DE2937292A1 - METHOD FOR PRODUCING W, (W-1) - DIHYDROXYCARBONIC ACIDS AS CARBON ACIDS CONTAINING A MAIN COMPONENT - Google Patents
METHOD FOR PRODUCING W, (W-1) - DIHYDROXYCARBONIC ACIDS AS CARBON ACIDS CONTAINING A MAIN COMPONENTInfo
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Description
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Carbonsäuren, welche tf, (w-1 )-Dihydroxysäure als einen Hauptbestandteil enthalten, aus a-Olefinen mit 12 bis 18 Kohlenstoffatomen unter Verwendung eines Mikroorganismus.The invention relates to a process for the preparation of carboxylic acids which tf, (w-1) -dihydroxy acid contained as a main component, from α-olefins having 12 to 18 carbon atoms using a microorganism.
Carbonsäuren, welche "v> (v)-1 ) -»Dihydroxy car bonsäure" enthalten, bedeuten in diesem Falle Carbonsäuren, weiche durch die folgenden 5 Formeln ausgedrückt werden:Carboxylic acids, which "v> (v) -1) -» Dihydroxy car bonsäure " contain, mean in this case carboxylic acids, which are expressed by the following 5 formulas:
O3OOU/O710O3OOU / O710
HOOC(CH2)n_50H(OH)CH2OH (1)HOOC (CH 2 ) n _ 5 0H (OH) CH 2 OH (1)
HOOC(CH2)n_2C00H (2)HOOC (CH 2 ) n _ 2 C00H (2)
H00C(CH2)n_5CH(OH)COOH (3)H00C (CH 2 ) n _ 5 CH (OH) COOH (3)
HOOC(CH2)n_2CH20H (4)HOOC (CH 2 ) n _ 2 CH 2 0H (4)
HOOC(CH2)n_5CH(OH)CH2OCH5 (5)HOOC (CH 2 ) n _ 5 CH (OH) CH 2 OCH 5 (5)
Bemerkung: η in den obigen Formeln bedeutet die Anzahl Kohlenstoffatome 12 bis 18.Note: η in the above formulas means the number of carbon atoms from 12 to 18.
Von den durch die obigen Formeln (1) bis (5) zum Ausdruck gebrachten Carbonsäuren, wird erfindungsgemäß die Carbonsäure (1) mit w, w-1-Dihydroxycarbonsäure als ein Hauptbestandteil erzeugt, doch die Erzeugung mindestens einer oder mehrerer der Verbindung (2) bis (5) ist ebenfalls mit einbezogen.Of the carboxylic acids expressed by the above formulas (1) to (5), the carboxylic acid is used in the present invention (1) with w, w-1-dihydroxycarboxylic acid as a main ingredient is generated, but the generation of at least one or more of the compounds (2) to (5) is also included.
Bisher sind einige' Berichte über die Herstellung verschiedener Verbindungen aus jt-Olefinen als Substrat veröffentlicht; beispielsweise beschreibt die japanische Patentveröffentlichung 38-15608 die Herstellung von !»!carbonsäure aus entsprechendem ot-Olefin, bzw. die japanische Patentschrift Kokai 51-5139o die Herstellung von «.-Hydroxycarbonsäure. J.Bruyn usw. berichten auch über die Herstellung von 1,2-Hexadecendiol aus 1-Hexadecen (J.Bruyn Koninkl. Ned. Akad. Watenschap Proc. Ser., 5.7c 41 (1954); J.E. Stewart, W.R. Pinnerty, R.E. Kallia und D.P. Stevenson, Science, 132 1251 (196o); T. Ishikawa und J.W. Poster, Nature, 192 892 (1961)).So far, several reports have been published on the preparation of various compounds from jt-olefins as substrates; For example, Japanese Patent Publication 38-15608 describes the production of! »! carboxylic acid from the corresponding ot-olefin, and Japanese Patent Kokai 51-5139o describes the production of«.-Hydroxycarboxylic acid. J.Bruyn, etc. also report the preparation of 1,2-hexadecenediol from 1-hexadecene (J.Bruyn Koninkl. Ned. Akad. Watenschap Proc. Ser., 5.7c 41 (1954); JE Stewart, WR Pinnerty, RE Kallia and DP Stevenson, Science, 132 1251 (196o); T. Ishikawa and JW posters, Nature, 192 892 (1961)).
Jedoch findet man in diesen Berichten, mit Ausnahme von Dicarbonsäure, nicht die Erzeugung irgendeiner Substanz, welche eine funktioneile Gruppe wie etwa Carboxylgruppe oder Hydroxylgruppe an jedem Ende der Kette besitzt.However, with the exception of dicarboxylic acid, one does not find in these reports the production of any substance which has a functional group such as carboxyl group or hydroxyl group at each end of the chain.
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Im allgemeinen neigt die intramolekulare Kondensation und intermolekulare Kondensation zum Auftreten langkettiger Kohlenwasserstoffe, welche eine Carboxylgruppe bzw. Carboxylgruppen an einem Ende bzw. den Enden der Ketten, und eine Hydroxygruppe bzw. Hydroxygruppen an einem Ende, an den Enden oder in der Nähe der Enden besitzen. Insbesondere sind langkettige Kohlenwasserstoffe, welche Methylengruppen in ihren Kohlenstoffketten besitzen, vielversprechende Rohmaterialien von Polymeren, Arzneimitteln, Antikorrosionsmitteln und Parfümstoffen, und insbesondere ist die von 15-Hydroxypentadecan abgeleitete Carbonsäure brauchbar als Rohstoff für die Synthese von großem cyclischen Lacton, welches ein kostspieliger Parfümstoff ist.In general, intramolecular condensation and intermolecular condensation tend to be long-chain Hydrocarbons having a carboxyl group or carboxyl groups at one end or the ends of the Chains, and a hydroxyl group or groups at one end, at the ends or near the ends own. In particular, long chain hydrocarbons are those that have methylene groups in their carbon chains own promising raw materials of polymers, drugs, anti-corrosion agents and Perfumes, and in particular the carboxylic acid derived from 15-hydroxypentadecane is useful as a raw material for the synthesis of large cyclic lactone, which is an expensive perfume.
Nunmehr wurde überraschenderweise gefunden, daß beim Kultivieren eines Mikroorganismus von Candida genus, welcher eine v), (\)-1 )-Dihydroxycarbonsäure erzeugt, in einem a-01efine mit 12 bis 18 Kohlenstoffatomen enthaltenden Medium als Substrat, oder beim Reagierenlassen von Zellen dieses Mikroorganismus, welcher zuvor kultiviert worden ist, auf diesen ct-Olefinen in einem Medium, dieser Mikroorganismus entsprechende Carbonsäuren erzeugt, welche v), $J-1 )-Dihydroxycarbonsäuren als einen Hauptbestandteil aufweisen.It has now surprisingly been found that when a microorganism of Candida genus which produces a v), (\) -1) -dihydroxycarboxylic acid is cultivated in a medium containing α-01efine having 12 to 18 carbon atoms as a substrate, or when cells are allowed to react Microorganism which has previously been cultured on these ct-olefins in a medium, this microorganism produces corresponding carboxylic acids which have v), $ J-1) -dihydroxycarboxylic acids as a main component.
Ziel der Erfindung ist daher die Schaffung eines Verfahrens zur Herstellung von Carbonsäuren, welche w,-(vJ-1 ) -Dihydroxy car bonsäure als einen Haptbestandteil aufweisen, aus cx-Olefinen mit 12 bis 18 Kohlenstoffatomen unter Verwendung eines Mikroorganismus von Candida genus.The aim of the invention is therefore to create a process for the preparation of carboxylic acids which have w, - (vJ-1) -dihydroxy carboxylic acid as a haptic component, from cx-olefins having 12 to 18 carbon atoms using a microorganism from Candida genus.
Das bei der Erfindung verwendete a-01efin ist einThe α-olefin used in the invention is a
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geradkettiger Kohlenwasserstoff mit 12 bis 18 Kohlenstoffatomen und besitzt eine Doppelbindung zwischen Kohlenstoffatomen an einem Ende, und nimmt bei der Kultivierung dieses Mikroorganismus als eine hauptsächliche Kohlenstoffquelle teil. Die Auswahl einer Anzahl Kohlenstoffatome ist von der betreffenden Carbonsäure abhängig, doch ist es möglich, gleichzeitig oc-Olefine zu verwenden, welche zwei oder mehrere unterschiedliche Anzahlen an Kohlenstoffatomen aufweisen.straight chain hydrocarbon with 12 to 18 carbon atoms and has a double bond between carbon atoms at one end, and decreases at the Cultivating this microorganism as a major source of carbon. Choosing one The number of carbon atoms depends on the carboxylic acid in question, but it is possible to use oc-olefins at the same time to use which have two or more different numbers of carbon atoms.
Der erfindungsgemäß verwendete Mikroorganismus gehört zu Candida genus und ist fähig, a-01efine zu assimilieren bzw. auf diesen zu reagieren unter Erzeugung von Carbonsäuren, welche als einen Hauptbestandteil w (w-1)-Dihydroxycarbonsäure der obigen Formel (1) aufweisen, bzw. unter Erzeugung mindestens einer der Verbindungen der obigen Formeln (2) bis (5), zusammen mit (1).The microorganism used in the present invention belongs to Candida genus and is capable of assimilating or reacting to α-olefins to produce carboxylic acids which have w (w-1) -dihydroxycarboxylic acid of the above formula (1) as a main component, or to produce at least one of the compounds of formulas (2) to (5) above, together with (1).
Candida tropicalis BR-254, welcher in den Beispielen der Erfindung verwendet wird und nachstehend beschrieben sei, wurde hinterlegt von Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology mit der Hinterlegungsnummer FERM P-46o4. Candida tropicalis BR-254, which is used in the Examples of the invention and is described below, has been deposited with the Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology under the accession number FERM P-46o4.
Nachstehend die mikrobiologischen Eigenschaften dieses Stammes:The microbiological properties of this strain are as follows:
(1) Grosse und Gestalt: Kurz, oval (4x8) x(5-11) Sporenbildung Negativ(1) Size and shape: Short, oval (4x8) x (5-11) Negative spore formation
(2) Kultureigenschaften:(2) Cultural characteristics:
Streifenkultur auf einem Agarmedium, welches Glucose, Hefeextrakt und Pepton enthält:Strip culture on an agar medium containing glucose, yeast extract and peptone:
Die Kolonie ist hell gelblich-weiß, auf der Oberfläche glanzlos und glatt.The colony is light yellowish-white, dull and smooth on the surface.
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(3) Fermentation von Zuckern: Glucose +(3) Fermentation of sugars: glucose +
Galactose + Sucrose +Galactose + sucrose +
Maltose +Maltose +
CellobioseCellobiose
Trehalose LactoseTrehalose lactose
Melibiose Raffinose MelezitoseMelibiose raffinose melezitose
InulinInulin
(4) Assimilation von Kohlenstoffverbindungen:(4) Assimilation of carbon compounds:
Glucoseglucose
GalactoseGalactose
d-Rlbosed-Rlbose
1-Thamnose1-thamnosis
1-Sorbose1-sorbose
SucroseSucrose
MaltoseMaltose
CellobioseCellobiose
MelibioseMelibiosis
RaffinoseRaffinose
InulinInulin
lösliche Stärke d-Xylosesoluble starch d-xylose
1-Arabinose1-arabinose
d-Arabinosed-arabinose
Äthanol + Glycerin + Erythrytol Ribotol + GäLactitol . d-Mannitol + d-Glunitol + a-Methyl-d-Glucosid + Salicin +Ethanol + Glycerin + Erythrytol Ribotol + Glactitol. d-mannitol + d-glunitol + a-methyl-d-glucoside + salicin +
d.l-Milchsäure + Bernsteinsäure . + Zitronensäure + Inositold.l-lactic acid + succinic acid. + Citric acid + inositol
'3*'3 *
(5) Assimilation von KNO,(5) assimilation of KNO,
(6) Vitaminbedarf:(6) Vitamin requirement:
(7) Wachstum in Medium mit Vitaminmangel: (7) Growth in medium with vitamin deficiency:
(8) NaCl-Toleranz:(8) NaCl tolerance:
(9) maximale Wachstumstemperatur: (1o) Guanosin-Cytosin-Gehalt:(9) maximum growth temperature: (1o) guanosine cytosine content:
Negativ BiotinNegative biotin
schwach 11 - 13 Ji 41 - 430C 35,3#weak 11 - 13 Ji 41 - 43 0 C 35.3 #
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-fr--fr-
Bei der Erfindung wird die Vorkultivierung des Mikroorganismus mit assimilierbarer Kohlenstoffquelle, beispielsweise a-Olefinen, Zuckern und anderen Kohlenstoffverbindungen durchgeführt, damit eine Zellmasse wächst, und dann werden die gewachsenen Zellen in einem Medium mit a-01efin als Substrat kultiviert, oder es wird eine sogenannte ruhende Zellreaktion mit a-01efin als Substrat in einem Medium aerob durchgeführt.In the invention, the pre-cultivation of the microorganism with an assimilable carbon source, for example α-olefins, sugars and other carbon compounds performed so that a cell mass grows, and then the grown cells are placed in a medium cultivated with a-01efin as a substrate, or it becomes a so-called resting cell reaction with α-01efin as substrate carried out aerobically in a medium.
Zu Kohlenstoffquellen, welche als Wachsturnsmedium geeignet sind, können, neben a-01efin, Glucose, Sucrose, Maltose, Trehalose oder Substanzen zählen, welche diese Bestandteile enthalten.To carbon sources, which are suitable as a growth medium can, in addition to a-01efin, glucose, sucrose, Maltose, trehalose or substances that contain these components count.
Zu Stickstoffquellen können Ammoniumchlorid, Ammoniumsulfat, Ammoniak in Lösung, Harnstoff, Aminosäuren oder Substanzen gehören, welche diese Bestandteile enthalten.Ammonium chloride, ammonium sulfate, Ammonia in solution, urea, amino acids, or substances that make up these components contain.
Zu Spurenwachstumsstimulantien und Mineralien, welche für das Wachstum benötigt werden, können Zinksulfat, Ferro-sulfat, Magnesiumsulfat, Mangansulfat, Kaliumphosphat und Natriumphosphat als Mineralien, und Vitamine und Nucleinsäuren als Spurenwachstumsstimulantien zählen. Außerdem können Verbindungen wie Pepton und Getreidetränklauge (corn steep liquor) mit einbezogen sein. Kurz gesagt, enthalten die Medien assimilierbare Substanzen und Nährsubstänzen, welche in einem weiten Bereich für die Herstellung des erstrebten bzw. betreffenden Produktes ausgewählt sind. Die Mengen dieser Zusätze können angemessen bestimmt werden gemäß den für die Fermentierung angewandten, bekannten Methoden.To trace growth stimulants and minerals, which Zinc sulfate, ferrous sulfate, magnesium sulfate, manganese sulfate, potassium phosphate can be needed for growth and sodium phosphate as minerals, and vitamins and nucleic acids as trace growth stimulants. Compounds such as peptone and corn steep liquor can also be included. In a nutshell, the media contain assimilable substances and nutrients, which in a wide range for the Production of the desired or relevant product are selected. The amounts of these additives can be reasonable can be determined according to the known methods used for fermentation.
Bei der Erfindung wird der Mikroorganismus im oben beschriebenen Medium bei einem pH-Wert von 7 bzw. von etwa In the invention, the microorganism is in the medium described above at a pH of 7 or about
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t.t.
7 lind einer Temperatur von 3o°C bzw. etwa Jo0C, 72 bis 96 Stunden aerob durch Schütteln so kultiviert, daß der Mikroorganismus mit dem Substrat und anderen Komponenten des Mediums genügend in Berührung kommen kann. Wenn e in Schäumen während des Kultivierens beobachtet wird, so setzt man eine angemessene Menge an Entschäumungsmittel hinzu, um das Schäumen zu bekämpfen und um Zellen daran zu hindern, sich in den Schaum einzumischen. Die so erzeugten Produkte enthalten w; (w-1)-Dihydroxycarbonsäure gemäß der obigen Formel (1), und zusätzlich eine oder mehrere Komponenten der Formeln (2) bis (5).7 and a temperature of 30 ° C or about Jo 0 C, cultivated aerobically by shaking for 72 to 96 hours in such a way that the microorganism can come into sufficient contact with the substrate and other components of the medium. If foaming is observed during cultivation, an appropriate amount of defoaming agent is added to combat foaming and to prevent cells from interfering with the foam. The products thus produced contain w ; (w-1) -Dihydroxycarboxylic acid according to the above formula (1), and additionally one or more components of the formulas (2) to (5).
Um jede Verbindung aus einem Gemisch der Produkte abzutrennen und zu gewinnen, wird der folgende Arbeitsgang vorgenommen: Man entfernt die Zellen aus dem Kultivierungsgemisch bzw. aus den Reaktionsprodukten und stellt die sich ergebende Flüssigkeit auf einen pH-Wert von 2 ein. Der erhaltene weiße kristalline Niederschlag wird methyliert, und durch eine Silicagelkolonne hindurch oder mittels fraktionierter Destillation in jede Verbindung aufgetrennt.In order to separate and recover any compound from a mixture of the products, the following operation is carried out undertaken: The cells are removed from the cultivation mixture or from the reaction products and adjusts the resulting liquid to a pH of 2. The white crystalline precipitate obtained is methylated, and passed through a column of silica gel or separated into each compound by fractional distillation.
Die Erfindung sei nunmehr speziell unter Bezugnahme auf eine bevorzugte Ausführungsform beschrieben.The invention will now be described specifically with reference to a preferred embodiment.
Bereitung der Impfsubstanzen:Preparation of the vaccine substances:
Candida tropicalis BR-254(FERM P-46o4) wird 24 Stunden bei 3o°C streifenkultiviert auf einer Schräge von MaIzextraktagar (hergestellt von Oxoide, Code CM 59). Andererseits werden 3o g Sucrose, log Natriumacetat, 4 g NH4Cl, 2 g K2HPO4, o,6 g MgSO4*7H2O, 1o mg FeSO4'7H2O, Candida tropicalis BR-254 (FERM P-46o4) is strip cultivated for 24 hours at 30 ° C on a slant of corn extract agar (manufactured by Oxoide, code CM 59). On the other hand, 30 g sucrose, log sodium acetate, 4 g NH 4 Cl, 2 g K 2 HPO 4 , 0.6 g MgSO 4 * 7H 2 O, 10 mg FeSO 4 '7H 2 O,
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8 mg MnSO^·4-5H2O, 8 mg ZnSO.'7HgO und 5 yag Biotin in 1 liter entionisierten Wassers aufgelöst, auf einen pH-Wert von 6,5 eingestellt, 15 Minuten bei 1150C sterilisiert, und 5o ml hiervon bringt man in einen 5oo ml-Erlenmeyerkolben, auf welchen zwei ösen von Zellen dieses Stammes aufgeimpft werden, um die Kultivierung durch hin- und hergehendes Schütteln 24 Stunden bei 280C durchzuführen. Als Ergebnis erhält man 5o ml Impflösung.8 mg MnSO ^ · 4-5H 2 O, 8 mg and 5 ZnSO.'7HgO yag biotin in 1 liter of deionized water dissolved, adjusted to a pH of 6.5, sterilized 15 minutes at 115 0 C and 5o ml thereof is brought into a 5oo ml Erlenmeyer flask, to which two eyelets are inoculated to the culture by reciprocating shaking be carried out for 24 hours at 28 0 C of cells of this strain. The result is 50 ml of the inoculation solution.
Kultivierung:Cultivation:
1 Liter eines Mediums, welches 5 g Na2HPO.'12H2O, 4 g NH4Cl, 0,6 g M S04'7H20, 1o mg FeS04*7H20, 8 mg MnSO4*4-5H2O, 8 mg ZnS04*7H20 und 5 ug Biotin, aufgelöst in 1 Liter entionisierten Wassers enthält und auf einen pH-Wert von 7 eingestellt ist, wird zusammen mit 1oo ml Tetradecen in einen 2L-Rüttelfermentator gegeben und 15 Min. bei 1150C sterilisiert. Dieses Medium wird mit 5o ml der oben beschriebenen Impfsubstanz angeimpft j dann wird die Kultivierung 24 Stunden bei 3o°C mit Belüftung bei o,6 Liter Je Minute und einer Rührung mit 8oo U/Min, durchgeführt, und der pH-Wert wird unter Verwendung von 2n-K0H auf 7 eingeregelt. Es folgt 48stündige weitere Kultivierung bei 3o°C, Rührung bei 6oo U/Min, und Belüftung bei o,9 Liter je Minute.1 liter of a medium which contains 5 g Na 2 HPO.'12H 2 O, 4 g NH 4 Cl, 0.6 g M S0 4 '7H 2 0, 10 mg FeS0 4 * 7H 2 0, 8 mg MnSO 4 * 4 -5H 2 O, 8 mg ZnS0 4 * 7H 2 0 and 5 ug biotin, dissolved in 1 liter of deionized water and adjusted to a pH value of 7, is placed together with 100 ml of tetradecene in a 2L vibrating fermenter and 15 Sterilized at 115 ° C. for min. This medium is inoculated with 50 ml of the above-described inoculant j then cultivation is carried out for 24 hours at 30 ° C. with aeration at 0.6 liters per minute and stirring at 800 rpm, and the pH is adjusted using adjusted from 2n-K0H to 7. This is followed by further cultivation for 48 hours at 30 ° C., stirring at 600 rpm, and aeration at 0.9 liters per minute.
Abtrennung der Produkte:Separation of the products:
Die erzeugte Brühe wird mit 2n-K0H auf einen pH-Wert von-9,o eingestellt, zur Entfernung von Zellen 15 Minuten bei 6ooo U/Min, zentrifugiert, und die sich ergebende wässrige Schicht stellt man mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 ein. Der erhaltene weiße kristalline Niederschlag wird unter Absaugen abfiltriert und zur Durchführung der Extrahierung mit Äther in 2oo ml In-KOH aufgelöst. Die sich ergebende wässrige Schicht stellt man mit konzentrierter SaIz-The broth produced is adjusted to a pH of -9.0 with 2N KOH, for 15 minutes to remove cells at 600 rpm, centrifuged, and the resulting The aqueous layer is adjusted to a pH of 2.0 with concentrated hydrochloric acid. The received white crystalline precipitate is filtered off with suction and to carry out the extraction with Ether dissolved in 2oo ml In-KOH. The resulting aqueous layer is made up with concentrated salt
030014/011·030014/011
säure auf einen pH-Wert von 2,0 ein, um die Extraktion mit Äther durchzuführen, und dann entfernt man den Äther durch Destillation unter vermindertem Druck. Als Ergebnis erhält man 4,5 g einer weißen, kristallinen Substanz. Wenn man 5oo mg dieses Gemisches mit Diazomethen inethyliert, in eine mit Silicagel gefüllte Kolonne bringt und mit 1o fo Äthylacetat in Chloroform eluiert, so werdenacid to pH 2.0 to perform extraction with ether, and then the ether is removed by distillation under reduced pressure. As a result, 4.5 g of a white crystalline substance is obtained. If one 5oo mg inethyliert this mixture with Diazomethen, brings in a silica gel column and eluted with ethyl acetate in chloroform 1o fo, so
4 Arten an Verbindungen eluiert. Man führt weiteres Eluieren mit Äthylacetat durch und es wird eine Verbindungsart eluiert. Die Tabelle I zeigt das Gewicht dieser4 kinds of compounds eluted. Further elution with ethyl acetate is carried out and it becomes a compound species eluted. Table I shows the weight of these
5 Produkte und deren gewichtsmäßigen Prozentsatz.5 products and their percentage by weight.
Verbindung durch Anzahl ' Gewicht mg gewichtsmäßigerConnection by number 'weight mg more weight
Prozentsatzpercentage
Nr. 1 Nr. 2 Nr. 3 Nr. 4 Nr. 5No. 1 No. 2 No. 3 No. 4 No. 5
1) zeigt Anzahl Eluierungen an.1) shows the number of elutions.
Identifizierung der Produkte:Identification of the products:
Die Verbindung Nr. 5 in Tabelle I wird geprüft sowohl durch Elementaranalyse als auch durch Massenspektrometrie, IR und 5C-NMR. Die Ergebnisse sind in Tabelle II wiedergegeben.Compound No. 5 in Table I is checked by both elemental analysis and mass spectrometry, IR and 5 C-NMR. The results are given in Table II.
03Q0U/07103Q0U / 071
Tabelle IITable II
C-NMR-Absorption1 Ί
13 C NMR absorption
Experimentell berechnet (%) Experimentally calculated (%)
65,66 11,o265.66 11, o2
ö OH Oö OH O
CH5 - 0 - G - CH2 - CH2 - (CH2)7 - CH2 - CH2 -CH- C2 CH 5 - O - G - CH 2 - CH 2 - (CH 2 ) 7 - CH 2 - CH 2 - CH - C 2
ppm(= Teile je Million)ppm (= parts per million)
51,9 1758 34,4 26,ο 3ο,1 26,7 34,7 73,2 67,451.9 1758 34.4 26, ο 3ο, 1 26.7 34.7 73.2 67.4
3o,83o, 8
MasBenepektrometrie (gemeseen als Trimethylsilylather)Mass spectrometry (measured as trimethylsilyl ether)
M+ - CH5 m/e 4o3 M+ - OCH5 . m/e 3Θ7 M+ - (CH2OTMS) m/e 315M + - CH 5 m / e 4o3 M + - OCH 5 . m / e 3Θ7 M + - (CH 2 OTMS) m / e 315
Aus den obigen Ergebnissen wird die Verbindung (5) identifiziert als Methyl-13,14-dihydroxytetradecanoat.From the above results, the compound (5) is identified as methyl 13,14-dihydroxytetradecanoate.
Die VerbindungenNr. 1 bis 4 wurden in der gleichen Weise wie oben analysiert und es wurde bestätigt, daß diese Verbindungen die folgende Struktur besitzen:The connections no. 1 through 4 were done in the same way analyzed as above, and it was confirmed that these compounds have the following structure:
0300U/07190300U / 0719
Nr. 1 : DimethyltetradecandioatNo. 1: dimethyl tetradecanedioate
Nr. 2 : Dimethyl-2-hydroxytetradecandioatNo. 2: Dimethyl 2-hydroxytetradecanedioate
Nr. 3 : Methyl-14-hydroxytetradecanoatNo. 3: methyl 14-hydroxytetradecanoate
Nr. 4 : Methyl-i^-hydroxy-H-methoxytetradecanoatNo. 4: Methyl 1-4 hydroxy-H-methoxytetradecanoate
1 1^1 1 ^
Die Tabelle III zeigt die Ergebnisse von C-NMR (kernmagnetische Resonanz).Table III shows the results of 13 C-NMR (nuclear magnetic Resonance).
Tabelle IIITable III
Verbindung Nr. 1 !, - O - 8 - Connection No. 1 !, - O - 8 -
CH5 - O - C - CH2 - CH2 - (CHg)8 - CHg - CHg - C - O - CH5 (ppm)CH 5 - O - C - CH 2 - CH 2 - (CHg) 8 - CHg - CHg - C - O - CH 5 (ppm)
51,8 175,3 34,6 25,8 3o,5 25,8 34,6 175,3 51,851.8 175.3 34.6 25.8 3o.5 25.8 34.6 175.3 51.8
3 ο, ο3 ο, ο
0 OH0 OH
- 0 - C - OH - CH2 - CHg - (CH2J7- CH2 -OHg-C- O-CH,- 0 - C - OH - CH 2 - CHg - (CH 2 J 7 - CH 2 -OHg-C- O-CH,
(ppm)
52,2 176,1 71,5 35,2 26,2 3o,5 25,9 34,7 175,5 51,8(ppm)
52.2 176.1 71.5 35.2 26.2 3o.5 25.9 34.7 175.5 51.8
CH5 - 0 - (3 - CH2 - CH2 - (CH2)8 - CH2 - CH2 - CH2 - OHCH 5 - 0 - (3 - CH 2 - CH 2 - (CH 2 ) 8 - CH 2 - CH 2 - CH 2 - OH
51,8 175,5 34,7 25,9 3o,4 24,5 38,9 68,651.8 175.5 34.7 25.9 3o, 4 24.5 38.9 68.6
3(5,13 (5.1
03001 4/071903001 4/0719
CH5 - O - C - CH2 - CH2 - (CH2)7 - CH2 - CH2 -CH- CH2-O-CH5 CH 5 - O - C - CH 2 - CH 2 - (CH 2 ) 7 - CH 2 - CH 2 -CH- CH 2 -O-CH 5
(ppm)(ppm)
51,8 175,5 34,6 25,9 3o,7 26,5 34,7 71,0 78,1 59,151.8 175.5 34.6 25.9 3o.7 26.5 34.7 71.0 78.1 59.1
3o,23o, 2
Die Kultivierung (bzw. Reaktion) wird in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 durchgeführt mit der Ausnahme, daß man anstelle von Tetradecen-1, Dodecen-1, Hexadecen-1 bzw. Octadecen-1 verwendet.The cultivation (or reaction) is carried out in the same way as in Example 1 with the exception that instead of tetradecene-1, dodecene-1, hexadecene-1 or octadecene-1 is used.
Impfsubstanzen, bereitet wie in Beispiel 1 beschrieben, werden in einem 5oo ml-Kolben auf 2o ml eines Mediums aufgeimpft, welches aus den gleichen Verbindungen wie in Beispiel 1 besteht, und es werden 2 ml Tridecen-1, Pentadecen-1 bzw. Heptadecen-1 hinzugesetzt. Die Kultivierung wird durchgeführt durch 96-stündiges hin- und hergehendes Schütteln (155 Schwingungen je Minute) bei 3o°C. Die entstandene Brühe wird nach dem Entfernen der Zellen auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und filtriert und man erhält einen Niederschlag, welcher in 1 n-KOH-Lösung aufgelöst und mittels Äther extrahiert wird. Die sich ergebende wässrige Schicht stellt man mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 ein und extrahiert mit Äther. Nach dem Entfernen des Äthers, wird der Niederschlag gewogen, methylverestert und trimethylsilyliert (unter Verwendung von TMS-HT,Inoculants, prepared as described in Example 1, are added to 2o ml of a medium in a 5oo ml flask inoculated, which from the same compounds as in Example 1, and 2 ml of tridecene-1, pentadecene-1 or heptadecene-1 are added. Cultivation is carried out by shaking back and forth for 96 hours (155 vibrations per minute) at 30 ° C. After removing the cells, the resulting broth is adjusted to a pH of 2 and filtered and a precipitate is obtained, which is dissolved in 1N KOH solution and extracted with ether will. The resulting aqueous layer is adjusted to pH 2 with concentrated hydrochloric acid one and extracted with ether. After removing the ether, the precipitate is weighed and methylesterified and trimethylsilylated (using TMS-HT,
030014/0719030014/0719
hergestellt von Tokyo Kaeei Co.)» um das Produkt zu ana lysieren durch Gaschromatographie mit Ausrüstung eines Wasserstofflammen-Ionisierungsanzeigers.manufactured by Tokyo Kaeei Co.) » to analyze the product by gas chromatography equipped with a hydrogen flame ionization indicator.
Die Tabelle IV zeigt das erzielte Bezirksverhältnis, ausgedrückt in Prozenten. Wie in der Tabelle gezeigt, erreicht die Gesamtheit jedes Bezirksverhältnisses nicht 1oo "/> wegen einiger Bestandteile, welche nicht identifiziert werden konnten.Table IV shows the area ratio achieved, expressed as a percentage. As shown in the table, the total of each district ratio does not reach 100 "/> because of some components which could not be identified.
0300H/07190300H / 0719
IVIV
\v\Substrate \ ^ o /> v
\ v \
5,4g
2,9g
o,o55g
o,o63g
o,o58g2.5g
5.4g
2.9g
o, o55g
o, o63g
o, o58g
COOHH00C (CH 2 ) n _ 2 -
COOH
CH(OH)COOHH00C (CH 2 ) n _ 3 -
CH (OH) COOH
CH2OHHOOC (CH) n-2 -
CH 2 OH
CH(OH)CH2OCH,H00C (CH 2 ) n _ 5 -
CH (OH) CH 2 OCH,
i Gesant
i
' n-Hexadecen-1
n-Octadecen-1
n-Tridecen-1
n-Pentadecen-1
n-Heptadecen-14 .n-dodecene-1
'n-hexadecene-1
n-octadecene-1
n-tridecene-1
n-pentadecene-1
n-heptadecene-1
CH(OH)CH2(OH)HOOC (CH 2 ) n _ 5 -
CH (OH) CH 2 (OH)
1o,3
1o,4
1o,28.8
1o, 3
1o, 4
1o, 2
4,9
4,7
4,6
5,o
5,o5.2
4.9
4.7
4.6
5, o
5, o
6,5
6,2
6,8
6,9
6,46.6
6.5
6.2
6.8
6.9
6.4
1o,8
1 0,0
8,1
6,3
9,99, o
1o, 8
1 0.0
8.1
6.3
9.9
89 ,-9
93,7 a
88,;^ (A
86,8
87,3I.
89, -9
93.7 a
88,; ^ (A
86.8
87.3
61,2
57,6
6o,3
58,5
55,86o, 3
61.2
57.6
6o, 3
58.5
55.8
Claims (1)
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648247A (en) * | 1990-03-19 | 1997-07-15 | Henkel Corporation | Method for increasing the omega-hydroxylase activity in candida tropicals |
| EP1148136A2 (en) | 1998-10-05 | 2001-10-24 | Cognis Corporation | Cytochrome P450 monooxygenase and NADPH cytochrome P450 oxidoreductase genes and proteins related to the omega hydroxylase complex of Candida tropicalis and methods relating thereto |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |