DE60102231T2

DE60102231T2 - Crf rezeptor-antagonisten und darauf bezogene methoden

Info

Publication number: DE60102231T2
Application number: DE60102231T
Authority: DE
Inventors: Mustapha Haddach
Original assignee: Neurocrine Biosciences Inc
Current assignee: Neurocrine Biosciences Inc
Priority date: 2000-05-18
Filing date: 2001-05-18
Publication date: 2005-04-14
Anticipated expiration: 2021-05-19
Also published as: US20040014747A1; EP1282624A1; US6541469B2; EP1282624B1; ES2214422T3; WO2001087889A1; JP2003533527A; US20020032194A1; AU2001263329A1; ATE260918T1; DE60102231D1

Description

Diese Erfindung betrifft im Allgemeinen CRF-Rezeptorantagonisten und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen durch Verabreichung solcher Antagonisten an ein warmblütiges Tier, das dieser bedarf.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Der erste Corticotropin-freisetzende Faktor (CRF, corticotropin-releasing factor) wurde aus Schafshypothalmi isoliert und als Peptid mit 41 Aminosäuren identifiziert (Vale et al., Science 213:1394 – 1397, 1981). Anschließend wurden Sequenzen des menschlichen und Ratten CRF isoliert und als identisch bestimmt, sich aber von Schafs- CRF in 7 der 41 Aminosäurereste unterscheidend (Rivier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4851, 1983; Shibahara et al., EMBO J. 2:775, 1983).
Für CRF wurde herausgefunden, dass es deutliche Änderungen in endokriner, Nerven- und Immunsystemfunktion bewirkt. Von CRF wird angenommen, dass es der hauptsächliche physiologische Regulator der Basis- und Stress-Freisetzung des adrenocorticotropen Hormons ("ACTH"), β-Endorphin und anderer Pro-Opiomelanocortin ("POMC")-abgeleiteten Peptide aus der vorderen Hypophyse ist (Vale et al., Science 213:1394 – 1397, 1981). In Kürze, von CRF wird angenommen, dass es seine biologischen Wirkungen durch Bindung an einen Plasmamembranrezeptor auslöst, von dem herausgefunden wurde, dass er im Gehirn verteilt vorliegt (DeSouza et al., Science 224:1449 – 1451, 1984), der Hypophyse (DeSouza et al., Methods Enzymol. 124:560, 1986; Wynn et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 110:602–608, 1983), den Nebennieren (Udelsman et al., Nature 319:147 – 150, 1986) und der Milz (Webster, E.L., und E.B. DeSouza, Endocrinology 122:609 – 617, 1988). Der CRF-Rezeptor ist an ein GTP-bindendes Protein (Perrin et al., Endocrinology 118:1171 – 1179, 1986) gekoppelt, das eine CRF-stimulierte Erhöhung der intrazellulären Produktion von cAMP vermittelt (Bilezikjian, L. M. und W.W. Vale, Endocrinology 113:657 – 662, 1983). Der Rezeptor für CRF wurde nun aus Ratte (Perrin et al., Endo 133(6):3058 – 3061, 1993) und menschlichem Gehirn (Chen et al., PNAS 90(19):8967 – 8971, 1993; Vita et al., FEBS 335(1):1 – 5, 1993) kloniert. Dieser Rezeptor ist ein Protein aus 415 Aminosäuren, das sieben membrandurchspannende Domänen umfasst. Ein Identitätsvergleich zwischen Ratten- und menschlichen Sequenzen zeigt einen hohen Grad an Homologie (97 %) auf der Aminosäureebene.
Zusätzlich zu seiner Rolle beim Stimulieren der Produktion von ACTH und POMC wird von CRF auch angenommen, dass es viele der endokrinen, autonomen und verhaltensabhängigen Reaktionen auf Stress koordiniert und in der Pathophysiologie von Gemütserkrankungen involviert ist.
Zudem wird von CRF angenommen, dass es ein Schlüsselvermittler in der Kommunikation zwischen den Immun-, zentralnervösen, endokrinen und cardiovaskulären Systemen ist (Crofford et al., J. Clin. Invest. 90:2555 – 2564, 1992; Sapolsky et al., Science 238:522 – 524, 1987; Tilders et al., Regul. Peptides 5:77 – 84, 1982). Insgesamt scheint CRF einer der Schlüsselneurotransmitter des zentralen Nervensystems zu sein und spielt eine wichtige Rolle in der Integration der Gesamtreaktion des Körpers auf Stress.
Die Verabreichung von CRF direkt in das Gehirn löst Verhaltens-, physiologische und endokrine Reaktionen aus, die identisch mit denen sind, die bei einem Tier beobachtet werden, das einer stressreichen Umgebung ausgesetzt wird. Zum Beispiel resultiert die intracerebroventriculäre Injektion von CRF in Verhaltensaktivierung (Sutton et al., Nature 297:331, 1982), dauerhafter Aktivierung des Elektroenzephalogramms (Ehlers et al., Brain Res. 178:332, 1983), Stimulation des sympathoadrenomedularen Stoffwechselweges (Brown et al., Endocrinology 110:928, 1982), einer Erhöhung der Herzgeschwindigkeit und des Blutdrucks (Fisher et al., Endocrinology 110:2222, 1982), einer Erhöhung im Sauerstoffverbrauch (Brown et al., Life Sciences 30:207, 1982), einer Änderung der gastrointestinalen Aktivität (Williams et al., Am. J. Physiol. 253:G582, 1987), Unterdrückung der Nahrungsaufnahme (Levine et al., Neuropharmacology 22:337, 1983), Veränderung des Sexualverhaltens (Sirinathsinghji et al., Nature 305:232, 1983) und Immunfunktionsschwäche (Irwin et al., Am. J. Physiol. 255:R744, 1988). Des weiteren schlagen klinische Daten vor, dass CRF in dem Gehirn bei Depression, angstbezogenen Erkrankungen und Anorexia nervosa hypersezerniert wird (DeSouza, Ann. Reports in Med. Chem. 25:215–223, 1990). Dementsprechend legen klinische Daten nahe, dass CRF-Rezeptorantagonisten neue antidepressive und/oder anxiolytische Medikamente darstellen könnten, die in der Behandlung neuropsychiatrischer Erkrankungen nützlich sein könnten, die sich in der Hypersezernierung von CRF manifestieren.
Die ersten CRF-Rezeptorantagonisten waren Peptide (siehe z. B. Rivier et al., U.S.-Patent Nr. 4,605,642; Rivier et al., Science 224:889, 1984). Während diese Peptide etablierten, dass CRF-Rezeptorantagonisten die pharmakologischen Reaktionen auf CRF verringern können, leiden Peptid-CRF-Rezeptorantagonisten unter den üblichen Nachteilen von Peptidtherapeutika, einschließlich eines Mangels an Stabilität und eingeschränkter oraler Aktivität. Kürzlich wurde von kleinen Molekülen von CRF-Rezeptorantagonisten berichtet. Zum Beispiel wurde von substituierten 4-Thio-5-oxo-3-pyrazolinderivaten (Abreu et al., U.S.-Patent Nr. 5,063,245) und substituierten 2-Aminothiazolderivaten (Courtemanche et al., australisches Patent Nr. AU-A-41399/93) als CRF-Rezeptorantagonisten berichtet. Von diesen besonderen Derivaten wurde herausgefunden, dass sie wirksam in der Hemmunng der Bindung von CRF an seinen Rezeptor in 1–10 μM-Bereich und 0,1–10 μM-Bereich sind.
Bedingt durch die physiologische Bedeutung von CRF bleibt die Entwicklung von biologisch aktiven kleinen Molekülen mit signifikanter CRF-Rezeptorbindungsaktivität, und die in der Lage sind, antagonistisch auf den CRF-Rezeptor zu wirken, ein wünschenswertes Ziel. Solche CRF-Rezeptorantagonisten wären in der Behandlung von endokrinen, psychiatrischen und neurologischen Zuständen oder Erkrankungen, einschließlich stressbedingter Erkrankungen im Allgemeinen nützlich.
Während wichtige Schritte zur Erzielung einer CRF-Regulation durch Verabreichung von CRF-Rezeptorantagonisten gemacht wurden, verbleibt ein Bedarf auf dem Gebiet an wirksamen kleinen Molekülen als CRF-Rezeptorantagonisten. Es gibt auch einen Bedarf an pharmazeutischen Zusammensetzungen, die solche CRF-Rezeptorantagonisten enthalten, sowie an Verfahren, die sich auf die Verwendung dieser zur Behandlung von, zum Beispiel, stressvermittelten Erkrankungen beziehen. Die vorliegende Erfindung erfüllt diese Bedürfnisse und stellt andere damit verwandte Vorteile zur Verfügung.
WO-A-9938868 offenbart bizyklische Azolotriazine und Pyrimidine.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
In Kürze, diese Erfindung ist im Allgemeinen auf CRF-Rezeptorantagonisten gerichtet und spezifischer auf CRF-Rezeptorantagonisten mit der folgenden allgemeinen Struktur (I)
einschließlich der Stereoisomere, Medikamentenvorstufen und pharmazeutisch verträgliche Salze davon, worin m, R, R₁, R₂, A und X wie unten definiert sind.
Die CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung haben eine Anwendung über einen weiten Bereich therapeutischer Anwendungen und können verwendet werden, um eine Reihe von Erkrankungen oder Krankheiten, einschließlich stressbedingter Erkrankungen zu behandeln. Solche Verfahren umfassen die Verabreichung einer wirksamen Menge eines CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung, vorzugsweise in der Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung an ein Tier, das dieser bedarf. Dementsprechend werden in einer anderen Ausführungsform pharmazeutische Zusammensetzungen offenbart, die einen oder mehrere CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Verdünnungsmittel enthalten.
Diese und andere Aspekte der Erfindung ergeben sich in offensichtlicher Weise durch Bezugnahme auf die folgende detaillierte Beschreibung. In diesem Sinne werden ver schiedene Literaturstellen hierin aufgezeigt, die in mehr Detail bestimmte Verfahren, Verbindungen und/oder Zusammensetzungen beschreiben und hiermit durch Referenzieren in ihrer Gesamtheit aufgenommen werden.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung ist im Allgemeinen auf Verbindungen gerichtet, die als Corticotropin-freisetzender Faktor (CRF) – Rezeptorantagonisten nützlich sind.
In einer ersten Ausführungsform haben die CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung die folgende Struktur (I):
einschließlich der Stereoisomere, Medikamentenvorstufen und pharmazeutisch verträgliche Salze davon, worin:

X Stickstoff oder CR₃ ist;
A O, S oder NR₄ ist;
"–––" eine wahlfreie Doppelbindung bedeutet;
R ein wahlfreier Substituent ist, welcher bei jedem Vorkommen unabhängig Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Alkylidenyl, Arylalkyl oder Heteroarylalkyl ist, wobei m 0, 1, 2 oder 3 ist, und die Anzahl der Substituenten R bedeutet;
R₁ Alkyl, substituiertes Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, Heteroaryl oder substituiertes Heteroaryl ist;
R₂ Wasserstoff, Halogen, Cyano, Alkyl, substituiertes Alkyl, Alkoxy oder Thioalkyl ist;
R₃ Wasserstoff, Halogen, Alkyl oder substituiertes Alkyl ist; und
R₄ Wasserstoff, Alkyl, substituiertes Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, ein Heterozyklus oder substituierter Heterozyklus ist.

Wie hierin verwendet haben die oben genannten Begriffe die folgende Bedeutung:
"Alkyl" bedeutet ein geradkettiger oder verzweigter, nicht zyklischer oder zyklischer, gesättigter oder ungesättigter aliphatischer Kohlenwasserstoff, der 1 bis 10 Kohlenstoffatome enthält, wobei der Begriff "niederes Alkyl" die gleiche Bedeutung wie Alkyl hat, aber 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthält. Repräsentative gesättigte geradkettige Alkyle umfassen Methyl, Ethyl, n-Propyl, n-Butyl, n-Pentyl, n-Hexyl und ähnliche, während gesättigte verzweigte Alkyle Isopropyl, sec-Butyl, Isobutyl, tert-Butyl, Isopentyl und Ähnliche umfasst. Repräsentative gesättigte zyklische Alkyle umfassen Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, -CH₂cyclopropyl, -CH₂cyclobutyl, -CH₂cyclopentyl, -CH₂cyclohexyl und Ähnliche; während nicht gesättigte zyklische Alkyle Cyclopentenyl und Cyclohexenyl und Ähnliche umfassen. Zyklische Alkyle werden auch als "homozyklische Ringe" bezeichnet und umfassen di- und polyhomozyklische Ringe wie Decalin und Adamantyl. Nicht gesättigte Alkyle enthalten mindestens eine Doppel- oder Dreifachbindung zwischen benachbarten Kohlenstoffatomen (die jeweils als "Alkenyl" oder "Alkinyl" bezeichnet werden). Repräsentative geradkettige und verzweigte Alkenyle umfassen Ethylenyl, Propylenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl, Isobutelenyl, 1-Pentenyl, 2-Pentenyl, 3-Methyl-1-butenyl, 2-Methyl-2-butenyl, 2,3-Dimethyl-2-butenyl und Ähnliche; während repräsentative geradkettige und verzweigte Alkinyle, Acetylenyl, Propynyl, 1-Butynyl, 2-Butynyl, 1-Pentynyl, 2-Pentynyl, 3-Methyl-1-butynyl und Ähnliche umfassen.
"Alkylidenyl" steht für ein divalentes Alkyl, aus dem zwei Wasserstoffatome vom gleichen Kohlenstoffatom entnommen wurden, wie =CH₂, =CHCH₃, =CHCH₂CH₃, =C(CH₃)CH₂CH₃ und Ähnliche.
"Aryl" bedeutet einen aromatischen carbozyklischen Bereich wie Phenyl oder Naphthyl.
"Arylalkyl" bedeutet ein Alkyl mit mindestens einem Alkylwasserstoffatom, das durch einen Arylbereich ersetzt wurde, wie einem Benzyl (d. h. -CH₂phenyl), -CH₂-(1- oder 2-Naphthyl), -(CH₂)₂phenyl, -(CH₂)₃phenyl, -CH(phenyl)₂ und Ähnliche.
"Heteroaryl" bedeutet einen aromatischen heterozyklischen Ring mit 5 bis 10 Gliedern und mindestens einem Heteroatom, das aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel ausgewählt ist und mindestens ein Kohlenstoffatom enthält, einschließlich sowohl mono- wie bizyklischer Ringsysteme. Repräsentative Heteroaryle umfassen (sind aber nicht eingeschränkt auf) Furyl, Benzofuranyl, Thiophenyl, Benzothiophenyl, Pyrrolyl, Indolyl, Isoindolyl, Azaindolyl, Pyridyl, Quinolinyl, Isoquinolinyl, Oxazolyl, Isooxazolyl, Benzoxazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Benzimidazolyl, Thiazolyl, Benzothiazolyl, Isothiazolyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Paryzinyl; Triazinyl, Cinnolinyt, Phthalazinyl und Quinazolinyl.
"Heteroarylalkyl" bedeutet ein Alkyl, bei dem mindestens ein Alkylwasserstoffatom mit einem Heteroarylbereich wie -CH₂pyridinyl, -CH₂pyrimidinyl und Ähnlichem ersetzt ist.
"Heterozyklus" (wird hierin auch als ein "heterozyklischer Ring" bezeichnet) bedeutet ein 5- bis 7-gliedriger monozyklischer oder 7- bis 14-gliedriger polyzyklischer, heterozyklischer Ring, der entweder gesättigt, ungesättigt oder aromatisch ist, und welcher 1 bis 4 Heteroatome enthält, die unabhängig voneinander aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel ausgewählt sind, und worin die Stickstoff- und Schwefel-Heteroatome optional oxidiert sein können, und das Stickstoff-Heteroatom kann optional quatemisiert sein, einschließlich bizyklischer Ringe, bei denen jegliche der oben genannten Heterozyklen an einen Benzolring gebunden sein können, wie auch trizyklische (und höhere) heterozyklische Ringe. Der Heterozyklus kann über jegliches Heteroatom oder Kohlenstoffatom verbunden sein. Heterozyklen umfassen Heteroaryle wie sie oben definiert werden. Somit umfassen Heterozyklen zusätzlich zu den oben aufgelisteten aromatischen Heteroarylen (sind aber nicht eingeschränkt auf) Morpholinyl, Pyrrolidinonyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Hydantoinyl, Valerolactamyl, Oxiranyl, Oxetanyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydropyranyl, Tetrahydropyridinyl, Tetrahydroprimidinyl, Tetrahydrothiophenyl, Tetrahydrothiopyranyl, Tetrahydropyrimidinyl, Tetrahydrothiophenyl, Tetrahydrothiopyranyl und Ähnliche.
"Heterocyclusalkyl" bedeutet ein Alkyl, bei dem mindestens ein Alkylwasserstoffatom mit einem Heterozyklus ersetzt wurde, wie -CH₂morpholinyl und Ähnliche.
Der Begriff "substituiert", wie er hierin verwendet wird, bedeutet jegliche der oben genannten Gruppen (d. h. Alkyl, Aryl, Arylalkyl, Heteroaryl, Heteroarylalkyl, Heterozyklus oder Heterocyclusalkyl), worin mindestens ein Wasserstoffatom mit einem Substituenten ersetzt ist. In dem Fall eines Ketosubstituenten ("-C(=O)-") sind zwei Wasserstoffatome ersetzt. "Substituenten" im Kontext dieser Erfindung umfassen Halogen, Hydroxy, Cyano, Nitro, Amino, Alkylamino, Dialkylamino, Alkyl, Alkoxy, Thioalkyl, Haloalkyl, Hydroxyalkyl, Aryl, substituiertes Aryl, Arylalkyl, substituiertes Arylalkyl, Heteroaryl, substituiertes Heteroaryl, Heteroarylalkyl, substituiertes Heteroarylalkyl, Heterozyklus, substituierter Heterozyklus, Heterocyclusalkyl, substituiertes Heterocyclusalkyl, -NR_aR_b, -NR_aC(=O)R_b, -NR_aC(=O)NR_aR_b, -NR_aC(=O)OR_b, -NR_aSO₂R_b, -OR_a, -C(=O)R_a -C(=O)OR_a, -C(=O)NR_aR_b, -OC(=O)NR_aR_b, -SH, -SR_a, -SOR_a, -S(=O)₂R_a, -OS(=O)₂R_a, -S(=O)₂OR_a, wobei R_a und R_b gleich oder verschieden sind und unabhängig voneinander Wasserstoff, Alkyl, Haloalkyl, substituiertes Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, Arylalkyl, substituiertes Arylalkyl, Heteroaryl, substituiertes Heteroaryl, Heteroarylalkyl, substituiertes Heteroarylalkyl, Heterozyklus, substituierter Heterozyklus, Heterocyclusalkyl oder substituierter Heterocyclusalkyl sind.
"Halogen" bedeutet Fluor, Chlor, Brom oder Iod.
"Haloalkyl" bedeutet ein Alkyl bei dem mindestens ein Wasserstoffatom mit einem Halogen ersetzt ist, wie Trifluormethyl und Ähnliche. Haloalkyl ist eine besondere Ausführungsform eines substituierten Alkyls, bei dem das Alkyl mit einem oder mehreren Halogenatomen substituiert ist.
"Alkoxy" bedeutet einen Alkylbereich, der durch eine Sauerstoffbrücke verbunden ist (d. h. -O-Alkyl) wie -O-Methyl, -O-Ethyl und Ähnliche.
"Thioalkyl" bedeutet einen Alkylbereich, der durch eine Schwefelbrücke verbunden ist (d.h. -S-Alkyl), wie -S-Methyl, -S-Ethyl und Ähnliche.
"Alkylamino" und "Dialkylamino" bedeutet ein oder zwei Alkylbereiche, die durch eine Stickstoffbrücke verbunden sind (d.h. -NHalkyl oder -N(alkyl)(alkyl)), wie Methylamino, Ethylamino, Dimethylamino, Diethylamino und Ähnliche.
"Hydroxyalkyl" bedeutet ein Alkyl, das mit mindestens einer Hydroxylgruppe substituiert ist.
Abhängig von den A- und X-Gruppen haben repräsentative Verbindungen dieser Erfindung eine der folgenden Strukturen (II) bis (VI):
Wie es im Kontext dieser Erfindung verwendet wird bedeutet
-CH₂CH₂- oder -CH=CH-, optional mit 1, 2 oder 3 R-Substituenten substituiert (d. h., m=0, 1, 2 oder 3). Dementsprechend umfassen beispielhafte Verbindungen dieser Erfindung (sind aber nicht eingeschränkt auf) Verbindungen mit den folgenden Strukturen (1a) bis (1i), wobei jedes Vorhandensein von R das gleiche oder verschieden ist und eine wie zuvor definierte Gruppe (nicht aber Wasserstoff) darstellt:
Falls vorhanden, umfassen beispielhafte R-Gruppen dieser Erfindung Alkyl, (wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl und Isobutyl), Aryl (wie Phenyl), Heteroaryl (wie Pyridyl) und Alkylidenyl (wie =CH₂ und =CHCH₃). In dem Fall, in dem R Alkylidenyl ist, muss das Kohlenstoffatom, an das es gebunden ist, die geeignete Valenz aufweisen. Zum Beispiel wäre ein Alkylidenylbereich in der R-Position, die oben in Struktur (1 g) gezeigt wird, nicht geeignet.
In spezifischeren Ausführungsformen dieser Erfindung umfassen beispielhafte R₁-Gruppen dieser Erfindung (sind aber nicht eingeschränkt auf) 2,4-Dichlorphenyl, 2,4-Dimethylphenyl, 2-Chlor-4-methylphenyl, 2-Methyl-4-chlorphenyl, 2,4,6-Trimethylphenyl, 2,4,5-Trimethylphenyl, 2-Chlor-4,5-dimethoxyphenyl, 2-Chlor-4-methoxyphenyl, 2-Methyl-4-methoxyphenyl, 2,4-Dimethoxyphenyl, 2-Trifluormethyl-4-chlorphenyl, 3-Methoxy-4-chlorphenyl, 2,5-Dimethoxy-4-chlorphenyl, 2-Methoxy-4-trifluormethylphenyl, 2-Methoxy-4-isopropylphenyl, 2-Methoxy-4-trifluormethylphenyl, 2-Methoxy-4-isopropylphenyl-2-methoxy-4-methylphenyl, 4-Methyl-6-dimethylaminopyridin-3-yl und 4-Dimethylaminopyridin-3-yl.
In ähnlicher Weise umfassen beispielhafte R₂-Gruppen Wasserstoff, Methyl, Ethyl, Thiomethyl, Trifluormethyl und Methoxy, beispielhafte R₃-Gruppen umfassen Wasserstoff, Methyl, Ethyl, Chlor und Fluor und beispielhafte R₄-Gruppen umfassen Alkyl wie 4-Heptyl, Hexyl, Pentyl und substituiertes Alkyl wie Methoxy oder Dimethoxysubstituiertes Propyl, Pentyl und Heptyl.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können im Allgemeinen als freie Base verwendet werden. Alternativ dazu können die Verbindungen dieser Erfindung in der Form von Säureadditionssalzen verwendet werden. Säureadditionssalze der freien Base von Aminoverbindungen der vorliegenden Erfindung können durch Verfahren hergestellt werden, die auf dem Gebiet wohl bekannt sind, und können aus organischen und anorganischen Säuren gebildet werden. Geeignete organische Säuren umfassen Malein-, Fumar-, Benzoe-, Ascorbin-, Bernstein-, Methansulfon-, Essig-, Oxal-, Propion-, Wein-, Salicyl-, Zitronen-, Glucon-, Milch-, Mandel-, Zimt-, Asparagin-, Stearin-, Palmitin-, Glycol-, Glutamin- und Benzolsulfonsäuren. Geeignete anorganische Salze umfassen Salz-, Brom-, Schwefel-, Phosphor- und Salpetersäuren. Somit ist vorgesehen, dass der Begriff "pharmazeutisch verträgliches Salz" der Struktur (I) jegliche und alle annehmbaren Salzformen umfasst.
Im Allgemeinen können die Verbindungen der Struktur (I) gemäß den organischen Synthesetechniken hergestellt werden, die den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt sind sowie durch die beispielhaften Verfahren, die in den Beispielen gezeigt werden. Zum Beispiel kann die Synthese der Struktur (I) allgemein gemäß den folgenden Reaktionsschemata 1 bis 3 durchgeführt werden.
Reaktionsschema 7
Reaktionsschema 2
Reaktionsschema 3
Die Wirksamkeit einer Verbindung als CRF-Rezeptorantagonist kann durch verschiedene Assayverfahren bestimmt werden. Geeignete CRF-Rezeptorantagonisten dieser Er findung sind in der Lage, die spezifische Bindung von CRF an seinen Rezeptor zu hemmen und mit CRF assoziierte Aktivitäten zu antagonisieren. Eine Verbindung der Struktur (I) kann auf Aktivität als CRF-Antagonist durch einen oder mehrere allgemein akzeptierten Assays zu diesem Zwecke untersucht werden, einschließlich (aber nicht eingeschränkt) den durch DeSouza et al. (J. Neuroscience 7:88, 1987) und Battaglia et al., (Synapse 1:572, 1987) offenbarten Assays. Wie zuvor erwähnt umfassen geeignete CRF-Antagonisten Verbindungen, die eine CRF-Rezeptoraffinität aufzeigen. CRF-Rezeptoraffinität kann durch Bindungsstudien bestimmt werden, die die Fähigkeit einer Verbindung messen, die Bindung eines radiomarkierten CRF (z. B. [¹²⁵I]Tyrosin-CFR) an seinen Rezeptor (z. B., Rezeptoren, die aus Ratten-Zerebralcortexmembranen hergestellt wurden) zu hemmen. Der von DeSouza et al. (Supra, 1987) beschriebene Radioliganden-Bindungs-Assay stellt einen Assay zur Bestimmung der Affinität einer Verbindung für den CRF-Rezeptor zur Verfügung. Solch eine Aktivität wird typischerweise aus dem IC₅₀ berechnet, als die Konzentration einer Verbindung, die notwendig ist, um 50 % des radiomarkierten Liganden vom Rezeptor zu verdrängen und wird als "K_i"-Wert angegeben, der nach der folgenden Gleichung berechnet wird:
worin L = Radioligand und K_D = Affinität des Radioliganden für den Rezeptor (Cheng und Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22:3099, 1973).
Zusätzlich zur Inhibierung der CRF-Rezeptorbindung kann die CRF-rezeptorantagonistische Aktivität einer Verbindung durch die Fähigkeit der Verbindung etabliert werden, eine Aktivität zu antagonisieren, die mit CRF assoziiert ist. Zum Beispiel ist von CRF bekannt, dass es verschiedene biochemische Prozesse einschließlich der Adenylatcyclase-Aktivität stimuliert. Daher können die Verbindungen als CRF-Antagonisten durch ihre Fähigkeit zum Antagonisieren einer CRF-stimulierten Adenylatcyclase-Aktivität untersucht werden, z. B. durch das Messen von cAMP-Mengen. Der durch Battaglia et al. (Supra, 1987) beschriebene CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivitätsessay stellt einen Assay zur Verfügung zur Bestimmung der Fähigkeit einer Verbindung, die CRF-Aktivität zu antagonisieren, zur Verfügung. Dementsprechend kann eine CRF-Rezeptorantagonist-Aktivität durch Assaytechniken bestimmt werden, die im Allgemeinen einen ersten Bindungsassay (wie der durch DeSouza (Supra, 1987) beschriebene), gefolgt von einem cAMP-Screeningprotokoll (wie der durch Battaglia (Supra, 1987) beschriebene) umfassen.
In Bezug auf CRF-Rezeptorbindungsaktivitäten haben CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung ein K_i von weniger als 10 μM. In einer bevorzugten Ausführungsform dieser Erfindung hat ein CRF-Rezeptorantagonisten ein K_i von weniger als 1 μM und mehr bevorzugt weniger als 0,25 μM (d. h. 250 nM). Wie in mehr Detail unten gezeigt wird, können die K_i-Werte beispielhafter Verbindungen dieser Erfindung durch die in Beispiel 5 gezeigten Verfahren untersucht werden.
Die CRF-Rezeptorantagonisten der vorliegenden Erfindung zeigen eine Aktivität an der CRF-Rezeptorstelle und können als therapeutische Mittel zur Behandlung einer Vielzahl von Erkrankungen oder Krankheiten verwendet werden, einschließlich endokriner, psychiatrischer und neurologischer Erkrankungen oder Krankheiten. Spezifischer, die CRF-Rezeptorantagonisten der vorliegenden Erfindung können zur Behandlung physiologischer Zustände und Erkrankungen nützlich sein, die durch die Hypersezernierung von CRF hervorgerufen werden. Da von CRF angenommen wird, dass es ein Schlüsselneurotransmitter ist, der die endokrinen, Verhaltens- und autonomen Reaktionen auf Stress aktiviert und koordiniert, können die CRF-Rezeptorantagonisten der vorliegenden Erfindung verwendet werden, um neuropsychiatrische Erkrankungen zu behandeln. Neuropsychiatrische Erkrankungen, die durch die CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung behandelbar sind, umfassen Gemütserkrankungen wie Depression, mit Angstzuständen verwandte Erkrankungen wie allgemeine Angstzustände, Panikerkrankung, obsessive kompulsive Erkrankung, abnormale Aggression, kardiovaskuläre Abnormitäten wie instabile Angina und reaktiver Bluthochdruck; und Essstörungen wie Anorexia nervosa, Bulimie und Darmstörungssyndrom. CRF-Antagonisten können auch in der Behandlung einer Stress-induzierten Immununterdrückung, die mit verschiedenen Krankheitszuständen assoziiert ist, sowie Schlaganfall nützlich sein. Andere Verwendungen der CRF-Antagonisten umfassen die Behandlung entzündlicher Zustände (wie rheumatische Arthritis, Uveitis, Asthma, entzündliche Darmerkrankung und G.I.-Motilität), Schmerz, Cushing's-Erkrankung, infantile Spasmen, Epilepsie und andere Anfälle in sowohl Kindern wie auch Erwachsenen und verschiedene Medikamentenmissbräuche und Entzug (einschließlich Alkoholismus).
In einer anderen Ausführungsform der Erfindung werden pharmazeutische Zusammensetzungen offenbart, die einen oder mehrere CRF-Rezeptorantagonisten enthalten. Für die Zwecke der Verabreichung können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als pharmazeutische Zusammensetzungen formuliert werden. Pharmazeutische Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen einen CRF-Rezeptorantagonisten der vorliegenden Erfindung (d. h. eine Verbindung der Struktur (I)) und einen pharmazeutisch verträglicher Träger und/oder Verdünnungsmittel. Der CRF-Rezeptorantagonist ist in der Zusammensetzung in einer Menge vorhanden, die wirksam ist, um eine bestimmte Erkrankung zu behandeln – – das bedeutet, in einer Menge, die ausreichend ist, um eine CRF-Rezeptorantagonistische-Aktivität zu erzielen und dies vorzugsweise mit verträglicher Toxizität für den Patienten. Vorzugsweise können die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung einen CRF-Rezeptorantagonisten in einer Menge von 0,1 mg bis 250 mg pro Dosis umfassen, abhängig von dem Weg der Verabreichung und mehr bevorzugt von 1 mg bis 60 mg. Geeignete Konzentrationen und Dosierungen können leicht durch einen Fachmann auf dem Gebiet bestimmt werden.
Pharmazeutisch verträgliche Träger und/oder Verdünnungsmittel sind den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt. Für Zusammensetzungen, die als Flüssigkeitslösungen formuliert sind, umfassen verträgliche Träger und/oder Verdünnungsmittel Salzlösung und steriles Wasser und können optional Antioxidantien, Puffer, Bakteriostatika und andere übliche Additive umfassen. Die Zusammensetzungen können auch als Pillen, Kapseln, Granulate oder Tabletten formuliert werden, die zusätzlich zu einem CRF-Rezeptorantagonisten Verdünnungsmittel, dispergierende und oberflächenaktive Mittel, Bindemittel und Schmiermittel enthalten. Ein Fachmann auf diesem Gebiet kann zudem den CRF-Rezeptorantagonisten in einer geeigneten Weise formulieren und gemäß akzeptierter Praxis werden solche in Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1990 offenbart.
Zudem sind auch Medikamentenvorstufen im Kontext dieser Erfindung mitumfasst. Medikamentenvorstufen sind jegliche kovalent gebundenen Träger, die eine Verbindung der Struktur (I) in vivo freisetzen, wenn eine solche Medikamenten-Vorstufe einem Patienten verabreicht wird. Medikamentenvorstufen werden im Allgemeinen durch das Verändern funktioneller Gruppen in einer solchen Weise hergestellt, dass die Veränderung abgespalten wird, entweder durch Routinemanipulation oder in vivo, was die Stammverbindung ergibt. Medikamentenvorstufen umfassen z.B. Verbindungen dieser Erfindung, worin Hydroxy-,Amin- oder Sulfhydrylgruppen an jegliche Gruppe gebunden sind, die, wenn sie einem Patienten verabreicht werden, sich abspalten, um die Hydroxy-, Amin- oder Sulfidylgruppen auszubilden. Somit umfassen repräsentative Beispiele der Medikamentenvorstufen (sind aber nicht eingeschränkt auf) Acetat-, Format- und Benzoatderivate der Alkohol- und Amin-funktionellen Gruppen der Verbindungen der Struktur (I). Zudem können im Falle einer Carbonsäure (-COOH) Ester wie Methylester, Ethylester und ähnliche eingesetzt werden.
In Bezug auf Stereoisomere können die Verbindungen der Struktur (I) chirale Zentren aufweisen und können als Racemate, racemische Mischungen und als individuelle Enantiomere oder Diastereomere vorkommen. Alle solche isomeren Formen sind von der vorliegenden Erfindung umfasst, einschließlich Mischungen davon. Des Weiteren können einige der kristallinen Formen der Verbindungen der Struktur (I) als Polymorphe existieren, die in der vorliegenden Erfindung mit umfasst sind. Zusätzlich können einige der Verbindungen der Struktur (I) Solvate mit Wasser oder anderen organischen Lösungsmitteln ausbilden. Solche Solvate sind gleichermaßen im Umfang dieser Erfindung mit umfasst.
In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Reihe von Erkrankungen und Krankheiten zur Verfügung, einschließlich endokriner, psychiatrischer und neurologischer Erkrankungen oder Krankheiten. Solche Verfahren umfassen die Verabreichung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung an ein warmblütiges Tier in einer Menge, die ausreicht, um die Krankheit oder Erkrankung zu behandeln. Solche Verfahren umfassen die systemische Verabreichung eines CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung, vorzugsweise in der Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung. Wie hierin verwendet, umfasst die systemische Verabreichung orale und parenterale Verfahren der Verabreichung. Zur oralen Verabreichung umfassen geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen der CRF-Rezeptorantagonisten Pulver, Granulate, Pillen, Tabletten und Kapseln sowie Flüssigkeiten, Sirupe, Suspensionen und Emulsionen. Diese Zusammensetzungen können auch Geschmacksmittel, Konservierungsmittel, suspendierende-, verdickende- und emulgierende Mittel und andere pharmazeutisch verträgliche Additive umfassen. Zur parenteralen Verabreichung können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in wässrigen Injektionslösungen hergestellt werden, die zusätzlich zu dem CRF-Rezeptorantagonisten Puffer, Antioxidantien, Bakteriostatika und andere Additive enthalten können, die üblicherweise in solchen Lösungen eingesetzt werden.
In einer anderen Ausführungsform können die Verbindungen dieser Erfindung und deren Analoga als Liganden in der Positron-Emissions-Tomographie (PET), Liganden in der Einzel-Fotonen-Emissions-Computer-Tomographie (SPECT) oder als diagnostische radiopharmazeutische Agentien verwendet werden. Der Einbau eines geeigneten Isotops (wie ¹¹C oder ¹⁸F für PET oder ¹²⁵I im Falle von SPECT) kann ein Agens zur Verfügung stellen, das zur Diagnose oder zum therapeutischen Management eines Patienten nützlich ist. Zusätzlich kann die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung eine physiologische, funktionelle oder biologische Beurteilung eines Patienten zur Verfügung stellen oder den Nachweis einer Erkrankung oder einer Pathologie und dessen Beurteilung zur Verfügung stellen.
Wie oben erwähnt wurde, kann die Verabreichung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung verwendet werden, um eine Reihe von Erkrankungen und Krankheiten zu behandeln. Insbesondere können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung an ein warmblütiges Tier zur Behandlung einer Depression, Angstzustand, Panikerkrankung, obsessive-kompulsive Erkrankung, abnormale Aggression, instabile Angina, reaktiver Bluthochdruck, Anorexia nervosa, Bulimie, entzündliches Darmsyndrom, Stress induzierte Immununterdrückung, Schlaganfall, Entzündung, Schmerz, Cushing's Erkrankung, infantile Spasmen, Epilepsie und Substanzmissbrauch bzw. Entzug, verabreicht werden.
Die folgenden Beispiele werden zum Zwecke der Illustration, nicht zur Einschränkung, zur Verfügung gestellt.
BEISPIELE
Repräsentative CRF-Rezeptorantagonisten dieser Erfindung können durch die in den Beispielen 1–4 offenbarten Verfahren hergestellt werden. Beispiel 5 zeigt ein Verfahren zur Bestimmung der Rezeptor-Bindungsaktivität (K_i) und Beispiel 6 offenbart einen Assay zum Screenen von Verbindungen auf CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivität.
Verbindung 1–2
Es wurden 15 g 2,4-Dichlorphenylacetonitril (1–1) in THF (60 ml) aufgelöst. Die Lösung wurde auf 0 °C gekühlt und Natriumhydrid (60 %), 4,19 g, 1,3 Equiv.) und Diethylcarbonat (12,72 ml, 1,3 Equiv.) wurden langsam hinzugefügt. Die Mischung wurde über Nacht unter Rückfluss erwärmt. Das Produkt war durch TLC (R_f des Produkts = 0,33, 20 % EtOAc:Hexan) und durch GC zu erkennen. Die Lösung wurde abgekühlt und 1 N HCl wurde hinzugefügt bis die Mischung leicht sauer war. Die Mischung wurde dreimal mit 70 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Kochsalz gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Das Verdampfen überschüssigen Lösungsmittels ergab 18 g einer öligen, braunen Flüssigkeit 1–2.
Verbindung 1–3
100 ml einer 9:1 Ethanol:Wasser-Lösung wurde zu Verbindung 1–2 hinzugefügt. Hydrazin (2,2 ml, 1,0 Equiv.) wurde hinzugefügt und die Mischung wurde über Nacht unter Rückfluss gekocht. In der TLC bleibt das Produkt an der Basislinie im 50 % Ethylacetat:Hexan-Lösungsmittelsystem. Das Ethanol wurde aus der Lösung verdampft, was einen gelben Feststoff ergab. Der Feststoff wurde mit ungefähr 100 ml Ether gewaschen und in einem Ofen für 3 Tage getrocknet, um 11,62 g 1–3 (59 % Ausbeute) zu ergeben.
Verbindung 1–4
Es wurden 11,27 g der Verbindung 1–3 in getrocknetem Dioxan (100 ml) aufgelöst und 7,1 ml (1,2 Equiv.) Ethylacetoacetat und einige Kristalle pTSA hinzugefügt. Die trübe Mischung wurde über Nacht bei 109 °C zum Rückfluss erwärmt. Die Lösung wurde kühlen gelassen und ein weißer Feststoff fiel zu Boden. Der Feststoff wurde filtriert und 3 × mit Ethylether gewaschen. Der Feststoff wurde getrocknet, um 14,48 g (58 % Ausbeute) des weißen Feststoffes 1–4 zu ergeben.
Verbindung 1–5
10 ml DMF wurden zu 1 g der Verbindung 1–4 hinzugefügt und erhitzt, bis diese vollständig aufgelöst war. Die Lösung wurde gekühlt und Natriumhydrid (60 % in Öl, 0,19 g, 1,5 Eq.) und Ethylbromacetat (0,44 ml, 1,2 Equiv.) wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde unter Stickstoff für 3 Stunden gerührt. 1 N HCl wurde zu der Lösung hinzugefügt, bis der pH ungefähr 7 betrug und die Mischung wurde mit Ethylacetat (3 × 10 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Kochsalz gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet, um 0,75 g der Verbindung 1–5 als weißen Feststoff mit einem R_f von 0,34 unter Verwendung von 100 % Ethylacetat zu ergeben.
Verbindung 1–6
750 mg der Verbindung 1–5 und 1 ml Phosphorsäureoxychlorid wurden über Nacht erhitzt. Es wurden Eiswasser und Natriumbicarbonat hinzugefügt bis die Reaktionsmischung neutral war. Die Mischung wurde mit Ethylacetat (3 ×) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Kochsalz gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Das resultierende dunkelrote/braune Öl wurde durch Kieselgel filtriert. Verbindung 1–6 (0,56 g) wurde als braunes Öl gesammelt. TLC R_f von 1–6 betrug 0,62 unter Verwendung einer 1:1-Lösung Ethylacetat:Hexan.
Verbindung 1–7
Verbindung 1–6 wurde in 4 ml trockenem Acetonitril aufgelöst. 4-Heptylamin (2 ml) wurde hinzugefügt und die Reaktionsmischung wurde bei 90 °C für 5 Stunden zum Rückfluss erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde in vacuo konzentriert, mit Ethylacetat verdünnt und durch ein Kieselgel filtriert. Die Konzentration und das Trocknen über Nacht ergab 0,502 g des Produkts 1–7.
Verbindung 1–8
Trockenes THF (2 ml) und 0,01 g (1,0 Equiv.) Lithiumaluminiumhydrid wurden unter Stickstoff gerührt. Verbindung 1–7 (250 mg) in 3 ml THF wurde hinzugefügt und die Lösung wurde für 1,5 Stunden gerührt und dann bei 70 °C über Nacht zum Rückfluss erhitzt. Das THF wurde verdampft und die resultierende Mischung wurde mit Wasser verdünnt, mit 1 N HCl neutralisiert und mit Ethylacetat (3 × 10 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Salz gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet, um 0,217 g der Verbindung 1–8 zu ergeben.
Verbindung 1–9
Eine Mischung von 1–8 (217 mg) und POCl₃ (4 ml) wurde über Nacht zum Rückfluss erhitzt und dann für 2 Tage gerührt. Eiswasser und Natriumbicarbonat wurden hinzugefügt bis die Mischung neutral war, gefolgt durch Extraktion mit Ethylacetat. Die organische Schicht wurde dann mit Kochsalz gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Die Verdampfung des Lösungsmittels ergab 181 mg der Verbindung 1–9.
Verbindung 1–10
Verbindung 1–9 wurde in 5 ml DMF aufgelöst. Natriumhydrid (60 % in Öl, 0,016 g, 1 Equiv.) wurde hinzugefügt und die Reaktion wurde unter Stickstoff für 24 Stunden gerührt. Nach 24 Stunden wurde ein weiteres Äquivalent NaH hinzugefügt. Die Reaktionsmischung wurde für weitere 6 Stunden gerührt und das Lösungsmittel verdampft. Wasser und Natriumbicarbonat wurden hinzugefügt bis die Mischung neutral war und die Mischung wurde mit Ethylacetat (3 × 8 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Kochsalz gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und in vacuo konzentriert. Die Aufreinigung unter Verwendung einer präparativen TLC-Platte und 30 % Ethylacetat/Hexan als Elutionsmittel ergab die Verbindung 1–10 (10,5 mg, MS-Ion = 433).
BEISPIEL 2 SYNTHESE REPRÄSENTATIVER VERBINDUNGEN
Verbindung 2–3
Natriumhydrid (1,5 Eq.) wird zu einer Lösung der Cyanoverbindung 2–1 in THF hinzugefügt. Verbindung 2–2 (R' ist Halogen, Cyano, Alkoxy; R" ist OH, Alkoxy; 1 Eq.) wird hinzugefügt. Die Mischung wird unter Rückfluss gekocht bis kein Ausgangsmaterial mehr vorhanden ist. Nach der Rückkehr auf Raumtemperatur wird die Mischung mit Wasser behandelt. Die zwei Schichten werden getrennt. Die wässrige Schicht wird mit 1 N HCl angesäuert, gekühlt und filtriert, um die Verbindung 2–3 zu ergeben.
Verbindung 2–4
Eine Suspension der Verbindung 2–3 und Hydrazin-HBr (2 Eq.) in EtOH/H₂O (9/1) wird zum Rückfluss für 0,5 Stunden erhitzt. Ethanol wird in vacuo entfernt und der Rest wird mit Wasser verdünnt. Die wässrige Phase wird basisch mit festem Na₂CO₃ gemacht und das Produkt wird mit Ethylacetat extrahiert. Der Extrakt wird mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und in vacuo konzentriert, um die Verbindung 2–4 zu ergeben.
Verbindung 2–5
Verbindung 2–4 und substituiertes Ethylacetoacetat (2 Eq.) in Dioxan wird zum Rückfluss für 20 Stunden erhitzt. Die Suspension wird abgekühlt und Ether wird hinzugegeben. Der Feststoff wird durch Filtration gesammelt. Verbindung 2–5 wird im nächsten Schritt verwendet.
Verbindung 2–6
Verbindung 2–5 wird in Acetonitril mit einem Überschuss POCl₃ erhitzt. Wenn die Umwandlung vollständig ist, werden das Lösungsmittel und der Überschuss des Reagenz entfernt. Die Reaktionsmischung wird neutralisiert und das Produkt mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organischen Schichten werden zusammengeführt und dreimal mit Wasser und Kochsalz gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Verbindung 2–6 wird durch Kieselgelchromatographie aufgereinigt.
Verbindung 2–7
Verbindung 2–6 wird mit einem Äquivalent des t-Butyldiphenylsilyl-geschützten Diols in der Gegenwart von Natriumhydrid in trockenem DMF kondensiert. Die Mischung wird dann auf 50 °C für 6 Stunden erhitzt. Nach dem Kühlen auf Raumtemperatur wird die Mischung in gesättigtes NH₄Cl gegossen und mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Phasen werden zusammengeführt und dreimal mit Wasser und Kochsalz gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Die Reinigung mittels Flash-Chromatographie ergibt das gewünschte Produkt 2–7.
Verbindung 2–8
Der Silyl-geschützte Alkohol 2–7 wird mit 1 M Bu₄NF in THF behandelt. Nach 3 Stunden wird die Mischung mit Wasser gewaschen und mit EtOAc extrahiert. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Die Aufreinigung mittels Flash-Chromatographie ergibt das gewünschte desylierte Produkt 2–8.
Verbindung 2–9
Das desylierte Produkt 2–8 wird dann mit Methansulfonylchlorid und Triethylamin in CH₂Cl₂ bei 0 °C behandelt. Nach 3 Stunden wird die Mischung mit gesättigtem NH₄Cl und Kochsalz gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Ohne weitere Aufreinigung wird das Mesylat mit NaH in THF bei 0 °C behandelt. Nach einer Stunde wird die Reaktionsmischung in gesättigtes NH₄Cl gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Die Aufreinigung mittels Flash-Chromatographie ergibt das gewünschte Produkt 9.
BEISPIEL 3 SYNTHESE EINES REPRÄSENTATIVEN INTERMEDIATS
Verbindung 3–1
Zu 1,5 Eq. R₁C(NH)OEt und 1 Eq. Pyrazol in Acetonitril wird 1 Eq. Eisessigsäure hinzugefügt. Die Mischung wird bei Raumtemperatur für 3 Tage gerührt. Sie wird dann aufkonzentriert und das Präzipitat abfiltriert, mit Ether gewaschen und getrocknet. Zu einer 1 Eq. NaOEt-Lösung in Ethanol wird 0,1 Eq. des Acetamidino-Feststoffes und 0,8 Eq. Diethylcarbonat [R₃ = Et] hinzugefügt. Die Mischung wird zum Rückfluss für 18 Stunden erhitzt. Nach dem Abkühlen wird das Lösungsmittel entfernt. Der Rückstand wird in Wasser aufgelöst und eine 1 N HCl-Lösung wird langsam bis zu pH = 5–6 hinzugefügt.
Die wässrige Schicht wird mit EtOAc extrahiert. Die organischen Schichten werden zusammengeführt, mit Kochsalz gewaschen, mit MgSO₄ getrocknet und das Lösungsmittel wird verdunstet, um den Feststoff 3–1 zu ergeben.
Verbindung 3–2
Verbindung 3–1 wird in Acetonitril mit einem Überschuss POCl₃ erhitzt. Wenn die Umwandlung vollständig ist, werden das Lösungsmittel und ein Überschuss des Reagenz entfernt. Die Reaktionsmischung wird neutralisiert und das Produkt mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organischen Schichten werden zusammengeführt und dreimal mit Wasser und Kochsalz gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet (MgSO₄) und in vacuo aufkonzentriert. Verbindung 3–2 wird durch Kieselgelchromatographie aufgereinigt.
BEISPIEL 4 SYNTHESE EINES REPRÄSENTATIVEN INTERMEDIATS
Verbindung 4–1
Eine Lösung der Bromverbindung R₁-Br (0,2 mol) in THF (400 ml) wird auf –78 °C gekühlt und langsam mit BuLi (2,5 M, 88 ml, 0,22 Mol) behandelt. Die Mischung wird für 20 Minuten bei –78 °C gerührt und DMF (20,1 ml, 0,24 mol) wird tropfenweise hinzugefügt. Die Mischung wird für 10 Minuten gerührt, das Kühlbad entfernt und die Reaktion wird auf Raumtemperatur wärmen gelassen. Wasser wird hinzugefügt und die wässrige Mischung wird mit Ethylacetat extrahiert, mit Kochsalz gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und in vacuo konzentriert, um 4–1 zu ergeben.
Verbindung 4–2
Eine Lösung von Tosylmethylisocyanid (15,4 g) in Dimethoxyethan (50 ml) wird tropfenweise zu einer Suspension KOBu-t (10,16 g, 90 mMol) in Dimethoxyethan (50 ml) bei –60 °C hinzugefügt. Nach 10 Minuten wird eine Lösung Aldehyd 4–1 (67 mMol) in Dimethoxyethan (75 ml) tropfenweise hinzugefügt. Die Mischung wird bei –50 °C für 30 Minuten gerührt und mit Methanol abgeschreckt (200 ml). Die Mischung wird für eine Stunde zum Rückfluss erhitzt, das Lösungsmittel verdampft und der Rückstand in Ethylacetat/Wasser verteilt. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und durch ein Kieselpolster filtriert, wobei mit Ethylacetat eluiert wird. Das Ethylacetat wird in vacuo aufkonzentriert, um die Verbindung 4–6 (62 mMol) als Öl zu ergeben. Diese Verbindung kann als Ausgangsmaterial in den Beispielen 1 und 2 (d. h. Verbindungen 1–1 und 2–1) verwendet werden.
BEISPIEL 5
CRF-Rezeptor-Bindungsaktivität
Die Verbindungen dieser Erfindung können auf Bindungsaktivität zum CRF-Rezeptor durch einen Standard-Radioliganden-Bindungsassay untersucht werden, wie er im allgemeinen durch DeSouza et al. (J. Neurosci. 7:88 – 100, 1987) beschrieben wird. Durch Verwendung verschiedener radiomarkierter CRF-Liganden kann der Assay verwendet werden, um die Bindungsaktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung mit jeglichem CRF-Rezeptor-Subtyp zu untersuchen. In Kürze, der Bindungsassay, involviert die Verdrängung eines radiomarkierten CRF-Liganden von dem CRF-Rezeptor.
Spezifischer, der Bindungsassay wird in 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen durchgeführt unter Verwendung von ungefähr 1 × 10⁶ Zellen pro Röhrchen, die stabil mit menschlichen CRF-Rezeptoren transfiziert sind. Jedes Röhrchen erhält ungefähr 0,1 ml Assaypuffer (z. B. Dulbecco's phosphatgepufferte Salzlösung, 10 mM Magnesiumchlorid, 20 μM Bacitracin) mit oder ohne nicht-markiertem Sauvagine, Urotensin I oder CRF (Endkonzentration 0,1 μM), um die nicht-spezifische Bindung zu bestimmen, 0,1 ml [¹²⁵I] Tyrosinovines CRF (Endkonzentration ⁓200 pM oder ungefähr die K_D, wie sie durch Scatchard-Analyse bestimmt wird) und 0,1 ml einer Membransuspension von Zellen, die den CRF-Rezeptor enthalten. Die Mischung wird für 2 Stunden bei 22 °C inkubiert, gefolgt durch die Abtrennung des gebundenen und freien Radioliganden durch Zentrifugation. Nach zwei Waschungen der Pellets werden die Röhrchen gerade oberhalb des Pellets abgeschnitten und in einem Gammazähler auf Radioaktivität bei ungefähr 80 % Effizienz ausgezählt. Alle Radioliganden-Bindungsdaten können unter Verwendung des nichtlinearen kleinsten Quadrat-Kurvenanpassungsprogramm LIGAND von Munson und Rodbard (Anal. Biochem. 107:220,1990) analysiert werden.
BEISPIEL 6
CRF-stimulierte Adenylat-Zyklase-Aktivität
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können durch verschiedene funktionelle Tests untersucht werden. Zum Beispiel können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung auf CRF-stimulierte Adenylat-Zyklase-Aktivität untersucht werden. Ein Assay zur Bestimmung der CRF-stimulierten Adenylat-Zyklase-Aktivität kann wie im allgemeinen durch Battaglia et al. (Synapse 1:572, 1987) beschrieben wird mit Modifikationen, um den Assay auf Gesamtzell-Zubereitungen zu adaptieren durchgeführt werden.
Spezifischer, die Standard-Assay-Mischung kann die folgenden, in einem Endvolumen von 0,5 ml enthalten: 2 mM L-Glutamin, 20 mM HEPES und 1 mM IMBX in DMEM-Puffer. In Stimulationsstudien werden ganze Zellen mit den transfizierten CRF-Rezeptoren in Platten mit 24 Vertiefungen ausplattiert und für eine Stunde bei 37 °C mit verschiedenen Konzentrationen CRF-verwandter und nicht-verwandter Peptide inkubiert, um das pharmakologische Rangprofil des jeweiligen Rezeptor-Subtyps zu etablieren. Nach der Inkubation wird das Medium abgesaugt, die Vertiefungen einmal vorsichtig mit frischem Medium gespült und das Medium abgesaugt. Um die Menge an intrazellulärem cAMP zu bestimmen, werden 300 μl einer Lösung von 95 % Ethanol und 20 mM wässriger Salzsäure zu jeder Vertiefung hinzugefügt und die resultierenden Suspensionen werden bei –20 °C für 16 bis 18 Stunden inkubiert. Die Lösung wird in 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen entfernt und die Vertiefungen werden mit zusätzlichen 200 μl Ethanol/wässrige Salzsäure gewaschen und mit der ersten Fraktion zusammengeführt. Die Proben werden lyophilisiert und dann mit 500 μl Natriumacetatpuffer resuspendiert. Die Messung von cAMP in den Proben wird unter Verwendung eines Einzelantikörperkits von Biomedical Technologies Inc. (Stoughton, MA) durchgeführt. Für eine funktionelle Untersuchung der Verbindungen wird eine einzelne Konzentration an CRF oder verwandter Peptide, die eine 80 %ige Stimulierung der cAMP-Produktion bewirken, zusammen mit verschiedenen Konzentrationen kompetierender Verbindungen (10^–12 bis 10^–6 M) inkubiert.
Man wird zu schätzen wissen, dass, obwohl spezifische Ausführungsformen der Erfindung hierin zum Zwecke der Illustration beschrieben wurden, verschiedene Veränderungen durchgeführt werden können, ohne vom Gedanken und Umfang der Erfindung abzuweichen. Dementsprechend ist die Erfindung außer durch die beigefügten Ansprüche nicht eingeschränkt.

Claims

Verbindung mit der folgenden Struktur:
oder ein Stereoisomer oder pharmazeutisch annehmbares Salz davon, worin: X Stickstoff oder CR₃ ist; A O, S oder NR₄ ist; "–––" eine wahlfreie Doppelbindung bedeutet; R ein wahlfreier Substituent ist, welcher bei jedem Vorkommen unabhängig Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Alkylidenyl, Arylalkyl oder Heteroarylalkyl ist, wobei m 0, 1, 2 oder 3 ist und die Anzahl der Substituenten R bedeutet; R₁ Alkyl, substituiertes Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, Heteroaryl oder substituiertes Heteroaryl ist; R₂ Wasserstoff, Halogen, Cyano, Alkyl, substituiertes Alkyl, Alkoxy oder Thioalkyl ist; R₃ Wasserstoff, Halogen, Alkyl oder substituiertes Alkyl ist; und R₄ Wasserstoff, Alkyl, substituiertes Alkyl, Aryl, substituiertes Aryl, ein Heterocyclus oder substituierter Heterocyclus ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei A O ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei A S ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei A NR₄ ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X Stickstoff ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X CR₃ ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₁ substituiertes Aryl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₁ substituiertes Phenyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₂ Alkyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei m 0 ist.
Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel.
Zusammensetzung nach Anspruch 11 zur Verwendung in einem Verfahren zum Behandeln einer Störung, die eine Hypersekretion von CRF in einem warmblütigen Lebewesen manifestiert, umfassend das Verabreichen einer wirksamen Menge der Zusammensetzung an das Lebewesen.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Störung ein Schlaganfall ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Störung eine Depression ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die Störung eine Angst ist.