DE19543110C2 - Steriles Knochenmaterial nativen Ursprungs für die Transplantation und Verfahren zur Hitzesterilisierung des Knochenmaterials - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Knochenmaterial nativen Ursprungs für die Transplantation, das im wesentlichen frei von Fett, Bin­ degewebe und Knorpelmasse ist, und ein Verfahren zu seiner Hitzesterilisation.

Allogenes Knochenmaterial findet eine breite Verwendung in der Orthopädie und Traumatologie, der Mund-Kiefer- und Ge­ sichtschirurgie und Plastischen Chirurgie, zum Auffüllen von Knochendefekten bei Frakturen, Zysten, Tumoren und TEP-Opera­ tionen, aber auch Kieferschwund und embryonalen Fehlbildungen (Matti H 1929, Wolter D 1976). Doch bestehen hier dieselben Infektionsgefahren, wie bei anderem, humanem Transplanta­ tionsgut. Es ist hier wohlgemerkt die mikrobiologische Ge­ fahr, welche von Material aus dem Inneren eines höheren Or­ ganismus ausgeht, gemeint, nicht die allgemeine Infektionsge­ fahr aus der Umwelt, für deren Ausgrenzung primär der Opera­ teur verantwortlich ist.

In diesem Zusammenhang sind verschiedene Bakterien, sowie Hepatitis-B-Virus (HBV) (Mason WS et al. 1991) und HIV (Humane Immunodeficiency Virus) Typ 1 und 2 (Coffin J et al. 1986) von Bedeutung.

Hepatitis B ist eine durch das Hepatitis-B-Virus (HBV) her­ vorgerufene Infektionskrankheit der Leber (Mason WS et al. 1991). Das Virus ist nicht nur in Hepatozyten, sondern auch in peripheren Lymphozyten und Zellen des Knochenmarks nach­ weisbar (Blum et al. 1983). Die Zahl der Virusträger, er­ wiesen durch Nachweis von Anti-HBc Antikörper im Blut, be­ läuft sich in der Bundesrepublik Deutschland auf 2-4% der jungen, erwachsenen Bevölkerung, in Entwicklungsländern noch deutlich höher (Hahn H et al. 1990).

AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) ist eine retrovi­ rale Infektionskrankheit, die durch das HIV (Humane Immunode­ ficiency Virus) Typ 1 oder 2 ausgelöst wird (Coffin J et al. 1986). Die Erkrankung an AIDS verläuft ausnahmslos tödlich (Schüpbach J 1989). Die Hauptinfektionsquellen sind Körper­ flüssigkeiten von Infizierten, was zu den Hauptübertragungs­ wegen bei Geschlechtsverkehr (WHO Collaborating Center on AIDS 1987) und Bluttransfusionen (Evatt BL et al. 1985) führt. 69% der HIV-Positiven sind männliche Homosexuelle, 14% Drogenabhängige, 5% Heterosexuelle (Bundesgesundheits­ minister 1993). Die Übertragung des HIV durch Knochentrans­ plantation ist ebenso möglich wie bei der Bluttransfusion. Die Infektion verläuft meist ohne ein imponierendes Krank­ heitsbild, mit einer leichten Mononukleose (Biggs B et al. 1986) und den Symptomen eines grippalen Infektes (Schüpbach J 1989). Die Inkubationszeit bis zur Ausbildung des AIDS be­ trägt meist über 5 Jahre (Hessol NA et al. 1987, Rees M 1987). Daraus ergibt sich eine mehrere Jahre dauernde infek­ tiöse Phase, in der dem Kranken seine Infektion nicht anzu­ sehen ist. Eine vorsorgliche Blutuntersuchung bringt keine Sicherheit. Der Infizierte ist bis zur Bildung von Antikör­ pern gegen das Virus, nach 3 Wochen bis 3 Monaten, für die gängigen Nachweisverfahren unzugänglich, so daß wiederholte Tests zum Schließen dieses sogenannten "infektiösen Fensters" notwendig sind (Allain J-P et al. 1986). Einer von 1000 HIV- Positiven ist gar dauerhaft seronegativ, das heißt für die Standardlaborverfahren zu keinem Zeitpunkt der Infektion und später der Erkrankung als HIV-positiv zu identifizieren (Poiesz BJ et al. 1987). Auch andere Keime stellen ein nicht zu unterschätzendes Problem in der Knochenchirurgie dar und es ist aus diesem Grunde sehr wünschenswert, daß möglichst alle Bakterien und sonstigen relevanten Keime bei einem Knochentransplantat sicher ausgeschlossen sind (Torwesten G et al. 1993).

Spenderknochenmaterial wurde bislang in sogenannten Knochen­ banken für die betroffene Klinik unter der Leitung eines approbierten Arztes gelagert und nach Bedarf aufgetaut. Die Lagerungstemperatur beträgt in der Regel -30°C und die maxi­ male Lagerungsdauer 6 bis 12 Monate (Jerosch et al. 1990). Eine Dauerlagerung über 5 bis 10 Jahre ist bei -70°C bis -80°C möglich (American Association of Tissue Banks 1987).

Die diesbezüglichen Infektionsrisiken sind nur schwer und kostenintensiv auszuschließen. Die Untersuchung auf HIV stellt in diesem Zusammenhang ein besonders Problem dar, da 20-30% der Patienten den notwendigen, zweiten Bluttest nach 3 Monaten verweigern und der Ausfall entsprechender Spendermaterialien wesentlich für die Kostensteigerung pro verwertbarem Transplantat verantwortlich ist (Torwesten G et al. 1993).

Der Bedarf in der Klinik an Knochenmaterial ist enorm und so stellt sich die Aufgabe, diesen, unter Elimination der mikro­ biologischen Gefahren und zu ökonomisch praktikablen Bedin­ gungen, zu befriedigen.

Die Pharmaindustrie bietet biologische und biosubstitutive Produkte, sowie Hilfsgeräte zur Knochensterilisation an, um einen Weg aus diesem Dilemma anzustreben.

Pasteurisierung (Bodenschatz W 1989) durch Erhitzen des Kno­ chens auf 80°C für 10 Minuten wurde von Knaepler H et al. 1992 beschrieben. Eine derartige Behandlung tötet zwar HIV- Viruspartikel (Bundesgesundheitsblatt 30 Nr. 1-5, WHO 1986) und eine Reihe anderer behüllter Viren und vegetative Bak­ terien (Bodenschatz W 1989), jedoch erfolgt keine signifi­ kante Inaktivierung von HBV (Bundesgesundheitsblatt 24 Nr. 1) und anderer Keime. Auch dürfte HIV-DNA eine derartige Behand­ lung schadlos überstehen. Ferner sind die osteoinduktiven Eigenschaften sorgfältig zu prüfen. Von der wirtschaftlichen Seite ist zu bedenken, daß eine HBV-Serologie nach wie vor notwendig ist.

Eine andere Form der Pasteurisierung wurde von Kuhne JH et al. 1994 beschrieben. Hier wurde das Knochenmaterial auf 65°C erhitzt. Es ist erfreulich, daß entsprechend behandel­ tes Material im Vergleich zu Kontrollen nahezu gleich gut einwächst, jedoch wird bei der beschriebenen Hitzebehandlung keine ausreichende Inaktivierung von HIV und HBV erreicht (Bundesgesundheitsblatt 30 Nr. 1-5, WHO 1986, Bundesgesund­ heitsblatt 24 Nr. 1).

Energiereiche Strahlung wurde von Fideler BM et al. 1994 zur Inaktivierung von HIV beschrieben. Die in diesem Zusammenhang nötige Strahlendosis für frisches Knochenmaterial beträgt 25000 Gray oder mehr. Knochenzellen werden dabei sicher zer­ stört. Eine derartige Bestrahlung ist allerdings sehr um­ ständlich und teuer. Außerdem werden die osteoinduktiven Eigenschaften bereits ab 10000 Gray beeinträchtigt (Burin et al. 1967).

Chemische Behandlungsmethoden scheitern meist bereits im Vorfeld wegen der toxischen Eigenschaften der meisten Desin­ fektionsmittel (Bodenschatz W 1989). Mellonig JT et al. 1992 beschreiben eine Kombination von Salzsäure und Desinfektions­ mittel, welche HIV abtötet, jedoch muß bezweifelt werden, daß eine derartige Behandlung verwertbares Knochenmaterial zu­ rückläßt. Wenn man andere Keime unberücksichtigt läßt, kann man HIV durch Behandlung mit Ethanol töten. Bereits der Kon­ takt von Virion mit 70%igem Ethanol für 1 Minute zerstört das Virion (Resnick L et al. 1986). Generell muß gesagt wer­ den, daß eine reine Inaktivierung von HIV aus mikrobiologi­ scher Sicht nicht ausreicht, um eine Knochenbank für einen Patienten als sicher zu deklarieren. Außerdem gibt es keine Werte über biomechanische oder osteoinduktive Eigenschaften von chemisch behandeltem Knochen. Und zuletzt muß berücksich­ tigt werden, daß sehr viele Chemikalien oder ihre Abbaupro­ dukte krebserregend oder toxisch sind und eine reine Chemobe­ handlung durchaus lebensfähige Osteozyten und Knochenmarks­ zellen aller Art zuückläßt. Für andere chemische Substanzen, wie auch Ethylendioxid, gilt dasselbe. Außerdem konnte hier sogar bei Behandlung mit HCI, einem bekannten DNA-Killer, HIV-DNA in entsprechendem Knochenmaterial nachgewiesen werden (Mellonig JT et al. 1992). Eine Dampfsterilisation führt zwar zu Inaktivierung von Infektionsträgern, schwächt aber die mechanische Stabilität des Knochenmaterials.

Es sind auch künstliche Knochenersatzwerkstoffe bekannt, die im wesentlichen aus Hydroxylapatit bestehen. Aus der DE-OS 35 42 744 ist es bekannt, den Kalk von kalkinkrustierten Algen durch Behandlung mit Phosphat in porösen Hydroxylapatit umzuwandeln.

In der US-PS 3 929 971 ist ein ähnliches Verfahren beschrie­ ben, wobei als Ausgangsmaterial das Kalkgerüst von Korallen verwendet wird.

Künstliche Knochenersatzwerkstoffe auf Kalziumhydroxylapatit­ basis, wie Synthacer^TM (Scientific Developments GmbH, München, Deutschland) haben den Nachteil, daß die neben Kalziumhydro­ xylapatit im Knochen enthaltenen Matrixbestandteile, wie Col­ lagen und Gucosaminoglycane, gänzlich fehlen. Jedoch ist eine mikrobiologische Unbedenklichkeit und eine künstliche Isotro­ pie gegeben. Zellkulturtests erwiesen, daß Materialien, wie Synthacer^TM und der unten genannte Endobon^TM im Vergleich zu gefrorenem Spenderknochenmaterial keine Zytotoxizität aufwei­ sen (Gunther K et al. 1993).

Gesinterte Knochenmaterialien, wie Endobon^TM (Merck AG, Darmstadt, Deutschland), sind ebenfalls mikrobiologisch unbe­ denklich. Auch diesen Produkten fehlen die übrigen Matrixkom­ ponenten nach der starken physikalischen Veränderung. Darüber hinaus haben sie, auf Grund ihrer natürlichen Anisotropie, schlechtere biomechanische Eigenschaften, als künstliche Knochenersatzwerkstoffe.

Weitere gesinterte Knochenmaterialien sind aus der DE-OS 40 28 683; der DE-OS 37 27 606; der DE-OS 28 40 064 und aus der EP 0 657 178 und der EP 0 141 004 sowie aus der US-PS 4 314 380 bekannt.

Gemäß der Erfindung wurde gefunden, daß natives Knochenmate­ rial einer Dampfsterilisation, insbesondere einer üblichen Dampfsterilisation, unterworfen werden kann, wenn es zuvor getrocknet wird. Die Erfindung ist deshalb dadurch gekenn­ zeichnet, daß das Knochenmaterial nativen Ursprungs für die Transplantation durch trockene Erhitzung von nativem Knochen­ material bei Temperaturen über der Denaturierungstemperatur von Proteinen (ca. 40°C) bis 300°C und nachfolgende Dampf­ sterilisation erhältlich ist.

Im Gegensatz zu Knochenmaterial, das lediglich einer Dampf­ sterilisation unterworfen wird und das durch die Dampfsteri­ lisation in seinen mechanischen Eigenschaften verschlechtert ist, kann das erfindungsgemäße Knochenmaterial in einer Form bereitgestellt werden, bei der seine Festigkeit der von na­ türlichen, unbehandelten Knochen gleicher Art und Herkunft entspricht. Entsprechendes gilt auch für den Elastizitätsmo­ dul. Dieser ist somit wesentlich günstiger als der Elasti­ zitätsmodul von Knochen, die auf die Sintertemperatur von Hydroxylapatit erhitzt wurden.

Das erfindungsgemäße Knochenmaterial kann in stückiger Form, insbesondere in Würfelform, vorliegen. Es ist möglich, diese Form schon herzustellen, bevor die Trocknung erfolgte. Die entsprechende Formung kann aber auch nach der Trocknung vor­ genommen werden. Das Knochenmaterial kann auch in Granulat­ form vorliegen. Granulate werden häufig verwendet, um Vertie­ fungen oder Löcher auszufüllen. Mit Vorteil kann das erfin­ dungsgemäße Knochenmaterial in einer sterilen Verpackung vor­ liegen, die luftdicht und vorzugsweise auch feuchtigkeits- und lichtdicht ist.

Das Knochenmaterial kann autogen, allogen oder auch xenogen sein. Es eignet sich nicht nur zur Behandlung von defekten spongiosen Knochen, sondern auch zur Behandlung von korti­ kalen Knochen und Zähnen.

Als Knochenmaterial eignet sich insbesondere solches, das eine poröse, insbesondere grobporöse Struktur aufweist. Eine solche poröse Struktur erleichtert das Einwachsen von Gewebe und Blutgefäßen. Spongiosa-Knochen haben insbesondere eine solche gewünschte poröse Struktur. Bevorzugt ist Knochen­ material aus Femurköpfen und Humerusköpfen.

Beim erfindungsgemäßen Verfahren zur Hitzesterilisierung von nativem Knochenmaterial für die Transplantation wird natives Knochenmaterial nach Entfernung von etwa anhängendem Gewebe, insbesondere Knorpel, einer trockenen Erhitzung bei Tempera­ turen über der Denaturierungstemperatur von Proteinen (ca. 40°C) bis 300°C und danach einer Dampfsterilisation unter­ worfen. Die trockene Erhitzung hat insbesondere die Aufgabe, noch vorhandenes Eiweiß zu denaturieren und das Knochenmate­ rial von Feuchtigkeit, insbesondere natürlicher Feuchtigkeit, zu befreien. Die Trocknung erfolgt in der Regel auf einen Feuchtigkeitsgehalt unter 10%, insbesondere unter 5%, rela­ tive Luftfeuchte. Die Einwirkung einer Dampfsterilisation auf derart getrocknetes Knochenmaterial kann dann die mechani­ schen Eigenschaften nicht mehr nachteilig beeinflussen.

Normalerweise wird bei Temperaturen zwischen 50°C und 300°C getrocknet, wobei Temperaturen unter 250°C bevorzugt sind. Liegen die Trocknungstemperaturen über 100°C, insbesondere über 120°C, dann ist das Knochenmaterial schon weitgehend steril. Es kann dann zwischen der Trocknung und der Dampfste­ rilisation eine Zwischenlagerung erfahren. Erfolgt die Trock­ nung im Bereich zwischen der Denaturierungstemperatur für Proteine (42°C) und etwa 100 oder 120°C, dann wird eine ggf. gewünschte Zwischenlagerung unter Kühlung, insbesondere im Tiefkühlbereich, vorgenommen. Auf diese Weise ist es mög­ lich, daß die Dampfsterilisation erst kurz vor der Implanta­ tion, zum Beispiel in einem Dampfsterilisator, vorgenommen wird, wie er für die Sterilisation chirurgischer Bestecke dient. So kann die Dampfsterilisation unter den Bedingungen des sogenannten Gummiprogramms erfolgen: 2,5 bar, wasser­ dampfgesättigt 120°C während 20 Minuten. Das sogenannte Metallprogramm, das bei 137°C unter Wasserdampfsättigung durchgeführt wird, ist ebenfalls möglich. Vor dem Abkühlen des Knochenmaterials wird die Dampfsättigung abgebaut, so daß das Knochenmaterial trocknet, bevor es abkühlt.

Die trockene Erhitzung als Vorbereitung der Dampfsterilisa­ tion kann unter Umgebungsluft und auch unter Umgebungsdruck durchgeführt werden. Zur trockenen Erhitzung eignen sich beispielsweise elektrisch beheizte Öfen mit einer entspre­ chenden Lufttemperatur. Auch ein trockenes Erhitzen unter Bestrahlung mit Hilfe von Mikrowellen ist geeignet.

Anhaftende Fremdstoffe, wie Bindegewebe, Fettgewebe und Knor­ pel werden vorzugsweise mechanisch entfernt. Danach kann, sofern erforderlich oder gewünscht, eine weitere Reinigung durch Waschen und/oder Extrahieren des Knochenmaterials vor­ genommen werden. Hierzu eignen sich wasserlösliche Lösungs­ mittel, insbesondere Alkohol oder Aceton. Bei einer solchen weiteren Reinigung können anhaftende Blutreste und Fett wirk­ sam entfernt werden. Gleichzeitig findet eine Teilentwässe­ rung statt.

Weitere Merkmale der Erfindung ergeben sich aus der nachfol­ genden Beschreibung von bevorzugten Ausführungsformen in Ver­ bindung mit den Unteransprüchen. Hierbei können einzelne Merkmale jeweils für sich allein oder zu mehreren bei einer Ausführungsform der Erfindung verwirklicht sein.

Beispiel 1

Oberschenkelknochen von Rindern aus der Schlachtung werden gesammelt und von anhaftendem Fleisch und Fett mechanisch be­ freit. Danach werden die Knorpelschichten am Hüftkopf mecha­ nisch abgelöst, so daß die poröse Knochenmasse des Hüftkopfes freiliegt. Diese wird vom kompakten Knochen des Oberschenkels mechanisch abgetrennt und anschließend durch Spülen mit Ace­ ton weiter gereinigt. Die erhaltenen Spongiosa-Knochenstücke werden in einen elektrisch beheizten Ofen gelegt und langsam unter Umgebungsluft und Umgebungsdruck auf eine Temperatur von ca. 200°C aufgeheizt. Die Knochenstücke werden noch 20 Minuten, nachdem die Temperatur im Knocheninneren auf 200°C angestiegen ist, im Ofen belassen. Nach Abkühlen wer­ den die Knochenstücke entweder unmittelbar in einen Dampfste­ rilisator gegeben oder unter steriler Verpackung zwischenge­ lagert.

Die Dampfsterilisation wird in einem üblichen Dampfsterilisa­ tor bei gesättigtem Wasserdampfdruck von 2,5 bar bei einer Sterilisationstemperatur von 120°C während 20 Minuten steri­ lisiert. Danach läßt man unter Wegnahme des Wasserdampfes ab­ kühlen, so daß das Knochenmaterial trocknet. Es kann dann entweder unmittelbar zur Transplantation verwendet oder ste­ rilisiert verpackt aufbewahrt werden.

Mechanische Untersuchungen ergeben, daß sowohl die Festigkeit als auch der Elastizitätsmodul des erfindungsgemäßen Knochen­ materials denen von nativem Knochenmaterial gleichen Ur­ sprungs entspricht. Das Knochenmaterial zeigt eine gute Ein­ wachsfähigkeit für Zellmaterial. Durch die trockene Erhitzung in Kombination mit der Dampfsterilisation sind Erreger, wie Bakterien und Viren, abgetötet. Auch die entsprechenden DNA ist inaktiviert. Wie im Beispiel gezeigt, brauchen die Kno­ chen nicht von lebenden Spendern zu stammen. Auch ist es mög­ lich, Knochenmaterial tierischen Ursprungs nach der erfin­ dungsgemäßen Behandlung auf Menschen zu übertragen.

Beispiel 2

Aus einem Hüftkopf humanen Ursprungs wird ein spongioses Knochenstück mit einem Knochenvolumen von 0,85 cm³ herausprä­ pariert. Das Knochenstück wird 5 Tage lang in Aceton ge­ lagert, wobei gelegentlich umgeschenkt wird. Danach wird das Knochenstück aus dem Aceton herausgenommen und in einem Microwellenherd 5 Minuten lang unter einer Bestrahlung von 500 Watt erhitzt. Dabei verdampft das Aceton und restliche im Knochenmaterial enthaltene Feuchtigkeit. Anschließend wird das Knochenmaterial einer Dampfsterilisation wie in Beispiel 1 unterworfen. Das fertige sterile Knochenmaterial hatte eine gute Härte, ein optisch schönes Aussehen und war fettfrei.

Claims (19)

1. Steriles Knochenmaterial nativen Ursprungs für die Transplantation, das im wesentlichen frei von Fett, Bindegewebe und Knorpelmasse ist, dadurch gekennzeich­ net, daß es durch trockene Erhitzung von nativem Kno­ chenmaterial bei Temperaturen über der Denaturierungs­ temperatur von Proteinen (ca. 40°C) bis 300°C und nachfolgende Dampfsterilisation erhältlich ist.

2. Knochenmaterial nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es steril verpackt ist.

3. Knochenmaterial nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekenn­ zeichnet, daß es eine grobporöse Struktur aufweist, ins­ besondere von Spongiosa-Knochen stammt.

4. Knochenmaterial nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß seine Festigkeit der von natürlichen unbehandelten Knochen gleicher Art ent­ spricht.

5. Knochenmaterial nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sein Elastizitätsmodul der von natürlichen unbehandelten Knochen gleicher Art entspricht.

6. Knochenmaterial nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es in stückiger Form, insbesondere in Würfelform, vorliegt.

7. Knochenmaterial nach einem der Ansprüche 1 bis 6, da­ durch gekennzeichnet, daß es in Granulatform vorliegt.

8. Verfahren zur Hitzesterilisierung von nativem Knochen­ material für die Knochentransplantation, dadurch gekenn­ zeichnet, daß natives Knochenmaterial nach Entfernung von etwa anhaftendem Gewebe und Knorpel einer trockenen Erhitzung bei Temperaturen über der Denaturierungstempe­ ratur von Proteinen (ca. 40°C) bis 300°C und danach einer Dampfsterilisation unterworfen wird.

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Knochenmaterial durch die trockene Erhitzung von insbesondere natürlicher Feuchtigkeit befreit wird, insbesondere bis ein Feuchtigkeitsgehalt kleiner 15%, vorzugsweise kleiner 10% erreicht ist.

10. Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeich­ net, daß als natives Knochenmaterial grobporöses Kno­ chenmaterial, insbesondere solches von Spongiosa-Kno­ chen, verwendet wird.

11. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, dadurch ge­ kennzeichnet, daß die Erhitzung zwischen 50 und 300°C, insbesondere unter ca. 250°C, durchgeführt wird.

12. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 11, dadurch ge­ kennzeichnet, daß die trockene Erhitzung in Umgebungs­ luft durchgeführt wird.

13. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 12, dadurch ge­ kennzeichnet, daß die trockene Erhitzung bei Umgebungs­ druck durchgeführt wird.

14. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 13, dadurch ge­ kennzeichnet, daß das trockene Erhitzen in einem Ofen mit einer entsprechenden Lufttemperatur durchgeführt wird.

15. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 13, dadurch ge­ kennzeichnet, daß das trockene Erhitzen unter Bestrah­ lung mit Mikrowellen durchgeführt wird.

16. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß das Knochenmaterial vor der trocken­ en Erhitzung durch Behandlung mit einem wassermischbaren und insbesondere fettlösenden Lösungsmittel mindestens teilweise vorgetrocknet wird.

17. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 16, dadurch ge­ kennzeichnet, daß das Knochenmaterial vor der trockenen Erhitzung von etwa anhaftenden Blutresten und Fett durch Waschen oder Extrahieren befreit wird.

18. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 17, dadurch ge­ kennzeichnet, daß es vor der trockenen Erhitzung von etwa anhaftendem Bindegewebe, Fettgewebe und/oder Knor­ pel mechanisch befreit wird.

19. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 18, dadurch ge­ kennzeichnet, daß die Knochenteile nach der Erhitzung, insbesondere im Tiefkühlbereich, zwischengelagert werden.