DE2502296A1

DE2502296A1 - Diaminocyclitol-derivate und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2502296A1
Application number: DE19752502296
Authority: DE
Inventors: Peter John L Daniels; John J Wright
Original assignee: Scherico Ltd
Current assignee: MSD International Holdings GmbH
Priority date: 1974-03-19
Filing date: 1975-01-21
Publication date: 1975-09-25
Also published as: FR2264553A1; IL46467A0; MY8100350A; FR2264553B1; HK7681A; CH612946A5; BG26400A3; IE40796B1; DE2502296C2; AR207582A1; GB1494129A; IL46467A; AU7747775A; IE40796L

Description

Patentanwälte

Dr.-'ng. Srfiönwoid- Dr.-Ing. Ih. Ateyrr-Or.-Ing. 'J'shold

"" F-J₁-; ijij)!. Cheni. Alek von Killer Oipi.-ihcm Lüfüo lieiiu-r ■ Oipl.-ing. Seiting 13. Jan. 1975 .

5 Köln 1, Deichmannhüus CG/gb

Sc/?er/co i/m/

Diaminocyclitol-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung

50983 9/0870 -~ ι ·»

Die vorliegende Erfindung betrifft halbsynthetische, antibakterielle Wirkstoffe vom Aminoglycosid-Aminocyclitol-Typ, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und Zwischenprodukte.

In der US-PS 3,780,018 ist ein Verfahren beschrieben, gemäss dem 1-[L-(-) -V'-Amino-cc-hydroxybutyryl] -gentamicin C₁ und 2'-[L-(-)-V*-Amino-a-hydroxybutyryl]-gentamicin CL hergestellt werden durch Umsetzung von Gentamicin CL mit einem aktiven Ester der L-(-) - V-Amino-a-hydroxybuttersäure, der eine Schutzgruppe enthält, und anschliessendes Entfernen der Schutzgruppe in an· sich bekannter Weise und Auftrennung der Reaktionsmischung durch Chromatographie. In der US-PS 3,796,698 ist ein Verfahren zur Herstellung von 1-[L- (-) -cT-Amino-a-hydroxybutyryl] -gentamicin C₂ und in der US-PS 3,796,699 ein Verfahren zur Herstellung von 1-[L-(-) -cT-Amino-cc-hydroxybutyryl] -gentamicin C_n

j.a

beschrieben.

Im Vergleich zu den jeweiligen Stammantibiotika, deren. Derivate sie bilden, weisen die neuen erfindungsgemässen antibakteriellen Wirkstoffe überraschende und unerwartete Eigenschaften auf. Im allgemeinen sind die neuen Verbindungen wirksam gegen Bakterien und/oder Protozoenstämme. Weiterhin sind sie wirksam gegen viele Bakterien, die gegenüber den Stammantibiotika im wesentlichen unempfindlich geworden sind.

Die Erfindung bezieht sich auf 1-N-substituierte Derivate der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B_, Gentamicin C. , Gentamicin C₁ , Gentamicin C₃, Gentamicin C„ , Gentamicin X₃, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum Jl-20B

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und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S.-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S_-4-Ämino-2-hyclroxybutyryl ist, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin Cw Gentamicin C, und Gentamicin C₃ der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl ist, und auf deren pharmazeutisch unnehmbare Säureadditionssalze.

Ein bevorzugte Gruppe von Aminoglykosiden aus der oben definierten Klasse umfasst 1-N-substituierte Derivate der 4_f6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyciitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin X₃' Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-4OD, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52 worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

Eine andere bevorzugte Gruppe von Verbindungen umfasst die 1-N-substituierten Derivate der 4,6-Di:-(aminoglycosyl)— 1,3-äiaminocyclitole Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin C., Gentamicin C. , Sisomicin, Verdamicin und Antibiotikum JI-2ÖB, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, mit der Massgabe, dass bei . Gentamicin C.. und Gentamicin C₁ der 1-N-Substituent S-S-Amino^-hydroxypropionyl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare: Säureadditionssalze. - ' ■-

Eine besonders bevorzugte Gruppe von Verbindungen umfasst die 1-N-substituierten Derivate der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-

1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Gentamicin B-, Sisomicin, und Verdamicin, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

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Innerhalb dieser Gruppe von Verbindungen sind die folgenden spezifisch genannten Verbindungen l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B, l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) gentamicin B, 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl) gentamicin B₁, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) sisomicin, 1-N-(S-3-Amino 2-hydroxypropionyl)verdamicin und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze bevorzugt.

Die Verbindungen 1-N-(S-4-Aminp-2-hydroxybutyryl)gentamicin B, l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin B, 1-N-(S- " 3-Ämino-2-hydroxypropionyl) sisomicin, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)verdamicin und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze sind besonders bevorzugt und in dieser Gruppe sind 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl) gentamicin B, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin B und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze am meisten bevorzugt.

Der Verbindungen dieser Erfindung werden durch die folgenden Formeln I, II und III definiert, worin X den Oben definierten l-N-Substituenfcian darstellt.

CH

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worin Y eine der folgenden Aminoglycosidgruppen darstellt:

CH₂NH₂

CH-

NH,

(in 1-N-X-Gentamicin. B)

OH

(in 1-N-X-(jentamicin B,)

OH

CH.

CH₃NH

(in 1-N-X-Gentamicin C.)

NH,

(in 1-N-X-Gentamicin

CH₂OH

(in 1-N-X-Gentamicin X_) CH₃NH₂

(in 1-N-X-Gentamicin -

CH,

NH,

-o

(in 1-N-X-Gentamiein

₀ )

ZB.

NH,

(in 1-N-X-Verdainicin)

509839/0 8

(in 1-N-X-Sisomicin)

250229S

(in 1-N-X-Antibibtiktin JI-20A)

CH.

NiL CH₂NHCH₃

HO

/ Antibiotikum

NH,

JI-20B)

(1-N-X-Antibiotikum G-52)

NH,

CH,

OH λ (1-N-X-Antibiotikum G-418)

H0\ j/

NH,

1-N-X-Antibiotikum 66-40D der folgenden Formel II

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"- 7 —

NH

NHX

.0 Κ OH

NH,

^Ho/3

II

OH

und 1-N-X-Gentaraicin A und 1-N-X-Antibiotikum 66-40B der folgenden Formel III

NH,

NHX

0 K OH

OH

III

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worin Y¹

CH₃OH

und Y¹

in 1-N-X-Gentamicin A

in 1-N-X-Antibiotikum 66-4OB

darstellt.

Die Stammantibiotika (darsgestellt durch obige Strukturformeln I, II und III, worin X Wasserstoff ist) sind alle in der Literatur beschrieben. Gentamicin C_ ist diesbezüglich eine Ausnahme und kann auf die folgende Art hergestellt werden:

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96 g Gentamieinbase (hergestellt aus dem nach der Vorgehensweise gemäß Beispiel k der US-PS 3,091,572 erhaltenen Sulfatsalz) werden in 400 ml der oberen Phase eines Methanol/ Chloroform/i?^ Ammoniumhydroxid (Volumverhältnis 1:2 : l) Lösungsmittelsystems gelöst. Je ein Zehntel dieser Lösung wird in die ersten iO Rohre eines 500 χ 80 ml Röhrengegenstroinextraktors eingebracht. Dann werden alle Rohre, einschließlich der ersten zehn, mit der unteren Phase des oben beschriebenen Lösungsmittelsystems aufgefüllt. Der Lösungsmittelvorratsbehälter wird so eingestellt, daß pro Austäusch 40 ml -der oberen Phase in das Rohr Nr. i abgegeben werden. Dann wird das Gerät auf 500 Austausche eingestellt. Wenn die AustauschVorgänge beendigt sind, wird jedes achte Rohr für Chromatographiezwecke (im Doppel) auf Schleicher und Schall Papier Nr. 589 unter Verwendung der unteren Phase des oben angegebenen Lösungsmittelsystems entnommen. Die Chromatogramme werden etwa 16 h entwickeln gelassen und dann die Papiere getrocknet. Eines der Papiere wird auf eine mit Staphylococcus aureus (A.T.C.C. 6538P) geimpfte Agarplatte aufgelegt, das Doppel wird mit der üblichen Ninhydrinlösung angesprüht und zur Entwicklung erhitzt. Die Agarplatte wird bei 37°C über Nacht ineubieren gelassen und die Lösung axis den Rohren, die das Material enthalten, welches dasselbe. V/anderungsverbal ten wie Gentamicin C^ aufweist, d.h. die Rohre 29O-36O, wird vereinigt,

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-ίο -

Die Rohre Nr. 290-360 werden durch frische Rohre ersetzt, die je 40 ml der unteren Phase und je 40 ml der oberen Phase enthalten. Das Gerät wird auf weitere 2800- Austauschvorgänge eingestellt und die oben angegebene ohromatographische Vorgehensweise wiederholt. Der Inhalt der Rohre i-i6 wird vereinigt und im Vakuum eingedampft, wobei 1,3 g Gentamicin Cp mit den folgenden Eigenschaften erhalten werden:

(a) Ein Molekulargewicht von 4β3, das durch Massenspektrometrie bestimmt wurde, was einer empirischen Formel von

(b) eine spezifische optische Drehung -[^ = + Ü4 i 5° (C 0,3%, H₂O) und

(c) einem magnetischen Protonenresonanzspektrum (pnir) wie folgt:

pmr(ppm) (D₂O): £ 0.99 DH, d, J=6.5Hz, CH-CH₃); 1.17

s, C-CH₃); 2Λ7' Dh, s, N-CH₃); 2.51 (ih, d, j=io.5Hz,

H-3")J 5-75 (IH, q, J=IO.5, 4ilz, H-2^fl); 4.00 (IH, d, J=12Hz, H~5"eq); 5.04 (IH, d, J=4Hz, H-I"); 5.15 (IH, d, J=J.5Hz, H-I¹)

S 0 9 8^:3 9 / 0 8 7 0

Eine Bestrahlung der sekundären Methylgruppe bei iO,99 ppm zeigt H-6¹ als Dublett (J=6,5 Hz) bei <*"2,81>ppm.

Die Antibiotika 66-4OB und 66-4OD werden gleichzeitig mit Sisomicin gebildet, welches das Hauptprodukt der in der GB-PS 1,274,518 beschriebenen Fermentation von Micromonospora inyoensis darstellt. Die Antibiotika 66-4OB und 66-4OD können aus dem Fermentationsmedium durch Anwendung besonderer chromatographischer Trennmethoden, wie sie in der BE-PS 811,370 beschrieben sind, getrennt werden.

Die im Vorliegenden als Gentamicin X₂ bezeichnete Substanz ist auch als Gentamicin X bekannt.

Die Erfindung bezieht sich auch auf wertvolle Zwischenprodukte. Diese Zwischenprodukte sind die 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-4OD und Sisomicin, worin die Aminogruppe in Stellung 6' geschützt ist und deren Säureadditionssalze. Typische Aminoschutzgruppen sind Trifluoracetyl und t-Butoxycarbonyl. Beispiele für solche Zwischenprodukte sind 6'-N-Trifluoracetyl-Gentamicin B, 6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum JI-20A, 6·-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-4OB, 6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-4OD und 6'-N-t-Butoxycarbonyl-Sisomicin.

Andere wertvolle Zwischenprodukte sind 6'-N-Trifluoracetyl-Gentamicin C. und Gentamicin C. mit Schutzgruppen in Stellung 2· oder in den Stellungen 2' und 3 und die Säureadditionssalze dieser Verbindungen. Beispiele sind 2'-N-Trifluoracetyl-Gentamicin C. und 2',3-Di-N-Trifluoracetyl-Gentamicin C₁.

In einem ihrer Verfahrensaspekte umfasst die vorliegende

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Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von 1-N-substituierten Derivaten der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A,. Gentamicin B, Gentamicin B.. , Gentamicin C₁, Gentamicin C, , Gentamicin C₀, Gentamicin C₀ , L Xa jL Za

Gentamicin X₀, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent mit X bezeichnet ist und S-3-^mino-2-hydro2iypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl bedeutet, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C₁, Gentamicin C. und Gentamicin C_ X die S-3-Amino-2-hydroxypropionylgruppe darstellt, und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass eines der oben genannten 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole, das ausser in 1-Stellung Aminoschutzgruppen aufweisen kann, mit einer Säure der Formel

HO-X¹ ,

in der X¹ die oben für X angegebene Bedeutung hat, wobei die Aminogruppe und/oder die Hydroxygruppe geschützt sein können, in Gegenwart eines Carbodiimides, beispielsweise Dicyclohexylcarbodiimid, oder mit einem reaktionsfähigen Derivat der Säure umgesetzt wird, dass.alle im Molekül vorhandenen Schutzgruppen entfernt werden und anschliessend das erhaltene Derivat als solches oder als ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz isoliert wird.

Im allgemeinen wird es bevorzugt, jene Ausgangsverbindungen, die eine 6'-CH₃-NH₂ Gruppe aufweisen, in Form ihrer 6'-N-geschützten Derivate einzusetzen. Beispiele von bevorzugten Schutzgruppen sind Trifluoracetyl und t-Butoxycarbonyl. Gentamicin C, wird vorteilhaft als das 2',3-Di-N-geschützte Derivat eingesetzt. Gentamicin A, Gentamicin B,, Gentamicin C₂, Gentamicin C₃ , Gentamicin X₀, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52 können

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in geschützter Form jedoch auch in ihrer freien Form der Reaktion unterworfen v/erden.

Gemäss einem anderen ihrer Verfahrensaspekte umfasst die vorliegende Erfindung ein erfinderisches Verfahren zur Herstellung von HST-substituierten Derivaten von 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1/3-diaminocyc lit ölen, worin der Substituent mit X bezeichnet wird und S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl bedeutet, und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen; welches dadurch gekennzeichnet ist, dass ein 4,6-Di—(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol, das durch Bildung eines Säureadditionssalzes teilweise neutralisiert ist, mit einer Säure der Formel

HO - X' ,

worin X' die oben für X angegebene Bedeutung hat, wobei jedoch die Aminogruppe und/oder die Hydroxygruppe geschützt sein können, in Gegenwart eines Carbodiimides, beispielsweise Dicyclohexylcarbodiimid, oder mit einem reaktiven Derivat der Säure umgesetzt wird, dass alle Schutzgruppen im Molekül entfernt werden und anschliessend das erhaltene Derivat als solches oder als ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz isoliert wird.

Der Ausdruck 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol, der in der Definition des erfinderischen Verfahrens Verwendung findet, umfasst Verbindungen, worin Aminoglycosid- Reste durch glycosidische Bindungen mit dem Aminocyclitol in den Stellungen 4 und 6 verbunden sind . Dieser Ausdurck umfasst daher Antibiotika wie die Gentamicine, Kanamycin, Tobramycin, Sisomicin, Antibiotikum G-418, Verdamicin, Antibiotika 66-4OB und 66-4OD, Antibiotika JI-2OA und JI-2OB, Antibiotikum G-52 und andere. Die folgende planare Formel soll den Ausdruck 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol weiter illustrieren:

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Aminoglycosid - O

worin A und B typische Substituenten in einem Aminocyclitol darstellen und die Wellenlinien alle möglichen stereochemischen Formen anzeigen. Aus der Formel geht auch hervor, dass die Aminoglycosid-Reste in den Stellungen 4 und 6 des Aminocyclitols aufscheinen.

Werwendet man beim erfindungsgemassen Verfahren 4,6-Di-(aminoglycosyl)-l/S-diaminocyclitole, die durch Bildung eines Säureaddxtionssalzes teilweise neutralisiert sind, so lässt sich eine spezifische Acylierung der Aminogruppe in 1-Stellung an Stelle einer wahllosen Acylierung erzielen.

Durch Protonierung der Aminogruppen wird derselbe Effekt wie durch die Gegenwart einer gewöhnlichen "chemischen" Schutzgruppe erzielt. Ueberraschend wurde gefunden, dass die Aminogruppe in Stellung 1 eines 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitols die letzte ist, die bei der Zugabe von Säure protoniert wird oder, falls ein Per- Säureadditxonssalz mit Base versetzt wird, die erste ist, die freigesetzt (deprotoniert) wird. Es können daher Schutzgruppen in Form von Protonen leicht in das Molekül eingeführt werden, indem die gewünschte Menge an Säure dem Aminoglycosid oder die gewünschte Menge Base dem Per- Säureadditxonssalz davon zugesetzt wird. Das erfinderische Verfahren nützt diese Gegebenheiten aus und, stellt daher eine vorteilhafte Methode zur Herstellung von 1-N-Acyl-Derivaten von 4,6-Di-(amino-

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glycosyl)-1,3-diaminocyclitolen dar, bei der diese teilweise neutralisierten und daher teilweise geschützten Ausgangsverbindungen eingesetzt werden.

Der hier verwendete Ausdruck "durch Bildung eines Säureadditionssalzes teilweise neutralisiert" bedeutet, dass jedes Mol 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol weniger als die stöchiometrische Zahl von Molen an Säure, die zur Bildung des Per-Säureadditionssalzes notwendig ist, assoziiert hat. Weiterhin bedeutet dieser Ausdruck, dass jedes Mol 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol wenigstens ein Mol Säure assoziiert hat.

Beispielsweise benötigt ein Aequivalent Gentamicin C₁ mit fünf Aminogruppen fünf Aequivalente Säure zur Bildung des Per- Säureadditionssalzes. Beim erfinderischen Verfahren wird ein Säureadditionssalz von Gentamicin C₁ eingesetzt, das weniger als fünf und wenigstens ein Aequivalent Säure assoziiert hat. (z.B. 4.5, 4.0, 3.5, 3.0, 2.5, 2.0, 1.5 oder 1.0 Aequivalent Säure).

In einer bevorzugten Ausführungsform dieses Verfahrens ist die Ausgangsverbindung durch (n-1) Aequivalente Säure neutralisiert, wobei η die Zahl der Aminogruppen im Molekül bedeutet. Es sind daher (n-1) Aminogruppen durch Bildung eines Säureadditionssalzes neutralisiert. Es ist jedoch selbstverständlich, dass das Verfahren auch an teilweise neutralisierten Ausgangsverbindungen durchgeführt werden kann, worin mehr oder weniger als (n-1) Aequivalente Säure zur Salzbildung vorhanden sind. Das Verfahren kann auch durch den pH-Bereich definiert werden, wobei der Bereich von 5.0 bis 9.0, vorzugsweise 5.0 bis 8.0, günstig ist. Ein stark bevorzugter pH-Bereich ist durch 6.5 und 7.5 begrenzt und der am meisten bevorzugte Bereich durch 6.8 als untere und 7.2 als obere Grenze definiert.

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Der Ausdruck

"Säureadditionssalz" umfaßt solche Salze, die zwischen den basischen Antibiotikum und einer Säure gebildet werden, ohne Rücksicht darauf, ob man die Säure als anorganische-oder organische Säure bezeichnen kann. Als Beispiele für derartige Säuren werden genannt: Schwefelsäure, Salzsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Essigsäure, Propionsäure, Bernsteinsäure, Oxalsäure, Cyclopropylcarbonsäure, Triiiiethylessigsäure, Maleinsäure, Benzoesäure, Phenylessigsäure und Trifluoressigsäure.

Wenn als Ausgangsmaterial ein Säureadditionssalz eingesetzt werden soll, in dem (n-l) Aminogruppen protonisiert sind, so läßt sich diese Verbindung vorteilhaft in situ herstellen, wobei man ein "per"-Säureadditionssalz mit 1 Äquivalent einer starken Base, beispielsweise Triäthylamin, umsetzt.

Es ist auch möglich, teilweise neutralisierte Ausgangsverbindungen zu verwenden, die ausserdem noch chemische Schutzgruppen aufweisen. Dies ist jedoch im allgemeinen nicht notwendig.

Die bei den erfindungsgemässen Verfahren eingesetzten Acylierungsmittel werden vorzugsweise in Form aktiver Derivate, z.B. Ester, Anhydride, Azide oder Imidazolderivate, verwendet. Weiterhin ist bevorzugt die Aminogruppe im Hydroxyaminoacylierungsmittel blockiert. Ist beispielsweise das gewünschte Hydroxyaminoacylprodukt Isoserinyl, so hat das Acylierungsmittel die Form

Lg ö CH—-CH₀

I I

OH NH-Bg

worin die Carboxylfunktion vorzugsweise in Form eines aktiven Esters (austretende Gruppe Lg) vorliegt, und die Amino-

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gruppe vorzugsweise durch eine Schutzgruppe (Bg), wie die Benzyloxycarbonylgruppe, die einfach durch Hydrogenolyse entfernbar ist, oder die t-Butoxycarbonylgruppe bzw. Trifluoracetylgruppe blockiert ist, wobei die t-Butoxycarbonylgruppe günstig mit Säure und die Trifluoracetylgruppe günstig mit einer Base entfernbar ist.

Wird die Herstellung von pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen der erfittäungsgemäßen neuen Verbinclungen gewünscht, können diese Salze durch Einstellen einer wässerigen Lösung der betreffenden Verbindung auf einen pH-Wert von h,0 und anschließende Lyophilisicrung hergestellt werden. Die erhaltenen Salze stellen die funktioneilen Äquivalente der freien Stickstoffbase dar. Als Beispiele für Säuren, die zur Salzbildung verwendet werden könneu, werden Schwefelsäure, Salzsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Essigsäure, Propionsäure, Bernsteinsäure, Oxalsäure und Maleinsäure genannt.

Die Ausdrücke "Blockierungsgruppe" oder "Schutzgruppe" stehen in der vorliegenden Beschreibung für Gruppen, die die blockierten oder geschützten Aminogruppen gegenüber einer nachfolgenden gewünschten chemischen Behandlung inert inachen, aber welche am Ende des durchgeführten Reaktionsablaufes leicht entfernt werden können, ohne die gewünschte N-Aminohydroxyacylgruppe zu spalten.

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Aminoschutzgruppen sind allgemein bekannt. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung stellen jedoch die Gruppen: Trifluoracetyl-, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl-, t-Butoxycarbonyl-, Benzyloxycarbonyl- und 4-Methoxy-benzyloxycarbonyl- bevorzugte

t Gruppen dar. Insbensondere werden Trifluoracetyl-, t-Bütoxy-

carbonyl- und Benzyloxycarbonylgruppen bevorzugt.

Beim Blockierungsvorgang wird die Schutzgruppe gewöhnlich in Form eines sauren Imidazolderivates, eines sauren Azids oder eines aktiven Esters wie z.B. Aethylthxoltrifluoracetat, t-Butoxycarbonylazid, N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid oder p-Nitrophenyltrichloräthylcarbonat eingesetzt. So können die Blockierungsgruppen als abgeleitet von einer Verbindung BgLg beschrieben werden, worin Bg die Blockierungsgruppe bedeutet, z.B. der saure Bestandteil eines aktiven Esters, und worin Lg die Austrittsgruppe wie z.B. das Imidazol bedeutet. Daher bezieht sich einer der Verfahrensaspekte der vorliegenden Erfindung auf ein Verfahren zur Herstellung der folgenden 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole: Gentamicin B, Sisomicin, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-4OD und Antibiotikum JI-2OA, in denen die Aminogruppe in 6'-Stellung eine Schutzgruppe trägt, und der Säureadditionssalze dieser Verbindungen, wobei dieses Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, dass eines der oben genannten 4,6-Di— (aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole mit einer Verbindung der Formel BgLg behandelt wird, wobei Bg die Blockierungsgruppe wird und Lg die Austrittsgruppe ist, und dass die so erhaltene Verbindung als solche oder als Säureadditionssalz isoliert wird. Bevorzugt werden äquimolare Mengen der Keaktanden eingesetzt und Bg stellt Trifluoracetyl oder t-Butoxycarbonyl dar.

Weiterhin betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von 6'-N-Trifluoracetyl-gentamicin C₁ und dessen Säure-

J.a

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additionssalzen, das dadurch gekennzeichnet ist, dass Gentamicin C. mit einer Verbindung CF₃CO-Lg umgesetzt wird, worin Lg eine Austrittsgruppe wie z.B. die -SC₃Hj--Gruppe bedeutet, und dass die so erhaltene Verbindung als solche oder als Saureaddxtionssalz isoliert wird. Bevorzugt werden äquimolare Mengen an Reaktanden verwendet.

Die Erfindung umfasst auch ein Verfahren zur Herstellung von 2'-N-geschütztem oder 2' ,3-Di-N-geschütztem Gentamicin C^ und den Säureadditionssalzen davon, das dadurch gekennzeichnet ist, dass Gentamicin C. entweder mit ca. einem oder ca. zwei Moläquivalenten einer Verbindung der Formel BgLg, die wie oben definiert ist, umgesetzt wird, und dass die so erhaltene Verbindung als solche oder als Säureadditions- salz isoliert wird. In der Verbindung BgLg bedeutet Bg vorzugsweise Trifluoracetyl.

Die folgenden Beispiele illustrieren die Erfindung:

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Beispiel 1: l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl) sisomicin: A. S-4-Trifluoracetamido-2-hydroxybuttersäure:

5 g S-ⁱt-BenzyloxycarboDylamino-2~hydroxybuttersäure werden in einer Mischung von 80 ml Dioxan und 20"ml Wasser aufgelöst. Dann werden 200 mg 30$iges Palladiumauf-Kohle zugefügt und bei Raumtemperatur und 3»4 at Wasserstoffdruclc 3 h lang hydriert. Der Katalysator wird durch Abfiltrieren entfernt und das Filtrat im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand wird im Hochvakuum 72 h lang getrocknet. Der getrocknete Rückstand wird in 30 ml kaltem Trifluoressigsäureanhydrid unter Rühren gelöst. Die Lösung wird 3 h bei Zimmertemperatur gerührt und dann im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand,wird mit Benzol behandelt und man erhält einen grauen Feststoff, der durch Filtrieren abgetrennt, mit Benzol gewaschen und getrocknet wird, wobei die S-4-Trifluoracetamido-2-hydroxybuttersäure erhalten wird.

B. N-(S-4-Trifluoracetamido-2-hydroxybutyryloxy)succinimid:

20 Mole der gemäß Verfahrensstufe A erhaltenen S-'i-Trifluoracetamido-2-hydroxybuttersäure werden in 50 ml Athylacetat gelöst, 2,3i g N-Hydroxysuccinimid unter Rühren zugegeben und die erhaltene Lösung in einem Eisbad gekühlt. Dann werden 4,3 g Dicyclohexylcarbodiimid der Lösung zugesetzt und die Rcaktionsinischung 3 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Es wird abgefiltert, um den Niederschlag zu entfernen und das Piltrat zur Trockene eingedampft, wobei das

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N-(S-'i-Trif luoracetainido~2-hydroxybutyr-yloxy) succiniraid erhalten wird, das dann im Hochvakuum getrocknet und im nachfolgenden Verfahrensschritt D eingesetzt wird.

C. ö'-N-Trifluoracetylsisomicin: .

20 g Sisomicin werden in 1,2 1 wasserfreiem Methanol gelöst und tropfenweise eine Lösung von 6 ml Äthylthioltrifluoracetat in 60 ml Methanol innerhalb von 3 h unter Rühren zugegeben. Die Reaktion wird IS h lang bei Raumtemperatur ablaufen gelassen und dann das Lösungsmittel im Vakuum entfernt, wobei ein Rückstand von 23,8 g eines Produktes mit etwa 95%iger Reinheit und den folgenden physicochemischen Eigenschaften erhalten wird;

Massenspektroskopische Daten: m/e 543 M * andere deutliche Peaks bei m/e 413, 395, 385, 362, 223 und 126. NMR (60 MHz, D₂) £ 5,37 Dublett J=2 Hz, H-i'; 5,i2 -Dublett, J= 4 Hz, H-i»,· 4,96 breites Singulett, H-4'j 2,57, Singulett, N-CH-'; i,26 Singulett, C-GH,

D. i-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)sisomicin:

614 mg (1,5 mMole) 6'-N-Trifluoracetylsisomicin werden in 12 ml 50#igem wässerigem Methanol gelöst und tropfenweise unter Rühren eine Lösung von i,9uMolen des im Verfahrensschritt B erhaltenen N-(S-4-Trifluoracetainido-2~hydroxy~ butyryloxy)succinimids in 3 ml Dimethylformamid zugesetzt*

50 98 3 9/087 0

2502298

Die erhaltene Mischung wird bei Raumtemperatur 18 h lang gerührt und sodann im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand-wird in 10 ml konzentriertem Ammoniumhydroxid aufgelöst und 2 h lang abstehen gelassen (um die Trifluoracetylgruppen zu entfernen). Das Lösungsmittel wird abgedampft und man erhält das i-N-(S-'i~Amino-2~hydroxybutyryl)sisomicin als Rückstand. Der Rückstand wird auf einer Silicagelsäule chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform/ Methanol/Ammoniumhydroxid (2 : 1 : l) Lösungsmittelsystems als Eluierungsmittel angewendet wird. Die das herzustellende Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft, der in Wasser gelöst und lyophilisiert wird, wobei ein amorpher weißer Feststoff erhalten wird.

Vie in Beispiel IC beschrieben, wird jedes der folgenden Antibiotika mit Äthylthioltrifluoracetat in Methanol behandelt:

Gentamicin C.
Gentamicin B
Antibiotikum JI-20A
Antibiotikum 66-Ί0Β
Antibiotikum 66->i0D

Die erhaltenen Produkte werden wie in Beispiel IC iso-

509839/0870 ---

2502298

liert, wobei die folgenden Verbindungen,erhalten werden:

Ö'-N-Trifluoraeetylgentamicin C_la, Ö'-N-Trifluoracetylgentamicin B, 6^f-N-Trifluoracetyl-Antibiotikuin JI-20A, 6«-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-40B, 6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-4tOD.

Werden die genannten G'-N-Trifluoracetyl-Zwischenprodukte der Verfahrensweise von Beispiel ID unterworfen, so erhält man die folgenden Produkte:

l-N-(S-^Ji-Amino-2-hydroxybutyryl)gentaniicin B, i-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum JI-20A, l-N-(S-*t-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum 66-^OB und l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum 66-40D,

Wird an Stelle der S-4-Benzyloxycarbonylamino-2~hydroxybuttersäure eine äquivalente Menge der S-3-Benzyloxycarbonyl—

amino-2-hydroxypropionsäure eingesetzt und gemäß Beispiel 1 vorgegangen, so erhält man in analoger Weise die folgenden Verbindungen:

l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) sisomicin, C^l_n + 139° (C_,0.3 in Wasser) Elementaranalyse berechnet C^-EL-O-EL. · 1/2 H₂CO₃; C=47.74; H=7.66; N=14.85; gefunden C=47.39; H=7.14; N=15.16 Pmr. 100 MHz D₂Oo^l.22 (S), C-Me,</*2.60 (S) N-Me 4.22 (Q), J=4Hz, 7.5Hz; 5.09 (d) , H₁,,", J_{llt 2}„=4.O,Hz; c/*5.34 (d) , H₁,, J₁, ₂,=2Hz .' .

509a39/0870

1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C. , Pmr 100 MHz, D₂O:cTi.22 C-Me; 2.59 N-Me; [α]^^δ + 115.4° (C,0.e in Wasser); 5.09 H-I", J₁₁₁ _„=4Hz, 5.17 H-I', J₁, _ol=3.5Hz

i. , Δ - X , λ

Elementaranalyse berechnet Cp₇H₄₄OqN₆-H₅O-CO-; C=45.01; H=7139; N=13.7O; gefunden C=44.98; H=7.81; N=13.68% 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin B, Pmr 100 MHz, D₃O + DCl₅CZ⁷LlS C_--Me (S); 2.77 N-Me (S); ^4.35 (Q), J=4.5, 8.0; H-I',^5.01 (d) , J₁, _o,=4.0 Hz; H-I", 5.43 (d) , J₁H _oi,=3.5Hz

1 -N- (S-3 -Amino-2 -hydroxypropionyl) Antibiotikum JI-20A, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum 66-4OB und/ 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum 66-40D.

Beispiel2 : i-N-(S-^zt~Araino-2-hydroxybutyryl)sisomicin:

1,6 g des wie in Beispiel 1, Verfahrensstufe C, beschrieben hergestellten 6^l~iJ-Trifluoracetyl-sisoraicins werden in einer Mischung aus 10 ml Wasser und 5 ml Methanol gelöst. Es wird eine Lösung von 3 mMolen N-(S-ⁱi-Phthaliniido-2-hydroxybutyryloxy) succiniiaid in 3 iul Dimethylformamid zugesetzt. Die Mischung wird bei Raumtemperatur· 3 h lang gerührt. Anschließend wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt, der erhaltene Rückstand

5098 3 9/08 7 0

in 15 ml Äthanol gelöst und 0,3 g Hydrazinhydrat z-*"»-,£ ^e ""^ setzt. Die Lösung wird 3 h lang am Rückfluß erhitzt und anschließend im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand wird auf 50 g Silicagel chroinatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform/Methanol/ konzentriertes Ammoniumhydroxid (2:1: l) Lösungsmittelsystems als Eluierungsmittel verwendet wird. Die einzelnen Fraktionen werden mittels Dünnschichtchromatographie überwacht und die die reine Hauptkomponente, die eine kleinere

enthaltenden Fraktionen Beweglichkeit als das Sisomicin aufweist, /vereinigt. Es werden 250 mg i-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)sisomicin erhalten« - ·

Beispiel 3.· i-N~(s-*i-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B: A. o'-N-t-Butoxycarbonylgentamicin B:

1 g Gentamicin B werden in 30 ml 50%igein wässerigem Methanol gelöst'und die Lösung auf 5°C abgekühlt. Dann werden 0,297 g t-Butoxycarbonylazid tropfenweise unter Rühren zugesetzt, worauf 0,186 ml Triäthylamin zugesetzt werden und die erhaltene Lösung 18 h lang weitergerührt wird. Die Reaktionsmischung wird im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft und der Rückstand auf 100 g Silicagel chromato-

5 098 39/0870

graphiert, wobei die uutere Phase eines Chloroform/ Methanol/konzentriertes Annnoniumhydroxid (2 ; 1 : l) Lösungsmittelsystems als Eluierungsmittel verwendet wird. Es werden jeweils 2 ml Fraktionen abgenommen und das aus der Säule austretende Eluat mittels Dünnschichtchromatographie überwacht« Die das gleiche Material enthaltenden Fraktionen 180 - 230 werden vereinigt und eingedampft, wobei 0,830 g 6'-N-t-Butoxycarbonylgentamicin B

mit den folgenden physikalischen Kenndaten erhalten werden: Pmr (60 MHz,D₂O)cTl.21 (3H,s, C-CH₃), 1.42 (9H,s,C(CH₃)₃) ,

^IT T

2.53 (3H,s,N-CH₃) , 5.2 (IH, d, J^ITöHz, H-I") 5.23 TlH/ d, J=3.0 Hz, H-I') PPM; Elementaranalyse berechnet für C-^H W₁O CO .H₀O; 0-45.57. h=7.51; N=8.69%? gefunden C=46.8O; H=7.82; N=8.54% [a]^ + 124 (C=I in Methanol)

B, l-N-(S-^-Amino-2-hydroxybutyryl)-6'-N-t-butoxycarbonylgentamicin B:

0,582 g o'-N-t-Butoxycarbonylgentamicin B werden in 25 ml Methanol/Wasser (l : 3) gelöst. Dann wird tropfenweise unter Rühren eine Lösung von 0,334 g N-(S-4-Carbobenzyloxyaraino-2-hydroxybutyryloxy)succinimid in 5 ml Dimethylformamid zugesetzt. Die Reaktionsaischung wird bei 5⁰C 5 h lang gerührt und dann im Vakuum zu'r,Trockene gedampft. Der Rückstand wird auf 60 g Silicagel chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform/Methanol/Animoniumhydroxid (2:1:1) Lösungsmittelsystenis als Eluierungs-*

509839/0870

mittel verwendet wird. Es werden jeweils 3 nil Fraktionen abgenommen und deren Gehalt durch Dünnschichtchroraatographie überwacht. Die Fraktionen l60 - 235 werden vereinigt und zu einem Rückstand von 0,280 g eingedampft, der in der Dünnschichtchromatographie als eine Zone wandert. Der Rückstand wird in 8 ml Methanol und 10 ml Wasser aufgelöst und bei 3»? at Wasserstoffdruck über 60 ing eines 5% Palladium-auf-IIolzkohle-Katalysatoxshydriert. Der Katalysator wird durch Filtrieren abgetrennt, das Filtrat zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft und der Rückstand auf 20 g Silicagel chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform/Methanol/Ararnonimnhydroxid (l : i j i) Lösungsraittelsystems als Eluierungsmittel verwendet wird. Die das l-N-(S-^-Amino-2~hydroxybutyryl)—6'— N—t-butoxycarbonylgentatnicin B enthaltenden 2 ml Fraktionen 79 - 127 werden vereinigt, wobei man 86 mg der genannten Substanz erhält. Es werden folgende Kenndaten bestimmt:

, s, C-^H₃V, 1Λ3 ( J3H, s> C-(CIl₃ )₃), 2.51

(3H, s, N-CHc), 5.03 (IH, d, J=l· H«, H^O, 5-25 (IH,. d_, J=5-5 Hte, H-I¹) PPM.

C. l-N"-(S-^-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B:

Das gemäß Verfahrensstufe B erhaltene l~N-(S-4-Anjino-2~ hydroxybutyryl)-6^l-N-t~butoxycarbonylgentamicin B wird in 0,3 dl Trifluoressigsäure aufgelöst und nach 5 min 30 ml Äthyläther zugesetzt. Das Triflu.oracetatsalz der

5 098 3 9/087 0

obigen Verbindung fällt als Niederschlag aus und wird durch Filtrieren abgetrennt. Der Niederschlag wird in Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule aus basischem Ionenaustauscherharz in der Hydroxylform geschickt, wobei das Säureadditionssalz in die freie Base umgewandelt wird. Das Säuleneluat wird lyophilisiert, wobei das i-N-(S~*i-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B als weißer amorpher Feststoff in einer Ausbeute von 72 mg erhalten

Pmr D₂O 100 MHz:<A.14 C.-methyl (S), 2.45 (S) N-methyl, 5.04 (d) H-I", J₁₁₁ ,„=4.0 Hzs 5.30 (d) , H-I¹, J₁, _o,=3.5Hz.

Werden bei diese Vorgehensweise äquivalente Mengen andere Aminoglycosidaminocyclitol Antibiotika eingesetzt, wie z.B. Gentamicin C, oder Antibiotikum Ji-2OA, so können die folgenden Verbindungen hergestellt werden: ö'-N-t-Butoxycarbonylgentamicin C₁ , sowie 6'-N-t-Butoxycarbonyl-Antibiotikum JI-20A.

Werden diese Verbindungen der Vorgehensweise nach Verfahrensstufen B und C unterworfen, kann 1-N-(S-4-Amino 2-hydroxybutyryl)-Antibiotikum JI-20A hergestellt werden.

Wird bei der obigen Vorgehensweise an Stelle des N-(S-4-Carbobenzyloxyamino-2-hydroxybutyryloxy) succinimid eine äquivalente Menge des N-(S-3-Carbobenzyloxyamino-2-hydroxypropionyloxy) succinimid eingesetzt, die-6'-N-t-Butoxycarbonyl-Antibiotika damit umgesetzt und die dabei erhaltenen Produkte gemäss der Verfahrensweise nach Stufe C weiterbehandelt, so werden die folgenden Produkte erhalten:

1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin B, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C₁ und

X ei

1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum JI-20A.

509839/0 870

"25-02*96.

Beispiel 4 ; i-N-(S-3-Amino-ß-hydroxypropionyl)gentaraicin C_±

A. i-N~(s~3-Carbobenzyloxyatuino-2-hydroxypropionyl)~2^l,3-di· N-trifluoräcetylgentaraicin C₁:

0.84 g 2^f ,^-di-N-Trifltioracetylgentamicin C.

werden in 40 ml Tetrahydrofuran gelöst und eine Lösung von 1,19 g N-(S~3-Carbobenzyloxyaraino-2-hydroxypropionyloxy)succiniinid in 2k ml Tetrahydrofuran tropfenweise unter Rühren' zugesetzt. Die ReaktionsDJischung wird 2^li h lang gerührt und anschließend zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand wird auf Silicagel chroniatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroforra/Methanol/konzentriertes Animoniumhydroxid/Wasser.(Volumsverhältnis 2 : 1 : 0,2 : 0,8) Lösungstnittelsysteiiis als Eluierungsraittcl ver-

509839/0870

wendet wird. Das Chrotnatogramni wird über Dünnschichtchromatographie überwacht und gleiche Fraktionen vereinigt, wobei das Ilauptprodukt der Reaktion, das 1-N-(S 3-Carbobenzyloxyamino-2-hydroxypropionyl)-2·,3-di-N-trifluoracetylgentamicin C, mit einem Schmelzpunkt von 125 - 13i°C und einer spezifischen Drehung [oO_D = +93 (CII-OH) erhalten wird. "

Elementaranalyse bezogen auf das Dihydrat: in % C H, N

berechnet:	47	ΛΊ .	6,	20	9,	23
gefunden:	47	,85	6,	67	9,	08

B. i-N-(S-3-Carbobenzyloxyamino-2-hydroxypropionyl)gentamicin

0,55 g des in Stufe A erhaltenen i-N^T-(S-3-Carbobenzyloxyamino-2-hydroxypropionyl)-2',3-di-N-trifluoracetylgentamicin C^ werden in 55 ml Methanol gelöst und 25 ml konzentriertes Ammoniumhydroxid unter Rühren zugesetzt. Es wird 3 Tage lang gerührt, wonach ein Dünnschichtchromatogramm auf Silicagelplatten, wobei die untere Phase eines Chloroform/Methanol/konzentriertes Ammoniurahydroxld (l : i : i) 'Lösungsmittelsystems als Entwickler verwendet wird, die im wesentlichen vollständige Abspaltung der Trifluoraeetylschulzgruppen anzeigt. Die Lösung wird im Vakuum zur Trockene gedampft, wobei 0,2 g . i-N~(S-3-Carbobenzyl-

509839/08 70

oxyamino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C^ mit einem Schmelzpunkt von 109 - 112⁰C und einer spezifischen Drehung von [a]_D = +73° (^Π2°) ehalten werden.

C. l~N-(S-3-Amino-2-hydroxypropiouyl)gentamiciu C^:

0,153 g des gemäß Stufe B erhaltenen i-N-(s~3~Carbobenzyloxyamino~2~hydroxypropionyl)gentamicin C^ werden in 8 ml Essigsäure gelöst und 0,05 g eines 10$ Palladium-auf-Kohle-Katalysators zugesetzt. Die Lösung wird bei 25°C und bei einem Wasserstoffdruck von A,ο at solange hydriert, bis durch Dünnschichtchroraatographie (wobei das in Stufe B verwendete Lösungsmittelsystem verwendet wird), die vollständige Umwandlung in das i-N-(S-3-Araino-2-hydroxypropionyl")· gentamicin C. angezeigt wird (Reaktionsdauer 16 h bis 3 Tage) Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und die Lösung zum Erhalt eines Rückstandes im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird über 7 g Silicagel chromatographyert, wobei die untere Phase einer Chloroform/Methanol/Animoniumhydroxid (2 : 1 : l) Mischung als Eluierungsmittel verwen-det wird. Das aus der Kolonne austretende Eluat wird durch Dünnschichtchromatographie überwacht, gleiche Fraktionen vereinigt und dabei 112 mg l-N-(S-3~Amino~2~hydroxypropionyl) gentamicin C₁ mit einem Schmelzpunkt von 109 - 119°C und einer spezifischen Drehung [cx]^ = +98° (ilgO) erhalten.

Elementaranalyse bezogen auf das Monohydrat:

509839/087Q

- .32 -

in % C II N-

berechnet: 49,4t7 8,65 14,42

gefunden: 49,24 8,53 14,10

Beispiel 5 : l-N~(S-4-Ainino-2-hydroxybutyryl)verdamicin: A. i~N-(S~4~Phthalimido-2-hydroxybutyryl)verdamicin:

4,61 g Verdamicin werden in 50 ml einer Methanol/Wasser "(1:3) Lösung gelöst und auf 0 bis 5°C abgekühlt. Dann wird der Lösung des Antibiotikunis tropfenweise unter Rühren eine Lösung von 3,81 g N-(S-4-Phthalimido-2-

oxy.

hydroxybutyryy)suceinimid in 20 ml Ditnethylforraaiaid zugegeben. Es wird weitere 16 h gerührt, und anschließend im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand wird auf einer 250 g Silicagelsäule chromatographiert, wobei die untere Phase einer Chlox-oforni/Methanol/ konzentriertes Ammoniunihydroxid (2:1:1) Mischung als Eluierungsniittel verwendet wird. Das Eluat wird mittels Dünnschichtchromatographie überwacht und gleiche Stoffe" beinhaltende Fraktionen vereinigt. Die vereinigten Fraktionen, '. ^: die das Hauptprodukt der Reaktion enthalten, werden eingedampft und man erhält l-N-(S~'i-Phthalimido-2-hydroxybutyryl)verdamicin und ein Isomeres davon.

B. i-N~(S~4-Amino~2-hydro'xybutyryl) verdamicin:

g im VcrfahrensschritM erhaltenes l-N-(S~'i-Phthnlin;i<',o-509839/0870

-" 33 - ■

2-hydroxybutyryl)verdamicin werden in 35 ml Äthanol gelöst und 1,0 g Hydrazinhydrat zugesetzt. Die Lösung wird 3 h lang am Rückfluß erhitzt, und dann im Vakuum ./ zur Trockene gedampft. Der Rückstand wird über l60 g Silicagel chromatographiert, wobei die untere Phase einer Chloroform/Methanol/konzentriertes Ammoniumhydroxid (Volumverhältnis 1 : i ; i) Mischung als Eluierungsmittel verwendet wird. Die durch Dünnschichtchromatographie bestimmten, die Hauptkomponente der Reaktion enthaltenden gleichen Fraktionen werden vereinigt und eingedampft, wobei das l-N-Cs-^-Amino-S-hydroxybutyrylJverdamicin als weißer amorpher Feststoff erhalten wird.

In ähnlicher "Weise werden die folgenden Verbindungen dieser Verfahrensweise unterworfen: -

Gentamicin A,
Gentamicin B^,
Gentamicin C₂ , ·

Gentamicin X^,
Antibiotikum G—*il8,
Antibiotikum JI-20B und
Antibiotikum G-52.

Die erhaltenen Produkte werden wie oben beschrieben isoliert, wobei man die folgenden Verbindungen erhält:

i-N-(S-'i-Amino~2-hydroxybutyryl)gentamicin A,

509839/0870

l-N-(S-^/i-Amino-2--hydroxybutyryl)gentairiicin ^bj:j i~N-(S~>i~Aniino-2-hydroxybutyryl)gentamicin i_N-(S-fi-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin X l-.N~(S-'i-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikura l-N-(S-^/i~Ainino-2-hydroxybutyryl)Antibiotilcuni JI-20B und i~N-(S-4-Amino~2~hydroxybutyryl)Antibiotikura G-52.

Setzt man in analoger Weise an Stelle des N-(S~3-Phthalimido-2-hydroxybutyryloxy)succininiid eine äquivalente Menge N-(S-3-Phthaliniido~2-hydroxypropionyloxy) succinirnid ein und folgt der oben . beschriebenen Arbeitsweise,

so erhält man die l-N~(S-3-Aniino-2~hydroxypropionyl)derivate der oben angegebenen Antibiotika. Entsprechend werden unter Verwendung von N-(S-3-Pfcvhalimido-2-hydroxypropionyloxy) succinimid in Verfahrensstufe A die folgenden Antibiotika dem Verfahren unterworfen:

Verdamicin,

Gentamicin A,
Gentamicin B.,
Gentamicin C₂,
Gentamicin C_2a,
Gentamicin X₂,
Antibiotikum G-'ilS,
Antibiotikum JI-2OB und
Antibiotikum G-52.

Die erhaltenen Produkte werden wie in diesem Beispiel beschrieben isoliert und man erhält die folgenden Verbindungen:

5Q 98 3.9/0 870

l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)verdamicin ,·" i-N-(S~3-Aniino-2-hydroxypropionyl)gentamicin A, i~N-(S-3-Aniino-2~hydroxypropionyl)gentamicin B^, l-N-(S-3-Amino-2-liydroxypropionyl)gentaniicin C₂, l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C_Oa, l-N-(S-3-Amino-2-*hydroxypropionyl)gentamicin X₂, i-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum G-418, l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikuni JI-2OB und l-N-(S~3-Amino-2-hydroxyproplonyl)Antibiotikuu] G-52.

Beispiel 6: :1-N-(S-3-t-Butoxycarbonylaraino-2-hydroxypropionyloxy) succinimid: .

A. S-3-t-Butoxycarbonylamino-2-hydroxypropionsäure:

8,0 g S-3-Carbobenzyloxyaiflino~2-hydroxypropionsäure Λν-erden in 110 ml einer Dioxan/Wasser (h : i) Mischung gelöst. Dann werden 200 mg eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators zugegeben und bei 3,4 at : Wasserstoffdruck 3 h lang hydriert, Der Katalysator wird abgefiltert und das Filtrat zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft, der S-3~Amino-2-.hydroxypropionsäure enthält. Die Säure wird in 40 ml Methanol und 8,5 ral Triäthylamin aufgelöst, die Lösung in einem Eisbad abgekühlt und 4,76 g t-Butoxycarbonylazid zugegeben. Die Mischung wird über Nacht abstehen und schrittweise auf Raumtemperatur anwärmen gelassen. Es wird die llauptnienfe

0 9 8 3 9/0870

~ '36 ~

Methanol abgedampft, rait Wasser verdünnt und mit verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 angesäuert. · Die wässerige Mischung wird öfters mit Äthylacetat extrahiert, die Äthylacetatextrakte vereinigt und getrocknet, sowie zum Erhalt eines Rückstandes im Vakuum eingedampft. Der erhaltene Rückstand wird aus einem Äthylacetat/Hexan— Geraisch, urakristallisiert, wobei 3,5 g S-3-t-Butoxycarbonyl· amino~2~hydroxypropionsäure mit einem Schmelzpunkt von 92. - 94⁰C und einer spezifischen Drehung [⁰O^ = +14,9 (c = 0,68fo,H₂ ⁰) erhalten werden.

Elementaranalyse bezogen auf

in fc .	C	82	7	H	6	N"
berechnet:	46,	81	7	,37	6	,83
gefunden:	46,		,61	,63

B, N-(S~3~t~Butoxycarbonylamino-2-hydroxypropionyloxy) succinimid:

2,3 g S~3-t-Butoxycarbonylamino-2-hydroxypropionsäure werden in einer Mischung aus 25 ml Tetrahydrofuran und 60 ml Athylacetat gelöst. Unter Rühren werden 1,42 g N-. . Ilydroxysuccinimid, und anschließend eine Lösung von 2,51 g Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Äthylacetat zugegeben. Die Mischung wird 16 h lang gerührt, und dann die ausge-

509839/0870

fallenen Feststoffe abgefiltert. Das Piltrat wird eingedampft, und dabei 3,56 g N-(S-3-t-Buto>:ycarbonylarninö-2-hydroxypropionyloxy)succiniraid erhalten.

In ähnlicher Weise wird an Stelle von S~3-Carbobenzyloxyaraino~2-hydroxypropionsäure eine äquivalente Menge S~4-Carbobenzyloxyamino~2-hydi*oxybutter— säure eingesetzt. Die Säure wird der Vorgehensweise dieses Beispieles unterworfen, wobei man N-(S-Ί-t-Butoxycarbonylaniino-2-hydroxybutyryloxy)succinimid erhält, 2. 2',3-di-N-Trifluoracetyl-gentamicin ^ct_

A. 2^l-N~Trifluoracetyl-gentaniiein C^:

1,7 g Gentamicin C^ werden in 20 ml Methanol gelöst, die Mischung auf k°C abgekühlt und 0,46 ml (0,563 g) Äthylthioltrifluoracetat unter Rühren zugesetzt. Die Reaktion wird 2 h fortschreiten gelassen, und dann die Lösung zum Erhalt eines Rückstandes im Vakuum eingedampft. Das erhaltene Produkt wird auf 80 g Silicagel G ehromatographiert, wobei die untere Phase einer Chloroforra/Methanol/Wasser/ Ammoniunihydroxid (10 : 5 : k : i) Mischung als Eluierungs- : mittel verwendet wird. Die die Hauptkomponente enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und konzentriert, wobei man l_tk g 2'-N-Trifluoracetyl-gentamicin C. mit einem Schmelzpunkt von 108 - Hi⁰C und einer spezifischen Drehung [α]ρ⁶ = +128° (c = 0,3%, H₂O) erhält.

Elementaranalyse berechnet auf ^C23^Hi₁2^N5°8^i;''5 · ^H2^0:

in % C H N¹F

berechnet:	46,	69	7	,50	11	,84	9,	63
gefunden:	46,	66	7	,65	11	,60	9,	24

B. 2¹^-di-N-Trifluoracetyl-gentaraicin C^:

0,66 g des gemäß Stufe A erhaltenen 2'-N-Trifluoracetylgentamicin C^ werden in 10 ml Methanol aufgelöst, die Mischung auf 4⁰C abgekühlt und 0,148 ml (o,182 g) Äthylthioltrifluoracetat gelöst in 3 ml Methanol zugesetzt. Die Reaktionsmischung wird etwa 16 h lang gerührt und dann zum Erhalt eines Rückstandes im Vakuum eingedampft. Das erhaltene Produkt wird auf 30 g Silicagel wie im Verfahrensschritt A beschrieben ehroiaatographiert. Die Säule ·-. wird durch Dünnschichtchromatographie überwacht, die geeigneten Fraktionen vereinigt und konzentriert, wobei 0,32 g 2¹,3-di-N-Trifluoracetyl-gentaraicin C^ mit einem Schmelzpunkt von 121 - 129°C und einer spezifischen Drehung von

a]p⁶ = 121° (c = 0,3$; H₂O) erhalten wird.

Elementaranalyse berechnet auf

in % C H N

berechnet:	44	,84	6,	17	10	,46
gefunden:	44		6,	35	10	,17

509839/0870

Beispiel 7 : l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin

A. i-N-(S-^-Benzyloxycarbonylamino~2-hydroxybutyryl)gentamicin C_la: ...

• 2,8 g (k niMole) Gentamicin C. -sulfat werden in 30 ml Vasser gelöst und 15 ml Methanol zugegeben. Dann werden 0,56 ml (4 mMole) Triethylamin zugesetzt und 10 min lang gerührt. Der Lösung des Antibiotikums wird tropfenweise unter Rühren eine Lösung aus k tuMolen N-(S-'*-Benzyloxy- carbonylamino~2~hydroxybutyryloxy)succinimid in 20 ml trockenem Dimethylformamid zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht (l6 h) bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird die Reaktionsmischung über Dünnschichtchromatographie auf Silicagel Chromatographiert, wobei die. untere Phase eines ChloroXorm/Methanol/Ammoniumhydroxid (i : 1 : i) Lösungs-

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mittelsystems als Eluierungsiuittel verwendet wird, wobei eine Mehrzahl von Nebenprodukten und ein Hauptprodukt gefunden wird. Die Reaktionsmischung wird im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft, und der Rückstand mit Methanol angerieben, wobei 3,2 g eines weißen Feststoffes erhalten werden, der alle durch Chromatographie gefundene Komponenten enthält.

Es werden 150 tng des erhaltenen Produktes auf 50 g Silicagel Chromatograph!ert, wobei die untere Phase eines Chloroform/ Methanol/Ammoniumhydroxid (2 : 1 ': i) Lösungsmittelsystems als Eluierungsmittel verwendet wird. Die die Hauptkomponente enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und lyophilisiert, wobei 70 mg 1--N-(S—*i-Benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)gentamicin C₁ erhalten wird. Es wurden folgende. Kenndaten bestimmt:

nmr (D₂O) J1,15 (3H, s, C-CH₃); 2,49 (3H, s, NCH₃); 4,10 (IH, dd, J = 8,0, 4,0 Hz, Seitenkette H--2); 7,36 (5H, m, Phenyl). .

B, l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin C

la*

Das im Verfahrensschritt A erhaltene i-N-(S-4-Benzyloxycarbonylamino~2-hydroxybutyryl)gentamicin C. wird in

^w la

einer Mischung aus 12 ml Methanol und 3 ml Wasser gelöst, 20 mg eines 10$ Palladiura-auf-~Kohle-Katalysators zugesetzt und bei Raumtemperatur und einen. Wasserstoffdruck von 4,0 al hydriert. Nach 3 h ist die Reaktion im wesentlichen

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beendet. Der Katalysator wird abgefiltert und das Filtrat lyophilisiert, wobei 46 mg l-N-(S-4~Aniino-2-hydroxybutyryl)gentamicin C₁ erhalten werden. Es wurden folgende Kenndaten bestimmt:

nmr (D₂O) S 1,17 (3Π, s, C-CH₃);- 2,48 (311, s, XCII₃); 4,22 (IH, dd, J = 9,5 Hz, 4,0 Hz, Seitenkette CIIOH); 5,04 (2H, m, H-I^! und H-I"). Mass enspektroskopisch^ Daten: (M-H₂O) m/e 532.

Beispiel 8 : l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B:

A. l-N-(S-4-Benzyloxycarbonylamino-2~hydroxybutyryl)gentamicin B:

3j39 g Gentamicin B-sulfat werden in 48,4 ml Wasser gelöst und mit 23,7 ml Methanol verdünnt. Dann werden unter Rühren 0,7 ml Triethylamin tropfenweise unter Rühren zugesetzt. Anschließend werden 1,67 g N-(S-4~Benzyloxycarbonyl· araino-2~hydroxybutyryloxy)succininiid in.Dimethylformamid gelöst und die Lösung tropfenweise unter Rühren der Antibiotikumlösung zugesetzt. Die erhaltene Reaktionsraischung wird bei Raumtemperatur IS h lang gerührt und dann im Vakuum zum Erhalt eines Rückstandes eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst und mit einer verdünnten Bariumhydroxidlösung unter Rühren solange behandelt, bis der pH·- Vert etwa 8,0 erreicht hat. Dan ausgefällte Bariumsulfat wird unter Verwendung einer FiI torhilfe durch Abfiltern

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entfernt. Der Niederschlag wird mit Wasser gewaschen, das Piltrat und die Waschlösung vereinigt und im Vakuum zur Trockene gedampft. Der Rückstand wird auf einer 600 g Silicagelsäule chromatographyert, wobei die untere Phase eines Chlorofortii/Methanol/Armnoniumhydroxid (i : 1 : l) Lösungsmittelsystems als Eluierungsmittel verwendet wird. Das unmittelbar vor dem Gentamicin B eluierte Material wird vereinigt, und die vereinigten Fraktionen zur Trockene gedampft, wobei man das l~N-(S-^;i~Benzyloxycarbonylaniino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B in einer Ausbeute von 0,2 g als amorphen Feststoff erhält. Es wurden folgende Kenndaten bestimmt:

nmr (D_o0): ~S 1,27 (3Π, s, C-CEL·); 2,51 (3H, s, NCH,); 5,08 (IH, d, J = 4 Hz); 5,25 (lH, d, J = 3,5 Hs).

B. i-N-(s-4~Araino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B:

Das gemäß Verfahrensschritt A erhaltene l-N"--(S-^-Benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl^gentamicin B wird in einer Mischung aus 20 ml Fasser und 8 ml Methanol gelöst. Das erhaltene Produkt wird in Gegenwart von 60 mg eines 5$ Palladiuffl-auf-Kohle-Katalysators bei 3,4 at Vasserstoffdruck und Raumtemperatur 3 h lang hydriert. Der Katalysator wird durch Filtrieren durch ein Filterhilfsmittel abgetrennt. Der Filterkuchen wird mit Wasser nachgewaschen, das FiItrat und die Waschlösung vereinigt und im Vakuum zur Trockene gedampft. Der erhaltene Rückstand wird auf

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einer 10 g Silicagelsäule chromatographiert, wobei ein Chloroform/Methanol/Ammoniumhydroxid (1:2:1) Lösungsmittelsystem als Eluierungsmittel verwendet wird. Die die polarste Komponente enthaltenden Fraktionen werden vereinigt, eingeengt, und lyophilisiert, wobei 12 mg 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B erhalten werden.

Auf ähnliche Weise wird eine äquivalente Menge der folgenden 4,6-Di— (aminoglycosyl)aminocyclitol-Antit)iotika diesem Verfahren unterworfen: Gentamicin C-,, Gentamicin Cp, Gentamicin Cp , Gentamicin A, Gentamicin Xp, Antibiotikum G-4l8, Antibiotikum JI-20Ä, Antibiotikum JE-20B und Gentamicin B-,.

Die Reaktionsprodukte werden gemäss der oben beschriebenen Art isoliert und man erhält: l-N-(S-4-AminO-2-hydroxybutyryl)-gentamicin C,, 1-N-(Sj-4-Amino-2~hydroxybutyryl)gentamicin Cp, 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyrylgentamicin C_ , 1-N--(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin A, 1-N-(^-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin X₀, 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)antibiotikun G-41S, 1-N-(^-4-Amino-2-hydroxybutyryl)antibiotikum 2OA, l-N-(Ö-4-Amino-2-hydroxybutyryl)antibiotikum JI-2DB und l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)gentamicin B, .

Setzt man N-(S_-3-Benzyloxyca;rbonylamino-2-hydroxypropionyl)-succinimid an Stelle von N-(jS-4-Benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)suecinimid ein, und behandelt man die oben genannten Antibiotika nach diesem Verfahren, erhält man die folgenden Verbindungen: 1-N- (S-j5-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C₁, l-N-(^-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin Cp, l-N-(S_-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin C_? , l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin Xp, 1-N-(S-J-Amino-2-

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hydroxypropionyl)gentamicin A, l-N-(S-j5-Amino-2-hydroxypropionyl)antibiotikum G-418, i~N-(S_-;5-Amino-2-hydroxypropionyl)antibiotikum JI-2DA, l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)-antibiotikunJl-2CB und l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)-gentamicin B,.

Beispiel 9: l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)verdamicin:

A. l-N-(S-4-Phthalimido-2-hydroxybutyryl)verdamicin:

5 g Verdamicin-Sulfat werden in 50 ml Wasser gelöst und 25 ml Methanol werden zugesetzt. Man fügt 0,5 ml Triäthylamin bei und rührt 10 Minuten. Danach gibt man tropfenweise und unter Rühren eine Lösung von 2,5 g N-(S_-4-Phthalimido-2-hydroxybutyryloxy)succinimid in 10 ml Dimethylformamid zu. Die Lösung wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und sodann im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird auf ΙβΟ g Silikagel chromatographiert, wobei die untere Phase eines Gemisches aus Chloroform:Methanol: cone.Ammoniumhydroxid (1:1:1) als Eluierungsmittel dient. Jene Fraktionen, die gemäss dünnschichtchromatographischen Bestimmungen auf Silikagel die Hauptmenge des Reaktionsproduktes enthalten, werden vereint und eingedampft. Man erhält die Verbindung dieses Beispiels als weissen, amorphen Feststoff.

B. l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)verdamicin:

Das Produkt aus Stufe A wird in 40 ml Aethanol gelöst und 0,2 g Hydrazinhydrat werden zugesetzt. Die Lösung wird 3 Stunden auf Rückfluss gehalten und danach im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird auf 16O g Silikagel unter Verwendung der unteren Phase eines Gemisches aus Chloroform:Methanol:cone.Ammoniumhydroxid (1:1:1) als Eluierungsmittel chromatographiert. Jene Fraktionen, die gemäss

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dünnschichtchromatographischer Bestimmungen auf Silikagel die Hauptmenge des Reaktionsproduktes enthalten/ werden vereint und eingedampft. Man erhält die Verbindung dieses Beispiels als weissen, amorphen Feststoff.

Auf ähnliche Weise kann eines der folgenden Antibiotika in äquivalenten Mengen diesem Verfahren unterworfen werden; Sisomicin, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 85-4OB und Antibiotikum 66-40D.

Isoliert man die entsprechenden Produkte in der oben beschriebenen Art, erhält man: 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)sisomicin, l-N_-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl) antibiotika G-52, 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)antibiotikum 66-4OB und 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)antibiotikum 66-4OD.

Setzt man N-(S-3~Phthalimido-2-hydroxypropionyloxy)succinimid an Stelle von N-(S-4-Phthalim^do-2-hydroxybutyryl·oxy) succinimid ein und behandelt die oben genannten Antibiotika gemäss diesem Verfahren, erhält man die folgenden Verbindungen: 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)sisomicin, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)antibiotikum3-52, i_N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)antibiotikum 6S-4Bund 1-N.-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)antibiotikum 66-4OD.

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Die Erfindung umfasst pharmazeutische Zusammensetzungen, die zumindest ein neues 1-N-substituiertes Derivat eines der genannten 4,6-Di-(aminoglycosyl)1,3-diaminocyclitole und einen pharmazeutischen Trägerstpff enthalten. Ebenso umfasst von der Erfindung wird eine Methode zur Bekämpfung von bakteriellen Infektionen in Lebewesen, die dadurch gekennzeichnet ist, dass man dem Lebewesen eine nicht giftige, antibakteriell wirksame Dosis eines 1-Nr-substituierten Derivates von einem der 4,6-Di-(aminoglycosyl·)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin C₁, Gentamicin C, , Gentamicin C₂, Gentamicin C„ , Gentamicin X„, Sisomicin,.Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-4OD, Antibiotikum JI-2OA, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C₁, Gentamicin C₁ und Gentamicin C„ der 1-N-Substituent S-3-Amino~2-hydroxypropionyl ist, oder eines pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzes dieser 1-N-substituierten Derivate verabreicht.

Der Verbindungen der Erfindung sind antibakterielle Mittel mit breitem Wxrkungsspektrum und sind gegen viele Organismen, insbesondere gram-negative, wirksam, die gegen die 1-N-unsubstituierten Antibiotika resistent sind. Die Verbindungen der Erfindung können alleine oder in Kombination mit anderen Antibiotika verwendet werden, um das Wachstum von Bakterien ,zu verhindern oder deren Zahl zu vermindern. Die Verbindungen sind wirksam gegen viele Organismen, welche die Stammantibiotika durch Acetylierung der 3-Aminogruppe und/oder durch Adenylierung der 2"-Hydroxylgruppe inaktivieren. Somit stellen die nach dem erfindungsgemässen Verfahren hergestellten neuen Verbindungen wertvolle Antibiotika dar, die demselben Gebrauch %vie ihre underivatisierten (Stamm)

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Antibiotika zugeführt werden können, so z.B. als bakteriostatische Spülmittel für Glasgeräte in Spitälern, chirurgische Instrumente, Badewannen oder zum Reinigen von Flächen, worauf Laboratoriumstiere gehalten werden.

Zusätzlich zu ihrer Nützlichkeit als antibakterielle Mittel können die Verbindungen dieser Erfindung auch als Zwischenprodukte für die Herstellung einer neuen Klasse von Verbindungen, die ebenfalls umerwartet gute antibakterielle Eigenschaften aufweisen, verwendet werden. Dieser Verwendungszweck wird in der Belgischen Patentschrift Nr. 818,431 beschrieben. Von diesem Patent werden 1-N-substituierte 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole, worin der 1-N-Substituent unter anderem S_-4-Amino-2-hydroxy-, butyl und S_-3-Amino-2-hydroxypropyl ist, umfasst. Diese Verbindungen können durch Reduktion der Verbindungen der vorliegenden Erfindung nach Standardmethoden erhalten werden. Bevorzugte Reduktionsmittel sind Aluminiumhydride und Borhydride.

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■- 48 - ■

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Im allgemeinen hängt die zu verabreichende Dosis der Verbindungen der Erfindung vom Alter und Gewicht des Lebewesens, von der Verabreichungsart, vom Typ und von der Schwere der bakteriellen Infektion ab. Die Dosierung der Derivate der 4, 6~Di-(ariiinoglycosyl)-l,3~d±aminocyclltole ist gewöhnlich der Dosierung der 1-N-unsubstituierten Verbindungen ähnlich.

Die Verbindungen der Erfindung können oral verabreicht werden. Sie können auch topisch verabreicht werden in der Form von Salben, Cremen oder Lotionen. Pharmazeutische Trägerstoffe für dies Formulierungen umfassen Wasser, OeIe, Fette, Polyester und Polyole.

Zur oralen Verabreichung der Verbindungen dieser Erfindung können Tabletten, Kapseln oder Elixire Anwendung finden, die Verbindungen können aber auch den Tierfutter zugemischt werden. Die orale Verabreichung ist besonders günstig im Falle von Infektionen im Gastrointestinaltrakt, die Diarrhöe verursachen.

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Im allgemeinen enthalten topische Preparationen ca. ..

0.1 bis ca. 3.0 g der Verbindungen der Erfindung pro 100 g Salbe, Creme oder Lotion. Die topische Verabreichung

erfolgt ca. 2 bis 5 Mal am Tag. ._

Die antibakteriellen Mittel der Erfindung können in flüssiger Form als Lösungen oder Suspensionen zur Anwendung an Ohren und Augen oder zur parenteralen Verabreichung in Form intramuskulärer Injektionen vorliegen. Injetionslösungen oder -suspensionen werden gewöhnlich so verabreicht, dass ca. 1 bis 15 mg Wirkstoff pro Kilogramm Körpergewicht in 2 bis 4 Dosen pro Tag in den infizierten Organismus gelangen. Die genaue Dosis hängt von Zustand der Infektionen, der Empfänglichkeit des infizierenden Organismus und von den individuellenCharakteristika des zu Behandelnden ab.

Die folgenden Beispiele illustrieren pharmazeutische Zusam-' mensetzungen.

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250223S

Formulierung 1 Tablette 10 mg. Tab.

1 -N- (S.-3 -Ämino -2 -hydroxypropionyl)

gentamicin B 10.50* mg.

Lactose 197.50 mg.

Maisstärke 25.00 mg.

Polyvinylpyrrolidon 7.50 mg.

Magnesiumstearat 2.50 mg.

* 5% Ueberschuss

Herstellung

Es wird eine Aufschlämmung aus 1-N- (S/-3 -Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin B, Lactose und Polyvinylpyrrolidon hergestellt und diese sprühgetrocknet. Man gibt die Maisstärke und das Magnesiumstearat zu, mischt und verpresst zu Tabletten.

Formulierung 2

1 -N- (S^-3 -Ämino-2 -hydroxypropionyl)

gentamicin B 1.0 g.

Methylparaben U.S.P. 0.5 g.

Propylparaben U.S.P. 0.1 g.

Petrolatum auf 1000 g.

Herstellung

(1) Man schmilzt das Petrolatum;

(s) Man mischt 1-N-(S.-3-Amino-2-hydroxypropionyl)gentamicin Β, Methylparaben und Propylparaben mit ca. 10% des geschmolzenen Petrolatum;
(3) Gibt das Gemisch in eine Kolloidmühle;

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-25,022.98

(4) Gibt das restliche Petrolatum unter Rühren zu und kühlt, bis es halbfest wird. Das Produkt wird in geeignete Behälter abgefüllt.

Formulierung 3 In-jektionslosung Per 2.0 ml. viole

1 -N- (S_-4 -Amino -2 -hydr oxybutyry 1) gentamicin B-Sulfat

84.0	mg.*
3.6	mg.
0.4	mg.
6.4	mg.

Methylparaben, U.S.P. Propylparaben, U.S.P. Natriumbisulfit, U.S.P. Dinatriumäthylendiamintetraacetat-

dihydrat 0.2 mg.

Wasser, U.S.P. q.s. 2.0 ml.'

* 5%iger Ueberschuss

Herstellung eines 50 Liter Ansatzes

Man gibt ungefähr 35 Liter Wasser für Injektionszwecke in ein geeignetes Gefäss aus rostfreiem Stahl und erhitzt auf ca. 70 C. Man setzt das Methylparaben und Propylparaben dem heissen Wasser zu und löst unter Rühren auf. Nach dem Auflösen kühlt man auf ca. 25 - 30°C ab und spült die Lösung wenigstens 10 Minuten mit Stickstoff. Die folgenden Operationen werden unter Stickstoff durchgeführt. Man fügt das Dinatrium - EDTA und Natriumbisulfit der Lösung zu und löst danach das aktive Ingredienz auf. Das Volumen wird auf 50 Liter gebracht und die Lösung bis zur Homogenität gerührt.

Die Lösung wird unter sterilen Bedingungen und unter Anwendung eines Filters, das Bakterien zurückhält, filtriert und das Filtrat in einem Tank aufgenommen.

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Das Filtrat wird aseptisch in sterile, pyrogenfreie Violen gefüllt und verschlossen.

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Claims

Patentansprüche

1. Verfahren zur Herstellung von 1-N-substituierten Derivaten der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin CL ,

Gentamicin C₁ , Gentamicin C₀, Gentamicin C₀ , Gentamicin X₀, Xa ζ <id £

Sisomicin/ Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-4OD, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der l-N-Substituent mit X bezeichnet wird und für die S-3~Amino-2~hydroxypropionyl- oder für die S-4-Amino-2-hydroxybutyrylgruppe steht, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C.. , Gentamicin C. und Gentamicin C„ X für die S-3-Amino-2-hydroxypropionylgruppe steht, und der pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass eines der oben genannten 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole, das in allen Stellungen ausser der 1-Stellung Aminoschutzgruppen aufweisen kann, mit einer Säure der Formel

HO - X'
worin X¹ die oben für X genannte Bedeutung aufweist, wobei jedoch die Äminogruppe und/oder die Hydroxygruppe geschützt sein können,

in Gegenwart eines Carbodiimides oder mit einem reaktiven Derivat der Säure umgesetzt wird, dass alle im Molekül vorhandenen Schutzgruppen entfernt werden und das erhaltene Derivat als solches oder als pharmazeutisch annehmbares Säureadäitionssala isoliert wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine der 4,6-Di-(aminoglycosyl) -1,3-diarninoayclitol-Ausgangsverbindungen Gentamicin C. , Gentamicin B, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum 55-40B, Antibiotikum 66-4OD und Sisomicin mit jeweils einer 6' -Aiainoschutzgruppe eingesetzt wird.

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3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung eingesetzt wird, deren 6'-Aminoschutzgruppe eine Trifluoracetyl- oder t-Butoxycarbonylgruppe ist.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol-Ausgangsverbindung Gentamicin C₁ mit Arninoschutzgruppen in den Stellungen 2' und 3 eingesetzt wird.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Aminoschutzgruppen Trifluoracetyl sind.

6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als 4,6-Di-(aininoglycosyl) -1,3-diaminocyclitol-Ausgangsverbindung Gentamicin A, Gentamicin B₁, Gentamicin C-, Gentamicin C_ , Gentamicin X„, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-2OB oder Antibioticum G-52 mit freien Aminogruppen eingesetzt wird.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass ein reaktives Derivat der Säure OH-X¹ als Acylierungsmittel eingesetzt wird.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet,dass das reaktive Derivat der Säure OH-X¹ ein Ester, das Azid, das Imidazolderivat oder das Anhydrid ist.

9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass das reaktive Derivat der Säure OH-X¹ der N-Hydroxysuccinimidylester ist.

10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass als 4,6-Di~{aminoglycosyl)-1,3-diamino-

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cyclitol Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin C₁, Gentamicin C₁ , Gentamicin C₀ , Gentamicin X₀, ! -La -^a «4

Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-4OD, Antibiotikum JI-2OA, Antibiotikum JI-2OB oder Antibiotikum G-52 eingesetzt wird.

11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet^ dass als 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B-, Gentamicin C₀ , Gentamicin X₀, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418,

*£a A

Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-4OD, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B oder Antibiotikum G-52 eingesetzt wird.

12. Verfahren zur Herstellung von 1-N-substituierten Derivaten von 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitolen worin der 1-N-Substituent mit X bezeichnet ist und die S-3-Amino-2-hydroxypropionyl- oder die S-4-Amino-2-hydroxybutyrylgruppe darstellt, und von pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass ein 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol, das durch Bildung eines Säureadditionssalzes teilweise neutralisiert ist, mit einer Säure der Formel

HO - X¹ ,

worin X¹ die für X oben angegebene Bedeutung hat, wobei jedoch die Aminogruppe und/oder die Hydroxygruppe geschützt sein können,

in Gegenwart eines Carbodiimides oder mit einem reaktiven Derivat der Säure umgesetzt wird, dass alle im Molekül anwesenden Schutzgruppen entfernt werden und das erhaltene Derivat als solches oder als pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz isoliert wird.

13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die 4,6-Di-(aminoglycosyl)-l,3-diaminocyclitoi~Ausgangs-

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j C η <j j Q β

verbindung durch (n-1) Aeqüivalente Säure neutralisiert ist, wobei η die Anzahl der Aminogruppen im Molekül bedeutet.

14. Verfahren nach Anspruch 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, dass ein reaktives Derivat der Säure HO-X¹ als Acylierungsmittel eingesetzt wird.

15. Verfahren nach einem der Ansprüche 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass als reaktives Derivat der Säure HO-X¹ der N-Hydroxysuccinimidylester eingesetzt wird.

16. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass X¹ S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino~2-hydroxybutyryl bedeutet, worin die Aminogruppe geschützt ist.

17. " Verfahren nach einem der Ansprüche 12 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass als 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B.., Gentamicin C., Gentamicin C_la, Gentamicin C₂, Gentamicin C_2a, Gentamicin X„, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B oder Antibiotikum G-52 eingesetzt wird.

18. Verfahren zur Herstellung der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D und Sisomicin mit einer Aminoschutzgruppe in Stellung 6' und der Säureadditionssalze dieser Verbindungen dadurch gekennzeichnet, dass eines der oben genannten 4,6-Di-(aminoglycosyl) 1,3-diaminocyclitole mit einer Verbindung der Formel BgLg umgesetzt wird, worin Bg die Aminoschutzgruppe darstellt und Lg eine Austrittsgruppe darstellt und dass eine so erhaltene Verbindung als solche oder als Säureadditionssalze isoliert wird.

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2S02298

19. Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass etwa äquimolare Mengen an Reaktanden eingesetzt werden.

20. Verfahren nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, dass Bg in der Verbindung der Formel BgLg Trifluoracetyl oder t*-Butoxycarbonyl darstellt.

21. Verfahren nach einem der Ansprüche 18 bis 20, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel BgLg Aethylthxoltrifluoracetat oder t-Butoxycarbonylazid verwendet wird.

22. Verfahren zur Herstellung von 6'-N-Trifluoracetyl-"

Gentamicin C₁ und dessen Säureadditionssalzen, dadurch xa

gekennzeichnet, dass Gentamicin C, mit einer Verbindung der Formel CF-CO-Lg worin, Lg eine Austrittsgruppe darstellt, umgesetzt wird und dass die so erhaltene Verbindung als solche oder als Säureadditionssalz isoliert wird.

23. Verfahren nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass etwa äquimolare Mengen an Gentamicin C. und Aethylthiol trifluoracetat verwendet werden.

24. Verfahren zur Herstellung von 2'-N-geschütztem oder

2·,3-Di-N-geschütztem Gentamicin C₁ und den Säureadditionssalze davon, dadurch gekennzeichnet, dass Gentamicin C. entweder mit etwa einem oder etwa zwei Moläquivalenten einer Verbindung der Formel BgLg, worin Bg eine Arainoschutzgruppe und Lg eine Aus— trittsgruppe ist, umgesetzt wird und dass die so erhaltene Verbindvuig als solche oder als Säureadditionssalz isoliert wird.

25. Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel BgLg eine solche "verwendet wird, worin Bg Trifluoracetyl ist.

26. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 25, wie hierin beschrieben. 5Q9839/087Q

21J 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin C₁, Gentamicin C₁ , Gentamicin C_n, ■

X J. -La £·

Gentamicin C , Gentamicin X~, Sisomicin/ Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C. , Gentamicin C, und Gentamicin C₃ der 1-N-Substituent S-3-AmInO^-hydroxypropionyl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

28. 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di~(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁ , Gentamicin C.., Gentamicin C, , Gentamicin C₂ , Gentamicin X~, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl offer S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C₁ und Gentamicin C₁ , der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxy-

xa

propionyl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

29. 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di-(amino glycosyl)--1,3-diaminocyclitole Gentamicin A, Gentamicin B, Gentamicin B₁, Gentamicin C„ , Gentamicin X„, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze .

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30. 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin A; GentamicinB, Gentamicin B., Gentamicin X₂, Sisomicin, Verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-4QD, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B und Antibiotikum G-52, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

31. 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di-(amino glycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Gentamicin B,, Gentamicin C₁, Gentamicin C₁ _t Sisomicin, Verdamicin und Antibiotikum JI-2OB, worin der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl oder S-4-Amino-2-hydroxybutyryl ist, mit der Massgabe, dass bei Gentamicin C₁ und Gentamicin C₁

χ xa

der 1-N-Substituent S-3-Amino-2-hydroxypropionyl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

32. 1-N-Substituierte Derivate der 4,6-Di-(aminoglycsoyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Gentamicin B-, Sisomicin und Verdamicin, worin der 1-N-Substituent S-3- · Amino-2-hydroxypropionyl oder S~4-Araino-2-hydroxybutyryl ist, und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

33. Die Verbindungen l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl) Gentamicin B, 1-N-(S-3-amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin B, l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin B., 1-N-(S-3-amino 2-hydroxypropionyl)Sisomicin, 1-N-(S-3-amino-2-hydroxypropionyl) Verdamicin und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

34. Die Verbindungen l-N-(S~4-Amino-2-hydroxybutyryl) Gentamicin B, l-N~(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) Gentamicin B, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) Sisomicin, 1-N- (S-3-Amino-2-

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hydroxypropionyl)Verdamicin und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

35. Die Verbindungen l-N-(S-4-amino~2-hydroxybutyryl) Gentamicin B, 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin B und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

36. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Sisomicin und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

37. 1-N- {S-3-Äinino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum 66-40B und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

38. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum 66-40D und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

39. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Änt ibiotikum G-52 und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

40. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Verdamicin und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

41. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin C. und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

42. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl) Gentamicin C₂ und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

43. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin C. und dessea pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

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44. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamic in C^ und dessai pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

45. 1-N-(S-3-AmInO-^-hydroxypropionyl) Gentamicin X₀ und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

46. l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin A und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

47. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin B und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

48. l-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin B, und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

49. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Gentamicin

JI-20A und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

50. 1-N-(S-3 -Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum JI-20B und dessai pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

51. 1-N-(S-3-Amino-2-hydroxypropionyl)Antibiotikum G-418 und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

52. 1-N- (S-4-Amino-2-hydro3:ybutyryl) Sisomicin und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

53. 1-N-(S-4~Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum

66-40B und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

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54. 1-N- (S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Äntibiotikum

66-4OD und dessenpharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

55. l-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum G-52 und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

56. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Verdamicin und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

57. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin C₃₃ und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

58. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin X₃ und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

59. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin A und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

60. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin B und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

61. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Gentamicin B, und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

62. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum

JI-20A und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

63. 1-N-(S-4-Amino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum JI-20B und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

64. 1--N-(S-4-Ämino-2-hydroxybutyryl)Antibiotikum G-418 und dessen pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze.

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65. Die 4_/6-Di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitole Gentamicin B, Antibiotikum JI-2OA,. Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-4OD und Sisomicin, worin die Aminogruppe in Stellung 6' geschützt ist, und deren Säureadditionssalze.

66. Die Verbindungen 6'-N-Trifluoracety!gentamicin B, 6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum JI-20A, 6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-40B,6'-N-Trifluoracetyl-Antibiotikum 66-4OD und 6'-N-Trifluoracetyl-Sisomicin.

67. Die Verbindungen 6■-N-t-Butoxycarbonyl-Gentamicin B, 6 ' -N-t-Butoxycarbonyl-Sisomicin, 6 ' -N-t-Butoxycarbonyl Antibiotikum 66-40B, 6'-N-t-Butoxycarbonyl-Antibiotikum 66-40D und 6'-N-t-Butoxycarbonyl-Antibiotikum JI-20A.

68. 6'-N-Trifluoracetylgentamicin C₁ und dessen

la

Säureadditionssalze.

69. Gentamicin C, mit Aminoschutzgruppen in Stellung 2' oder in den Stellungen 2' und 3 und die Säureadditionssalze davon.

70. 2',3-Di-N-trifluoracetylgentamicin C..

71. Pharmazeutische Zubereitung enthaltend als Äktivsubstanz zumindest eine Verbindung gemäss einem den Ansprüche 27 bis 64 und einen pharmazeutischen Trägerstoff.

72. Zubereitung nach Anspruch 71 in der Form von Dosiseinheiten.

73. Verfahren zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung

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geinäss einem der Ansprüche 27 bis 64 in eine für die therapeutische Verabreichung geeignete Form bringt.

74. Verfahren nach Anspruch 73, dadurch gekennzeichnet, dass die Aktivsubstanz mit einem geeigneten Trägerstoff gemischt wird.

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