[go: up one dir, main page]

DE3539393A1 - Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures - Google Patents

Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures

Info

Publication number
DE3539393A1
DE3539393A1 DE19853539393 DE3539393A DE3539393A1 DE 3539393 A1 DE3539393 A1 DE 3539393A1 DE 19853539393 DE19853539393 DE 19853539393 DE 3539393 A DE3539393 A DE 3539393A DE 3539393 A1 DE3539393 A1 DE 3539393A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
oxo
dihydro
fluoro
cyclopropyl
carboxylic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE19853539393
Other languages
German (de)
Inventor
Guenter Dr Huebner
Helmut Prof Dr Brunner
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer AG
Original Assignee
Bayer AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer AG filed Critical Bayer AG
Priority to DE19853539393 priority Critical patent/DE3539393A1/en
Priority to DE19863617803 priority patent/DE3617803A1/en
Priority to US06/921,995 priority patent/US4895803A/en
Priority to EP86114931A priority patent/EP0221493B1/en
Priority to AT86114931T priority patent/ATE106097T1/en
Priority to DE3689853T priority patent/DE3689853D1/en
Priority to ES86114931T priority patent/ES2052493T3/en
Priority to CA000522180A priority patent/CA1288712C/en
Priority to JP61262871A priority patent/JP2581681B2/en
Publication of DE3539393A1 publication Critical patent/DE3539393A1/en
Priority to JP8118207A priority patent/JPH08317788A/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
    • A61L2/0088—Liquid substances

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

The invention relates to the use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinoquinoline-3-carbo xylic acid = ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures, to compositions for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures and to ciprofloxacin-containing cell cultures.

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von 1-Cyclopropyl-6- fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure= Ciprofloxacin zur Dekontamination Mycoplasma-infizierter Zellkulturen, Zubereitungen zur Dekontamination Mycoplas­ men-infizierter Zellkulturen sowie Ciprofloxacin enthal­ tende Zellkulturen.The invention relates to the use of 1-cyclopropyl-6- fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid Ciprofloxacin for decontamination of Mycoplasma-infected Cell cultures, preparations for decontamination Mycoplas men-infected cell cultures and ciprofloxacin cell cultures.

Zellkulturen, insbesondere permanente Zellinien, sind häufig mit Mycoplasmen kontaminiert, die viele unkontrol­ lierbare Veränderungen in den Zellkulturen induzieren kön­ nen. Im Gegensatz zu Infektionen mit Bakterien und Pilzen bleibt die Mycoplasmeninfektion oft unerkannt, weil selbst stark kontaminierte Zellkulturen normales Wachstum zeigen können und das Kulturmedium klar bleibt.Cell cultures, especially permanent cell lines, are often contaminated with mycoplasma, which many uncontrolled able to induce changeable changes in the cell cultures nen. In contrast to infections with bacteria and fungi the mycoplasma infection often remains undetected because itself highly contaminated cell cultures show normal growth can and the culture medium remains clear.

Für viele Zwecke der Grundlagenforschung (z.B. genetische und physiologische Gegebenheiten in den Zellen einer Kul­ tur), der angewandten Forschung (z.B. lymphozytäre Zell­ fusion zur Gewinnung monoklonaler Antikörper) und erst recht der biotechnologischen Nutzung von Zellkulturen, z.B. Gewinnung eines Produktes für die Humanapplikation, ist es notwendig, mit Mycoplasma-freien Zellkulturen zu arbeiten. Ist eine Kultur erst einmal mit Mycoplasmen kontaminiert, so ist es äußerst schwer, wenn nicht gar oft unmöglich, diese Kultur wieder zu dekontaminieren, obwohl mit verschiedenen Techniken gelegentlich eine Dekontamina­ tion erreicht wurde: So wurden infizierte Zellkulturen bei 41°C für 18 h hyperthermisch behandelt (L. Hayflick, Nature 185, 783-784, 1960), oder die Zellen wurden mit Bromuracil bzw. Bromdesoxyuridin plus dem Fluorochrom Hoechst 33258 und UV-Licht behandelt (M. Marcus et al., Nature 285, 659-661, 1980; K. J. Fowler et al., Exp. Cell Res. 149, 303-306, 1983), oder sie wurden mit Makrophagen, ggf. plus Antibiotika inkubiert (L. Schimmelpfeng et al., Nature 285, 661-662, 1980), oder sie wurden durch die nackte Maus passagiert (D.N. Howell et al., Human Immunol. 5, 233-238, 1982). Für eine routinemäßige Dekontamination eignet sich jedoch keine dieser Methoden.For many basic research purposes (e.g. genetic and physiological conditions in the cells of a cult tur), applied research (e.g. lymphocytic cells  fusion to obtain monoclonal antibodies) and first right of the biotechnological use of cell cultures, e.g. Obtaining a product for human application, it is necessary to use mycoplasma-free cell cultures work. Is a culture first with mycoplasmas contaminated, it is extremely difficult, if not often impossible to decontaminate this culture again, though occasionally decontaminated with different techniques tion: So infected cell cultures were 41 ° C hyperthermally treated for 18 h (L. Hayflick, Nature 185, 783-784, 1960), or the cells were mixed with Bromuracil or bromodeoxyuridine plus fluorochrome Hoechst 33258 and UV light treated (M. Marcus et al., Nature 285, 659-661, 1980; K.J. Fowler et al., Exp. Cell Res. 149, 303-306, 1983), or they were treated with macrophages, incubated plus antibiotics if necessary (L. Schimmelpfeng et al., Nature 285, 661-662, 1980), or they were published by the naked mouse passages (D.N. Howell et al., Human Immunol. 5, 233-238, 1982). For routine decontamination however, none of these methods are suitable.

Es ist außerdem bekannt geworden, daß die Behandlung von Mykoplasmen-kontaminierten Zellkulturen und Zellinien mit den Antibiotika Tiamulin und Minocyclin zu Mykoplasmen­ freien Kulturen führen soll. Um jedoch insbesondere bei wertvollen Zellinien endgültig Mykoplasmen-freie Kulturen zu etablieren, müssen verschiedene Schritte von Behand­ lung, Klonierung der Zellen und Kontrollen durchgeführt werden (J. Schmidt & V. Erfle, Exp. Cell Res. 152, 565- 570, 1984).It has also become known that the treatment of Mycoplasma-contaminated cell cultures and cell lines with the antibiotics tiamulin and minocycline to mycoplasma free cultures. However, in particular at valuable cell lines finally mycoplasma-free cultures To establish different steps of treatment lung, cell cloning and controls performed (J. Schmidt & V. Erfle, Exp. Cell Res. 152, 565- 570, 1984).

Es wurde nun gefunden, daß Ciprofloxacin, bevorzugt in Konzentrationen zwischen 1 und 1000 µg/ml Zellkultur, It has now been found that ciprofloxacin, preferably in Concentrations between 1 and 1000 µg / ml cell culture,  

besonders bevorzugt 20 bis 100 µg/ml Zellkultur, ganz besonders bevorzugt 50 µg/ml Zellkultur, bei der Be­ handlung von Zellkulturen, die gegebenenfalls gleichzeitig auch mit Tiamulin und Minocyclin inkubiert werden, eine Dekontamination besonders hartnäckiger Mycoplasmen-In­ fektionen erbringt, wie sie häufig in Kulturen adhärenter Zellen vorliegen, bei denen die Tiamulin- und Minocyclin- Behandlung nicht allein zum Erfolg führt. Das Verfahren benötigt nur eine siebentägige Behandlungszeit zur Erreichung einer dauerhaften Dekontamination der Kultur. Weitere verschiedene Schritte, wie z.B. Klonierung der Zellen, können völlig entfallen.particularly preferably 20 to 100 µg / ml cell culture, whole particularly preferably 50 µg / ml cell culture, in which Be act of cell cultures, if necessary simultaneously can also be incubated with tiamulin and minocycline, a Decontamination of particularly stubborn mycoplasma-in yields infections that are often more adherent in cultures Cells are present in which the tiamulin and minocycline Treatment alone does not lead to success. The procedure only needs a seven-day treatment time Achieve permanent decontamination of the culture. Other different steps, such as Cloning the Cells, can be completely eliminated.

Die Erfindung betrifft daher die Verwendung von 1-Cyclo­ propyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochinolin-3- carbonsäure zur Dekontamination von Mycoplasma-infizierten Zellkulturen.The invention therefore relates to the use of 1-cyclo propyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazoquinoline-3- carboxylic acid for decontamination of Mycoplasma-infected Cell cultures.

Zweckmäßigerweise werden zur Dekontamination 1 bis 1000 µg des Wirkstoffes pro ml Zellkultur eingesetzt.Expediently 1 to 1000 are used for decontamination µg of active ingredient used per ml of cell culture.

Bevorzugt betrifft die Erfindung auch die Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino­ chinolin-3-carbonsäure zur Dekontamination von Mycoplasmen aus Zellkulturen derart, daß die Dekontamination mit der 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino­ chinolin-3-carbonsäure parallel zu einer Behandlung der Zellkulturen mit ((2-(Diethylamino)ethyl)-thio)-essig­ saure-6-ethenyldecahydro-5-hydroxy-4,6,9,10-tetramethyl-1- oxo-3a,9-propano-3aH-cyclopentacycloocten-8-yl-ester = Tiamulin und/oder 4,7-Bis(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11, 12a-octahydro-3,10,12,12a-tetrahydroxy-1,11-dioxo-2- naphthacencarbonsäureamid = Minocyclin erfolgt. Dabei werden 1 bis 1000 µg Tiamulin und/oder Minocyclin pro ml Zellkultur eingesetzt. Die Behandlung erfolgt so, daß man den Wirkstoff 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7- piperazinochinolin-3-carbonsäure 7 bis 14 Tage, gegebenen­ falls in Kombination mit den Wirkstoffen Tiamulin und/oder Minocyclin, auf die Zellkultur einwirken läßt.The invention preferably also relates to the use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino quinoline-3-carboxylic acid for decontamination of mycoplasma from cell cultures such that the decontamination with the 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino quinoline-3-carboxylic acid in parallel with a treatment of Cell cultures with ((2- (diethylamino) ethyl) thio) vinegar acid-6-ethenyldecahydro-5-hydroxy-4,6,9,10-tetramethyl-1- oxo-3a, 9-propano-3aH-cyclopentacycloocten-8-yl ester Tiamulin and / or 4,7-bis (dimethylamino) -1,4,4a, 5,5a, 6,11, 12a-octahydro-3,10,12,12a-tetrahydroxy-1,11-dioxo-2- naphthacenecarboxamide = minocycline. Here  1 to 1000 µg tiamulin and / or minocycline per ml Cell culture used. The treatment is such that the active ingredient 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7- piperazinoquinoline-3-carboxylic acid given 7 to 14 days if in combination with the active ingredients tiamulin and / or Minocycline, on which cell culture can act.

Weiterer Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino­ chinolin-3-carbonsäure für die Herstellung von Zuberei­ tungen zur Dekontamination von Mycoplasma-infizierten Zellkulturen sowie die Verwendung von 1-Cyclopropyl-6- fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochinolin-3-carbon­ säure, gegebenenfalls in Verbindung mit Tiamulin und/oder Minocyclin für die Herstellung solcher Zubereitungen.Another object of the invention is the use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino quinoline-3-carboxylic acid for the preparation of preparations Decontamination of Mycoplasma-infected Cell cultures and the use of 1-cyclopropyl-6- fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazoquinoline-3-carbon acid, optionally in combination with tiamulin and / or Minocycline for the preparation of such preparations.

Schließlich sind auch Zellkulturmedien, enthaltend 1- Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino­ chinolin-3-carbonsäure bzw. Zellkulturen, enthaltend 1- Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochino­ lin-3-carbonsäure und gegebenenfalls Tiamulin und/oder Minocyclin Gegenstand der Erfindung.Finally, cell culture media containing 1- Cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazino quinoline-3-carboxylic acid or cell cultures containing 1- Cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochino lin-3-carboxylic acid and optionally tiamulin and / or Minocycline object of the invention.

Zweckmäßigerweise bietet es sich an, nach der Detektion einer Mycoplasmeninfektion in Zellkulturen, insbesondere in wertvollen Zellinien, diese Zellen in einem geeigneten Kulturmedium in einer Dichte von z.B. 103-106 Zel­ len/ml frisch einzusäen in ein geeignetes Kulturgefäß, wie beispielsweise eine Zellkulturflasche aus Plastikmaterial. Diese frisch inokulierten Zellen können dann mit einer zuvor hergestellten Lösung von Ciprofloxacin, gegebenen­ falls auch mit einer Lösung von Tiamulin und/oder Minocyc­ lin versetzt werden. Das Antibiotikum kann beispielsweise im Zellkulturmedium gelöst und in einem nach Bedarf erfor­ derlichen Volumen zur Zellkultur zugegeben werden; so ist es z.B. praktisch, etwa 100-500 µl Antibiotika-Lösung zu etwa 5-20 ml Zellkultur zuzupipettieren. Nach Zell- und Antibiotika-Inokulation wachsen die Zellen in den nachfolgenden Tagen an; während dieser Zeit kann dann Ciprofloxacin, gegebenenfalls auch Tiamulin und/oder Mino­ cyclin, seine antiinfektive Wirkung auf die Mycoplasmen ausüben. Ist die Kultur dicht angewachsen (stationäre Wachstumsphase), so empfiehlt es sich, die Zellen mit einer dem Fachmann bekannten Technik zu ernten und mit einer niedrigeren Zelldichte wieder frisch in ein neues Kulturgefäß zu inokulieren; dazu sollte frisches Kultur­ medium verwendet werden und bei Bedarf wieder Ciprofloxa­ cin-Lösung, gegebenenfalls auch Tiamulin- und/oder Mino­ cyclin-Lösung zugesetzt werden. It is expedient, after the detection of a mycoplasma infection in cell cultures, in particular in valuable cell lines, to sow these cells freshly in a suitable culture medium in a density of, for example, 10 3 -10 6 cells / ml in a suitable culture vessel, such as, for example, a cell culture bottle made of plastic material. These freshly inoculated cells can then be mixed with a previously prepared solution of ciprofloxacin, optionally also with a solution of tiamulin and / or minocyc lin. The antibiotic can, for example, be dissolved in the cell culture medium and added to the cell culture in a volume as required; for example, it is practical to pipette in about 100-500 µl of antibiotic solution to about 5-20 ml of cell culture. After cell and antibiotic inoculation, the cells grow in the following days; During this time, ciprofloxacin, optionally also tiamulin and / or minocycline, can exert its anti-infective effect on the mycoplasma. If the culture has grown densely (stationary growth phase), it is advisable to harvest the cells using a technique known to the person skilled in the art and to inoculate them freshly into a new culture vessel with a lower cell density; For this purpose, fresh culture medium should be used and, if necessary, ciprofloxa cin solution, optionally also tiamulin and / or minocycline solution, should be added.

Beispielexample

Suspensions- oder adhärente Zellen verschiedener Zellinien (z.B. U 266 humane Myelomzellen, L 929 Maus-Fibroblasten), die mit Mycoplasmen nicht identifizierter Spezifität kontaminiert waren, wurden mit einer Konzentration von 105/ml und einem Volumen von 10-15 ml in 75 cm3-Zellkul­ turflaschen eingesät. Als Kulturmedium wurde RPMI 1640 mit 10% fötalem Kälberserum (FCS), L-Glutamin (2 mM), Hepes- Puffer (4 mM) und 2-Mercaptoethanol (50 µM) verwandt. Nach jeweils 3-4 Tagen befanden sich die Kulturen in statio­ närer Phase, in der sie dann geerntet wurden (bei adhären­ ten Zellen unter Verwendung von Trypsin/EDTA (0,25%/0,02%)). Anschließend wurden die Zellen wieder in frischem Medium bei 105/ml ausgesät.Suspension or adherent cells from different cell lines (eg U 266 human myeloma cells, L 929 mouse fibroblasts), which were contaminated with mycoplasmas of unidentified specificity, were with a concentration of 10 5 / ml and a volume of 10-15 ml in 75 cm 3 cell culture bottles sown. RPMI 1640 with 10% fetal calf serum (FCS), L-glutamine (2 mM), Hepes buffer (4 mM) and 2-mercaptoethanol (50 µM) was used as the culture medium. After every 3-4 days, the cultures were in the stationary phase, in which they were then harvested (in adherent cells using trypsin / EDTA (0.25% / 0.02%)). The cells were then sown again in fresh medium at 10 5 / ml.

Zur Behandlung der Mycoplasmen-Kontamination wurde den Kulturen zugesetzt: a) Tiamulin (10 µg/ml, 4 Tage lang) und anschließend Minocyclin (5 ug/ml, 3 Tage lang); b) Ciprofloxacin (50 µg/ml, 7 Tage lang); c) Tiamulin und Minocyclin wie unter a) plus Ciprofloxacin wie unter b). Am Ende jeder Einwirkzeit wurden die Antibiotika mit Medium ausgewaschen und die Zellen weiterpassagiert. Vor der Behandlung und zu verschiedenen Zeiten nach der Be­ handlung wurde 0,1 ml Zellkultur auf Hayflick′s Agar zum Mycoplasmen-Nachweis ausgestrichen (L. Hayflick, Texas Reports Biol. Med. 23, Suppl. 1, 285-300, 1965) und für mindestens eine Woche bei 37°C anaerob bebrütet.For the treatment of mycoplasma contamination the Cultures added: a) Tiamulin (10 µg / ml, for 4 days) and then minocycline (5 µg / ml, 3 days); b) Ciprofloxacin (50 µg / ml, 7 days); c) tiamulin and Minocycline as under a) plus ciprofloxacin as under b). At the end of each exposure time, the antibiotics were taken Medium washed out and the cells passed on. In front treatment and at different times after loading 0.1 ml cell culture on Hayflick's agar Mycoplasma detection streaked (L. Hayflick, Texas Reports Biol. Med. 23, Suppl. 1, 285-300, 1965) and for incubated anaerobically at 37 ° C for at least one week.

Das verwendete Agarmedium (5 ml pro Petrischale) setzte sich zusammen aus: PPLO-Agar (Difco; 70 Teile), Pferde­ serum (20 Teile), Hefeextrakt (Flow; 25%-ig; 10 Teile), Glucose (50%-ig, 2 Teile), Benzylpenicillin (100000 U/ml; 1 Teil) und Thalium-I-acetat (2%-ig; 2,5 Teile). Die Ent­ stehung typischer "spiegeleiförmiger" Kolonien auf dem Agar bedeutet Kontamination der Zellkultur mit Mycoplas­ men. Tabelle 1 zeigt Ergebnisse von behandelten L 929- Zellkulturen.The agar medium used (5 ml per petri dish) set consists of: PPLO agar (Difco; 70 parts), horses  serum (20 parts), yeast extract (flow; 25%; 10 parts), Glucose (50%, 2 parts), benzylpenicillin (100000 U / ml; 1 part) and Thalium-I-acetate (2%; 2.5 parts). The Ent standing of typical "fried egg-shaped" colonies on the Agar means contamination of the cell culture with Mycoplas men. Table 1 shows results of treated L 929- Cell cultures.

Tabelle 1Table 1

Mycoplasmen-Kontamination in L 929-Zellkulturen zu ver­ schiedenen Zeiten nach einer 7-tägigen Behandlung mit Tiamulin/Minocyclin(T/M), Ciprofloxacin (C), Tiamulin- Ciprofloxacin/Minocyclin-Ciprofloxacin (T-C/M-C) oder ohne Behandlung (⌀); + = Mycoplasmen-Kontamination, - = keine Mycoplasmen-Kontamination Mycoplasma contamination in L 929 cell cultures at various times after 7 days of treatment with tiamulin / minocycline (T / M), ciprofloxacin (C), tiamulin ciprofloxacin / minocycline ciprofloxacin (TC / MC) or without treatment (⌀ ); + = Mycoplasma contamination, - = no mycoplasma contamination

Während sofort nach der Behandlung in keiner der drei Behandlungsgruppen Mycoplasmen nachweisbar waren, konnten 4 Tage nach Absetzen der Tiamulin/Minocyclin-Behandlung wieder Mycoplasmen aufgefunden werden, nach Ciprofloxacin- Behandlung konnten 7 Tage lang keine Mycoplasmen entdeckt werden. Im Gegensatz dazu konnten über einen Monat nach der Kombinationsbehandlung mit Tiamulin-Ciprofloxacin/Mi­ nocyclin-Ciprofloxacin keine Mycoplasmen mehr nachgewiesen werden, so daß diese Zellen als dekontaminiert angesehen werden müssen.While immediately after treatment in none of the three Treatment groups mycoplasmas were detectable 4 days after stopping tiamulin / minocycline treatment mycoplasmas can be found again after ciprofloxacin Treatment could not detect mycoplasma for 7 days will. In contrast, could take over a month  the combination treatment with tiamulin-ciprofloxacin / Mi nocycline-ciprofloxacin no longer detected mycoplasma are considered so that these cells are decontaminated Need to become.

Claims (10)

1. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro- 4-oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure zur Dekon­ tamination von Mycoplasma-infizierten Zellkulturen.1. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro- 4-oxo-7-piperazinoquinoline-3-carboxylic acid for decon tamination of mycoplasma-infected cell cultures. 2. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro- 4-oxo-7-piperazino-chinolin-3-carbonsäure zur Dekontamination von Mycoplasma-infizierten Zellkul­ turen, dadurch gekennzeichnet, daß zur Dekontamina­ tion 1 bis 1000 µg/ml Zellkultur eingesetzt werden.2. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro- 4-oxo-7-piperazino-quinoline-3-carboxylic acid for Decontamination of Mycoplasma-infected cell culture doors, characterized in that for decontamina tion 1 to 1000 µg / ml cell culture can be used. 3. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure zur Dekonta­ mination von Mycoplasma-infizierten Zellkulturen, dadurch gekennzeichnet, daß die Dekontamination mit der 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4-oxo-7- piperazinochinolin-3-carbonsäure parallel zu einer Behandlung der Zellkulturen mit ((2-(Diethylamino)­ ethyl)-thio)-essigsäure-6-ethenyldecahydro-5-hydroxy- 4,6,9,10-tetramethyl-1-oxo-3a,9-propano-3aH-cyclo­ pentacycloocten-8-yl-ester = Tiamulin und/oder 4,7- Bis(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydro- 3,10,12, 12a-tetrahydroxy-1,11-dioxo-2- naphthacencarbonsäureamid = Minocyclin erfolgt.3. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinoquinoline-3-carboxylic acid for decontamination mination of mycoplasma-infected cell cultures, characterized in that the decontamination with the 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7- piperazinoquinoline-3-carboxylic acid parallel to one Treatment of cell cultures with ((2- (diethylamino) ethyl) -thio) -acetic acid-6-ethenyldecahydro-5-hydroxy- 4,6,9,10-tetramethyl-1-oxo-3a, 9-propano-3aH-cyclo pentacycloocten-8-yl ester = tiamulin and / or 4.7- Bis (dimethylamino) -1,4,4a, 5,5a, 6,11,12a-octahydro- 3,10,12, 12a-tetrahydroxy-1,11-dioxo-2- naphthacenecarboxamide = minocycline. 4. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß zur Dekontamination 1 bis 1000 µg 1-Cyclopropyl-6-fluor-,4-dihydro-4-oxo- 7-piperazinochinolin-3-carbonsäure und 1 bis 1000 ug Tiamulin und/oder Minocyclin pro ml Zellkultur einge­ setzt werden.4. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid according to claim 3, characterized in that for decontamination 1 to 1000 µg 1-cyclopropyl-6-fluoro-, 4-dihydro-4-oxo  7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid and 1 to 1000 µg Tiamulin and / or minocycline per ml of cell culture be set. 5. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure gemäß den An­ sprüchen 1, 3 und 4, dadurch gekennzeichnet, daß man den Wirkstoff 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure 7 bis 14 Tage auf die Zellkultur einwirken läßt.5. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid according to the An sayings 1, 3 and 4, characterized in that one the active ingredient 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid 7 to 14 days can act on the cell culture. 6. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure gemäß den Ansprüchen 3 und 4, dadurch gekennzeichnet, daß man den Wirkstoff 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure 7 bis 14 Tage, in Kombination mit den Wirkstoffen Tiamulin und/oder Minocyclin auf die Zellkultur einwirken läßt.6. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid according to the Claims 3 and 4, characterized in that one the active ingredient 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinoquinoline-3-carboxylic acid 7 to 14 days, in combination with the active ingredients tiamulin and / or Minocycline can act on the cell culture. 7. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure für die Her­ stellung von Zubereitungen zur Dekontamination von Mycoplasma-infizierten Zellkulturen.7. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinoquinoline-3-carboxylic acid for Her provision of preparations for decontamination of Mycoplasma-infected cell cultures. 8. Verwendung von 1-Cyclopropyl-6-fluor-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure in Verbindung mit Tiamulin und/oder Minocyclin für die Herstellung von Zubereitungen zur Dekontamination von Mycoplasa­ infizierten Zellkulturen. 8. Use of 1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4- oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid in combination with tiamulin and / or minocycline for manufacturing of preparations for decontamination of Mycoplasa infected cell cultures.   9. Zellkulturmedien, enthaltend 1-Cyclopropyl-6-fluor- 1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochinolin-3-carbon­ säure.9. Cell culture media containing 1-cyclopropyl-6-fluoro 1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazoquinoline-3-carbon acid. 10. Zellkulturmedien, enthaltend 1-Cyclopropyl-6-fluor- 1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazinochinolin-3-carbonsäure und Tiamulin und/oder Minocyclin.10. Cell culture media containing 1-cyclopropyl-6-fluoro 1,4-dihydro-4-oxo-7-piperazoquinoline-3-carboxylic acid and tiamulin and / or minocycline.
DE19853539393 1985-11-07 1985-11-07 Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures Withdrawn DE3539393A1 (en)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19853539393 DE3539393A1 (en) 1985-11-07 1985-11-07 Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures
DE19863617803 DE3617803A1 (en) 1985-11-07 1986-05-27 USE OF GYRASE INHIBITORS FOR THE DECONTAMINATION OF MYCOPLASMA-INFECTED CELL CULTURES
US06/921,995 US4895803A (en) 1985-11-07 1986-10-22 Method for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures
DE3689853T DE3689853D1 (en) 1985-11-07 1986-10-27 Use of gyrase inhibitors for the decontamination of Mycoplasma-infected cell cultures.
AT86114931T ATE106097T1 (en) 1985-11-07 1986-10-27 USE OF GYRASE INHIBITORS TO DECONTAMINATE MYCOPLASMA-INFECTED CELL CULTURES.
EP86114931A EP0221493B1 (en) 1985-11-07 1986-10-27 Use of gyrase blocking agents in decontaminating cell cultures infested by mycoplasmas
ES86114931T ES2052493T3 (en) 1985-11-07 1986-10-27 USE OF GIRASE INHIBITORS FOR THE DECONTAMINATION OF CELL CROPS INFECTED WITH MYCOPLASM.
CA000522180A CA1288712C (en) 1985-11-07 1986-11-05 Use of gyrase inhibitors for decontamination of mycoplasma-infectedcell culture
JP61262871A JP2581681B2 (en) 1985-11-07 1986-11-06 Mycoplasma-a gillase inhibitor for decontamination of infected cell cultures
JP8118207A JPH08317788A (en) 1985-11-07 1996-04-17 Decontaminating method for cell culture object infected by micoplasma

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19853539393 DE3539393A1 (en) 1985-11-07 1985-11-07 Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE3539393A1 true DE3539393A1 (en) 1987-05-14

Family

ID=6285313

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19853539393 Withdrawn DE3539393A1 (en) 1985-11-07 1985-11-07 Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE3539393A1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1288290A1 (en) * 2001-08-14 2003-03-05 Biotest Ag Gamma-sterilisable culture medium for the detection of yeast and fungi
WO2019214841A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Smart Material Printing B.V. Selective use of polyoxometalates against the infestation of eukaryote cultures, virus cultures and microorganism populations with mollicutes and selectively mollicute-inhibiting and -killing polyoxometalate-containing substances and methods

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1288290A1 (en) * 2001-08-14 2003-03-05 Biotest Ag Gamma-sterilisable culture medium for the detection of yeast and fungi
DE10139965B4 (en) * 2001-08-14 2005-12-29 Biotest Ag Gamma sterilizable culture medium for the detection of yeasts and fungi
WO2019214841A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Smart Material Printing B.V. Selective use of polyoxometalates against the infestation of eukaryote cultures, virus cultures and microorganism populations with mollicutes and selectively mollicute-inhibiting and -killing polyoxometalate-containing substances and methods

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3035118C2 (en) Method for the cultivation of swimming animal cells and device for carrying out the method
DD268481A5 (en) Test Methods and Methods for the Determination of Antibiotics in MILK AND THEREOF TO BE USED, NEW STRAIN OF STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS
EP2103308A1 (en) Method for producing a mixture of bacteriophages and its use in therapy of antibiotic-resistant staphylococci
DE69429051T2 (en) Use of water to prepare a preparation for treating dermatoses in pets
DE2460599B2 (en) Use of radioisotopes for the rapid determination of microorganisms
EP0467337B1 (en) Conservation of diagnostic tests
EP0221493B1 (en) Use of gyrase blocking agents in decontaminating cell cultures infested by mycoplasmas
DE3539393A1 (en) Use of ciprofloxacin for decontamination of mycoplasma-infected cell cultures
DE3434122A1 (en) METHOD FOR PRODUCING INTERFERON
CH671031A5 (en)
DE3005605C2 (en)
DE3783511T2 (en) METHOD FOR BREEDING ANIMAL CELLS AND SUITABLE MEDIA.
DE19521938C2 (en) Use of cyclic lipopeptides to inactivate or to protect against infections by microorganisms of the Mollicutes class
DE3917163C2 (en)
DE947827C (en) Process for the preservation of decomposable substances
DE3812194C2 (en)
DE2812989A1 (en) METHOD OF MANUFACTURING INTERFERON AND THE PRODUCT OBTAINED THEREOF
EP1490112A1 (en) Method and agent for producing therapeutically active blood compositions
DE19505056C1 (en) Pleomorphic trypanosome cultivation on semi-solid culture medium, esp. agar
DE2212573A1 (en) Test agent for examining a sample for microorganisms
Ito et al. Zytologische Untersuchungen der Epithelzellen der menschlichen Gallenblase mittels der Bauerschen Methode mit besonderer Berücksichtigung der gleichzeitigen Darstellung von Schleimstoff und Golgiapparat sowie Mitochondrien.
EP0524971B1 (en) Decontaminated biological material
DE1617568C (en) Method for attenuating smoldering necholeravirus in pig cell cultures
DE451935C (en) Process for the production of antitoxins
DE1022757B (en) Bags made of plastic foils for cultivations for cultivating microorganisms

Legal Events

Date Code Title Description
8143 Withdrawn due to claiming internal priority