DE69028410T2

DE69028410T2 - Wirkstoff zur bekämpfung von viren der retrovirengruppe, diesen enthaltende zusammensetzungen und deren verwendungen

Info

Publication number: DE69028410T2
Application number: DE69028410T
Authority: DE
Inventors: Helene B-1301 Bierges Margery; Michel B-1301 Bierges Vandevelde
Original assignee: Previsan SA
Current assignee: Previsan Ag Zug Ch
Priority date: 1989-12-06
Filing date: 1990-12-05
Publication date: 1997-04-24
Anticipated expiration: 2010-12-06
Also published as: EP0504184B1; HK1008388A1; WO1991007876A1; JPH05505390A; EP0504184A1; AU6870691A; DE69028410D1; ATE142075T1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Desinfektionsmittel, das zur Bekämpfung von Viren aus der Gruppe der Retroviren, insbesondere von Human- Immuninsuffizienz Viren (HIV), wenigstens einen Wirkstoff in Form einer Verbindung aus der Gruppe der organischen Chloramine enthält. Sie betrifft ferner die Verwendung dieses Mittels und dieser Zusammensetzungen.
Retroviren sind nach der Erfindung definiert als Viren, deren genetisches Material in einer Ribonukleinsäurekette enthalten ist, die zu ihrer Reproduktion das Umschreiben in Form einer Desoxyribonukleinsaure mittels einer als reverse Transkriptasen bezeichneten Gruppe von Enzymen erfordert.
Diese Viren infizieren Pflanzen und Tiere ebenso wie den Menschen. Eine nicht vollständige Liste dieser Viren wird von J.M. Huraux et al. in Virologie, Flammarion Médicine- Sciences (1985), Paris angegeben. Eine Anzahl dieser Viren hat bei Tieren ihre onkogene Fähigkeit gezeigt, und neuere Untersuchungen zeigen das gleiche Risiko beim Menschen.
Diese für Krebs bei Tieren verantwortlichen Viren dienen als Modelle zur Erforschung von Molekülen, die geeignet sind humane Erkrankungen unter Kontrolle zu bringen.
Es sind etwa 70 Jahre seit der Entdeckung das Rous-Sarkom-Virus (Mäusekrankheit), daß das erste Retrovirus entdeckt wird, das für Leukämie beim Menschen verantwortlich ist.
Diese Viren (HTLV I und HTLV II) scheinen mit Virenarten verwandt zu sein, die Affen infizieren, und die Erkrankung wird nur in bestimmten Regionen auf der Welt beobachtet. Der Krankheitsverlauf führt schnell zum Tod, und es ist keine Behandlung bekannt.
Ansonsten erzeugen gewisse Retroviren keinen Krebs, sondern andere Krankheiten (Encephalitis, Anämie, Pneumonie beispielsweise beim Tier) und insbesondere Erworbene Immuninsuffizienz (AIDS) beim Tier und beim Menschen.
Die internationale Bezeichnung HIV wurde für die Human-Viren, die für dieses Syndrom verantwortlich sind, akzeptiert. Diese sind zu Mutationen fähig, und es sind bereits 4 verschiedene Viren identifizierbar. Ebenso erhielten die Viren, welche für die Immuninsuffizienz beim Affen verantwortlich sind, die Bezeichnung SIV.
Selbstverständlich ist das Hauptproblem das Auftreten von AIDS beim Menschen und seine schnelle, weltweite Verbreitung.
Diese Krankheit, welche die Abwehr des Kranken beeinträchtigt, erlaubt das Auftreten von opportunistischen Krankheiten, wie einer gewissen Krebserkrankung (Kaposi), die zum Tod des Patienten führt.
Bis heute ist lediglich eine Behandlung bekannt, die das Leben der Patienten verlängert ohne jedoch die Heilung zu ermöglichen. Diese Behandlung umfaßt die Verabreichung von 3'-Azido-3'-desoxythymidin (siehe EP-A-196 185). Diese Substanz hat sich als sehr toxisch und teuer erwiesen. Es scheint ansonst schon allgemein anerkannt zu sein, daß das Virus gegen dieses Molekül nach mehr oder weniger langer Zeit, insbesondere nach etwa 12 bis 18 Monaten, resistent wird (E. Schulhafer et al. "Acquired immuno-deficiency syndrome ...", In Vivo 3(2) (1989), 61-78).
Ebenso wurde die Verwendung von gewissen, gegebenenfalls halogensubstituierten Benzidinderivaten als Medikament gegen Retroviren betrachtet (FR-A-2 612 515). Jedoch gibt es in diesem Dokument lediglich eine einfache Behauptung, welche die Wirksamkeit dieser Verbindungen betrifft.
Die Übertragungswege der Viren waren auf den direkten Blutkontakt und den Kontakt über die Wunde durch infiziertes Material zurückzufhren. Das Übertragungsrisiko durch Gegenstände und insbesondere durch infiziertes medizinisches Material ist nicht zu vernachlässigen.
Der sexuelle Übertragungsweg und die Übertragung auf Kinder durch infizierte Muttermilch sind ebenfalls bekannt, was den möglichen Durchgang der infizierenden Teilchen durch gesunde Schleimhäute aufzeigt (P. Lepage et al. "Postnatal Transmission of HIV from Mother to Child", The Lancet, 15. August 1987, S. 400; C.J. Miller et al. "Genital Mucosal Transmission of Simian Immunodeficiency Virus", Journal of Virology, Okt. 1989, S. 4277- 4284).
Es scheint immer wahrscheinlicher, daß es eine Inokulation des Virus durch einfachen Kontakt, d.h. durch die Haut oder eine Schleimhaut, geben kann. Gewisse Forscher haben die Meinung geäußert, daß die inokulierten Viren eine Replikationsphase zu kennen scheinen, während der sie im Bereich der Schleimhaut oder der Haut des Trägers bleiben. Diese Phase könnte sich über mehrere Monate erstrecken. Erst in einer zweiten Phase würden sich die Viren und/oder ihre Bestandteile von der Schleimhaut ausgehend verbreiten (R. Zittoun "Syndrome Immuno Déficitaire Acquis", Doins Editeurs, Paris (1986), S. 183-184).
Die Aufklärung der Moleküle, welche die Desinfektion von Oberflächen und leblosen Gegenständen sowie von Stoffen und Produkten, die mit den Schleimhäuten und der Haut in Kontakt kommen, gestatten, erweist sich daher zur Ausrottung der Krankheit als notwendig. Es ist unumgänglich, die Übertragung der Retroviren vom Träger auf eine gesunde Person im Rahmen des Möglichen zu verhindern. Schließlich wäre es vorteilhafterweise wünschenswert, wirksame therapeutische Zusammensetzungen, die falls möglich systemisch, jedenfalls lokal, insbesondere während der als "Schleimhautphase" bezeichneten Infektionsphase wirkt, bereitzustellen.
Man kennt bereits Zusammensetzungen und ein Verfahren zur Desinfektion auf der Grundlage von naturlichen oder synthetischen Oligosacchariden oder Polysacchariden, die wenigstens eine S-Oxosäuregruppe aufweisen (siehe EP-A-285 357). Aus den angeführten Beispielen ergibt sich jedoch deutlich, daß, selbst wenn diese Zusammensetzungen gegenüber den Retroviren wirksam sind, sie immer einen Teil der vorhandenen Viren fortbestehen lassen, der auf Dauer gesehen eine enorme Gefahr angesichts des Auftretens einer resistenten, noch gefährlicheren Viruspopulation darstellt.
In der Europäischen Patentanmeldung Nr. 88 87 0139.8 wurden bereits Produkte betrachtet, die im Kontakt mit der Haut, den Schleimhäuten oder Körpersekreten lokal eindringen können, wobei diese Produkte einen Wirkstoff zur Bekämpfüng von Viren aus der Gruppe der Retroviren, beispielsweise Natriumsuramin, umfassen.
Ansonsten wurden bereits die Wirkung üblicher chemischer Desinfektionsmittel, wie Ethanol, Glutaraldehyd, Natriumhypochlorit, Formalin, β-Propiolacton, denaturierter Alkohol, gegenüber Retroviren untersucht (V.B. Spire et al. "Inactivation of Lymphadenopathy associated virus by chemical disinfectants", The Lancet, 20. Oktober 1984, S. 899-901; P.J.V. Hanson et al. "Chemical Inactivation of HIV on surfaces", Br. Med. J. 298 (1989), 862-4; L. Resnick et al. "Stability and inactivation of HTLV-III/LAV under clinical and laboratory environments", JAMA 255 (1986), 14; L.S. Martin et al. "Disinfection and inactivation of the human T lymphotropic Virus type III/lymphadenopathy-associated virus", The Journal of Infectious Diseases 152(2) (1985)).
Aus diesen Untersuchungen ergibt sich, daß die Mehrzahl der in Krankenhäusern verwendeten Desinfektionsmittel unwirksam oder wenig wirksam gegenüber den HIV- Retroviren und demzufolge potentiell gefährlich sind. Diejenigen, welche sich als am wirksamsten erwiesen haben, erfordern Kontaktzeiten von wenigstens 10 Minuten, was im Fall der Reinigung von beispielsweise Böden, Tischen usw. technisch schwierig ist. Schließlich scheinen einige dieser Desinfektionsmittel ihre Wirksamkeit in Gegenwart von Proteinmedien zu verlieren, oder sie sind nicht anwendbar, wenn sie mit der Haut oder den Schleimhäuten eines lebenden Körpers in Kontakt kommen müssen oder Gefahr laufen in Kontakt zu kommen, aufgrund ihrer chemischen Aggressivität in der starken Konzentration, in welcher man sie verwenden muß (siehe WHO AIDS (séries) 2. Aufl. (1989), 7-8).
Schließlich ergibt sich aus der Literatur, daß sich die Mehrzahl der durchgeführten Versuche an den Verbindungen zur Untersuchung ihrer Wirksamkeit gegenüber den HIV-Viren auf die Untersuchung der enzymatischen Wirksamkeit des Virus, d.h. der Wirkung auf die reversen Transkriptase, beschränkt. Diese Testart ist nicht sehr empfindlich; tatsächlich ist diese enzymatische Wirksamkeit nur nachweisbar, wenn eine große Anzahl infizierender Teilchen vorhanden ist. Dieser Test erlaubt es nicht, die Zerstörung oder das Verschwinden des inaktiven Virus nachzuweisen.
Die vorliegende Erfindung hat folglich zum Ziel ein Desinfektionsmittel, wie zu Beginn zitiert, bereitzustellen, das auf Retroviren gründlich unter vollständiger Beseitigung derselben wirkt, wobei es seine Wirksamkeit für einen langen Zeitraum beibehält. Vorteilhafterweise wird das Mittel sein Wirkungspotential im Zellmedium, im wäßrigen Medium so wie in Gegenwart von organischen Medien, insbesondere Proteinen, beibehalten. Seine Toxizität wird vorzugsweise wenig ausgeprägt sein. In einer bevorzugten Form wird die keimtötende Wirkung gegenüber HIV-Viren sehr schnell sein.
Es ist klar, daß der Wirkstoff gemäß seiner Verwendung, sei dies die Desinfektion von Böden oder die Desinfektion von organischen Abfällen, die beispielsweise aus Analyselaboratorien stammen, den verschiedenen Erfordernissen an Löslichkeit, Toxizität oder Stabilität entsprechen muß.
Überraschenderweise hat man nun entdeckt, daß gewisse chlorierte Verbindungen die Rolle des gesuchten Wirkstoffs in besonders wirksamer und gründlicher Weise spielen können. Um die gestellten Probleme zu lösen, ist nach der vorliegenden Erfindung folglich die Verwendung einer Zusammensetzung vorgesehen, welche die charakteristischen Einzelheiten der Patentansprüche 1 oder 2 aufweisen.
Die kondensierten N-Chloramin-Derivate, die von Guanidin stammen und in ihrer Eigenschaft als Wirkstoffe in einer solchen Zusammensetzung verwendet werden, sind chlorierte organische Verbindungen, die insbesondere für ihre stabile und langanhaltende Freigabe von verfügbarem Chlor bekannt sind (S.S. Block "Disinfection, Sterilization, and Preservation", 3. Aufl., Lea & Febiger, Philadelphia (1983), S. 173).
Chlorazodin, das erfindungsgemaß als Wirkstoff in einem Desinfektionsmittel eingesetzt wird, ist ebenfalls seit langem als Desinfektionsmittel bekannt (siehe US-A- 2 073 256 und GB-A-421 006).
Die Verwendung dieser Substanzen zur wirksamen und schnellen Bekämpfüng der Viren, insbesondere der Retroviren wird jedoch in den Veröffentlichungen nach dem Stand der Technik weder beschrieben noch vorgeschlagen.
Gewisse organische Verbindungen sind in Wasser gut löslich oder ihre Löslichkeit kann durch Zugabe von für diesen Effekt üblichen Hilfsstoffen verbessert werden. Chlorazodin weist in für Zellen nichttoxischen Konzentrationen ein sehr breites Wirkunsspektrum auf pathogene Organismen auf. Es scheint durch die Gegenwart von Proteinen nicht oder nur wenig beeinflußt zu werden.
Insbesondere weist Chlorazodin eine stabile und langanhaltende Wirkung gegenüber den HIV-Retroviren auf, weiterhin ist diese Wirkung zu 100% vollständig und sie erfolgt in sehr kurzer Zeit, in der Größenordnung von einer Minute, und dies bei äußerst geringen Konzentrationen.
Als geeigneter Träger können vorteilhafterweise Wasser oder ein beliebiges anderes geeignetes Lösungsmittel als Vehikel vorgesehen werden, in dem der Wirkstoff gelöst wird. Weitere Desinfektionsmittel oder übliche Hilfsstoffe können gegebenenfalls zusätzlich enthalten sein.
Insbesondere bei einer Zusammensetzung, die Chlorazodin und Cetrimid bzw. ein Laurylsulfat enthält, wurde nachgewiesen, daß sie ein breites unerwartetes Spektrum nicht nur gegenüber Bakterien und Viren besitzt, sondern auch gegenüber Pilzen.
Nach der Erfindung wird die Verwendung von vorstehend erwähnten Desinfektionsmitteln zur Desinfektion von leblosen Objekten gegenüber Viren aus der Gruppe der Retroviren, insbesondere von Human-Immuninsuffizienz-Viren (HIV) vorgesehen.
Unter Desinfektion gegenüber dem Retrovirus ist nicht nur die Zerstörung der pathogenen Organismen zu verstehen, sondern auch das Verhindern des Eindringens in lebende Zellen.
Als zu desinfizierende leblose Objekte kann man bei der erfindungsgemäßen Verwendung beispielsweise
- Sanitärmaterialien aus Kunststoff, Textil oder Kautschuk: Watte, absorbierende Baumwolle, Mullbinde, Verbände, Toilettenpapier, Verpackungsfolien usw.
- medizinische, tiermedizinische und zahnmedizinische Instrumente und Apparate: Spritzen, Kanülen, Sonden, Klammern, Scheren, Besteck zum Magenspülen, chirurgische Tische, Becken usw.
- medizinische, tiermedizinische und zahnmedizinische Kleidung: Handschuhe, Hemden, Tücher usw.
- Objekte aus dem Lebensmittelbereich, die eine Bearbeitung erfordern: Saugflaschen, Kochtöpfe, Flaschen oder Dosen, insbesondere für Getränke, usw.
- kosmetische Instrumente: Material und Ausrüstung zum Frisieren, Maniküren, Pediküren, Kosmetik usw.
- Sanitätsfahrzeuge: Krankenwagen, Rolltische usw.
- Boden- und Wandoberflächen: Räume, insbesondere in Krankenhäusern, usw.
- Sanitär- und Hygienegeräte: Waschbecken, Bettpfannen, Spülbecken, Badewannen usw.
- Getränke: Wasser, das für Getränke notwendig ist, Milch usw.
- Badewasser
vorsehen.
Man kann auch die Desinfektion von Exkrementen, von Analysenrückständen aus Laboratorien und insbesondere von aus Mensch- oder Tierkörpern entnommenen Proben, beispielsweise im Hinblick auf eine Analyse vorsehen.
Nach der Erfindung ist es vorteilhaft, vorzusehen, daß die kosmetischen Zusammensetzungen gleichfalls wenigstens einen erfindungsgemäßen Wirkstoff enthalten. In diesem Fall ist es selbstverständlich, daß verschiedene in diesem Bereich übliche Träger und Hilfsstoffe verwendet werden können.
Man kann eine besondere Verwendung eines erfindungsgemäßen Wirkstoffes oder emer erfindungsgemäßen wirksamen Zusammensetzung in oder auf Produkten vorsehen, die für den Kontakt mit der Haut oder den Schleimhäuten im menschlichen oder tierischen Körper, die möglicherweise Träger von Viren sind, in Frage kommen. Zusätzlich zu seiner desinfizierenden Wirkung kann der Wirkstoff oder die wirksame Zusammensetzung in oder auf gewissen Produkten, wie den Handschuhen von Chirurgen oder Zahnärzten, Pessaren, Kondomen usw., vorteilhafterweise ein Sperrmedium für die Übertragung von Retroviren eines Virenträgers auf eine gesunde Person erzeugen. Man kann beispielsweise vorsehen, daß ein Kondom aus Kautschukmaterial mit Hilfe von Vaseline, die einen erfindungsgemäßen Wirkstoff enthält, eingeschmiert wird. Für Handschuhe von Chirurgen kann man auch zwei Kautschukhäutchen vorsehen, zwischen die ein Pulver aus beispielsweise Amylaseamylopektin, das einen erfindungsgemäßen Wirkstoff enthält, eingeschlossen ist. Im zuletzt genannten Fall ist das Desinfektionspulver, das als Sperre dient, folglich nicht selbst in direktem Kontakt mit der Haut.
Die Erfindung hat gleichfalls zur Aufgabe wenigstens ein kondensiertes N-Chloramin- Derivat, das von Guanidin-Derivaten oder von Chlorazodin stammt, zur Herstellung einer therapeutischen Zusammensetzung einzusetzen, um diese zur Behandlung oder Prophylaxe von Infektionen durch Viren aus der Gruppe der Retroviren, insbesondere bei Infektionen durch Human-Immuninsuffizienz-Viren (HIV) anzuwenden. Vorzugsweise kann man Chlorazodin verwenden, dessen Wirksamkeit gegenüber HIV-Viren bereits bei einer äußerst geringen Konzentration in eine Größenordnung von 1 mg/ml bis 300 µg/ml, vorzugsweise 660 µg/ml bis 330 µg/ml, vollständig ist.
Unter Desinfektion kann man hier auch eine enzymatische oder andere intrazelluläre Desaktivierung verstehen.
Die erfindungsgemäßen organischen Verbindungen sind geeignet ihre Stabilität im Zellmedium zu bewahren, sie sind für lebende Organismen verträglich und für die Zellen nichttoxisch. Das Vorhandensein von Proteinen beeinflußt ihre Wirkung auf die langsame und stabile Freisetzung von verfügbarem Chlor nicht spürbar. Insbesondere kann man die Herstellung von örtlichen Desinfektionsmitteln, ausgehend beispielsweise von Chlorazodin, vorsehen, zum Beispiel zur Desinfektion von Wunden, Geschwüren oder Teilen der Haut und der Schleimhäute. Durch die ausgezeichnete Stabilität von Chlorazodin im Proteinmedium, kann man sogar seine Verwendung zur Herstellung von Medikamenten zur systemischen Behandlung von AIDS in Betracht ziehen.
Die erfindungsgemäßen organischen Verbindungen weisen, wie bereits ausgeführt, den Vorteil auf, daß sie ein breites keimtötendes Wirkungsspektrum bieten, und folglich stellen sie bereits eine beachtliche Abwehr gegen das Vorhandensein anderer pathogener oder allogener Stoffe als HIV-Retroviren dar.
Diese letzte Eigenschaften ist nicht nur für die erhaltene starke Desinfektionswirkung wichtig, sondern auch, weil sie für den Träger des Virus selbst nützlich sein kann. In der Tat soll dieser jede Aktivierung seiner lymphozytären Zellen soweit wie möglich vermeiden. Diese Aktivierung hat bei einem HIV-Träger die Replikation des Virus und dessen Vermehrung in den Zellen zur Folge. Es empfiehlt sich für HIV-Träger die hygienischen Lebensgewohnheiten zu befolgen, die jede Gefahr der Aktivierung der infizierten Zellen und demgemäß eine Immunreaktion seines Organismus so weit wie möglich ausschalten.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen bietet jemandem die Möglichkeit, sich zu desinfizieren, aber zusätzlich auch sich gegen Immunreaktionen anderer Herkunft zu schützen.
Die Erfindung wird nun ausführlicher mit Hilfe einiger nichtbegrenzender Ausführungsbeispiele beschrieben.

Beispiel 1

Desinfektionspulver zum Waschen
Chlorazodin 250 mg
Lactose 1 g
Dieses Pulver kann in einem Beutel aufbewahrt und in 1 l Wasser aufgelöst werden.

Beispiel 2

Vaginaltabletten
In Pulverform mischt man Chlorazodin, Weinsäure und Natriumhydrogencarbonat in pharmazeutisch geeigneten Mengenanteilen, anschließend preßt man das Ganze in Form von Vaginaltabletten.
Die experimentellen Versuche wurden vom Laboratorium des L'Institut Pasteur du Brabant durchgeführt, um die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Mittel zu untersuchen.

Diese Versuche umfassen als Ausgangsmaterial:

- N,N'-Dichlorazodicarbonamidin (Chlorazodin) in 95%iger Reinheit. Die Reinheit wurde durch Dünnschichtchromatographie und eine Kohlenstoff-Wasserstoff-Untersuchung (siehe G.I. Braz et al., J. Applied Chem. (USSR) 17 (1944), 565-9) bestimmt.
- der Überstand der Zellkulturen (Molt-3), die kontinuierlich HIV-Viren erzeugen. Der verwendete, virale Überstand hat eine Aktivität der reversen Transkriptase von 1 x 10&sup6; cpm/ml
- Zellen einer humanen T-Zelllinie abgeleitet vom Pheno-Typ T&sub4; (Supt-1), die in RPMI- Medium unter Zugabe von 10% fötalem Kälberserum und 1% Glutamin kultiviert werden.
Die Wirksamkeit von Chlorazodin wird auf zwei Niveaus bestimmt:
a) Wirkung auf die Infizierbarkeit von Supt-1-Linien durch das HIV I-Virus.
b) Wirkung auf die Integration des viralen Genoms in die chromosomalen DNS der Supt-1- Zellen.
Die Ergebnisse dieser Versuche sind nachfolgend in den Beispielen 3 bis 5 angegeben.

Beispiel 3

Untersuchung der Toxizität von Chlorazodin gegenüber Supt-1-Zellen

Chlorazodin in einer Verdünnung von 1/500, was 2 mg/ml entspricht, wirkt auf Supt-1- Zellen toxisch. Verdünnungen von 1/1500 und 1/3000, die Konzentrationen von 660 µg/ml und 330 µg/ml entsprechen, verringerten dagegen die Lebensfähigkeit der Zellen nicht.

Beispiel 4

Infizierbarkeit der Supt-1-Linie durch das HIV I-Virus

Man inkubiert virale HIV I-Präparate mit hohem Titer in Gegenwart von Chlorazodin in Verdünnungen von 1/1500 und 1/3000 und während verschiedener Inkubationszeiten. Man behandelt die Supt-1-Zellen zunächst während 30 Minuten bei 37ºC mit 10 µg/ml Polybren, anschließend werden sie mit den virus-behandelten Präparaten inokuliert. Man verwendet als Vergleichsproben nichtokulierte Zellen und nicht behandelte Zellen, die mit einem virusbehandelten Präparat inokuliert wurden.
Daraufhin bestimmt man bei jeder Passage der Zelle die Infizierbarkeit der Präparate nachfolgend auf die virale Produktion (ausgedrückt durch Messung des Antigens p24) in den solubilisierten Zell-Lysaten der untersuchten Supt-1-Zellen.
Die Messungen des Infektionsvermögens des HIV I-Virus nach der Inkubation mit Chlorazodin werden in den nachfolgenden Tabellen 1 bis 3 ebenso wie in den Figuren 1 bis 3, welche den Tabellen 1 bis 3 entsprechen, aufgeführt. In den Figuren befindet sich auf der Ordinate die optische Dichte (opt. Dichte) und auf der Abszisse die Anzahl der Tage nach der Infektion. Die durchgezogene Linie gibt die nichtbehandelte Vergleichsprobe, die unterbrochene Linie die Verdünnung des Chlorazodin von 1/1500 und die punktierte Linie die Verdünnung des Chlorazodins von 1/3000 wieder. Tabelle 1 Messung der Infizierbarkeit mit dem HIV I-Virus 1 Minute nach der Inkubation mit Chlorazodin (Figur 1)
Blindwert: 0,186 ± 0,004 Tabelle 2 Messung der Infizierbarkeit mit dem HIV I-Virus 10 Minuten nach der Inkubation mit Chlorazodin (Figur 2)
Blindwert: 0,186 ± 0,004 Tabelle 3 Messung der Infizierbarket mit dem HIV I-Virus 30 Minuten nach der Inkubation mit Chlorazodin (Figur 3)
Blindwert: 0,186 ± 0,004
Aus diesem Versuch ergibt sich, daß Chlorazodin in Verdünnungen von 1/1500 und 1/3000 die Vervielfältigung des HIV I-Virus in den Supt-1-Zellen vollständig verhindert, und dies nach 1-, 10- und 30 minütiger Inkubation mit dem Wirkstoff bei Normaltemperatur.
Im Phasenkontrastmikroskop beobachtete man ansonsten keinerlei zytopathogene Auswirkung auf die Zellen, die mit dem Virus, das mit Chlorazodin vorbehandelt wurde, inokuliert wurden. Dagegen treten ab dem 14. Tag nach der Infektion mit dem Präparat der Virusprobe Synzyten auf

Beispiel 5

Integration des viralen Genoms in die chromosomale DNS der Supt-1-Zellen
Durch Genamplifikation mittels einer thermostabilen Polymerase belegte man das Vorhandensein der Gene "gag", "LIR" und "env" des HIV I-Provirus. Dieses Verfahren wird als PCR (Polymerase Chain Reaction) bezeichnet (Chin-Yih Ou et al, Sciences 239 (1988), 295- 297).
Dieses Verfahren eignet sich zum Nachweis des HIV I-Provirus im Genom der Supt-1- Zellen, die mit dem mit Chlorazodin inkubierten HIV I-Virus, wie in Beispiel 4 beschrieben, inokuliert wurden.
Amplifizierte und mittels Ethidiumbromid im UV sichtbare Oligonukleotide erscheinen nur in den Versuchsröhrchen, die einer Inokulierung mit dem HIV I-Virus, das nicht mit Chlorazodin behandelt wurde, entsprechen.
Ebenso kann man nach der Hybridisierung mit für die drei untersuchten Gene spezifischen Sonden, die mit ³²P markiert wurden, auf die vollständige Abwesenheit des HIV I-Provirus in den Supt-1-Zellen schließen, wobei diese als Inokulate der HIV I-Virionen, die mit Chlorazodin in Verdünnungen von 1/1500 und 1/3000 behandelt wurden, erhalten werden.
Folgerichtig ist aus den Versuchen der Beispiele 3 bis 5 klar zu erkennen, daß die Ausrottung der Viren durch Chlorazodin bei geringen Konzentrationen in den behandelten Zellen in sehr kurzer Zeit (1 Minute oder weniger) vollständig ist. Es ist wichtig, festzuhalten, daß diese bemerkenswerte Wirksamkeit des Chlorazodins in organischem Medium vorhanden ist.

Beispiel 6

Humane Lymphozyten, die aus periphärem Blut von Spendern der Blutgruppe Nullnegativ (PBL) stammen, wurden mit HIV I infiziert, das aus dem Überstand von Molt-3- Zellen, d.h. von Zellen, die kontinuierlich diese Viren erzeugen, stammt.
Am 8. Tag der Infektion wurde diese anhand des Antigens p24 (ELISA-Test, siehe Beispiel 4) überprüft.
Vier Zellpopulationen wurden im Hinblick auf ihre Mortalität untersucht:
1 gewöhnliche Lymphozyten in Kultur (Vergleichsprobe A),
2 gewöhnliche Lymphozyten in Gegenwart von Chlorazodin 1/3000,
3 nichtbehandelte, infizierte Lymphozyten (Vergleichsprobe B),
4 infizierte Lymphozyten in Gegenwart von Chlorazodin 1/3000. Tabelle 4
Die Vergleiche zeigen, daß die infizierten Lymphozyten in Gegenwart von Chlorazodin stärker zerstört werden.
Tatsächlich sind die Unterschiede zwischen den Vergleichsproben A und B und den Blutlymphozyten + Chlorazodin nicht signifikant, wenngleich die infizierten Lymphozytenkulturen in Gegenwart von Chlorazodin eine um 15% erhöhte Mortalität aufweisen.
Folglich kann man auf eine selektive Toxizität von Chlorazodin auf infizierte Zellen schließen.

Beispiel 7

Molt-3B-Zellen, die kontinuierlich HIV-Viren erzeugen, wurden mit Chlorazodin in Konzentrationen von 1/1500 und 1/3000 während Zeiträumen von 1, 10 und 30 Minuten behandelt.
Die Antigene p24, ausgedrückt durch den Überstand in den Kulturen, wurden nach 24, 48, 72 und 96 Stunden abgeschätzt.
Um diese Wirkung zu messen und dabei die Toxizität des Produkts auf die infizierten Zellen zu umgehen, wählte man eine aussergewöhnlich große Anzahl von Zellen, um auf diese Weise eine sehr kleine, aber ausreichende Anzahl von lebenden Zellen nach 96 Stunden zu erhalten. Tabelle 5 Messung des Infektionsvermögens von HIV-I-Viren in Molt-3B-Zellen (optische Dichte)
Als Schlußfolgerung ergibt sich, daß Chlorazodin die Erzeugung von HIV in den infizierten Zellen hemmen kann, und daß es im Fall der Repopulation mit nichtinfizierten Zellen ermöglicht, daß nach einem Zeitraum von 96 Stunden nichtinfizierte Kulturen erhalten werden.

Beispiel 8

Man führte das Experiment von Beispiel 7 erneut durch, aber mit humanen Lymphozyten, die mit HIV I infiziert sind. Chlorazodin wurde bei den infizierten Zellen in einer Dosis von 1/3000 während 1, 3 und 6 Stunden angewandt. Tabelle 6 Messung des Infektionsvermögens von HIV I-Viren in infizierten humanen Lymphozyten (optische Dichte)
Die gleichen Schlußfolgerungen, wie diejenigen welche in Beispiel 7 abgeleitet wurden, können wieder angeführt werden.
Um eine ausreichende Anzahl an lebenden Lymphozyten zu bewahren, mußte das Experiment auf 6 Stunden begrenzt werden.

Beispiel 9

Man schätzte die Toxizität von Chlorazodin bei 330 µg/ml und von Chlorazodin, das mit einer quaternären oberflächenaktiven Substanz kombiniert ist, durch Abschätzen der Spitzentoxizität auf Fisch ab.
Das vorgesehene Produkt kann, wenn es zur Desinfektion eingesetzt wird, nicht die Toxizitätsschwelle, die für die Umgebung gemessen wird, erreichen, und folglich kann es als sicher eingeschätzt werden.

Beispiel 10

Desinfektionsmittel

Man stellte ein Desinfektionsmittel her, das zusätzlich zu Chlorazodin ein desinfizierendes Gemisch aus Alkyltrimethylammoniumbromid, bezeichnet als Cetrimid, enthält. Eine Synergieuntersuchung zeigte, daß diese Zusammensetzung innerhalb von 5 Minuten bei 25ºC in Gegenwart von 10%igem fötalem Kälberserum die folgenden Keime vollständig hemmen konnte: Bacillus cereus, Candida albicans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Mycobacterium fortuitum, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Salmonellen der Gruppe B, Enterobacter agglomerans, Staphylococcus aureus, Herpes simplex I-Viren, Viren von Stomatitis vesiculosa, Retroviren, Aspergillus fumigatus, Microsporum canis, Trichophytor rubrum.
Auf der Grundlage der vorstehenden Feststellung wurde eine Tablettenzusammensetzung mit Brausewirkung selbst in Blut und organischen Materialien hergestellt.
Chlorazodin 330 mg
Alkyltrimethylammoniumbromid (Cetrimid) 100 mg
Zitronensäure 150 mg
Weinsäure 175 mg
NaHCO&sub3; 375 mg
Avicel PH102 180 mg
Lactose EFK 522 mg
Aerosil 200 3,8 mg
Denatonium-Benzoat 0,2 mg
für eine Tablette 1836 mg
Dosierung: 1 Tablette auf 1 l Wasser
Es ist klar, daß die vorliegende Erfindung in keiner Weise auf die vorstehend beschriebenen Ausführungsformen begrenzt ist und daß viele Abwandlungen daraus abgeleitet werden können, ohne den Bereich der Erfindung zu verlassen.
Zahlreiche andere Desinfektionsmittel oder Azzneimittel können außer den beispielhaft angegebenen vorgesehen werden, indem lediglich die Zubereitungen, welche auf dem jeweiligen Bereich im allgemeinen angewandt wird, wenn es sich um Reinigungsprodukte, kosmetische Zusammensetzungen, Medikamente oder andere handelt, befolgt werden.

Claims

1. Verwendung eines Desinfektionsmittels, enthaltend als Wirkstoff ein kondensiertes N-Chloramin-Derivat, das von Guanidin-Derivaten stammt, in einer Konzentration, in der es keine Toxizität aufweist, wenn das Mittel mit der Haut oder den Schleimhäuten eines Menschen oder eines Tiers in Kontakt kommt, sowie ein geeigneter Träger und gegebenenfälls andere Desinfektionsmittel oder übliche Hillsstoffe, zur Desinfektion von leblosen Objekten gegenüber Viren aus der Gruppe der Retroviren, insbesondere von humanen Immundefizienz-Viren (HIV).

2. Verwendung eines Desinfektionsmittels, enthaltend als Wirkstoff Chlorazodin (N,N'-Dichlorazodicarbonamidin) in einer Konzentration, in der es keine Toxizität aufweist, wenn das Mittel mit der Haut oder den Schleimhäuten eines Menschen oder eines Tiers in Kontakt kommt, sowie ein geeigneter Träger und gegebenenfiills andere Desinfektionsmittel oder übliche Hilfsstoffe, zur Desinfektion von leblosen Objekten gegenüber Viren aus der Gruppe der Retroviren, insbesondere von humanen Immundefizienz-Viren (HIV).

3. Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Zusammensetzung eine wäßrige Lösung des Chlorazodins in einer Konzentration an dieser Verbindung von 300 µg/ml bis 1 mg/ml, insbesondere von 330 µg/ml bis 660 µg/ml unfaßt.

4. Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Zusammensetzung Chlorazodin und als weiteres Desinfektionsmittel oder als Hilfsstoff Cetrimid oder ein Laurylsulfat umfaßt.

5. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die zu desinfizierenden, leblosen Objekte Sanitärmaterialien aus Kunststoff; Textil oder Kautschuk, medizinische sowie tiermedizinische Instrumente, Apparate und Kleidung, Objekte aus dem Lebensmittelbereich, die eine Bearbeitung erfordern, kosmetische Instrumente, Sanitätfahrzeuge, Boden- und Wandoberflächen, Sanitär- und Hygienegeräte, Badewasser, Getränke und entsprechende Objekte darstellen.

6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die zu desinfizierenden, leblosen Objekte Exkremente, Analysenrückstände aus Laboratorien, aus Mensch- oder Tierkörpern entnommene Proben und entsprechende Objekte darstellen.

7. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die zu desinfizierenden, leblosen Objekte kosmetische Zusammensetzungen darstellen.

8. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die zu desinfizierenden, leblosen Objekte Produkte darstellen, die mit der Haut oder den Schleimhäuten des menschlichen oder 10 oder tierischen Körpers in Kontakt kommen können, die gegebenenfalls Träger von Viren sein können, wobei in den oder auf den Produkten dieses Desinfektionsmittel oder die Zusammensetzung zur Desinfektion gleichzeitig einen Barrierenbereich für die Übertragung der vorgenannten Viren erzeugt.

9. Verwendung nach Anspruch 8, wobei die Produkte, die mit der Haut oder den Schleimhäuten in Kontakt kommen können, Handschuhe von Chirurgen oder Zahnärzten, Pessare, Kondome und entsprechende Objekte darstellen.

10. Verwendung eines kondensierten N-Chloramin-Derivats, das von Derivaten des Guanidins stammt, zur Herstellung eines Heilmittels zur Behandlung oder zur Vorbeugung von Infektionen durch Viren aus der Gruppe der Retroviren, und insbesondere von Infektionen durch den humanen Immundefizienz-Virus (HIV).

11. Verwendung von Chlorazodin zur Herstellung eines Heilmittels zur Behandlung oder zur Vorbeugung von Infektionen durch Viren aus der Gruppe der Retroviren, und insbesondere von Infektionen durch den humanen Immundefizienz-Virus (HIV).