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DE3715856A1 - Apparatus for concentrating electrically charged macromolecules - in particular eluted from a gel - situated in a liquid - Google Patents

Apparatus for concentrating electrically charged macromolecules - in particular eluted from a gel - situated in a liquid

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DE3715856A1
DE3715856A1 DE19873715856 DE3715856A DE3715856A1 DE 3715856 A1 DE3715856 A1 DE 3715856A1 DE 19873715856 DE19873715856 DE 19873715856 DE 3715856 A DE3715856 A DE 3715856A DE 3715856 A1 DE3715856 A1 DE 3715856A1
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Inventor
Arnfried Brenzel
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Biometra GmbH
Original Assignee
Biometra Biomedizinische Analytik GmbH
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Abstract

Apparatus for concentrating electrically charged macromolecules - in particular eluted from a gel - situated in a liquid, having a vessel, the interior of which is subdivided by at least one block having a trough for receiving the liquid - and if required the gel - into two electrode chambers, each containing at least one electrode, for receiving electrolytic solutions, the trough, on the one hand being directly connected to one electrode chamber and, on the other hand being connected to the other electrode chamber via a duct (20), leaving from the top or next to its base, which duct has a first falling section and then a rising section, characterised in that the rising section of the duct passes through a detachable stopper, between which and an abutment shoulder in the block a filter membrane retaining the macromolecules is to be clamped.

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zum Konzentrie­ ren von in einer Flüssigkeit befindlichen, elektrisch geladenen - insbesondere aus einem Gel eluierten - Makromolekülen.The invention relates to a device for concentrating Ren of electrical in a liquid charged - especially eluted from a gel - Macromolecules.

Vorrichtungen dieser Art werden u.a. zum Eluieren von Proteinen (Oligopeptiden - Proteinkomplexen) und Nukleinsäuren (DNA, RNA) aus Lösungen und Gelen (Agarose, PAA) sowie zu deren Konzentration benutzt.Devices of this type are used, inter alia, for the elution of proteins (oligopeptides - protein complexes) and nucleic acids (DNA, RNA) from solutions and gels (agarose, PAA) and for their concentration.

Bei einer nach der DE-PS 34 17 180 bekannten Vorrichtung sind keine zusätzlichen Mittel im Kanal zur Unterstüt­ zung der Konzentration vorgesehen.In a device known from DE-PS 34 17 180 are not additional resources in the support channel concentration is provided.

Aufgabe der Erfindung ist es, die Konzentration der Makromoleküle zu erhöhen und das Konzentrat zur Ent­ nahme leicht zugänglich zu machen.The object of the invention is to concentrate the Increase macromolecules and concentrate for ent making it easily accessible.

Die Lösung dieser Aufgabe ist im Kennzeichen des Anspruchs 1 angegeben.The solution to this problem is the hallmark of Claim 1 specified.

Als Filtermembranen eignen sich besonders semiper­ meable Membranen, wie sie als Dialysemembranen ver­ wendet werden.Semiper are particularly suitable as filter membranes meable membranes as they are used as dialysis membranes be applied.

Grunsätzlich lassen sich mit der Vorrichtung jedoch alle Arten von geladenen, löslichen Makromolekülen die in ihrer Größe über der Ausschlußgrenze der Filter­ membran liegen, anreichern, also auch z.B. Farbstoffe, Zucker, AS. In principle, however, the device can all types of charged, soluble macromolecules those in size above the filter cutoff membrane, enrich, i.e. also e.g. Dyes, Sugar, AS.  

Werden in die Elektrodenräume alkalische Pufferflüssig­ keiten (pH 8-10, z.B. TRIS-Borat, 100 mM) gegeben, so lassen sich die meisten Biomakromoleküle so konditionie­ ren, daß ihre Wanderung in Richtung auf die positive Elek­ trode erfolgt, z.B. alle gängigen PAGE-Systeme nach Stegemann-Laemmli u.a.Alkaline buffers become liquid in the electrode compartments (pH 8-10, e.g. TRIS-borate, 100 mM) most biomacromolecules can be conditioned in this way ren that their hike towards the positive elec trode takes place, e.g. all common PAGE systems Stegemann-Laemmli and others

In Ausnahmefällen ist jedoch auch die Verwendung saurer Pufferlösungen möglich.In exceptional cases, however, is the use acidic buffer solutions possible.

Nach Beginn des Konzentrationsvorgangs durch Anlegen einer Spannung an die Elektroden reichern sich die zu konzentrierenden Makromoleküle vor der Filtermembran an und sinken zum Teil in den tiefsten Bereich des Ka­ nals ab. Nach Beendigung des Konzentrationsvorgangs wird die Spannung abgeschaltet, und es werden die an der Filtermembran absorbierten Makromoleküle durch kurzfristiges Anlegen einer gegenpoligen Spannung (2-5 min) leicht und vollständig von der Filtermem­ bran abgelöst, wonach sie ebenfalls an die tiefste Stelle des Kanals absinken. Das Entnehmen des Konzen­ trats erfolgt nach Absaugen der in dem Elektrodenraum befindlichen Pufferflüssigkeit mit Hilfe einer Spritze, die eine stumpfe Kanüle aufweist, aus dem Kanal.After starting the concentration process by applying a voltage to the electrodes accumulate Macromolecules to be concentrated in front of the filter membrane on and partly sink into the deepest area of the Ka nals off. After the concentration process has ended the voltage is switched off and it is switched on of the filter membrane absorbed by macromolecules short-term application of an opposite pole voltage (2-5 min) easily and completely from the filter membrane bran replaced, after which it also goes to the deepest Point of the channel. The removal of the conc trats takes place after suction in the electrode space buffer liquid with the help of a syringe, which has a blunt cannula, out of the channel.

Die erforderliche Stromstärke liegt in Abhängigkeit von der Art der geladenen Makromoleküle und der Wahl der Pufferflüssigkeit und auch nach Wahl noch anzu­ führender Kühlung zwischen 5 und 50 mA bei Spannungen zwischen 20 und 250 V.The required current is dependent on the type of macromolecules loaded and the choice the buffer liquid and also to be selected leading cooling between 5 and 50 mA at voltages between 20 and 250 V.

Häufig sammeln sich beim Konzentrationsvorgang Gas­ bläschen vor der Filtermembran, was zu einer Unter­ brechung des Stromflusses beim Konzentriervorgang führen kann. Um das Ansammeln von Gasbläschen vor der Filter­ membran zu vermeiden, ist bevorzugt eine Ausbildung gemäß Anspruch 2 vorgesehen. Durch diese Maßnahme wird erreicht, daß sich etwa bildende Gasbläschen nicht vor der Filtermembran sammeln können, sondern in dem gegen die Stromrichtung aufsteigenden Abschnitt des Kanals ansteigen. Hierbei wirkt auch die Ausbildung des Kanals nach Anspruch 3 mit.Gas often collects during the concentration process bubbles in front of the filter membrane, resulting in a sub break the current flow during the concentration process can. To the accumulation of gas bubbles in front of the filter Avoiding the membrane is preferred  provided according to claim 2. This measure will ensures that gas bubbles that do not form the filter membrane, but in the opposite the upstream section of the channel increase. The formation of the channel also has an effect here according to claim 3 with.

Eine besonders günstige Ausbildung des elektrischen Felds im Kanal erhält man durch die Ausbildung nach Anspruch 4. In Aufsicht kann dabei die Wanne dreieck­ förmig sein, wobei dann die Seitenwände die Schenkel des Dreiecks bilden. Aus Fertigungsgründen kann es aber auch vorteilhaft sein, den Seitenwänden in Auf­ sicht die Form von Kreisabschnitten zu geben, so daß die Wannen in den Block gebohrt werden können.A particularly favorable training of the electrical Fields in the canal are obtained through training Claim 4. In supervision, the tub can triangle be shaped, with the side walls then the legs of the triangle. For manufacturing reasons it can but also be advantageous in up the side walls to give the shape of circular sections so that the tubs can be drilled into the block.

Um den Weg des elektrischen Stroms zu verkürzen, sind die Ausbildungen nach den Ansprüchen 5 bis 8 vorteil­ haft. Ist die Überlaufwand geschlossen, so eignet sich die Vorrichtung besonders zur Konzentrierung von Makro­ molekülen aus Lösungen, die in die Wanne eingegeben werden. Um ein Vermischen der in dem angrenzenden Elek­ trodenraum befindlichen Flüssigkeit mit den Lösungen in den Wannen zu vermeiden, kann man eine die Vermi­ schung verhindernde Flüssigkeit als die Überlaufwand überdeckende Abdeckflüssigkeit verwenden, etwa eine Zuckerlösung.To shorten the path of the electric current are the training according to claims 5 to 8 advantageous arrested. If the overflow wall is closed, it is suitable the device especially for concentrating macro Molecules from solutions entered into the tub will. To mix the in the adjacent Elek fluid in the anode compartment with the solutions to avoid in the tubs one can see the vermi preventive liquid as the overflow wall Use a covering liquid, such as one Sugar solution.

Zur Konzentration von Makromolekülen, die aus Gelen eluiert sind, eignet sich - ebenfalls unter dem Ge­ sichtspunkt der Stromwegverkürzung - besonders die Ausbildung nach Anspruch 7 und 8.To the concentration of macromolecules which are eluted from gels, is - also under the point of view of Ge Stromwegverkürzung - especially the embodiment according to claim 7 and 8. FIG.

Um die Filtermembran leicht austauschen zu können, ist bevorzugt eine Ausbildung nach Anspruch 9 vorgesehen. To be able to easily replace the filter membrane, is preferably provided an education according to claim 9.  

Besonders bewährt haben sich die Bemessungsangaben nach Anspruch 10 und 11.The design data have proven particularly useful Claims 10 and 11.

Um eine größtmögliche Nativität biologischer Makro­ moleküle (Enzymaktivität, Fotoaktivität, allgemeine Bewahrung der Quartärstruktur von Proteinen) zu er­ halten, ist bevorzugt eine Ausbildung nach Anspruch 12 vorgesehen.The greatest possible nativity of biological macro molecules (enzyme activity, photoactivity, general Preservation of the quaternary structure of proteins) hold, is preferably an education according to claim 12 intended.

Die Erfindung wird im folgenden an einem Ausführungs­ beispiel unter Hinweis auf die beigefügten Zeichnungen beschrieben.The invention is based on an embodiment example with reference to the accompanying drawings described.

Fig. 1 zeigt eine Vorrichtung schräg von oben, teilweise fortgebrochen. Fig. 1 shows a device obliquely from above, partially broken away.

Fig. 2 zeigt die Vorrichtung nach Fig. 1 in entspre­ chender Darstellung von ihrer anderen Seite aus. Fig. 2 shows the device of FIG. 1 in corre sponding representation from its other side.

Fig. 3 zeigt einen Schnitt längs der Linie III-III in Fig. 1. FIG. 3 shows a section along the line III-III in FIG. 1.

Fig. 4 zeigt den Bereich IV in Fig. 3 vergrößert. Fig. 4 shows the area IV in Fig. 3 enlarged.

Das Innere eines im wesentlichen rechteckigen Behälters 2 ist durch einen Block 4 in zwei jeweils eine Elektro­ de 6, 8 enthaltenden Elektrodenraum 10, 12 zur Aufnahme elektrolytischer Lösungen unterteilt. In dem Block 8 sind auf der Seite des Elektrodenraums 10 im Querschnitt etwa halbkreisförmige Wannen 13 vorgesehen, die zum Elektrodenraum 10 durch herausnehmbare Überlaufwände 14 oder durch kammartige Gitter 16 begrenzt sind. (Selbstverständlich werden in der Regel gleichartige Begrenzungen vorgesehen sein). The inside of an essentially rectangular container 2 is divided by a block 4 into two electrode spaces 10 , 12 each containing an electrical de 6 , 8 for receiving electrolytic solutions. In block 8 , on the side of the electrode space 10, approximately semicircular troughs 13 are provided in cross section, which are delimited from the electrode space 10 by removable overflow walls 14 or by comb-like grids 16 . (Of course, similar limits will usually be provided).

Von den Wannen 13 gehen nächst ihrem Boden 18 Kanäle 20 mit einem erst abfallenden Abschnitt 22 und sich dann ansteigenden Abschnitt 24 aus, der mit dem Elektro­ denraum 10 verbunden ist. Der ansteigende Abschnitt 24 des Kanals 20 durchsetzt einen Schraubstopfen 26, der in ein Innengewinde des Blocks 4 eingeschraubt ist. Zwischen der inneren Stirnwand des Stopfens 26 und einer Widerlagerschulter 28 im Block 4 ist eine die Makromoleküle zurückhaltende Filtermembran 30 ein­ geklemmt. Die Ebene der Widerlagerschulter 28 schneidet annähernd den tiefsten Punk 32 der oberen Begrenzungs­ fläche des Kanals 20, so daß sich zwischen dem Punkt 32 und der Filtermembran 30 - wenn überhaupt - nur sehr wenig Gasblasen sammeln können.From the tubs 13 go next to their bottom 18 channels 20 with a first sloping section 22 and then rising section 24 , which is connected to the electrical denraum 10 . The rising section 24 of the channel 20 passes through a screw plug 26 which is screwed into an internal thread of the block 4 . Between the inner end wall of the plug 26 and an abutment shoulder 28 in block 4 , a filter membrane 30 which retains the macromolecules is clamped. The plane of the abutment shoulder 28 intersects approximately the deepest point 32 of the upper boundary surface of the channel 20 , so that between the point 32 and the filter membrane 30 - if at all - only very little gas bubbles can collect.

Die Abschnitte 22, 24 des Kanals 20 streben nach unten trichterförmig (erst kegelig, dann röhrenförmig) aufeinander zu.The sections 22 , 24 of the channel 20 strive towards one another in the shape of a funnel (first conical, then tubular).

Die Seitenwände der Wannen 13, die die Einlaßöffnung 34 des trichterförmigen Abschnitts 22 begrenzen, streben - im vorliegenden Beispiel abgerundet - aufein­ ander zu.The side walls of the tubs 13 , which delimit the inlet opening 34 of the funnel-shaped section 22 , strive toward one another - rounded in the present example.

Der Neigungswinkel der Achsen der Abschnitte 22, 24 des Kanals 20 zur Horizontalen beträgt im vorliegenden Beispiel 30°. Die Abschnitte 22, 24 weisen bei einge­ schraubtem Schraubstopfen 26 gleiche Form auf und sind in gleicher Weise geneigt. Die in Fig. 4 eingetragenen Winkel α und β sind also gleich, und insbesondere sind auch die Längen a und b gleich, (wie auch die anderen Abmessungen der Abschnitte 22, 24 untereinander gleich sind).The angle of inclination of the axes of the sections 22 , 24 of the channel 20 to the horizontal is 30 ° in the present example. The sections 22 , 24 have the same shape when the screw plug 26 is screwed in and are inclined in the same way. The angles α and β entered in FIG. 4 are therefore the same, and in particular the lengths a and b are also the same (just as the other dimensions of the sections 22 , 24 are identical to one another).

In den Block 4 ist unterhalb der Wannen 13 eine Kühl­ schlange 36 eingearbeitet, die zu auf einer Seite des Blocks 4 liegenden Anschlußstücken 38 führt.In the block 4 a cooling coil 36 is incorporated below the tubs 13 , which leads to lying on one side of the block 4 connectors 38 .

Die Elektroden 6, 8 sind in den Bodenkanten der Räume 10, 12, die dem Block 4 gegenüberliegen, verlegt und enden in Anschlußstücken 40, die im oberen Ende einer Schmalseite 42 des Behälters 2 befestigt sind.The electrodes 6 , 8 are laid in the bottom edges of the spaces 10 , 12 , which lie opposite the block 4 , and end in connection pieces 40 , which are fastened in the upper end of a narrow side 42 of the container 2 .

Folgende Abmessungen haben sich bewährt:
Das Fassungsvermögen der Wannen 13 (bei geschlossener Überlaufwand 14) beträgt 4 ml, die Höhe der Wannen 5 mm, das Fassungsvermögen jedes einzelnen Kanalabschnitts 22 bzw. 24 beträgt 200 µl, die Längen von a und b sind 4 mm.The following dimensions have proven themselves:
The capacity of the trays 13 (with the overflow wall 14 closed) is 4 ml, the height of the trays 5 mm, the capacity of each individual channel section 22 or 24 is 200 μl, the lengths of a and b are 4 mm.

AnwendungsbeispieleExamples of use

Elektroelution aus nicht denaturierenden PAA- oder Agarosegelen zur Gewinnung nativer Biomoleküle in konzentrierter Form.
Elutionspuffer: 50-100 mM TRIS-Borat, TRIS-HCl, pH 7-9.Electroelution from non-denaturing PAA or agarose gels to obtain native biomolecules in concentrated form.
Elution buffer: 50-100 mM TRIS-borate, TRIS-HCl, pH 7-9.

Elution denaturierter Protein-Untereinheiten aus hoch­ prozentigen SDS-/LDS-PAA-Gelen zur Konzentrierung klein­ ster Polipeptidmengen.
Elutionspuffer: 0,1-1% SDS/LDS, 50-150 mM TRIS- Glycin, TRIS-Borat, TRIS-HCl, pH 8-10. Elektrokonzentration verdünnter Proben.
Es wird 1 M Stammlösung auf ca. 100 mM eines der oben genannten Elutionspuffer eingestellt. Die Lösung wird mit 70% Saccharose auf ca. 2-5% Endkonzentration beschwert.Elution of denatured protein subunits from high-percentage SDS / LDS-PAA gels to concentrate the smallest amounts of polipeptides.
Elution buffer: 0.1-1% SDS / LDS, 50-150 mM TRIS-glycine, TRIS-borate, TRIS-HCl, pH 8-10. Electro concentration of diluted samples.
1 M stock solution is adjusted to approximately 100 mM of one of the elution buffers mentioned above. The solution is weighted to about 2-5% final concentration with 70% sucrose.

Elektro-Ultrafiltration eluierter Probengemische nach vorgegebenen Ausschlußgrenzen (z.B. XM-, UM-Membranfil­ terserie, Amicon), z.B. Abtrennen von Ampholyt aus prä­ parativen IEF-Banden.
Elektrodialyse von Proben, die in Hochsalzlösungen vor­ liegen.
Kurzfristig (2-5 min) wird ein Spannungsfeld in H2O fest angelegt. Die Probe wird direkt in den Kanal vor die Filtermembran eingefüllt (unterschichtet). Es erfolgt eine geringe Volumenzunahme durch Diffusion. Bei der Polarität des Spannungsfelds ist die IEP der Probe zu beachten.Electro-ultrafiltration of eluted sample mixtures according to specified exclusion limits (e.g. XM, UM membrane filter series, Amicon), e.g. separation of ampholyte from preparative IEF bands.
Electrodialysis of samples in high salt solutions.
In the short term (2-5 min), a tension field is fixed in H 2 O. The sample is filled directly into the channel in front of the filter membrane (underlayed). There is a slight increase in volume due to diffusion. With regard to the polarity of the voltage field, the IEP of the sample must be observed.

Claims (12)

1. Vorrichtung zum Konzentrieren von in einer Flüssigkeit befindlichen, elektrisch geladenen - insbesondere aus einem Gel eluierten - Makromolekülen mit einem Behälter (2), dessen Innenraum durch einen wenigstens eine Wanne (13) zur Aufnahme der Flüssigkeit - und gegebenenfalls des Gels - aufweisenden Block (4) in zwei jeweils mindestens eine Elektrode (6, 8) enthaltende Elektroden­ räume (10, 12) zur Aufnahme elektrolytischer Lösungen unterteilt ist, wobei die Wanne (13) einerseits unmittel­ bar mit dem einen Elektrodenraum (12) und andererseits über einen von oben oder nächst ihrem Boden ausgehenden Kanal (20) mit einem erst abfallenden Abschnitt (22) und einem dann ansteigenden Abschnitt (24) mit dem ande­ ren Elektrodenraum (10) verbunden ist, dadurch gekennzeichnet, daß der ansteigende Abschnitt (24) des Kanals (20) einen lösbaren Stopfen (26) durch­ setzt, zwischen dem und einer Widerlagerschulter (28) im Block (4) eine die Makromoleküle zurückhaltende Filter­ membran (30) einzuklemmen ist.1. Device for concentrating, in a liquid, electrically charged - in particular eluted from a gel - macromolecules with a container ( 2 ), the interior of which has at least one trough ( 13 ) for holding the liquid - and optionally the gel - having a block ( 4 ) in two each containing at least one electrode ( 6 , 8 ) containing electrode spaces ( 10 , 12 ) for receiving electrolytic solutions, the tub ( 13 ) on the one hand directly with the one electrode space ( 12 ) and on the other hand via one of Channel ( 20 ) leading above or next to its bottom is connected to the other electrode space ( 10 ) by a first sloping section ( 22 ) and a then rising section ( 24 ), characterized in that the rising section ( 24 ) of the channel ( 20 ) a releasable stopper ( 26 ) through, between which and an abutment shoulder ( 28 ) in the block ( 4 ) hold back the macromolecules de Filter membrane ( 30 ) must be clamped. 2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Ebene der Widerlagerschulter (28) wenigstens an­ nähernd den tiefsten Punkt (32) der oberen Begrenzungs­ fläche des Kanals (20) schneidet.2. Device according to claim 1, characterized in that the plane of the abutment shoulder ( 28 ) intersects at least at approximately the lowest point ( 32 ) of the upper boundary surface of the channel ( 20 ). 3. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeich­ net, daß die Abschnitte (22, 24) des Kanals (20) nach unten trichterförmig aufeinander zu streben.3. Apparatus according to claim 1 or 2, characterized in that the sections ( 22 , 24 ) of the channel ( 20 ) funnel-shaped towards each other downward. 4. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Seitenwände der wenigstens einen Wanne (13) in Richtung zum Kanal (20) aufeinander zu streben. 4. Device according to one of the preceding claims, characterized in that the side walls of the at least one trough ( 13 ) towards each other in the direction of the channel ( 20 ) to strive. 5. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die wenigstens eine Wanne (13) zu dem auf ihrer Seite liegenden Elektrodenraum (10) durch eine Überlaufwand (14; 16) begrenzt ist.5. Device according to one of the preceding claims, characterized in that the at least one trough ( 13 ) to the electrode space ( 10 ) lying on its side is delimited by an overflow wall ( 14 ; 16 ). 6. Vorrichtung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Überlaufwand (14) mit dem Block lösbar ver­ bunden ist.6. The device according to claim 5, characterized in that the overflow wall ( 14 ) with the block is releasably connected. 7. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die wenigstens eine Wanne (13) zu dem auf ihrer Seite liegenden Elektrodenraum (10) durch ein Gitter begrenzt ist.7. Device according to one of claims 1 to 4, characterized in that the at least one trough ( 13 ) to the lying on its side electrode space ( 10 ) is limited by a grid. 8. Vorrichtung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Gitter (16) kammartig ausgebildet ist.8. The device according to claim 7, characterized in that the grid ( 16 ) is comb-like. 9. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Stopfen (16) als Schraub­ stopfen ausgebildet ist.9. Device according to one of the preceding claims, characterized in that the plug ( 16 ) is designed as a screw plug. 10. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Neigungswinkel (α, β) der Achsen der Abschnitte (22, 24) des Kanals (20) zur Horizontalen 45° bis 25° beträgt.10. Device according to one of the preceding claims, characterized in that the angle of inclination ( α , β ) of the axes of the sections ( 22 , 24 ) of the channel ( 20 ) to the horizontal is 45 ° to 25 °. 11. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Abschnitte (22, 24) des Kanals (20) gleiche Form aufweisen und gleich geneigt sind.11. Device according to one of the preceding claims, characterized in that the sections ( 22 , 24 ) of the channel ( 20 ) have the same shape and are inclined equally. 12. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sich im Block (4) unter der wenigstens einen Wanne (13) eine Kühleinrichtung (36) befindet.12. Device according to one of the preceding claims, characterized in that there is a cooling device ( 36 ) in the block ( 4 ) under the at least one trough ( 13 ).
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