DE1642670C

DE1642670C - Method for the cultivation of Leishma men

Info

Publication number: DE1642670C
Authority: DE
Inventors: Georg Solomonowitsch Moskau B21b37OO Silberblat
Original assignee: Wsesojusnii nautschno lssledovatels kij Institut antibiotikow, Moskau
Publication date: 1972-04-06

Description

1642 8701642 870

^- Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Kultivie- leishmanien im Bereich von 30 bis 40, ΜίΠ./ml erreicht ^ - The invention relates to a method for cultivating isishmanias in the range of 30 to 40, ΜίΠ. / Ml achieved

fi rung von Leis,hm»nierv auf Glukose und Vitamin B₁ werden und drittens die Kultivierung nur in dem ge*fi tion of leis, hm »nierv on glucose and vitamin B ₁ and thirdly, the cultivation only in the ge *

f^rc enthaltenden Nährböden unter Verwendung von ringen Volumen der Nährböden von I bis 5 mJ statt"culture media containing f ^r c using small volumes of culture media from 1 to 5 mJ instead of "

Inokulum, Leishmanien gehören zum Typ Protozoa, fand,Inoculum, Leishmania belong to the Protozoa type, found,

rT ■ zur Klasse Flagellata, der Unterklasse Zooflagellata. S Die der vorliegenden Erfindimg zugrunde liegenderT ■ to the class Flagellata, the subclass Zooflagellata. S The one on which the present invention is based

V... der Ordnung Protomonadidss, der FamilieTrypanoso- Aufgabe besteht m der Beseitigung der vorgenannten V ... of the order Protomonadidss, of the family Trypanoso, the task is to eliminate the aforementioned

'£■" midea und der Gattung Leishmania und dienen be- "Nachteile durch Entwicklung eines Verfahrens zur'£ ■ "midea and the genus Leishmania and serve" disadvantages by developing a method for

tr kanntlich zur Herstellung medizinischer und biologi- · Kultivierung von Leishmanien auf ein- oder zwei-tr known for the production of medical and biological cultivation of leishmanias on one or two

1'^., scher Präparate, wie Vakzine, Antigene, Seren und phasigen stabilisierten Nährböden in den gewünschten1 '^., Shear preparations such as vaccines, antigens, serums and phase-stabilized nutrient media in the desired

Jj Γ antibiotische Stoffe, * ίο Mengen und auch unter großtechnischen Bedingungen,Jj Γ antibiotic substances, * ίο quantities and also under industrial-scale conditions,

f\: Die Leishmanien sind durch zwei durch den Wechsel Diese Aufgabe wurde durch ein Verfahren zur Kulti- f \: The Leishmanias are through two through the alternation This task was through a process of culti-

[\ des »Y,'irtes« bedingte Entwicklungsstufen gekenn- vierung von Leishmanien auf Glukose und Vitamin B₁ [\ des "Y, 'irtes" - related developmental stages of leishmania to glucose and vitamin B ₁

[V zeichnet: im Wirbeltierwirt entwickeln sich nämlich die enthaltenden Nährböden unter Verwendung von[V draws: in the vertebrate host namely, the nutrient media they contain develop using

i/ Leishmanien in der leishmanialen Entwicklungsstufe, Inoku'lum gelöst, das dadurch gekennzeichnet ist, daßi / Leishmania in the leishmanial stage of development, Inoku'lum solved, which is characterized in that

\f im wirbellosen Wirt dagegen in der Leptomonas-Stufe. 13 man erfindungsgemäß In contrast, \ f in the invertebrate host is in the Leptomonas stage. 13 according to the invention

fjX In letzterer sind die Leishmanien Erreger der Human- . , , , _T_, , , ^ ,, ... 1· %. η
erkrankungen, Haut- und Visceral-Leishmaniosen, die, ^a) ^hst den Nährboden nut allen üblichen Bein v.elen Ländern Asiens, Afrikas und Südamerikas standteilen, außer Glukose und Vitamin B„ beverbreitet sind. Zur S'rophylaxe und Heilbehandlung reitet,fjX In the latter, the leishmanias are pathogens of the human. _{,,, T} _,,, ^ ,, ... 1 %. η
Diseases, skin and visceral leishmaniasis, which, ^a ) ^ hst the breeding ground in all common parts of many countries in Asia, Africa and South America, except glucose and vitamin B are widespread. Rides for prophylaxis and therapeutic treatment,

der Leishmaniosen werden biologische Präparate be- ao b) in den bereiteten Nährboden erst Glukose undof leishmaniasis biological preparations are loaded ao b) in the prepared culture medium first glucose and

nutzt, die gegenwärtig unter laboratoriumsmäßigen Vitamin B, unduses the currently under laboratory-grade vitamins B, and

Bedingungen hergestellt werden und einer bedeutenden c) dann das Leishmanien-Inokulum einführt,Conditions are established and a significant c) then introduces the Leishmania inoculum,

Vervollkommnung bedürfen. <j) worauf die Kultivierung unter Durchblasen einesNeed perfection. <j) followed by cultivation while blowing a

* Bekannt sind Laboratoriumsverfahren zur Kultivie- stufenweise sich erhöhenden Luftvolumens bis in* Laboratory processes for cultivating gradually increasing air volumes up to in are known

rung \.on Leishmanien durch Einführung von lnoku- 25 _dj_e jj_ef_e <}_er zu kultivierenden Schicht durchge-on Leishmania by introducing lnoku 25 _d j _e jj _e f _e <} _er layer to be cultivated.

lum in eine dünne Schicht ein-oder zweiphasiger Nähr- führt wird,
boden, in die Glukose und Vitamin B₁ im Zuge derlum leads to a thin layer of one- or two-phase nutrients,
soil, into the glucose and vitamin B ₁ in the course of

Nährbodenbereitung zusammen mit den anderen üb- In der Verfahrensstufe c) werden als Inokulum verliehen Bestandteilen l .-^gebracht waren. Auf Nähr- zugsweise Kulturen in der Leptomonas-Entwicklungsböden entwickein sich die Leishmanien im wesentlichen 30 stufe, und zwar von der Phase des logarithmischen in der Leptomonas-Stufe (vgl. die LuSSR-Zeitschrift Wachstums bis zur Phaie des abnehmenden Wachs- »Labora.ornoje ('to«, 1961, Nr. 6, S. 46> Nach diesem turns, im 5- bis 15täg?gen Alter mit einem pH-Wert von Verfahren wurde in einer Kultur von j ml Volumen mindestens 5,5 und einer Konzentration an Leishmain 360 Stunden nach Beginn der Populationsentwick- nien von mindestens 30 Mill, ml verwendet. Das lung eine maximalt· Konzentration an Leishmanien 35 Inokulum führt man zweckmäßig in den Nährboden von 32 Mill, ml erzielt. in einer Volumenmenge von 5 bis 20°/₀ in bezug auf Für die bekannten Verfahren werden jedoch keine das Volumen dieses Nährbodens ein. um in der erhalbestimmten Kennzahlen hinsichtlich Alter, pH-Wert tenen frisch inokulierten Kultur eine Konzentration und Konzentration der Zellen im Inokulum, Volumen an Leishmanien von 4 bis IK Mill, ml herbeizuführen, des zum Gesamtvolumen des Nährbodens hinzugefüg- 41 In der Regel werden «ährend der Kultivierungsten Inokulums. pH-Wert und Konzentration an stufe d) 1 bis 6 Volumen/Std. Luft je 1 Volumen Leishmanien in der frisch inokulierten Kultur und Kultur durchgeblasen.Culture medium preparation together with the other ingredients l .- ^ were brought in process stage c) as inoculum. On nutrient-wise cultures in the Leptomonas developing soil, the Leishmanias develop essentially from the logarithmic phase in the Leptomonas stage (cf. the LuSSR journal Growth to the phase of decreasing wax- »Labora.ornoje ('to', 1961, No. 6, p. 46> After this turns, in 5 to 15 days of age with a pH of procedure was in a culture of j ml volume at least 5.5 and a concentration of Leishmain 360 hours after the start of Populationsentwick- nien of at least 30 million, ml. the lung is advantageously carried out in the culture medium from 32 million a maxi paints · concentration of Leishmania 35 inoculum ml obtained. in a volume amount of 5 to 20 ° / ₀ With regard to the known methods, however, none of the volume of this nutrient medium is used in order to determine the concentration and concentration of the cells in the inoculum, volume of L in the freshly inoculated culture, in terms of age, pH value, and the concentration of the cells in the inoculum To bring about eishmania from 4 to 1K mill. ml of that added to the total volume of the culture medium. pH value and concentration at stage d) 1 to 6 volumes / hour. Air blown through 1 volume of Leishmania each in the freshly inoculated culture and culture.

andere Kennwerte angegeben. Bei diesen Verfahren Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren könnenother parameters specified. With these methods with the method according to the invention can

kommt es bei der Bereitung der Nährböden lediglich Konzentrationen an Leishmanien von 120 bis 150MiIl./When preparing the culture media, only concentrations of leishmania of 120 to 150 milliliters /

zu einem teilweisen Abbau einiger Bestandteile (wie 45 ml erhalten werden; diese Konzentration ist 3- bisa partial degradation of some constituents (such as 45 ml; this concentration is 3 to

Glukose und Vitamin B₁). So zersetzt suh Glukose 4mal größer als die mit bekannten KultivierverfahrenGlucose and Vitamin B ₁ ). For example, suh breaks down glucose 4 times more than that with known cultivation methods

durch die fraktionierte Sterilisation zu sauren Zwischen- erhältliche. Hohe Konzentrationen werden in Zeit-through fractional sterilization to acidic intermediates. In time, high concentrations

produkten, die sich für den Bedarf der Mikroorganis- spannen erreicht, welche nur die Hälfte der durch bw-products that meet the needs of the microorganisms, which only cover half of the

men nicht cigren. Infolgedessen wird auch die Puffer- kannte Verfahren erzielbaren sind. Die genanntenmen do not cigren. As a result, the buffer-known processes are also achievable. The mentioned

kapazi'ät der Nährböden gestört, wodurch es des öfte- 50 Konzentrationen werden zudem in Kulturen erhalten,the capacity of the culture media is disturbed, which often results in concentrations being retained in cultures,

ren zu einer Verschiebung des pH-Wertes im fertigen deren Volumen gegenüber den bekannten Verfahrenren lead to a shift in the pH value in the finished volume compared to the known processes

Nährbodon von schwach alkalischer Reaktion 7.2 bis das 500- bis 700fache betragen. Darüber hinaus er-The nutrient medium for a weakly alkaline reaction is 7.2 to 500 to 700 times. In addition,

TA, die für die Leishmanienvermehrung notwendig ist, moglicht die Erfindung, auf einphasigen Nährlösungen TA, which is necessary for leishmania multiplication, makes the invention possible on single-phase nutrient solutions

bis zur schwach sauren 6.7 bis 6,9 kommt. Die fin- Leishmanien-Kulturen zu gewinnen, die eine homogeneuntil the weakly acidic 6.7 to 6.9 comes. The fin Leishmania cultures to attract the homogeneous

führung des Vitamins B, zusammen mit den übrigen 55 Zelleniuspension ohne Beimengungen von Medium-management of vitamin B, together with the remaining 55 cells without the addition of medium

U Bestandteilen in einen Nährboden schwach alkali- komponenten darstellen, so daß das Zellenmr'enal bei U constituents in a nutrient medium represent weakly alkaline components, so that the cell mr'enal with

j scher Reaktion ist ebenfalls ungünstig und führt zu anschließender Verwendung nicht zusätzlich einigtj shear reaction is also unfavorable and leads to subsequent use not additionally agreed

einem raschen Abbau des freien Vitamins lange Zeit zu werden braucht, Durch die getrennte Sten ierungA rapid breakdown of the free vitamin takes a long time, due to the separate stenosis

Vor dem Inokulieren des Inokulums und dem Ent* des Nährbodens und det Glukose" bzw. Vitamin Bj*Before inoculating the inoculum and the Ent * of the medium and det glucose "or vitamin Bj *

wicklungsbegintt der Leishmanien. Die bisherigen Ver- 60 Lösungen wird es möglich, die Zeit für die Nährboden-Leishmania begins to develop. The previous solutions make it possible to save the time for the culture medium

f fahren ermöglichen nicht die Aufbewahrung der bercl· bereitung um das 10- bis lifaehe, und zwar auf einigeF driving do not allow the preparation to be stored around ten to fifty years ago, namely for a few

|i toten Nährböden während längeren¹ Zeit; vielmehr ist Stunden zu verringern. Die getrennte Aufbewahrung| i dead culture media during prolonged ^one time; rather, hours should be reduced. Separate storage

j! es notwendig, nach kurzen Zeilspannen die Nährböden des Nährbodens sowie der Glukose- und Vitamin B₁-j! it is necessary, after a short period of time, to remove the nutrient media as well as the glucose and vitamin B ₁ -

Y neu herzustellen, Die bekannten Verfahren ermög-' Lösungen gewährleistet während einer längeren Lager- Y to be re-established, the known processes enable solutions to be ensured during a long period of storage

liehen auch keine Oewinnung von Leishmanien in 65 Mit (einiger Monate) die Konstanthaltung der Kon-lent no recovery of Leishmania in 65 With (a few months) keeping the constant

] größeren Mengen, da erstens die Kultivierung lang' zentrationen und eine hohe Qualität der Bestandteile in] larger quantities, firstly because the cultivation is long and the quality of the constituents is high

ii v:ierig ist und 240 bis 360 Stunden dauert, zweitens dem zum Inokulieren bereiten Nährböden, der nachii v: ierig and lasts 240 to 360 hours, secondly the culture media ready for inoculation, the after

ρ nur niedrige Werle maximaler Konzentrationen an Bedarf verwendet wird.ρ only low values of maximum concentrations of demand are used.

^Ji< H r^?i ^J i < H r ^? i

''.U § Das erfindungsgemaße? Verfahren eignet sich für die Weise durchgeblasen; wahrend der ersten 24 Stunden * It Kultivierung von Leishmanien sowohl vom Haut'als betragt die durchströmende Luftmeng? IVoI ^ID"' ''. U § The according to the invention? Method is suitable for the way blown through; during the first 24 hours * It cultivation of Leishmania both from the skin and the amount of air flowing through IVoI ^ID "'

vom Viscemltyp,, . je Volumen Kultur; in den nilvhsten 24 Stunden wirdof the Visceml type ,,. per volume of culture; in the next 24 hours

In den nachfolgenden Ausführungsbeispielen wird der Verbrauch allmählich auf 2,7 Volumen/Std, undIn the following exemplary embodiments, the consumption is gradually increased to 2.7 volumes / hour and

die Erfindung näher erläutert. is schließlich auf 6 Volumen/Std, je Volumen Kultur erhöht. Dieser maximale Luftverbrauch wird bis zum the invention explained in more detail. is finally increased to 6 volumes / hour, per volume of culture. This maximum air consumption is up to

Beispiel! pinstellen der maximalen LeishiTOni'en-Kqnzentrauor,Example! pin locations of the maximum LeishiTOni'en-Kqnzentrauor,

Bereitung des Nährbodens ⁱⁿ ^{der Ku!tur} aufrechterhalten, Die Zeitdauer einerPreparation of the medium ^structure maintained ⁱⁿ ^{the Ku!} The duration of a

Kultivierungsperiode von Leishmanien in einem Vo-Cultivation period of Leishmania in a pre-

a)in einem Reaktor von 51 Fassungsvermögen wird 19 jumen von 3,5 | beträgt 144 bis 168 Stunden; in diesera) In a reactor of 51 capacity, 19 jumen of 3.5 | is 144 to 168 hours; in this

ein jrweiphasiger Pepton-Hefe-Nährboden bereitet, der Zeit wächst die Zelienkonzentration von dem Aus-prepares a two-phase peptone-yeast culture medium, over time the cell concentration increases from the

je Liter folgende Zusammensetzung aufweist: gangswert von 4 bis 18 Mill./rnl auf den Endwert vonper liter has the following composition: initial value from 4 to 18 million / ml to the final value of

J DD-Pepton ,,, , _r , 200 ml ^{l20 Ws} ^⁵⁰ MiH./mi.J DD-Peptone ,,,, _r , 200 ml ^{l20 Ws} ^ ⁵⁰ MiH./mi.

"^ Eleischwasser ,,...,,. .,,,,,,,, 200 ml"^ Eleischwasser ,, ... ,,.. ,,,,,,,, 200 ml

t_t destilliertes Wasser ,,,,,,,.,,, ,. 600 ml ^£s B e i s ρ ι e 1 2 t _t distilled water ,,,,,,,. ,,,,. 600 ml ^{£ s} B eis ρ ι e 1 2

L -' trockene Blutkörner , 20 g Bereitung des NährbodensL - 'dry blood grains, 20 g preparation of the culture medium

^h * Nä,HPO₄ · 12H„O 3 g _n ., _f ^h * Nä, HPO ₄ · 12H "O 3 g _n ., _f

ΚΗ,ΡΟ " 05e Im 5-l-Reaktor wird ein einphasiger Pepton-Hefe-ΚΗ, ΡΟ "05e In the 5-liter reactor, a single-phase peptone yeast

^{2 4} ' ^B Nährboden folgender Zusarr. ..ensetzung (je Liter) be- ^{2 4} ' ^B nutrient medium as follows. ..settlement (per liter)

Das DD-Pepton ist ein Produkt autoproteolytischer 20 reitet:The DD peptone is a product of autoproteolytic 20 rides:

Spaltung von Fleischbrei und Bierhefe. Diese Nähr- DD-Peoton 200 mlSplitting of meat pulp and brewer's yeast. This nutritional DD-Peoton 200 ml

bodenkomponente stellt die hauptsächliche Stickstoff- Fleischwasser 200 mlsoil component represents the main nitrogen meat water 200 ml

und Vitaminquelle für die Leishmanien dar Hämatin-Lösung ".'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'. 200 mland source of vitamins for Leishmanias hematin solution ". '.'. '.'. '.'. '.'. '.'. '.'. '.'. '.'. '.'. '. 200 ml

Zunächst bereuet man die Hamat.n-Losung aus _{destilIiertes Was}:_er 400 mlAt first one regrets the Hamat.n solution from _{distilled water} : _he 400 ml

trockenen Blutkornern von Schweineblut, und zwar 25 x. udq . i?h O 3gdry blood grains from pig blood, namely 25 times. udq. i? h O 3g

nimmt man 100 g Blutkörner und extrahiert bei einem ku po * ² 0 5 etake 100 g of blood grains and extract with a ku po * ² 0 5 e

pH-Wert von 8,3 bis 8,4 mit alkalischem Wasser ² " pH value from 8.3 to 8.4 with alkaline water ² "

Hämatin; die Hamann-Lösung wird durch 1,5 Stunden Zur Bereitung der Hämatin-Lösung versetzt man lunges Erhitzen bei 127°C sterilisiert. Zu der erhaltenen 20 g trockener Blutkörner aus Schweineblut mit 500 ml Losung gibt man eine Phosphatsalzt: enthaltende Nähr- 30 destilliertem Wasser, das mit 20°/₀iger NaüH-Lösung bouillon zu und stellt das pH auf 7,6 bis 7,8 ein. Das bis /um pH-Wert 8,3 bis 8.4 alkalisiert ist. Das erhal-Fleuchwasser wurde durch Kochen von 0,5 kg Rind- tene Gemisch wird durch ein 1,5 Stunden langes Erflcisch in 1 1 Wasser gewonnen. hitzen auf 127"C sterilisiert, wobei die Blutkörner eine Der vorbereitete Nährboden wird durch Erwärmen feindisperse Suspension bilden. Letztere wird auf 20 bis tuf 127 C während 1,5 Stunden sterilisiert. Dann 35 30⁰C abgekühlt, 1 bis 3 Tage lang bei 4 bis 8⁰C wiru der Nährboden auf 15 bis 25 ¹C gekühlt und bei absetzengelassen, dann die über dem Niederschlag bediescj-Temperatur aufbewahrt, worauf man den Nähr- findliche Flüssigkeit dekantiert oder das Gemisch filboden während einiger Monate verwenden kann. triert. Man erhält ein transparentes Filtrat dunkelb) In den jeweils zum Kultivieren der Leishmanien violetter Farbe, das als Hämatin-Lösung zur Nährverwendeten Teil des Nährbodens führt man 150 ml 40 bodenbereitung verwendet wird, aber auch unter Zueincr sterilen 34°/₀igen Glukose-Lösung und 5 ml einer satz von 1 °/₀ Chloroform bei einer Temperatur von 5° ,igen sterilen Vitamin Β,-Lösung ein, wonach das 4 bis 6⁰C 1 Monat lang aufbewahrt weiden kann. Zur Inokiiliun inokuliert wird. Bereitung des Nährbodens wird die Hämatin-Lösung L) Das Inokulieren: Als Inokulum verwendet man mit der Phosphatsal/e enthaltenden Nährbouillon verin jedem Fall eine Kultur, die mindestens 97°/₀ 45 mischt und das Gemisch auf ein pH von 7,6 bis 7,8 Leishmanien in der Leptomonas-Entwicklungsstufe eingestellt.Hematin; the Hamann solution is sterilized for 1.5 hours. To prepare the hematin solution, lung heating at 127 ° C. is added. To the obtained 20 g of dry grains blood from pig blood with 500 ml of solution are to a Phosphatsalzt: nutrient containing 30 of distilled water, bouillon with 20 ° / ₀ hydrochloric NaüH solution are added and the pH adjusted to 7.6 to 7.8 a . That is alkalized to / around pH 8.3 to 8.4. The resulting Fleuchwasser was obtained by boiling 0.5 kg of beef mixture is obtained by stirring it in 1 liter of water for 1.5 hours. overheat to 127 "C sterilized, wherein the grains have a blood The prepared culture medium is formed by heating finely dispersed suspension. The latter is sterilized at 20 to 127 tuf C for 1.5 hours. Then cooled 35 30 ⁰ C, 1 to 3 days at 4 to 8 ⁰ C, the culture medium at 15 Wiru to 25 ¹ C cooled and allowed to settle in, then stored via the precipitate bediescj temperature, followed by decanting the nutrient-sensitive liquid or mixture filboden for several months use can. trated. this gives a transparent filtrate Dark Blue) to each violet for culturing the Leishmania color, as a hematin solution Nährverwendeten part of the culture medium leads to 150 ml of 40 ground preparation is used, but also Zueincr sterile 34 ° / ₀ aqueous glucose solution and 5 ml a rate of 1 ° / ₀ chloroform at a temperature of 5 °, sterile aqueous vitamin Β, a solution, after which the 4 to 6 ⁰ C for 1 month can graze kept long. to Inokiiliun inocula is made. The hematin solution is used to prepare the nutrient medium. L) Inoculation: The nutrient broth containing the phosphate saline is always used as an inoculum which _{mixes at least 97 ° / 0} 45 and the mixture to a pH of 7.6 to 7 , 8 Leishmanias discontinued in the Leptomonas stage of development.

(wobei höchstens 5°/„ deformierte Zellen zulässig sind) Die übrige Bereitung des Nährbodens, die Entnahme(with a maximum of 5% deformed cells allowed) The rest of the preparation of the nutrient medium, the removal

Und höchstens 3°/₀ Leishmanien in der leishmanialen des Inokulums, die Inokulierung der Leishmanien undAnd at most 3 ° / ₀ leishmanias in the leishmanial of the inoculum, the inoculation of the leishmanias and

Entwicklungsstufe enthält; der pH-Wert des Inoku- das Durchblasen von Luft während der KultivierungStage of development contains; the pH of the inoku the bubbling of air during cultivation

lums darf nicht unter 5,5 liegen, die Konzentration an 50 ^rfolgt gemäß Beispiel 1.The lumens must not be below 5.5, the concentration of 50 ^ is according to Example 1.

Mikroorganismen beträgt 30 Mill./ml und mehr, das Die graphische Darstellung zeigt Entwicklungs-Alter der Kultur 5 bis 15Tage. Das Inokulum wird kurvender Leishmanien auf verschiedenen Nährboden, Zunächst in Rour..~>chen Kolben und anschließend nach- und zwar die Kurve 1 die Entwicklung auf klassischem «inanderfolgend in Gefäßen von 0.5 bis 1,5 I Fassungs- NNN-Agar-Nährboden (nach Novy, Neal und Vermögen gezüchtet; die in jedem Gefäß gezüchtete 55 Nico I It-: »Agar-Nährboden«, 1908) mit anrei-Kultur dient als Inokulum für die Kultur des gleichen chermier, 1 °/„ Pepton enthaltender Flüssigkeit, die J? oder ei nt ·. größeren Volumens. Die Kultur wird in der Kurve 2 die Entwicklung auf einem bekannten 2^
f P ase (K-- logarithmischen Wachstums in einem Vo- phasigen Pepton-Hefe-Nährboden und die Kun « lumen ■.> n 5 bis 20%. bezogen auf das Volumen des die Entwicklung auf einphasigem Pepton-Hefe-N 1 < j Nährb "ims, inokuliert. In der frisch inokulierten 60 boden nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ge 1
KuItU' '»trägt die Leishmatiien-Konzentralion 4 bis Beispiel 2. In der graphischen Darstellung gibt
18 MiH ",| bei einem pH-Wert von 7,2 bis 7,8. Abszisse die Tage des Kulturwachslunis, die Ordn
j d) !'"■ Kultivierung: Nach dem Inokulieren wird die Lcishmanien*Konzenlration in Mill./ml an. v> das Chi.iii mit der Kultur in einen Thermostaten gc* aus der graphischen Darstellung zu ersehen, bcn 1 f stellt ( dt r auf andere Weise erwärmt, damit die Ent- 65 die maximale Leishmanien-Konzentration beim et
\ wicklunf der Leishmanien bei einer Temperatur von dungsgemäßcn Verfahren (Kurve 3), nämlich 200M
\ 25,5 bis ?7.5°C erfolgt. Die frisch inokulierte Kultur ml, bereits am 6*. Tag der Kulturcntwicklung;
ΐ wird mit zunehmenden Volumen Luft in folgender übersteigt um das 6fache die Leishmanien-KonzenMicroorganisms is 30 million / ml and more, the graph shows the age of development of the culture 5 to 15 days. The inoculum is curving Leishmania on different nutrient media, first in a round flask and then following curve 1, the development on classic «successively in vessels of 0.5 to 1.5 l capacity NNN agar culture media ( cultivated according to Novy, Neal and Vermögen; the 55 Nico I It-: "agar medium", 1908) with anrei culture grown in each vessel serves as inoculum for the culture of the same chermier liquid containing 1% peptone that J? or ei nt ·. larger volume. The culture will develop in curve 2 on a known 2 ^
f P ase (K-- logarithmic growth in a void-phase peptone-yeast culture medium and the Kun «lumen.> n 5 to 20%. based on the volume of the development on single-phase peptone-yeast-N 1 <j Inoculated nutrients. In the freshly inoculated soil according to the method according to the invention, 1
KuItU '' »carries the Leishmatiien-Konzentralion 4 to Example 2. In the graphic representation there
18 MiH ", | at a pH value of 7.2 to 7.8. The abscissa is the days of the culture wax, the ordn
jd)! '"■ Cultivation: After inoculation, the Lcishmania * concentration in mill./ml r heated in a different way so that the ent- 65 the maximum Leishmania concentration at the et
\ Of Leishmania wicklunf at a temperature of dungsgemäßcn method (curve 3), namely 200M
\ 25.5 to ? 7.5 ° C takes place. The freshly inoculated culture ml, already on 6 *. Day of cultural development;
ΐ will with increasing volume of air in the following exceeds the Leishmania concentration by 6 times

tion nach den bekannten Verfahren (Kurve 2), Auch wird die maximale Konzentration döppeit so schnell wie nach den bekannten Verfahren erreicht* ·tion according to the known method (curve 2), also the maximum concentration is reached as quickly as with the known methods *

Claims

Patent claims:

1. Method of Culturing Leishmania on nutrient media containing glucose and vitamin Bi with the introduction of inoculum, thereby marked ι * that one

a) first prepares the nutrient medium with all the usual components, except glucose and vitamin B _1,

b) in the prepared nutrient medium first glucose and vitamin B ₁ and

c) then introduces the Leishmania Inokuium,

d) followed by cultivation while blowing through a gradually increasing volume of air is carried out down to the depth of the layer to be cultivated.

2i A method according to claim 1, characterized gckentl · * characterized in that mäh In stage e) as ihökultim a Leishmaniefi-Kuitüf in the Leptdmönäs-Entwickiurigsstiife from the phase of iogarithriiischen growth to do phase of äbhehmehdeii growth in Aitef 5-15 days a pH "value of at least 5 _S 5 and a Leishmania Korizentraiion of at least 4Ö Mill./mi used.

3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that in step c) the inoculum in the culture medium in a volume of 5 to 20%, based on the volume of this medium, introduces and a Leishmania concert in the freshly inoculated culture obtained sets from 4 to 18 mill./ml.

4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that one during the cultivation stage d) 1 to 6 volumes / hour Air blows 1 volume of culture through each.

1 sheet of drawings