DE3147611A1 - Vorrichtung zur quantitativen elution von proteinen oder polypeptioden aus einem gel. - Google Patents
Vorrichtung zur quantitativen elution von proteinen oder polypeptioden aus einem gel.Info
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Description
ÖEUTSCHES KREBSFORSCHUNGS- Heidelberg, 1.12.1981
ZENTRUM HEIDELBERG PLA 81Ö5 Ga/hr
IiIR 1 081 233
Vorrichtung zur quantitativen Elution von Proteinen oder Polypeptiden aus
einem Gel.
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur quanti=-
tativen Elution von Proteinen oder Polypeptiden aus einem Gel mittels Elektrophorese.
Nach der SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese aufgetrennte
Proteinmischungen (z.B. Viren, isolierte biologische Membranen usw. - nach bekannten Methoden
Laemmli, Nature 227, 680, 1970; Thomas und Kornberg, Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 2626, 1975) stellen sich
im Plattengel, als einzelne Banden dar. Diese Banden entsprechen einzelnen Proteinen mit entsprechendem
Molekulargewicht, um diese so aufgetrennten Proteine
(Polypeptide) für weitere Anwendungen benutzen zu können, werden die Gelbereiche aus dem Plattengel
herausgetrennt, gesammelt und das im Netzwerk des Polyacrylamide festgehaltene Protein elektrophoretisch
eluiert. Als Elutionspuffer dient im allgemeinen
ein Laufpuffer wie 20 mM Tris-Glycin, pH 8.8, 0,1 mM
SDS und 0,5 % Mercaptoethanol.
Die der Erfindung gestellte Aufgabe besteht nunmehr
darin, eine Vorrichtung zu bieten, mit der die Isolation auch von größeren Mengen elektrophoretisch aufgetrennter
Proteine bzw. Polypeptide in gewünschter Konzentration ermöglicht ist.
Die Lösung dieser Aufgabe ist in den kennzeichnenden Merkmalen des Anspruchs 1 dargelegt.
Die übrigen Ansprüche geben vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindung wieder.
Die Erfindung wird im folgenden anhand eines Ausführungsbeispiels
mittels der Figur näher erläutert.
Die Figur zeigt einen Schnitt durch eine Elutionsapparatur, welche eine obere und untere Elektrodenkammer
4„ 10 aufweist. Beide Kammern 4 und 10 können zylindrisch aufgebaut sein und werden aufeinanderges-e.tzt.Am
Boden 12 bzw. am Deckel 3 der Kammer 10 bzw. 4 ist jeweils eine flächenhafte oder ringförmige
Elektrode 11 (positiv) und 1 (negativ) derart angeordnet,
daß sie senkrecht zu einer Achse (Rotationsachse der beiden Kammern 4, 10) stehen, die durch den
Verbindungsgang 13 zwischen beiden Kammern 4 und 10
weist. Die obere Elektrode 1 ist an einer Halterung 14ibefestigt, mit der sie bezüglich der Oberfläche
(nicht dargestellt) der in der oberen Elektrodenkammer 4 befindlichen Gel-PufferlÖsungfje nach Füllstand
und elektrischer Spannung zwischen den Elektroden 1, 11#verstellt werden kann. Zur Feststellung der
Halterung 14 dient eine Schraube 2, die an einem Kranz
15 am Deckel 3 geführt wird.
Der Boden der oberen Elektrodenkammer 4 ist vorzugsweise als Trichter 16 geformt. An seiner tiefsten
Stelle beginnt der Verbindungsgang 13, in dem ein
• β β
Röhrchen 7 wie ein Trichterhals angeordnet ist. Das Röhrchen 7 besitzt einen Anschlag 17, bis zu dem es
von unten (untere Elektrodenkammer 10) her in den Verbindungsgang 13 eingeschoben werden kann. Ein Teil
18 reicht jedoch bis zum Trichterboden 16 hoch, wo ein Simmering 6 für die Abdichtung zwischen Röhrchen
7 und oberer Elektrodenkammer 4 sorgt. Eine Sinterplatte 5 kann alternativ das obere oder untere Ende
des Röhrchens 7 abdecken.
Das untere Ende 19 des Röhrchens 7 ist konisch ausgebildet.
Auf diesen Konus 19 wird die Öffnung einer
Dialysekapsel 9 als Sammelkapsel für die Proteine bzw. Polypeptide aus der Gel-Pufferlösung in der
oberen Elektrodenkammer 4 bei Anlegen einer Spannung von 80 - 1OO V und ca. 10 mA Stromstärke über 10 bis
24 h Elutionszeit aufgeschoben werden. Als Halterung dient ein Gegenkonusring 8, der die Dialysekapsel 9
(z.B. Kollodiumhülse SM 1 32OO,Ausschlußgrenze ca.
10.000 Dalton, Firma Sartorius) an den Konus 19 festklemmt. Die untere Elektrodenkammer 10 ist ebenfalls
mit Pufferlösung gefüllt, die die Dialysekapsel· 9 umgibt.
Bei längeren Dialysekapseln 9 ist es möglich, mit einem zylindrischen Zwischenstück die Höhe der unteren
Elektrodenkammer 10 zu verändern. Es ist auch mögiich,
im Boden der oberen Eiektrodenkammer 4 mehrere Trichter mit entsprechender Anzahl von Verbindungsgängen und Dialysekapse^ nebeneinander anzuordnen,
um gleichzeitig Proteine in einem Arbeitsgang eluieren zu können. Die gesamte Vorrichtung besteht vorzugsweise
aus Isolationsmaterial, wie z.B. Plexiglas.
Claims (1)
- DEUTSCHES KREBSFORSCHUNGS- Heidelberg, 1.12.1981 ZENTRUM HEIDELBERG PLA 8165 Ga/hrPatentansprüche;. Vorrichtung zur quantitativen Elution von Proteinen oder Polypeptiden aus einem Gel mittels Elektrophorese, dadurch gekennzeichnet, daß eine obere und eine untere Elektrodenkammer (4, 10) mit einer Pufferlösung vorgesehen ist, wobei in die obere Elektrodenkammer (4) zusätzlich das die Proteine oder Polypeptide enthaltende Gel eingefüllt ist, daß zwischen der oberen und unteren Elektrodenkammer (4, 10) ein Verbindungsgang (13) geschaffen ist, und daß am Ende des Verbindungsganges (13) im Bereich der Pufferlösung der unteren Elektrodenkammer (10) eine Sammelkapsel (9) für die Proteine oder Polypeptide angeordnet ist.2ο Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Elektroden (1,11) der oberen und unteren Elektrodenkammer (4, 10) senkrecht zu einer Achse angeordnet sind, die durch den Verbindungsgang (13) weist.3. Vorrichtung nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Elektroden (1, 11) flächenhaft oder ringförmig ausgebildet sind.4. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder einem der folgenden, dadurch gekennzeichnet, daß die obere— 2 —Elektrode (1) an einer Halterung (14) befestigt ist, die der Spannungszuführung und der Einstellung der Elektrode (1) in bezug auf die Oberfläche der in der oberen Elektrοdenkammer (4) befindlichen Gel-Pufferlösung dient.5. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder einem der"folgenden, dadurch gekennzeichnet, daß der Verbindungsgang (13) ein Röhrchen (7) enthält und von tiefsten Bereich des als Trichter (16) ausbildbaren Bodens der oberen Elektrοdenkammer (4) bis in die untere Elektrodenkammer (1o) reicht.6. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder einem der folgenden, dadurch gekennzeichnet, daß das Röhrchen(7) mittels einer Dichtung (6) gegenüber der oberen Elektrodenkammer (4) abgedichtet ist.7. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder einem der folgenden, dadurch gekennzeichnet, daß die Sammelkapsel (9) eine Dialysekapsel ist, die auf das konisch ausgebildete untere Ende (19) des Röhrchens (7) aufgeschoben und mittels eines Klemmringes (8) gehaltert ist.
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