DE4432485A1 - Rapid test for the differentiation of erythrocyte characteristics - Google Patents
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Abstract
Description
Gegenstand der Erfindung ist ein Schnelltest zur Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen, vor allem geeignet zur Verwendung als Bedside-Test zur einfachen und schnellen Bestimmung von Blutgruppen oder deren Bestätigung aus Kapillarblut, der aber auch mit Erythrocytensuspensionen durchführbar ist, wenn die Zelldichte derjenigen von Vollblut entspricht, wobei die Testkarte gleichzeitig zur Dokumentation des Tests verwendbar ist.The invention relates to a rapid test for Differentiation of erythrocyte characteristics, especially suitable for use as a bedside test for simple and rapid determination of blood groups or their Confirmation from capillary blood, but also with Erythrocyte suspensions are feasible if the Cell density corresponds to that of whole blood, the Test card at the same time as documentation of the test is usable.
Bedsidetests sind als Bestätigungstests unmittelbar vor der Transfusion vorgeschrieben, da im allgemeinen der Spender bei der Transfusion nicht selbst zugegen ist, um Verwechslungen von Blutkonserven auszuschließen. Derartige Tests sind seit etwa 1908 beschrieben und wurden zuerst in Anwesenheit des Spenders durchgeführt. Seit 1955 wurde auf Kartons mit eingetrockneten Antiseren ein ABO/Rh Bedsidetest verwendet, es folgten Teste mit gebrauchsfertigen, flüssigen Antiseren, dann Dipsticks auf Elisa-Basis.Bedside tests are immediately before as confirmation tests of transfusion, since in general the Donor is not present at the transfusion itself Eliminate mix-ups from stored blood. Such Tests have been described since about 1908 and were first published in Presence of the donor carried out. Since 1955 has been on Cardboard boxes with dried antisera an ABO / Rh Bedsidetest used, followed by tests ready-to-use, liquid antisera, then dipsticks on Elisa base.
Alle diese Tests benötigen mindestens 1-2 Minuten zur Austestung, ggf. noch 10 Minuten zur Vorbereitung und sind bis auf die Dipsticks nur durch schriftliches Protokoll dokumentierbar.All of these tests take at least 1-2 minutes to complete Testing, possibly 10 minutes to prepare and are except for the dipsticks only by written protocol documentable.
Der erfindungsgemäße Test basiert auf der auf Runge und Schönbein zurückgehenden Methode der Kapillaranalyse bzw. Papierchromatographie. Die papierchromatographische Auftrennung von Proteinen ist eine gängige, jedoch aufwendige Methode. So ist zum Beispiel die Bestimmung von ABO-Gruppen-Antigenen in verwestem Blut mittels aufsteigender Papierchromatographie in Salzsäure/Methanol- Systemen beschrieben, wobei die Antigene nach anschließender Elution bestimmt werden (Kuchkinov, Aktual. Vopr. Sud.-Med. Ekspert. Veshchestv. Dokazatel′stv, 1982, 38-44 (Chemical Abstracts 101, 1984, 67 173)). Dieses umständliche Verfahren ist natürlich völlig ungeeignet für einen Bedside-Test, bei dem es auf Schnelligkeit, Genauigkeit und Dokumentierbarkeit ankommt.The test according to the invention is based on that on stanchions and Schönbein's method of capillary analysis or Paper chromatography. The paper chromatographic Separation of proteins is a common one, however elaborate method. For example, the determination of ABO group antigens in decayed blood ascending paper chromatography in hydrochloric acid / methanol Systems described, the antigens according to subsequent elution (Kuchkinov, Aktuell. Vopr. Sud.-Med. Ekspert. Veshchestv. Dokazatel′stv, 1982, 38-44 (Chemical Abstracts 101, 1984, 67 173)). This cumbersome procedure is of course completely unsuitable for a bedside test where speed, Accuracy and documentability are important.
Bekannterweise ist zudem die papierchromatographische Bestimmung von Blutgruppen nicht möglich, da Chromatographiepapiere keine Differenzierung zwischen agglutinierten und nicht agglutinierten Blutproben erlauben.It is also known that paper chromatography is used Blood groups cannot be determined because Chromatography papers no differentiation between agglutinated and non-agglutinated blood samples allow.
Aufgabe der Erfindung ist daher die Bereitstellung eines schnellen, einfach zu handhabenden, sicheren und dokumentierbaren Tests zur Blutgruppenbestätigung.The object of the invention is therefore to provide a fast, easy to use, safe and Documentable tests for blood group confirmation.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß eine kapillaranalytische Blutgruppenbestätigung mittels Papier und einem Laufmittel durchführbar ist, wobei Erythrozyten durch das Laufmittel transportiert werden und durch deren unterschiedliche Migration eine dauerhafte Dokumentation zur Verfügung steht. Bei Zusatz von passenden Antiseren wird dieser Transport der Erythrozyten durch deren Agglutination blockiert, da die Agglutinate immobil sind. Chromatographiepapiere erlauben keine Differenzierung zwischen agglutinierten und nicht agglutinierten Bluten, obwohl für diese Papiere die Papierherstellung auf Konstanz und Reproduzierbarkeit optimiert wurde.Surprisingly, it has now been found that a Capillary analytical blood group confirmation using paper and an eluent can be carried out, with erythrocytes are transported by the solvent and by their different migration permanent documentation is available. With the addition of suitable antisera this transport of the erythrocytes by their Agglutination blocked because the agglutinates are immobile. Chromatography papers do not allow differentiation between agglutinated and non-agglutinated bleeding, although papermaking on these papers Constancy and reproducibility has been optimized.
Gegenstand der Erfindung ist daher ein Schnelltest zur Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen auf Papier, auf welchem die entsprechenden Antiseren aufgetragen werden, und die Differenzierung durch die unterschiedliche Migration der Erythrozyten durch ein Laufmittel optisch und dauerhaft möglich ist. The invention therefore relates to a rapid test for Differentiation of erythrocyte characteristics on paper, on to which the corresponding antisera are applied, and differentiation through the different Migration of the erythrocytes optically by means of an eluent and is permanently possible.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher die Verwendung des erfindungsgemäßen Tests zur raschen Bestimmung von Blutgruppen, deren Unterscheidung und/oder der Bestimmung von Blutgruppenunverträglichkeiten.Another object of the invention is therefore Use of the test according to the invention for rapid Determination of blood groups, their differentiation and / or the determination of blood group intolerance.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist eine sogenannte Bedside-Testkarte zur raschen und sicheren Überprüfung von Spender- und Empfängerblut direkt vor der Übertragung und deren Dokumentation, sowie die Herstellung dieser Karten.Another object of the invention is a so-called Bedside test card for quick and safe verification of Donor and recipient blood immediately before transmission and their documentation, as well as the production of these cards.
Geeignete Papiersorten für den erfindungsgemäßen Test sind ungeleimte Papiere, bevorzugt Filtrierpapier (wie z. B. Laborfiltrierpapier oder Kaffeefilter), Fließpapier (wie z. B. Küchenkrepp, Löschpapier, Trockentücher aus Papier oder Aufsaugpapier, beispielsweise für Labortische) oder Hygienepapier (wie z. B. Toilettenpapier oder Haushaltstücher, Handtücher, Taschentücher und Servietten aus Papier). Besonders bevorzugt sind Papiere der Qualität Toilettenpapier, Abtrockentücher, Kaffeefilter, Aufsaugpapier, wobei ganz besonders bevorzugt Papierqualitäten für Kaffeefilter und Aufsaugpapier für Labortische sind. Die Papiere können bevorzugt auch eine einseitige Beschichtung aus lösungsmittelundurchlässigem Material, bevorzugt Polyethylen, aufweisen, durch welches die Befestigung auf der Dokumentations-Testkarte erheblich erleichtert wird und die ein Eindringen von Lösungsmitteln und Testsubstanzen in die Testkarte verhindert.Suitable types of paper are for the test according to the invention unsized paper, preferably filter paper (such as Laboratory filter paper or coffee filter), blotting paper (such as e.g. B. paper towels, blotting paper, paper towels or absorbent paper, for example for laboratory tables) or Sanitary paper (such as toilet paper or Household towels, hand towels, handkerchiefs and napkins made of paper). Quality papers are particularly preferred Toilet paper, wipes, coffee filters, Absorbent paper, with particular preference Paper grades for coffee filters and absorbent paper for Laboratory tables are. The papers can preferably also be one one-sided coating made of solvent-impermeable Have material, preferably polyethylene, through which the mounting on the documentation test card considerably is facilitated and the penetration of solvents and test substances in the test card prevented.
Eine praktikable Ausführungsform des erfindungsgemäßen
Schnelltests ist als Beispiel in Fig. 1 dargestellt. Auf
dieser nur als beispielhaft zu betrachtenden Testkarte
bedeutet
1 - Beschriftungsfelder zur Aufnahme der
Identifikationsangaben für Spender und/oder
Empfänger,
2 - ggf. ein zusätzliches Informationsfeld für
technisch und dokumentarische Angaben, Signaturen
etc.,
3 - aufgeklebt je Probe ein Analysenfeld aus den o.g.
Trennmaterialien mit
4 - der Auftragsfläche für das Lauf- oder
Fließmittel,
5 - mindestens einer linearen Auftragszone für das
Testblut,
6 - mindestens einer linearen Auftragszone der
Antiseren und
7 - mindestens einer Laufzone für die nicht
agglutinierten Erythrozyten,
8 - einem Vorratsfeld je Probe, auf welchem das
entnommene Kapillarblut bzw. Blut zunächst
aufgetragen wird.A practical embodiment of the rapid test according to the invention is shown as an example in FIG. 1. On this test card, which is only to be regarded as an example, means
1 - labeling fields for the identification information for donors and / or recipients,
2 - if necessary, an additional information field for technical and documentary information, signatures etc.,
3 - glued an analysis field from the above-mentioned separation materials with each sample
4 - the application area for the eluent or superplasticizer,
5 - at least one linear application zone for the test blood,
6 - at least one linear application zone of the antisera and
7 - at least one running zone for the non-agglutinated erythrocytes,
8 - a storage field per sample, on which the capillary blood or blood is initially applied.
In bevorzugter Form hat das Analysenfeld (3) ein kammartiges Aussehen mit mehreren Laufzonen (5), bevorzugt vier.In a preferred form, the analysis field ( 3 ) has a comb-like appearance with several running zones ( 5 ), preferably four.
Die in der Antiseren-Auftragszone (5) aufgetragenen Antiseren sind mono- oder polyklonale kommerzielle Präparate der Spezifitäten Anti-A, Anti-B und Anti-D, besonders bevorzugt sind monoklonale Antiseren. Sie wurden als optimal für dieses Verfahren gefunden. An diesen Positionen werden 2-5 µl Antiserum in handelsüblicher Konzentration manuell je nach Bedarf und auszutestenden Blutgruppensystemen aufgetragen. Bevorzugt sind für Standard-Untersuchungen die Antiseren bereits industriell durch übliche Druckverfahren aufgetragen.The antisera applied in the antisera application zone ( 5 ) are mono- or polyclonal commercial preparations with the specificities anti-A, anti-B and anti-D, and monoclonal antisera are particularly preferred. They were found to be optimal for this procedure. At these positions, 2-5 µl antiserum in commercial concentration is applied manually as required and the blood group systems to be tested. For standard examinations, the antisera are preferably already applied industrially by customary printing processes.
Zur Durchführung des Tests wird das Kapillarblut (aus der Fingerbeere oder dem Ohrläppchen) oder das Spenderblut zunächst auf das Vorratsfeld (8) gegeben, welches bevorzugt aus einer undurchlässigen und indifferenten Folie besteht, von welcher die einzelnen Testfelder beschickt werden. Der verbleibende Rest kann vorzugsweise nach Eintrocknung ebenfalls mit einer Folie abgedeckt werden und dient als Referenzprobe für gegebenenfalls später zusätzlich erforderliche Tests, vor allem forensischer Art. Von diesem Kapillarblut bzw. Spenderblut werden dann 2-5 µl auf die Testblut-Auftragszone (5) gegeben.To carry out the test, the capillary blood (from the fingertip or the earlobe) or the donor blood is first placed on the storage field ( 8 ), which preferably consists of an impermeable and indifferent film from which the individual test fields are fed. The remainder, preferably after drying, can also be covered with a film and serves as a reference sample for any additional tests that may be required later, especially forensic types. From this capillary blood or donor blood, 2-5 µl is then added to the test blood application zone ( 5 ) .
Als Fließmittel für die Analyse dient ein für den Transport der Erythrozyten geeignetes Fließmittel, wie beispielsweise LISS- (lower ionic strenghts solution) oder PBS-Lösungen (phosphate buffered saline), bevorzugt physiologische Kochsalzlösung. Werden ca. 100-500 µl Fließmittel auf die Fließmittel-Auftragszone (4) der waagerecht liegenden Testkarte gegeben, so erreicht die Fließmittelfront schon nach wenigen Sekunden das Ende der Laufzone (7), wobei der Blutfleck bei Agglutination an der Auftragszone der Antiseren (6) verbleibt oder bei schwacher oder fehlender Agglutination sich mit dem Fließmittel bewegt.A flow agent suitable for the transport of the erythrocytes, such as, for example, LISS (lower ionic strength solution) or PBS (phosphate buffered saline) solutions, preferably physiological saline, is used as the flow agent for the analysis. If approx. 100-500 µl of superplasticizer is added to the superplasticizer application zone ( 4 ) of the horizontal test card, the superplasticizer front will reach the end of the running zone ( 7 ) after a few seconds, with the blood stain on agglutination at the application zone of the antisera ( 6 ) remains or moves with the superplasticizer if the agglutination is weak or missing.
Überraschend sind Schnelligkeit und Sensitivität der Methode, die nur Sekunden braucht, während herkömmliche Tests aus dem Stand der Technik im Bereich von eventuell 10-15 Minuten liegen.Speed and sensitivity are surprising Method that takes only seconds while conventional State of the art tests in the range of possibly Lie 10-15 minutes.
Das in Fig. 1 dargestellte Analysenfeld (3) ist im Rahmen der Erfindung nur als Beispiel anzusehen und die Beschränkung auf 4 Laufzonen (7) nur eine mögliche Ausführungsform. Es sind selbstverständlich Ausführungsformen mit nur einer Laufzone sowie mit einer beliebigen Zahl möglich, so daß mit einem einzigen Test gegen weitere Antiseren geprüft werden kann.The analysis field ( 3 ) shown in FIG. 1 is only to be regarded as an example within the scope of the invention and the restriction to 4 running zones ( 7 ) is only one possible embodiment. Embodiments with only one running zone and with any number are of course possible, so that testing can be carried out with a single test against further antisera.
Monoklonale Antiseren der Spezifitäten Anti-M und Anti-N, sowie Anti-Le-a und Anti-Le-b sind ebenfalls auf diese Weise als Schnelltests erprobt worden und bieten sowohl aus Kapillarblut wie aus Erythrocytensuspension herkömmlichen Testen den o.g. genannten entscheidenden Zeitvorteil bei der Schnellauswahl von Blutkonserven. Der Test bietet sich daher neben dem AB0-Blutgruppensystem allgemein für die schnelle Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen mit monoklonalen Antikörpern der IgM-Klasse an, zum Beispiel der Duffy-, Kell-Cellano-, Kidd-, Lewis-, Lutheran-, MNSs-, P-, Rhesus-, HLA-System oder des Plasmaproteinpolymorphismus.Monoclonal antisera of the specificities Anti-M and Anti-N, as well as anti-le-a and anti-le-b are also on these Way have been tried as rapid tests and offer both from capillary blood as from erythrocyte suspension conventional testing the above crucial mentioned Time advantage when selecting blood products quickly. Of the Test is therefore available in addition to the AB0 blood group system general for the rapid differentiation of Erythrocyte features with monoclonal antibodies to the IgM class, for example the Duffy, Kell-Cellano, Kidd, Lewis, Lutheran, MNSs, P, Rhesus, HLA system or plasma protein polymorphism.
Da Blutgruppenverträglichkeiten vor einer Übertragung ausgetestet werden müssen, bietet sich der erfindungsgemäße Schnelltest auf Papier besonders zur industriellen Herstellung von Bedside-Testkarten an, indem eine Karte aus Papier, Karton oder einem geeigneten Kunststoffmaterial mit den notwendigen Angaben und Feldern zur Aufnahme von Informationen vorbedruckt wird. Anschließend werden dann das Analysenfeld (3) aus beschichtetem Papier aufgeklebt sowie das Referenzfeld (8) für die Aufnahme der Blutprobe.Since blood group compatibility must be tested before transmission, the rapid test according to the invention is particularly suitable for the industrial production of bedside test cards, in that a card made of paper, cardboard or a suitable plastic material is pre-printed with the necessary information and fields for receiving information. Then the analysis field ( 3 ) made of coated paper and the reference field ( 8 ) for taking the blood sample are glued on.
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- 1995-09-06 EP EP95931995A patent/EP0781415A1/en not_active Withdrawn
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1996008723A1 (en) | 1996-03-21 |
| AU3522295A (en) | 1996-03-29 |
| EP0781415A1 (en) | 1997-07-02 |
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