[go: up one dir, main page]

DE2754326A1 - Antibiotikum am-2282, verfahren zu seiner herstellung und arzneimittel - Google Patents

Antibiotikum am-2282, verfahren zu seiner herstellung und arzneimittel

Info

Publication number
DE2754326A1
DE2754326A1 DE19772754326 DE2754326A DE2754326A1 DE 2754326 A1 DE2754326 A1 DE 2754326A1 DE 19772754326 DE19772754326 DE 19772754326 DE 2754326 A DE2754326 A DE 2754326A DE 2754326 A1 DE2754326 A1 DE 2754326A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
antibiotic
agar
streptomyces
yellow
methanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19772754326
Other languages
English (en)
Other versions
DE2754326C2 (de
Inventor
Atsushi Hiramo
Yuzuru Iwai
Satoshi Omura
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kitasato Institute
Original Assignee
Kitasato Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kitasato Institute filed Critical Kitasato Institute
Publication of DE2754326A1 publication Critical patent/DE2754326A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2754326C2 publication Critical patent/DE2754326C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

n Antibiotikum AM-2282, Verfahren zu seiner Herstellung und Arzneimittel w
Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.
Das Antibiotikum AM-2282 zeigt antibiotische Wirkung gegenüber Hefen und Pilzen sowie pharmakologische Aktivität bei Hochdruck, Ödemen und Ulcus. Die Verbindung kann somit zur Bekämpfung verschiedener, durch Hefen und Pilze hervorgerufener Infektionen und zur Behandlung von Hochdruck eingesetzt werden. Die Eigenschaften des Antibiotikums AM-2282 sind verschieden von denen bekannter Antibiotika, wie Oxamicetin und
25 u-24 544.
Unter den verschiedenen, in Anspruch 1 aufgeführten Parametern wird das UV-Absorptionsspektrum in erster Linie zur Identifizierung der Verbindung verwendet. Verschiedene bekann te Antibiotika mit ähnlichen Eigenschaften, wie Oxamicetin (J. Antibiotics, Bd. 26 (1973), S. 752, 757 und 765) und U-24544 (Appl. Microbiol., Bd. 15 (1967), S. 1142) haben ein UV-Absorptionsmaximum bei 280 bis 310 nm. Das UV-Maximum von Oxamicetin bei 305 nm liegt im alkalischen pH-Bereich bei 322 nm und im sauren pH-Bereich bei 316 nm. Außer dem Maximum bei 322 nm hat Oxamicetin im alkalischen pH-Bereich ein weiteres Maximum bei 265 nm.
L 809824/0751
U-24544 hat ein Absorptionsmaximum bei 303 nm, das im alkalischen pH-Bereich bei 331 nm liegt.
Das IR-Absorptionsspektrum von AM-2282 ist verschieden von dem des Oxamicetins und U-24544. Daraus folgt, daß Oxamicetin und U-24544 nicht identisch mit dem Antibiotikum AM-2282 sind.
Die Summenformel C28H26N4°3 für das Antibiotikum AM-2282 ergibt sich aus dem gefundenen Wert für das Massenspektrum m/e = 466,199 (ber.: 466,200), ferner aus der Zahl von 25-27 Protonen im NMR-Sprektrum und der Zahl von 26-28 Kohlenstoffatomen im C-NMR-Spektrum sowie den Werten der Elementaranalyse.
Das NMR-Spektrum des Antibiotikums AM-2282 ist in der Zeitschrift The Journal of Antibiotics, Bd. 30 (1977), S. 276 bis 282 wiedergegeben.
In Tabelle I ist die minimale Hemmkonzentration (MHK) des Antibiotikums AM-2282 gegenüber verschiedenen Bakterien und Pilzen zusammengestellt. Die Werte wurden nach der Agar-Verdünnungsmethode bestimmt.
809824/0751
Tabelle I Testkeim
Staphylococcus aureus FDA 209P Bacillus subtilis PCI Sarcina lutea PCI 1001 Mycobacterium smegmatis ATCC Escherichia coli NIJH Pseudomonas aeruginosa P-3 Proteus vulgaris IFO 3167 Xanthomonas oryzae Candida albicans Candida pseudotropicalis Saccharomyces sake Aspergillus niger Aspergillus brevipus Aspergillus fumigatus Trichophyton rubrum Trichophyton mentagrophytes Cryptococcus neoformans Microsponam gipseum Sclerotinia cinerea Piricularia oryzae
MHK,
γ/ml		 Medium*
-200 N
ν 200 N
25 N
50 N
>200 N
>200 N
>200 N
200 N
6,25 P
3,12 P
3,12 P
25 P
3,12 P
12,5 P
6,25 P
25 P
50 P
>100 P
0,78 P
0,78 P
* N: Pepton 0,5 % Gew./Vol., Fleischextrakt 0,5 % Gew./Vol., Agar 1,2 % Gew./Vol., pH 7,0.
P: Kartoffelextrakt mit 1,0 % Gew./Vol. Glucose und 30 1/2 % Gew./Vol. Agar, pH 6,8.
Die Bestimmung der blutdrucksteigernden Wirkung wurde folgendermaßen durchgeführt:
35 Weiblichen Ratten mit einem Körpergewicht von 200 bis 250 g, die zur Erzeugung von spontanem Hochdruck unter bestimmten
809824/075
Bedingungen gezüchtet wurden, wird das Hydrochlorid von AM-2282 oral in den in Tabelle II angegebenen Dosen gegeben. Im Verlauf von 1, 3 und 5 Stunden nach Verabreichung der Verbindung wird in der Schwanzarterie der systolische Blutdruck bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt.
Tabelle II
Dosis,
mg/kg 		Ausmaß des Hochdrucks (50
nach 		3 Std. - 5 Std.
Hydrochlorid
von AM-2282 		[0,16
L0,16
.0,3
^,3
[0,63
10,63
l1,25 		1 Std. 2
13
23
13
24
23
25 		1
2
12
11
25
24
31
39
a-Methyl-DOPA 100 -2
2
6
17
13
17
15
18 		13 13
7
Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß bei einer Dosis von 0,3 mg/kg eine hypertensive Wirkung eintritt.
Weitere Versuche an Ratten haben ergeben, daß die Verbindung zur Bekämpfung von Ödemen und Ulcus geeignet ist. Die minimale wirksame Konzentration beträgt 1,0 mg/kg.
Die akute Toxizität von AM-2282 bei intraperitonealer Verabreichung an Mäuse, berechnet nach der Methode von Behrens und Kärber, beträgt 6,6 mg/kg.
Das Antibiotikum AM-2282 wird erfindungsgemäß durch aerobe Züchtung eines das Antibiotikum bildenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces und Isolierung des Antibiotikums aus der Gärmaische hergestellt. Im erfindungsgemäßen Verfahren kön-
809824/0751
nen nach üblichen Methoden erhaltene Mutanten und Varianten von das Antibiotikum bildenden Mikroorganismen der Gattung Streptomyces eingesetzt werden.
Vorzugsweise wird im erfindungsgemäßen Verfahren ein Mikroorganismus der Art Streptomyces staurosporeus eingesetzt. Ein bevorzugter Mikroorganismus ist Streptomyces sp. AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL 11184). Dieser Stamm hat folgende Eigenschaften:
1. Morphologische Eigenschaften:
Auf Malzagar-Medium bildet sich Substratmycel mit einfacher Verzweigung. Auf Malzagar-Medium, ausgenommen verschiedene synthetische Medien, bildet sich ein Luftmyce].
Sporenkettenmorphologie wird zur Sektion Re c&TTexI bliest Sporangien und begeiselte Sporen werden nicht beobachtet. Die Sporen sind zylindrisch oder länglich mit den Abmessungen 0,4 bis 0,6 um χ 1,8 bis 2,4 pm, mit glatter Oberfläche. Auf einigen organischen Agarmedien, wie Hefe-Malzagar, werden sclerotische Granulate gebildet, deren Durchmesser 10 bis 30 ^im beträgt.
2. Kulturcharakteristika in verschiedenen Medien:
In Tabelle III sind die Kulturcharakteristika nach 10-bis 14-tägiger Züchtung bei 27°C zusammengestellt. Die Farbwerte wurden durch Vergleich mit dem Color Harmony Manual (Container Corporation of America, Chicago, 1958) bestimmt.
809824/0751
co cn
ro cn
N> O
Nährmedium
Sucrose-Nitrat-Agar
Glucose-Nitrat-Agar
Glycerin-CaIciummalat-Agar
Glucos e-Asparagin-Agar (ISP)
Glycerin-Asparagin-Agar (ISP)
anorganische Salze-Stärke- Agar (ISP)
Tyrosin-Agar (ISP) Nähragar
Glucose-Pepton-Agar
Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar (ISP)
Wachsturn
Tabelle III Unterseite
gut,
melonengelb (3ga)
gut, gerunzelt, melonengelb (3ga)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, aprikosenfarben (4ga)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, bambusfarben
mäßig, gerunzelt, hellmaisgelb (2ea)
gut, bernsteinfarben (3pc)
hellmelonen· gelb (3ea)
rosa (3ca)
hellaprikosenfarben (4ea)
hellmelonengelb (3ea)
rosa bis hellgelb (3gc)
hellelfenbeinfarben (2ca)
maisgelb (2hb)
melonengelb (3ga)
melonengelb (3ia)
Luftmycel Bildung von
löslichem ———— Pigment
schlecht, samt- hellmelonen· artig, hellme- gelb (3ea) lonengelb (3ea)
mäßig, samtartig, rosa (3ca)
mäßig, samtartig, rosa (4ca)
mäßig, samtartig, weiß
kräftig, samt- - <8 artig, weiß bis rosa (3ca)
mäßig, samtartig, rosa, (3ca)
gering, samtartig, bambusfarben elfenbeinfarben (2fb) (2cb) bis rosa (3ca)
mäßig, samtartig, rosa, (4ca)
mäßig, samtartig, weiß bis perlfarben (3ba)
co cn
co O
cn
cn
Nährmedium
Hafermehl-Agar (ISP)
Wachstum
Tabelle III - Fortsetzung Unterseite
gut, hellmelonengelb, (3ea)
Pepton-Hefe-Extrakt-gut, elfenbein-Eisen-Agar (ISP) farben (2db)
QO O CO 00
Trypton-Hefeextraktbrühe (ISP)
Oberflächenwachstum
hellelfenbein
(2oa)
hellmelonengelb (3ea)
maisgelb (2hb)
Luftmycel
mäßig, samtartig,
weiß bis rosa
(3ca)
hellelfenbeinfarben (2ca)
Bildung von
löslichem
Pigment
gelb (2ga)
ISP: Vom International Streptomyces Project empfohlenes Nährmedium
1 3. Physiologische Eigenschaften:
1) Wachstumstemperaturbereich: 20 bis AO0C (Hefeextrakt-
Malzagar-Medium)
2) Bildung von melanoiden negativ (Trypton-Hefe-Pi gmenten: extrakt,
Pepton-Hefeextrakt-Iisen-
Agar, Tyrosin-Agar)
3) Gelatineverflüssigung: positiv
4) Stärkehydrolyse: positiv
5) Coagulierung von Nagermilch: vermutlich positiv
10 6) Peptonisierung von Mager« positiv milch:
7) Schwefelwasserstoffbildung: negativ
8) Bildung von salpetriger negativ Säure:
9) Hydrolyse von Cellulose: vermutlich positiv.
4. Verwertung von Kohlenstoffquellen im Pridham-Gottlief-Medium:
Verwertbar: D-Glucose, L-Arabinose, Sucrose, L-Inosit und D-Mannit;
Mehr oder weniger verwertbar: D-Fructose, D-Xylose, L-Rhamnose und Cellulose.
Die morphologischen und physiologischen Eigenschaften des Stammes AM-2282 lassen sich wie folgt zusammenfassen: Die Kultur ist von braunstichig-weißer bis hellgelbstichigoranger oder rotstichig-gelber Farbe.Die Farbe des Luftmycels ist Je nach den Agarmedien weiß, gelb oder rosa. Auf Pepton-Hefe-Eisen-Agar, Tyrosin-Agar und Trypton-HefebrUhe werden 3Q keine melanoiden Pigmente gebildet. Beim Vergleich dieser Eigenschaften mit denen der bekannten Stämme von Streptomyces, die in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. Auflage und in anderen Veröffentlichungen beschrieben sind, besteht Übereinstimmung mit folgenden fünf Arten: Streptomyces roseofulvus Pridham et al. 1958,
Streptomyces pluricolorescens Okami and Umezawa 1961,
809824/0751
Streptomyces moderatus Reusser I967, Streptomyces baarnensis Pridham et al. 1958 und Streptomyces tolypophorus Shibata et al. 1971. Diese Stämme unterscheiden sich jedoch vom Stamm AM-2282 hinsichtlich folgender morphologischer und physiolo-
5 giseher Eigenschaften.
Die Sporen von S. roseofulvus haben eine Größe von etwa 1 Mikron und in Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar, Hafermehl-Agar und anorganische Salze-Stärke-Agar wird ein hellgraustichiggelbes oder hellbraunsticfrg-graues Pigment gebildet. Dieser Stamm verwertet D-Xylose, D-Fructose und Rhamnose. Die Sporen von S. pluricolorescens sind ebenfalls kurz (etwa 1 Mikron) und die Unterseite der Kolonie ist von graustichiggelber oder gelbstichig-brauner Farbe auf Hefe-Malz-Agar, Hafermehl-Agar, anorganische Salze-Stärke-Agar und Glycerin-Asparagin-Agar. Das Luftmycel von S. moderatus ist auf Hefe-Malz-Agar, Hafermehl-Agar und anorganische Salze-Stärke-Agar graustichig-gelbrosa, und es bildet ein purpurfarbenes lösliches Pigment. S. baarnensis und S. tolypophorus haben ähnlieh wie Streptomyces sp. AM-2282 lange Sporen. S. baarnensis bildet jedoch ein spärliches Luftmycel, seine Farbe ist auf verschiedenen organischen Medien weiß bis grau und die Unterseite der Kolonie ist hellelfenbeinfarben. S. tolypophorus bildet spärliches Luftmycel von weißer Farbe, und die Unterseite der Kolonie bildet kein erkennbares Pigment auf anorganische Salze-Stärke-Agar und es bildet ein orange-gelbes Pigment auf Glycerin-Calciummalat-Agar. Der Stamm verwertet Fructose, Xylose und Rhamnose als Kohlenstoffquelle.
Aufgrund der vorstehend angegebenen Eigenschaften kann man schließen, daß der Stamm AM-2282 eine neue Art von Streptomyces ist, für die der Name Streptomyces staurosporeus nov. sp. vorgeschlagen wird. Der Stamm wurde als Streptomyces sp. AM-2282 beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Chiba-ken, Japan unter der Hinterlegungsbezeichnung FERM-P Nr. 3725 sowie bei der
L 809824/0751 -J
ARS-Kultursammlung in Peoria, V.St.A. unter der Hinterlegungsbezeichnung NRRL 11 184 hinterlegt.
Aus diesem Stamm können nach üblichen Methoden beispielsweise durch Bestrahlung mit UV-Licht, Röntgenstrahlen bzw. anderen Strahlen oder chemischen Mutagenen Mutanten hergestellt werden. Eine durch Bestrahlung mit UV-Licht hergestellte Mutante zeichnet sich durch besonders hohe Produktivität aus. Der Stamm AM-228 2 bildet das Antibiotikum AM-2282 sowohl intracellulär als auch extracellular.
Im erfindungsgemäßen Verfahren kann Jedes synthetische oder organische Nährmedium verwendet werden, das Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthält. Gegebenenfalls können dem Nährmedium noch andere übliche Nährstoffe zur ZUchtung von Mikroorganismen der Gattung Streptomyces einverleibt werden.
Als Kohlenstoffquelle kommen verschiedene Substanzen in Frage, die assimilierbaren Kohlenstoff enthalten. Bevorzugte Kohlenstoffquellen sind Glucose, Maltose, Lactose, Saccharose, Stärke, Dextrin, Glycerin und Melasse.
Als Stickstoffquellen kommen verschiedene Substanzen in Frage, die assimilierbaren Stickstoff enthalten. Bevorzugte Stickstoff quellen sind Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, Baumwollsamenkuchen, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Hefe, Caseinhydrolysat, Ammoniumsalze und Salze der Salpetersäure.
Beispiele für verwendbare anorganische Salze sind Phosphate und Sulfate von Calcium, Natrium, Eisen und Mangan.
Zur Produktion großer Mengen an Antibiotikum AM-2282 wird die ZUchtung vorzugsweise in einem flüssigen Nährboden durchgeführt, doch können auch feste Nährböden verwendet werden. Vorzugsweise hat das Einsaatmedium die gleiche Zusammenset-
809824/0751
zung wie das Hauptfermentationsmedium. Die Einsaatkultur wird vorzugsweise durch 24- bis 48stündige Züchtung unter aeroben Bedingungen bei Temperaturen von etwa 27° C unter Verwendung
eines Sakaguchi-Kolbens hergestellt. 5
Die Hauptfermentation wird vorzugsweise 50 bis 120 Stunden unter aeroben Bedingungen und unter Schütteln bei Temperaturen von 15 bis 400C, insbesondere 25 bis 300C, und bei einem pH-Wert von 6 bis 10, insbesondere 6 bis 7, durchgeführt. Nach beendeter Züchtung hat sich eine große Menge Antibiotikum AM-2282 in der Gärmaische und den Zellen angesammelt. Das Antibiotxkun wird in an sich bekannter Weise aus der Gärmaische und den Zellen isoliert. Beispielsweise werden die Zellen von der Flüssigkeit durch Filtration getrennt. Das Antibiotikum kann auch unmittelbar aus der Gärmaische isoliert werden, da es lipoidlöslich ist. Zu diesem Zweck wird die Gärmaische einer Lösungsmittelextraktion unterworfen.
Ein bevorzugtes Verfahren zur Isolierung und Reinigung des Antibiotikums aus der Gärmaische wird nachstehend erläutert.
Die Gärmaische wird mit wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von etwa 10 eingestellt und sodann mit einem organischen Lösungsmittel, wie n-Butylacetat, extrahiert. Der
erhaltene Extrakt wird unter vermindertem Druck stark eingeengt und sodann mit 0,1 η Salzsäure versetzt. Die wäßrige Phase wird hierauf mit wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Der erhaltene Extrakt wird unter vermindertem Druck zur Trockene ein-
gedampft. Sodann wird der Rückstand an Kieselgel mit einem Gemisch von Chloroform und Methanol (60 : 1 V/V) chromatographiert. Die das Antibiotikum enthaltenden Fraktionen, die eine positive Dragendorff-Reaktion zeigen, und deren Rf-Wert bei der DUnnschichtchromatographie an Kieselgel und mit dem
System Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) einen Wert von 0,55 ergeben, werden vereinigt und unter vermindertem Druck ein-
L 809824/0751 J
gedampft. Das erhaltene gelbliche Pulver wird aus einem Gemisch von Chloroform und Methanol (100 : 2 V/V) umkristallisiert. Das Antibiotikum AM-2282 kristallisiert in hellgelben Nadeln aus.
Die Bestimmung des Antibiotikums erfolgt durch den Präcipitationstest mit Dragendorff-Reagens und die Messung der Absorption bei 292 nm.
10 Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
In einen Sakaguchi-Kolben werden 500 ml eines Nährmediums (pH 7,0) mit 2,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, 0,5 Gewichtsproζent/Volumen Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Fleischextrakt, 0,3 Gewichtsprozent/Volumen Trockenhefe, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Natriumchlorid und 0,3 Gewichtsprozent/Volumen Calciumcarbonat vorgelegt. Das Nährmedium wird 15 Minuten bei 120°C sterilisiert. Sodann wird aus einer Schrägkultur mit einer Pletinuse Streptomyces sp. AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL 11 184) in das Nährmedium überimpft und 48 Stunden auf einer DrehschUttelmaschine bei 110 U/min und 27°C gezüchtet.
Die erhaltene Einsaatkultur wird in 20 Liter eines Produktionsmediums (pH 7,0), das 2,0 Gewichtsprozent/Volumen Stärke, 1,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, O,5 Gewichtsprozent/Volumen Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Hefeextrakt und 0,4 Gewichtsprozent/Volumen Calciumcarbonat enthält, in einen 30 Liter fassenden Fermenter überimpft. Die Fermentation wird 75 Stunden unter Schütteln (250 U/min) bei 270C und einer Belüftungsgeschwindigkeit von 10 Liter/min durchgeführt. Nach beendeter Züchtung wird die Gärmaische (17 Liter) mit wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt, mit 8 Liter n-Butylacetat versetzt und 30 bis 60 Minuten bei Raumtemperatur ausgeschüttelt. Sodann wird der n-Butylacetatex-
L 809824/0751 -1
trakt abgetrennt und in 2 Liter 1 η Salzsäure gegossen. Die wäßrige Phase wird abgetrennt, mit 28prozentiger wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und zweimal mit jeweils 1 Liter Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetatextrakt wird unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleiben etwa 1,3 g eines bräunlich gefärbten Rückstands, der mit 50 ml Diethylether zur Abtrennung fettartiger Verunreinigungen gewaschen wird. Die getrocknete Substanz wird sodann auf eine mit 12g Kieselgel 60 gefüllte Säule aufge-
10 setzt und mit 400 ml einen Gemisches von
Chloroform und Methanol (60 : 1 V/V) entwickelt. Das Eluat wird in Fraktionen von jeweils 2,5 ml unterteilt. Jede Fraktion wird mittels Dragendorff-Reagens und dünnschichtchromatographisch an 0,3 mm Kieselgel G mit dem Lösungsmittelsystem Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) untersucht. Die Fraktionen Nr. 61 bis 140 werden als aktive Fraktionen vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Es hinterbleiben 170 mg eines gelben Pulvers. Das Pulver wird in 7 ml eines Gemisches von Chloroform und Methanol (ge : 2 V/V) gelöst und 15 Stunden im Kühlschrank stehengelassen. Die Kristalle werden abfiltriert. Es werden 110 mg hellgelbe Nadeln in einer Reinheit von oberhalb 99 % erhalten. Diese Nadeln haben die vorstehend angegebenen Eigenschaften.
50 mg der erhaltenen hellgelben Nadeln werden in Chloroform gelöst. In die Chloroformlösung wird gasförmiger Chlorwasserstoff eingeleitet. Nach dem Aufarbeiten werden 42 mg des Antibiotikums AM-2282 als Hydrochlorid erhalten.
30 Beispiel 2
Gemäß Beispiel 1 wird eine Einsaatkultur von Streptomyces staurosporeus FERM-P Nr. 3725, NRRL 11 184 hergestellt. 600 ml der erhaltenen Einsaatkultur werden gemäß Beispiel 1 in 70 Liter eines Produktionsmediums in einen 100 Liter fassenden Fermenter überimpft. Die Fermentation wird 68 Stunden bei 270C unter Schütteln (200 U/min) und einer Belüftungsgeschwin-
809824/0751
digkeit von 30 Liter/min durchgeführt. Nach beendeter Fermentation wird die Gärmaische (63 Liter) mit 28prozentiger wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und mit 30 Liter n-Butylacetat extrahiert. Der n-Butylacetatextrakt wird abgetrennt und in 8 Liter 0,1 η Salzsäure gegossen. Die wäßrige Phase wird mit 28prozentiger wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und erneut zweimal mit jeweils 4 Liter Ethylacetat extrahiert.
Der εthylacetatextrakt wird unter vermindertem Druck eingedampft. Es werden 1,4 g eines bräunlichen Rückstandes erhalten, der mit 100 ml Diethylether zur Abtrennung fettartiger Verunreinigungen gewaschen wird. Die getrocknete Substanz wird gemäß Beispiel 1 chromatographisch gereinigt. Es werden Fraktionen von jeweils 15 ml aufgefangen. Die Fraktionen 41 bis 80 enthalten das Antibiotikum, und sie ergeben eine positive Dragendorff-Reaktion und bei der Dünnschichtchromatographie gemäß Beispiel 1 wird ein Rf-Wert von 0,55 erhalten.
Die aktiven Fraktionen werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft. Es werden 520 mg eines gelben Pulvers erhalten, das in einer geringen Menge Chloroform gelöst und 15 Stunden im Kühlschrank stehengelassen wird. Die entstandenen Kristalle werden abfiltriert. Es werden 370 mg des Antibiotikums AM-2282 in hellgelben Nadeln und mit einer Reinheit von mehr als 99 % erhalten. Das Produkt hat die gleichen Eigenschaften wie das in Beispiel 1 hergestellte Produkt.
809824/0751

Claims (7)

VOSSIUS · VOSSIUS · HILTL · TAUCHNER HEUNEMANN PATENTANWÄLTE SIEBERTSTRASSE 4- ■ 8OOO MÖNCHEN 86 . PHONE: (O89) 474O75 CABLE: BENZOLPATENT MÖNCHEN ■ TELEX 5-29453 VOPAT D 12 APR 1978 u.Z.: M 450 (Vo/kä) Case: MFP-1298 THE KITASATO INSTITUTE Tokyo, Japan 11 Antibiotikum AM-2282, Verfahren zu seiner Herstellung und Arzneimittel " Priorität: 11. 12. 1976, Japan, Nr. 148 299/76 15 Patentansprüche
1. Antibiotikum AM-2282, gekennzeichnet
20 durch folgende Parameter:
a) Elementaranalyse gef.: C 70,03 %, H 6,03 %, N 11,21 %;
b) Molekulargewicht, bestimmt durch Massenspektroskopie
25 (m/e): 466;
c) Summenforme1: C00H0^-N.0-;
d) spezifischer Drehwert: /ö/jp = +35,0 (c = 1,0 in Methanol);
e) Schmelzpunkt: kein scharfer Schmelzpunkt, die Verbindung färbt sich bei 208°C braun und verwandelt sich bei 260°C in ein teeriges Produkt;
809824/0751
1 f) UV-Absorptionsspektrum (Fig. 1):
^ma20Hnm (E1cm): 2h3 (337)' 267 (Schulter 552),
292 (1228), 322 (Schulter 537),
335 (313), 356 (220),372 (254).
Diese Maxima werden weder im alkalischen noch im sauren pH-Bereich verschoben;
g) IR-Absorptionsspektrum (Fig. 2) als Kaliumbromid-Preßling: 3450 cm" (Amin- und Hydroxy-Gruppen), 2960 cm" (Methyl und Methylengruppen), 1675 cm" (Carbonyl- und Doppelbindungs-Gruppen), 1588, 1460, 1356, 1322, 1285, 1230, 1123 und 752 cm" ;
-I5 h) Farbreaktionen: positive Dragendorff-, Molisch-,
Rydon-Smith- und Ninhydrin-Reaktion; negative Beilstein-, Eisen(lII)-chlorid-und Anilinphthalat-Reaktion;
i) Löslichkeit in verschiedenen Lösungsmitteln: löslich in Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid; schwer löslich in Chloroform, Ethylacetat, n-Butylacetat und Methanol; unlöslich in Petrolether, η-Hexan und Wasser;
k) Rf-Werte bei der DünnschichtChromatographie an Kieaelgel (Kieselgel G, 0,3 nun):
Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) 0,55 Benzol-Aceton (1:2 V/V) 0,43
n-Butanol-Essigsäure-Wasser 0,24
(8 : 1 : 0,5 V/V)
2. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man einen das Antibiotikum AM-2282 bildenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium züchtet und aus der Gärmaische das Antibiotikum isoliert.
809824/0751
Γ - 3 -
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mikroorganismus der Art Streptomyces staurosporeus einsetzt.
4. Verfahren nach Anspruch 3» dadurch gekennzeichnet, daß man als Mikroorganismus Streptomyces sp. AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL 11 184) oder eine daraus nach üblichen Verfahren gewonnene, das Antibiotikum bildende Mutante oder Variante einsetzt.
5. Verfahren nach Anspruch 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthaltendes Nährmedium einsetzt.
6. Verfahren nach Anspruch 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man die Züchtung 50 bis 120 Stunden bei Temperaturen von 25 bis 30°C und einem pH-Wert von 6 bis 7 durchführt.
7. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an dem Antibiotikum gemäß Anspruch 1.
809824/0751
DE2754326A 1976-12-11 1977-12-06 Antibiotikum AM 2282, seine Herstellung und Arzneimittel Expired DE2754326C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP14829976A JPS5373501A (en) 1976-12-11 1976-12-11 Novel antibiotics amm2282 and process for preparing same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2754326A1 true DE2754326A1 (de) 1978-06-15
DE2754326C2 DE2754326C2 (de) 1982-10-21

Family

ID=15449664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2754326A Expired DE2754326C2 (de) 1976-12-11 1977-12-06 Antibiotikum AM 2282, seine Herstellung und Arzneimittel

Country Status (6)

Country Link
US (1) US4107297A (de)
JP (1) JPS5373501A (de)
CH (1) CH634103A5 (de)
DE (1) DE2754326C2 (de)
FR (1) FR2373556A1 (de)
GB (1) GB1542995A (de)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4735939A (en) * 1987-02-27 1988-04-05 The Dow Chemical Company Insecticidal activity of staurosporine
US5093330A (en) * 1987-06-15 1992-03-03 Ciba-Geigy Corporation Staurosporine derivatives substituted at methylamino nitrogen
CZ280738B6 (cs) * 1988-02-10 1996-04-17 F. Hoffmann - La Roche And Co., Aktiengesellschaft Substituované pyrroly, jejich použití pro výrobu léčiv a léčiva na jejich bázi
USRE36736E (en) * 1989-02-06 2000-06-13 Hoffman-La Roche Inc. Substituted pyrroles
GB8904161D0 (en) * 1989-02-23 1989-04-05 Hoffmann La Roche Substituted pyrroles
US5015578A (en) * 1989-03-23 1991-05-14 Bristol-Myers Squibb Company BMY-41950 antitumor antibiotic
US5618809A (en) * 1989-12-14 1997-04-08 Schering Corporation Indolocarbazoles from saccharothrix aerocolonigenes copiosa subsp. nov SCC 1951 ATCC 53856
US4973552A (en) * 1990-02-20 1990-11-27 Bristol-Meyers Squibb Company Staurosporine fermentation process
US5292747A (en) * 1990-08-07 1994-03-08 Hoffman-La Roche Inc. Substituted pyrroles
WO1993007153A1 (en) * 1991-10-10 1993-04-15 Schering Corporation 4'-(n-substituted-n-oxide)staurosporine derivatives
WO1993018771A1 (fr) * 1992-03-24 1993-09-30 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha INHIBITEUR DE L'AGGLUTINATION PLAQUETTAIRE CONTENANT UN DERIVE DE STAUROSPORINE η-LACTAME
DE69331228D1 (en) * 1992-09-21 2002-01-10 Kyowa Hakko Kogyo Kk Heilmittel für thrombozytopenia
US6015665A (en) * 1995-02-13 2000-01-18 The Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US6060238A (en) * 1995-02-13 2000-05-09 The Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US7097972B1 (en) 1995-02-13 2006-08-29 Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US6747138B1 (en) 1995-04-03 2004-06-08 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for regulating Fas-associated apoptosis
DE19917990A1 (de) * 1999-04-20 2000-11-02 Florian Lang Arzneimittel enthaltend Hemmstoffe der zellvolumenregulierten humanen Kinase h-sgk
US6524577B1 (en) * 2000-09-27 2003-02-25 Agraquest, Inc. Strain of Streptomyces for controlling plant diseases
WO2004094645A1 (en) * 2003-04-22 2004-11-04 Lonza Ag Process for the recovery of staurosporine from a fermentation broth
JO2897B1 (en) * 2004-11-05 2015-09-15 نوفارتيس ايه جي Organic compounds
CN101580515B (zh) * 2008-05-16 2011-06-08 上海医药工业研究院 一种星形孢菌素提取纯化的方法
EP3592749A1 (de) 2017-03-06 2020-01-15 Teva Pharmaceutical Works Ltd. Feste formen von midostaurin

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3843784A (en) * 1970-12-24 1974-10-22 Lilly Co Eli Antibiotics a201a and a201b and process for the production thereof
JPS4710038U (de) * 1971-02-26 1972-10-06
BE795918A (fr) * 1972-02-29 1973-08-27 Lilly Co Eli Antibiotique a-25822 et procede de production

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICHTS-ERMITTELT *

Also Published As

Publication number Publication date
CH634103A5 (de) 1983-01-14
JPS5753076B2 (de) 1982-11-11
DE2754326C2 (de) 1982-10-21
JPS5373501A (en) 1978-06-30
FR2373556A1 (fr) 1978-07-07
GB1542995A (en) 1979-03-28
US4107297A (en) 1978-08-15
FR2373556B1 (de) 1980-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2754326C2 (de) Antibiotikum AM 2282, seine Herstellung und Arzneimittel
DE3783588T2 (de) Neue verbindungen dc-88a und dc-89a1 und deren herstellungsverfahren.
DE3887820T2 (de) Antibiotika, Benanomicine A und B und Dexylosylbenanomicin B, ihre Herstellung und Verwendung.
DE2537902C2 (de) Als Rifamycin P, Q, R und U bezeichnete Antibiotika und Verfahren zu deren Herstellung
DE2623227C2 (de) Antibiotikum Lucknomycin, Verfahren zu dessen Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel
DE2715255B2 (de) Anthracyclinglykoside MA 144-M1 und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
DE2839668C2 (de)
DE3048421C2 (de) Antibiotische Substanz, Verfahren zu deren Herstellung und antimykotisches Mittel, welches diese enthält
CH646432A5 (de) Beta-lactam-antibiotika.
DE2918711A1 (de) Macrolid-antibiotika, verfahren zu ihrer gewinnung und diese antibiotika enthaltende pharmazeutische praeparate
DD239611A5 (de) Verfahren zur herstellung neuer saframycin a-derivaten
DE3136675A1 (de) Neues peptid und dessen herstellung
DE3014434A1 (de) Antibiotikum, verfahren zu seiner herstellung und es enthaltendes arzneimittel
DE2654266C3 (de) Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von 5,10,11,1 la-Tetrahydro-9,1 ldihydroxy-e-methyl-Soxo-lH-pyrrolo [2,1-c] [1,4] benzodiazepin-2acrylamid
DE3407979C2 (de)
DE3139131C2 (de) Stubomycin-Antibiotikum und Verfahren zu seiner Herstellung
DE2645528C3 (de) Antibiotisch wirksame Pyrrole [2,1c] -1,4benzdiazepine
DE2444110A1 (de) Neues antibiotikum
DE1467883C3 (de) Verfahren zur Herstellung eines Antibiotikums
DE2408121A1 (de) Platomycin a und b, verfahren zu ihrer herstellung, arzneimittel und ihre verwendung als desinfektionsmittel
DE2818544A1 (de) Antibiotikum sf-1942, verfahren zu dessen herstellung und pharmazeutische zusammensetzung, die das antibiotikum sf-1942 enthaelt
DE2424707A1 (de) Antibiotikum nr. 1998, seine salze mit saeuren, verfahren zu seiner herstellung, mikroorganismen zur durchfuehrung des verfahrens und arzneimittel
DE1077380B (de) Herstellung des Antibiotikums Lemacidin
DE1492111C (de) Verfahren zur Herstellung von Poly oxm A und B
DE2944143C2 (de) Antibiotikum SF-2052, Verfahren zu dessen Herstellung und das Antibiotikum SF-2052 enthaltende antibakterielle Mittel

Legal Events

Date Code Title Description
OAP Request for examination filed
OD Request for examination
D2 Grant after examination
8328 Change in the person/name/address of the agent

Free format text: VOSSIUS, V., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. TAUCHNER, P., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. HEUNEMANN, D., DIPL.-PHYS. DR.RER.NAT., PAT.-ANWAELTE, 8000 MUENCHEN

8328 Change in the person/name/address of the agent

Free format text: TAUCHNER, P., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. HEUNEMANN, D., DIPL.-PHYS. DR.RER.NAT., PAT.-ANWAELTE, 8000 MUENCHEN