DE69422496T2

DE69422496T2 - Mittel gegen malaria

Info

Publication number: DE69422496T2
Application number: DE69422496T
Authority: DE
Inventors: Goro Chihara; Ivan Havlik; Yutaro Kaneko; Tohru Mimura
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1993-09-20
Filing date: 1994-09-20
Publication date: 2002-07-11
Anticipated expiration: 2014-09-21
Also published as: JP3718849B2; WO1995008334A1; ES2142407T3; EP0676206A1; EP0676206A4; DE69422496D1; CA2148607A1; OA10157A; EP0676206B1; US5780452A; CZ128095A3

Description

Diese Erfindung betrifft ein Antimalariamittel, welches als aktiven Bestandteil ein sulfatiertes Polysaccharid, gegebenenfalls in Kombination mit Chinin enthält.
Malaria ist eine Krankheit, die durch Plasmodien oder Malariaparasiten verursacht wird. Chinin, Chloroquin, Primachin und dergleichen werden derzeit als typische therapeutische Mittel verwendet, welche jedoch wegen der Bildung von resistenten Parasiten gegen diese Arzneimittel nicht immer ausreichend wirksam sind. Es ist auch bekannt, daß sulfatierte Polysaccharide Antiblutgeninnungsaktivität und antiretrovirale Aktivität (offengelegte japanische Patentanmeldung (Kokai) Nr. Sho 62-215529) und dergleichen haben.
WO 92/05790 offenbart die Verwendung einer speziellen Heparinfraktion mit niedriger Affinität für Antithrombin III bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Malaria.
DE-A-19 36 723 offenbart einige Polysaccharidsulfatsalze von Chininalkaloiden, die für den Einsatz gegen Malaria vorgeschlagen werden.
DE-A-11 29 148 offenbart die Herstellung von Heparinderivaten mit cytostatischer Aktivität. Die Derivate werden durch Reaktion von Heparinsäure mit einer basischen Verbindung, die ein Chininalkaloid sein kann, gebildet.
JP-B-63 020 141 offenbart einen Chloroquin-Chondroitin- Schwefelsäurekomplex zur Verwendung bei der Behandlung von Nierenentzündung und Rheumatismus.
JP-A-63 33333 beschreibt die immunstimulierende Wirkung von Chondroitinsulfat enthaltenden Zusammensetzungen.
EP-A-0 385 464 beschreibt immunulogisch aktive Mittel, welche Sulfate eines als "RON" bezeichneten Polysaccarids sind, das ein α-1,6-Glucan mit einer kleinen Menge von 3,6- verzweigten Seitenketten ist.
EP-A-0 375 174 und JP-A-03 218317 offenbaren bestimmte Curdlan- und Lentinansulfate zur Verwendung als antiretrovirale Mittel.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein neues Antimalariamittel bereitzustellen, das eine höhere therapeutische Wirkung hat.
Im Hinblick auf das Ziel, das vorstehend genannte Problem zu lösen, haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung eingehende Studien durchgeführt und gefunden, daß ein sulfatiertes Curdlan Antimalariawirkung hat und, daß der kombinierte Einsatz des sulfatierten Curdlans und des Chinins eine synergistische Wirkung auf die Antimalariaaktivität ausübt. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse wurde die vorliegende Erfindung gemacht.
Dementsprechend betrifft ein erster Aspekt der vorliegenden Erfindung die Verwendung von sulfatiertem Curdlan oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon und gegebenenfalls Chinin bei der Herstellung eines Antimalariamittels, und ein zweiter Aspekt betrifft ein Antimalariamittel, welches sulfatiertes Curdlan oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon und Chinin als aktive Bestandteile enthält.
Sulfatiertes Curdlan hat als Nebenwirkung eine schwache Antigerinnungsaktivität. Sulfatiertes Curdlan mit einem Schwefelgehalt von 5 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise 10 bis 20 Gew.-% und am stärksten bevorzugt 12 bis 17 Gew.-% und einem Gewichtsmittel des Molekulargewichts von 5000 bis 500 000, vorzugsweise 20 000 bis 200 000 und am stärksten bevorzugt 50 000 bis 120 000, gemessen durch Gelfiltration (GPC), wird bevorzugt eingesetzt.
Beispiele der pharmazeutisch geeigneten Salze des sulfatierten Polysaccharids umfassen anorganische Salze, wie das Natriumsalz, Kaliumsalz, Calciumsalz, Magnesiumsalz und dergleichen.
Das erfindungsgemäße Antimalariamittel kann als wahlweise Dosierungsformen, wie Injektionen, Tropfeinläufe, Zäpfchen und dergleichen, ohne spezielle Beschränkung dargestellt werden.
Die Präparation des aktiven Bestandteils der vorliegenden Erfindung in ein Arzneimittel kann, wieder ohne besondere Einschränkung, auf die übliche Weise unter Verwendung von Füllstoffen oder Trägern, wie Lactose, Glucose, Mannitol, Maltose, Aminosäuren, Gelatine, destilliertem Wasser, Ethanol und dergleichen, durchgeführt werden.
Die Dosis des erfindungsgemäßen Antimalariamittels variiert in Abhängigkeit vom Alter, dem Körpergewicht und den Symptomen jedes Patienten und des Verabreichungsverfahrens und ist im allgemeinen 1 bis 1000 mg/kg Gewicht · Tag, vorzugsweise 10 bis 500 mg/kg Gewicht · Tag, bezogen auf den aktiven Bestandteil. Das erfindungsgemäße Antimalariamittel kann kontinuierlich oder wiederholt verabreicht werden.
Das erfindungsgemäße Antimalariamittel übt seine Antimalariawirkung aus, wenn es vor oder nach der Malariainfektion verabreicht wird.
Ein zweiter Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft ein Antimalariamittel, das ein sulfatiertes Curdlan oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon und Chinin als aktive Bestandteile enthält.
Wie vorstehend beschrieben, zeigen nach den Ergebnissen der Erfinder der vorliegenden Erfindung sulfatiertes Curdlan und Chinin im Hinblick auf die Antimalariaaktivität eine synergistische Wirkung. Das heißt, wenn das sulfatierte Curdlan, das erfindungsgemäß einzusetzen ist, zusammen mit Chinin verwendet wird, das ein herkömmliches Antimalariamittel ist, wird im Vergleich mit der arithmetischen Summe ihrer therapeutischen Wirkungen, wenn sie getrennt eingesetzt werden, eine höhere therapeutische Wirkung erreicht (vergl. Testbeispiel 2, das nachstehend beschrieben wird).
In diesem Fall können sulfatiertes Curdlan und Chinin in einem Verhältnis von 20 : 1 bis 20 000 : 1 (sulfatiertes Curdlan : Chinin) verabreicht werden, und die Dosis kann 0,5 bis 500 mg/kg Gewicht · Tag, vorzugsweise 5 bis 200 mg/kg Körpergewicht·Tag sein, ausgedrückt als die Summe beider aktiven Bestandteile.
Fig. 1 bis 3 zeigen die Ergebnisse der jeweiligen Testbeispiele 1 bis 3.
Die folgenden Beispiele werden bereitgestellt, um die vorliegende Erfindung anschaulich zu beschreiben, der technische Umfang der vorliegenden Erfindung wird dadurch jedoch nicht eingeschränkt.

Testbeispiel 1:

Es wurde die Wirkung von sulfatiertem Curdlannatrium (CRDS; Molekulargewicht: 80 000; Schwefelanteil: 14,5%) auf die Infektion von menschlichen Erythrocyten mit Merozoiten eines gegen Chloroquin resistenten Malariaparasiten Plasmodium falciparum Stamm FCR 3 untersucht.
Die mit Merozoiten infizierten menschlichen Erythrozyten, die durch das Lambros-Vanderberg-Verfahren synchronisiert worden waren (Infektionsverhältnis: 0,5%; Hämatokritwert: 1%), und CRDS wurden in verschiedenen Konzentrationen auf eine 96-Loch-Mikroplatte gegeben und auf die übliche Weise 78 Stunden bei 37ºC unter Verwendung eines Mediums kultiviert, das durch Auflösen von 10,4 g RPMI 1640, 5,9 g HEPES-Puffer, 4,0 g Glucose und 44 mg Hypoxanthin in 1 Liter Wasser und Zugeben von Gentamicin zu der erhaltenen Lösung auf eine Konzentration von 50 mg/ml hergestellt worden war. Das Wachstum der Merozoiten wurde auf der Grundlage der Aufnahme von Tritium (3H)-markiertem Hypoxanthin gemessen, um die Wirkung von CRDS, die Infektion zu inhibieren, zu untersuchen.
Dieser Test wurde dreimal durchgeführt, und die Konzentration für die 50%ige Inhibition (IC&sub5;&sub0;) wurde für jeden Ansatz bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt. Die IC&sub5;&sub0;-Werte waren 2,9, 5,5 bzw. 4, 95 ug/ml.

Testbeispiel 2:

Um die Wirkung der kombinierten Verwendung von sulfatiertem Curdlan (CRDS) und Chinin auf den gegen Chloroquin resistenten P. falciparum Stamm FCR 3 zu untersuchen, wurde ein anderer, dem Testbeispiel 1 ähnlicher Test durch Änderung des Verhältnisses beider Bestandteile durchgeführt, um den IC&sub5;&sub0;-Wert bei jedem Verhältnis zu bestimmen.
Mit Merozoiten infizierte menschliche Erythrocyten, die durch das Lambros-Vanderberg-Verfahren synchronisiert worden waren (Infektionsverhältnis: 0,5%; Hämatokritwert: 1%), und CRDS (dasselbe wie in Testbeispiel 1 eingesetzte Material) und Chinin wurden bei einem bestimmten CRDS/Chinin-Verhältnis, wobei jedoch die Konzentrationen unterschiedlich waren, auf eine 96-Loch-Mikroplatte gegeben und auf die übliche Weise 78 Stunden bei 37ºC unter Verwendung des in Testbeispiel 1 beschriebenen Mediums kultiviert. Das Wachstum der Merozoiten wurde auf der Grundlage des Einbaus von Tritium (3H)-markiertem Hypoxanthin gemessen, um die Wirkung der kombinierten Verwendung von CRDS und Chinin auf die Inhibition der Infektion zu untersuchen.
Die Konzentrationen von CRDS und Chinin, die 50% des Wachstums inhibieren, wurden bei jedem Verhältnis gemessen, und ihre relativen Werte zu dem IC&sub5;&sub0;-Wert jedes allein eingesetzten Mittels (CRDS: 4,95 ug/ml; Chinin: 41,6 nM) wurden unter Herstellung eines Isobologramms aufgetragen. Bie Ergebnisse sind in Fig. 2 gezeigt. Da jede Auftragung unter der geraden Linie zwischen den IC&sub5;&sub0;-Werten beider allein eingesetzten Mittel gefunden wurde, wurde bestätigt, das CRDS und Chinin eine synergistische Wirkung zeigen.

Testbeispiel 3:

Es wurde die Wirkung von sulfatiertem Curdlan (CRDS), die Malarainfektion zu inhibieren, unter Verwendung eines Mausmodellsystems untersucht.
Eine Gesamtmenge von 106 Mauserythrocyten, die mit einem Maus-Haemosporina, Plasmodium berghei, infiziert worden waren, wurden in die Bauchhöhle jeder BALB/c-Maus (männlich) mit etwa 25 g Körpergewicht inokuliert, wodurch die Infektion bewirkt wurde. Wenn die Parasiten wuchsen und das Parasitenblut etwa 10% des Gesamtblutes betrug, wurde CRDS (dasselbe wie in Testbeispiel 1 verwendete Material) in einer Dosis von 0, 50, 100 oder 200 mg/kg/Tag subcutan verabreicht, wobei jede tägliche Dosis in vier Dosen pro Tag zur Verwendung in sechsstündigen Abständen geteilt wurde.
Das Parasitenblutverhältnis wurde jeden Tag gemessen. Die Ergebnisse sind in Fig. 3 gezeigt. Es wurde bestätigt, daß die die Infektion inhibierende Wirkung mit zunehmender Dosis von CRDS steigt.

Claims

1. Verwendung von sulfatiertem Curdlan oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes davon und gegebenenfalls Chinin bei der Herstellung eines Antimalariamittels.

2. Antimalariamittel, welches sulfatiertes Curdlan oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz davon und Chinin als aktive Bestandteile enthält.