinical Investigations of medical devices, 1994, und ICH (International Committee for Harmonisation): Harmonised tripartite guideline for good clinical practice, Brookwood Medical Publications, Ltd., Surrey, UK, 1996, beschrieben sind, durchgeführt werden. Ein Fachmann auf dem Gebiet wird durch Verwendung der in den Standardtextbüchern, Richtlinien und Vorschriften, wie sie oben beschrieben wurden, wie auch nach allgemeinem Wissen auf dem Gebiet, fähig sein, den genauen Dosierungsplan, der für eine aktive Schmelzsubstanz und/oder ausgewählter anderer aktive Substanzen durchzuführen ist, sowie die Dosierungsform lediglich unter Anwendung von Routineexperimentierverfahren auszuwählen.

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN

Die Erfindung wird anhand der beigefügten Zeichnungen näher beschrieben, wobei
Fig. 1 ein Diagramm ist, das DNA-Synthese in humanen PDL-Zellen, die mit EMD stimuliert wurden, oder in unstimulierten Zellen zeigt;
Fig. 2 ein Diagramm ist, das die TGF-β1-Produktion in humanen PDL-Zellen, die mit EMD stimuliert wurden, und in nichtstimulierten Zellen zeigt;
Fig. 3A eine Röntgenaufnahme ist, die eine postoperative Schädigung nach Entfernung eines Weisheitszahnes zeigt; und
Fig. 3B eine Röntgenaufnahme ist, die die Regeneration von periodontalem Ligament nach Behandlung mit EMD zeigt, wie es im Beispiel 12 unten beschrieben ist.

EXPERIMENTELLER ABSCHNITT

Materialien und Verfahren

Das Schmelzmatrixderivat EMDOGAIN® von BIORA AB, S-205 12 Malmö, Schweden, das 30 mg gefriergetrocknetes Schmelzmatrixprotein (im Folgenden als EMD abgekürzt) und 1 ml Trägerlösung (Propylenglykolalginat), die vor der Anwendung vermischt werden, ohne dass das Protein und der Träger getrennt getestet werden, enthält. Das Gewichtsverhältnis ist etwa 85/5/10 zwischen den Hauptprotein-Peaks bei 20, 14 beziehungsweise 5 kDa.
Hitzebehandeltes EMD ist EMD, das für 3 Stunden bei etwa 80ºC erhitzt wurde um Restproteasen zu inaktivieren.
Das 20 kDa-Protein Amelogenin und das Tyrosin-reiche Peptid Amelogenin (TRAP) mit 5 kDa wurden aus EMD isoliert, wobei HPLC-Gelpermeationschromatographie (TSK G-2000 SW, äquilibriert mit 30% Acetonitril in 0,9% NaCl) verwendet wurde, und eine Reinigung durch Reversed phase-Chromatographie (Pro-RPC, HR 5/10, Pharmacia-Upjohn, Schweden) unter Verwendung eines Acetonitrilgradienten erfolgte. Die getrennten Protein/Polypeptide wurden dann in verschiedenen Mengen zu der Trägerlösung von EMDOGAIN® gegeben, ohne dass sie getrennt getestet wurden.
Hyaluronsäure war HMT-0028 (MG 990.000) von Seikagaku Corporation, Tokyo, Japan.
Bakterien und Hefen waren alle in erster Linie solche, die von Patienten isoliert und durch metabolische und antigene Eigenschaften nach Standardverfahren klassifiziert worden waren. Die Spezies der Bakterien und der Hefe, die verwendet wurden, sind in der folgenden Tabelle aufgelistet.
Serumalbumin (Rind) und Collagen Typ I (Rind) wurden von Sigma, St. Louis, U.S.A., erhalten.
Die Agarplatten waren alle "Brain Hart Infusion Agar" von Difco, ergänzt mit humanen roten Blutzellen (100 ml pro Liter Agar).

BEISPIELE

Beispiel 1

Zellproliferation und TGF-β1-Produktion in PDL-Zellen, die mit EMDOGAIN® behandelt worden waren
Eine Stammlösung von EMD wurde hergestellt, indem eine Phiole (enthaltend 30 mg EMD) in 3 ml steriler, filtrierter 0,1% HAc gelöst wurde. 60 ul der EMD-Stammlösung wurden zu 6.000 ul Dulbecco's modifiziertem Eagle-Medium gegeben, das 10% fötales Kälberserum und 1% einer Penicillin-Streptomycin-Lösung enthielt. 300 ul des Gemisches wurden zu jeder Vertiefung von Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen (NUNC A/S. Dänemark, Kat. # 167008) gegeben. 1.000 humane periodontale Ligament (PDL)-Zellen (erhalten von gesunden humanen periodontalen Geweben von Personen, bei denen aus kieferplastischen Gründen Prämolar-Extraktionen vorgenommen worden waren, und im Wesentlichen kultiviert, wie es von Somerman et al., J Dental Res. 67, 1988, S. 66-70) beschrieben wird, kultiviert), wurden zu jeder Vertiefung gegeben und bei 37ºC, 5% CO&sub2;, für 5 Tage inkubiert.
PDL-Zellen, die als Kontrollen verwendet wurden, wurden in Dulbecco's modifiziertem Eagle-Medium im Wesentlichen, wie es oben beschrieben ist, aber in Abwesenheit von EMD, kultiviert.
Nach Inkubation wurden die Zellen einem Zellproliferations-Immunoassay unterzogen, der den Einbau von 5-Brom-2'-desoxyuridin (BrdU), entsprechend den Angaben des Herstellers (Boehringer Mannheim, Kat. # 1647 229) unterworfen. Bei diesem Verfahren wird BrdU anstelle von Thymidin in die DNA von wachsenden Zellen eingebaut. Der Einbau von BrdU wird durch einen ELISA-Assay nachgewiesen, und die Menge an BrdU, die in dem Assay gemessen wird, ist eine Angabe für die Rate der DNA-Synthese, und folglich die Rate der Zellproliferation der PDL-Zellen.
Die Resultate aus Fig. 1 zeigen, dass PDL-Zellen, kultiviert in Gegenwart von EMD, eine deutlich höhere Proliferationsrate aufweisen als PDL-Zellen, die in Abwesenheit von EMD kultiviert werden.
Zu 100 ul Zellüberstand aus der Mikrotiterplatte wurden 20 ul 1N HCl gegeben, worauf sich eine Inkubation für 10 Minuten bei Raumtemperatur anschloss. Das Inkubationsgemisch wurde mit 20 ul 1N NaOH/0,5 M HEPES neutralisiert. 100 ul dieses Gemisches wurden zu 400 ul eines Verdünnungspuffers gegeben. 200 ul des Verdünnungspuffers wurden E- LISA unterworfen, wobei der QuantikinesTM-Kit (Kat. # DB 100), erhältlich von R & D Systems, GB, nach den Anweisungen des Herstellers verwendet wurde.
Die in Fig. 2 dargestellten Resultate zeigen eine ausgesprochene Erhöhung der TGF-β1-Produktion in PDL-Zellen, die mit EMD inkubiert worden waren, im Vergleich zu PDL-Zellen, die nicht mit EMD inkubiert worden waren.

Beispiel 2

Untersuchung eines verbesserten Effekts von EMDOGAIN® auf die Wundheilung in weichem Gewebe nach periodontaler Operation.

Der Zweck dieses Beispiels besteht darin, den Einfluss der Schmelzmatrixderivate und/oder Schmelzmatrixproteine auf eine verbesserte Heilung einer Wunde in weichem Gewebe nach periodontaler Operation zu zeigen.
Experimentelle Defekte im marginalen Peridontium von mehr als 50 Macaca- Affen-Zähnen wurden geschaffen, indem das dentale Cementum, die periodontale Membran und der marginale alveolare Knochen mit einem Zahnbohrer bis auf eine cervico-apicale Entfernung von etwa 5 mm entfernt wurden. Nichts (Kontrolle) oder Schmelzmatrixderivat (erhalten von EMDOGAIN®, entweder als Nicht-rekonstituiertes lyophilisiertes Pulver oder als rekonstituierte Zusammensetzung) wurde dann auf die experimentellen Defekte aufgetragen. Die Konzentration der Proteine in der rekonstituierten Zusammensetzung war etwa 5 bis 30 mg/ml, und das angewendete Volumen lag im Bereich von etwa 0,1 bis etwa 0,2 ml pro Defekt.
Die Wundheilung wurde während der folgenden 8 Wochen visuell beurteilt. Bei Defekten, bei denen EMDOGAIN® aufgetragen wurde, gab es nach 2 Wochen eine gute Heilung (keine Rötung oder Schwellung) und vernachlässigbare Plaque, als die Fäden entfernt wurden, eine gute Heilung und nach 5 Wochen wenig Gingivitis, und nach 8 Wochen eine Heilung ohne Komplikationen, als die Experimente beendet waren. Dagegen zeigten die Kontrolldefekte nach 2 Wochen Entzündungen mit Retraktionen und reichlich Plaque, mit schweren Retraktionen und Gingivitis sowohl nach 5 Wochen als auch nach 8 Wochen.

Beispiel 3

Untersuchung der wundheilenden Wirkung von Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen nach periodontaler Operation

Der Zweck dieses Beispiels besteht darin, den Einfluss von Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen auf eine schnelle Wundheilung bei Patienten nach periodontaler Operation zu zeigen.
Fünfundfünfzig (55) Patienten, die eine periodontale Operation benötigten, wurden in zwei Gruppen eingeteilt, von denen eine eine herkömmliche Operation nach der modifizierten Widman-Wundlappen-Technik erhielt (20 Patienten), und eine andere, die dieselbe Technik plus Anwendung von EMDOGAIN® erhielt (35 Patienten) (die Konzentration war 30 mg Protein/ml und etwa 0,3 ml wurde pro Zahn aufgetragen). Keiner der Patienten erhielt zur Zeit der Operation Antibiotika, aber alle waren angewiesen, täglich eine aseptische Mundspülung (Chlorhexidin) vorzunehmen.
Es wurde eine aktive Befragung der Patienten zur Zeit der Entfernung der Fäden (1 bis 3 Wochen nach Operation) durchgeführt. Während 3 (15%) der Kontrollpatienten Nachoperations-Events hatten, die Antibiotika erforderten, benötigte nur einer (3%) der mit EMDO- GAIN® behandelten Patienten eine solche Behandlung.

Beispiel 4

Untersuchung des Wundheilungseffektes von Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen nach Zahnextraktion

Der Zweck dieses Beispiels besteht darin, den Einfluss von Schmelzproteinen/Schmelzmatrixderivaten auf die Wundheilung nach Extraktionen des dritten Molars zu zeigen.
Patienten mit einem Alter von 30 Jahren oder älter, mit symmetrischen impaktierten oder halbimpaktierten dritten Unterkieferbackenzähnen (bzw. dritten Molaren), die entfernt werden mussten, hatten einen dritten Backenzahn, der nach dem klassischen Verfahren, das Hochheben eines vertikalen Lappens unter Durchführung der notwendigen Osteoktomie und des notwendigen Schnittes, extrahiert wurde, während der zweite extrahiert wurde und die Alveole vor dem Nähen mit EMDOGAIN® gefüllt wurde. Alle Patienten erhielten Antibiotika (3 g Amoxicillin oder 1 g Erythromycin) 1 bis 2 Stunden vor der Operation, und ihnen wurde nach der Operation Ibuprofen (600 mg · 3) verabreicht. Sie wurden dann angewiesen, mit Chlorhexidin (0 bis 1%, 10 ml · 2) über 4 Wochen zu spülen.
Nach 2 Wochen wurden die Fäden entfernt. Die Heilung von EMDOGAIN®- und Kontrollstellen wurde sowohl vom Patienten als auch vom Zahnarzt beurteilt. 9 Patienten hatten kontralaterale Extraktionen mit/ohne EMDOGAIN®. Ein Patient hatte eine leichte Reizung von den Fäden an beiden Stellen, während ein weiterer Patient schwere Schmerzen nur an der Kontrollstelle hatte, aber keine Probleme mit der mit EMDOGAIN® behandelten Stelle hatte. In einem zweiten Mittelpunkt standen 3 von 6 Patienten, die nur an der Kontrollstelle Schmerzen hatten. Schließlich hatte in einer dritten Gruppe ein Patient ein ernstes Event, Alveolitis, die an der Kontrollstelle eines Patienten diagnostiziert wurde. Die mit EMDOGAIN® behandelte Stelle heilte ohne Probleme. Ein anderer Patient hatte eine leichte Reizung von Fäden an beiden Extraktionsstellen, allerdings war nur die Kontrollstelle entzündet und schmerzte und erforderte wiederholte Ausspülungen mit Salzlösung und die Einnahme von Schmerzmitteln.
Diese klinischen Resultate zeigen, dass die Anwendung von EMDOGAIN® in der Extraktionsalveole nach der Extraktion eines Weisheitszahnes die Heilung verbessern kann und die sonst häufigen schmerzhaften Schwellungen reduzieren kann.

Beispiel 5

Heilung von traumatischen Wunden in der Nachbarschaft von Zähnen und Nerven Fallbeschreibung

Eine 39 Jahre alte, weibliche Patientin litt an einer schweren Pericoronitis um ihren unteren linken Weisheitszahn (38). In der staatlichen Zahnklinik wurde der Zahn teilweise entfernt, wobei die apikale Hälfte des Zahns nach iatrogener Wurzelfraktur im Kiefer zurückblieb. Unter Schmerzen wurde die Patientin an einen Spezialisten der Kieferchirurgie verwiesen, der am nächsten Tag das Wurzelfragment chirurgisch entfernte.
Zwei Tage nach der Operation ging die Patientin zur Kontrolle zu ihrem normalen Zahnarzt. Sie hatte eine Schwellung an der linken Seite und zeigte eine andauernde und vollständige Blockierung des linken Unterkiefernervs. Eine klinische Untersuchung und Röntgenaufnahmen zeigten, dass während der Operation eine schwere Schädigung durch Bohren am Kieferknochen, dem apikalen Drittel der distalen Wurzel von Zahn 37 und am Unterkiefernervenkanal erfolgt war (siehe Röntgenaufnahme, Fig. 1A). Eine Untersuchung der Taschentiefe distal zu Zahn 37 mit einer Sonde ergab 25 mm von der Spitze der Zahnkrone aus, die hinter dem Apex der distalen Wurzel war.
In einem Versuch, die Knochen- und Nervenheilung und die Regeneration des verlorengegangenen periodontalen Ligaments an Zahn 37 zu induzieren, wurde die Operationswunde geöffnet und sorgfältig gereinigt. Nach Débridement mit Salzlösung wurden der freigelegte Knochen, die distale Wurzeloberfläche von 37 und der Unterkiefernerv mit EMDOGAIN® (30 mg/ml, im Überschuss aufgetragen; ca. 1 ml) bedeckt, und die Wunde wurde mit drei Fäden zusammengenäht. Sie wurde angewiesen, ihren Mund in den nächsten 5 Tagen zweimal täglich mit Chlorhexidin-Lösung (Corsodyl®) zu spülen, und es wurde eine fünftägige prophylaktische Behandlung mit Penicillin (Ampicillin, 660 mg · 4) begonnen.
Nach zehn Tagen kam die Patientin zur Kontrolle und zur Entfernung der Fäden. Zu dieser Zeit war die Schwellung vorbei, und die Heilung des weichen Gewebes war sehr gut. Allerdings bestand die vollständige Anästhesie des Unterkiefernervens weiter, und die Patientin wurde darüber informiert, dass die Prognose für einen unterbrochenen Nerv bestenfalls ungewiss ist. Zu diesem Zeitpunkt machte die Anästhesie es unmöglich, die Lebensfähigkeit von Zahn 37 zu untersuchen. Normalerweise führt eine Wurzelbeschädigung wie der hier vorliegenden zu einer Nekrose der Pulpa und zu einer Ankylose des Zahns. Um diese Komplikationen zu verhindern, ist eine endodontische Behandlung indiziert. Um allerdings zu sehen, ob die experimentelle Behandlung eine Heilung des periodontalen Ligaments fördern könnte, war die Patientin damit einverstanden, den Zahn unbehandelt zu lassen. Die Patientin erhielt einen Plan für monatliche Kontrollen.
Zwei Monate nach der obigen Kontrolle hatte die Patientin in ihrer linken Oberlippe eine Überempfindlichkeit, ein Zeichen für eine Nervenheilung. Das weiche Gewebe im Bereich 37-38 war ohne Narbenbildung völlig geheilt. Ein Röntgenbild zeigte die Bildung von neuem Knochen in der Extraktionsalveole. Zahn 37 und das umgebende Gewebe litten noch an Anästhesie.
Vier Monate nach Behandlung war die Anästhesie verschwunden, und der untersuchte Zahn 37 war vital, aber überempfindlich, er zeigte Temperaturempfindlichkeit und Empfindlichkeit bei Elektrizitätstests. Das Röntgenbild zeigte, dass die Knochenfüllung in der Extraktionsalveole deutlich war, und es gab Anzeichen für eine periodontale Regeneration an der distalen Wurzel von Zahn 37.
Fünf Monate nach dem Behandlungsbeginn mit EMDOGAIN® war die untersuchte Vitalität von Zahn 37 normal. Zu dieser Zeit war auf dem Röntgenbild eine vollständige Regeneration eines funktionalen periodontalen Ligaments deutlich (Fig. 1B), und ein neu gebildeter alveolarer Knochen mit normalem Aussehen hatte die Knochendefekte und die Extraktionsalveole ausgefüllt. Es gab keine Anzeichen für Ankylose.
Die Taschenuntersuchungstiefe distal von Zahn 37 mit einer Sonde war jetzt nur 10 mm, was etwa 1 mm unter der Zementschmelzverbindung ist. Nach dieser Kontrolle wurde die Patientin als vollständig geheilt entlassen und für normale Recalls in Ein-Jahres-Intervallen eingeplant.

Kommentare:

Eine vollständige und schnelle Heilung von traumatischen Wunden in der Nachbarschaft von Zähnen und Nerven nach einer chirurgischen Entfernung von Weisheitszähnen sind selten. Üblicherweise führen Komplikationen, die so schwer wie die oben beschriebenen sind, zu einer vollständigen Entfernung des beschädigten Zahnes oder zumindest zu einer endodontischen Entfernung der Zahnpulpa und zur Wurzelfüllung, gefolgt von einer Knochenheilung mit Ankylose. Ein unterbrochener Nerv braucht normalerweise 8 bis 12 Monate zur Heilung, wenn er überhaupt heilt, und oft bestehen Regionen mit Parästhesie über einige Jahre. Die schnelle und gute Qualität der oben beschriebenen Heilung ist sehr ungewöhnlich und sollte als Zeichen für das Wundheilungsvermögen von EMDOGAIN® angesehen werden.
A: Patient zwei Tage nach Entfernung von Zahn 38. Beachte den großen Defekt distal zu Zahn 37 und die Involvierung des Unterkieferkanals. Während der Operation wurde auch der alveoläre Knochen distobukkal von Zahn 37 entfernt.
B: Patient fünf Monate nach der Operation. Beachte die Anzeichen für ein vollständiges funktionales periodontales Ligament (Lamina dura) beim Effekt im distalen Wurzelteil von Zahn 37. Es gibt keine Anzeichen für Ankylose. Der Umriss des Unterkieferkanals kann jetzt gesehen werden, und die Extraktionsalveole ist vollständig mit Knochen gefüllt. Beachte auch die Bildung von neuem distobukkalen alveolaren Knochen um Zahn 37.

Beispiel 6

Untersuchung der Wirkung von Schmelzmatrixderivaten und Schmelzmatrixproteinen auf die Heilung von Ulcus cruris (Venenulcus)

Patient 1

Der Patient war männlich, 1926 geboren und hatte eine Krankheitsgeschichte mit wiederholter Thrombose mit schlimmem postthrombotischen Syndrom und wiederkehrenden Venengeschwüren. Er wurde systemisch mit Coumarinderivaten als Antikoagulans behandelt, und die Geschwüre wurden lokal mit Crupodex (Dextranmonomer), BIOGAL und 3%iger Borsäurelösung behandelt.
Zu Beginn der Behandlung mit EMDOGAIN® hatte er ein Venengeschwür mit einer ovalen Größe von 5 · 4 cm und einer Tiefe von 0,5 mm, das in der Granulationsstufe mit sehr schlimmer Epithelisierung war.
Die Wunde wurde mit 3% H&sub2;O&sub2; desinfiziert, und 500 ul EMDOGAIN® wurden tropfenweise aufgetragen und mit einem sterilen Stäbchen gleichmäßig verteilt. Das EMDOGAIN® wurde für 10 Minuten an der Luft gelassen, und dann wurde die Wunde mit Inadine (Johnson & Johnson) Rayon-Verband, der mit 10% Povidon-Iod-Salbe imprägniert war, bedeckt.
Nach 5 Tagen hatte eine Epithelisierung im proximalen Teil des Ulcus stattgefunden, und der Ulcus war auf 1,8 · 2,2 cm zurückgegangen, und es gab keine Nebenreaktion (Entzündung). Es wurde kein EMDOGAIN® aufgetragen. Nach 12 Tagen hatte eine Epithelisierung im proximalen Teil und eine neue Epithelisierung im lateralen Teil in einem Bereich von etwa 2 · 2 cm stattgefunden. Fast die Hälfte des Ulcus war geheilt. Es wurden 400 ul EMDOGAIN® aufgetragen.
Nach 19 Tagen hatte eine weitere Epithelisierung in den proximalen und lateralen Teilen des Ulcus stattgefunden, allerdings keine im distalen Teil, wo der Ulcus ziemlich tief war (etwa 1 mm). Mehr als die Hälfte des Ulcus war geheilt. Es wurden 300 ul EMDOGAIN® aufgetragen. Ab dem Beginn der Behandlung mit EMDOGAIN® fühlte der Patient keine Schmerzen im Ulcus, dagegen hatte er vor der Behandlung Schmerzen. EMDOGAIN® wurde dann einmal pro Woche bis zum Tag 40 (200 ul) aufgetragen, und das Geschwür (beziehungsweise der Ulcus) wurde nach 47 Tagen als vollständig geheilt angesehen.

Patient 2

Der Patient war weiblich, war 1949 geboren und hatte Varizen, chronische Veneninsuffizienz und wiederkehrende Venengeschwüre (beziehungsweise Ulcus). Sie hatte mehrere Allergien gegen Pharmazeutika (Arzneimittel; Medikamente), wie auch ein Krampfaderekzem. Sie war vorher lokal mit Otosporin-Tropfen (Polymyxin B-Sulphat + Neomycinsulphat + Hydrocortison) behandelt worden und hatte eine Cortison-Kompresse.
Bei Beginn der Behandlung mit EMDOGAIN® war ihr Venengeschwür 1 cm im Durchmesser und 2 mm in der Tiefe. Es wurden 300 ul EMDOGAIN® angewendet.
Nach 5 Tagen war die Epithelisierung 2 mm um die Wunde (im Umfang), und es gab keine Nebenreaktion (Entzündung). Es wurde kein EMDOGAIN® aufgetragen. Nach 12 Tagen hatte sich die Größe des Geschwürs auf etwa 2 mm im Durchmesser verringert, es wurden 100 ul EMDOGAIN® aufgetragen.
Nach 19 Tagen hatte das Geschwür noch einen Durchmesser von etwa 2 mm, allerdings war der Boden schön granuliert, und das Geschwür war nicht so tief (etwa 0,2 mm). Es wurden 100 ul EMDOGAIN® aufgetragen.
Die Patientin hatte am anderen Bein einen weiteren Ulcus mit etwa 0,3 · 1 cm. 200 ul EMDOGAIN® wurden aufgetragen.
Nach 7 Tagen lag eine neue Epithelisierung und eine schöne Granulierung am Boden vor, und die Größe hatte sich auf etwa 0,5 · 0,2 cm verkleinert.
100 ul EMDOGAIN® wurde dann einmal die Woche auf jedes Geschwür bis zum Tag 40 aufgetragen; nach 47 Tagen wurden die Geschwüre als vollständig geheilt angesehen. Es wurden keine allergischen Reaktionen auf EMDOGAIN® beobachtet.
Es hatte sich ein weiterer Ulcus am selben Bein mit einer Größe von etwa 0,5 · 0,3 cm gebildet, auf den 100 ul EMDOGAIN® aufgetragen wurden.

Patient 3

Der Patient war weiblich, 1929 geboren und hatte nach Wundrose eine Thrombose der tiefen Venen; zu Beginn der Behandlung mit EMDOGAIN® hatte sie ein sehr großes Ulcus cruris mit einer Größe von etwa 15 · 19 cm, das sich im Progressionsstadium in Richtung des Rumpfes befand, wobei das Ulcus nach verschiedenen Behandlungen als fast hoffnungslos angesehen wurde. 700 ul EMDOGAIN® wurden in einem Bereich etwa 3 cm ab der oberen Grenze aufgetragen.
Nach 7 Tagen war keine Epithelisierung vorhanden, allerdings war der behandelte Bereich transparenter (strukturartiger) mit kleinen verstreuten Granulierungsbereichen, und in diesem Bereich waren keine Schmerzen und keine Anzeichen einer Progression. Auf denselben Bereich wurden 700 ul EMDOGAIN® aufgetragen.
Nach 4 Wochen entwickelte die Patientin eine Infektion, vermutlich durch Pseudomonas verursacht, im distalen Teil des Ulcus, der nicht mit EMDOGAIN® behandelt worden war. Es wurden 700 ul EMDOGAIN® aufgetragen. Nach 7 Tagen war die Infektion verschwunden.

Patient 4

Die Patientin war weiblich, 1947 geboren und hatte Varizen mit oberflächlicher Thrombophlebitis nach Wundrose, und zum Zeitpunkt des Beginns der Behandlung mit EMDOGAIN® hatte sie ein Ulcus cruris mit einer Größe von etwa 2 · 0,8 cm mit einem sauberen, aber nicht granulierenden Boden. Es wurden 300 ul EMDOGAIN® aufgetragen.
Nach 7 Tagen hatte sich die Größe des Ulcus auf etwa 0,7 · 0,3 cm verkleinert, und es lag eine Epithelisierung am gesamten Rand und eine Granulierung am Boden vor. Es wurden 200 ul EMDOGAIN® aufgetragen, anschließend wurden 1 · 100 ul EMDOGAIN® 1 · pro Woche über 5 Wochen aufgetragen. Nach 5 Wochen wurde das Ulcus als vollständig geheilt angesehen.

Beispiel 14

EMDOGAIN® als Hilfsmittel für die nicht-chirurgische periodontale Behandlung an flachen Oberflächenstellen

Ziel

Ziel der Untersuchung war es, zu beurteilen, ob eine Anwendung von EMDOGAIN® das Heilungsresultat einer nicht-chirurgischen periodontalen Behandlung verbessern kann. Das spezielle Ziel dieser Untersuchung bestand darin, die Wirkung an flachen Oberflächenstellen zu beurteilen.

Beispiel 7

EMDOGAIN® als Hilfsmittel für eine nicht-chirurgische periodontale Behandlung an flachen Oberflächenstellen

Ziel

Das Ziel der Untersuchung war es, zu beurteilen, ob eine Anwendung von EMDOGAIN® das Heilungsresultat einer nicht-chirurgischen periodontalen Behandlung verbessern kann. Das spezifische Ziel dieser Untersuchung besteht darin, die Wirkung an flachen Oberflächenstellen zu beurteilen.

Untersuchungsplan

Die Untersuchung wurde als Langzeittest mit einer Dauer von 6 Monaten als intra-individueller Test durchgeführt. Die Untersuchung hat ein Konzept mit doppeltem Blindwert, mit geteiltem Mund, ist Placebo-kontrolliert und statistisch.

Subjekte

14 Patienten von der Clinic of Periodontics, Department of Periodontology, Universität Göteborg, zur Behandlung einer moderat fortgeschrittenen periodontalen Krankheit.

Kriterien für die Aufnahme in den Test

-- Mindestens 3 flache Zahnoberflächenstellen in jedem von 2 kontralateralen Quadranten bei einer Sondenuntersuchungs-Taschentiefe 5 mm und mit mindestens einem Stellenpaar mit einer Sondenuntersuchungstiefe 6 mm;
-- Die ausgewählten Zähne müssen eine vitale Pulpa besitzen, was durch elektrische oder thermische Stimulierung bestimmt wurde, oder wenn sie einer Wurzelkanalbehandlung unterzogen wurden, asymptomatisch und ohne Besonderheiten sein.

Behandlung

Beurteilungen

Die Basisuntersuchung, die Nachuntersuchungen nach 1, 2, 3, 8 und 24 Wochen umfassten die Variablen:
1. Zahnpflege-Status - Vorliegen/Abwesenheit von Plaque
2. Gingivaler Zustand - (Gingivaler Index; Löe 1967)
3. Taschentiefe bei Untersuchung mit einer Sonde
4. Befestigungslevel bei Untersuchung mit einer Sonde
5. Bluten bei Untersuchung mit einer Sonde - Vorliegen/Abwesenheit (15 Sekunden)
6. Zahnüberempfindlichkeit - nach Luftstrahl-Stimulus (ja/nein)
7. Grad der Unbehaglichkeit - aufgezeichnet bei Nachuntersuchungen nach 1, 2 und 3 Wochen, wobei eine 10 cm < < -Analogskala verwendet wurde (VAS).

Schlussfolgerung

Die Patienten hatten weniger postoperative Probleme, eine geringere Blutung, weniger Plaque und einen verbesserten gingivalen Index. Diese Resultate bestätigen die wundheilende Wirkung von EMDOGAIN®.

Schlussfolgerung

Die Patienten hatten weniger postoperative Probleme, geringere Blutung, weniger Plaque und einen verbesserten gingivalen Index. Diese Resultate bestätigen die wundheilende Wirkung von EMDOGAIN®.

Beispiel 8

Wundheilungs-Pilotuntersuchungen bei Schweinen

Einführung

Ziel

Das Ziel dieser Pilotuntersuchung besteht darin, den Heilungsprozess von "Splitthickness"-Wunden bei Schweinen zu beurteilen und die Wirkung von EMD auf diese Wunden zu beurteilen.

Grund für die Auswahl der Tierspezies

Das Schwein wird als Testmodell gewählt, da diese Spezies sich als gutes Modell zur Bestimmung der Wundheilung bei Menschen erwiesen hat.

Materialien und Methoden

Tiere

Das Experiment wird bei 4 weiblichen SPF-Schweinen (Artkreuzung von dänischen Land-, Yorkshire- und Duroc-Schweinen). Zu Beginn des Akklimatisierungszeitraums wird das Körpergewicht der Tiere etwa 35 kg sein.

Streu

Die Streu wird Weichholz-Sägespäne "LIGNOCEL H 3/4" von Hahn & Co, D- 24796 Bredenbeck-Kronsburg, sein. Es werden regelmäßige Analysen auf relevante mögliche Kontaminanten durchgeführt.

Ernährung

Es wird eine im Handel verfügbare Schweinenahrung "Altromin 9033" von Chr. Petersen A/S. DK-4100 Ringsted, geboten (etwa 800 g zweimal täglich). Es werden regelmäßig Analysen der Hauptnährstoffkomponenten und relevanter möglicher Kontaminanten durchgeführt.

Trinkwasser

Zweimal täglich wird den Tieren Trinkwasser heimischer Qualität angeboten. Analysen auf relevante mögliche Kontaminanten werden regelmäßig durchgeführt.

Verletzung

Die Wunden werden am Tag 1 angelegt. Die Tiere werden mit Stresnil® Vet. Janssen, Belgien (40 mg Azaperon/ml, 1 ml/10 kg) und Atropin DAK, Dänemark, (1 mg Atropin/ml, 0,5 ml/10 kg), verabreicht als einzelne intramuskuläre Injektion mit anschließender i.v.- Injektion von Hypnodil®, Janssen, Belgien (50 mg Metomidat/ml, etwa 2 ml) anästhesiert.
Ein dorso-lateraler Bereich an jeder Seite des Rückens des Tiers wird rasiert, mit Seife und Wasser gewaschen, mit 70% Ethanol desinfiziert, das mit steriler Salzlösung abgewaschen wird, und schließlich mit steriler Gaze getrocknet.
Acht "Splitthickness"-Wunden (Spaltwunden) (25 · 25 · 0,4 mm) werden an dem präparierten Bereich, 4 an jeder Seite des Rückgrats, unter Verwendung eines ACCU- Dermatoms (GA 630, Aesculap®) angelegt. Die Wunden werden mit 1 bis 4 numeriert, und zwar 1 (am weitesten kranial) bis 4 (am weitesten kaudal beziehungsweise schwanzwärts) an der linken Seite des Tiers, und 5 (am stärksten kranial) bis 8 (am stärksten kaudal) an der rechten Seite des Tiers.
Geronnenes Blut wird mit steriler Gaze entfernt.
Unmittelbar vor der Operation, etwa 8 Stunden nach Ende der Operation und, wann immer es danach notwendig ist, wird den Tieren eine intramuskuläre Injektion von Anorfin® A/S GEA, Dänemark (0,3 mg Buprenorphin/ml, 0,04 ml/kg) verabreicht.

Dosierung

Nach der Verletzung werden die Wunden wie folgt behandelt:
A = Kontrolle
B = EMD
Etwa 15 Minuten vor einer Dosierung wird die EMD-Formulierung nach Instruktionen, die vom Hersteller geliefert werden, hergestellt. Die EMD-Formulierung wird innerhalb von 2 Stunden nach Herstellung verwendet. Für die Wunden der Behandlung B wird EMD als dünne Schicht auf die Wundoberfläche aufgetragen. Pro 4 Wunden wird eine Phiole EMD verwendet.

Wundverband

Die Wunden werden mit Tegaderm® verbunden. Die Verbände werden mit einer Gaze-Bandage bedeckt, die mit Fixomull® fixiert wird. Die Verbände, die Gaze und das Fixomull® werden durch einen netzartigen Bodystocking, Bend-a-rete® (Tesval, Italien), festgehalten. Die Verbände werden täglich betrachtet.
Die Verbände werden am Tag 2 (alle Tiere) und 3 (Tier Nr. 3 und 4) gewechselt.
Vor jedem Wechsel werden die Tiere durch eine intramuskuläre Injektion in den Hals (1,0 ml/10 kg Körpergewicht) mit einem Gemisch aus Zoletil 50® Vet., Virbac, Frankreich (125 mg Tiletamin und 125 mg Zolazepam in 5 ml Lösungsmittel, 5 ml), Rompun® Vet., Bayer, Deutschland (20 mg Xylazin/ml, 6,5 ml) und Methadon® DAK, Nycomed DAK, Dänemark (10 mg Methadon/ml, 2,5 ml) anästhesiert.

Beobachtung der Wunden

Jede Wunde wird am Tag 2 (alle Tiere), 3 (alle Tiere) und 4 (Tier Nr. 3 und 4) betrachtet. Der Grad der Exsudation und Entzündung wird beurteilt. Das Aussehen der transplantierten Epidermis wird detailliert beschrieben.

Klinische Symptome

Alle Anzeichen von Krankheit oder von Verhaltensänderungen werden täglich aufgezeichnet. Jede Abweichung wird bezüglich der Zeit des Einsetzens, der Dauer und Intensität aufgezeichnet.

Körpergewicht

Die Tiere werden am Tag der Ankunft, am Tag der Verletzung und am Ende der Untersuchung gewogen.

Endbeobachtungen

Am Tag 3 (etwa 56 Stunden nach Verletzung) werden Tier Nr. 1 und Tier Nr. 2 durch einen Schnitt an der subclavicularen Vene und Arterie nach Betäubung mit einer Bolzenpistole getötet.
Am Tag 4 (etwa 72 Stunden nach Verletzung) werden Tier Nr. 3 und 4 durch einen Schnitt an der subclavicularen Vene und Arterie nach Betäubung mit einer Bolzenpistole getötet.

Entnahme von Gewebeproben

Jede Wunde wird als Block, der von Skelettmuskelgewebe getrennt ist, freigeschnitten. Wenn ein Hängenbleiben an dem darunterliegenden Skelettmuskel auftritt, wird ein Teil des Muskels in das Material zur Fixierung eingeschlossen. Jeder Block wird in Phosphatgepuffertem, neutralem, 4%igem Formaldehyd fixiert.

Histologische Präparation

Nach Fixierung werden vier typische Proben aus allen Wunden in Paraffin eingebettet, auf eine nominale Dicke von 5 um geschnitten und mit Haematoxylin und Eosin gefärbt. Nach dem Färben werden die Objektträger unter Verwendung eines Rasters unter dem Lichtmikroskop betrachtet. Dies ermöglicht die Messung der Gesamtlänge der Wunde und die Länge der epithelialisierten Oberfläche. Dieses Verhältnis wird als prozentualer Teil der Wunde, die durch epitheliale Zellen pro Objektträger bedeckt ist, ausgedrückt. Es werden die Mittelwerte für jede Wunde genommen, woraus die Gruppenmittelwerte errechnet werden.

Statistik

Die Daten werden verarbeitet, wodurch eine Gruppe von Mittelwerten und Standardabweichungen, wenn dies geeignet ist, erhalten werden. Es werden auch mögliche Ausreisser identifiziert. Danach wird jede kontinuierliche Variable mit dem Bartlett-Test auf Varianzhomogenität untersucht. Wenn die Varianz homogen ist, wird für die Variable eine Varianzanalyse durchgeführt. Wenn signifikante Differenzen nachgewiesen werden, werden mit einem Dunnett-Test mögliche Zwischengruppendifferenzen untersucht. Wenn die Varianz heterogen ist, wird jede Variable durch das Shapiro-Wilk-Verfahren auf Normalität untersucht. Im Fall einer Normalverteilung werden mögliche Zwischengruppendifferenzen mit dem Students-t-Test identifiziert, andernfalls werden die möglichen Zwischengruppendifferenzen durch den Kruskal-Wallis-Test bestimmt. Wenn signifikante Zwischengruppendifferenzen nachgewiesen werden, wird die nachfolgende Identifizierung der Gruppen mit dem Wilcoxon Rank-Surn-Test durchgeführt.
Die statistischen Analysen werden nach SAS®-Verfahren (Version 6.12), beschrieben in "SAS/STAT® User's Guide, Version 6, 4. Ausgabe, Bd. 1 + 2", 1989, SAS Institute Inc., Cary, North Carolina 27513, USA, durchgeführt.

SEQUENZPROTOKOLL

< 110> Biora AB
< 120> Matrixprotein-Zusammensetzung zur Wundheilung
< 130> 20542PC1
< 160> 2
< 170> Fast-SEQ für Windows, Version 3.0
< 210> 1
< 211> 407
< 212> PRT
< 213> unbekannt
< 400> 1
< 210> 2
< 211> 324
< 212> PRT
< 213> Unbekannt
< 400> 2

Claims

1. Verwendung einer Zubereitung einer aktiven Schmelzsubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen oder kosmetischen Zusammensetzung zur Heilung einer Wunde in Haut oder einer Schleimhaut.

2. Verwendung nach Anspruch 1 zur Verbesserung der Heilung einer Wunde in Haut oder einer Schleimhaut.

3. Verwendung einer Zubereitung einer aktiven Schmelzsubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen oder kosmetischen Zusammensetzung zur Regeneration oder zur Wiederherstellung von Haut oder Schleimhaut.

4. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Wunde in einer Schleimhaut in der Mundhöhle vorhanden ist.

5. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Wunde eine körperliche Verletzung oder ein Trauma ist, die/das mit Kieferchirurgie einschließlich paradontaler Chirurgie, Zahnextraktion(en), endodontischer Behandlung, Einsetzen von Zahnimplantaten, Einsetzen und Verwendung von Zahnprothesen in Zusammenhang steht.

6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Wunde aus der Gruppe bestehend aus aseptischen Wunden, 30 Quetschwunden, Schnittwunden, Risswunden, Nicht-Penetrationswunden, offenen Wunden, Penetrationswunden, Perforationswunden, Punktionswunden, septischen Wunden, Infarzierungen und subkutanen Wunden ausgewählt ist.

7. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Wunde aus der Gruppe bestehend aus ischämischen Geschwüren, Druckgeschwüren, Fisteln, schweren Bissen, thermischen Brandwunden und spenderseitigen Wunden ausgewählt ist.

8. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die Wunde eine Aphtenwunde, eine traumatische Wunde oder eine mit Herpes in Zusammenhang stehende Wunde ist.

9. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die aktive Schmelzsubstanz aus Schmelzmatrix, Schmelzmatrix- Derivaten und/oder Schmelzmatrix-Proteinen ausgewählt ist.

10. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die aktive Schmelzsubstanz aus der Gruppe bestehend aus Enamelinen, Amelogeninen, Nicht-Amelogeninen, Prolin-reichen Nicht-Amelogeninen, Amelinen (Ameloblastin, Sheathlin), Tuftelinen und Derivaten davon und Gemischen davon ausgewählt ist.

11. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die aktive Schmelzsubstanz ein Molekulargewicht von höchstens etwa 120 kDa, z. B. höchstens 100 kDa, 90 kDa, 80 kDa, 70 kDa oder 60 kDa, bestimmt durch SDS-Page-Elektrophorese, hat.

12. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Zubereitung einer aktiven Schmelzsubstanz ein Gemisch aktiver Schmelzsubstanzen mit unterschiedlichen Molekulargewichten enthält.

13. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Zubereitung einer aktiven Schmelzsubstanz mindestens zwei Substanzen, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amelogeninen, Prolin-reichen Nicht-Amelogeninen, Tuftelin, Schmelzbüschel-Proteinen, Serumproteinen, Speichelproteinen, Amelin, Ameloblastin, Sheathlin und Derivaten davon, umfasst.

14. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die aktive Schmelzsubstanz ein Molekulargewicht von bis zu etwa 40000 hat.

15. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die aktive Schmelzsubstanz ein Molekulargewicht zwischen etwa 5000 und etwa 25000 hat.

16. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der Hauptteil der aktiven Schmelzsubstanz ein Molekulargewicht von etwa 20 kDa hat.

17. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei mindestens ein Teil der aktiven Schmelzsubstanz in Form von Aggregaten vorliegt oder nach Anwendung in vivo fähig ist, Aggregate zu bilden.

18. Verwendung nach Anspruch 17, wobei die Aggregate eine Partikelgröße zwischen etwa 20 nm und etwa 1 um haben.

19. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der Proteingehalt der aktiven Schmelzsubtanz in der Zubereitung im Bereich von etwa 0,05 Gew.-% bis 100 Gew.-%, z. B. etwa 5 bis 99 Gew.-%, etwa 10 bis 95 Gew.-%, etwa 15 bis 90 Gew.-%, etwa 20 bis 90 Gew.-%, etwa 30 bis 90 Gew.-%, etwa 40 bis 85 Gew.-%, etwa 50 bis 80 Gew.-%, etwa 60 bis 70 Gew.-%, etwa 70 bis 90 Gew.-% oder etwa 80 bis 90 Gew.-% liegt.

20. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung außerdem einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.

21. Verwendung nach Anspruch 20, wobei der pharmazeutisch annehmbare Träger Propylenglycolalginat ist.

22. Verwendung nach Anspruch 20, wobei der pharmazeutisch annehmbare Träger Hyaluronsäure oder Salze davon ist.

23. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 22, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung 30 mg Schmelzmatrixprotein und 1 ml Propylenglycolalginat umfasst.

24. Verwendung einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 23 oder von Proteinen oder Peptiden, die darin enthalten sind, zur Wundheilung in Haut und Schleimhaut.

25. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die Heilung von Blut- und Lymph-Gefäßen verstärkt und/oder verbessert wird.

26. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die Heilung dermaler oder mucosaler Wunden beschleunigt, stimuliert oder gefördert wird.

28. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Heilung von Bindegewebe ohne Vernarbung.