DE68901937T2 - Reagens zum nachweis von krebs. - Google Patents

Description

• Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein gemischtes Hg- Ni-Reagenz zur Krebsdiagnose durch Nachweis aromatischer Amine, wie etwa Tyrosin, welche gemeinhin im Urin eines Krebspatienten vorhanden sind.
• Eine frühere Technik der Krebsdiagnose, welche die Menge an aromatischen Aminen (Tyrosin usw.) mißt, die besonders im Urin von Krebspatienten nachgewiesen werden, ist im koreanischen Patent Nr. 21558 unter dem Namen der vorliegenden Erfinder beschrieben. Ein unklares Magnetresonanzsignal im Bereich von 3,00 ppm bis 3,09 ppm wird aufgrund der Anwesenheit aromatischer Amine gemeinhin im Urin von Krebspatientien beobachtet. Ein diagnostisches Verfahren zum Krebsnachweis unter Verwendung von Millons Reagenz ist in dem früheren Patent bereits offenbart worden.
• Die Verwendung von Millons Reagenz im Urintest als Reagenz zur Bestätigung der Anwesenheit von Tyrosin hat jedoch einen Nachteil. Der bei der Reaktion gebildete Niederschlag ist nämlich sehr instabil. Der Grund hierfür ist, daß die Quecksilberionen in Millons Reagenz im Vergleich mit anderen Metallionenein hohes Komplexbildungsvermögen, aber eine verhältnismäßig geringe Neigung zur Ionisation besitzen. Somit wird es leicht durch anorganische Salze und aromatische Organoverbindungen, welche in den Urinproben vorhanden sind, gestört.
• Um diesen Nachteil zu überwinden, haben wir dementsprechend auf der Tatsache beruhend, daß die Reaktion zwischen Millons Reagenz und Tyrosin primär auf der Bildung eines Komplexes der Quecksilberionen beruht, versucht, Tyrosin-Standardmaterial mit anderen Metallionen anstelle der Quecksilberionen umzusetzen. Als Ergebnis haben wir bestätigt, daß Tyrosin auch mit Salpetersäurelösungen von Cadmium (Cd), Zink (Zn), Kupfer (Cu) und Nickel (Ni) reagiert, um eine rote Komplexverbindung zu ergeben. Wenn jedoch die Salpetersäurelösungen dieser Metalle anstelle von Millons Reagenz auf die Urinproben von Krebspatienten angewandt werden, wird keine Reaktion beobachtet. Der Grund hierfür scheint darin zu liegen, daß das Komplexbildungsvermögen dieser Metallionen im Verhältnis niedriger ist als jenes von Quecksilberionen, und der Gehalt an im Urin von Krebspatienten vorhandenen aromatischen Aminen so klein ist, daß er nicht den Konzentrationswert erreicht, welcher in der Lage ist, die Reaktion mit den Metallionen auszulösen. Diese Metalle haben jedoch ein niedriges Komplexbildungsvermögen, und eine hohe Neigung zur Ionisierung. Demgemäß wird angenommen, daß diese Metalle entweder als ein Ersatz für Quecksilber in den Quecksilberkomplexen oder als ein Vernetzungsmittel zwischen den Komplexen wirksam sind, um die Komplexe zu stabilisieren. Auf der Grundlage hiervon wurde Millons Reagenz, welches eine Salpetersäurelösung von Quecksilber ist, mit jedem der vorstehend erwähnten Metalle kombiniert, und es wurde bestätigt, daß die Kombination von Millons Reagenz mit Nickel stabilere Niederschläge als mit Millons Reagenz allein ergab.
• Das heißt, wenn Millons Reagenz allein verwendet wird, ist der erhaltene Komplex instabil und wird in Abhängigkeit vom Zustand der Probe leicht gelöst und das Ablesen der Ergebnisse kann daher schwierig sein.
• Das kombinierte Reagenz der vorliegenden Erfindung zeigt jedoch kein solches unerwünschtes Phänomen und das Ablesen der Reaktionsergebnisse ist leicht, weil die Farbe des Reaktionsniederschlags stabil ist und über einen langen Zeitraum andauert.
• Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine krebsdiagnostische Reagenzmischung bereitgestellt, welche Quecksilber, Nickel, Salpetersäure und destilliertes Wasser umfaßt, worin Nickel in einer Menge von 0,05 bis 0,5 Gewichtsteilen pro Gewichtsteil Quecksilber enthalten ist.
• Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung besteht aus Quecksilber, Nickel, Salpetersäure und destilliertem Wasser. In dieser Zusammensetzung ist der erhaltene Niederschlag unbeständig, falls das Mischungsverhältnis zwischen Quecksilber und Nickel höher an Quecksilber ist, und falls das Verhältnis höher an Nickel ist, wird die Menge des Niederschlages verringert, was eine schlechte Diagnosewirkung zur Folge hat. Es ist daher notwendig, ein geeignetes Mischungsverhältnis aufrecht zu erhalten. Die geeignete Menge Nickel, welche zum Aufrechterhalten der stabilen Farbe des Niederschlages während des Reaktionszeitraums benötigt wird, beträgt im allgemeinen 0,1 bis 0,3 Gewichtsteile Nickel pro Gewichtsteil Quecksilber. Zusätzlich wird die in der Reagenzzusammensetzung der vorliegenden Erfindung enthaltene Salpetersäure gewöhnlich im Verhältnis von 2 bis 5 ml Salpetersäure pro Gramm Quecksilber verwendet. Destilliertes Wasser wird in einer im wesentlichen der von Salpetersäure ähnlichen Menge verwendet. Falls jedoch destilliertes Wasser im Überschuß verwendet wird, wird die Menge an Niederschlag verringert, wohingegen eine zu geringe Menge destillierten Wassers einen instabilen Niederschlag zur Folge hat.
• Weitere Ausführungsformen, auf welche Bezug genommen wird, werden in den Ansprüchen 3 und 4 erwähnt.
• Die folgenden Beispiele veranschaulichen die vorliegende Erfindung.
Beispiel 1
• 10 ml einer Lösung von 50 g in 50 ml konzentrierter Salpetersäure gelöstem metallischen Quecksilber wird mit 20 ml einer Lösung von 5 g in 50 ml konzentrierter Salpetersäure gelöstem metallischen Nickel vermischt. Das Gemisch wird mit 30 ml destilliertem Wasser verdünnt.
• Wenn 0,15 ml des Reagenzes der vorliegenden Erfindung, welches im vorstehenden Verhältnis zusammengesetzt ist, 3 ml der Urinproben zugesetzt wird, wird im Urin von Krebspatienten ein roter Niederschlag beobachtet, während im Urin gesunder Menschen ein weißer Niederschlag beobachtet wird.
• Die klinischen Tests gemäß der vorstehenden Methode werden an 37 gesunden Menschen, 62 Krebspatienten und 86 an anderen Krankheiten leidenden Menschen ausgeführt. Die Ergebnisse in den folgenden Tabellen werden erhalten (Tabelle 1). Die klinischen Tests unter Verwendung des bekannten Millonschen Reagenzes werden an denselben Proben ausgeführt, und wie in der folgenden Tabelle zu sehen ist, ist die Zuverlässigkeit der Testergebnisse daraus niedrig und wird mit der Testzeit weiter erniedrigt. Tabelle 1 Klinische Daten unter Verwendung des Reagenzes der vorliegenden Erfindung Patientenzielgruppe Positiv (%) Negativ Gesamt Gesunde Kontrollgruppe Gruppe mit anderen Krankheiten Gruppe der Krebspatienten Empfindlichkeit Spezifität Positive Zuverlässigkeit Negative Zuverlässigkeit Tabelle 2 Klinische Daten unter Verwendung des bekannten Millonschen Reagenzes Patientenzielgruppe Positiv (%) Negativ Gesamt Gesunde Kontrollgruppe Gruppe mit anderen Krankheiten Gruppe der Krebspatienten Empfindlichkeit Spezifität Positive Zuverlässigkeit Negative Zuverlässigkeit
• Wie aus den vorstehenden Testergebnissen offensichtlich bestätigt werden kann, kann die Reagenzzusammensetzung der vorliegenden Erfindung als eine ausgezeichnete krebsdiagnostische Reagenzzusammensetzung verwendet werden.

Claims (5)

1. Krebsdiagnostische Reagenzmischung aus Quecksilber, Nickel, Salpetersäure und destilliertem Wasser, worin Nickel in einer Menge von 0,05 bis 0,5 Gewichtsteilen pro Gewichtsteil Quecksilber enthalten ist.

2. Reagenzmischung nach Anspruch 1, worin die Menge an Nickel 0,1 bis 0,3 Gewichtsteile pro Gewichtsteil Quecksilber beträgt.

3. Reagenzmischung nach Anspruch 1 oder 2, worin 0,5 bis 2 Volumenteile destilliertes Wasser pro Volumenteil Salpetersäure eingesetzt werden.

4. Reagenzmischung nach Anspruch 1 oder 2, worin das Gewichtsverhältnis zwischen Quecksilber und Nickel 1 : 0,2 und das Volumenverhältnis zwischen Salpetersäure und destilliertem Wasser 3 : 2 bis 4 beträgt.

5. Verfahren zur Herstellung einer Krebsdiagnostischen Reagenzmischung nach Anspruch 1, wobei man destilliertes Wasser zu einer Lösung von Quecksilber in konzentrierter Salpetersäure und einer Lösung von Nickel in konzentrierter Salpetersäure gibt.