DE1717100C

DE1717100C - Process for the production of Prapara th hemolytic streptococci for the supportive treatment of carcinoma diseases

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Publication number: DE1717100C
Authority: DE
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication date: 1972-07-13

Description

I 717100I 717100

Bekanntlich befinden sich unter den lebenden Zellen hiimolytischer Streptococcen solche, die anticarcinomntöse Wirkung besitzen Die Verwendung von lobenden Zellen in einer für die Tumortherapie ausreichenden Menge ist jedoch sehr gefährlich, da S diese Bakterien z. B. Erysipel erzeugen,It is known that among the living cells of hemolytic streptococci there are those that are anticarcinomntous Have an effect The use of praising cells in a sufficient for tumor therapy However, amount is very dangerous because S these bacteria z. B. produce erysipelas,

Die pathogene Wirkung der hämolytischen Streptococcen (worunter im folgenden auch die Virulenz oder die Toxizität verstanden werden soll) nimmt ab und die anticarcinomatöse Wirkung zu, wenn die Zellen der hämolytischen Streptococcen kurze Zeit bei etwa 37° C in einem Medium behandelt werden, das Penicillin in verhältnismäßig hoher Konzentration enthält (vgl. S.Koshimura, R.Shimizu, A. Fujimura und H. Okamoto, GANN, Bd. 55 [1964], S. 233 bis 236). Es ist ferner bekannt, daß bessere Ergebnisse erhalten werden, wenn die Zellen der hämolytischen Streptococcen nach der Behandlung bei etwa 37" C in einem penicillinhalligen Medium kurze Zeit einer Wärmebehandlung in der Nähe von 45° C unterworfen werden (vgl. The Japanese Journal of Experimental Medicine, Bd. 36 [1966], S. 161 bis 174).The pathogenic effects of hemolytic streptococci (which in the following also includes virulence or toxicity) takes and the anticarcinomatous effect increases when the cells of the hemolytic streptococci short time be treated at about 37 ° C in a medium, the penicillin in a relatively high concentration contains (see S.Koshimura, R.Shimizu, A. Fujimura and H. Okamoto, GANN, Vol. 55 [1964], pp. 233 to 236). It is also known that better results are obtained if the cells of the hemolytic streptococci after the Treatment at about 37 "C in a penicillin-rich medium for a short period of heat treatment in the Near 45 ° C (cf. The Japanese Journal of Experimental Medicine, Vol. 36 [1966], Pp. 161 to 174).

Durch eine derartige Penicillinbehandlung kann die antitumoröse Wirkung der hämolytischen Streptococcen erhöht und ihre pathogene Wirkung gesenkt werden. Das auf diese Weise hergestellte Präparat kann jedoch nicht Patienten verabreicht werden, bei denen die Gefahr des anaphylaktischen Schocks durch Penicillin besteht. Dieses Problem darf nicht unterschätzt werden, da die Zahl der überempfindlichen Menschen angestiegen ist infolge des schnell ansteigenden Gebrauchs von Penicillin bei der Therapie verschiedener Krankheiten. Weiter ist zu befürchten, daß wegen der leichten Bindung des Penicillins an Protein im alkalischen Milieu eine Verbindung aus Penicillin und Zellprotein gebildet wird, die die Antigenwirkung von Penicillin erhöht, wodurch schwere allergische Reaktionen hervorgerufen werden können.Such a penicillin treatment can reduce the anti-tumor effect of the hemolytic streptococci increased and their pathogenic effect decreased. The preparation made in this way however, it cannot be given to patients at risk of anaphylactic shock consists of penicillin. This problem should not be underestimated, given the number of hypersensitive Has increased as a result of the rapidly increasing use of penicillin in therapy various diseases. It is also to be feared that because of the easy binding of the penicillin a compound of penicillin and cell protein is formed on protein in an alkaline environment, which the Penicillin antigenic effects increased, causing severe allergic reactions be able.

• Aufgabe der Erfindung war es, die Nachteile der durch Penicillinbehandlung erhaltenen Präparate hämolytischer Streptococcen zu vermeiden und neue Präparate mit anticarcinomatöser Wirkung zu schaffen, die nicht pathogen sind und keine Antigenwirkung hervorrufen. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst.• The object of the invention was to reduce the disadvantages of the preparations obtained by penicillin treatment in a hemolytic manner Avoiding streptococci and creating new preparations with anti-carcinomatous effects, which are not pathogenic and do not cause antigenic effects. This object is achieved by the invention solved.

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von Präparaten zur unterstützenden Behandlung von Carcinomerkrankungen durch Behandlung einer Suspension lebender Zellen hämolytischer Streptococcen mit anticarcinomatöser Wirkung mit einem Antibiotikum und kurzzeitigem zweistufigem Erwärmen auf Temperaturen von 37 bzw. 45°C, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man als Antibiotikum Cephalosporin C oder Cycloserin verwendet und in der ersten Stufe 20 bis 60 Minuten auf 30 bis 38° C und in der zweiten Stufe 20 bis 60 Minuten auf 38 bis 50° C erwärmt.The invention thus provides a method for the production of preparations for supporting Treatment of carcinoma diseases by treating a suspension of living cells hemolytic Streptococci with anticarcinomatous effects with an antibiotic and short-term two-stage heating to temperatures of 37 and 45 ° C, which is characterized in that one used as antibiotic cephalosporin C or cycloserine and in the first stage 20 to 60 minutes heated to 30 to 38 ° C and in the second stage 20 to 60 minutes to 38 to 50 ° C.

Es wurde gefunden, daß lediglich Cephalosporin C und Cycloserin die anticarcinomatöse Wirkung der hämolytischen Streptococcen noch besser erhöhen als Penicillin und außerdem ihre Virulenz eliminiert. Streptomycin und viele andere Antibiotika und auch Chemotherapeutika rufen bei hämolytischen Streptococcen überhaupt keine .Verbesserung der anticarcinomatösen Wirkung hervor. Da Cephalosporin C und Cycloserin keine Kreuzungsallergie mit Penicillin zeigen, tritt die Gefahr des anaphylaktischen Schocks nicht auf, und man kann das erfindungsgemäß hergestellte Präparat auch an Patienten verabreichen, die gegen Penicillin Überempfindlich sind.It has been found that only cephalosporin C and cycloserine have the anticarcinomatous effect of the Hemolytic streptococci increase even better than penicillin and, moreover, eliminate their virulence. Streptomycin and many other antibiotics, as well as chemotherapy drugs, call for hemolytic streptococci No improvement at all in anticarcinomatous Effect. Because cephalosporin C and cycloserine are not allergic to crossbreeds with penicillin show, there is no risk of anaphylactic shock, and this can be done according to the invention also administer the prepared preparation to patients who are hypersensitive to penicillin.

Das erflndungsgemflße Verfahren wird praktisch folgendermaßen ausgeführt: Cephalosporine oder Cycloserin wird zu einer Suspension lebender Zellen von hämolytischen Streptococcen gegeben. Die Zellen werden in üblichen Nährmedien, z. B. in Pepton-Fleischbrühe, Herzfleischbrühe oder einem hauptsächlich Hefeextrakt enthaltenden Medium, bei Temperaturen von 30 bis 38° C unter stationären Bedingungen oder unter Belüften und Rühren gezüchtet. Sodann werden die Zellen in üblicher Weise abgetrennt und z. B. in Bernheimers Basalmedium suspendiert (Zusammensetzung: 675 mg Maltose, 6 ml einer 20%igen Lösung von Kaliumdihydrogenphosphat in Wasser, die auf einen pH-Wert 6,9 bis 7,0 mit Natriumhydroxyd eingestellt ist, 12 ml einer 2%igen wäßrigen Lösung von Magnesiumsulfat-heptahydrat und 66 ml destilliertes Wasser, im folgenden als BBM bezeichnet). Das Cephalosporine oder Cycloserin werden zu der Zellsuspension zugesetzt, so daß diese Stoffe in einer Endkonzentration von 3 χ 10 ² Mol pro Liter oder mehr vorliegen. Es ist natürlich auch möglich, das Cephalosporin C oder Cycloserin in BBM vorher zu lösen und anschließend die lebenden Zellen darin zu suspendieren.The process of the invention is practically carried out as follows: Cephalosporins or cycloserine are added to a suspension of living cells of hemolytic streptococci. The cells are grown in conventional nutrient media, e.g. B. in peptone meat broth, heart meat broth or a medium mainly containing yeast extract, grown at temperatures of 30 to 38 ° C under stationary conditions or with aeration and stirring. The cells are then separated off in the usual manner and z. B. suspended in Bernheimer's basal medium (composition: 675 mg of maltose, 6 ml of a 20% solution of potassium dihydrogen phosphate in water, which is adjusted to a pH value of 6.9 to 7.0 with sodium hydroxide, 12 ml of a 2% aqueous Solution of magnesium sulfate heptahydrate and 66 ml of distilled water, hereinafter referred to as BBM). The cephalosporins or cycloserine are added to the cell suspension so that these substances are present in a final concentration of 3 10 ² mol per liter or more. It is of course also possible to dissolve the cephalosporin C or cycloserine in BBM beforehand and then to suspend the living cells in it.

Das Tür die Zwecke der Erfindung verwendete Cephalosporin C kann natürlichen oder synthetischen Ursprungs sein. Es können natürliches Cephalosporin C, Cephalothin oder Cephaloridin verwendet werden. Als Suspendiermedium für die Zellsuspension kann auch eine andere Salzlösung, z. B. eine mit Phosphat gepufferte Kochsalzlösung an Stelle von BBM, verwendet werden.The cephalosporin C used for the purposes of the invention can be natural or synthetic Be of origin. Natural cephalosporin C, cephalothin or cephaloridin can be used. Another salt solution, e.g. B. one with Phosphate buffered saline can be used in place of BBM.

Für das erfindungsgemäße Verfahren kommen lebende Zellen aller hämolysierenden Streptococcen (Streptococcus hemolyticus) in Frage, die anticarcinomatöse Wirkung besitzen, insbesondere hämolysierende Streptococcen der Gruppe A (Klassifikation nach nach L a η c e f i e 1 d), die Streptolysin S bilden (vgl. auch The Japanese Journal of Exptl. Med., Bd. 25 [1955], S. 93 bis 102.Living cells of all haemolytic streptococci are used for the method according to the invention (Streptococcus hemolyticus) in question, which have anticarcinomatous effects, especially haemolytic Group A streptococci (classification according to L a η c e f i e 1 d), which form streptolysin S. (See also The Japanese Journal of Exptl. Med., Vol. 25 [1955], pp. 93 to 102.

Um eine bessere Einwirkung des zugesetzten Cephalosporins C oder des Cycloserins in der Zellsuspension zu erreichen, wird diese 20 bis 60 Minuten auf Temperaturen von 30 bis 38" C, insbesondere auf etwa 37 C, erwärmt. Eine Behandlungsdauer von 20 Minuten ist im allgemeinen ausreichend. Auf diese Wärmebehandlung folgt eine weitere Wärmebehandlung während etwa 20 bis 60 Minuten bei Temperaturen von 38 bis 50° C, vorzugsweise in der Nähe von 45° C.In order to have a better effect of the added cephalosporin C or the cycloserine in the cell suspension to achieve, this is 20 to 60 minutes at temperatures of 30 to 38 "C, in particular to about 37 C, heated. A treatment time of 20 minutes is generally sufficient. On this heat treatment this is followed by a further heat treatment for about 20 to 60 minutes at temperatures from 38 to 50 ° C, preferably near 45 ° C.

Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird die anticarcinomatöse Wirkung der lebenden Zellen der hämolylischen Streptococcen gegenüber einer Penicillin behandlung erhöht, während die pathogene Wirkung durch diese Behandlung verschwindet. Bei Verwendung von Cephalosporin C wird insbesondere die Fähigkeit der Streplococcen zur Bildung von Streptolysin S ebenfalls zum Verschwinden gebracht.The anticarcinomatous effect of the living cells of the haemolylic streptococci compared to penicillin treatment increased, while the pathogenic effect disappears through this treatment. When using Cephalosporin C in particular the ability of the streplococci to produce streptolysin S also disappeared.

Die erfindungsgemäß hergestellten Präparate können Patienten nach ausreichender Verdünnung gewöhnlich intravenös oder lokal in Form einer wäßrigen Suspension appüziert werden. Die Verabreichung kann über lange Zeiträume auch an solche Patienten erfolgen, die konstitutionell zu einer Uberempfindlichkeit gegenüber Penicillin neigen.Patients can usually use the preparations produced according to the invention after sufficient dilution be administered intravenously or locally in the form of an aqueous suspension. The administration can be done over long periods of time to those patients who are constitutionally hypersensitive tend towards penicillin.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erlftulert.The invention is illustrated by the following examples.

example 1

9 g Hefeextrakt (Hersteller Ebios Yakuhin Kogyo K. K.) werden in 200 ml destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung wird mit 10%iger Natronlauge auf einen pH-Wert von 7,0 bis 7,2 eingestellt und 60 Minuten auf 100° C erhitzt. Nach dem Abkühlen wird der ausgefallene Niederschlag abfiltriert, der pH-Wert des Filtrats mit 10%iger Natronlauge erneut auf 7,0 bis 7,2 eingestellt, wieder 30 Minuten auf 100⁰C erhitzt und filtriert. Das Filtrat wird mit destilliertem Wasser auf 300 ml aufgefüllt und diese Lösung in sterilisierte Kolben gegossen und bei einem Druck von 1 kg/cm² IO Minuten dampfslerilisiert.9 g of yeast extract (manufacturer Ebios Yakuhin Kogyo KK) are dissolved in 200 ml of distilled water. The solution is adjusted to a pH of 7.0 to 7.2 with 10% sodium hydroxide solution and heated to 100 ° C. for 60 minutes. After cooling, the deposited precipitate is filtered off, the pH of the filtrate is again adjusted to 7.0 to 7.2 with 10% sodium hydroxide solution, ^{heated again to 100 °} C. for 30 minutes and filtered. The filtrate is made up to 300 ml with distilled water and this solution is poured into sterilized flasks and ^{steam sterilized at a pressure of 1 kg / cm 2} 10 minutes.

Eine Kultur von Streptococcus hemolyticus, Stamm Su, ATCC Nr. 21 060 (ein fast avirulenter Stamm), der 20 Stunden in 15 ml Fleischbrühe gezüchtet \λ orden war, wird zur Beimpfung von 300 ml des L'.cnannten Hefeextrakts als Nährmedium verwendet und 20 Stunden statisch bei 37°C kultiviert. Sodann wird die Kulturbrühe mit Eis gekühlt und zentrifugiert. Die erhaltenen Zellen werden zweimal mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und in 15 ml BBM suspendiert. Die Absorption dieser Zellensuspension bei 660 πΐμ beträgt 7,80.A culture of Streptococcus hemolyticus, strain Su, ATCC No. 21 060 (an almost avirulent strain), cultured in 15 ml meat broth for 20 hours is used to inoculate 300 ml des L 'named yeast extract was used as a nutrient medium and cultured statically at 37 ° C. for 20 hours. Then the culture broth is cooled with ice and centrifuged. The cells obtained are washed twice with physiological saline and in 15 ml of BBM suspended. The absorption of this cell suspension at 660 πΐμ is 7.80.

5 ml dieser Zellsuspension in BBM werden mit I ml einer physiologischen Kochsalzlösung versetzt, die 0,258molar an Cephaloridin ist, und 20 Minuten auf 37° C erhitzt. Das Ergebnis der Antitumorversuche mit dieser Streptococcensuspension ist in Tabelle I unter Gruppe I angegeben.5 ml of this cell suspension in BBM are mixed with 1 ml of a physiological saline solution, which is 0.258 molar of cephaloridin and heated to 37 ° C for 20 minutes. The result of the anti-tumor tests with this streptococcus suspension is given in table I under group I.

Example 2

Eine gemäß Beispiel 1 hergestellte wärmebehandelte Zellsuspension von Streptococcus hemolyticus, Stamm Su₁ATCC Nr. 21 060, wird weitere 30 Minuten auf 45° C erwärmt. Die erhaltene Streptococcensuspension zeigt noch bessere Ergebnisse als die gemäß Beispiel 1 erhaltene Suspension.A heat-treated cell suspension of Streptococcus hemolyticus, strain Su ₁ ATCC No. 21 060, prepared according to Example 1, is heated to 45 ° C. for a further 30 minutes. The streptococcus suspension obtained shows even better results than the suspension obtained according to Example 1.

Example 3

30 g Hefeextrakt (Hersteller Ebios Yakuhin Kogyo K. K.) werden in 500 ml destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung wird mit 10%iger Natronlauge auf einen pH-Wert von 7,0 bis 7,2 eingestellt und 60 Minuten auf 100° C erhitzt. Nach dem Abkühlen wird der gebildete Niederschlag abfiltriert, der pH-Wert des Filtrats mit 10%iger Natronlauge erneut auf 7,0 bis 7,2 eingestellt und mit destilliertem Wasser auf 1000 ml aufgefüllt. Die Lösung wird in sterilisierte Kolben gegossen und bei einem Druck von 1 kg/cm² 10 Minuten dampfsterilisiert. 1000 ml dieser Hefeextraktlösung werden dann mit einer Kultur von Streptococcus hemolyticus, Stamm Su, ATCC Nr. 21 060 (fast avirulenter Stamm), beimpft, der 20 Stunden in 50 ml Fleischbrühe gezüchtet worden war. Die Züchtung erfolgt 14 Stunden statisch bei 37⁰C. Die Kulturbrühe wird anschließend mit Eis abgekühlt und zentrifugiert. Die erhaltenen Zellen werden zweimal mit kalter physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und anschließend in 50 ml BBM suspendiert.30 g of yeast extract (manufacturer Ebios Yakuhin Kogyo KK) are dissolved in 500 ml of distilled water. The solution is adjusted to a pH of 7.0 to 7.2 with 10% sodium hydroxide solution and heated to 100 ° C. for 60 minutes. After cooling, the precipitate formed is filtered off, the pH of the filtrate is again adjusted to 7.0 to 7.2 with 10% sodium hydroxide solution and made up to 1000 ml with distilled water. The solution is poured into sterilized flasks and ^{steam sterilized at a pressure of 1 kg / cm 2 for} 10 minutes. 1000 ml of this yeast extract solution is then inoculated with a culture of Streptococcus hemolyticus, strain Su, ATCC No. 21 060 (almost avirulent strain), which has been grown in 50 ml of meat broth for 20 hours. The cultivation takes place statically for 14 hours at 37 ^° C. The culture broth is then cooled with ice and centrifuged. The cells obtained are washed twice with cold physiological saline solution and then suspended in 50 ml of BBM.

Die Absorption dieser Zellsuspension bei 660 nm beträgt 9,7.The absorption of this cell suspension at 660 nm is 9.7.

5 ml der erhaltenen Zellsuspension in BBM werden mit 1 ml einer physiologischen Kochsalzlösung versetzt, die 0,258molar an Cycloserin ist. Die Suspension wird 20 Minuten auf 37°C erwärmt. Es wird eine Suspension hiimolytischer Sireptucoccen mit günstiger Antitumorwlrkunß erhalten.5 ml of the resulting cell suspension in BBM are mixed with 1 ml of a physiological saline solution, which is 0.258 molar of cycloserine. The suspension is heated to 37 ° C. for 20 minutes. It will be a Suspension of hemolytic syreptucocci with favorable Antitumor effect obtained.

Example 4

Eine gemäß Beispiel 3 hergestellte wärmebehandelte Zellsuspension von Streptococcus hemolyticus, Stamm Su₁ATCC Nr. 21 060, wird weitere 30 Minuten auf 45° C erwärmt. Die erhaltene Streptococcen-Suspension zeigt eine noch bessere anticarcinomatöse Wirkung.A heat-treated cell suspension of Streptococcus hemolyticus, strain Su ₁ ATCC No. 21 060, prepared according to Example 3, is heated to 45 ° C. for a further 30 minutes. The streptococcal suspension obtained shows an even better anticarcinomatous effect.

Example 5

Kulturen von Streptococcus hemolyticus, ATCC Nm. 21 059, 21 546, 21 548 und 12 202, die jeweils 20 Stunden in 15 ml Fleischbrühe gezüchtet worden waren, werden zur Beimpfung von jeweils 300 ml des im Beispiel 1 beschriebenen Hefeextrakts alsCultures of Streptococcus hemolyticus, ATCC Nm. 21 059, 21 546, 21 548 and 12 202, respectively Cultured in 15 ml of meat broth for 20 hours are used to inoculate 300 ml of the yeast extract described in Example 1 as

Nährmedium verwendet und 20 Stunden statisch bei 37" C kultiviert. Sodann wird die Kulturbrühe mit Eis gekühlt und zentrifugiert. Die erhaltenen Zellen werden zweimal mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und in 15 ml BBM suspendiert.Nutrient medium is used and cultivated statically at 37 ° C. for 20 hours. The culture broth is then chilled with ice and centrifuged. The cells obtained are washed twice with physiological saline washed and suspended in 15 ml of BBM.

Die Absorption der Zellensuspension bei 660 nm wird gemessen.The absorption of the cell suspension at 660 nm is measured.

Jeweils 5 ml dieser Zellensuspensionen in BBM werden mit 1 ml einer physiologischen Kochsalzlösung versetzt, die 0,258molar an Cycloserin, Cepha-In each case 5 ml of these cell suspensions in BBM are mixed with 1 ml of a physiological saline solution added, the 0.258 molar of cycloserine, Cepha-

loridin oder dem Kaliumsalz von Penicillin G ist, und 20 Minuten auf 37° C und hierauf weitere 30 Minuten auf 45⁰C erhitzt. Es werden Suspensionen hämolytischer Streptococcen mit anticarcinomatöser Wirkung erhalten.loridine or the potassium salt of penicillin G, and heated for 20 minutes at 37 ° C and then for another 30 minutes at 45 ⁰ C. Suspensions of hemolytic streptococci with an anticarcinomatous effect are obtained.

Die Ergebnisse von Versuchen mit diesen Streptococcensuspensionen sind im Versuchsbeispiel 12 zusammengestellt. The results of tests with these streptococcus suspensions are compiled in test example 12.

Versuchsbeispiel 1Experimental example 1

Eine gemäß Beispiel 1 erhaltene Zellsuspension wird fortschreitend mit BBM auf das 10- bis 40fache verdünnt und sofort hinsichtlich ihrer anticarcinomatösen Wirkung untersucht.A cell suspension obtained according to Example 1 is progressively increased with BBM by 10 to 40 fold diluted and immediately examined for its anticarcinomatous effect.

Zum Vergleich werden Suspensionen hämolytischer Streptococcen untersucht, die in ähnlicher Weise mit dem Kaliumsalz von Penicillin G oder mit Dihydrostreptomycinsulfat behandelt waren. Ferner wird eine unbehandelte Zellsuspension und eine BBM-Lösung ohne Zellsuspension untersucht.For comparison, suspensions of hemolytic streptococci are examined which are carried out in a similar manner treated with the potassium salt of penicillin G or with dihydrostreptomycin sulfate. Further an untreated cell suspension and a BBM solution without cell suspension are examined.

Es wurden Mäuse intraperitoneal mit Ehrlich-Ascites-Carcinomzellen beimpft. Am 8. Tage nach dem Impfen wurden die Zellen gesammelt, mit Eis abgekühlt und mit kalter physiologischer KochsalzlösungMice were given Ehrlich ascites carcinoma cells intraperitoneally inoculates. On the 8th day after inoculation, the cells were collected, cooled with ice and with cold physiological saline solution

versetzt. Sodann wurden die Zellen 5 Minuten mit 800 bis 1000 UpM zentrifugiert. Die sedimentierten Carcinomzellen wurden zweimal mit kalter physiologischer Kochsalzlösung gewaschen und in BBM suspendiert, so daß die Zahl der Zellen 6 χ 10⁷ prooffset. The cells were then centrifuged at 800 to 1000 rpm for 5 minutes. The sedimented carcinoma cells were washed twice with cold physiological saline solution and suspended in BBM, so that the number of cells 6 10 ⁷ per

Millimeter betrug. 1 ml dieser Suspension von Carcinomzellen wurde mit 3 ml der zu untersuchenden Suspension hämolytischer Streptococcen bzw. der BBM-Lösung versetzt, 90 Minuten auf 37"C erwärmt und anschließend in einer Menge von jeweils 0,5 ml intraperitoneal Mäusen injiziert (ddY-Stamm, durchschnittliches Körpergewicht etwa 20 g). Für jede Gruppe wurden fünf Mäuse verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle I angegeben.Millimeters. 1 ml of this suspension of carcinoma cells was mixed with 3 ml of the to be examined Suspension of hemolytic streptococci or the BBM solution added, heated to 37 ° C. for 90 minutes and then injected intraperitoneally into mice in an amount of 0.5 ml each time (ddY strain, average Body weight about 20 g). Five mice were used for each group. The results are given in Table I.

Table I.

HllmolylischHllmolylisch a Slreptococcensuspension a Slreptococcus suspension Ver-Ver 1010 ■überlebende Müuse■ surviving muse 3030th soso Gruppegroup Konzentrationconcentration dUnnungs-thin TageDays 2020th T«geT «ge TilgeRepay zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic in. physiologischerin. physiological faktorfactor spülerdishwasher TageDays spülerdishwasher spülerdishwasher KoohsulzlösungKoohsulzlösung 1010 55 späterlater 55 55 II. CephaloridinCephaloridin 108 mg/ml108 mg / ml .20.20 55 55 55 55 (0,258 Mol)(0.258 moles) 3030th 5 ·5 · 55 44th •3• 3 4040 55 44th 22 22 1010 55 44th 55 55 IIII Penicillin-G-KaliumPenicillin G Potassium 1,6 χ 10⁵ E/ml1.6 10 ⁵ U / ml 2020th 55 55 22 22 (0,258 Mol)(0.258 moles) 3030th 55 44th 11 11 4040 55 44th 11 00 1010 55 33 00 00 IIIIII Dihydrostreptomycin-Dihydrostreptomycin 188 mg/ml188 mg / ml 2020th 55 11 00 00 sulfatsulfate (0,258 Mol)(0.258 moles) 3030th 55 22 00 00 1010 55 22 11 11 IVIV Unbehandelte ZellUntreated cell 2020th 55 33 11 00 suspension in physip-suspension in physip- 3030th 55 22 00 00 logischerKochsaiz-logical cooking 22 lösungsolution 55 00 00 VV Vergleich, nur BBM ohneComparison, only BBM without —- 00 ZellsuspensionCell suspension

Die Konzentration jedes Antibiotikums in physiologischer Kochsalzlösung wurde derart eingestellt, daß sie einer äquimolaren Konzentration von Penicillin-G-Kalium von 1,6 χ 10⁵ Einheiten/ml entsprach. Diese Berechnung basierte auf der Annahme, daß 1 mg Penicillin-G-Kalium 1667 Einheiten entspricht und 1,6 χ 10⁵ Einheiten pro Milliliter einer Konzentration von 0,258 Mol. Die Menge Dihydrostreptomycin wurde als 3/2-Sulfat berechnet.The concentration of each antibiotic in physiological saline solution was adjusted so that it ^{corresponded to an equimolar concentration of penicillin G potassium of 1.6 10 5} units / ml. This calculation was based on the assumption that 1 mg of penicillin G potassium corresponds to 1667 units and 1.6 10 ⁵ units per milliliter to a concentration of 0.258 mol. The amount of dihydrostreptomycin was calculated as 3/2 sulfate.

Unter Verwendung von acht Mäusen für jede Gruppe und einer hämolytischen Streptococcensuspension gemäß Beispiel 2 wurden die in Tabelle II angegebenen Ergebnisse erhalten.Using eight mice for each group and a streptococcal hemolytic suspension according to Example 2, the results given in Table II were obtained.

Table II

HämolytischcHemolytic c StreptococcensuspensionStreptococcus suspension Ver
dünnungs-Ver
thinning 10
Tage10
Days überlebende Mäusesurviving mice 30
Tage30th
Days 50
Tage50
Days Gruppegroup zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic Konzentration
in physiologischerconcentration
in physiological faktorfactor späterlater 20
Tage20th
Days späterlater späterlater KochsalzlösungSaline solution 2020th 88th späterlater 88th 88th II. CephaloridinCephaloridin 108 mg/ml108 mg / ml 4040 88th 88th 88th 88th (0,258 Mol)(0.258 moles) 6060 88th 88th 77th 77th 8080 88th 88th 55 55 2020th 88th 77th 88th 88th IIII Penicillin-G-KaliumPenicillin G Potassium 1,6 χ 10⁵ E/ml1.6 10 ⁵ U / ml 4040 88th 88th 66th 66th (0,258 Mol)(0.258 moles) 6060 88th 88th 22 22 8080 88th 44th 11 11 88th 33 00 00 IIIIII Vergleich, nur BBMComparison, only BBM 00 ohne Zellsuspensionwithout cell suspension

Versuchsbeispiel 2Experimental example 2

Die Präparate wurden folgendermaßen hergestellt: Die Bakterien wurden gemäß Beispiel 3 gezüchtet und die Zellen in BBM suspendiert.The preparations were made as follows: The bacteria were cultured according to Example 3 and the cells suspended in BBM.

1 ml der Lösung von Cycloserin, Penicillin-G-Kalium oder Dihydrostreptomycinsulfat in physiologischer Kochsalzlösung wurde zu 5 ml dieser Zellsuspension zugegeben. Sodann wurden die Suspensionen 20 Minuten auf 37° C und anschließend 30 Minuten auf 45° C erwärmt. Hierauf wurden die Suspensionen mit BBM auf das 2-, A- und 8fache verdünnt und sofort hinsichtlich ihrer anticarcinomatösen Wirkung untersucht.1 ml of the solution of cycloserine, penicillin G potassium or dihydrostreptomycin sulfate in physiological saline was added to 5 ml of this cell suspension. The suspensions were then heated to 37 ° C. for 20 minutes and then to 45 ° C. for 30 minutes. The suspensions were then diluted 2, A and 8-fold with BBM and immediately examined for their anticarcinomatous effect.

Männliche Mäuse vom ddY-Stamm (durchschnittliches Körpergewicht etwa 20 g) wurden intraperitoneal mit jeweils etwa 10⁶ Ehrlich-Ascites-Carcinomzellen (aus Mäuseascites am 8. Tag nach der Beimpfung gewonnen) sowie mit der verdünnten BBM-Lösung in einer Menge von 0,8 ml pro Maus einmal täglich über eine Zeitspanne von 5 Tagen beimpft. Pro Gruppe wurden acht Mäuse verwendet. Nach Verabreichung der Zellsuspension wurde die Uberlebensrate der Mäuse jeder Gruppe bestimmt.Male mice of the ddY strain (average body weight about 20 g) were injected intraperitoneally with about 10 ⁶ Ehrlich ascites carcinoma cells (obtained from mouse ascites on the 8th day after inoculation) and with the diluted BBM solution in an amount of 0, Inoculated 8 ml per mouse once a day for a period of 5 days. Eight mice were used per group. After the administration of the cell suspension, the survival rate of the mice in each group was determined.

Die Ergebnisse sind in Tabelle III aufgeführt.The results are shown in Table III.

Table III

HämolytischHemolytic : Streptococcensuspension: Streptococcus suspension VerVer 1010 überlebende Mäusesurviving mice 3030th 5050 Konzentrationconcentration dünnungs-thinning TageDays 2020th TageDays TageDays Gruppegroup zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic in physiologischerin physiological faktorfactor späterlater TageDays späterlater späterlater KochsalzlösungSaline solution x4x4 88th späterlater 88th 88th II. CycloserinCycloserine 26,4 mg/ml26.4 mg / ml X8X8 88th 88th 55 55 (0,258 Mol)(0.258 moles) x4x4 88th 77th 66th 66th IIII Penicillin-G-KaliumPenicillin G Potassium 1,6 χ IO⁵ E/ml1.6 IO ⁵ U / ml x8x8 88th 77th 22 22 (0,258 Mol)(0.258 moles) x4x4 88th 33 00 00 IIIIII DihydrostreptomycinDihydrostreptomycin 188 mg/ml188 mg / ml x8x8 88th 22 00 00 sulfatsulfate (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 22 00 00 IVIV Vergleich, nur BBM ohneComparison, only BBM without 00 ZellsuspensionCell suspension

Die Konzentration jeder Substanz in physiologischer Kochsalzlösung wurde derart eingestellt, daß sie einer äquimolaren Konzentration von 1,6 · 10⁵ E/ml Penicillin-G-Kalium entsprach.The concentration of each substance in physiological saline was adjusted so that it ^{corresponded to an equimolar concentration of 1.6 × 10 5} U / ml of penicillin G potassium.

Die Berechnung beruhte auf der Annahme, daß 1 mg Penicillin-G-Kalium 1667 Einheiten und 1,6 · 10⁵ E/ml einer Menge von 0,258 Mol entsprachen. Das Dihydrostreptomycinsulfat wurde auf 3/2-Sulfat berechnet.The calculation was based on the assumption that 1 mg of penicillin G potassium ^{corresponded to 1667 units and 1.6 · 10 5} U / ml corresponded to an amount of 0.258 mol. The dihydrostreptomycin sulfate was calculated to be 3/2 sulfate.

Versuchsbeispiel 3Experimental example 3

Versuchsbeispiel 2 wurde wiederholt, die Konzen tration von Cycloserin in physiologischer Kochsalz lösung jedoch auf 26,4 mg/ml und die Konzentratioi von Pencillin-G-Kalium in physiologischer Koch salzlösung auf die gleiche Gewichtskonzentratior eingestellt. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV ange geben.Experimental example 2 was repeated, the concentration of cycloserine in physiological table salt solution, however, to 26.4 mg / ml and the concentration of pencillin-G potassium in physiological cooking saline solution adjusted to the same weight concentration. The results are given in Table IV give.

Table IV

HämolytischeHemolytic StreptococcensuspensionStreptococcus suspension Ver
dünnungs-
faktorVer
thinning
factor 10
Tage
später10
Days
later überlebende Mäusesurviving mice 30
Tage
später30th
Days
later 50
Tage
später50
Days
later Gruppegroup zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic Konzentration
in physiologischer
Kochsalzlösungconcentration
in physiological
Saline solution x4
x8x4
x8 OO OOOO OO 20
Tage
später20th
Days
later 88th
55 8
58th
5 II. CycloserinCycloserine 26,4 mg/ml
(0,258 Mol)26.4 mg / ml
(0.258 moles) x4
x8x4
x8 OO OOOO OO 8
78th
7th 22
ÖÖ 1
01
0 IIII Penicillin-G-KaliumPenicillin G Potassium 4,4 χ ΙΟ⁴ E/ml
(=26,4 mg/ml)4.4 χ ΙΟ ⁴ U / ml
(= 26.4 mg / ml) 88th 33 00 00 IIIIII Vergleich, nur BBM ohne
ZellsuspensionComparison, only BBM without
Cell suspension 00

Versuchsbeispiel 4Experimental example 4

1 ml einer Zellsuspension von Streptococcus hemolyticus, Stamm Su, ATCC Nr. 21 060 (fast avirulenter Stamm) in BBM, die gemäß Beispiel 1 erhalten wurde, wurde mit jeweils 0,2 ml einer physiologischen Kochsalzlösung von Cephaloridin bzw. Penicilhn-G-Kalium versetzt und 20 Minuten auf 37 C und hierauf 30 Minuten auf 45 C erwärmt. 0,1 ml dieser vorbehandelten Lösung wurde subkutan in den Rücken von Mäusen (ddY-Stamm, Durchschnittskörpergewicht etwa 20 g) injiziert und die Mortalität nach 24 Stunden bestimmt. Für jeden Versuch wurden 10 Mäuse verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle V angegeben. 1 ml of a cell suspension of Streptococcus hemolyticus, strain Su, ATCC No. 21 060 (almost avirulent strain) in BBM, which was obtained according to Example 1, was in each case with 0.2 ml of a physiological saline solution of cephaloridin or Penicilhn-G- Potassium was added and the mixture was heated to 37 ° C. for 20 minutes and then to 45 ° C. for 30 minutes. 0.1 ml of this pretreated solution was injected subcutaneously into the backs of mice (ddY strain, average body weight about 20 g) and the mortality was determined after 24 hours. Ten mice were used for each experiment. The results are given in Table V.

Tabelle VTable V Zugegebene« AntibiotikumAdmitted «antibiotic Cephaloridin Cephaloridin Penicillin-G-Kalium Penicillin G Potassium

OhneWithout

Versuchsbeispiel 5
(Toxizitätsversuch)Experimental example 5
(Toxicity test)

1 ml einer Zellsuspension von Streptococcus hemo· lyticus. Stamm Su. ATCC Nr. 21 060 (fast avirulentei Stamm) in BBM, die gemäß Beispiel 3 erhalten wurde wurde mit 0,2 ml einer physiologischen Kochsalzlösung von Cycloserin oder Penicillin-G-Kalium dei im Beispiel 2 verwendeten Konzentration versetzt und 20 Minuten auf 37 C und anschließend weitere 30 Minuten auf 45 C erhitzt. 0,1 ml dieser vorbehandelter Lösung wurde intraperitoneal in Mäuse injiziert (ddY-Stamm. Durchschnittskörpergewicht etwa 20 g und die Mortalität nach 7 Tagen bestimmt. Für jeden Versuch wurden zehn Mäuse verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI angegeben. 1 ml of a cell suspension of Streptococcus hemolyticus. Tribe Su. ATCC No. 21 060 (almost avirulentei strain) in BBM, which was obtained according to Example 3, was mixed with 0.2 ml of a physiological saline solution of cycloserine or penicillin-G potassium of the concentration used in Example 2 and kept at 37 ° C. for 20 minutes then heated to 45 ° C. for a further 30 minutes. 0.1 ml of this pretreated solution was injected intraperitoneally into mice (ddY strain. Average body weight about 20 g and mortality determined after 7 days. Ten mice were used for each experiment. The results are given in Table VI.

6565 Tabelletable VIVI Mortalität.Mortality. Mortalität %Mortality% Zugegebenes AntibiotikumAdmitted antibiotic 00
00
8080 00
00
8080 Cycloserin Cycloserine Penicillin-G-Kalium Penicillin G Potassium Ohne Without

Versuchsbeispiel 6Experimental example 6

1 ml einer 8%igen Lösung von Natriumribonucleat in BBM wurde zu 1 ml einer vorbehandelten Zellsuspension gegeben, die gemäß Versuchsbeispiel 4 erhalten worden war. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei 37° C inkubiert, sodann zentrifugiert und die hämolytische Aktivität der überstehenden Flüssigkeit unter Verwendung von roten Blutkörperchen von Kaninchen in üblicher Weise bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII angegeben.1 ml of an 8% solution of sodium ribonucleate in BBM was added to 1 ml of a pretreated cell suspension obtained according to experimental example 4 had been. The mixture was incubated for 2 hours at 37 ° C., then centrifuged and the hemolytic Supernatant activity using rabbit red blood cells determined in the usual way. The results are given in Table VII.

Table VII

Zugegebenes AntibiotikumAdmitted antibiotic Bildungsfähigkeit
Tür Streptolysin-SEducational Ability
Door streptolysin-S Cephaloridin
Penicillin-G-Kalium ...
Ohne Cephaloridin
Penicillin G Potassium ...
Without < 1 (Hämolyse-Ein-
heiten/ml)
< 1 (Hämolyse-Ein-
heiten/ml)
2260 (Hämolyse-Ein-
heiten/ml)<1 (hemolysis on
units / ml)
<1 (hemolysis on
units / ml)
2260 (hemolysis in
units / ml)

b) Methode des Experimentsb) Method of the experiment

Ratten (Stamm: DONRYU) erhielten durch intraperitoneale Injektion Ratten-Ascites-Hepatomzellen AH-H(IO⁶ Zellen/Tier).Rats (strain: DONRYU) received rat ascites hepatoma cells AH-H (10 ⁶ cells / animal) by intraperitoneal injection.

Gruppen zu je 10 Tieren wurden behandelt mit 100 KE/Tier der verdünnten Präparate PCB-45, CEB-45 und CYB-45. Ferner erhielten Gruppen zu je 10 Tieren nur BBM mit Penicillin-G-Kalium, BBM mit Cephaloridin bzw. BBM mit Cycloserin. Die Tiere erhielten 10 Tage lang täglich eine i. p.-Injektion. Die Behandlung wurde 72 Stunden nach der Inokulation der Tumorzellen begonnen. Bis zu 60 Tagen nach der Inokulation wurde die Zahl der überlebenden Tiere relativ zur Zahl der hehandelten Tiere festgestellt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VIII angegeben.Groups of 10 animals each were treated with 100 KE / animal of the diluted preparations PCB-45, CEB-45 and CYB-45. Furthermore, groups of 10 animals each received only BBM with penicillin G potassium, BBM with cephaloridin or BBM with cycloserine. The animals received i.p. daily for 10 days. injection. Treatment was started 72 hours after inoculating the tumor cells. Up to Sixty days after inoculation, the number of surviving animals was relative to the number of treated animals Animals noted. The results are given in Table VIII.

Präparatpreparation

PCB-45 PCB-45

CEB-45 CEB-45

CYB-45 CYB-45

BBM + Penicillin BBM + penicillin

BBM + Cephaloridin
BBM + Cycloserin ..BBM + cephaloridin
BBM + cycloserine ..

Versuchsbeispiel 8Experimental example 8

Hemmung des Wachstums von Ratten-Ascites-Hepatomzellen AH-13Inhibition of the growth of rat ascites hepatoma cells AH-13

Das Experiment wurde in gleicher Weise durchgeführt wie Versuchsbeispiel 1, jedoch wurden die verdünnten Präparate PCD-45, CEB-45 und CYB-4f intravenös injiziert. Die Ergebnisse sind in Tabelle ΓΧ angegeben.The experiment was carried out in the same way as Experimental Example 1, except that the diluted preparations PCD-45, CEB-45 and CYB-4f are injected intravenously. The results are in table ΓΧ specified.

Table IX

4040

4545

5555

10
10
1010
10
10

5
5
55
5
5

1010

10 10 1010 10 10

Präparatpreparation ü
10ü
10 beriet
20advised
20th ensra
30ensra
30th te nac
40te nac
40 hTag
50hday
50 :n
60: n
60 "5
PCB-45 "5
PCB-45 9
9
9
5
5
59
9
9
5
5
5 7
8
6
0
0
07th
8th
6th
0
0
0 7
8
57th
8th
5 5
6
45
6th
4th 5
6
45
6th
4th 5
6
45
6th
4th CEB-45 CEB-45 CYB-45 CYB-45 BBM + Penicillin
20
BBM + Cephaloridin
BBM + Cycloserin ...BBM + penicillin
20th
BBM + cephaloridin
BBM + cycloserine ...

Versuchsbeispiel 7Experimental example 7

Hemmung des Wachstums von Ratten-Ascites-Inhibition of the growth of rat ascites

Hepatomzellen AH 13Hepatoma cells AH 13

a) Herstellung der Arzneipräparate PCB-45, CEB-45 und CYB-45a) Manufacture of the medicinal products PCB-45, CEB-45 and CYB-45

Die Streptococcenzellen wurden in einer Menge von 10⁹ Zellen/ml in BBM suspendiert, das entweder 27000 I. E. Penicillin-G-Kalium/ml BBM (PCB) oder 0,043 Mol Cephaloridin/ml BBM (CEB) oder 0,043 Mol Cycloserin/BBM (CYB) enthielt. Die Zellsuspension wurde 20 Minuten auf 37° C und hierauf 30 Minuten auf 45⁰C erwärmt.The streptococcus cells were suspended in an amount of 10 ⁹ cells / ml in BBM containing either 27,000 IU penicillin G potassium / ml BBM (PCB) or 0.043 mol cephaloridine / ml BBM (CEB) or 0.043 mol cycloserine / BBM (CYB) contained. The cell suspension was heated for 20 minutes at 37 ° C and then 30 minutes at 45 ⁰ C.

Danach wurden die Präparate mit BBM so verdünnt, daß eine Mischung erhalten wurde, die 10 KE/ml enthielt. 1 KE = 1 klinische Einheit = 0,1 mg getrocknete Bakterienzellen.Thereafter, the preparations were diluted with BBM so that a mixture was obtained which 10 KE / ml. 1 KE = 1 clinical unit = 0.1 mg dried bacterial cells.

Versuchsbeispiel 9Experimental example 9

Hemmung des Wachstums von Ratten-Ascites-Hepatomzellen AH 414Inhibition of the growth of rat ascites hepatoma cells AH 414

Das Experiment wurde in gleicher Weise durchgerührt wie Versuchsbeispiel 7, jedoch wurden die genannten Hepatomzellen verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle X angegeben.The experiment was carried out in the same way as Experimental Example 7, but the called hepatoma cells are used. The results are given in Table X.

Table X

Präparatpreparation

PCB-45 PCB-45

CEB-45 CEB-45

CYB-45 CYB-45

BBM + Penicillin BBM + penicillin

BBM + Cephaloridin
BBM + Cycloserin ...BBM + cephaloridin
BBM + cycloserine ...

Uberlebensrate nach Tagen 10 20 30 40 50 60Survival rate after days 10 20 30 40 50 60

10
10
10
10
10
1010
10
10
10
10
10

10 10 9 3 3 110 10 9 3 3 1

Versuchsbeispiel 10Experimental example 10

Yoshida-Sarkomzellen (eines gegen N-Lost-N-oxidYoshida sarcoma cells (one against nitrogen mustard-N-oxide

resistenten Stamms)resistant strain)

Das Experiment wurde in gleicher Weise durchgeführt wie Versuchsbeispiel 7, jedoch wurden die genannten Yoshida-Sarkomzellen verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle XI angegeben.The experiment was carried out in the same manner as Experimental Example 7, except that the called Yoshida sarcoma cells. The results are given in Table XI.

Table XI

Überlebensrate nach Tagen 10 20 30 40 50 60 Präparat Survival rate after days 10 20 30 40 50 60 preparation

PCB-45 PCB-45

CEB-45 CEB-45

CYB-45 CYB-45

BBM + Penicillin ...
BBM + Cephaloridin
BBM + Cycloserin ..BBM + penicillin ...
BBM + cephaloridin
BBM + cycloserine ..

Überlebensrate nach TagenSurvival rate after days

10
10
10
10
10
910
10
10
10
10
9

2020th

10 10 9 0 0 010 10 9 0 0 0

3030th

4040

5050

Versuchsbeispiel 11Experimental example 11

Klinische Versuche mit CYB-45Clinical trials with CYB-45

Eine Zell'suspension von Streptococcus hemolyticus in BBM, die 0,043 MoI Cycloserin enthält, wurde 20 Minuten auf 37° C und 30 Minuten auf 45⁰C erwärmt. Das erhaltene Präparat CYB-45 wurde zur Behandlung eines Reticulosarkoms bei einem 73 Jahre alten Mann verwendet. Ein fingerspitzengroßes Phyma (knolliger Auswuchs) wurde am linken Unterkiefer beobachtet.A Zell'suspension of Streptococcus hemolyticus in BBM containing 0.043 MoI cycloserine was heated 20 minutes at 37 ° C and 30 minutes at 45 ⁰ C. The obtained preparation CYB-45 was used for the treatment of reticulosarcoma in a 73 year old man. A fingertip-sized phyma (bulbous outgrowth) was observed on the left mandible.

Nach etwa 6 Monaten wurde eine Probeexcision durchgeführt und pathohistologisch untersucht. Diagnose Reticulosarkom. Im 7. Monat wurde der Patient in die Klinik eingeliefert. Bei der Unter-After about 6 months, a trial excision was carried out and examined pathohistologically. Diagnosis of reticulosarcoma. In the 7th month the patient was admitted to the clinic. In the case of

suchung wurden drei harte Knollen von Bohnengröße an beiden Seiten des Unterkiefers sowie ein Knollen von Daumengröße an der linken Seite des Halses festgestellt.Three hard bean-sized tubers were found on either side of the lower jaw as well as one Thumb-sized bulbs noted on left side of neck.

CYB-45 wurde intravenös 4 mal in einer Gesamtdosis von 10 KE (1 KE = 1 klinische Einheit = 0,1 mg getrocknete Bakterienzellen) verabreicht, und zwar am 11. Tag 1 KE, am 18. Tag 3 KE, am 25. Tag 3 KE und am 34. Tag 3 KE.CYB-45 was administered intravenously 4 times in a total dose of 10 CU (1 CU = 1 clinical unit = 0.1 mg dried bacterial cells), namely 1 CU on day 11, 3 CU on day 18, 3 CU on day 25 and on the 34th day 3 KE.

2 Stunden nach jeder Injektion bekam der Patient kurzzeitig Fieber (bis etwa 39° C). Zum Zeitpunkt der 4. Injektion hatte sich der Knollen auf kleine Fingerspitzengröße zurückgebildet. Der Patient hatte 3 kg zugenommen, sein Appetit und Allgemeinzustand sich wesentlich gebessert. Nach 2^x/₂ Monaten wurde der Patient entlasser».Two hours after each injection, the patient briefly developed a fever (up to about 39 ° C). At the time of the 4th injection, the nodule had receded to the size of a small fingertip. The patient had gained 3 kg, his appetite and general condition improved significantly. After 2 ^x / ₂ months the patient was discharged ».

Versuchsbeispiel 12Experimental example 12

Männliche Mäuse vom ddY-Stamm (durchschnittliches Körpergewicht etwa 20 g) wurden intraperitoneal mit jeweils etwa 10⁶ Ehrlich-Ascites-Carcinomzellen (aus Mäuseascites am 8. Tag nach der Beimpfung gewonnen) sowie mit jeweils 0,1 ml pro Maus der im Beispiel 5 erhaltenen Zellensuspensionen in BBM einmal täglich über eine Zeitspanne vor 5 Tagen beimpft. Pro Gruppe wurden acht Mäus< verwendet. Nach Verabreichung der Zellensuspensioi wurde die Uberlebensrate der Mäuse jeder Gruppi bestimmt. Die Ergebnisse sind in den Tabellen XI bis XV aufgeführt.Male mice of the ddY strain (average body weight about 20 g) were given intraperitoneally in each case about 10 ⁶ Ehrlich ascites carcinoma cells (obtained from mouse ascites on the 8th day after inoculation) and with 0.1 ml per mouse in each case as in Example 5 obtained cell suspensions in BBM were inoculated once a day for a period of time before 5 days. Eight mice were used per group. After administration of the cell suspensions, the survival rate of the mice in each group was determined. The results are shown in Tables XI to XV.

Tabelle XII
Streptococcus hemolyticus Sv (ATCC Nr. 21059); Absorption bei 660 nm 7,90Table XII
Streptococcus hemolyticus Sv (ATCC No. 21059); Absorbance at 660 nm 7.90

StreptococcensuspensionStreptococcus suspension KonzertrationConcert Ver- "" 1010 Überlebende MäuseSurviving mice 3030th 5050 OruoneOruone in physiologischerin physiological dünnungs-thinning TageDays 2020th TageDays TageDays zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic KochsalzlösungSaline solution faktorfactor späterlater TageDays späterlater späterlater 26,4 mg/ml26.4 mg / ml 44th 88th späterlater 66th 55 II. CycloserinCycloserine (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 77th 55 33 108 mg/ml108 mg / ml 44th 88th 66th 88th 77th IIII CephaloridinCephaloridin (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 88th 55 55 1,6 χ 10⁵ E/ml1.6 10 ⁵ U / ml 44th 88th 77th 66th 55 IIIIII PeniciUin-G-KaliumsalzPeniciUin-G potassium salt (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 77th 22 22 —- 88th 33 00 00 IVIV Vergleich (nur BBM ohneComparison (only BBM without 00 Zellen)Cells)

Tabelle XIII Streptococcus hemolyticus C-203 S (ATCC Nr. 21 546); Absorption bei 660 nm 5,00 Table XIII Streptococcus hemolyticus C-203 S (ATCC No. 21,546); Absorbance at 660 nm 5.00

StreptococcensuspensionStreptococcus suspension Konzentrationconcentration
in physiologischerin physiological Ver-Ver
dünnungs-thinning 1010
TageDays überlebende Mäusesurviving mice 30
Tage30th
Days 50
Tage50
Days Gruppegroup zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic KochsalzlösungSaline solution ■ faktor■ factor späterlater 20
Tage 20th
Days späterlater spätelate 26,4 mg/ml26.4 mg / ml 44th δδ späterlater 44th 44th II. CycloserinCycloserine (0,258 Mol)(0.258 moles) δδ δδ 66th 33 33 108 mg/ml108 mg / ml 44th δδ 44th 55 55 IIII CephaloridinCephaloridin (0,258 Mol)(0.258 moles) δδ δδ 77th 33 33 1,6 χ 10⁵ E/ml 1.6 10 ⁵ U / ml 44th δδ 55 44th 44th IIIIII PeniciUin-G-KaliumsalzPeniciUin-G potassium salt (0,25δ Mol)(0.25δ mole) δδ δδ 66th 33 22 —- δδ 44th 00 00 IVIV Vergleich (nur BBM ohneComparison (only BBM without 00 •• Zellen)Cells)

Tabelle XIV
Streptococcus hemolyticus Blackmore (ATCC Nr. 21 548), Absorption bei 660 nm 8,60Table XIV
Streptococcus hemolyticus Blackmore (ATCC No. 21 548), absorbance at 660 nm 8.60

StreptococcensuspensionStreptococcus suspension Konzentrationconcentration VerVer 1010 überlebende Mäusesurviving mice 3030th 5050 C5rUDO6C5rUDO6 in physiologischerin physiological dünnungs-thinning TageDays 2020th TageDays TageDays zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic KochsalzlösungSaline solution faktorfactor späterlater TageDays späterlater späterlater 26,4 mg/ml26.4 mg / ml 44th 88th späterlater 66th 55 II. CycloserinCycloserine (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 66th 44th 33 108 mg/ml108 mg / ml 44th 88th 55 66th 66th IIII CephaloridinCephaloridin (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 77th 44th 44th 1,6 χ 10⁵ E/ml1.6 10 ⁵ U / ml 44th 88th 66th 55 55 IIIIII Penicillin-G-KaliumsalzPenicillin G potassium salt (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 66th 33 33 —- 88th 55 00 00 IVIV Vergleich (nur BBM ohneComparison (only BBM without 00 Zellen)Cells)

Tabelle XV
Streptococcus hemolyticus ATCC Nr. 12 202, Absorption bei 660 nm 4,50Table XV
Streptococcus hemolyticus ATCC No. 12 202, absorbance at 660 nm 4.50

StreptococcensuspensionStreptococcus suspension Konzentrationconcentration VerVer 1010 überlebende Mäusesurviving mice 3030th 5050 Gruppegroup in physiologischerin physiological dünnungs-thinning TageDays 2020th TageDays TageDays zugegebenes Antibiotikumadded antibiotic KochsalzlösungSaline solution faktorfactor späterlater TageDays späterlater späterlater 26,4 mg/ml26.4 mg / ml 44th 88th späterlater 55 44th II. CycloserinCycloserine (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 55 33 33 108 mg/ml108 mg / ml 44th 88th 44th 55 55 IIII CephaloridinCephaloridin (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 66th 44th 33 1,6 χ 10⁵ E/ml1.6 10 ⁵ U / ml 44th 88th 44th 44th 44th IIIIII Penicillin-G-KaliumsalzPenicillin G potassium salt (0,258 Mol)(0.258 moles) 88th 88th 55 33 22 —- 88th 33 00 00 IVIV Vergleich (nur BBM ohneComparison (only BBM without 00 Zellen)Cells)

Claims

Patent claims:

1. Process for the production of preparations for hemolytic streptococci for supportive purposes Treatment of cancer by treating a suspension of living cells Hemolytic streplococcal effect with an antibiotic and brief two-stage heating to temperatures of 37 and 45 ° C, characterized by the fact that as

Antibiotic Cephalosporin C or Cycloserii used and in the first stage 20 to 60 minutes to 30 to 38 ⁼ C and in the second stage 20 bi; Heated to 38 to 50 ⁰ C for 60 minutes.

2. The method according to claim 1, characterized in that there is a hemolytic Slrepto cocccn Streptococcus hemolyticus ATCC No. 2106 (used.