DE19852905A1

DE19852905A1 - Process for the selection of catalytic antibodies

Info

Publication number: DE19852905A1
Application number: DE1998152905
Authority: DE
Inventors: Lutz F Prof Dr Tietze; J Hinrich Peters; Bazzaz Farrokh Djalali; Juergen Seibel
Original assignee: BASF SE
Current assignee: BASF SE
Priority date: 1998-11-09
Filing date: 1998-11-09
Publication date: 2000-05-11
Also published as: WO2000028330A1; AU1551400A

Abstract

The invention relates to a method for selecting catalytic antibodies which is characterized in that antibodies are immobilized, a chemical compound A is converted into a product B using these immobilized antibodies, the appearance of the product is detected, and these antibodies exhibiting a catalytic activity are selected.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Selektion von kata lytischen Antikörpern.The invention relates to a method for selecting kata lytic antibodies.

Chemische Synthesen mit Hilfe katalytischer Antikörper sind seit den 80iger Jahren in vielen Arbeiten beschrieben worden. Eine Übersicht über Synthesen mit katalytischen Antikörpern sind bei spielsweise den Übersichtsartikeln von Mader et al. (Chem. Rev., 97, 1997: 1281-1301), Stanley M. Roberts (J. Chem. Soc., Perkin. Trans. 1, 1998: 157-169) und Smithrud et al. (Current Opinion in Biotechnology, 8, 1997: 459-466) zu entnehmen. Weitere katalytische Antikörper werden beispielsweise in den Schutzrechten US 5,576,174 oder US 5,190,865 beschrieben. Kata lytische Antikörper besitzen im Vergleich zu den entsprechenden Enzymen meist ein deutlich breiteres Substratspektrum (siehe Lerner et al., Science, Vol. 278, 1997: 2085-2092). Die Reak tivitäten der katalytischen Antikörper sind jedoch in der Regel sehr gering. Eine große Ausnahme bildet die von Lerner et al. (Science, Vol. 278, 1997: 2085-2092) mit katalytischen Antikörpern beschriebene Aldolasereaktion, da in diesem Einzel fall die mit den Antikörpern erzielten Aktivitäten denen der enzymatischen Aktivität nahezu entsprechen. Da die katalytischen Aktivitäten, die mit den Antikörpern erreicht werden, im Ver gleich zu den entsprechenden enzymatischen Aktivitäten meist um Größenordnungen geringer sind, sind katalytische Antikörper für technische Synthesen bis jetzt nicht nutzbar.Chemical syntheses using catalytic antibodies have been around has been described in many works in the 80s. A Overview of syntheses with catalytic antibodies are at for example the review articles by Mader et al. (Chem. Rev., 97, 1997: 1281-1301), Stanley M. Roberts (J. Chem. Soc., Perkin. Trans. 1, 1998: 157-169) and Smithrud et al. (Current Opinion in Biotechnology, 8, 1997: 459-466). Other catalytic antibodies are, for example, in the Property rights US 5,576,174 or US 5,190,865 described. Kata have lytic antibodies compared to the corresponding ones Enzymes usually have a much wider range of substrates (see Lerner et al., Science, Vol. 278, 1997: 2085-2092). The Reak activities of the catalytic antibodies are usually very low. A major exception is that of Lerner et al. (Science, Vol. 278, 1997: 2085-2092) with catalytic Antibodies described aldolase reaction because in this single if the activities achieved with the antibodies match those of the almost correspond to enzymatic activity. Because the catalytic Activities achieved with the antibodies in Ver mostly to the corresponding enzymatic activities Orders of magnitude are smaller, are catalytic antibodies for Technical syntheses are not yet usable.

Ein Problem bei der Isolierung aktiverer Antikörper bzw. kata lytischer Antikörper allgemein liegt darin, daß aus einer Viel zahl durch die Immunisierung erzeugter Antikörper die Antikörper herausgesucht werden müssen, die katalytische Aktivität zeigen. In der Regel zeigt nur ein sehr geringer Prozentsatz der erzeugten Antikörper katalytische Aktivität. Um katalytische Antikörper mit einer guten enzymatischen Aktivität zu erhalten, muss deshalb eine Vielzahl von Antikörpern durchgescreent werden.A problem with the isolation of more active antibodies or kata lytic antibody in general is that from a lot number of antibodies generated by immunization the antibodies must be sought out that show catalytic activity. Usually only a very small percentage shows the generated antibodies catalytic activity. To catalytic To get antibodies with good enzymatic activity a large number of antibodies must therefore be screened.

Um eine Vielzahl von Antikörpern auf ihre katalytische Aktivität hin testen zu können, wurden, wie der Literatur zu entnehmen ist, verschiedene Wege beschritten. Der aufwendigste Weg ist das Aus testen einer Unzahl einzelner Antikörper zunächst auf Bindung des Haptens und anschließend der Test auf katalytische Aktivität. Zur Optimierung des Screening sind zwei Standardmethoden beschrieben worden. Als eine Standardmethode wird die sogenannte Phagen- Display-Technik zur Selektion von katalytischen Antikörpern verwendet, wie sie beispielsweise von Gao et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 94, 1997: 11777-11782), US 5,258,289, WO 95/27045 oder in EP-A-0 557 897 beschrieben wird. Diese Technik ermöglicht es, eine größere von Antikörpern auf ihre enzymatische Aktivität hin zu testen. Von Nachteil ist jedoch, daß die ursprünglich erzeugten Antikörper als Fragmente in das Phagengenom kloniert werden müssen. Dies erfordert zusätzliche Zeit. Durch die Umklonierung wird außerdem ein wesentlicher Vor teil bei der Erzeugung katalytischen Antikörper verloren, nämlich die Fähigkeit der Generierung einer natürlichen Diversität durch das Immunsystem. Von Nachteil ist weiterhin, daß zunächst nur die Bindungsfähigkeit der Antikörper untersucht wird und nicht sofort ihre katalytische Aktivität. Von Lerner et al. (Science, Vol. 275, 1997: 945-948) wird ein direkter Nachweis mit der Phagen- Display-Technik beschrieben. Als zweite Methode wurde der so genannte catELISA entwickelt (siehe Tawfik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 90, 1993: 373-377, Fastrez J., Molcular Biology, Vol. 7, 1997: 37-55 oder WO 94/16332). Hierbei wird zunächst das Substrat des katalytischen Antikörpers an einen festen Träger gebunden und anschließend mit den Antikörpern behandelt. Die Umsetzung des Substrats zum Produkt wird mit einem zweiten produktspezifischen Antikörper nachgewiesen. Nach dem dieser Antikörper an das Produkt gebunden hat, wird ein dritter Antikörper, der gegen den produktspezifischen Antikörper gerichtet ist, gebunden, der über eine Markierung die Reaktion detektierbar macht. Von Nachteil bei dieser Methode ist, daß für dieses Verfahren neben dem katalytischen Antikörper ein für das Produkt hochspezifischer Antikörper benötigt wird, der keinerlei Nebenreaktion mit dem Substrat zeigen darf.A variety of antibodies based on their catalytic activity to be able to test, as can be seen from the literature, went different ways. The most expensive way is to go out testing a myriad of individual antibodies first for binding the Haptens and then the test for catalytic activity. For Optimization of the screening two standard methods are described been. As a standard method, the so-called phage Display technology for the selection of catalytic antibodies used, as described for example by Gao et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 94, 1997: 11777-11782), US 5,258,289, WO 95/27045 or in EP-A-0 557 897. This Technique allows a larger amount of antibodies to be placed on your body to test enzymatic activity. The disadvantage is, however, that the originally generated antibodies as fragments in the Phage genome need to be cloned. This requires additional Time. The recloning also becomes an essential pre lost in the generation of catalytic antibodies, namely the ability to generate natural diversity through the immune system. Another disadvantage is that initially only Binding ability of the antibody is examined and not immediately their catalytic activity. By Lerner et al. (Science, Vol. 275, 1997: 945-948) a direct detection with the phage Display technology described. The second method was like this called catELISA developed (see Tawfik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 90, 1993: 373-377, Fastrez J., Molcular Biology, Vol. 7, 1997: 37-55 or WO 94/16332). Here will first the substrate of the catalytic antibody to one bound solid support and then with the antibodies treated. The conversion of the substrate to the product is carried out with a second product-specific antibody. After that this antibody has bound to the product is a third antibody, against the product-specific antibody is directed, bound via a label the reaction makes detectable. The disadvantage of this method is that for this method in addition to the catalytic antibody for the Highly specific antibody product is required, which does not require any Side reaction with the substrate may show.

Von Nachteil bei allen genannten Methoden ist, daß die kata lytischen Antikörper nur für eine einmalige Reaktion verwendet werden können und weitere Tests nicht möglich sind.A disadvantage of all the methods mentioned is that the kata lytic antibodies used only for a single reaction can be and further tests are not possible.

Es bestand daher die Aufgabe, ein Verfahren zur Selektion von katalytischen Antikörpern zu entwickeln, das die oben genannten Nachteile nicht aufweist, breit anwendbar und einfach durch führbar ist.It was therefore the task of a method for the selection of to develop catalytic antibodies that match the above Does not have disadvantages, widely applicable and easy to use is feasible.

Diese Aufgabe wurde durch das erfindungsgemäße Verfahren zur Selektion von katalytischen Antikörpern gelöst, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Antikörper immobilisiert und mit diesen immobilisierten Antikörpern eine chemische Verbindung A zu einem Produkt B umsetzt, das Auftreten des Produkts detektiert und diese Antikörper auswählt, die eine katalytische Aktivität zeigen. This object was achieved by the method according to the invention Selection of catalytic antibodies solved by this is characterized in that immobilized antibodies and with a chemical compound A to these immobilized antibodies converts to a product B, the occurrence of the product is detected and selects these antibodies that have a catalytic activity demonstrate.

Unter katalytischen Antikörpern sind im erfindungsgemäßen Ver fahren Antikörper zu verstehen, die eine gegenüber der nicht katalysierten Reaktion um mindestens den Faktor 2 bevorzugt um mindestens den Faktor 100 gesteigerte Reaktivität aufweisen.Under catalytic antibodies are in the ver drive antibodies to understand one versus the other catalyzed reaction preferred by at least a factor of 2 have reactivity increased by at least a factor of 100.

Unter katalytischen Antikörpern im erfindungsgemäßen Verfahren sind weiterhin polyklonale oder monoklonale Antikörper oder deren Fragmente prinzipiell aller Immunoglobulinklassen wie IgM, IgG, IgD, IgE, IgA oder ihre Subklassen, wie die Subklassen des IgG oder deren Mischungen zu verstehen. Bevorzugt sind IgA, IgG und seine Subklassen, wie beispielsweise IgG₁, IgG₂, IgG_2a, IgG_2b, IgG₃ oder IgG_M. Als Fragmente seien alle verkürzten oder veränderten Antikörperfragmente mit einer oder zwei das Substrat (= chemische Verbindung B) umsetzenden Bindungs- bzw. Katalysestellen wie Antikörperteile mit einer den Antikörper entsprechenden von leichter und schwerer Kette gebildeten Bindungsstelle wie Fv-, Fab- oder F(ab')₂-Fragmente oder Einzelstrangfragmente genannt. Bevorzugt sind verkürzte Doppelstrangfragmente wie Fv-, Fab- oder F(ab')₂. Diese Fragmente können beispielsweise auf enzymatischem wege durch Abspaltung des Fc-Teils der Antikörper mit Enzymen wie Papain oder Pepsin, durch chemische Oxidation oder durch gentechnische Manipulation der Antikörpergene erhalten werden. Auch genmanipulierte nichtverkürzte Fragmente oder Teilfragmente, die in Phagen eingeführt wurden, können vorteilhaft im Ver fahren verwendet werden. Unter katalytischen Antikörpern sind auch modifizierte Antikörper oder deren Fragmente zu verstehen, die nicht peptidische Bindungen oder modifizierte Aminosäuren enthalten. Bevorzugt werden monoklonale Antikörper oder deren Derivate (= Fragmente, modifizierte Antikörper) im erfindungs gemäßen Verfahren verwendet.Catalytic antibodies in the process according to the invention are furthermore to be understood to mean polyclonal or monoclonal antibodies or their fragments in principle of all immunoglobulin classes such as IgM, IgG, IgD, IgE, IgA or their subclasses, such as the subclasses of IgG or their mixtures. IgA, IgG and its subclasses, such as IgG ₁ , IgG ₂ , IgG _2a , IgG _2b , IgG ₃ or IgG _M, are preferred. Fragments include all shortened or modified antibody fragments with one or two binding or catalysis sites that convert the substrate (= chemical compound B), such as antibody parts with a binding site formed by light and heavy chains corresponding to the antibody, such as Fv, Fab or F ( ') Called ₂ fragments or single-strand fragments. Shortened double-strand fragments such as Fv, Fab or F (ab ') ₂ are preferred. These fragments can be obtained, for example, enzymatically by cleaving off the Fc part of the antibodies with enzymes such as papain or pepsin, by chemical oxidation or by genetic engineering manipulation of the antibody genes. Genetically manipulated non-truncated fragments or partial fragments that have been introduced into phages can also be used advantageously in the process. Catalytic antibodies are also understood to mean modified antibodies or their fragments which contain non-peptide bonds or modified amino acids. Monoclonal antibodies or their derivatives (= fragments, modified antibodies) are preferably used in the method according to the invention.

Die Antikörper, Antikörperfragmente oder Antikörper-tragende Phagen können allein oder in Mischungen verwendet werden.The antibodies, antibody fragments or antibody-bearing Phages can be used alone or in mixtures.

Die katalytischen Antikörper werden zunächst im erfindungsgemäßen Verfahren auf einem festen Träger immobilisiert. Es können ein zelne Antikörper oder Mischungen von Antikörpern immobilisiert werden. Für ein rasches Screening werden vorteilhaft zunächst definierte Mischungen verschiedener Antikörper zusammen immobili siert. Zeigen diese Mischungen eine katalytische Aktivität, so werden die Antikörper nochmals einzeln im erfindungsgemäßen Ver fahren auf katalytische Aktivität getestet.The catalytic antibodies are first in the invention Process immobilized on a solid support. It can be a immobilized individual antibodies or mixtures of antibodies become. For quick screening, be advantageous first defined mixtures of different antibodies together immobilized siert. These mixtures show catalytic activity, so the antibodies are again individually in the ver drive tested for catalytic activity.

Diese Träger können aus natürlichen, anorganischen oder organischen Materialien beispielsweise aus Materialien wie Glas, Latex, quervernetzten Polystyrolen, quervernetzten Polyacryl amiden, Keramik, Quarz, kolloidale Metallpartikel, Stein, Holz, Kunststoff, natürlichen Polymeren, Gummi, Silicagele, Aerogele, Hydrogele oder Porzellan, bestehen. Die Materialien können in reiner Form, als Mischungen, Legierungen oder Blends oder in verschiedenen Schichten oder nach Beschichtung verwendet werden.These carriers can be made from natural, inorganic or organic materials, for example from materials such as glass, Latex, cross-linked polystyrenes, cross-linked polyacrylic amides, ceramics, quartz, colloidal metal particles, stone, wood, Plastic, natural polymers, rubber, silica gels, aerogels, Hydrogels or porcelain. The materials can be in pure form, as mixtures, alloys or blends or in different layers or after coating.

Unter quervernetzten Polystyrolen, quervernetzten Polyacrylamiden oder anderen Harzen sind beispielsweise Polyacrylamid, Poly methacrylamid, Polyhydroxyethylmethacrylat, Polyamid, Poly styrol, (Meth)acrylat-Copolymere von beispielsweise (Meth)- acrylsäure, (Meth)acrylsäureestern und/oder Itaconsäure, Croton säure, Maleinsäure, PU-Schäume, Epoxydharze oder sonstige Copolymere zu verstehen.Under cross-linked polystyrenes, cross-linked polyacrylamides or other resins are, for example, polyacrylamide, poly methacrylamide, polyhydroxyethyl methacrylate, polyamide, poly styrene, (meth) acrylate copolymers of, for example, (meth) - acrylic acid, (meth) acrylic acid esters and / or itaconic acid, croton acid, maleic acid, PU foams, epoxy resins or others To understand copolymers.

Als natürliche Polymere bzw. Träger seien beispielsweise Agarose, Cellulose, Alginat, Chitosan, Dextran, Levan, Xanthan, Collagen, Gellan, X-Carrageenan, Agar, Pectin, Ramanian, Holzschnitzel, mikrokristalline Cellulose, Hexosamine oder Gelatine genannt.Examples of natural polymers or carriers are agarose, Cellulose, alginate, chitosan, dextran, levan, xanthan, collagen, Gellan, X-Carrageenan, agar, pectin, Ramanian, wood chips, called microcrystalline cellulose, hexosamine or gelatin.

Ebenfalls geeignete Träger sind Kieselerde, Kieselgur, Metall oxide oder Blähton.Also suitable carriers are silica, diatomaceous earth, metal oxide or expanded clay.

Vorteilhafte Träger sind beispielsweise poröse Materialen wie Sinterglas, Sintermetalle, poröse Keramiken oder Harze, die eine große innere Oberfläche in einem Bereich von 5 bis 2000 m²/g Trägermaterial, bevorzugt 40 bis 800 m²/g, besonders bevorzugt 50 bis 500 m²/g, haben. Der Porendurchmesser der Materialen sollte vorteilhafterweise so gewählt werden, daß keine Stofftransport limitierungen durch Diffusion der Substrate oder Produkte oder durch aktiven Stofffluß entstehen. Der Porendurchmesser liegt zweckmäßigerweise zwischen 10 nm bis 500 nm, bevorzugt zwischen 30 nm bis 200 nm.Advantageous supports are, for example, porous materials such as sintered glass, sintered metals, porous ceramics or resins which have a large inner surface in a range from 5 to 2000 m ² / g of support material, preferably 40 to 800 m ² / g, particularly preferably 50 to 500 m ² / g, have. The pore diameter of the materials should advantageously be chosen so that there are no mass transport restrictions due to diffusion of the substrates or products or due to active material flow. The pore diameter is advantageously between 10 nm to 500 nm, preferably between 30 nm to 200 nm.

Die verwendeten Trägermaterialien sollten vorteilhafterweise ein möglichst großes Porenvolumen (< 1 ml/g Trägermaterial) besitzen.The carrier materials used should advantageously be one have the largest possible pore volume (<1 ml / g carrier material).

Weitere vorteilhafte Träger sind plane Träger, die vorteilhaft Vertiefungen zur Messung enthalten können und eine leichte Detektion der katalytischen Reaktion ermöglichen wie Mikro titerplatten oder Glasplatten wie Objektträger. Diese Träger ermöglichen eine einfache Automatisierung des erfindungsgemäßen Verfahrens mit üblichen Geräten, bei dem eine Vielzahl von Reaktionen parallel oder nacheinander ausgeführt werden kann.Other advantageous carriers are flat carriers, which are advantageous Wells for measurement can contain and a light one Enable detection of the catalytic reaction like micro titer plates or glass plates such as slides. These carriers enable simple automation of the invention Procedure with conventional equipment, in which a variety of Reactions can be carried out in parallel or in succession.

Trägermaterialien, die wenig oder gar nicht kompressibel sind, sind gegenüber kompressiblen Materialien bevorzugt, wenn bei spielsweise eine katalytische Reaktion in Durchflußreaktoren, beispielsweise in einer üblichen Chromatographiesäule, durch geführt werden soll, d. h. für derartige Reaktionen sollten die verwendeten Träger vorteilhafterweise eine gewisse Druck stabilität und ein günstiges Sedimentationsverhalten besitzen.Backing materials that are little or not compressible, are preferred over compressible materials if at for example a catalytic reaction in flow reactors, for example in a conventional chromatography column to be managed, d. H. for such reactions should the carrier used advantageously a certain pressure have stability and favorable sedimentation behavior.

Von Vorteil ist bei längerer mechanischer Belastung auch eine günstige Abriebfestigkeit der verwendeten Träger.In the case of prolonged mechanical stress, one is also advantageous favorable abrasion resistance of the carrier used.

Die Antikörper können auf der Oberfläche des Trägers oder im Inneren oder auf beidem gebunden sein.The antibodies can be on the surface of the support or in the Be bound inside or on both.

Zur Anbindung der katalytischen Antikörper an die Träger sind diese gegebenenfalls in einer dem Fachmann bekannten Weise zu modifizieren. Die Immobilisierung kann über Van der Waals-Kräfte erfolgen, über niedermolekulare Substanzen (Avidin/Streptavidin, Biotin), über Proteine wie Protein A oder Antikörper, die gegen die katalytischen Antikörper gerichtet sind, oder über reaktive Gruppen wie Carboxyl-, Amino-, Thiol-, Hydroxy- oder Aldehyd gruppen. Auch Maleinsäureanhydridgruppen sind zur Bindung geeig net. Vorteilhaft werden zur Anbindung Anti-Antikörper verwendet. Zur Immobilisierung geeignete vorteilhafte beschichtete Mikro titerplatten werden von einer Reihe von Firmen wie Pierce, Nung oder Dunn Labortechnik GmbH (Thelenberg 6, 535567 Ansbach) vertrieben. Geeignete polymere Träger sind aus der Fest phasensynthese speziell aus der Festphasen-Peptidsynthese oder -Nucleinsäurensynthese bekannt und ebenfalls im Handel erhält lich.To connect the catalytic antibodies to the supports if necessary, in a manner known to the person skilled in the art modify. Immobilization can be done via Van der Waals forces low molecular weight substances (avidin / streptavidin, Biotin), via proteins such as Protein A or antibodies that are against the catalytic antibodies are directed, or via reactive Groups such as carboxyl, amino, thiol, hydroxy or aldehyde groups. Maleic anhydride groups are also suitable for binding net. Anti-antibodies are advantageously used for binding. Coated micro suitable for immobilization titer plates are made by a number of companies such as Pierce, Nung or Dunn Labortechnik GmbH (Thelenberg 6, 535567 Ansbach) expelled. Suitable polymeric carriers are from the solid phase synthesis specifically from solid phase peptide synthesis or -Nucleic acid synthesis known and also commercially available Lich.

Die Bindung an die feste Träger erfolgt dabei in an sich bekannter Weise.The binding to the solid carrier is done in itself known way.

Durch die vorteilhafte Bindung der katalytischen Antikörper im erfindungsgemäßen Verfahren an die festen Träger können die Anti körper im Gegensatz zu oben beschriebenem Stand der Technik mehr fach verwendet werden und so mehrere Umsetzungen mit einem Anti körper durchgeführt werden. Dadurch ist es möglich, eine größere Menge katalytischer Antikörper zu identifizieren. Substratspek tren der Antikörper lassen sich so leicht ermitteln.Due to the advantageous binding of the catalytic antibodies in the Process according to the invention on the solid carrier can the anti body in contrast to the prior art described above can be used several times and thus several implementations with one anti body. This makes it possible to get a larger one Identify amount of catalytic antibody. Substrate spec The antibodies can be easily determined.

Vorteilhaft lassen sich die Produkte B über kolorimetrische, fluorimetrische oder densitometrische Analysenmethoden nach weisen. Dabei können beispielsweise die Lichtstreuung, Trübung, wellenlängenabhängige Lichtabsorption oder Fluoreszenz zur Detektion genutzt werden. Häufig werden Substrate verwendet, die nach Spaltung einen leicht meßbaren Farbstoff bilden. Auch übliche chemische Nachweisverfahren wie HPLC, Gaschromatographie oder Dünnschichtchromatographie oder immunologische Verfahren wie ELISA können vorteilhaft zum Produktnachweis verwandt werden. Products B can be advantageously used via colorimetric, fluorimetric or densitometric analysis methods point. For example, light scattering, turbidity, wavelength-dependent light absorption or fluorescence for Detection can be used. Substrates are often used which form an easily measurable dye after cleavage. Also Common chemical detection methods such as HPLC, gas chromatography or thin layer chromatography or immunological methods such as ELISA can advantageously be used for product verification.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird vorteilhaft in einem wäßrigen Medium durchgeführt. Bevorzugt wird die Selektion in Gegenwart eines organischen Lösungsmittels wie Methanol, Ethanol oder Dimethylsulfoxid durchgeführt. Das Verfahren kann aber auch in einem reinen organischen Lösungsmittel durchgeführt werden, wobei als organisches Lösungsmittel prinzipiell alle Lösungsmittel in Betracht kommen wie protische oder aprotische Lösungsmittel wie Hexan, Toluol, Benzol, MTB oder Essigester.The process according to the invention is advantageously carried out in an aqueous Medium performed. Selection in the presence is preferred an organic solvent such as methanol, ethanol or Dimethyl sulfoxide performed. The procedure can also be in a pure organic solvent, where as an organic solvent in principle all solvents in Consider like protic or aprotic solvents like Hexane, toluene, benzene, MTB or ethyl acetate.

Vorteilhafterweise wird das Verfahren bei einer Temperatur zwischen 10°C bis 60°C, bevorzugt zwischen 20°C bis 50°C, besonders bevorzugt zwischen 45°C bis 50°C, durchgeführt. Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren können vorteilhaft mehrere Substrate (= chemische Verbindung A) auf Umsetzung mit den immobilisierten Antikörpern getestet werden. So können leicht Substratspektren der katalytischen Antikörper erstellt werden. Außerdem können vorteilhaft Reaktionsparameter untersucht werden, wie die Variation der Temperatur oder des Lösungsmittels, even tuelle Cofaktoren oder sonstige Parameter. Weiter können vorteil haft Aussagen über die Reaktionsgeschwindigkeit gemacht werden (durch kinetische Studien).The process is advantageously carried out at one temperature between 10 ° C to 60 ° C, preferably between 20 ° C to 50 ° C, particularly preferably carried out between 45 ° C to 50 ° C. With the method according to the invention, several can advantageously Substrates (= chemical compound A) for reaction with the immobilized antibodies are tested. So can easily Substrate spectra of the catalytic antibodies are created. In addition, reaction parameters can advantageously be examined, like the variation in temperature or solvent, even current cofactors or other parameters. Another advantage statements about the reaction speed are made (through kinetic studies).

Auch die Substrate können für das erfindungsgemäße Verfahren immobilisiert werden, wie es aus dem von Tawfik (siehe oben) beschriebenen catELISA bekannt ist. Durch die Immobilisierung des Substrats können die vorteilhaften Eigenschaften beider Methoden kombiniert werden. Dabei wird das Substrat wie für den catELISA beschrieben auf einem Träger (= Untergrund) befestigt, und der beispielsweise auf einem polymeren Träger immobilisierte kata lytische Antikörper wird zum Substrat zugegeben und die Reaktion durchgeführt. Anschließend kann das Produkt wie bei Tawfik beschrieben nachgewiesen oder aber abgespalten werden und an schließend detektiert werden über HPLC, GC oder anderen Analysen methoden.The substrates can also be used for the process according to the invention be immobilized, as it is from that of Tawfik (see above) described catELISA is known. By immobilizing the Substrate can have the beneficial properties of both methods be combined. The substrate is the same as for the catELISA described attached to a support (= underground), and the for example, kata immobilized on a polymeric support lytic antibody is added to the substrate and the reaction carried out. The product can then be used as with Tawfik described demonstrated or split off and on finally detected by HPLC, GC or other analyzes methods.

Unter chemischer Verbindung A im erfindungsgemäßen Verfahren sind prinzipiell alle chemischen Verbindungen zu verstehen, wie bei spielsweise Proteine, Peptide, Nukleinsäuren wie RNA oder DNA, Polysaccharide, Lipide oder sonstige niedermolekulare organische Substanzen (= < 1000 Dalton). Bevorzugt sind unter chemischer Verbindung niedermolekulare Substanzen zu verstehen.Chemical compound A are in the process according to the invention to understand in principle all chemical compounds, as with for example proteins, peptides, nucleic acids such as RNA or DNA, Polysaccharides, lipids or other low-molecular organic Substances (= <1000 daltons). Preferred are chemical Compound to understand low molecular substances.

Bevorzugt werden im erfindungsgemäßen Verfahren durch immobili sierte Antikörper niedermolekulare Substanzen der allgemeinen Formel I (= chemische Verbindung A)
In the process according to the invention, low-molecular substances of the general formula I (= chemical compound A) are preferred by immobilized antibodies

zu einem Produkt B der allgemeinen Formel II unter Zyklisierung umgesetzt
converted to a product B of the general formula II with cyclization

wobei die Substituenten und Variablen in den Formeln I und II folgende Bedeutung haben:
- - - = eine Doppelbindung,
R¹, R³, R⁴ unabhängig voneinander Wasserstoff oder substituiertes oder unsubstituiertes, verzweigtes oder unverzweigtes C₁-C₁₀-Alkyl-.
R² = Wasserstoff oder -OR⁶,
R⁵ = substituiertes oder unsubstituiertes, verzweigtes oder unverzweigtes C₁-C₂₁-Alkyl-, C₂-C₂₁-Alkenyl-, C₂-C₂₁-Alkinyl-, -CH₂-R⁷, -OR⁷, CN, Halogen oder OAc.
R⁶ = Wasserstoff, C₁-C₂₀-Alkyl-, C₂-C₂₀-Alkenyl-, C₁-C₂₀-Alkyl carbonyl-, C₂-C₂₀-Alkenylcarbonyl-, Aryl-, Hetaryl- oder eine abspaltbare Schutzgruppe,
R⁷ = C₁-C₂₀-Alkyl-, C₂-C₂₀-Alkenyl-, C₂-C₂₀-Alkinyl-, Aryl-, Hetaryl- oder -(CH₂)_n-XR⁶, wobei X = O, S oder N und n = 0, 1 oder 2. where the substituents and variables in the formulas I and II have the following meaning:
- - - = a double bond,
R ¹ , R ³ , R ⁴ independently of one another are hydrogen or substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₁₀ -alkyl.
R ² = hydrogen or -OR ⁶ ,
R ⁵ = substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₂₁ -alkyl-, C ₂ -C ₂₁ -alkenyl-, C ₂ -C ₂₁ -alkynyl-, -CH ₂ -R ⁷ , -OR ⁷ , CN, Halogen or OAc.
R ⁶ = hydrogen, C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₁ -C ₂₀ alkyl carbonyl, C ₂ -C ₂₀ alkenylcarbonyl, aryl, hetaryl or a cleavable Protecting group,
R ⁷ = C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₂ -C ₂₀ alkynyl, aryl, hetaryl or - (CH ₂ ) _n -XR ⁶ , where X = O , S or N and n = 0, 1 or 2.

Unter Verbindungen der Formel I, die durch eine Doppelbindung im Formelbild I durch die gestrichelte Linie gekennzeichnet ist, sind die folgenden Verbindungen der Formeln Ia, Ib und Ic zu ver stehen:
Compounds of the formula I, which is identified by a double bond in the formula I by the dashed line, are the following compounds of the formulas Ia, Ib and Ic:

wobei die Substituenten die oben genannte Bedeutung haben. R¹, R³, R⁴ bezeichnen in den Verbindungen der Formeln I, II, Ia, Ib und Ic unabhängig voneinander Wasserstoff oder substi tuiertes oder unsubstituiertes, verzweigtes oder unverzweigtes C₁-C₁₀-Alkyl.where the substituents have the meaning given above. R ¹ , R ³ , R ⁴ in the compounds of the formulas I, II, Ia, Ib and Ic independently of one another denote hydrogen or substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₁₀ -alkyl.

Als Alkylreste seien substituierte oder unsubstituierte ver zweigte oder unverzweigte C₁-C₁₀-Alkylketten, wie beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, 1-Methylethyl, n-Butyl, 1-Methylpropyl-, 2-Methylpropyl, 1,1-Dimethylethyl, n-Pentyl, 1-Methylbutyl, 2-Methylbutyl, 3-Methylbutyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, n-Hexyl, 1,1-Dimethylpropyl, 1,2-Dimethylpropyl, 1-Methylpentyl, 2-Methylpentyl, 3-Methylpentyl, 4-Methylpentyl, 1,1-Dimethyl butyl, 1,2-Dimethylbutyl, 1,3-Dimethylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 2,3-Dimethylbutyl, 3,3-Dimethylbutyl, 1-Ethylbutyl, 2-Ethylbutyl, 1,1,2-Trimethylpropyl, 1,2,2-Trimethylpropyl, 1-Ethyl-1-methyl propyl, 1-Ethyl-2-methylpropyl, n-Heptyl, n-Octyl, n-Nonyl oder n-Decyl, genannt.As alkyl radicals are substituted or unsubstituted ver branched or unbranched C ₁ -C ₁₀ alkyl chains, such as methyl, ethyl, n-propyl, 1-methylethyl, n-butyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, 1,1-dimethylethyl , n-pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 1-methylpentyl, 2-methylpentyl , 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 1-ethylbutyl, 2-ethylbutyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1-ethyl-1-methylpropyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl or n -Decyl called.

Als Substituenten der genannten Reste von R¹, R³ und R⁴ kommen prinzipiell ein oder mehrere Substituenten wie Halogen wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, -OAcyl, -OAlkyl, Alkyl, Aryl, -OAryl, Alkoxy, -OAlkoxy oder Benzyloxy in Frage.In principle, one or more substituents such as halogen, such as fluorine, chlorine or bromine, cyano, nitro, amino, hydroxyl, -Oacyl, -Oalkyl, alkyl, aryl, -Oaryl, come as substituents of the radicals mentioned R ¹ , R ³ and R ⁴ . Alkoxy, -Oalkoxy or benzyloxy in question.

Als bevorzugte Reste von R¹, R³, R⁴ seien Wasserstoff, Methyl oder Hydroxymethyl genannt.Preferred residues of R ¹ , R ³ , R ⁴ are hydrogen, methyl or hydroxymethyl.

R² bezeichnet in den Verbindungen der Formeln I, II, IIa, IIb und IIc Wasserstoff oder -OR⁶.In the compounds of the formulas I, II, IIa, IIb and IIc, R ² denotes hydrogen or -OR ⁶ .

R⁶ bezeichnet in den Formeln Wasserstoff, C₁-C₂₀-Alkyl-, C₂-C₂₀-Alkenyl-, C₁-C₂₀-Alkylcarbonyl-, C₂-C₂₀-Alkenylcarbonyl-, Aryl-, Hetaryl- oder eine abspaltbare Schutzgruppe. R ⁶ in the formulas denotes hydrogen, C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₁ -C ₂₀ alkylcarbonyl, C ₂ -C ₂₀ alkenylcarbonyl, aryl, hetaryl or a removable protective group.

Als Alkylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₁-C₂₀-Alkyl ketten, wie beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, 1-Methyl ethyl, n-Butyl, 1-Methylpropyl-, 2-Methylpropyl, 1,1-Dimethyl ethyl, n-Pentyl, 1-Methylbutyl, 2-Methylbutyl, 3-Methylbutyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, n-Hexyl, 1,1-Dimethylpropyl, 1,2-Dimethylpropyl, 1-Methylpentyl, 2-Methylpentyl, 3-Methyl pentyl, 4-Methylpentyl, 1,1-Dimethylbutyl, 1,2-Dimethylbutyl, 1,3-Dimethylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 2,3-Dimethylbutyl, 3,3-Dimethylbutyl, 1-Ethylbutyl, 2-Ethylbutyl, 1,1,2-Trimethyl propyl, 1,2,2-Trimethylpropyl, 1-Ethyl-1-methylpropyl, 1-Ethyl-2-methylpropyl, n-Heptyl, n-Octyl, n-Nonyl, n-Decyl, n-Undecyl, n-Dodecyl, n-Tridecyl, n-Tetradecyl, n-Pentadecyl, n-Hexadecyl, n-Heptadecyl, n-Octadecyl, n-Nonadecyl oder n-Eicosyl, genannt.As alkyl radicals are branched or unbranched C ₁ -C ₂₀ alkyl chains, such as methyl, ethyl, n-propyl, 1-methyl ethyl, n-butyl, 1-methyl propyl, 2-methyl propyl, 1,1-dimethyl ethyl, n-pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 1-methylpentyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 1-ethylbutyl, 2 -Ethylbutyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1-ethyl-1-methylpropyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n- Decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, n-pentadecyl, n-hexadecyl, n-heptadecyl, n-octadecyl, n-nonadecyl or n-eicosyl.

Als Alkenylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₂-C₂₀-Alkenylketten, wie beispielsweise Ethenyl, Propenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl, 3-Butenyl, 2-Methylpropenyl, 1-Pentenyl, 2-Pentenyl, 3-Pentenyl, 4-Pentenyl, 1-Methyl-1-butenyl, 2-Methyl-1-butenyl, 3-Methyl-1-butenyl, 1-Methyl-2-butenyl, 2-Methyl-2-butenyl, 3-Methyl-2-butenyl, 1-Methyl-3-butenyl, 2-Methyl-3-butenyl, 3-Methyl-3-butenyl, 1,1-Dimethyl-2-propenyl, 1,2-Dimethyl-1-propenyl, 1,2-Dimethyl-2-propenyl, 1-Ethyl-1- propenyl, 1-Ethyl-2-propenyl, 1-Hexenyl, 2-Hexenyl, 3-Hexenyl, 4-Hexenyl, 5-Hexenyl, 1-Methyl-1-pentenyl, 2-Methyl-1-pentenyl, 3-Methyl-1-pentenyl, 4-Methyl-1-pentenyl, 1-Methyl-2-pentenyl, 2-Methyl-2-pentenyl, 3-Methyl-2-pentenyl, 4-Methyl-2-pentenyl, 1-Methyl-3-pentenyl, 2-Methyl-3-pentenyl, 3-Methyl-3-pentenyl, 4-Methyl-3-pentenyl, 1-Methyl-4-pentenyl, 2-Methyl-4-pentenyl, 3-Methyl-4-pentenyl, 4-Methyl-4-pentenyl, 1,1-Dimethyl-2-butenyl, 1,1-Dimethyl-3-butenyl, 1,2-Dimethyl-1-butenyl, 1,2-Dimethyl- 2-butenyl, 1,2-Dimethyl-3-butenyl, 1,3-Dimethyl-1-butenyl, 1,3-Dimethyl-2-butenyl, 1,3-Dimethyl-3-butenyl, 2,2-Dimethyl- 3-butenyl, 2,3-Dimethyl-1-butenyl, 2,3-Dimethyl-2-butenyl, 2,3-Dimethyl-3-butenyl, 3,3-Dimethyl-1-butenyl, 3,3-Dimethyl- 2-butenyl, 1-Ethyl-1-butenyl, 1-Ethyl-2-butenyl, 1-Ethyl-3- butenyl, 2-Ethyl-1-butenyl, 2-Ethyl-2-butenyl, 2-Ethyl-3-butenyl, 1,1,2-Trimethyl-2-propenyl, 1-Ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-Ethyl- 2-methyl-1-propenyl, 1-Ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1-Heptenyl, 2-Heptenyl, 3-Heptenyl, 4-Heptenyl, 5-Heptenyl, 6-Heptenyl, 1-Octenyl, 2-Octenyl, 3-Octenyl, 4-Octenyl, 5-Octenyl, 6-Octenyl, 7-Octenyl, Nonenyl, Dekenyl, Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octa dekenyl, Nonadekenyl oder Eicoxenyl, genannt. Alkenyl radicals are branched or unbranched C ₂ -C ₂₀ alkenyl chains, such as, for example, ethenyl, propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 2-methylpropenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4- Pentenyl, 1-methyl-1-butenyl, 2-methyl-1-butenyl, 3-methyl-1-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 3-methyl-3-butenyl, 1,1-dimethyl-2-propenyl, 1,2-dimethyl-1-propenyl, 1,2-dimethyl 2-propenyl, 1-ethyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-propenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-hexenyl, 1-methyl-1-pentenyl, 2- Methyl-1-pentenyl, 3-methyl-1-pentenyl, 4-methyl-1-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-methyl-2-pentenyl, 4-methyl- 2-pentenyl, 1-methyl-3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 3-methyl-3-pentenyl, 4-methyl-3-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4- pentenyl, 3-methyl-4-pentenyl, 4-methyl-4-pentenyl, 1,1-dimethyl-2-butenyl, 1,1-dimethyl-3-butenyl, 1,2-dimethyl-1-butenyl, 1, 2-dimethyl-2-butenyl, 1 , 2-dimethyl-3-butenyl, 1,3-dimethyl-1-butenyl, 1,3-dimethyl-2-butenyl, 1,3-dimethyl-3-butenyl, 2,2-dimethyl-3-butenyl, 2nd , 3-dimethyl-1-butenyl, 2,3-dimethyl-2-butenyl, 2,3-dimethyl-3-butenyl, 3,3-dimethyl-1-butenyl, 3,3-dimethyl-2-butenyl, 1 -Ethyl-1-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 2-ethyl-1-butenyl, 2-ethyl-2-butenyl, 2-ethyl-3-butenyl, 1.1 , 2-trimethyl-2-propenyl, 1-ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1-heptenyl, 2nd -Heptenyl, 3-heptenyl, 4-heptenyl, 5-heptenyl, 6-heptenyl, 1-octenyl, 2-octenyl, 3-octenyl, 4-octenyl, 5-octenyl, 6-octenyl, 7-octenyl, nonenyl, decenyl , Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octa Dekenyl, Nonadekenyl or Eicoxenyl.

Als Alkylcarbonylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₁-C₂₀-Alkylketten, wie beispielsweise Methylcarbonyl, Ethyl carbonyl, n-Propylcarbonyl, 1-Methylethylcarbonyl, n-Butyl carbonyl, 1-Methylpropylcarbonyl, 2-Methylpropylcarbonyl, 1,1-Di methylethylcarbonyl, n-Pentylcarbonyl, 1-Methylbutylcarbonyl, 2-Methylbutylcarbonyl, 3-Methylbutylcarbonyl, 2,2-Dimethylpropyl carbonyl, 1-Ethylpropylcarbonyl, n-Hexylcarbonyl, 1,1-Dimethyl propylcarbonyl, 1,2-Dimethylpropylcarbonyl, 1-Methylpentyl carbonyl, 2-Methylpentylcarbonyl, 3-Methylpentylcarbonyl, 4-Methylpentylcarbonyl, 1,1-Dimethylbutylcarbonyl, 1,2-Dimethyl butylcarbonyl, 1,3-Dimethylbutylcarbonyl, 2,2-Dimethylbutyl carbonyl, 2,3-Dimethylbutylcarbonyl, 3,3-Dimethylbutylcarbonyl, 1-Ethylbutylcarbonyl, 2-Ethylbutylcarbonyl, 1,1,2-Trimethyl propylcarbonyl, 1,2,2-Trimethylpropylcarbonyl, 1-Ethyl-1-methyl propylcarbonyl, 1-Ethyl-2-methylpropylcarbonyl, n-Heptylcarbonyl, n-Octylcarbonyl, n-Nonylcarbonyl, n-Decylcarbonyl, n-Undecyl carbonyl, n-Dodecylcarbonyl, n-Tridecylcarbonyl, n-Tetradecyl carbonyl, n-Pentadecylcarbonyl, n-Hexadecylcarbonyl, n-Hepta decylcarbonyl, n-Octadecylcarbonyl, n-Nonadecylcarbonyl oder n-Eicosylcarbonyl, genannt.As alkylcarbonyl radicals are branched or unbranched C ₁ -C ₂₀ alkyl chains, such as methylcarbonyl, ethyl carbonyl, n-propylcarbonyl, 1-methylethylcarbonyl, n-butyl carbonyl, 1-methylpropylcarbonyl, 2-methylpropylcarbonyl, 1,1-dimethylethylcarbonyl, n -Pentylcarbonyl, 1-methylbutylcarbonyl, 2-methylbutylcarbonyl, 3-methylbutylcarbonyl, 2,2-dimethylpropyl carbonyl, 1-ethylpropylcarbonyl, n-hexylcarbonyl, 1,1-dimethylpropylcarbonyl, 1,2-dimethylpropylcarbonyl, 1-methylpentyl carbonyl, 2- Methylpentylcarbonyl, 3-methylpentylcarbonyl, 4-methylpentylcarbonyl, 1,1-dimethylbutylcarbonyl, 1,2-dimethylbutylcarbonyl, 1,3-dimethylbutylcarbonyl, 2,2-dimethylbutylcarbonyl, 2,3-dimethylbutylcarbonyl, 3,3-dimethylbutylcarbonyl, 1- Ethyl butyl carbonyl, 2-ethyl butyl carbonyl, 1,1,2-trimethyl propyl carbonyl, 1,2,2-trimethyl propyl carbonyl, 1-ethyl-1-methyl propyl carbonyl, 1-ethyl-2-methyl propyl carbonyl, n-heptyl carbonyl, n-octyl carbonyl, n- Nonylcarbonyl, n-decylcarbonyl, n-undecyl carbony l, n-dodecylcarbonyl, n-tridecylcarbonyl, n-tetradecyl carbonyl, n-pentadecylcarbonyl, n-hexadecylcarbonyl, n-hepta decylcarbonyl, n-octadecylcarbonyl, n-nonadecylcarbonyl or n-eicosylcarbonyl.

Als Alkenylcarbonylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₂-C₂₀-Alkenylketten, wie beispielsweise Ethenylcarbonyl, Propenylcarbonyl, 1-Butenylcarbonyl, 2-Butenylcarbonyl, 3-Butenylcarbonyl, 2-Methylpropenylcarbonyl, 1-Pentenylcarbonyl, 2-Pentenylcarbonyl, 3-Pentenylcarbonyl, 4-Pentenylcarbonyl, 1-Methyl-1-butenylcarbonyl, 2-Methyl-1-butenylcarbonyl, 3-Methyl- 1-butenylcarbonyl, 1-Methyl-2-butenylcarbonyl, 2-Methyl-2- butenylcarbonyl, 3-Methyl-2-butenylcarbonyl, 1-Methyl-3-butenyl carbonyl, 2-Methyl-3-butenylcarbonyl, 3-Methyl-3-butenylcarbonyl, 1,1-Dimethyl-2-propenylcarbonyl, 1,2-Dimethyl-1-propenylcarbonyl, 1,2-Dimethyl-2-propenylcarbonyl, 1-Ethyl-1-propenylcarbonyl, 1-Ethyl-2-propenylcarbonyl, 1-Hexenylcarbonyl, 2-Hexenylcarbonyl, 3-Hexenylcarbonyl, 4-Hexenylcarbonyl, 5-Hexenylcarbonyl, 1-Methyl-1-pentenylcarbonyl, 2-Methyl-1-pentenylcarbonyl, 3-Methyl-1-pentenylcarbonyl, 4-Methyl-1-pentenylcarbonyl, 1-Methyl-2-pentenylcarbonyl, 2-Methyl-2-pentenylcarbonyl, 3-Methyl-2-pentenylcarbonyl, 4-Methyl-2-pentenylcarbonyl, 1-Methyl-3-pentenylcarbonyl, 2-Methyl-3-pentenylcarbonyl, 3-Methyl-3-pentenylcarbonyl, 4-Methyl-3-pentenylcarbonyl, 1-Methyl-4-pentenylcarbonyl, 2-Methyl-4-pentenylcarbonyl, 3-Methyl-4-pentenylcarbonyl, 4-Methyl-4-pentenylcarbonyl, 1,1-Dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,1-Dimethyl-3-butenylcarbonyl, 1,2-Dimethyl-1-butenylcarbonyl, 1,2-Dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,2-Dimethyl-3-butenylcarbonyl, 1,3-Dimethyl-1-butenylcarbonyl, 1,3-Dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,3-Dimethyl-3-butenylcarbonyl, 2,2-Dimethyl-3-butenylcarbonyl, 2,3-Dimethyl-1-butenylcarbonyl, 2,3-Dimethyl-2-butenylcarbonyl, 2,3-Dimethyl-3-butenylcarbonyl, 3,3-Dimethyl-1-butenylcarbonyl, 3,3-Dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1-Ethyl-1-butenylcarbonyl, 1-Ethyl-2-butenylcarbonyl, 1-Ethyl- 3-butenylcarbonyl, 2-Ethyl-1-butenylcarbonyl, 2-Ethyl-2-butenyl carbonyl, 2-Ethyl-3-butenylcarbonyl, 1,1,2-Trimethyl-2-propenyl carbonyl, 1-Ethyl-1-methyl-2-propenylcarbonyl, 1-Ethyl-2-methyl- 1-propenylcarbonyl, 1-Ethyl-2-methyl-2-propenylcarbonyl, 1-Heptenylcarbonyl, 2-Heptenylcarbonyl, 3-Heptenylcarbonyl, 4-Heptenylcarbonyl, 5-Heptenylcarbonyl, 6-Heptenylcarbonyl, 1-Octenylcarbonyl, 2-Octenylcarbonyl, 3-Octenylcarbonyl, 4-Octenylcarbonyl, 5-Octenylcarbonyl, 6-Octenylcarbonyl, 7-Octenylcarbonyl, Nonenylcarbonyl, Dekenylcarbonyl, Undekenyl carbonyl, Dodekenylcarbonyl, Tridekenylcarbonyl, Tetradekenyl carbonyl, Pentadekenylcarbonyl, Hexadekenylcarbonyl, Hepta dekenylcarbonyl, Octadekenylcarbonyl, Nonadekenylcarbonyl oder Eicoxenylcarbonyl, genannt.As alkenylcarbonyl radicals are branched or unbranched C ₂ -C ₂₀ alkenyl chains, such as, for example, ethenylcarbonyl, propenylcarbonyl, 1-butenylcarbonyl, 2-butenylcarbonyl, 3-butenylcarbonyl, 2-methylpropenylcarbonyl, 1-pentenylcarbonyl, 2-pentenylcarbonyl, 3-pentenylcarbonyl, 4-pentenylcarbonyl Pentenylcarbonyl, 1-methyl-1-butenylcarbonyl, 2-methyl-1-butenylcarbonyl, 3-methyl-1-butenylcarbonyl, 1-methyl-2-butenylcarbonyl, 2-methyl-2-butenylcarbonyl, 3-methyl-2-butenylcarbonyl, 1-methyl-3-butenyl carbonyl, 2-methyl-3-butenylcarbonyl, 3-methyl-3-butenylcarbonyl, 1,1-dimethyl-2-propenylcarbonyl, 1,2-dimethyl-1-propenylcarbonyl, 1,2-dimethyl -2-propenylcarbonyl, 1-ethyl-1-propenylcarbonyl, 1-ethyl-2-propenylcarbonyl, 1-hexenylcarbonyl, 2-hexenylcarbonyl, 3-hexenylcarbonyl, 4-hexenylcarbonyl, 5-hexenylcarbonyl, 1-methyl-1-pentenylcarbonyl, 2 -Methyl-1-pentenylcarbonyl, 3-methyl-1-pentenylcarbonyl, 4-methyl-1-pentenylcarbonyl, 1-methyl-2-pentenylcarbonyl, 2-methyl-2-pentenylcarbonyl, 3-methyl-2-penteny 1carbonyl, 4-methyl-2-pentenylcarbonyl, 1-methyl-3-pentenylcarbonyl, 2-methyl-3-pentenylcarbonyl, 3-methyl-3-pentenylcarbonyl, 4-methyl-3-pentenylcarbonyl, 1-methyl-4-pentenylcarbonyl, 2-methyl-4-pentenylcarbonyl, 3-methyl-4-pentenylcarbonyl, 4-methyl-4-pentenylcarbonyl, 1,1-dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,1-dimethyl-3-butenylcarbonyl, 1,2-dimethyl- 1-butenylcarbonyl, 1,2-dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,2-dimethyl-3-butenylcarbonyl, 1,3-dimethyl-1-butenylcarbonyl, 1,3-dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1,3-dimethyl- 3-butenylcarbonyl, 2,2-dimethyl-3-butenylcarbonyl, 2,3-dimethyl-1-butenylcarbonyl, 2,3-dimethyl-2-butenylcarbonyl, 2,3-dimethyl-3-butenylcarbonyl, 3,3-dimethyl- 1-butenylcarbonyl, 3,3-dimethyl-2-butenylcarbonyl, 1-ethyl-1-butenylcarbonyl, 1-ethyl-2-butenylcarbonyl, 1-ethyl-3-butenylcarbonyl, 2-ethyl-1-butenylcarbonyl, 2-ethyl- 2-butenyl carbonyl, 2-ethyl-3-butenylcarbonyl, 1,1,2-trimethyl-2-propenyl carbonyl, 1-ethyl-1-methyl-2-propenylcarbonyl, 1-ethyl-2-methyl-1-propenylcarbonyl, 1-et hyl-2-methyl-2-propenylcarbonyl, 1-heptenylcarbonyl, 2-heptenylcarbonyl, 3-heptenylcarbonyl, 4-heptenylcarbonyl, 5-heptenylcarbonyl, 6-heptenylcarbonyl, 1-octenylcarbonyl, 2-octenylcarbonyl, 3-octenylcarbonyl, 4-octenylcarbonyl, 5-octenylcarbonyl, 6-octenylcarbonyl, 7-octenylcarbonyl, nonenylcarbonyl, decenylcarbonyl, undekenyl carbonyl, dodekenylcarbonyl, tridekenylcarbonyl, tetradekenyl carbonyl, pentadekenylcarbonyl, hexadekenylcarbonyl, hepta decenylcarbonyl, octadekylylylyl, octadekylylylyl, octadekylylenyl, octadekylylenyl, octadekylylyl, octadylylenylenyl, octadekylylenyl, octadylylenylenyl, octadylylenyl, octadylylenyl, octadylylyl, or octadylylenylenyl,

Als Arylreste seien beispielsweise Phenyl, Methoxyphenyl oder Naphthyl oder aromatische Ringe oder Ringsysteme mit 6 bis 18 Kohlenstoffatomen im Ringsystem sowie bis zu 24 weiteren C-Atomen, die weitere nicht aromatische Ringe oder Ringsysteme mit 3 bis 8 C-Atomen im Ring bilden können, zu verstehen, die ggf. mit einem oder mehreren Resten wie Halogen, wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Alkyl, Alkoxy, oder anderen Resten substituiert sein können, genannt. Bevorzugt sind ggf. substituiertes Phenyl, Methoxyphenyl und Naphthyl.Examples of aryl radicals are phenyl, methoxyphenyl or Naphthyl or aromatic rings or ring systems with 6 to 18 carbon atoms in the ring system and up to 24 more C atoms, the other non-aromatic rings or ring systems with 3 to 8 carbon atoms in the ring can understand the optionally with one or more residues such as halogen, such as fluorine, Chlorine or bromine, cyano, nitro, amino, hydroxy, alkyl, alkoxy, or other radicals may be mentioned. Prefers are optionally substituted phenyl, methoxyphenyl and naphthyl.

Als Hetarylreste seien einfache oder kondensierte aromatische Ringsysteme mit einem oder mehreren heteroaromatischen 3- bis 7-gliedrigen Ringen, die ein oder mehrere Heteroatome wie N, O oder S enthalten können, und die ggf. mit einem oder mehreren Resten wie Halogen wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Thio, Alkyl, Alkoxy oder weiteren aromatischen oder weiteren gesättigten oder ungesättigten nicht aromatischen Ringen oder Ringsystemen substituiert sein können, genannt.As hetaryl residues are simple or condensed aromatic Ring systems with one or more heteroaromatic 3- to 7-membered rings containing one or more heteroatoms such as N, O or S can contain, and possibly with one or more Residues such as halogen such as fluorine, chlorine or bromine, cyano, nitro, Amino, hydroxy, thio, alkyl, alkoxy or other aromatic or other saturated or unsaturated non-aromatic Rings or ring systems can be substituted.

Als Substituenten der vorgenannten Reste kommen prinzipiell ein oder mehrere Substituenten wie Halogen wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Carboxy, Acyl, -OAcyl, OAlkyl, Halogenalkyl-, Alkyl-, Hydroxyalkyl-, Formyl, -OAlkenyl, Halogenalkenyl-, Alkenyl-, Hydroxyalkenyl-, -OAlkinyl, Halogen alkinyl-, Alkinyl-, Hydroxyalkinyl-, Aryl-, -OAryl, Alkoxy-, OAlkoxy oder Benzyloxy in Frage. In principle, substituents of the abovementioned radicals come one or more substituents such as halogen such as fluorine, chlorine or bromine, cyano, nitro, amino, hydroxy, carboxy, acyl, -Oacyl, Oalkyl, haloalkyl, alkyl, hydroxyalkyl, formyl, -Oalkenyl, Haloalkenyl, alkenyl, hydroxyalkenyl, -Oalkynyl, halogen alkynyl, alkynyl, hydroxyalkynyl, aryl, aryl, alkoxy, Oalkoxy or benzyloxy in question.

Die für R⁶ genannten Reste können direkt über ein Kohlenstoffatom oder in Form ihrer Ether oder Ester an das Grundgerüst gebunden sein.The radicals mentioned for R ⁶ can be bonded to the basic structure directly via a carbon atom or in the form of their ether or ester.

Ferner kann R⁶ eine Schutzgruppe darstellen. Das erfindungsgemäße Verfahren wird durch die Anwesenheit einer Schutzgruppe nicht negativ beeinflußt. Prinzipiell kann jede Schutzgruppe verwendet werden. Bevorzugte Schutzgruppen sind die in der Literatur bekannten Schutzgruppen für Hydroxylgruppen (T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons New York, 1981, Seite 14-71; P.J. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag Stuttgart, 1994, Seite 21-94). Beispielhaft seien folgende Schutzgruppen erwähnt:R ⁶ can furthermore represent a protective group. The process according to the invention is not adversely affected by the presence of a protective group. In principle, any protective group can be used. Preferred protective groups are the protective groups for hydroxyl groups known in the literature (TW Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons New York, 1981, pages 14-71; PJ Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag Stuttgart, 1994, page 21 -94). The following protective groups are mentioned as examples:

Ester, wie Acetat (Ac), Monochlor- bis Trichloracetate, Trifluor acetat, Phenylacetate, Triphenylmethoxyacetat, Phenoxyacetate, Halogenphenoxyacetate, Halogenalkylphenoxyacetate, Formiat, Benzoylformiat, 3-Phenylpropionat, Isobutyrat, Pivaloat (Pv), Adamantoat, Crotonate, Benzoate; Silylether wie Trimethylsilyle (TMS), Triethylsilyle (TES), Methyldi-t-butylsilyl, tert-Butyl dimethylsilyl (TBS oder TBDMS), tert-Butyldiphenylsilyl (TBDPS), Triphenylsilyl, Triisopropylsilyle (TIPS), Diethylisopropylsilyl (DEIPS), Isopropyldimethylsilyl (IPDMS), Thexyldimethylsilyl (TDS); aliphatische und aromatische Ether, wie Methyl (Me), Benzyle (Bn), o-Nitrobenzyl, p-Methoxybenzyle, 3,4-Dimethoxy benzylether, Trityle (Trt oder Tr), p-methoxyphenyldiphenylmethyl (MMTr), 4,4',4"-tris(benzoyloxy)trityl (TBTr), di(p-Methoxy phenyl)phenylmethyl (DMTr), tert-Butyle, 9-Phenyl-9-xanthenyl (pixyl), Allyle, 2-(Trimethylsilyl)ethyl (TMSE); Acetale (Alkoxyalkylether, Aryloxyalkylether oder Alkyloxyarylether), wie Methoxymethyl (MOM), Methylthiomethyl (MTM), 2-Methoxyethoxy methyl (MEM), 1-methoxy-1-methylethyl, 2-Ethoxyethyl (EE), 4-Methoxytetrahydropyran-4-yl (MTHP), Tetrahydropyran-2-yl, 2-(Trimethylsilyl)ethoxymethyl (SEM), 3,4-dimethoxybenzyl (DMB), Benzyloxymethyl, p-Methoxybenzyl (PMB), p-Methoxybenzyloxymethyl (PMBM) und Methoxycarbonyle und Allyloxycarbonyle (Alloc) sowie davon abgeleitete, gegebenenfalls alkylierte oder halogenierte Schutzgruppen, um nur einige der möglichen Schutzgruppen zu nennen.Esters, such as acetate (Ac), monochloro to trichloroacetates, trifluoro acetate, phenylacetate, triphenylmethoxyacetate, phenoxyacetate, Halophenoxyacetates, haloalkylphenoxyacetates, formate, Benzoyl formate, 3-phenylpropionate, isobutyrate, pivaloate (Pv), Adamantoat, Crotonate, Benzoate; Silyl ethers such as trimethylsilyle (TMS), triethylsilyle (TES), methyldi-t-butylsilyl, tert-butyl dimethylsilyl (TBS or TBDMS), tert-butyldiphenylsilyl (TBDPS), Triphenylsilyl, triisopropylsilyl (TIPS), diethylisopropylsilyl (DEIPS), isopropyldimethylsilyl (IPDMS), thexyldimethylsilyl (TDS); aliphatic and aromatic ethers, such as methyl (Me), Benzyls (Bn), o-nitrobenzyl, p-methoxybenzyls, 3,4-dimethoxy benzyl ether, trityle (Trt or Tr), p-methoxyphenyldiphenylmethyl (MMTr), 4,4 ', 4 "-tris (benzoyloxy) trityl (TBTr), di (p-methoxy phenyl) phenylmethyl (DMTr), tert-butyl, 9-phenyl-9-xanthenyl (pixyl), allyl, 2- (trimethylsilyl) ethyl (TMSE); Acetals (Alkoxyalkyl ether, aryloxyalkyl ether or alkyloxyaryl ether), such as methoxymethyl (MOM), methylthiomethyl (MTM), 2-methoxyethoxy methyl (MEM), 1-methoxy-1-methylethyl, 2-ethoxyethyl (EE), 4-methoxytetrahydropyran-4-yl (MTHP), tetrahydropyran-2-yl, 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl (SEM), 3,4-dimethoxybenzyl (DMB), Benzyloxymethyl, p-methoxybenzyl (PMB), p-methoxybenzyloxymethyl (PMBM) and methoxycarbonyls and allyloxycarbonyls (Alloc) as well derived, optionally alkylated or halogenated Protecting groups, to name just a few of the possible protecting groups call.

Unter Schutzgruppen sind auch Vitamine zu verstehen, die über den Sauerstoff im Rest -OR⁶ an das Chroman oder direkt gebunden sind, wie Vitamin A, Vitamin B2, Vitamin C, Vitamin C-Phosphat, Biotin, Folsäure, Nicotinsäure oder Pantothensäure oder Zucker oder niedere Mono- oder Dicarbonsäuren, wie die vorteilhaften Acetate oder Succinate. Protecting groups are also to be understood as vitamins which are bound to the chroman or directly via the oxygen in the -OR ⁶ radical, such as vitamin A, vitamin B2, vitamin C, vitamin C phosphate, biotin, folic acid, nicotinic acid or pantothenic acid or sugar or lower mono- or dicarboxylic acids, such as the advantageous acetates or succinates.

R⁵ bezeichnet in den Verbindungen der Formeln I, II, IIa, IIb und IIc substituiertes oder unsubstituiertes, verzweigtes oder unverzweigtes C₁-C₂₁-Alkyl-, C₂-C₂₁-Alkenyl-, C₂-C₂₁-Alkinyl- oder -CH₂-R⁷, -OR⁷, CN, Halogen oder OAc.In the compounds of the formulas I, II, IIa, IIb and IIc, R ⁵ denotes substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₂₁ -alkyl-, C ₂ -C ₂₁ -alkenyl-, C ₂ -C ₂₁ -alkynyl- or -CH ₂ -R ⁷ , -OR ⁷ , CN, halogen or OAc.

Als Alkylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₁-C₂₁-Alkyl ketten, wie beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, 1-Methyl ethyl, n-Butyl, 1-Methylpropyl-, 2-Methylpropyl, 1,1-Dimethyl ethyl, n-Pentyl, 1-Methylbutyl, 2-Methylbutyl, 3-Methylbutyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, n-Hexyl, 1,1-Dimethylpropyl, 1,2-Dimethylpropyl, 1-Methylpentyl, 2-Methylpentyl, 3-Methyl pentyl, 4-Methylpentyl, 1,1-Dimethylbutyl, 1,2-Dimethylbutyl, 1,3-Dimethylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 2,3-Dimethylbutyl, 3,3-Dimethylbutyl, 1-Ethylbutyl, 2-Ethylbutyl, 1,1,2-Trimethyl propyl, 1,2,2-Trimethylpropyl, 1-Ethyl-1-methylpropyl, 1-Ethyl- 2-methylpropyl, n-Heptyl, n-Octyl, n-Nonyl, n-Decyl, n-Undecyl, n-Dodecyl, n-Tridecyl, n-Tetradecyl, n-Pentadecyl, n-Hexadecyl, n-Heptadecyl, n-Octadecyl, n-Nonadecyl oder n-Eicosyl, genannt.As alkyl radicals are branched or unbranched C ₁ -C ₂₁ alkyl chains, such as methyl, ethyl, n-propyl, 1-methyl ethyl, n-butyl, 1-methyl propyl, 2-methyl propyl, 1,1-dimethyl ethyl, n-pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 1-methylpentyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 1-ethylbutyl, 2 -Ethylbutyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1-ethyl-1-methylpropyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n- Decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, n-pentadecyl, n-hexadecyl, n-heptadecyl, n-octadecyl, n-nonadecyl or n-eicosyl.

Als Alkenylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₂-C₂₁-Alkenylketten, wie beispielsweise Ethenyl, Propenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl, 3-Butenyl, 2-Methylpropenyl, 1-Pentenyl, 2-Pentenyl, 3-Pentenyl, 4-Pentenyl, 1-Methyl-1-butenyl, 2-Methyl-1-butenyl, 3-Methyl-1-butenyl, 1-Methyl-2-butenyl, 2-Methyl-2-butenyl, 3-Methyl-2-butenyl, 1-Methyl-3-butenyl, 2-Methyl-3-butenyl, 3-Methyl-3-butenyl, 1,1-Dimethyl-2-propenyl, 1,2-Dimethyl-1-propenyl, 1,2-Dimethyl-2-propenyl, 1-Ethyl-1- propenyl, 1-Ethyl-2-propenyl, 1-Hexenyl, 2-Hexenyl, 3-Hexenyl, 4-Hexenyl, 5-Hexenyl, 1-Methyl-1-pentenyl, 2-Methyl-1-pentenyl, 3-Methyl-1-pentenyl, 4-Methyl-1-pentenyl, 1-Methyl-2-pentenyl, 2-Methyl-2-pentenyl, 3-Methyl-2-pentenyl, 4-Methyl-2-pentenyl, 1-Methyl-3-pentenyl, 2-Methyl-3-pentenyl, 3-Methyl-3-pentenyl, 4-Methyl-3-pentenyl, 1-Methyl-4-pentenyl, 2-Methyl-4-pentenyl, 3-Methyl-4-pentenyl, 4-Methyl-4-pentenyl, 1,1-Dimethyl-2-butenyl, 1,1-Dimethyl-3-butenyl, 1,2-Dimethyl-1-butenyl, 1,2-Dimethyl- 2-butenyl, 1,2-Dimethyl-3-butenyl, 1,3-Dimethyl-1-butenyl, 1,3-Dimethyl-2-butenyl, 1,3-Dimethyl-3-butenyl, 2,2-Dimethyl- 3-butenyl, 2,3-Dimethyl-1-butenyl, 2,3-Dimethyl-2-butenyl, 2,3-Dimethyl-3-butenyl, 3,3-Dimethyl-1-butenyl, 3,3-Dimethyl- 2-butenyl, 1-Ethyl-1-butenyl, 1-Ethyl-2-butenyl, 1-Ethyl-3- butenyl, 2-Ethyl-1-butenyl, 2-Ethyl-2-butenyl, 2-Ethyl-3-butenyl, 1,1,2-Trimethyl-2-propenyl, 1-Ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-Ethyl-2-methyl-1-propenyl, 1-Ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1-Heptenyl, 2-Heptenyl, 3-Heptenyl, 4-Heptenyl, 5-Heptenyl, 6-Heptenyl, 1-Octenyl, 2-Octenyl, 3-Octenyl, 4-Octenyl, 5-Octenyl, 6-Octenyl, 7-Octenyl, Nonenyl, Dekenyl, Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octadekenyl, Nonadekenyl oder Eicoxenyl, genannt.Alkenyl radicals are branched or unbranched C ₂ -C ₂₁ alkenyl chains, such as, for example, ethenyl, propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 2-methylpropenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4- Pentenyl, 1-methyl-1-butenyl, 2-methyl-1-butenyl, 3-methyl-1-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 3-methyl-3-butenyl, 1,1-dimethyl-2-propenyl, 1,2-dimethyl-1-propenyl, 1,2-dimethyl 2-propenyl, 1-ethyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-propenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-hexenyl, 1-methyl-1-pentenyl, 2- Methyl-1-pentenyl, 3-methyl-1-pentenyl, 4-methyl-1-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-methyl-2-pentenyl, 4-methyl- 2-pentenyl, 1-methyl-3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 3-methyl-3-pentenyl, 4-methyl-3-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4- pentenyl, 3-methyl-4-pentenyl, 4-methyl-4-pentenyl, 1,1-dimethyl-2-butenyl, 1,1-dimethyl-3-butenyl, 1,2-dimethyl-1-butenyl, 1, 2-dimethyl-2-butenyl, 1 , 2-dimethyl-3-butenyl, 1,3-dimethyl-1-butenyl, 1,3-dimethyl-2-butenyl, 1,3-dimethyl-3-butenyl, 2,2-dimethyl-3-butenyl, 2nd , 3-dimethyl-1-butenyl, 2,3-dimethyl-2-butenyl, 2,3-dimethyl-3-butenyl, 3,3-dimethyl-1-butenyl, 3,3-dimethyl-2-butenyl, 1 -Ethyl-1-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 2-ethyl-1-butenyl, 2-ethyl-2-butenyl, 2-ethyl-3-butenyl, 1.1 , 2-trimethyl-2-propenyl, 1-ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1-heptenyl, 2nd -Heptenyl, 3-heptenyl, 4-heptenyl, 5-heptenyl, 6-heptenyl, 1-octenyl, 2-octenyl, 3-octenyl, 4-octenyl, 5-octenyl, 6-octenyl, 7-octenyl, nonenyl, decenyl , Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octadekenyl, Nonadekenyl or Eicoxenyl.

Als Alkinylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₂-C₂₁-Alkinylketten, wie beispielsweise Ethenyl, Prop-1-in-1-yl, Prop-2-in-1-yl, n-But-1-in-1-yl, n-But-1-in-3-yl, n-But-1-in-4-yl, n-But-2-in-1-yl, n-Pent-1-in-1-yl, n-Pent-1-in-3-yl, n-Pent-1-in-4-yl, n-Pent-1-in-5-yl, n-Pent-2-in-1-yl, n-Pent-2-in-4-yl, n-Pent-2-in-5-yl, 3-Methyl-but-1-in-3-yl, 3-Methyl-but-1-in-4-yl, n-Hex-1-in-1-yl, n-Hex-1-in-3-yl, n-Hex-1-in-4-yl, n-Hex-1-in-5-yl, n-Hex-1-in-6-yl, n-Hex-2-in-1-yl, n-Hex-2-in-4-yl, n-Hex-2- in-5-yl, n-Hex-2-in-6-yl, n-Hex-3-in-1-yl, n-Hex-3-in-2-yl, 3-Methyl-pent-1-in-1-yl, 3-Methyl-pent-1-in-3-yl, 3-Methyl-pent- 1-in-4-yl, 3-Methyl-pent-1-in-5-yl, 4-Methyl-pent-1-in-1-yl, 4-Methyl-pent-2-in-4-yl oder 4-Methyl-pent-2-in-5-yl, genannt.As alkynyl radicals are branched or unbranched C ₂ -C ₂₁ -alkynyl chains, such as, for example, ethenyl, prop-1-yn-1-yl, prop-2-yn-1-yl, n-but-1-yn-1-yl, n-but-1-in-3-yl, n-but-1-in-4-yl, n-but-2-in-1-yl, n-pent-1-in-1-yl, n- Pent-1-in-3-yl, n-pent-1-in-4-yl, n-pent-1-in-5-yl, n-pent-2-in-1-yl, n-pent 2-in-4-yl, n-pent-2-in-5-yl, 3-methyl-but-1-in-3-yl, 3-methyl-but-1-in-4-yl, n- Hex-1-in-1-yl, n-hex-1-in-3-yl, n-hex-1-in-4-yl, n-hex-1-in-5-yl, n-hex 1-in-6-yl, n-hex-2-in-1-yl, n-hex-2-in-4-yl, n-hex-2-in-5-yl, n-hex-2- in-6-yl, n-hex-3-in-1-yl, n-hex-3-in-2-yl, 3-methyl-pent-1-in-1-yl, 3-methyl-pent 1-in-3-yl, 3-methyl-pent-1-in-4-yl, 3-methyl-pent-1-in-5-yl, 4-methyl-pent-1-in-1-yl, 4-methyl-pent-2-in-4-yl or 4-methyl-pent-2-in-5-yl.

Als Substituenten des genannten Restes R5 kommen prinzipiell ein oder mehrere Substituenten wie Halogen, wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Carboxy, Acyl, -OAcyl, OAlkyl, Halogenalkyl-, Alkyl-, Hydroxyalkyl-, Formyl, -OAlkenyl, Halogenalkenyl-, Alkenyl-, Hydroxyalkenyl-, -OAlkinyl, Halogen alkinyl-, Alkinyl-, Hydroxyalkinyl-, Aryl-, -OAryl, Alkoxy-, OAlkoxy oder Benzyloxy.In principle, substituents for the radical R5 mentioned come one or more substituents such as halogen, such as fluorine, chlorine or bromine, cyano, nitro, amino, hydroxy, carboxy, acyl, -Oacyl, Oalkyl, haloalkyl, alkyl, hydroxyalkyl, formyl, -Oalkenyl, Haloalkenyl, alkenyl, hydroxyalkenyl, -Oalkynyl, halogen alkynyl, alkynyl, hydroxyalkynyl, aryl, aryl, alkoxy, Oalkoxy or benzyloxy.

Bevorzugte Reste neben den besonders bevorzugten Resten Allyl oder Phytyl sind für R⁵ Tabelle I zu entnehmen. Preferred radicals in addition to the particularly preferred radicals allyl or phytyl can be found for R ^{5 in} Table I.

Tabelle I Table I

Reste für R⁵ Residues for R ⁵

R' bezeichnet in den Resten der Tabelle I einen substituierten oder unsubstituierten, verzweigten oder unverzweigten Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinylrest oder eine Schutzgruppe wie oben be zeichnet.R 'in the residues of Table I denotes a substituted one or unsubstituted, branched or unbranched alkyl, Alkenyl or alkynyl or a protecting group as above draws.

R⁷ bezeichnet in den Formeln C₁-C₂₀-Alkyl-, C₂-C₂₀-Alkenyl-, C₂-C₂₀-Alkinyl-, Aryl-, Hetaryl- oder -(CH₂)_n-XR⁶, wobei X = O, S oder N und n = 0,1 oder 2 bedeutet und wobei R⁶ die oben genannte Bedeutung hat. Bevorzugt bedeutet n 1 oder 2.R ⁷ in the formulas denotes C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₂ -C ₂₀ alkynyl, aryl, hetaryl or - (CH ₂ ) _n -XR ⁶ , where X = O, S or N and n = 0.1 or 2 and where R ^{6 has} the meaning given above. N is preferably 1 or 2.

Als Alkylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₁-C₂₀-Alkyl ketten, wie beispielsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, 1-Methyl ethyl, n-Butyl, 1-Methylpropyl-, 2-Methylpropyl, 1,1-Dimethyl ethyl, n-Pentyl, 1-Methylbutyl, 2-Methylbutyl, 3-Methylbutyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, n-Hexyl, 1,1-Dimethylpropyl, 1,2-Dimethylpropyl, 1-Methylpentyl, 2-Methylpentyl, 3-Methyl pentyl, 4-Methylpentyl, 1,1-Dimethylbutyl, 1,2-Dimethylbutyl, 1,3-Dimethylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 2,3-Dimethylbutyl, 3,3-Dimethylbutyl, 1-Ethylbutyl, 2-Ethylbutyl, 1,1,2-Trimethyl propyl, 1,2,2-Trimethylpropyl, 1-Ethyl-1-methylpropyl, 1-Ethyl- 2-methylpropyl, n-Heptyl, n-Octyl, n-Nonyl, n-Decyl, n-Undecyl, n-Dodecyl, n-Tridecyl, n-Tetradecyl, n-Pentadecyl, n-Hexadecyl, n-Heptadecyl, n-Octadecyl, n-Nonadecyl oder n-Eicosyl, genannt.As alkyl radicals are branched or unbranched C ₁ -C ₂₀ alkyl chains, such as methyl, ethyl, n-propyl, 1-methyl ethyl, n-butyl, 1-methyl propyl, 2-methyl propyl, 1,1-dimethyl ethyl, n-pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 1-methylpentyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 1-ethylbutyl, 2 -Ethylbutyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1-ethyl-1-methylpropyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n- Decyl, n-undecyl, n-dodecyl, n-tridecyl, n-tetradecyl, n-pentadecyl, n-hexadecyl, n-heptadecyl, n-octadecyl, n-nonadecyl or n-eicosyl.

Als Alkenylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₂-C₂₀-Alkenylketten, wie beispielsweise Ethenyl, Propenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl, 3-Butenyl, 2-Methylpropenyl, 1-Pentenyl, 2-Pentenyl, 3-Pentenyl, 4-Pentenyl, 1-Methyl-1-butenyl, 2-Methyl- 1-butenyl, 3-Methyl-1-butenyl, 1-Methyl-2-butenyl, 2-Methyl-2- butenyl, 3-Methyl-2-butenyl, 1-Methyl-3-butenyl, 2-Methyl-3- butenyl, 3-Methyl-3-butenyl, 1,1-Dimethyl-2-propenyl, 1,2-Di methyl-1-propenyl, 1,2-Dimethyl-2-propenyl, 1-Ethyl-1-propenyl, 1-Ethyl-2-propenyl, 1-Hexenyl, 2-Hexenyl, 3-Hexenyl, 4-Hexenyl, 5-Hexenyl, 1-Methyl-1-pentenyl, 2-Methyl-1-pentenyl, 3-Methyl-2- pentenyl, 4-Methyl-1-pentenyl, 1-Methyl-2-pentenyl, 2-Methyl-2- pentenyl, 3-Methyl-2-pentenyl, 4-Methyl-2-pentenyl, 1-Methyl-3- pentenyl, 2-Methyl-3-pentenyl, 3-Methyl-3-pentenyl, 4-Methyl-3- pentenyl, 1-Methyl-4-pentenyl, 2-Methyl-4-pentenyl, 3-Methyl-4- pentenyl, 4-Methyl-4-pentenyl, 1,1-Dimethyl-2-butenyl, 1,1-Di methyl-3-butenyl, 1,2-Dimethyl-1-butenyl, 1,2-Dimethyl-2-butenyl, 1,2-Dimethyl-3-butenyl, 1,3-Dimethyl-1-butenyl, 1,3-Dimethyl- 2-butenyl, 1,3-Dimethyl-3-butenyl, 2,2-Dimethyl-3-butenyl, 2,3-Dimethyl-1-butenyl, 2,3-Dimethyl-2-butenyl, 2,3-Dimethyl- 3-butenyl, 3,3-Dimethyl-1-butenyl, 3,3-Dimethyl-2-butenyl, 1-Ethyl-1-butenyl, 1-Ethyl-2-butenyl, 1-Ethyl-3-butenyl, 2-Ethyl- 1-butenyl, 2-Ethyl-2-butenyl, 2-Ethyl-3-butenyl, 1,1,2-Trimethyl- 2-propenyl, 1-Ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-Ethyl-2-methyl-1- propenyl, 1-Ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1-Heptenyl, 2-Heptenyl, 3-Heptenyl, 4-Heptenyl, 5-Heptenyl, 6-Heptenyl, 1-Octenyl, 2-Octenyl, 3-Octenyl, 4-Octenyl, 5-Octenyl, 6-Octenyl, 7-Octenyl, Nonenyl, Dekenyl, Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octadekenyl, Nonadekenyl oder Eicoxenyl, genannt.Alkenyl radicals are branched or unbranched C ₂ -C ₂₀ alkenyl chains, such as, for example, ethenyl, propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 2-methylpropenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4- Pentenyl, 1-methyl-1-butenyl, 2-methyl-1-butenyl, 3-methyl-1-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 3-methyl-3-butenyl, 1,1-dimethyl-2-propenyl, 1,2-dimethyl-1-propenyl, 1,2-dimethyl -2-propenyl, 1-ethyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-propenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl, 5-hexenyl, 1-methyl-1-pentenyl, 2 -Methyl-1-pentenyl, 3-methyl-2-pentenyl, 4-methyl-1-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-methyl-2-pentenyl, 4-methyl -2-pentenyl, 1-methyl-3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 3-methyl-3-pentenyl, 4-methyl-3-pentenyl, 1-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4 pentenyl, 3-methyl-4-pentenyl, 4-methyl-4-pentenyl, 1,1-dimethyl-2-butenyl, 1,1-dimethyl-3-butenyl, 1,2-dimethyl-1-butenyl, 1,2-dimethyl-2-bu tenyl, 1,2-dimethyl-3-butenyl, 1,3-dimethyl-1-butenyl, 1,3-dimethyl-2-butenyl, 1,3-dimethyl-3-butenyl, 2,2-dimethyl-3- butenyl, 2,3-dimethyl-1-butenyl, 2,3-dimethyl-2-butenyl, 2,3-dimethyl-3-butenyl, 3,3-dimethyl-1-butenyl, 3,3-dimethyl-2- butenyl, 1-ethyl-1-butenyl, 1-ethyl-2-butenyl, 1-ethyl-3-butenyl, 2-ethyl-1-butenyl, 2-ethyl-2-butenyl, 2-ethyl-3-butenyl, 1,1,2-trimethyl-2-propenyl, 1-ethyl-1-methyl-2-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-1-propenyl, 1-ethyl-2-methyl-2-propenyl, 1- Heptenyl, 2-Heptenyl, 3-Heptenyl, 4-Heptenyl, 5-Heptenyl, 6-Heptenyl, 1-Octenyl, 2-Octenyl, 3-Octenyl, 4-Octenyl, 5-Octenyl, 6-Octenyl, 7-Octenyl, Nonenyl, Dekenyl, Undekenyl, Dodekenyl, Tridekenyl, Tetradekenyl, Pentadekenyl, Hexadekenyl, Heptadekenyl, Octadekenyl, Nonadekenyl or Eicoxenyl.

Als Alkinylreste seien verzweigte oder unverzweigte C₃-C₂₀-Alkinylketten, wie beispielsweise Prop-1-in-1-yl, Prop- 2-in-1-yl, n-But-1-in-1-yl, n-But-1-in-3-yl, n-But-1-in-4-yl, n-But-2-in-1-yl,n-Pent-1-in-1-yl, n-Pent-1-in-3-yl, n-Pent-1- in-4-yl, n-Pent-1-in-5-yl, n-Pent-2-in-1-yl, n-Pent-2-in-4-yl, n-Pent-2-in-5-yl, 3-Methyl-but-1-in-3-yl, 3-Methyl-but-1-in-4-yl, n-Hex-1-in-1-yl, n-Hex-1-in-3-yl, n-Hex-1-in-4-yl, n-Hex-1-in- 5-yl, n-Hex-1-in-6-yl, n-Hex-2-in-1-yl, n-Hex-2-in-4-yl, n-Hex-2- in-5-yl, n-Hex-2-in-6-yl, n-Hex-3-in-1-yl, n-Hex-3-in-2-yl, 3-Methyl-pent-1-in-1-yl, 3-Methyl-pent-1-in-3-yl, 3-Methyl-pent- 1-in-4-yl, 3-Methyl-pent-1-in-5-yl, 4-Methyl-pent-1-in-1-yl, 4-Methyl-pent-2-in-4-yl oder 4-Methyl-pent-2-in-5-yl, genannt.As alkynyl radicals are branched or unbranched C ₃ -C ₂₀ -alkynyl chains, such as, for example, prop-1-yn-1-yl, prop-2-yn-1-yl, n-but-1-yn-1-yl, n- But-1-in-3-yl, n-but-1-in-4-yl, n-but-2-in-1-yl, n-pent-1-in-1-yl, n-pent 1-in-3-yl, n-pent-1-in-4-yl, n-pent-1-in-5-yl, n-pent-2-in-1-yl, n-pent-2- in-4-yl, n-pent-2-in-5-yl, 3-methyl-but-1-in-3-yl, 3-methyl-but-1-in-4-yl, n-hex 1-in-1-yl, n-hex-1-in-3-yl, n-hex-1-in-4-yl, n-hex-1-in 5-yl, n-hex-1- in-6-yl, n-hex-2-in-1-yl, n-hex-2-in-4-yl, n-hex-2-in-5-yl, n-hex-2-in- 6-yl, n-hex-3-in-1-yl, n-hex-3-in-2-yl, 3-methyl-pent-1-in-1-yl, 3-methyl-pent-1- in-3-yl, 3-methyl-pent-1-in-4-yl, 3-methyl-pent-1-in-5-yl, 4-methyl-pent-1-in-1-yl, 4- Methyl-pent-2-in-4-yl or 4-methyl-pent-2-in-5-yl.

Als Arylreste seien beispielsweise Phenyl, Methoxyphenyl oder Naphthyl, oder aromatische Ringe oder Ringsysteme mit 6 bis 18 Kohlenstoffatomen im Ringsystem sowie bis zu 24 weiteren C-Atomen, die weitere nicht aromatische Ringe oder Ringsysteme mit 3 bis 8 C-Atomen im Ring bilden können, zu verstehen, die ggf. mit einem oder mehreren Resten wie Halogen wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Alkyl, Alkoxy oder anderen Resten substituiert sein können, genannt. Bevorzugt sind ggf. substituiertes Phenyl, Methoxyphenyl und Naphthyl.Examples of aryl radicals are phenyl, methoxyphenyl or Naphthyl, or aromatic rings or ring systems with 6 to 18 carbon atoms in the ring system and up to 24 more C atoms, the other non-aromatic rings or ring systems with 3 to 8 carbon atoms in the ring, which may contain one or more residues such as halogen such as fluorine, Chlorine or bromine, cyano, nitro, amino, hydroxy, alkyl, alkoxy or other radicals may be mentioned. Prefers are optionally substituted phenyl, methoxyphenyl and naphthyl.

Als Substituenten der vorgenannten Reste kommen prinzipiell ein oder mehrere Substituenten wie Halogen wie Fluor, Chlor oder Brom, Cyano, Nitro, Amino, Hydroxy, Carboxy, Acyl, -OAcyl, OAlkyl, Halogenalkyl-, Alkyl-, Hydroxyalkyl-, Formyl, -OAlkenyl, Halogenalkenyl-, Alkenyl-, Hydroxyalkenyl-, -OAlkinyl, Halogen alkinyl-, Alkinyl-, Hydroxyalkinyl-, Aryl-, -OAryl, Alkoxy-, OAlkoxy oder Benzyloxy in Frage.In principle, substituents of the abovementioned radicals are used or several substituents such as halogen such as fluorine, chlorine or Bromine, cyano, nitro, amino, hydroxy, carboxy, acyl, -Oacyl, Oalkyl, haloalkyl, alkyl, hydroxyalkyl, formyl, -Oalkenyl, Haloalkenyl, alkenyl, hydroxyalkenyl, -Oalkynyl, halogen alkynyl, alkynyl, hydroxyalkynyl, aryl, aryl, alkoxy, Oalkoxy or benzyloxy in question.

Examples example 1 Immunization for the production of antibodies

a) Preparation and preparation of the antigen
Hapten III (7 mg, 15 µmol) and 2 mg maleimide-activated hemocyanin of the keyhole snail (= KLH, Imject®, Pierce) were dissolved in PBS buffer (2 ml) and for 2 h at room temperature (approx. 23 ° C) incubated.
b) immunization
MRLlpr / lpr mice (8 weeks old) were immunized intraperitoneally (= ip) with the KLH-hapten-III conjugate according to the following procedure:
Day 1 100 µg KLH-Hapten III + 100 µl TiterMax ™ adjuvant
36th day 75 µg KLH hapten III + 75 µl TiterMax ™ adjuvant
43. Day 75 µg KLH-Hapten III + 75 µl TiterMax ™ adjuvant
On the 50th, 51st and 52nd day, the animals were immunized with 75 µg KLH hapten III each. The organs were removed 24 hours after the last refreshment.
The fusion, selection and culture was carried out according to the modified Köhler-Milstein protocol (Peters and Baumgarten, Monoclonal Antibodies, Springer Verlag, 1992). HGPRT (-) P3x63Ag8.653 mouse myeloma cells (ATCC CRL 1580) were used as fusion partners. The fusionates were plated in the selection medium in 96 well microtiter plates. The selection medium consisted of RPMI-1640 with the following additives: 10% fetal calf serum (= FCS), penicillin / streptamycin, HAT-Az (= hypoxanthine, aminopterin, thymidine supplement + azaserine).
After a week, the clones were separated and transferred to additional microtiter plates. Antibody production was tested by Ig-ELISA and the specificity of the antibodies (= Ak) on BSA-hapten conjugate (BSA = bovine serum albumin) in the ELISA. Clones that showed binding affinity were subjected to recloning.

Example 2 Selection of catalytic antibodies in microtiter plates

Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität der aus der Immuni sierung und Fusion erhaltenen monoklonalen Antikörper (= AK, siehe Beispiel 1) wurden die Näpfe einer Mikrotiterplatte (ELISA- Platte) mit Kaninchen anti Maus-Ak beschichtet. Anschließend wurden die Platten mit den möglichen katalytischen Ak für die Reaktion inkubiert. Die Platte wurde mehrfach mit ELISA-Wasch puffer (PBS-Puffer + 0,05% Tween 20) gewaschen. Das Substrat (allgemeine Formel I) wurde in Methanol oder DMSO gelöst (1 bis 2 mg/ml) und auf die Platte pipettiert (100-200 µl). Die Platte wurde für 3 Tage bei 50°C inkubiert. To determine the enzymatic activity of the Immuni monoclonal antibodies (= AK, see example 1), the wells of a microtiter plate (ELISA Plate) coated with rabbit anti mouse Ak. Subsequently were the plates with the possible catalytic Ak for the Reaction incubated. The plate was washed several times with ELISA buffer (PBS buffer + 0.05% Tween 20) washed. The substrate (general formula I) was dissolved in methanol or DMSO (1 to 2 mg / ml) and pipetted onto the plate (100-200 µl). The plate was incubated for 3 days at 50 ° C.

Der Nachweis der Zyklisierungsprodukte erfolgte sowohl dünn schichtchromatographisch als auch mittels HPLC (Säule: Chiralcel OD-R, Daicel). Mit diesem Verfahren wurden eine Reihe von Anti körper gefunden, die die kontrollierte Reaktion durchführen. Schema I gibt die überprüfte Reaktion wieder. Das Substrat (= Edukt, I) läßt sich zum Produkt (II), je nach gefundenen katalytischen Antikörper mit einer Enantiomerenreinheit von mindestens 30%ee, umsetzen (siehe Tabelle II).The detection of the cyclization products was both thin by layer chromatography as well as by means of HPLC (column: Chiralcel OD-R, Daicel). A number of anti found bodies that perform the controlled response. Scheme I shows the reaction examined. The substrate (= Educt, I) can be made into product (II), depending on the one found Catalytic antibodies with an enantiomeric purity of convert at least 30% ee (see Table II).

Schema I Scheme I

Umsetzung der chemischen Verbindung A zum Produkt B Conversion of chemical compound A to product B

Tabelle II Table II

Umsetzungen mit verschiedenen katalytischen Antikörpern Reactions with various catalytic antibodies

Eine den Antikörper Doro-1 sezernierende Hybridomazellinie wurde bei der DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zell kulturen GmbH, Mascheroder Weg 1b, 38124 Braunschweig, Bundes republik Deutschland) unter der Nummer DSM ACC2372 hinterlegt.A hybridoma cell line secreting the Doro-1 antibody at the DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell kulturen GmbH, Mascheroder Weg 1b, 38124 Braunschweig, Federal Republic of Germany) under the number DSM ACC2372.

Claims

1. A method for the selection of catalytic antibodies, characterized in that the antibodies are immobilized and with these immobilized antibodies a chemical compound A is converted into a product B, the occurrence of the product is detected and these antibodies are selected which show a catalytic activity.

2. The method according to claim 1, characterized in that several antibodies are immobilized together.

3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the implementation with immobilized monoclonal anti body takes place.

4. The method according to claims 1 to 3, characterized records that the implementation with different antibodies takes place in at least two parallel approaches.

5. The method according to claims 1 to 4, characterized records that to immobilize the antibodies a solid Carrier is used.

6. The method according to claims 1 to 5, characterized records that the selection in the presence of organic Solvent or carried out in organic solvent becomes.

7. The method according to claims 1 to 6, characterized records that the selection with immobilized antibodies and immobilized substrate is carried out.

8. The method according to claims 1 to 7, characterized in that the immobilized antibodies are a chemical compound A of the general formula I.
convert to a product B of the general formula II with cyclization
where the substituents and variables in the formulas I and II have the following meaning:
- - - = a double bond,
R ² , R ³ , R ⁴ independently of one another hydrogen or substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₁₀ alkyl.
R ² = hydrogen or -OR ⁶ ,
R ⁵ = substituted or unsubstituted, branched or unbranched C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₂ -C ₂₀ alkynyl, -CH ₂ -R ⁷ ,
R ⁶ = hydrogen, C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₁ -C ₂₀ alkyl carbonyl, C ₂ -C ₂₀ alkenylcarbonyl, aryl, hetaryl or a cleavable Protecting group,
R ⁷ = C ₂ -C ₂₀ alkyl, C ₂ -C ₂₀ alkenyl, C ₂ -C ₂₀ alkynyl, aryl, hetaryl or - (CH ₂ ) _n -XR ⁶ , where X = O , S or N and n = 1 or 2.