DE3825186A1

DE3825186A1 - Lectin-containing compositions which can be administered orally for treating metastases

Info

Publication number: DE3825186A1
Application number: DE19883825186
Authority: DE
Inventors: Ta Cheng Tung
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-03-28
Filing date: 1988-07-25
Publication date: 1989-03-16

Abstract

Compositions for suppressing postoperative malignant tumour metastases, containing the lectins abrin and abrus agglutinin, both alone and in combination with other chemotherapeutics, are disclosed.

Description

Die Erfindung betrifft orale Verabreichungsformen von Lektinen, insbesondere Abrin und Abrus-Agglutinin, zur Unterdrückung nach-operativer maligner Tumor-Metastasen. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können Abrin und Abrus-Agglutinin alleine oder zusammen mit einem chemotherapeutischen Mittel gegen Krebs enthalten. Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können gleichzeitig mit oder nach einer Strahlen- und/oder chemotherapeutischen Behandlung zur Unterdrückung maligner Tumor-Metastasen verwendet werden.The invention relates to oral forms of administration of lectins, especially Abrin and Abrus agglutinin, for the suppression of post-operative malignant tumor metastases. The compositions according to the invention Abrin and Abrus agglutinin can be used alone or together with a chemotherapeutic agent for cancer contain. The preparations according to the invention can simultaneously with or after a radiation and / or chemotherapy treatment for suppression malignant tumor metastases can be used.

Traditionell wurden Lektine an an Krebs erkrankte Patienten parenteral verabreicht. Diese Behandlung mußte im Krankenhaus durch Ärzte vorgenommen werden. Die klinische Anwendung von Lektinen wurde durch dieses Erfordernis, daß Lektinzubereitungen einem an Krebs erkrankten Patienten im Krankenhaus unter direkter ärztlicher Überwachung verabreicht werden mußten, behindert. Die parenterale Verabreichung eines Arzneimittels ist außerdem mit gewissen Risiken verbunden.Lectins have traditionally been used to treat cancer Patients administered parenterally. This treatment had to be done by doctors in the hospital. The clinical use of lectins was through this Requirement that lectin preparations have cancer sick patients in the hospital under direct medical supervision had to be administered, with special needs. The parenteral administration of a drug is also associated with certain risks.

Es besteht deshalb ein großer Bedarf für sicherere oral verabreichbare Lektinzubereitungen, die ein krebskranker Patient ohne direkte ärztliche Überwachung selbst einnehmen kann, um die klinische Verwendung dieser Zubereitungen auszudehnen. Wie nachstehend im einzelnen beschrieben, umfassen die erfindungsgemäßen Zubereitungen Lektine in einer oral verabreichbaren Form, die signifikante Anti-Krebs-Wirkungen, insbesondere bei der Inhibierung von Metastasen, zeigen.There is therefore a great need for safer ones orally administrable lectin preparations, which are a cancer Patient without direct medical supervision itself can take to clinical use of these preparations to expand. As follows described in detail include the invention Preparations lectins in an orally administrable Form, the significant anti-cancer effects, especially in the inhibition of metastases.

Erfindungsgemäß werden oral verabreichbare, Lektine enthaltende Anti-Metastasen-Zubereitungen bereitgestellt, die zahlreiche praktische Anwendungen zur Unterdrückung von malignen Tumor-Metastasen und für die Förderung der Immunität gegen Krebs, AIDS und Hepatitis haben. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen stellen danach einen wertvollen Beitrag für die post-operative Behandlung von Krebs dar. Erfindungsgemäß wird eine sichere, oral zu verabreichende Zubereitung bereitgestellt, die einem krebskranken Patient leicht ohne direkte ärztliche Intervention verabreicht werden kann. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann täglich oral verabreicht werden, und zwar auch zusammen mit und/oder auf eine chemotherapeutische und/oder Strahlen-Behandlung folgend. Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können die Lektine als einzigen wirksamen Bestandteil oder zusammen mit einem Chemotherapeutikum gegen Krebs für eine post-operative Behandlung enthalten.According to the invention, lectins that can be administered orally anti-metastatic preparations containing provided the numerous practical applications for Suppression of malignant tumor metastases and for promoting immunity to cancer, AIDS and Have hepatitis. The compositions according to the invention then make a valuable contribution to the post-operative treatment of cancer. According to the invention becomes a safe, oral preparation provided to a cancer patient administered easily without direct medical intervention can be. The composition according to the invention can be administered orally daily, including together with and / or on a chemotherapy and / or radiation treatment. The invention Preparations can be the only lectins effective ingredient or together with a chemotherapy drug against cancer for post-operative treatment contain.

Ein wichtiges Ziel der vorliegenden Erfindung ist es deshalb, sichere, oral verabreichbare Lektin-Metastasen wirksam unterdrücken und von einem krebskranken Patienten ohne direkte ärztliche Überwachung eingenommen werden können.An important object of the present invention is it therefore, safe, orally administrable lectin metastases effectively suppress and from a cancer patient Patients taken without direct medical supervision can be.

Gegenstand der Erfindung sind dabei sowohl oral verabreichbare Zubereitungen, in denen ein Lektin der einzige wirksame Bestandteil ist, als auch solche Zusammensetzungen, in denen ein Lektin mit einem Chemotherapeutikum gegen Krebs kombiniert ist.The invention relates to both orally administrable Preparations in which a lectin is the only one active ingredient, as well as such compositions, in which a lectin with a chemotherapy drug is combined against cancer.

Lektine sind zellagglutinierende Proteine mit spezifischer Affinität für eine große Vielzahl von Kohlenhydraten. Viele Pflanzen, wie beispielsweise Bohnen, Gemüse und medizinische Kräuter, enthalten unterschiedliche Lektine in ihren Samen, Blättern, Rinde usw. (1). Phytohemagglutinin (PHA), ConcanavalinA (ConA), Abrin, Abrus-Agglutinin (AAG), Ricin, Ricinusagglutinin, Sojabohnenagglutinin und Weizenkeimagglutinin (WGA) gehören zu den bekannten Lektinen, die aus Pflanzen isoliert wurden. Diese glycophilen Proteine haben eine spezifische Affinität für Kohlenhydrate und binden an die endständigen Monosaccharidanteile der Zellmembranrezeptoren (2). Demgemäß erfolgt eine Anlagerung (3), gefolgt von einer Endozytose.Lectins are cell agglutinating proteins with more specific Affinity for a wide variety of carbohydrates. Many plants, such as beans, Vegetables and medicinal herbs contain different ingredients Lectins in their seeds, leaves, bark, etc. (1). Phytohemagglutinin (PHA), concanavalinA (ConA), Abrin, Abrus Agglutinin (AAG), Ricin, Ricinus Agglutinin, Soybean agglutinin and wheat germ agglutinin (WGA) are among the well-known lectins that come from plants were isolated. These have glycophilic proteins a specific affinity for carbohydrates and bind to the terminal monosaccharide portions of the cell membrane receptors (2). Accordingly, an attachment takes place (3) followed by endocytosis.

Lektine dringen in das Cytoplasma ein und lösen biologische Antworten aus, wie beispielsweise die Induktion von Lymphokinen, wie beispielsweise Interferonen (4, 5) die Stimulierung von DNA-Synthese, gefolgt von mitogener Zellteilung (6) und, nach Eintritt in die Zellen, die Unterdrückung der Protein- und DNA-Synthese (7). Lektine wurden vorgeschlagen, um die Entwicklung von Tumor- oder Krebszellen in vitro entweder direkt über Makrophagen oder durch Aktivierung von T-Lymphocyten (8-10) zu verhindern. Anti-Tumor-Wirkungen von Lektinen in vivo wurden bei Tieren nach parenteraler Verabreichung (11-13) gezeigt, die Verwendung von oral verabreichten Lektinen wurde in der Literatur jedoch nicht berichtet. Es ist ferner gezeigt worden, daß ein Teil der oral verabreichten Lektine an die Membranrezeptoren von Lymphocyten auf den Magen-Darm-Wänden binden und in den Körper eindringen. Deshalb werden Lektine in Nahrungsmitteln, die nicht während des Kochens oder des Verdauens zerstört werden, über das Lymphsystem des Verdauungstraktes absorbiert und üben ihre spezifischen biologischen Funktionen aus. Es ist auch gezeigt worden, daß Abrus-Agglutinin und Abrin isoliert aus Samen von Abrus precatorius R-Interferone induziert und deshalb die Immunität gegen Krebs verstärkt (5).Lectins penetrate the cytoplasm and dissolve biological ones Answers, such as induction of lymphokines, such as interferons (4, 5) stimulation of DNA synthesis followed by mitogenic Cell division (6) and, after entering the cells, the suppression of protein and DNA synthesis (7). Lectins have been suggested to help develop Tumor or cancer cells in vitro either directly Macrophages or by activation of T lymphocytes (8-10) to prevent. Anti-tumor effects of lectins in vivo in animals after parenteral administration (11-13) demonstrated the use of orally administered However, lectins were not found in the literature reported. It has also been shown that part of the orally administered lectins to the membrane receptors of lymphocytes bind to the gastrointestinal walls and penetrate into the body. That is why lectins are in Foods that are not during cooking or of digestion are destroyed through the lymphatic system of the digestive tract are absorbed and exercise their specific biological functions. It is also shown been isolated from that Abrus-Agglutinin and Abrin Seeds of Abrus precatorius R-interferons induced and therefore increases immunity to cancer (5).

Weitere Literatur zum Stand der Technik umfaßt Lin, 1969 (15); Post, 1980 (16); Wang, 1982 (17) und Sharon und Lis, 1975 (18).Further prior art literature includes Lin, 1969 (15); Post, 1980 (16); Wang, 1982 (17) and Sharon and Lis, 1975 (18).

Es wurde gefunden, daß oral verabreichtes AAG oder Abrin signifikante Anti-Krebs-Wirkungen hat, insbesondere bei der post-operativen Inhibierung maligner Tumor-Metastasen.Orally administered AAG or Abrin has significant anti-cancer effects, in particular in the post-operative inhibition of malignancy Tumor metastases.

AAG und Abrin sind Lektinproteine mit einem Molekulargewicht von 130 000 bzw. 65 000. Es wurde gefunden, daß oral verabreichtes AAG und Abrin biologisch aktiv sind. Mäuse zeigten nach Verabreichung oraler Dosen von AAG oder Abrin eine Erhöhung der peripheren Leukocyten und T-Lymphocyten sowie die Induktion von R-Interferon (5). Diese Beobachtungen beweisen die Absorption von oral verabreichtem AAG, Abrin und anderen Lektinen. Eine orale Verabreichung ist wesentlich bequemer und sicherer als eine parenterale Verabreichung durch Ärzte im Krankenhaus.AAG and Abrin are lectin proteins with a molecular weight of 130,000 and 65,000, respectively. that orally administered AAG and abrin are biologically active are. Mice showed oral doses after administration of AAG or Abrin an increase in peripheral leukocytes and T lymphocytes and the induction of R interferon (5). These observations prove the absorption of orally administered AAG, Abrin and others Lectins. Oral administration is essential more convenient and safer than parenteral administration by doctors in the hospital.

Viele Lektine sind normale Bestandteile von Pflanzen und Gemüsen, die sicher, eßbar und nicht toxisch sind. Lektine werden beim Kochen zerstört. Um ihre biologische Wirksamkeit zu erhalten, sollten Lektine aus den Pflanzen extrahiert und zu oralen Verabreichungsformen verarbeitet werden. Die tägliche Einnahme von Lektinen stellt die Immunität gegen Krebs, AIDS und Hepatitis wieder her.Many lectins are normal components of plants and vegetables that are safe, edible, and non-toxic. Lectins are destroyed during cooking. To their biological To get effectiveness, lectins should be made the plants extracted and oral administration forms are processed. The daily intake of Lectins restores immunity to cancer, AIDS and Hepatitis recovered.

Die biologischen Wirkungen oral verabreichter Lektine wurden untersucht.The biological effects of lectins administered orally were examined.

Eine Dosis von 2 mg des Lektins Con-A-FITC wurde sechs Mäusen verabreicht, die 1,5 bis 2 Stunden später getötet wurden. Die Untersuchung von kryogenen Schnitten des Magen-Darm-Traktes unter dem Fluoreszenzmikroskop zeigte fluoreszierende Lymphocyten im Bereich von Flimmerhärchen, Payer's Lappen und laminarer Propria des Magen-Darm-Traktes.A dose of 2 mg of the lectin Con-A-FITC was six Mice administered that killed 1.5 to 2 hours later were. Examination of cryogenic sections of the gastrointestinal tract under the fluorescence microscope showed fluorescent lymphocytes in the range of Cilia, Payer's rag and laminar propia of the gastrointestinal tract.

In einer anderen Untersuchung waren Mäuse, die täglich eine orale Dosis von AAG (200 ng) oder Abrin (20 ng) und S-180 Tumorzellen (1-2 × 10⁶) (14) über Schwanzvenen Injektion erhielten, signifikant weniger anfällig für Tod und Tumor-Metastasen der Lunge als die Kontrollgruppe, wenn die Mäuse drei Wochen nach der Behandlung untersucht wurden. Einige mit AAG oder Abrin behandelten Mäusen erholten sich sogar vom Krebs (vgl. (14), Tabelle I und Fig. 1-8).In another study, mice who received an oral dose of AAG (200 ng) or Abrin (20 ng) and S-180 tumor cells (1-2 × 10⁶) (14) daily via tail vein injection were significantly less susceptible to death and Tumor metastases to the lungs as the control group when the mice were examined three weeks after treatment. Some mice treated with AAG or Abrin even recovered from cancer (see (14), Table I and Fig. 1-8).

Es war unerwartet, daß das oral den Mäusen verabreichte Lektin bioverfügbar und für die Unterdrückung von Tumor-Metastasen wirksam war.It was unexpected that this was administered orally to the mice Lectin bioavailable and for the suppression of Tumor metastases were effective.

Es wurde gefunden, daß die Unterdrückung von Tumor-Metastasen in größerem Umfang bei der Verabreichung von Lektinen zusammen mit und/oder nachfolgend auf eine chemotherapeutische und/oder Strahlenbehandlung eintrat, als bei Chemotherapie und/oder Strahlenbehandlung alleine. Die tägliche Verabreichung von Lektinen ergab auch eine verstärkte Immunität (4-6). Demgemäß sind Lektine zur Kontrolle von Krebs, AIDS und Hepatitis wirksam.It has been found that the suppression of tumor metastases to a greater extent when administered of lectins together with and / or subsequently chemotherapy and / or radiation treatment occurred when chemotherapy and / or radiation treatment alone. Daily administration of lectins also resulted in increased immunity (4-6). Accordingly are lectins to control cancer, AIDS and hepatitis effective.

Die erfindungsgemäßen Zubereitungen, die nach der in dieser Anmeldung beschriebenen Methode hergestellt wurden, werden oral täglich Krebspatienten nach der Operation verabreicht, um maligne Tumor-Metastasen zu unterdrücken.The preparations according to the invention, according to the method described in this application cancer patients are orally daily after the Surgery administered to malignant tumor metastases to suppress.

Die Zubereitungen werden täglich über einen Behandlungszeitraum verabreicht, bis ein Patient frei von Krebs ist, im allgemeinen fünf Jahre lang.The preparations are made daily over a treatment period administered until a patient is free of Cancer is, generally for five years.

Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten im allgemeinen eine Lektinmenge, die der täglichen Dosiseinheit entspricht. Kleinere Mengen für mehrfache Verabreichungen während der Dauer eines Tages können jedoch ebenfalls benutzt werden.The compositions according to the invention contain generally an amount of lectin that the daily Dose unit corresponds. Smaller quantities for multiple Administrations for the duration of a day can however, can also be used.

Für AAG oder Abrin liegt die tägliche Mindestdosis, die noch für die Unterdrückung von Krebs-Tumor-Metastasen wirksam ist, im allgemeinen bei ungefähr 10 ng. Die Wirksamkeit von AAG nimmt zu, wenn die tägliche Dosis auf bis zu 500 ng gesteigert wird. Tägliche Dosen über dieser Menge zeigen keine gesteigerte Wirksamkeit bei der Unterdrückung von Krebs-Tumor- Metastasen mehr. Der bevorzugte Bereich der Tagesdosis liegt zwischen ungefähr 50 und ungefähr 200 ng.The minimum daily dose for AAG or Abrin is which are still for the suppression of cancer tumor metastases is effective, generally at around 10 ng. The effectiveness of AAG increases if the daily dose is increased up to 500 ng. Daily doses above this amount show no increase Effectiveness in Cancer Cancer Suppression More metastases. The preferred range of the daily dose is between about 50 and about 200 ng.

Die Wirksamkeit von Abrin nimmt mit einer Steigerung der täglichen Dosis auf bis ungefähr 20 ng zu. Eine tägliche Dosis über dieser Menge zeigt keine gesteigerte Wirksamkeit bei der Unterdrückung von Krebs-Tumor- Metastasen. Die bevorzugte Tagesdosis liegt zwischen ungefähr 2,0 und ungefähr 5,0 ng.The effectiveness of Abrin decreases with an increase the daily dose to about 20 ng. A daily dose above this amount shows no increase Effectiveness in Cancer Cancer Suppression Metastases. The preferred daily dose is between about 2.0 and about 5.0 ng.

Wenn Patienten, die an verschiedenen Arten von Krebs litten, zusätzlich zur Bestrahlung und Chemotherapie post-operativ tägliche Dosen von AAG (200 ng) oder Abrin (5 ng) erhielten, war die Unterdrückung des Wiederauftretens von Krebs nach einjähriger Beobachtung auffällig.When patients suffering from different types of cancer suffered in addition to radiation and chemotherapy post-operative daily doses of AAG (200 ng) or Abrin (5 ng) was suppressed by Recurrence of cancer after one year of observation striking.

Lektine in gemäß ihrer erfindungsgemäßen Methode hergestellten oralen Dosisformen können demgemäß Menschen als täglicher post-operativerer Krebsbehandlungszusatz verabreicht werden. Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können auf einer täglichen Basis einem Krebspatienten post-operativ zusammen mit und/oder nachfolgend auf eine Strahlen- oder chemotherapeutische Behandlung verabreicht werden, um maligne Tumor-Metastasen zu unterdrücken.Lectins in according to their method according to the invention Accordingly, oral dosage forms can be used by humans as a daily post-operative cancer treatment additive be administered. The preparations according to the invention can be a cancer patient on a daily basis post-operatively together with and / or subsequently radiation or chemotherapy treatment administered to malignant tumor metastases suppress.

In einer weiteren Ausgestaltung der Erfindung enthält die verabreichte Zusammensetzung ein Lektin zusammen mit einem Krebschemotherapeutikum. Dafür geeignete Chemotherapeutika umfassen Alkylierungsmittel, wie Cyclophosphamid, Melphalan, Busulfan und Chlorumbucil; Antimetabolite, wie Methotrexat, 6-Mercaptopurin und 6-Thioguanin; Androgene, wie Ethinylestradiol, Progestine, wie 6-Methylhydroxyprogesteron, Thyroidhormon, Nebennierenrindenhormone, wie Prednison und Dexamethason und andere Verbindungen, wie Procarbazin, CCNU, MeCCNU, o,p′DDD, Hexamethylmelanin und Hydroxyharnstoff. In dieser Ausgestaltung der Erfindung werden die Lektine mit den aus Harrison, Principles of Internal Medicine, Ch. 323, pp. 17451767 (8th ed., McGraw- Hill, New York 1977 bekannten oralen Chemotherapeutika gemischt. In a further embodiment of the invention contains the administered composition is a lectin with a cancer chemotherapy drug. Suitable for that Chemotherapeutic agents include alkylating agents such as Cyclophosphamide, melphalan, busulfan and chlorumbucil; Antimetabolites such as methotrexate, 6-mercaptopurine and 6-thioguanine; Androgens, such as ethinyl estradiol, progestins, such as 6-methylhydroxyprogesterone, thyroid hormone, Adrenal cortex hormones such as prednisone and dexamethasone and other compounds such as procarbazine, CCNU, MeCCNU, o, p′DDD, hexamethylmelanine and hydroxyurea. In this embodiment of the invention the lectins with those from Harrison, Principles of Internal Medicine, Ch. 323, pp. 17451767 (8th ed., McGraw- Hill, New York 1977 known oral chemotherapy drugs mixed.

Die erfindungsgemäße Zubereitung enthaltend die Lektine kann in einer gesonderten Zubereitung dem Patienten zusätzlich zu einem Krebs-Chemotherapeutikum oder einer Strahlenbehandlung verabreicht werden. Die Verabreichung kann gleichzeitig, unmittelbar vor oder nach der anderen Behandlung oder in kleinerem oder größerem zeitlichen Abstand erfolgen. Es ist auch möglich, die Lektinbehandlung erst nach Abschluß der Strahlenbehandlung oder Chemotherapie zu beginnen.The preparation according to the invention containing the lectins can be prepared in a separate preparation for the patient in addition to a cancer chemotherapy drug or radiation treatment. The Administration can take place simultaneously, immediately before or after the other treatment or in a smaller one or a larger time interval. It is also possible, the lectin treatment only after completion to start radiation treatment or chemotherapy.

Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können außerdem auch in anderen Fällen, in denen es sich nicht um einen Krebspatienten nach der Operation handelt, verabreicht werden. Durch die Verabreichung kann die Stärke des Immunsystems der behandelten Person vergrößert werden, insbesondere bei solchen Personen, die sich mit Krebs, Aids oder Hepatitis angesteckt haben oder in einer entsprechenden Risikosituation sind oder bei denen Aids oder Hepatitis durch einen Antigen-Test festgestellt wurde.The preparations according to the invention can also even in other cases where it is not is a cancer patient after the operation, be administered. Through the administration can the strength of the person's immune system be enlarged, especially for such people, who is infected with cancer, AIDS or hepatitis have or in a corresponding risk situation are or in which AIDS or hepatitis caused by one Antigen test was found.

Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann übliche Materialien und Zusatzstoffe enthalten und bekannten pharmakologischen Formulierungen entsprechen. Zur Herstellung der gewünschten pharmazeutischen Form der erfindungsgemäßen Zubereitungen können zahlreiche Zusätze, Verdünnungsmittel und Hilfsmittel verwendet werden.The composition according to the invention can be conventional Contain materials and additives and known correspond to pharmacological formulations. To Production of the desired pharmaceutical form The preparations of the invention can be numerous Additives, diluents and auxiliaries used will.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung nicht beschränken, sondern nur beschreiben. Es ist selbstverständlich, daß für den Fachmann Änderungen, die Veränderung von Verhältnissen und andere Abwandlungen im Bereich seines Fachwissens liegen und von der vorliegenden Erfindung erfaßt werden.The following examples are not intended to illustrate the invention restrict, but only describe. It goes without saying that for those skilled in the art changes that Change of relationships and other modifications are in the area of his specialist knowledge and from the present invention can be detected.

example 1 Method of making an oral dosage form of lectins

500 g Sojabohnen werden zu Pulver vermahlen, mit Wasser extrahiert und durch fraktionierte Fällung mit Ammoniumsulfat weiter gereinigt. Die Lektine in den Fraktionen mit einer Ammoniumsulfatsättigung von 30-90% wurden durch Adsorbtion in einer Zuckeraffinitätssäure isoliert und dann über eine Sephadex-Säule gereinigt. Die so erhaltenen gereinigten Lektine wurden zu trockenem Puder lyophilisiert. Casein wurde als Träger zur Herstellung der Verabreichungsform zugesetzt.500 g soybeans are ground to powder, with Water extracted and by fractional precipitation further cleaned with ammonium sulfate. The lectins in the fractions with an ammonium sulfate saturation of 30-90% were obtained by adsorption in one Sugar affinity acid isolated and then over a Sephadex column cleaned. The purified so obtained Lectins were lyophilized to dry powder. Casein has been used as a vehicle to prepare the dosage form added.

Example 2 Manufacture of AAG and Abrin dosage forms

Der Samen von Abrus procatorius wurde zur Entfernung von Lipiden mit Hexan gewaschen, der Samen dann zu Pulver gemahlen und mit Wasser extrahiert. Ammoniumsulfat wurde in Portionen zu wäßrigen Extrakten zugegeben, um die Lektine fraktioniert zu fällen. Die Fällungen aus 35-60% Sättigung wurden in Wasser gelöst und dialysiert. Nach der Dialyse wurde Sepharose zugegeben und 4 Stunden in einem kalten Raum gerührt. Die an Sepharose adsorbierten Lektine wurden durch Zentrifugieren abgetrennt, dreimal mit Wasser gewaschen und dann in einer 2%igen Lösung von Cerebrose 3 Stunden lang wieder aufgelöst. Die Sepharose wurde durch Zentrifugieren entfernt und die AAG und Abrin enthaltende wäßrige Schicht über eine Sephadex-Säule chromatographiert und dadurch AAG von Abrin getrennt. Die wäßrigen Fraktionen von AAG und Abrin wurden dann lyophilisiert, um das reine AAG und Abrin zu erhalten. Casein wurde als Zusatzstoff zur Herstellung der Verabreichungsformen verwendet.Abrus procatorius seed was removed of lipids washed with hexane, the seeds then too Powder ground and extracted with water. Ammonium sulfate became portions of aqueous extracts added to fractionate the lectins. The precipitates from 35-60% saturation were in water solved and dialyzed. After dialysis Sepharose added and 4 hours in a cold Room stirred. The lectins adsorbed on Sepharose were separated by centrifugation, three times with Washed water and then in a 2% solution dissolved from cerebrose for 3 hours. The Sepharose was removed by centrifugation and the aqueous layer containing AAG and Abrin chromatographed a Sephadex column and thereby AAG separated from Abrin. The aqueous fractions AAG and Abrin were then lyophilized to give the to get pure AAG and Abrin. Casein was considered Additive for the production of the administration forms used.

Example 3 Comparison of oral and parenteral administration from AAG in mice

20 Mäusen wurden 4 Tage lang subkutan täglich jeweils 200 ng verabreicht. Am 5. Tag erhielten die Mäuse intravenös über die Schwanzvene jeweils 2,5 × 10⁶ Zellen Sarcoma-180. Eine Kontrollgruppe Mäuse erhielt die gleiche Menge S-180, ohne zuvor AAG erhalten zu haben. Beide Gruppen wurden nach 3 Wochen getötet und eine mikroskopische pathologische Untersuchung auf Lungenmetastasen durchgeführt. 20 mice were given subcutaneously daily for 4 days each 200 ng administered. The mice were given on day 5 intravenously via the tail vein 2.5 × 10⁶ each Sarcoma-180 cells. A control group received mice the same amount of S-180 without having previously received AAG to have. Both groups were killed after 3 weeks and a microscopic pathological examination performed on lung metastases.

Von der Gruppe, die AAG erhalten hatte, zeigten 50% keine Metastasen, 33% hatten Metastasen 1. Grades, keine hatte Metastasen 2. Grades und 17% hatten Metastasen 3. Grades. Von der Kontrollgruppe zeigten 25% keine Metastasen, 13% hatten Metastasen 1. Grades, 25% hatten Metastasen 2. Grades und 37% hatten Metastasen 3. Grades.Of the group that received AAG, 50% showed no metastases, 33% had 1st degree metastases, none had 2nd degree metastases and 17% had them 3rd degree metastases. From the control group showed 25% no metastases, 13% had metastases 1. Degrees, 25% had 2nd degree metastases and 37% had 3rd degree metastases.

Eine dritte Gruppe von 20 Mäusen erhielt täglich eine Woche lang oral eine Dosis von 200 ng pro Tag. Am 8. Tag erhielt jede Maus intravenös über die Schwanzvene 2,5 × 10⁶ Zellen von S-180. Eine Kontrollgruppe Mäuse erhielt die gleiche Menge S-180, ohne zuvor AAG erhalten zu haben. Die Versuchsgruppe erhielt dann für die nächsten 7 Tage weiter eine orale Dosis von 200 ng AAG. Beide Gruppen wurden nach 3 Wochen getötet und die mikroskopische pathologische Untersuchung auf Lungenmetastasen durchgeführt.A third group of 20 mice received daily Oral dose of 200ng daily for a week. On the 8th day, each mouse received intravenously over the Tail vein 2.5 × 10⁶ cells from S-180. A control group Mice received the same amount without S-180 have previously received AAG. The experimental group received then an oral one for the next 7 days Dose of 200 ng AAG. Both groups were followed 3 weeks killed and the microscopic pathological Examination for lung metastases performed.

Die Ergebnisse der Versuchsgruppe und der Kontrollgruppe unterschieden sich signifikant (p <0,05). Die Testgruppe hatte im Durchschnitt 0,2 plus/minus 0,4 metastatische Krebsknötchen. Die Kontrollgruppe hatte im Durchschnitt 31,4 plus/minus 42,4 metastatische Krebsknötchen.The results of the test group and the control group differed significantly ( p <0.05). The test group had an average of 0.2 plus / minus 0.4 metastatic cancer nodules. The control group had an average of 31.4 plus / minus 42.4 metastatic cancer nodules.

Die Häufigkeit von Lungenmetastasen von S-180-Zellen bei den Versuchs- und Kontrollgruppen wird in Tabelle I zusammengefaßt. The incidence of lung metastases from S-180 cells for the test and control groups is shown in table I summarized.

Tabelle I Table I

Dieses Beispiel zeigt, daß die orale Verabreichung von AAG genauso wirksam bei der Unterdrückung von Krebszellmetastasen ist wie die parenterale Verabreichung von AAG.This example shows that oral administration from AAG is equally effective in suppressing Cancer cell metastases are like parenteral administration from AAG.

Example 4 Comparison of oral and parenteral administration from AAG in mice

AAG wurde einer Versuchsgruppe von 9 C₅₇BL/6-Mäusen wie in Beispiel 3 verabreicht. Am 5. Tage wurden 2 × 10⁴ B-16-Melanomzellen intravenös über die Schwanzvene der Versuchsgruppe und einer Kontrollgruppe von 9 Mäusen, die kein AAG erhalten hatten, verabreicht. Beide Gruppen wurden getötet und wie in Beispiel 3 untersucht.AAG was a test group of 9 C₅₇BL / 6 mice administered as in Example 3. On the 5th day were 2 × 10⁴ B-16 melanoma cells intravenously via the Tail vein of the test group and a control group out of 9 mice that had not received AAG, administered. Both groups were killed and how examined in Example 3.

Die Ergebnisse der Versuchsgruppe und der Kontrollgruppe unterschieden sich signifikant (p <0,05). Die Versuchsgruppe hatte durchschnittlich 23,6 plus/minus 13,0 metastatische Krebsknötchen. Die Vergleichsgruppe hatte durchschnittlich 44,0 plus/minus 23,6 metastatische Krebsknötchen.The results of the test group and the control group differed significantly ( p <0.05). The experimental group had an average of 23.6 plus / minus 13.0 metastatic cancer nodules. The comparison group had an average of 44.0 plus / minus 23.6 metastatic cancer nodules.

Einer dritten Gruppe von 7 Mäusen wurde oral AAG wie in Beispiel 3 verabreicht. Am 8. Tage wurden dieser Versuchsgruppe und 8 Mäuse einer Vergleichsgruppe, die zuvor kein AAG erhalten hatte, 2 × 10⁴ B-16-Melanomzellen intravenös über die Schwanzvene verabreicht. Die Mäuse der Versuchsgruppen erhielten dann bis zur 3. Woche weiter eine tägliche Dosis von 200 ng AAG. Dann wurden beide Gruppen getötet und wie in Beispiel 3 untersucht.A third group of 7 mice was given oral AAG administered as in Example 3. On the 8th day this experimental group and 8 mice from a comparison group, who had not previously received an AAG, 2 × 10⁴ B-16 melanoma cells intravenously via the Tail vein administered. The mice of the test groups then continued to receive a daily until the 3rd week Dose of 200 ng AAG. Then both groups were killed and as examined in Example 3.

Die Ergebnisse der Versuchsgruppe und der Kontrollgruppe unterschieden sich signifikant (p <0,05). Die Versuchsgruppe wies durchschnittlich 4,1 plus/minus 0,5 metastatische Krebsknötchen auf, die Kontrollgruppe durchschnittlich 14,9 plus/minus 7,4 metastatische Krebsknötchen.The results of the test group and the control group differed significantly ( p <0.05). The experimental group had an average of 4.1 plus / minus 0.5 metastatic cancer nodules, the control group an average of 14.9 plus / minus 7.4 metastatic cancer nodules.

Dieses Beispiel bestätigt weiter, daß die orale Verabreichung von AAG genauso wirksam bei der Unterdrückung von Krebszellenmetastasen ist wie die parenterale Verabreichung von AAG.This example further confirms that oral administration from AAG just as effective in suppressing of cancer cell metastases is like parenteral Administration of AAG.

Die Signifikanz der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß die oral verabreichten Lektine, insbesondere AAG, Abrin und Con-A für die Behandlung und Prävention von Krebs geeignet sind, indem sie an die Membranrezeptoren von Lymphozyten der Magen-Darm- Wand binden und in den Körper eintreten und Anti- Krebs-Aktivitäten entfalten, ehe sie von proteolytischen Enzymen verdaut werden. Die orale Verwendung von Lektinen ist sicherer und einfacher als die parenterale Verwendung. Die oralen Lektine sind zur Bekämpfung von Krebs genauso wirksam wie parenterale Lektine. Die Annehmlichkeit ist ein anderer wichtiger Vorteil der oralen Formen.The significance of the present invention is there in that the orally administered lectins, in particular AAG, Abrin and Con-A for treatment and Prevention of cancer are appropriate by contacting the membrane receptors of lymphocytes of the gastrointestinal Tie wall and enter the body and anti Cancer activities unfold before becoming proteolytic Enzymes are digested. Oral use of lectins is safer and easier than the parenteral Use. The oral lectins are for control of cancer as effective as parenteral Lectins. The convenience is another important one Advantage of oral forms.

In den vorstehenden Beispielen können andere als dort genannte Zusatzstoffe zur Erreichung des gewünschten pharmazeutischen Effekts zugesetzt werden. Die vorliegende Erfindung stellt Zubereitungen zur Verfügung, die relativ leicht herzustellen und zu verabreichen sind und für den gewünschten Zweck wirksam sind. In the above examples, other than additives mentioned there to achieve the desired pharmaceutical effect can be added. The present invention provides preparations Available that are relatively easy to manufacture and to are administered and effective for the desired purpose are.

List of literature cited

(1) I.J. Goldstein und C.E. Hayes. The lectins: Carbohydrate-binding proteins of plants and animals. Adv. Carbohydr. and Biochem. 35 128 (1978). Academic Press.
(2) N. Sharon und H. Lis. Lectins: Cell agglutinating and sugar-specific proteins. Science 177 947 (1972).
(3) N. Sharon, Y. Reisner, A. Ravid und A. Prujansky. Studies on the interaction of lectins with saccharides on lymphocyte cell surfaces. In "Carbohydrate - Protein Interaction" (ACS Symposium Series 88; Goldstein, Ed., Washington 1979).
(4) G.A. Granger, R.A. Daynes, P.E. Runge, A.M. Prieur und E.W.B. Jeffes. Lymphocytes effector molecules and cell-mediated immune reactions. Contemp. Top. Mol. Immunol. 4 205 (1975).
(5) S.J. Chen, T.C. Lee und T.C. Tung; Interferon induction in inbred BALB/C mice by abrus agglutinin. Bull. Chinese Oncol. Soc. 5 33 (1984).
(6) H. Lis und N. Sharon. Lectins: Their chemistry and application to immunology. "The Antigen" Vol. IV, Chapter 7, page 429 (Academic Press. 1977).
(7) J.Y. Lin, K.Y. Tserng, C.C. Chen, L.T. Lin und T.C. Tung. Abrin and Ricin: New anti-tumor substances. Nature 227 292 (1970).
(8) M. Esumi-Kurisu, N. Iwata-Dohi, D. Mizuno und M. Yamazaki. Inhibition of murine tumor development by the lectin wheat germ agglutinin. Gann 74 398 (1983).
(9) M. Kurisu, M. Yamazaki und D. Mizuno. Induction of macrophage-mediated tumor lysis by the lectin wheat germ agglutinin. Cancer Res. 40 3798 (1980).
(10) A. Mazumder, E.A. Grimm und S.A. Rosenberg. Characterization of the lysis of fresh human solid tumor by autologous lymphocyutes activated in vitro with phytohemagglutinin. J. Immunol. 130 958 (1983).
(11) J.Y. Lin, W.Y. Kao, K.Y. Tserng, C.C. Chen und T.C. Tung. Effekt of crystalline abrin on the biosynthesis or protein, RNA and DNA in experimental tumors. Cancer Res. 30 2431 (1970).
(12) H. Lin, W.R. Bruce und M.J. Walcroft. Concanavalin A (NSC-143504): Its action on experimental tumor cells and possible use in cancer chemotherapy. Cancer Themother. 59 319 (1975).
(13) T.C. Tung, T.T. Yang und H.C. Chang. The growth inhibition of S-1801 Sarcoma cells by Abrus agglutinin treatment in vivo. J. Formosan Med. Assoc. 80 1 (1981).
(14) I.J. Fidler. Selection of successive tumor lines for metastasis. Nature (London) New Biol. 242 148 (1973).
(15) J.Y. Lin, C.C. Chen, L.T. Lin und T.C. Tung. Inhibitory effect of abrin and Ehrlich Ascitees timor. J. Formosan Med. Assoc. 68 522 (1969).
(16) G. Poste und I.J. Fidler. The pathogenesis of cancer metastasis. Nature 283 10 (1980).
(17) W. Wang, M.T. Kuo, T.C. Lee, P.Y. Tsai und T.C. Tung. Effects of abrin und abrus agglutinin on the cytotoxicity of murine spleen cells. Bull. Chinese Oncology Soc. 3 173 (1982).
(18) N. Sharon und H. Lis. Use of Lectins for the Study of Membranes. "Methods in Membrane Biology", Vol. 3, pp. 147-186 (Korn, ed., Plenum Press, New York 1975).(1) IJ Goldstein and CE Hayes. The lectins: Carbohydrate-binding proteins of plants and animals. Adv. Carbohydr. and Biochem. 35,128 (1978). Academic Press.
(2) N. Sharon and H. Lis. Lectins: Cell agglutinating and sugar-specific proteins. Science 177,947 (1972).
(3) N. Sharon, Y. Reisner, A. Ravid and A. Prujansky. Studies on the interaction of lectins with saccharides on lymphocyte cell surfaces. In "Carbohydrate - Protein Interaction" (ACS Symposium Series 88; Goldstein, Ed., Washington 1979).
(4) GA Granger, RA Daynes, PE Runge, AM Prieur and EWB Jeffes. Lymphocytes effector molecules and cell-mediated immune reactions. Contemp. Top. Mol. Immunol. 4 205 (1975).
(5) SJ Chen, TC Lee and TC Tung; Interferon induction in inbred BALB / C mice by abrus agglutinin. Bull. Chinese Oncol. Soc. 5 33 (1984).
(6) H. Lis and N. Sharon. Lectins: Their chemistry and application to immunology. "The Antigen" Vol. IV, Chapter 7, page 429 (Academic Press. 1977).
(7) JY Lin, KY Tserng, CC Chen, LT Lin and TC Tung. Abrin and Ricin: New anti-tumor substances. Nature 227,292 (1970).
(8) M. Esumi-Kurisu, N. Iwata-Dohi, D. Mizuno and M. Yamazaki. Inhibition of murine tumor development by the lectin wheat germ agglutinin. Gann 74 398 (1983).
(9) M. Kurisu, M. Yamazaki and D. Mizuno. Induction of macrophage-mediated tumor lysis by the lectin wheat germ agglutinin. Cancer Res. 40 3798 (1980).
(10) A. Mazumder, EA Grimm and SA Rosenberg. Characterization of the lysis of fresh human solid tumor by autologous lymphocyutes activated in vitro with phytohemagglutinin. J. Immunol. 130, 958 (1983).
(11) JY Lin, WY Kao, KY Tserng, CC Chen and TC Tung. Effect of crystalline abrin on the biosynthesis or protein, RNA and DNA in experimental tumors. Cancer Res. 30 2431 (1970).
(12) H. Lin, WR Bruce and MJ Walcroft. Concanavalin A (NSC-143504): Its action on experimental tumor cells and possible use in cancer chemotherapy. Cancer Themother. 59 319 (1975).
(13) TC Tung, TT Yang and HC Chang. The growth inhibition of S-1801 Sarcoma cells by Abrus agglutinin treatment in vivo. J. Formosan Med. Assoc. 80 1 (1981).
(14) IJ Fidler. Selection of successive tumor lines for metastasis. Nature (London) New Biol. 242 148 (1973).
(15) JY Lin, CC Chen, LT Lin and TC Tung. Inhibitory effect of abrin and Ehrlich Ascitees timor. J. Formosan Med. Assoc. 68,522 (1969).
(16) G. Poste and IJ Fidler. The pathogenesis of cancer metastasis. Nature 283 10 (1980).
(17) W. Wang, MT Kuo, TC Lee, PY Tsai and TC Tung. Effects of abrin and abrus agglutinin on the cytotoxicity of murine spleen cells. Bull. Chinese Oncology Soc. 3, 173 (1982).
(18) N. Sharon and H. Lis. Use of Lectins for the Study of Membranes. "Methods in Membrane Biology", vol. 3, pp. 147-186 (Korn, ed., Plenum Press, New York 1975).

Claims

1. Orally administrable preparation for suppression post-operative malignant tumor metastases in mammals, containing a physiologically effective Amount of a lectin selected from Abrin and Abrus agglutinin and a pharmaceutically acceptable Carrier.

2. Preparation according to claim 1, characterized characterized that the lectin Abrin is.

3. Preparation according to claim 2, characterized characterized that Abrin in quantities from 1.0 to 20 ng per dose unit present is.

4. Preparation according to claim 3, characterized characterized that Abrin in quantities from 2.0 to 5.0 ng per dose unit available is.

5. Preparation according to claim 1, characterized characterized that the lectin Abrus agglutinin is.

6. Preparation according to claim 5, characterized characterized that the abrasion Agglutinin in amounts of 10 to 500 ng per Dose unit is present.

7. Preparation according to claim 6, characterized characterized in that Abrus agglutinin in amounts of 50 to 200 ng per dose unit is available.

8. Preparation according to one of claims 1-7, characterized, that they also have group anti-cancer agents Cyclophosphamide, melphalan, busulfan, Chlorumbucil, methotrexate, 6-mercaptopurine, 6-thioguanine, fluoxymesterone, ethinyl estradiol, 6-methylhydroxyprogesterone, thyroid hormone, Prednisone, dexamethasone, procarbazine, CCNU, MeCCNU, o, p′-DDD, hexamethylmelanine and hydroxyurea contains.

9. Use of preparations according to one of the Claims 1 to 8 for the suppression of post-operative Metastases of malignant tumors.

10. Use of preparations according to one of the Claims 1 to 8 for treatment and prophylaxis of AIDS and hepatitis.