DE2941575A1 - METHOD FOR IDENTIFYING A VIRUS INFECTION AND KIT THEREFOR - Google Patents
METHOD FOR IDENTIFYING A VIRUS INFECTION AND KIT THEREFORInfo
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Description
Methode zur Identifizierung einer Virus infektion und Kit hierfürMethod for identifying a virus infection and kit therefor
Die Erfindung betrifft die Diagnose von Virusinfektionen, insbesondere ein Kit und eine Methode zu seiner Verwendung für die Identifizierung von Virusinfektionen in vivo.The invention relates to the diagnosis of viral infections, in particular a kit and a method for its use for the identification of viral infections in vivo.
Es wurde bereits darüber berichtet, daß Bakterien, z.B. Staphylococcus aureus, ein Oberflächenprotein enthalten, das den Fc-Teil von Immunoglobulin erkennt (Kronvall et al, J. Immunol. 104 (1970) 140-147). Dies führte zur weitverbreiteten Verwendung von S. aureus für die Immunopräzipitation von Antigenen aus Zell-Lysaten (Kessler, J. Immunol. 115 (1975) 1617-1624; Goding, J. Immunol. Methods 20 (1978) 241-253).It has already been reported that bacteria, e.g. Staphylococcus aureus, contain a surface protein, which recognizes the Fc part of immunoglobulin (Kronvall et al, J. Immunol. 104 (1970) 140-147). This led to the widespread use of S. aureus for the Immunoprecipitation of antigens from cell lysates (Kessler, J. Immunol. 115 (1975) 1617-1624; Goding, J. Immunol. Methods 20 (1978) 241-253).
Von Austin et al (Lab. Investig. 39 (Aug. 1978) 128-132) wurde ferner gefunden, daß die Bindung von Staphylococcus aureus an kultivierte Kaninchenzellen, die in vitro mit einem Stamm von Influenzavirus infiziert werden, verstärkt wird, wenn die infizierten Zellen mit Antiinfluenzaserum behandelt werden. Die Autoren weisen ferner darauf hin, daß Antiinfluenza-Antikörpar sehr frühzeitig im Verlauf dieser Virusinfektion in vivo gebildet werden, und setzen als selbstverständlich voraus, daß auf Grund dieser Tatsache Bakterien auf den Ort der Infektion in vivo durch Bindung an die infizierten Zellen lokalisiert werden.Austin et al (Lab. Investig. 39 (Aug. 1978) 128-132) also found that the binding of Staphylococcus aureus to cultured rabbit cells infected in vitro with a strain of influenza virus if the infected cells are treated with anti-influenza serum. The authors point also point out that anti-influenza antibodies are very good early in the course of this viral infection in vivo, and take for granted suggest that due to this fact bacteria to the site of infection in vivo by binding to the infected Cells are localized.
Es wurde nun gefunden, daß entgegen der Annahme von Austin et al bei Zellen, die in vivo mit einem Virus infiziert worden sind, nicht alle immunoreaktiven Stellen auf ihren Oberflächen an im Wirt gebildete Antikörper gebunden sind und diese Zellen keine stark gesteigerte Bindung an Bakterien aufweisen. Es wurde ferner gefunden, daß Zellen, die vom Virus in vivoIt has now been found that, contrary to the assumption of Austin et al, in cells that were infected with a virus in vivo have been infected, not all of the immunoreactive sites on their surfaces are linked to antibodies produced in the host are bound and these cells do not have a greatly increased binding to bacteria. It was also found that cells carried by the virus in vivo
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infiziert worden sind, im Gegensatz zu anderen, nicht in dieser Weise infizierten Zellen die Fähigkeit haben, sich an Antikörper oder Bindungspartner, die für das die Zellen infizierende Virus spezifisch sind, zu binden, worauf diese an Antikörper gebundenen infizierten Zellen fähig sind, sich über den Antikörper an Bakterien zu binden. Die Anwesenheit oder Abwesenheit von Bakterien, die an die an den Antikörper gebundenen infizierten Zellen gebunden sind, kann durch einfache Beobachtung unter Verwendung eines Lichtmikroskops bestimmt werden, wobei als Kontrolle infizierte Zellen, an die kein Antikörper gebunden worden ist, verwendet werden, so daß es möglich wird, durch Verwendung verschiedener Antikörper, von denen jeder für eine andere Virusinfektion spezifisch ist, das jeweilige Virus oder die jeweiligen Viren, die die Infektion verursachen, zu identifizieren. Die Methode ist schnell in wenigen Stunden unter Verwendung von in Testlaboratorien leicht verfügbaren Geräten durchgeführt worden und stellt demzufolge ein einfaches und schnelles Mittel zur Diagnose von Virusinfektionen dar.have been infected, in contrast to other cells not infected in this way, have the ability to to bind to antibodies or binding partners specific for the virus that infects the cells, whereupon these antibody-bound infected cells are able to attach themselves to bacteria via the antibody to tie. The presence or absence of bacteria associated with those bound to the antibody infected cells can be determined by simple observation using a light microscope using infected cells to which no antibody has been bound as controls so that it becomes possible by using different antibodies, each for a different Virus infection is specific, the particular virus or viruses causing the infection, to identify. The method is quick in a few hours using easily in test laboratories available devices and is therefore a simple and fast means to Diagnosis of viral infections.
Gegenstand der Erfindung ist demgemäß die Identifizierung einer Virusinfektion in einem Spezimen von in vivo infizierten Zellen nach einer Methode, die dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Kontrollprobe des Spezimens und wenigstens eine Testprobe verfügbar macht, mit jeder Testprobe einen Antikörper gegen ein bekanntes Virus inkubiert, das sich an die Oberfläche einer mit dem bekannten Virus infizierten Zelle zu binden vermag, und hierbei ein Reaktionsgemisch bildet, das freien Antikörper und gebundene Paare enthält, die aus dem an die Oberflächen der infizierten Zellen gebundenen Antikörper bestehen, den freien Antikörper von der Testprobe abtrennt, die Kontrollprobe und jede Testprobe mit Bakterien inkubiert, die die Fähigkeit haben, sich an den Antikörper zu binden, von jeder Probe etwaigeThe invention accordingly relates to the identification of a virus infection in a specimen from in vivo infected cells by a method which is characterized in that a control sample of the Specimen and at least one test sample makes available, with each test sample an antibody against a known one Incubated virus that is able to bind to the surface of a cell infected with the known virus, thereby forming a reaction mixture containing free antibody and bound pairs resulting from the Antibodies bound to the surfaces of the infected cells consist of the free antibody from the test sample separates, the control sample and each test sample are incubated with bacteria that have the ability to grow to bind to the antibody, any sample
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ungebundene Bakterien abtrennt und die Anwesenheit oder Abwesenheit von an die Oberflächen von Zellen der Kontroll- und Testproben gebundenen Bakterien feststellt.separates unbound bacteria and the presence or absence of on the surfaces of cells of the Detects bound bacteria in control and test samples.
Die Erfindung umfasst ferner ein für die Identifizierung von Virusinfektionen in einem Spezimen von in vivo infizierten Zellen dienendes Kit, das als wesentliche Komponenten einen Vorrat von Bakterien, die sich an Antikörper gegen das infektiöse Mittel zu binden vermögen, und einen Vorrat wenigstens eines Antikörpers gegen eine bekannte Virusinfektion enthält.The invention further encompasses one for the identification of viral infections in a specimen from in vivo Kit for infected cells, the essential components of which are a supply of bacteria that can adhere to Ability to bind antibodies against the infectious agent, and a supply of at least one antibody against a known viral infection.
Bei der Durchführung einer Diagnose gemäß der Erfindung ist es wesentlich, eine Kontrollprobe des Zellspezimens einzubeziehen. Wenn die Kontrollprobe Bindung von Bakterien an Zellen in der gleichen Größenordnung wie die Testproben aufweist, kann die Diagnose nicht durchgeführt werden. Wenn jedoch eine oder mehrere Testproben eine wesentlich verstärkte Bindung von Bakterien an die Zelloberflächen im Vergleich zur Kontrollprobe aufweisen, ist das infektiöse Virus als ein Virus identifiziert, gegen das der beim Test verwendete Antikörper spezifisch ist.In making a diagnosis according to the invention, it is essential to have a control sample of the cell specimen to be included. If the control sample binding of bacteria to cells in the same order of magnitude as that Has test samples, the diagnosis cannot be performed. However, if one or more test samples have a show significantly increased binding of bacteria to the cell surfaces compared to the control sample, the infectious virus is identified as a virus against which the antibody used in the test is specific is.
In der Praxis ist es zweckmäßig, eine Reihe von Testproben gleichzeitig mit einer Kontrollprobe zu bearbeiten, wobei mit jeder Testprobe ein anderer Antikörper, der für ein anderes Virus spezifisch ist, verwendet wird.In practice, it is useful to process a number of test samples simultaneously with a control sample, a different antibody specific for a different virus being used with each test sample.
Antikörper gegen eine Vielzahl verschiedener Viren sind im Handel erhältlich oder können, falls gewünscht, gezüchtet werden, indem ein beliebiges gewünschtes Tier, z.B. Kaninchen, Schafe usw., mit einem bekannten Virus infiziert, nach einer geeigneten Zeit Blut vom Tier entnommen und das den gewünschten Antikörper enthaltende Antiserum gewonnen wird.Antibodies against a wide variety of viruses are commercially available or, if desired, can be can be bred by adding any desired animal, e.g., rabbits, sheep, etc., with a known virus infected, after a suitable time blood is taken from the animal and the one containing the desired antibody Antiserum is obtained.
Die Erfindung ist besonders auf die Identifizierung von Viren anwendbar, die Infektionen des oberen Respirations-The invention is particularly applicable to the identification of viruses that cause infections of the upper respiratory tract
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trakts verursachen, jedoch ist sie auch brauchbar im Falle mehrerer verschiedener Viren wie vesikuläre Stomatitis, Herpes χρ,ά Paramyxo einschließlich respiratorischer synzytialer und Parainfluenza.tracts, but it is also useful in the case of several different viruses such as vesicular stomatitis, herpes χρ, ά paramyxo including respiratory syncytial and parainfluenza.
Die Probe oder das Spezimen von in vivo infizierten Zellen, auf die die Erfindung anwendbar ist, kann in beliebiger üblicher Weise erhalten werden, beispielsweise durch Entnahme einer Probe von biologischem Material von einem infizierten Individuum, Entnahme von Sekret aus einer Wunde, Entnahme eines Abstrichs aus dem Hals, Entnahme von Nasensekreten oder durch Entnahme von abgeschabtem Zervikalgewebe.The sample or specimen of in vivo infected cells to which the invention is applicable can be found in can be obtained in any conventional manner, for example by taking a sample of biological Material from an infected individual, collection of secretions from a wound, collection of a smear from the Throat, removal of nasal secretions or removal of scraped cervical tissue.
Als Bakterien, die verwendet werden können und als Markierung an den infizierten Zellen dienen, kommen beliebige Bakterien infrage, die ein Oberflächenprotein enthalten, das spezifisch mit dem Antikörper gegen ein Virus reagiert d.h. Bakterien, die Oberflächenimmunoglobulinrezeptoren besitzen. Bevorzugt werden Bakterien, die Protein A enthalten, z.B. Styphylococcus aureus. Die Bestimmung der Anwesenheit oder Abwesenheit von an die Zelloberflächen gebundenen Bakterien kann äußerst einfach erfolgen, indem die ganzen Zellen mit dem Auge unter dem Mikroskop untersucht werden. Bei 400- bis 800facher Vergrößerung kann die Anwesenheit von infizierten Zellen unter nicht infizierten Zellen in einem Verhältnis von 1:1000 leicht in wenigen Minuten festgestellt werden, da die Bakterien als hervorstechende visuelle Markierungen auf den Zelloberflächen dienen.Any bacteria that can be used and act as a marker on the infected cells can be used Bacteria in question that contain a surface protein that is specific to the antibody against a Virus reacts i.e. bacteria, the surface immunoglobulin receptors own. Bacteria containing Protein A, e.g., Styphylococcus, are preferred aureus. Determination of the presence or absence of bacteria bound to the cell surfaces can be extremely simply by examining the whole cells with the eye under a microscope. at 400- to 800-fold magnification can detect the presence of infected cells among uninfected cells in A ratio of 1: 1000 can easily be detected in a few minutes because the bacteria are as salient Visual markings on the cell surfaces are used.
Das Spezimen bzw. die Probe der zu testenden Zellen wird vorzugsweise fixiert, indem sie in ein kleines Volumen eines geeigneten Fixiermittels, z.B. normale Kochsalzlösung, die 1 Gew.-% Glutaraldehyd enthält, getaucht wird, wobei eine übermäßig starke Verdünnung der Probe vermieden wird, um die anschließende mikroskopische Untersuchung zu erleichtern.The specimen or the sample of the cells to be tested is preferably fixed by placing it in a small volume a suitable fixative such as normal saline containing 1% by weight glutaraldehyde is, avoiding excessive dilution of the sample, in order to make the subsequent microscopic Facilitate investigation.
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Eine Kontrollprobe und eine oder mehrere Testproben werden dann vom Spezimen abgetrennt und der Trocknung bei Raumtemperatur oder mäßig erhöhter Temperatur in den Vertiefungen eines üblichen Mikroskop-Objektträgers oder anderen geeigneten Gefäßen überlassen, wobei übermäßig starkes Erhitzen vermieden wird, das bekanntlich die Morphologie der Zellen zerstören würde. Das Trocknen bewirkt, daß die Zellen an der Gefäßoberfläche haften bleiben, so daß sie während der anschließenden Spülungen in ihrer Lage bleiben. Jede Probe wird nach dem Trocknen entweder durch Eintauchen oder mit einer Spritzflasche mit normaler Kochsalzlösung, die eine geringe Menge eines nichtionogenen Tensids enthält, kurz gespült. Eine geringe Menge des gewünschten Antiserums oder eine Verdünnung des gewünschten Antikörpers wird dann jeder Testprobe zugesetzt, worauf inkubiert wird. Der Kontrollprobe wird nichts oder eine geringe Menge normaler Kochsalzlösung vor der Inkubation zugesetzt. Bei einer bevorzugten Ausführungsform wird der Kontrollprobe vor der Inkubation Nicht-Immunserum von der gleichen Tierspezies, in der das Antiserum oder der Antikörper erzeugt wurde, zugesetzt. Das Antiserum oder der Antikörper wird vorzugsweise im Überschuß über die Menge verwendet, die für die Reaktion mit allen verfügbaren immunoreaktiven Stellen auf den Zelloberflächen erforderlich ist. Die Bebrütung der Kontroll- und Testproben wird unter gleichen Bedingungen durchgeführt, nämlich etwa 2 Minuten bis etwa 60 Minuten bei Raumtemperaturen. Höhere Temperaturen bis etwa 37°C oder sogar noch höher sowie niedrigere Temperaturen können ebenfalls angewendet werden, wie dies für Immunoreaktionen bekannt ist. Im allgemeinen wird die Inkubation durchgeführt, indem 10 Minuten oder mehr, vorzugsweise etwa 30 Minuten bei 37°C erhitzt wird.A control sample and one or more test samples are then separated from the specimen and allowed to dry Room temperature or a moderately elevated temperature in the wells of a conventional microscope slide or left to other suitable vessels, avoiding excessive heating, which is known to the Would destroy the morphology of the cells. The drying causes the cells to adhere to the surface of the vessel remain so that they remain in place during the subsequent rinses. Each sample is after drying either by immersion or with a squirt bottle briefly rinsed with normal saline solution containing a small amount of a non-ionic surfactant. One small amount of the desired antiserum or a dilution of the desired antibody will then each Test sample added, followed by incubation. The control sample gets nothing or a small amount of normal saline added before incubation. In a preferred embodiment, the control sample is before the Incubation of non-immune serum from the same animal species in which the antiserum or antibody was generated, added. The antiserum or antibody is preferably used in excess of the amount required is required to react with all available immunoreactive sites on the cell surfaces. the Incubation of the control and test samples is carried out under the same conditions, namely about 2 minutes to about 60 minutes at room temperatures. Higher temperatures up to about 37 ° C or even higher and lower Temperatures can also be used, as is known for immunoreactions. In general the incubation is carried out by heating for 10 minutes or more, preferably about 30 minutes at 37 ° C.
Durch die zwischen dem Antiserum oder Antikörper und der Testprobe von Zellen stattfindende Immunoreaktion wird ein Gemisch von Zellen, an deren OberflächenBy the immunoreaction that takes place between the antiserum or antibody and the test sample of cells becomes a mixture of cells on their surfaces
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freie Antikörper spezifisch gebunden sind, und/Antikörperfree antibodies are specifically bound, and / antibodies
gebildet.educated.
Der freie Antikörper wird dann vom gebundenen Antikörper abgetrennt, indem jede Testprobe mit einem Puffer mit physiologischem pH-Wert und physiologischer Ionenstärke gespült oder gewaschen wird. Die Kontrollprobe wird in der gleichen Weise behandelt. Wenn jedoch nur ein geringer Überschuß des Antikörpers verwendet wird, ist es möglich, diese Trennmaßnahme wegzulassen.The free antibody is then separated from the bound antibody by using each test sample with a buffer physiological pH and physiological ionic strength is rinsed or washed. The control sample is in treated the same way. However, if only a small excess of the antibody is used, then is it is possible to omit this separation measure.
Jeder Probe, d.h. sowohl den Kontroll- als auch den Testproben, wird dann eine geringe Menge der gewünschten Bakterien, z.B. S. aureus, vorzugsweise in einem geeigneten Fixierungsmittel, z.B. einer 1%igen wäßrigen Formaldehydlösung, zugesetzt, worauf das Gemisch bebrütet wird. Vorzugsweise werden die Bakterien im Überschuß über die Menge verwendet, die mit allen verfügbaren immunoreaktiven Stellen auf dem gebundenen Antikörper reagiert.Each sample, i.e. both the control and test samples, is then given a small amount of the desired Bacteria, e.g. S. aureus, preferably in a suitable fixative, e.g. a 1% aqueous formaldehyde solution, added, whereupon the mixture is incubated. Preferably the bacteria are in excess about the amount used with any available immunoreactive sites on the bound antibody reacted.
Etwaige ungebundene Bakterien werden dann von jeder Probe durch Spülen oder Waschen der Kontrollprobe und jeder Testprobe mit einem Puffer mit physiologischem pH-Wert und physiologischer Ionenstärke abgetrennt.Any unbound bacteria are then removed from each sample by rinsing or washing the control sample and each test sample separated with a buffer with physiological pH and physiological ionic strength.
Die Kontrollprobe und jede Testprobe werden dann mit dem Auge unter einem Mikroskop untersucht, um die Anwesenheit oder Abwesenheit von an die Zelloberflächen gebundenen Bakterien festzustellen. Falls erforderlich oder erwünscht, kann zur Erleichterung der Bestimmung eine geeignete Färbung, z.B. Gram1 Färbung oder Giemsa, angewendet oder ein Phasenkontrastmikroskop verwendet werden.The control sample and each test sample are then visually examined under a microscope to determine the presence or absence of bacteria bound to the cell surfaces. If necessary or desired, a suitable stain, eg Gram 1 stain or Giemsa, or a phase contrast microscope can be used to facilitate the determination.
Es ist ferner möglich, die Bakterien zuerst mit einem geeigneten Antiserum oder Antikörper unter Bildung eines Antiserum-Bakterien-Komplexes umzusetzen, worauf der Komplex mit den ganzen Zellen umgesetzt oder inkubiert werden, um gie Bakterien an die Oberfläche der infizier-It is also possible to first treat the bacteria with a suitable antiserum or antibody to form a Antiserum-bacterial complex to implement, whereupon the complex implemented or incubated with the whole cells to bring the bacteria to the surface of the infected
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ten Zellen zu binden.th cells to bind.
Ein Kit für die Durchführung einer solchen Bestimmung enthält die folgenden wesentlichen Komponenten:A kit for performing such a determination contains the following essential components:
1) Einen Vorrat von Bakterien, z.B. Staphylococcus aureus, die vorzugsweise inaktiviert sind, z.B. eine 1%ige Suspension von mit Formalin inaktiviertem S.aureus, oder einen gefriergetrockneten Vorrat dieser inaktivierten Bakterien, die zu einer 1%igen Suspension in normaler Kochsalzlösung oder in 0,01-molarem Trispuffer bei pH 7,4, der normale Kochsalzslösung enthält, rekonstituiert werden können.1) A supply of bacteria, e.g. Staphylococcus aureus, which are preferably inactivated, e.g. a 1% suspension of formalin-inactivated S.aureus, or a freeze-dried supply of these inactivated Bacteria that contribute to a 1% suspension in normal saline or in 0.01 molar Tris buffer pH 7.4, which contains normal saline, can be reconstituted.
2) Einen oder mehrere Vorräte von Antiserum oder Antikörper, von denen jeder spezifisch, wenn auch nicht unbedingt monospezifisch für ein bekanntes Virus ist. Das Antiserum oder der Antikörper kann in üblicher Weise in jedem geeigneten Tier erzeugt werden. Geeignet ist beispielsweise Kaninchenantiserum, das Immunoglobuline enthält, die für ein bestimmtes virales infektiöses Mittel spezifisch sind. Der Vorrat des Antiserums oder Antikörpers kann in Form einer Verdünnung bei dem für die Verwendung beim Verfahren geeigneten Titer, beispielsweise 2 log. über Neutralisationspotential des Antikörpers, oder in Form einer zu einer solchen Verdünnung rekonstituierbaren gefriergetrockneten Masse vorhanden sein.2) One or more supplies of antiserum or antibody, each of which is specific, though not necessarily monospecific, for a known virus. The antiserum or antibody can be generated in any suitable animal in a conventional manner. Suitable for example is rabbit antiserum that contains immunoglobulins that are responsible for a specific viral infectious Resources are specific. The stock of antiserum or antibody can be in the form of a dilution at the for the use in the process of a suitable titer, for example 2 log. about the neutralization potential of the Antibody, or in the form of a freeze-dried mass reconstitutable to such a dilution be.
Das Kit kann außerdem als fakultative zusätzliche Komponenten einen Vorrat von Mikroskop-Objektträgern mit geeigneten Vertiefungen (wells) und Vorräte der gewünschten Puffer enthalten. Es kann praktisch alle gewünschten oder notwendigen Materialien für die Durchführung der Tests einschließlich eines Vorrats von Glutaraldehyd und Farbstoff sowie Geräte wie Pipetten, Objektträger-Inkubatoren, Trockenofen und Mikroskop enthalten.The kit can also contain a supply of microscope slides with suitable additional components Contain wells and supplies of the desired buffer. It can be practically anything you want or materials necessary for performing the tests including a supply of glutaraldehyde and Contains dye as well as devices such as pipettes, slide incubators, drying oven, and microscope.
Die Erfindung wird durch die folgenden speziellenThe invention is made specific by the following
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Beispiele weiter erläutert.Examples further explained.
Eine Suspensionskultur von Babyhamster-Nierenzellen wurde mit dem Virus der vesikulären Stomatitis (VSV) bei 20facher Vermehrung (multiplicity of 20) durch Inkubation für 3 Stunden bei 35°C infiziert. Eine Kontrollprobe der Zellen wurde scheininfiziert. Nach der Inkubation wurden die Zellen in isotonischem Puffer gewaschen, in 1%iger Glutaraldehydlösung fixiert und gewaschen.A suspension culture of baby hamster kidney cells was infected with the vesicular stomatitis virus (VSV) 20-fold multiplication (multiplicity of 20) infected by incubation for 3 hours at 35 ° C. A control sample the cells were mock infected. After incubation, the cells were washed in isotonic buffer, fixed in 1% glutaraldehyde solution and washed.
Die infizierten Zellen und die Kontrollprobe wurden dann getrennt mit Kaninchen-Anti-VSV-Serum (1:20) 45 Minuten bei 37 C inkubiert. Die Zellsuspensionen wurden zur Entfernung von ungebundenem oder freiem Antikörper gewaschen, und die infizierten Zellen und Kontrollzellen wurden getrennt mit einer Suspension von mit Formalin inaktiviertem S. aureus (Volumenverhältnis 1:10) 30 Minuten bei 37°C behandelt. Die beiden Zellsuspensionen wurden dann zur Entfernung von verbliebenen freien, nicht an die Zellen gebundenen Bakterien gewaschen, und Proben der beiden Zellsuspensionen wurden auf Objektträger aus Glas gegeben und bei 400facher Vergrößerung unter einem bi-okularem Mikroskop untersucht. Hierbei wurde festgestellt, daß 100% der infizierten Zellen hervorstechend mit Bakterien markiert waren, die adhärent an die ZeIloberflächen gebunden waren, während keine der Kontrollzellen Bakterien, die an die Zelloberflächen gebunden waren, zeigten.The infected cells and the control sample were then separated with rabbit anti-VSV serum (1:20) for 45 minutes incubated at 37C. The cell suspensions were washed to remove unbound or free antibody, and the infected cells and control cells were separated with a suspension of inactivated with formalin S. aureus (volume ratio 1:10) treated at 37 ° C for 30 minutes. The two cell suspensions were then washed to remove any remaining free unbound bacteria, and samples of the Both cell suspensions were placed on glass slides and examined at 400x magnification under a bi-ocular microscope. It was found that that 100% of the infected cells were prominently marked with bacteria that were adherent to the cell surfaces were bound, while none of the control cells were bacteria that bound to the cell surfaces were, showed.
Wenn bei dem vorstehend beschriebenen Versuch normales Kaninchenserum anstelle des Anti-VSV-Serums verwendet wurde, wurden weder infizierte Zellen noch nicht infizierte Zellen durch Bakterien, die an die Zelloberfla-» chen gebunden waren, markiert.When using normal rabbit serum instead of anti-VSV serum in the experiment described above was, neither infected cells nor uninfected cells were caused by bacteria attached to the cell surface » chen were bound, marked.
Ähnliche Ergebnisse wurden erhalten, wenn bei dem vorstehend beschriebenen Versuch menschliche Zellen, dieSimilar results were obtained when, in the experiment described above, human cells which
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mit Herpes simplex-Viren infiziert waren, anstelle der infizierten Hamsterzellen verwendet wurden und außerdem das entsprechende Kaninchen-Antiherpes simplex-Serum verwendet wurde. Ähnliche Ergebnisse wurden auch erhalten, wenn bei dem vorstehend beschriebenen Versuch Affenzellen, die mit dem respiratorischen Synzytial-Virus infiziert waren, anstelle der infizierten Hamsterzellen verwendet und außerdem das entsprechende Kaninchen-Anti-Respirations-Synzytialserum verwendet wurden.were infected with herpes simplex virus instead of the infected hamster cells were used and also the corresponding rabbit antiherpes simplex serum was used. Similar results were also obtained when in the experiment described above Monkey cells infected with the respiratory syncytial virus instead of the infected hamster cells used and also the corresponding rabbit anti-respiratory syncytial serum were used.
Ähnliche Ergebnisse können auch erhalten werden, wenn menschliche Zellen, die in vivo mit einem der vorstehend genannten Viren infiziert sind, verwendet werden. Die Kontrollprobe von in vivo infizierten Zellen, die nicht mit einem spezifischen Antiserum inkubiert werden, zeigt wenige oder keine Zellen, die an die Zelloberflächen gebunden sind, während Zellen, die mit dem entsprechenden Antiserum inkubiert werden, eine große Zahl von gebundenen Bakterien zeigen. In der gleichen Weise zeigen Zellen, die in vivo mit einem Virus infiziert und nur mit einem Antikörper gegen ein anderes Virus inkubiert worden sind, wenige oder keine Bakterien, die an die Zelloberflächen gebunden sind.Similar results can also be obtained when human cells in vivo with any of the above named viruses are infected. The control sample from in vivo infected cells that did not Incubated with a specific antiserum shows few or no cells attached to the cell surfaces are bound, while cells that are incubated with the appropriate antiserum, a large number of bound Show bacteria. In the same way, cells that are infected with a virus in vivo and only show have been incubated with an antibody to another virus, few or no bacteria that can bind to the Cell surfaces are bound.
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