DE69702158T2

DE69702158T2 - Carnitine-Bisalkanoylester mit bakterizider, fungizider und antiprotozoischer Wirkung

Info

Publication number: DE69702158T2
Application number: DE69702158T
Authority: DE
Inventors: Francesco De Angelis; Gian Carlo Gramiccioli; Nazareno Scafetta; Maria Ornella Tinti
Original assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Current assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date: 1996-03-20
Filing date: 1997-03-14
Publication date: 2000-10-19
Anticipated expiration: 2017-03-15
Also published as: ES2147663T3; DK0796841T3; ZA972374B; US5925369A; JPH107631A; ITRM960180A1; IT1283955B1; DE69702158D1; CA2200409C; PT796841E; CA2200409A1; ATE193521T1; ITRM960180A0; MX9702043A; KR100491099B1; KR970065506A; JP4077052B2; EP0796841A1; EP0796841B1; GR3034243T3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft DL-, D- oder L-Carnitinester der Formel (I):
worin:
R ein lineare oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Alkanoyl- Gruppe mit 2 bis 16 Kohlenstoffatomen ist;
Y eine lineare oder verzweigte Alkylen-Kette mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ortho-, meta- oder para-Xylylen ist; und
X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist.
Die Verbindungen der Formel (I) besitzen zwei chirale Zentren. Jedes kann unabhängig voneinander entweder die D- oder L-Konfiguration darstellen.
Die Verbindungen der Formel (I) besitzen hochwirksame bakterizide, fungizide und protozoenvernichtende Aktivität.
Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls Verfahren zur Herstellung der Verbindungen (I) und pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung von Hautkrankheiten, die durch Bakterien, Hefen, Pilze oder Protozoen als Pathogene für einfache oder Mischinfektionen verursacht werden.
Beispiele für Hautinfektionen, die mit den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen behandelt werden können, sind diejenigen, die durch Dermatophyten (Tinea corporis, Tinea cruris, Tinea capitis, Tinea pedis, Tinea barbae, Tinea unguis) hervorgerufen werden; durch hefeartige Stämme, wie Soor, Chelitis, Rhinopharyngitis, Vulvovaginitis, Balanoposthitis, Intertrigo, Pityriasis versicolor, Otitis, Onychauxis, Perionychauxis; durch Bakterien, wie Impetigo, Nasenluftweg-Staphylococcus, Erythrasma, Vaginosis; und durch Protozoen, wie Haut-Leichmaniasis, durch Acanthamoeba verursachte Keratitis, durch Trichomonas verursachte Vaginitis.
Unter den Hautmischinfektionen sollten Vulvovaginitis, Vaginosis, Balanitis und Balanoposthitis, Onychauxis und Perionychauxis, infizierte Hautgeschwüre bei Diabetes-Patienten, Infektionen des Außenohres und Infektionen immungeschwächter Patienten genannt werden.
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung sind ebenfalls nützlich zur Behandlung von infektiösen Pathologien, die durch Stämme verursacht werden, die gegen die häufigsten Antimykotika und Antibiotika resistent sind, und bei der Desinfizierung von chirurgisch geöffneten Geweben.
In den Verbindungen der Formel (I) hat R bevorzugt 9 bis 13 Kohlenstoffatome.
R ist bevorzugt Decanoyl, Undecanoyl und Tridecanoyl.
Y wird bevorzugt ausgewählt aus Trimethylen, Tetramethylen, Pentamethylen, Hexamethylen und ortho-, meta- oder para-Xylylen.
X&supmin; wird bevorzugt ausgewählt aus Chlorid, Bromid, Methansulfonat, Phosphat, saurem Fumarat, Fumarat, sauren Tartrat und Tartrat.
Da die Verbindungen der Formel (I) besonders wirksam bei der Behandlung von Hautkrankheiten sind, sind die bevorzugten Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung dermatologische Zubereitungen, die zur topischen Anwendung geeignet sind, wie Cremes, Salbengrundlagen, Gele, Lotionen, Lösungen und dgl. Geeignete Zusammensetzungen wurden gefunden, die 0,5 bis 2 Gew.-%, bevorzugt 1 bis 1,5 Gew.-% einer der Verbindungen der Formel (I) enthalten.
Die Zusatzstoffe zur Verwendung bei der Herstellung der Zusammensetzungen der Erfindung sind wohlbekannt und werden dem Fachmann in der Pharmazie und pharmazeutischen Technologie bezüglich der speziell herzustellenden Zusammensetzung ersichtlich sein.
Bezüglich des Standes der Technik sind die den Anmeldern bekannten Verbindungen, die den Verbindungen der vorliegenden Erfindung hinsichtlich sowohl Struktur als auch Aktivitätserwägungen am nächsten kommen, die langkettigen Ester von Acyl-L-carnitin der Formel:
worin R eine lineare oder verzweigte Acyl-Gruppe mit 2 bis 16 Kohlenstoffatomen ist; n eine ganze Zahl von 7 bis 15 ist und X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist, offenbart in EP-A-0 552 137 und EP-A-0 552 138, beide im Namen der gleichen Anmelder der vorliegenden Patentanmeldung. EP-A-0 552137 und EP = A- 0552 138 offenbaren die bakterizide Aktivität bzw. fungizide Aktivität solcher Verbindungen.
Unter diesen bekannten Verbindungen hat sich Isovaleryl-L-carnitin- undecylestermethansulfonat (Verbindungs-Code: ST 1103) als das sowohl wirksamste bakterizide als auch fungizide Mittel erwiesen.
Es wurde nun gefunden, daß die Verbindungen der Formel (I) eine noch wirksamere bakterizide und fungizide Aktivität, bessere Hautverträglichkeit und geringere Zelltoxizität als die bekannten Verbindungen besitzen.
Es hat sich gezeigt, daß diese Verbindungen ebenfalls eine protozoenvernichtende Aktivität aufweisen, die für die bekannten Verbindungen zuvor nicht offenbart war.
Bezüglich des Reaktionsschemas, wenn A=O&supmin; ist (Cl&supmin; fehlt dann), umfaßt das Verfahren die folgenden Schritte:
(a) Suspendieren eines inneren Alkanoyl-L-carnitinsalzes in einem organischen, wasserfreien, inerten Lösungsmittel, wie N,N-Dimethylformamid, Acetonitril oder Methylenchlorid;
(b) Zugabe einer Verbindung der Formel Z-Y-Z, worin Y die vorhergehende Bedeutung hat und Z ausgewählt ist aus Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, O-Mesyl oder O-Tosyl, in einer äquivalenten Menge bis zur Hälfte der Mole des Alkanoyl-L-carnitins zur Suspension bei 0 bis 10ºC;
(c) Halten der Suspension unter Rühren auf 20 bis 50ºC für 24 h, bis die Suspension vollständig solubilisiert ist;
(d) Ausfällen des Reaktionsrohprodukts durch Zugabe eines Lösungsmittels, wie Ethylether oder Hexan, Abfiltrieren des Produkts und Waschen mit Aceton oder Methylethylketon, bis ein festes Produkt erhalten wird;
(e) Auflösen des Produkts in Wasser und Eluieren an einem stark basischen Harz, wie Amberlite IRA-402, das mit einer geeigneten Säure der Formel HX aktiviert ist, um das als Salz gebildete Produkt in der gesuchten Form zu erhalten;
(f) Gefriertrocknen oder Aufkonzentrieren des Eluats zur Isolierung des festen Produkts; und
(g) Reinigen des Feststoffs des Schrittes (f) durch Chromatographie an C&sub8;-Silica unter Elution mit H&sub2;O/CH&sub3; N 70 : 30.
Alternativ umfaßt das Verfahren die folgenden Schritte, wenn A=Cl ist:
(a') Suspendieren des Alkanoyl-L-carnitinsäurechlorids in einem organischen, wasserfreien, inerten Lösungsmittel, wie N,N-Dimethylformamid, Acetonitril oder Methylenchlorid;
(b') Zugabe einer Verbindung der Formel Z-Y-Z, worin Y die zuvor genannte Bedeutung hat und Z OH ist, in einer äquivalenten Menge bis zur Hälfte der Mole des Alkanoyl-L-carnitins zur Suspension bei Raumtemperatur;
(c') Halten der Suspension unter Rühren auf Raumtemperatur für 16 bis 24 h, bis die Suspension vollständig solubilisiert ist;
(d') Aufkonzentrieren der Lösung zur Trockene im Vakuum;
(e') Reinigen des so erhaltenen Rohprodukts durch Silicagel- Chromatographie unter Elution mit H&sub2;O/CH&sub3;CN-Lösungen; und
(f') Isolieren der Verbindung durch Aufkonzentrieren und anschließende Gefriertrocknung. Reaktionsschema
A = O&supmin;, Cl
Y = wie zuvor beschrieben
Z = Cl, Br, I, OMs, OTs, OH
Ms = Mesyl
Ts = Tosyl
X&supmin; = Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure.
Die Herstellung und physikochemischen Eigenschaften einiger Verbindungen der Erfindung werden in den folgenden, nicht-beschränkenden Beispielen gezeigt.

Beispiel 1

Herstellung von Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)p-xylylendiester (ST 1226)

Inneres Undecanoyl-L-carnitinsalz (8,5 g; 0,025 mol) wurde in 50 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid suspendiert.
Zur auf 0ºC gekühlten Suspension wurde α,α'-Dibrom-p-xylol (3,4 g; 0,013 mol) hinzugegeben. Die resultierende Mischung wurde für 4 h gerührt, bis eine vollständige Solubilisierung erreicht war. Ethylether wurde zur Lösung hinzugegeben, bis die Ausfällung einer gelartigen Masse beendet war.
Das so erhaltene Rohprodukt wurde wiederholt mit Aceton gewaschen und unter Erhalt von 7 g eines festen Produktes im Vakuum filtriert. Molare Ausbeute 65% (bezogen auf α,α'-Dibrom-p-xylol).
Das Produkt wurde in Wasser aufgelöst und an in Cl&supmin;-Form aktiviertem IRA-402 (140 ml) eluiert.
Aus dem gefriergetrockneten Eluat wurden 6,3 g eines leicht hygroskopischen Produktes erhalten.
Elementaranalyse für C&sub4;&sub4;H&sub7;&sub8;O&sub8;N&sub2;Cl&sub2;
H&sub2;O 1,4%
HPLC
Säule: SGE-SCX (5 um) 1250 mm · 4,0 mm
Temperatur: 30ºC
Elutionsmittel: CH&sub3;CN/NH&sub4;H&sub2;PO&sub4; 50 mM 65/35 pH = 7 (NH&sub4;OH)
Fließgeschwindigkeit: 0,75 ml/min
Rt: 17,6 min
[α]D&sub2;&sub5; = -17º (c = 0,6% H&sub2;O)
¹H-NMR CDCl&sub3; (δ): 7,4 (4H, s, Phenyl); 5, 6 (2H, m,
5,2 (4H, s, 2 CH&sub2;Phenyl); 4,2 - 4,0 (4H, dd, 2N&spplus;CH&sub2;); 3,4 (18H, s, 2(CH&sub3;)&sub3;N&spplus;); 3,0 - 2,8 (4H, m, 2 CH&sub2;COO); 2,3 (4H, t, 2 OCOCH&sub2;); 1,6 (4H, m, 2 CH&sub2;CH&sub3;); 1,1 (32H, m,2(CH&sub2;)8); 0,9 (6H, t, 2 CH&sub3;).

Beispiel 2

Herstellung (über den Säurechlorid-Weg, siehe Reaktionsschema, A=Cl) von Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)p-xylylendiester (ST 1226)

Undecanoyl-L-carnitinchldorid (18 g; 0,05 mol) wurde in 50 ml Methylenchlorid suspendiert, und zur resultierenden Mischung wurde Thionylchlorid (7,5 ml; 0,1 mol) hinzugegeben. Die Mischung wurde für 3 h bei Raumtemperatur gerührt.
Die Mischung wurde dann im Vakuum aufkonzentriert, der Rückstand wiederholt mit Et&sub2;o gewaschen und aufkonzentriert.
Das Reaktionsprodukt wurde in wasserfreiem Methylenchlorid (50 ml) suspendiert, und zur Mischung wurde 1,4-Benzoldimethanol portionsweise während 2 h hinzugegeben. Die resultierende Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum aufkonzentriert.
Das Reaktionsrohprodukt wurde durch Chromatographie an C&sub8;-Silicagel und Elution mit H&sub2;O/CH&sub3;CN 70 : 30 gereinigt.
Die die Titelverbindung (ST 1226) enthaltenden Fraktionen wurden aufkonzentriert und dann gefriergetrocknet.
Das so erhaltene Produkt zeigte die gleichen Eigenschaften wie die in Beispiel 1 erhaltene. Verbindung.

Beispiel 3

Herstellung von Bis(tridecanoyl-L-carnitinchlorid)trimethylendiester (ST 1233)

Inneres Tridecanoyl-L-carnitinsalz (5,15 g; 0,0144 mol) wurde in 50 ml wasserfreiem N,N-DMF suspendiert. Zur auf 0ºC gekühlten Suspension wurde 1,3-Dibrompropan (0,73 ml; 0,0072 mol) hinzugegeben. Die resultierende Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.
Dann wurde ein Überschuß von innerem Tridecanoyl-L-carnitinsalz (0,5 g) zweimal hinzugegeben, und die Mischung wurde weiter über Nacht gerührt, bis die Reaktionsmischung vollständig aufgelöst war.
Am Ende der Reaktion wurde Ethylether hinzugegeben, bis das Reaktionsrohprodukt vollständig ausfiel.
Der Feststoff wurde unter Erhalt von 6 g eines Produkts abfiltriert, das in Wasser aufgelöst und an in der Cl&supmin;-Form aktiviertem IRA-402 (120 ml) eluiert wurde.
5 g der Titelverbindung (ST 1233) wurden erhalten. Ausbeute 44%.
Elementaranalyse für C&sub4;&sub3;H&sub8;&sub4;O&sub8;N&sub2;Cl&sub2;
[α]D&sub2;&sub5; = -13,2º (c = 1% H&sub2;O)
¹H-NMR CDCl&sub3; (δ): 5,6 (2H, m, 2-CHOCO); 4,5 (2H, d, 2N&spplus;-CHH); 4,3 - 3,9 (6H, m, 2N&spplus;-CHH; 2 CH&sub2;O); 3,5 (18H, s, 2(CH&sub3;)&sub3;N&spplus;); 3,0 - 2,8 (4H, 2 CH&sub2;COO); 2,3 (4H, t, OCOCH&sub2;); 2,0 (2H, m, -CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-); 1,6,(4H, m, 2 CH&sub2;CH&sub3;); 1,2 (36H, s, 2(CH&sub2;)&sub9;); 0,8 (6H, t, 2 CH&sub3;).

Beispiel 4

Herstellung von Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)-oxylylendiester (ST 1249)

Die Titelverbindung wurde wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt und isoliert. Ausbeute: 58%.
Elementaranalyse entspricht C&sub4;&sub4;H&sub7;&sub8;O&sub8;N&sub2;Cl&sub2;
HPLC
Säule: SGE-SCX (5 um) 1250 mm · 4,0 mm
Temperatur: 30ºC
Elutionsmittel: CH&sub3;CN/NH&sub4;H&sub2;PO&sub4; 50 mM 65/35 pH = 7,2 (NH&sub4;OH)
Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min
Rt: 9,68 min
[α]D&sub2;&sub5; = -16º (c = 1% H&sub2;O)
NMR entspricht dem von Beispiel 1.

Beispiel 5

Herstellung von Bis-(undecanoyl-L-carnitinchlorid) m-Xylylendiester (ST 1250)

Die Titelverbindung wurde wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt und isoliert. Ausbeute 78%.
Elementaranalyse entspricht C&sub4;&sub4;H&sub7;&sub8;O&sub8;N&sub2;Cl&sub2;
HPLC wie in Beispiel 1 beschrieben
Rt = 9,18 min
NMR entsprechend wie in Beispiel 1 beschrieben
[α]D&sub2;&sub5; = -18,2 (c = 0,5% H&sub2;O)
Die hochwirksame bakterizide, fungizide und protozoenvernichtende Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen und ihre Überlegenheit gegenüber Verbindungen des nächstkommenden Standes der Technik, wie gegenüber dem oben erwähnten Isovaleryl-L-carnitinundecylestermethansulfonat (ST 1103), wurde in verschiedenen pharmakologischen Untersuchungen beurteilt, von denen einige nachfolgend beschrieben werden.

Antimikrobielle Aktivität in vitro

Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 an Gram-positiven und Gram-negativen Bakterien (Laborsammlung und frische klinische Isolate von dermatologischem Interesse)

Materialien und Methoden

Bakteriensuspensionen werden aus einer Über-Nacht-Kultur in Mueller- Hinton-Bouillon hergestellt und im gleichen Medium auf eine Endkonzentration von 5,0 · 10&sup4; Zellen/ml in jeder Vertiefung einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen eingestellt. Substanzverdünnungen (0,3 10 g) in Mueller- Hinton-Bouillon werden zu den Suspensionen hinzugegeben, um einen Bereich von Endkonzentrationen von 0,19 bis 100 ug/ml zu erhalten.
Die Mikrotiter werden dann bei 37ºC für 18 h inkubiert (siehe L.D. THRUPP, Susceptibility testing of antibiotics in liquid media, in: Antibiotics in laboratory medicine, V. LORIAN Hrsg., 2. Auflage, 4,93-150, Williams & Wilkins, Baltimore, MD 21202 USA).

Ergebnisse

Die Daten, die die Stämme der Laborsammlung und die klinischen Isolate betreffen, sind in den Tabellen 1 bzw. 2 angegeben. Es ist ersichtlich sowohl aus den einzelnen Ergebnissen als auch aus den mittleren MHK-Werten, daß ST 1226 eine höhere Aktivität als ST 1103 gegenüber Grampositiven Bakterien aufweist (Tabelle 1a und 1b).
Im Gegensatz wurden keine wesentlichen Unterschiede zwischen den zwei Substanzen gegenüber Gram-negativen Bakterien gefunden (Tabelle 2a und 2b). Tabelle 1a Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Grampositiven Bakterien (Laborsammlung) Tabelle 1 b Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Grampositiven Bakterien (klinische Isolate)a. Die Diagnose der Hautinfektion, aus der die Bakterienstämme isoliert wurden, ist nur angegeben, wenn sie bekannt war
a = SG-Stämme (vom S. Gallicano Krankenhaus, Rom). IDI-Stämme (vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom). Tabelle 2a Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Gramnegativen Bakterien (Laborsammlung) Tabelle 2b Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Gramnegativen Bakterien (klinische Isolate)a. Die Diagnose der Hautinfektion, aus der die Bakterienstämme isoliert wurden, ist nur angegeben, wenn sie bekannt war
a = SG-Stämme (vom S. Gallicano Krankenhaus, Rom). IDI-Stämme (vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom).
Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 gegenüber Gram-positiven und Gram-negativen anaeroben Bakterien (Laborsammlung und klinische Isolate)

Materialien und Methoden

Bakterien aus Kulturen in WILKINS-CHALGREN-(W.C.)-Medium in Petrischalen, die über Nacht bei 35ºC in einem anaeroben Glas herangezogen wurden, wurden erneut in Brucella-Bouillon suspendiert. Die Suspensionen wurden auf 1,0 · 10&sup8; Zellen/ml eingestellt und auf Mikrotiterplatten (Platte mit U-Boden mit 96 Vertiefungen) verteilt (0,2 ml/Vertiefung). Gleichzeitig werden Verdünnungen der Substanzen mit 0,3 10 g mit W.C.-Agar- Medium in vierteiligen Petrischalen vermischt, die dann mit der Bakteriensuspension mittels eines Mehrpunktinokulators geimpft werden (1,0 · 10&sup5; Zellen/Fleck). Die Platten werden dann bei 35ºC für 48 h in einem anaeroben Glas inkubiert (siehe J.E. ROSENBLATT, Antimicrobial susceptibility testing of anaerobes, in: Antibiotics in laboratory medicine, V. LORIAN Hrsg., 2. Auflage, 6, 159-180, Williams & Wilkins, Baltimore, MD 21202 USA).

Ergebnisse

Die MHK-Werte (ug/ml) der Verbindungen gegenüber drei anaeroben Bakterienstämmen sind in Tabelle 3 angegeben. Der mittlere MHK-Wert von ST 1226 ist kleiner als der von ST 1103. Tabelle 3 Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber anaeroben Bakterien. Die Diagnose der Hautinfektion, aus der die Bakterienstämme isoliert wurden, ist nur angegeben, wenn sie bekannt war
* = Gram-positive Bakterien (klinische Isolate vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom).
** = Gram-negatives Bakterium (Laborsammlung).
Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 gegenüber hefeartigen Stämmen (Laborsammlung und klinischen Isolate)

Materialien und Methoden

Über-Nacht-Hefekulturen in Sabouraud-Bouillon werden in geeigneter Weise gewaschen und in mit Asparagin und Glucose ergänzter Hefe-Stickstoff- Basis (Y.N.B.s.) verdünnt, um ca. 5,0 · 10&sup4; KBE/ml in Mikrotitervertiefungen zu erhalten. Substanzverdünnungen (0,3 log) in Y.N.B.s. werden zu diesen Suspensionen auf einen Endkonzentrationsbereich von 0,19 bis 100 ug/ml hinzugegeben. Die Mikrotiterplatten werden dann bei 35ºC für 24 bis 48 h inkubiert (siehe M. PFALLER, M.G. RINALDI, J.M. GALGIANI, M.S. BARTLETT, B.A. BODY, A. ESPINEL-INGROFF, R.A. FROMTLING, G. S. HALL, G. E. HUGHES, F.C. ODDS, A.M. SUGAR, Collaborative investigator of variables in susceptibility testing of yeasts, Ant. Agent and Chemoth., 34, 9:1648-1656, 1990; R. COOK, K.A. McINTYRE, J.M. GALGIANI, Effects of incubation temperature, inoculum size, and medium on agreement of macro and microdilution broth susceptibility test, results for yeasts, Ant. Agent and Chemoth., 34, 8:1542-1545, 1990; E. ANALSSIE, V. PAETZNICK, G.P. BODEY, Fluconazol susceptibility testing of "Candida albicans" microtiter method that is indipendent of inoculum size, temperature, and time of reaching, Ant. Agent and Chemoth., 35, 8:1641-1646, 1991).

Ergebnisse

Die Daten, die die Laborsammlungsstämme und die klinischen Isolate betreffen, sind in den Tabellen 4 bzw. 5 angegeben. ST 1226 weist eine höhere Aktivität als ST 1103 auf, hauptsächlich gegenüber klinischen Candida-Isolaten von dermatologischem Interesse. Tabelle 4 Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber hefeartigen Stämmen (Laborsammlung) Tabelle 5 Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Candida-Stämmen (klinische Isolate)a. Die Diagnose der Hautinfektion, aus der die Candida-Stämme isoliert wurden, ist nur angegeben, wenn sie bekannt war Tabelle 5 (Fortsetzung)
a = SG-Stämme (vom 5. Gallicano Krankenhaus, Rom). IDI-Stämme (vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom). SM-Stänme (vom S. Matteo Krankenhaus, Pavia).
b = Behandlung vor der klinischen Diagnose verabreicht.
Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 gegenüber fadenförmigen Pilzen (Laborsammlung)

Materialien und Methoden

Die Konidien werden aus 72-Stunden-Kulturen in Sabouraud-Agar durch Waschen mit Sabouraud-Bouillon und 0,5% Tween 80 geerntet. Nach einer Rohfiltration und Waschen werden die resultierenden Suspensionen auf eine Endkonzentration von ca. 5,0 · 10&sup4; KBE/ml in einer Mikrotiterplatte eingestellt. Die Substanzen (Verdünnungen mit 0,3 log in Y.N.B.s) werden zu den Pilzsuspensionen hinzugegeben, um einen Bereich von Endkonzentrationen von 0,19 bis 100 ug/ml zu erzeugen. Die Mikrotiterplatten werden dann bei 35ºC für 48 bis 72 h inkubiert.

Ergebnisse

Die mit den zwei Verbindungen erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 6 gezeigt. Sowohl die Einzelergebnisse als auch die mittleren MHK-Werte zeigen deutlich, daß ST 1226 eine deutlich höhere Aktivität als ST 1103 aufweist. Tabelle 6 Minimale Hemmkonzentrationen (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber fadenförmigen Pilzen (Laborsammlung)
Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 gegenüber Dermatophyten (klinische Isolate von dermatologischem Interesse)

Materialien und Methoden

Myzelfragmente, Mikro- und Makroaleurosporen werden aus 7-tägigen Pilzkulturen geerntet, die bei 30ºC in Kartoffeldextrose herangezogen wurden, indem sie mit Sabouraud-Bouillon und 0,5% Tween 80 gewaschen werden. Nach einer Rohfiltration und Waschen wird die Pilzsuspension in mit Asparagin und Glucose ergänzter Hefe-Stickstoff-Bais (YNBs) erneut suspendiert, um eine Endkonzentration von 1,0 · 10&sup5; infektiösen Einheiten/ml in einer Mikrotiterplatte zu ergeben.
Die Substanzen (Verdünnungen mit 0,3 log in Y.N.B.s.) werden zu den Pilzsuspensionen hinzugegeben, um einen Bereich an Endkonzentrationen von 0,19 bis 100 ug/ml zu erzeugen. Die Mikrotiterplatten werden dann bei 30C für 96 bis 120 h inkubiert.

Ergebnisse

Die mit den zwei Verbindungen erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 7 angegeben. Es ist leicht ersichtlich, daß ST 1226 eine höhere Aktivität als ST 1103 gegenüber Dermatophyten aufweist. Tabelle 7 Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber Dermatophyten (klinische Isolate)a. Die Diagnose der Hautinfektion, aus der die Bakterienstämme isoliert wurden, ist nur angegeben, wenn sie bekannt war Tabelle 7 (Fortsetzung)
* Laborsammlungsstämme
a SG-Stämme (vom S. Gallicano Krankenhaus, Rom). IDI-Stämme (vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom)
b Behandlung vor der klinischen Diagnose verabreicht
Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 gegenüber Protozoen (Trichomonas vaginalis) Materialien und Methoden
Protozoen-Suspensionen werden aus 24-Stunden-Kulturen hergestellt, die bei 37ºC und 5% CO&sub2; in DIAMOND T.Y.M.-Bouillon, ergänzt mit 10% hitzeinaktiviertem Kalbfötusserum, herangezogen wurden.
Die Suspension werden im gleichen Medium auf eine Endkonzentration von 2,5 · 10&sup5; Zellen/ml in jeder Vertiefung einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen eingestellt. Substanzverdünnungen (0,3 log) werden zu den Suspension hinzugegeben, um einen Bereich von Endkonzentrationen von 0,19 bis 100 ug/ml zu erhalten. Die Mikrotiter werden dann bei 37ºC und 5% CO&sub2; für 24 h inkubiert. MHK bezieht sich auf die minimale Konzentration, die entweder Protozoen oder Geißeln oder die wellenförmige Membran-Motilität hemmt (vgl. C. JULIANO, M.G. MARTINOTTI, P. CAPPUCCINELLI, In vitro effect of microtubule inhibitors on T. vaginalis, Microbiologia, 8:31-42, 1985; T. LÖVGREN und I. SALMELA, In vitro sensitivity of T. vaginalis and C. albicans to chemotherapeutic agents, Acta Path. Microbiol. Scand., 86:155-158, 1978).

Ergebnisse

Die mit den zwei Substanzen erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 8 gezeigt: ST 1226 weist eine höhere (2-fache) Aktivität als ST 1103 auf. Tabelle 8 Minimale Hemmkonzentration (ug/ml) von ST 1226 und ST 1103 gegenüber T. vaginalis-Stämmena
a = Stämme vom Insitut für Mikrobiologie und Virologie, Universität Sassari
b = Metroindazol-resistente Stämme (MHK von 25 und 50 ug/ml) Aktivität in vivo
Auswertung der infektionsverhindernden Wirkung in vivo von ST 1226 und ST 1103 gegenüber einer topischen Mischinfektion, die durch einen Dermatophyten (Tricophyton quinckeanum) und durch ein Gram-positives Bakterium (Staphylococcus aureus) verursacht wird

Materialien und Methoden

Tiere

Männliche Mäuse mit angeborenem BALB/c (C. RIVER) im Alter von 6 Wochen wurden verwendet (5 Tiere pro Gruppe).

Mikrobielle Stämme

Die Tiere wurden topisch mit pathogenen Stämmen von Tricophyton (Tricophyton quinckeanum NCPF 309) und Staphylococcus (Staphylococcus aureus LC1) infiziert.

Experimentelles Verfahren

Suspensionen von Pilz-Mikroaleurosporen und Bakterien wurden auf eine Endkonzentration von 5,0 · 10&sup7; bzw. 1,0 · 10&sup7; Zellen/ml eingestellt. Volumina von 0,2 ml jeder Suspension wurden auf das oberen Hinterteil der Tiere aufgetragen, das zuvor rasiert und vorsichtig mit einer Skalpellklinge bis zum "Glänzen" abgeschabt wurde. Die Behandlung begann 30 h nach der Übertragung durch Verabreichung von jeweils 50 mg Substanz in Gel-Form (1% Testprodukt) auf die infizierte Haut, einmal täglich für 5 aufeinanderfolgende Tage. Zwei Tage nach der letzten Behandlung wurden die Tiere getötet, und die infizierten Gewebeproben wurden gesammelt. Nach Homogenisierung und geeigneter Verdünnung in einem Medium wurden die Gewebeproben auf Platten aufgezogen (in mycobiotischem Agar und Mannitsalz-Agar für Pilze bzw. Bakterien), um selektiv das Wachstum der Pathogene zu beurteilen. Das Pilzwachstum wird mittels einer willkürlichen Skala ausgewertet, während das Bakterienwachstum durch Bestimmung der KBE (koloniebildenden Einheiten) ausgewertet wird.

Ergebnisse

Die mit beiden Molekülen erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 9 gezeigt. Es kann daraus entnommen werden, daß die Moleküle beide eine identische Aktivität gegenüber S. aureus aufweisen, während ST 1226 eine größere Antipilzaktivität als ST 1103 aufweist. Tabelle 9 Infektionsverhindernde Wirksamkeit in vivo von ST 1226 im Vergleich mit ST 1103 in einer topischen Mischinfektion (Tricophyton quinckeanum NCPF 309 und Staphylococcus aureus LC1) bei Mäusen a
a = 5 Tiere pro Experimentgruppe
b = Tiere wurden topisch für 5 aufeinanderfolgende Tage durch Verabreichung von 50 mg/Tag jeder Substanz mit 1% in Gel behandelt (Hydroxyethylcellulose 2,5 g; Glycerin 7,0 g; Propylenglykol 7,0 g; gereinigtes Wasser auf 100 ml)
c = +++: konfluentes Pilzwachstum (aus einem 1 ml Hauthomogenat)
++: halbkonfluentes Pilzwachstum (aus einem 1 ml Hauthomogenat)
+: mäßiges Pilzwachstum (aus einem 1 ml Hauthomogenat)
Auswertung der Hautverträglichkeit nach wiederholten Behandlungen (10 Tage) mit ST 1226 und ST 1103 an skarifizierter Haut der Maus

Materialien und Methoden

Tiere

Männliche CD1-Mäuse (C. RIVER) im Alter von 6 Wochen wurden verwendet (5 Tiere pro Gruppe).

Substanzen

Die Substanzformulierungen (1% Testprodukt) wurden in Gel hergestellt (Hydroxyethylcellulose 2,5 g; Glycerin 7,0 g; Propylenglykol 7,0 g; Wasser auf 100 ml).

Experimentelles Verfahren

Die zentrale Rückenzone der Tiere wurde zuerst rasiert und dann mit einer Skalpelklinge vorsichtig abgeschabt. Die Behandlung wurde einen Tag nach der Hautabschabung durch Verabreichung von 50 mg jeder Substanzformulierung einmal täglich für 10 aufeinanderfolgende Tage durchgeführt. Die behandelten Hautflächen wurden 5, 7, 9 und 11 Tage nach der Skarifizierung untersucht. Die Auswertung beruhte auf einer Einteilung der Schädigungen als Erythem (E), Desquamation (D), und Riß (R) gemäß folgender Skala:
Die Mittelwerte jedes Parameters in der gleichen Tiergruppe erlaubten uns, die Gewebeschädigung auszuwerten, die durch die untersuchte Substanz hervorgerufen wurde.

Ergebnisse

Die mit den Verbindungen erhaltenen Ergebnisse, ausgedrückt als Mittelwert jedes Parameters, der in der gleichen Experimentgruppe ausgewertet wurde, sind in Tabelle 10 angegeben. Es ist ersichtlich, daß ST 1226 besser verträglich als ST 1103 ist. Tabelle 10 Hautverträglichkeit wiederholter Verabreichungen von ST 1226 und ST 1103 auf skarifizierte Mäusehaut. Auswertung an den Tagen 5, 7, 9 und 11 nach Skarifizierung durch eine willkürliche Skala (Erythem, Desquamation und Riß) im Bereich von 0 (keine Wirkung) bis 3 (schwere Schädigung). Die Ergebnisse werden als Mittelwerte jeder Experimentgruppe (5 Tiere/Gruppe) ausgedrückt
a = Tage nach Hautskarifizierung
Auswertung der Antipilzaktivität von ST 1226 (1% und 1,5%) und Miconazol (1,5%) in einem experimentellen Infektionsmodell (Tinea pedis), das in der Meerschweinchenpfote mit einem Trichophyton-Stanim (T. mentagrophytes IDI D 1049) induziert wird.
Die Eigenschaften einer chronischen Infektion und die Ähnlichkeit mit der menschlicheh Infektion vom histologischen und klinischen Gesichtspunkt her machen dieses Modell sehr nützlich zur Untersuchung des am meisten verbreiteten topischen Pilzbefundes (Fußflechte). Daneben kann der Ausgang der Behandlung einen guten Vergleichspunkt darstellen, von dem aus man wertvolle Indikationen auf andere Dermathophyten, die unterschiedliche Körperbereiche infizieren, extrapolieren kann. Ferner erlaubt die Chronizität dieser Infektion (bis zu 6 Monaten) die Untersuchung der Substanzen selbst bei langandauernden Behandlungen, wie es gewöhnlich beim Menschen vorkommt.
In der vorliegenden Untersuchung haben wir im Meerschweinchenmodell untersucht, ob ST 1226 in zwei unterschiedlichen Konzentrationen diese typische dermatophytische Hautinfektion, die langandauernd ist und häufig beim Menschen vorkommt, heilen kann.

Materialien und Methoden

Tiere

12 männliche Hartley-Meerschweinchen (C. RIVER) mit einem Gewicht von 350 bis 400 g wurden verwendet (3 Tiere pro Experimentgruppe).

Infektiöser Stamm

Ein klinisches Isolat (Tricophyton mentagrophytes IDI D 1049 vom Immacolata Dermatologischen Institut, Rom) wurde verwendet.

Inokulum-Zubereitung

Mikroaleurosporen wurden zuerst durch Abschaben von einer 7-Tage- Pilzlcultur geerntet, die in Kartoffeldextroseagar herangezogen wurde, und dann erneut in Sabouraud-Bouillon mit 0,5% Tween 80 suspendiert.
Nach Waschen wurden die Sporen in steriler Salzlösung zum Erhalt einer Endkonzentration von 1,0 · 10&sup8; Sporen/ml standardisiert.

Experimentgruppe

Fünf Experimentgruppen wurden wie folgt aufgestellt:
Kontrolle I: infizierte Tiere
Kontrolle II: infizierte und Placebo behandelte Tiere
Behandelt I: infizierte und mit 1% ST 1226 behandelte Tiere
Behandelt II: infizierte und mit 1,5% ST 1226 behandelte Tiere
Behandelt III: infizierte und mit 1,5% Miconazol behandelte Tiere
Jede Gruppe schloß 3 Tiere ein, und nur die linke hintere Pfote wurde beimpft. Für die zwei Kontrollgruppen wurden insgesamt drei Tiere verwendet, bei denen beide Hinterpfoten jedes Tieres beimpft wurden.

Experimentelles Verfahren

Filterpapierscheiben (mit einem Durchmesser von 12 mm und einer Dicke von 0,3 mm) wurden mit Aluminiumfolie im unteren Teil abgedeckt, um die Ausbreitung des Inokulums zu verhindern. Dieser Filter wurde dann auf ein Stück von 1 · 3 cm eines doppelseitigen Pflasters geklebt, das an die um die Pfote gewickelte Gaze anhaftete.
Die Filterpapierscheibe wurde dann mit 100 ul der infektiösen Suspension benetzt und anschließend an der Meerschweinchenpfote angebracht. Die Tierpfote wurde mit einer Bandage und Pflaster verbunden und dann in diesem Zustand für 7 Tage belassen.
7 Tage nach der Infektion wurden die infizierten Bereiche freigelegt, und der Schädigungstyp wurde gemäß einer willkürlichen Skala wie folgt unterteilt:
Diese "klinischen" Zeichen wurden erneut an den Tagen +14, +21 und +31 (dem Tag des Tötens der Tiere) untersucht. Drei Tage nach der ersten Begutachtung des Schädigungstyps (Tag +10) wurden Behandlungen mit den unterschiedlichen Formulierungen begonnen, und sie wurden für 20 Tage (einmal täglich) fortgesetzt. Zwei Tage nach der letzten Behandlung (Tag +31) wurden die Tiere getötet, und die Fußsohlenbereiche der Pfoten wurden in 10 Teile für jede Pfote zerteilt.
Diese Abschnitte wurden auf mycobiotisches Agar aufgetragen, das mit Penicillin G und Streptomycin (100 ug/ml) ergänzt war. Volumina von 50 ul beider Antibiotika wurden dann zu den Fußsohlenabschnitten hinzugegeben, um etwaiges bakterielles Wachstum zu verhindern, das das Wachstum von T. mentagrophytes in den untersuchten Proben beeinflussen könnte.
Die erhaltenen Daten wurden als Anzahl der mikrobiologischen sterilen Hautabschnitte gegenüber den insgesamt untersuchten Abschnitten ausgedrückt.

Ergebnisse

Die mit ST 1226 in diesem experimentellen Modell erhaltenen Ergebnisse waren vorteilhaft hinsichtlich der "mikrobiologischen Wiederherstellung" (80% und 100% mit 1% bzw. 1,5% ST 1226) (Tabelle 11).
Die Behandlung mit Miconazol (1,5%) konnte in ähnlicher Weise die Infizierung von allen behandelten Proben auslöschen Tabelle 11 Klinische und mikrobiologische Auswertung einer Hautbehandlung mit ST 1226 und Miconazol in einer Meerschweinchen-Fußsohleninfektion durch einen Stamm von Trichophyton (T. mentagrophytes IDI D 1049)
a = Tag nach dem infizierenden Inokulum
b = mit Placebo behandelte infizierte Tiere (Hydroxyethylcellulose 2,5 g; Glycerin 7,0 g; Propylenglykol 7,0 g; gereinigtes Wasser auf 100 ml) Vergleichsauswertung der Hautverträglichkeit von vier wäßrigen
Formulierungen, die 1% ST 1226 enthalten, auf skarifizierte Mäusehaut.

Materialien und Methoden

Tiere

45 männliche CD1-Mäuse (C. RIVER) im Alter von 7 Wochen wurden verwendet (5 Tiere pro Experimentgruppe).
Substanzformulierungen
Creme TF 24/6327

Komponenten %

ST 1226 1
Para combin 0,25
Propylenglykol 2
Sepigel 305 5
Vaselinöl 10
H&sub2;O auf 100
Creme TF 25/6327

Komponenten %

ST 1226 1
Fattylan 16
Glycerin 3
Propylenglykol 5
Nipa sept. 0,2
H&sub2;O auf 100
Creme TF 28/6327

Komponenten %

ST 1226 1
Fattylan 11,5
Tween 80 0,3
BHA 0,004
Sorbinsäure 0,2
EDTA 0,1
Vaseline 12
Propylenglykol 2,5
Siliconöl
AK 350 0,1
Vaselinöl 5
H&sub2;o auf 100
Creme TF 14/6327

Komponenten %

ST 1226 1
Hydroxyethylcellulose 1,6
Glycerin 8
Propylenglykol 3
Ethanol 15
Parfüm 0,050
H&sub2;O auf 100

Experimentelles Verfahren

Die zentrale Rückenzone der Tiere wurde zuerst rasiert und dann vorsichtig mit einer Skalpelklinge abgeschabt.
Die Behandlung begann am Tag 1 nach der Hautabschabung durch Verabreichung von 50 mg jeder Substanzformulierung einmal täglich für 10 aufeinanderfolgende Tage. Die behandelten Hautbereiche wurden klinisch an den Tagen 5, 7, 9 und 13 nach der Skarifizierung untersucht. Die Auswertung beruhte auf einer Einteilung der Schädigungen als Erythem (E), Desquamation (D) und Riß (R) gemäß folgender Skala:
Die Mittelwerte jedes Parameters in der gleichen Tiergruppe erlaubten es uns, die durch die untersuchte Substanz hervorgerufene Gewebeschädigung auszuwerten.

Ergebnisse

Alle Placebos erscheinen sehr gut vertragen zu werden. Im Gegensatz dazu sind unter den wäßrigen Cremes mit 1% ST 1226 nur TF 24/6327 und TF 14/6327 vollständig sicher, während sowohl TF 25/6327 in einem geringeren Ausmaß und TF 28/6327 in einem größeren Ausmaß sich als schlecht Verträglich herausstellen (Tabelle 12). Tabelle 12 Auswertung der Hautverträglichkeit nach wiederholten topischen Behandlungen mit ST 1226 mit 1% in vier unterschiedlichen Trägern auf skarifizierte Mäusehaut (50 mg/Maus für 10 aufeinanderfolgende Tage)
E = Erythem; D = Desquamation; R = Riß, P = Placebo; F = vollständige Formulierung (Placebo + 1% ST 1226)

Claims

1. DL-, D- oder L-Carnitinester der Formel (I):

worin:

R eine lineare oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Alkanoyl-Gruppe mit 2 bis 16 Kohlenstoffatomen ist;

Y eine lineare oder verzweigte Alkylen-Kette mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ortho-, meta- oder para-Xylylen ist; und

X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist.

2. Ester gemäß Anspruch 1, worin R eine Alkanoyl-Gruppe mit 9 bis 13 Kohlenstoffatomen ist.

3. Ester gemäß Anspruch 1, worin Y ausgewählt ist aus Trimethylen, Tetramethylen, Pentamethylen und Hexamethylen.

4. Ester gemäß Anspruch 1, worin X- ausgewählt ist aus Chlorid, Bromid, Methansulfonat, Phosphat, saurem Fumarat, Fumarat, saurem Tartrat und Tartrat.

5. Ester gemäß Anspruch 1, ausgewählt aus der Gruppe, die aus Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)-p-xylylendiester, Bis(tridecanoyl-L- carnitinchlorid)trimethyldiester, Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)-o- xylylendiester, Bis(undecanoyl-L-carnitinchlorid)-m-xylylendiester, Bis(undecanoyl-D-carnitinchlorid)-p-xylylendiester, Bis(decanoyl-L- carnitinchlorid), Bis(decanoyl-D-carnitinchlorid), Bis(dodecanoyl-L- carnitinchlorid), und Bis(dodecanoyl-D-carnitinchlarid) besteht.

6. Pharmazeutische Zusammensetzung, die als Wirkstoff eine Verbindung der Formel (I) umfaßt:

worin:

X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist; und einen dafür pharmakologisch akzeptablen Arzneimittelzusatzstoff.

7. Zusammensetzung gemäß Anspruch 6, die zur topischen Anwendung zur Behandlung von Hautkrankheiten geeignet ist, die durch Bakterien, Hefen, Pilze oder Protozoen verursacht werden.

8. Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, die 0,5 bis 2 Gew.-%, bevorzugt 1 bis 1,5 Gew.-% einer Verbindung der Formel (I) und einen dafür pharmakologisch akzeptablen Arzneimittelzusatzstoff umfaßt.

9. Zusammensetzung gemäß Anspruch 7 oder 8 in Form einer Creme, einer Salbengrundlage, eines Gels, einer Lotion oder einer Lösung.

10. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I):

worin:

X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist;

welches die folgenden Schritte umfaßt:

(a) Suspendieren eines inneren Alkanoyl-L-carnitinsalzes in einem organischen, wasserfreien inerten Lösungsmittel, wie N,N-Dimethylformamid, Acetonitril oder Methylenchlorid;

(b) Zugabe einer Verbindung der Formel Z-Y-Z, worin Y die zuvor angegebene Bedeutung hat und Z ausgewählt ist aus Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, O-Mesyl oder O-Tosyl, in einer äquivalenten Menge bis zur Hälfte der Mole des Alkanoyl-L-carnitins zur Suspension bei 0 bis 10ºC;

(c) Halten der Suspension unter Rühren auf 20 bis 50ºC für 24 h, bis die Suspension vollständig solubilisiert ist;

(d) Ausfällen des Reaktionsrohprodukts durch Zugabe eines Lösungsmittels, wie Ethylether oder Hexan, Abfiltrieren des Produkts und Waschen mit Aceton oder Methylethylketon, bis ein festes Produkt erhalten wird;

(e) Auflösen des Produkts in Wasser und Eluieren an einem stark basischen Harz, wie Amberlite IRA-402, das mit einer geeigneten Säure der Formel HX aktiviert ist, um das salzgebildete Produkt in der gesuchten Form zu erhalten; und

(f) Gefriertrocknen des Eluats zur Isolierung des Festprodukts;

(g) Reinigen des Feststoffs aus Schritt (f) durch Chromatographie an C&sub8;-Silica unter Elution mit H&sub2;O/CH&sub3; N 70 : 30.

11. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I):

worin:

X&supmin; das Anion einer pharmakologisch akzeptablen Säure ist, welches die folgenden Schritte umfaßt:

(a') Suspendieren des Alkanoyl-L-carnitinsäurechlorids in einem organischen, wasserfreien, inerten Lösungsmittel, N,N-Dimethylformamid, Acetonitril oder Methylenchlorid;

(b') Zugabe einer Verbindung der Formel Z-Y-Z, worin Y die zuvor genannte Bedeutung hat und Z OH ist, in einer äquivalenten Menge bis zur Hälfte der Mole des Alkanoyl-L-carnitins zur Suspension bei Raumtemperatur;

(c') Halten der Suspension unter Rühren auf Raumtemperatur für 16 bis 24 h, bis die Suspension vollständig solubilisiert ist;

(d') Aufkonzentrieren der Lösung zur Trockene im Vakuum;

(e') Reinigen des so erhaltenen Rohprodukts durch Silicagel- Chromatographie unter Elution mit H&sub2;O/CH&sub2;CN-Lösungen; und

(f') Isolieren der Verbindung durch Aufkonzentrieren und anschließende Gefriertrocknung.