DE1114484B

DE1114484B - Method for purifying streptomycin

Info

Publication number: DE1114484B
Application number: DED32158A
Authority: DE
Inventors: Frank Ridgway
Original assignee: Distillers Co Yeast Ltd
Current assignee: Distillers Co Yeast Ltd
Priority date: 1959-01-06
Filing date: 1959-12-19
Publication date: 1961-10-05

Description

Verfahren zur Reinigung von Streptomycin Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Reinigung von Streptomycin.Methods for Purifying Streptomycin The invention relates to to a method for purifying streptomycin.

Es ist bekannt, daß das Antibiotikum Streptomycin eine freie Aldehydgruppe besitzt. Daher läßt es sich mit primären Monoaminen zu Schiffschen Basen oder mit Diaminen, die primäre und sekundäre Aminogruppen an benachbarten Kohlenstoffatomen besitzen, zu Imidazolidinen umsetzen. Einige dieser Streptomycinderivate sind wenig in Wasser löslich, und man kann daher mit ihrer Hilfe das Streptomycin aus wäßrigen Flüssigkeiten, die es enthalten, leicht abtrennen (vgl. zum Beispiel die USA.-Patentschriften 2 717 893 und 2 767168).It is known that the antibiotic streptomycin has a free aldehyde group owns. Therefore it can be combined with primary monoamines to form Schiff bases or with Diamines, the primary and secondary amino groups on adjacent carbon atoms own, convert to imidazolidines. Some of these streptomycin derivatives are few soluble in water, and you can therefore with their help the streptomycin from aqueous Easily separate liquids containing it (see, for example, USA patents 2 717 893 and 2 767168).

Es ist ferner aus der zuletzt genannten Patentschrift bekannt, reines Streptomycin aus den hergestellten Schiffschen Basen oder Imidazolidinen durch saure Hydrolyse zu gewinnen.It is also known from the last-mentioned patent specification, pure Streptomycin from the Schiff bases or imidazolidines produced by acidic Gaining hydrolysis.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Reinigung von Streptomycin wird nun die Hydrolyse der aus Streptomycin oder einem Salz desselben in wäßriger Lösung mit einem geeigneten Amin, in Anwesenheit von Sulfationen bei einem pH-Wert über etwa 7 hergestellten Schiffschen Base oder Imidazolidinverbindung mit Hilfe eines sauren lonenaustauscherharzes, vorzugsweise in der freien Säureform durchgeführt, wobei das schwerlösliche Ausgangsmaterial mit dem Ionenaustauscher und Wasser gemischt und nötigenfalls so lange Säure zugegeben wird, bis sich die schwerlösliche Verbindung auflöst, worauf das Ionenaustauscherharz aus der Reaktionsmischung abgetrennt und aus der verbleibenden wäßrigen Lösung ein gereinigtes Streptomycinsalz gewonnen wird.In the method according to the invention for purifying streptomycin Now the hydrolysis of streptomycin or a salt thereof in aqueous Solution with a suitable amine, in the presence of sulfate ions at a pH value about 7 prepared Schiff's base or imidazolidine compound with the help an acidic ion exchange resin, preferably carried out in the free acid form, the sparingly soluble starting material mixed with the ion exchanger and water and, if necessary, acid is added until the sparingly soluble compound is removed dissolves, whereupon the ion exchange resin is separated from the reaction mixture and a purified streptomycin salt is obtained from the remaining aqueous solution will.

Zur Herstellung des Ausgangsmaterials werden vorzugsweise primäre Monoamine mit einem Molekulargewicht von etwa 100 bis 150, wie 2-Phenyläthylamin oder Benzylamin, verwendet. Solche Amine liefern Schiffsche Streptomycinbasen, die relativ unlöslich in Wasser sind, die sich jedoch leicht in Wasser lösen, wenn sie, gegebenenfalls nach Zugabe von Säure, mit dem Ionenaustauscherharz in Berührung kommen.Primary monoamines with a molecular weight of about 100 to 150, such as 2-phenylethylamine or benzylamine, are preferably used to prepare the starting material. Such amines provide Schiff's streptomycin bases which are relatively insoluble in water, but which dissolve easily in water if they come into contact with the ion exchange resin, optionally after addition of acid.

Die Schiffschen Basen und Imidazolidine können in wäßriger Lösung gebildet werden, die gegebenenfalls ein organisches Lösungsmittel, wie Methanol oder Isopropanol, enthält. Etwas höhere Ausbeuten an Schiffscher Base werden z. B. mit 2-Phenyläthylamin in Anwesenheit dieser Lösungsmittel erzielt.The Schiff's bases and imidazolidines can be in aqueous solution may be formed, optionally using an organic solvent such as methanol or isopropanol. Slightly higher yields of Schiff base are z. B. achieved with 2-phenylethylamine in the presence of these solvents.

Derivate von Streptomycin mit Aminen oder Diaminen höheren Molekulargewichtes, z. B. Dibenzyläthylendian-in, brauchen länger, bis sie sich lösen, als die Derivate der obengenannten Amine, wenn sie mit handelsüblich erhältlichen Ionenaustauscherharzen, wie sie weiter unten definiert werden, behandelt werden.Derivatives of streptomycin with amines or diamines of higher molecular weight, z. B. Dibenzyläthylendian-in, take longer to dissolve than the derivatives of the above-mentioned amines, if they are used with commercially available ion exchange resins, as defined below.

Es wurde festgestellt, daß die Anwesenheit von Sulfationen notwendig ist, bevor eine befriedigende Ausfällung der Schiffschen Base oder des Imidazolidins stattfindet. Dies erfolgt zweckmäßig durch Zugabe einer geringen Menge an Schwefelsäure oder an einem löslichen Sulfat zur wäßrigen Lösung, die das Streptomycin und Amin enthält, falls nicht schon ausreichend Sulfationen in der Reaktionsmischung anwesend sind.It was found that the presence of sulfate ions is necessary is before a satisfactory precipitation of the Schiff base or the imidazolidine takes place. This is expediently done by adding a small amount of sulfuric acid or a soluble sulfate to the aqueous solution containing the streptomycin and amine contains, if not already sufficient sulfate ions present in the reaction mixture are.

Zur befriedigenden Ausfällung der Schiffschen Base oder des Imidazolidins ist es auch notwendig, die Streptomycinlösung auf einem pH-Wert über etwa 7,0, vorzugsweise über 9, zu halten. Die Einstellung des pH-Wertes kann durch Zugabe von Alkali, wie Natriumhydroxyd, oder eines nicht reaktionsfähigen Amins, wie Monomethylamin, oder eines Ionenaustauscherharzes, wie »Amberlite IR-45« (schwach basisches Ionenaustauscherharz auf Polystyrolbasis) erfolgen.For the satisfactory precipitation of Schiff's base or imidazolidine it is also necessary to bring the streptomycin solution to a pH above about 7.0, preferably over 9, hold. The pH can be adjusted by adding alkali, such as Sodium hydroxide, or a non-reactive amine such as monomethylamine, or an ion exchange resin such as "Amberlite IR-45" (weakly basic ion exchange resin based on polystyrene).

Die gefällte Schiffsche Base oder das Imidazolidin wird aus der Lösung abgetrennt und vor einer weiteren Behandlung zur Entfernung von nicht umgesetztem Amin zweckmäßig gründlich gewaschen.The precipitated Schiff base or imidazolidine is released from the solution separated and before further treatment to remove unreacted Amine washed thoroughly.

Die schwerlösliche Streptomycinverbindung _ wird dann erfindungsgemäß mit Wasser gemischt, zweckmäßig durch Aufschlämmen, und das Ionenaustauscherharz zugegeben. Werden Schiffsche Basen der bevorzugten Amine verwendet, so hat sich eine Harzmenge im Bereich von 1 bis 2 Äquivalenten als ausreichend erwiesen; werden jedoch höhermolekulare Amine verwendet, so können größere Harzmengen erforderlich sein.The sparingly soluble streptomycin compound is then used according to the invention mixed with water, suitably by slurrying, and the ion exchange resin admitted. If Schiff's bases of the preferred amines are used, an amount of resin has been found Proven to be sufficient in the range of 1 to 2 equivalents; however, they are higher molecular weight If amines are used, larger amounts of resin may be required.

Die erfindungsgemäß verwendeten Harze sind sauer, zweckmäßig stark sauer, z. B. Harze mit Sulfonsäuregruppen. Dabei haben sich die unter den Handelsnamen »Zeo-Karb-225«, »Amberlite IR-120« und »IR-124« bekannten Ionenaustauscher als zweckmäßig erwiesen. Diese Harze erhalten ihre Austauschkapazität von den Sulfonsäuregruppen eines sulfonierten Styrol - Divinylbenzol - Mischpolymerisates. Mischpolymerisate, die höchstens etwa 25% Divinylbenzol enthalten, haben sich im erfindungsgemäßen Verfahren als zweckmäßig erwiesen, obgleich es bevorzugt wird, Harze mit etwa 9 bis 16% Divinylbenzol zu verwenden.The resins used according to the invention are acidic, suitably strong sour, e.g. B. Resins with sulfonic acid groups. The under the trade name "Zeo-Karb-225", "Amberlite IR-120" and "IR-124" known ion exchangers are useful proven. These resins get their exchange capacity from the sulfonic acid groups of a sulfonated styrene-divinylbenzene copolymer. Copolymers, which contain a maximum of about 25% divinylbenzene have proven themselves in the invention The method has been found to be useful, although it is preferred to use resins with about 9 to use up to 16% divinylbenzene.

Im erfindungsgemäßen Verfahren sind auch Ionenaustauscherharze geeignet, die ihre Austauschkapazität von Carboxylgruppen erhalten, wie sie z. B. unter den Handelsnamen »Amberlite IRC 50«, »Zeo-Karb-226« und »Dowex 50« bekannt sind. Diese Harze sind Mischpolymerisate aus Divinylbenzol und Methacrylsäure.Ion exchange resins are also suitable in the process according to the invention, which get their exchange capacity of carboxyl groups, as z. B. under the Trade names "Amberlite IRC 50", "Zeo-Karb-226" and "Dowex 50" are known. These Resins are copolymers of divinylbenzene and methacrylic acid.

Wird die Schiffsche Base oder das Imidazolidin mit dem Ionenaustauschharz gemischt, so kann die Zugabe einer geringen Menge an Säure, vorzugsweise Schwefelsäure, die Lösungsgeschwindigkeit des Streptomycinderivates erhöhen. Ob die Zugabe der Säure notwendig ist oder nicht, scheint von der Reinheit der Schiffschen Base oder des Imidazolidins abzuhängen. Streptomycingärlösungen scheinen gewöhnlich genügend anorganische Kationen oder Salze zu enthalten, um eine Lösung des daraus hergestellten Derivates ohne Zugabe von Säure zu ermöglichen. Reinere Derivate können jedoch die Zugabe einer geringen Säuremenge erfordern.Will the Schiff base or the imidazolidine with the ion exchange resin mixed, the addition of a small amount of acid, preferably sulfuric acid, increase the dissolution rate of the streptomycin derivative. Whether the addition of the Acid is necessary or not, seems of the purity of the Schiff base or of the imidazolidine. Streptomycin fermentations usually seem sufficient To contain inorganic cations or salts, to make a solution of the prepared therefrom Allow derivatives without adding acid. However, purer derivatives can use the Require addition of a small amount of acid.

Nach Auflösung des Streptomycinderivates wird die Mischung einige Zeit gerührt und das Harz aus der Mischung, vorzugsweise durch Abfiltrieren oder Zentrifugieren, abgetrennt. Das Harz wird dann mit Wasser gewaschen und die Waschwässer zu der Flüssigkeit zugegeben, aus welcher das Harz abgetrennt worden ist.After dissolving the streptomycin derivative, the mixture becomes several Time stirred and the resin from the mixture, preferably by filtering or Centrifugation, separated. The resin is then washed with water and the wash waters is added to the liquid from which the resin has been separated.

Die so hergestellte wäßrige Lösung des gereinigten Streptomycinsulfates kann durch Mischung mit weiterem Ionenaustauscherharz derselben Art, wie bekannt, noch weiter gereinigt werden, um noch in der Lösung vorhandene Spuren von Amin zu entfernen. Dies kann ansatzweise erfolgen oder indem die Lösung über eine Kolonne des Harzes geleitet wird.The aqueous solution of the purified streptomycin sulfate thus prepared can by mixing with further ion exchange resin of the same type as known, further purified in order to remove traces of amine still present in the solution remove. This can be done batchwise or by passing the solution through a column of the resin is passed.

Es ist zweckmäßig, daß das aus der gereinigten Lösung durch Ausfällung oder Lyophilisieren gewonnene Streptomycinsalz, z. B. das Sulfat, einen solchen pH-Wert besitzt, der seine Anordnung in injizierbaren Präparaten ermöglicht. Dies erfolgt, indem der pH-Wert der Lösung durch Zugabe von Schwefelsäure oder mit Hilfe eines Anionenaustauscherharzes auf 6,0 bis 7,0 eingestellt wird.It is expedient that that from the purified solution by precipitation or lyophilizing the streptomycin salt obtained, e.g. B. the sulfate, one such Has a pH value that allows it to be placed in injectable preparations. this takes place by adjusting the pH of the solution by adding sulfuric acid or with the help of an anion exchange resin is adjusted to 6.0 to 7.0.

Um eine gute Farbe und hohe Reinheit des Endproduktes zu gewährleisten, kann es notwendig sein, die Lösung vor der endgültigen Gewinnung des Streptomycins mit einem geringen Anteil an Aktivkohle zu behandeln.To ensure good color and high purity of the end product, it may be necessary to make the solution before the final recovery of the streptomycin treat with a small amount of activated charcoal.

Die Gewinnung eines Streptomycinsalzes aus der Lösung kann in irgendeiner üblichen Weise erfolgen; z. B. kann das Salz durch Zugabe eines nicht lösenden Materials, wie Methanol, ausgefällt oder es kann lyophilisiert oder in eine Calciumchloridkomplexverbindung übergeführt werden; weiterhin kann es durch Hydrierung in ein reines Dihydrostreptomycinsalz, z. B. das Sulfat, übergeführt werden.The recovery of a streptomycin salt from the solution can be in any one of the following ways usual manner; z. B. the salt can by adding a non-dissolving material, like methanol, precipitated or it can be lyophilized or converted into a calcium chloride complex compound to be convicted; furthermore, it can be converted into a pure dihydrostreptomycin salt by hydrogenation, z. B. the sulfate, are transferred.

Das durch das Harz absorbierte Amin kann z. B. durch Eluieren mit Alkali und einem organischen Lösungsmittel, wie Butanol oder Isopropanol, und Destillation gewonnen und erneut zur Herstellung der Ausgangsverbindung verwendet werden.The amine absorbed by the resin may e.g. B. by eluting with Alkali and an organic solvent such as butanol or isopropanol, and distillation recovered and used again for the preparation of the starting compound.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann ansatzweise oder als kontinuierliches Verfahren unter Verwendung von Kolonnen des Ionenaustauscherharzes durchgeführt werden.The process according to the invention can be carried out batchwise or as a continuous one Process carried out using columns of the ion exchange resin will.

Es ist zwar bekannt, daß man Streptomycin mit Aminen umsetzen und die erhaltenen Umsetzungsprodukte zur Regenerierung und Reinigung von Streptomycin wieder hydrolysieren kann. Die für die Hydrolyse bis jetzt bekannten Bedingungen sind jedoch verhältnismäßig scharf, so daß nicht angenommen werden konnte, daß mittels der an sich nur verhältnismäßig mild wirkenden Ionenaustauscher überhaupt eine befriedigende Hydrolyse erzielt werden könnte. Es war daher sehr überraschend, daß eine solche Hydrolyse bereits in wenigen Stunden bei Zimmertemperatur mit ausgezeichneten Ergebnissen ohne Eintreten unerwünschter Nebenreaktionen durchgeführt werden konnte.It is known that streptomycin can be reacted with amines and the reaction products obtained for the regeneration and purification of streptomycin can hydrolyze again. The conditions known up to now for the hydrolysis are, however, relatively sharp, so that it could not be assumed that means the ion exchanger, which in itself only has a relatively mild effect, is actually a satisfactory one Hydrolysis could be achieved. It was therefore very surprising that such a Hydrolysis in just a few hours at room temperature with excellent results could be carried out without the occurrence of undesired side reactions.

Die Tatsache, daß man Streptomycin zwecks Reinigung bereits mit Ionenaustauschern behandelt hat, ergab noch keinen Hinweis dafür, daß eine Hydrolyse der Reaktionsprodukte aus Streptomycinen mit Aminen durchführbar ist. Ebenso konnte aus der Tatsache, daß man bereits Eiweißstoffe mittels Ionenaustauschern mit nicht sehr befriedigenden Ergebnissen hydrolysieren konnte, nicht der Schluß gezogen werden, daß die genannten Reaktionsprodukte aus Streptomycin und Aminen ohne weiteres mittels solcher Ionenaustauscher hydrolysiert werden könnten.The fact that you can purify streptomycin with ion exchangers has treated, gave no indication that hydrolysis of the reaction products can be carried out from streptomycins with amines. Likewise, from the fact that one already protein substances by means of ion exchangers with not very satisfactory Hydrolyzing results could not be concluded that the said Reaction products from streptomycin and amines readily by means of such ion exchangers could be hydrolyzed.

Die folgenden Beispiele veranschaulichen besondere Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung. Für die Herstellung der schwerlöslichen Ausgangsverbindung aus Streptomycin und einem primären Monoamin oder Diamin wird Schutz innerhalb der vorliegenden Erfindung jedoch nicht beansprucht. Beispiel 1 Eine Streptomycin enthaltende Gärlösung wurde mit dem Ionenaustauscherharz »Amberlite IRC 50« in Berührung gebracht, von dem ein Teil in Form des Natriumsalzes vorlag.The following examples illustrate particular embodiments of the present invention. For the production of the sparingly soluble starting compound composed of streptomycin and a primary monoamine or diamine is protection within the present invention is not claimed. Example 1 A streptomycin containing Fermentation solution was brought into contact with the ion exchange resin »Amberlite IRC 50«, some of which was in the form of the sodium salt.

Das Harz wurde dann mit verdünnter Schwefelsäure gewaschen, bis ein Gleichgewichts-pH-Wert von 5,0 bis 6,5 erreicht war, wodurch die Alkalimetallionen entfernt wurden. Dann wurde das Streptomycin mit verdünnter Schwefelsäure bei einem Gleichgewichts-PH-Wert von 1,8 bis 2,2 aus dem Harz eluiert.The resin was then washed with dilute sulfuric acid until a Equilibrium pH of 5.0 to 6.5 was reached, reducing the alkali metal ions removed. Then the streptomycin with dilute sulfuric acid at a Equilibrium pH 1.8 to 2.2 eluted from the resin.

Dieses Eluat wurde durch Berührung mit einem Anionenaustauscherharz neutralisiert, mit Aktivkohle entfärbt und so lange konzentriert, bis es 125 Millionen Einheiten Streptomycin in 380 ccm Lösung enthielt.This eluate was made by contact with an anion exchange resin neutralized, decolorized with activated charcoal and concentrated until it is 125 million Units of streptomycin in 380 cc solution.

Der p11-Wert des Konzentrates wurde dann auf 8,5 mit Monomethylamin eingestellt und zur Bildung der Schiffschen Base ein leichter Überschuß an 2-Phenyläthylamin zugegeben. Dann wurde filtriert und der Niederschlag mit 200 ccm »Amberlite IR-120« in Form der freien Säure und 800 ccm Wasser gemischt und nach Einstellen des pH-Wertes auf 8,0 mit Schwefelsäure 2 Stunden gerührt. Das Harz wurde abfiltriert und das Filtrat mit weiteren 50 ccm frischem Harz gemischt und erneut gerührt. Auch dieses Harz wurde abfiltriert, die Harze wurden vereinigt, mit Wasser gewaschen und die Waschwasser zum Filtrat zugegeben. Das Streptomycinsulfat wurde aus dem Filtrat durch Ausfällung mit Methanol gewonnen, gewaschen, getrocknet und gewogen.The p11 value of the concentrate was then increased to 8.5 with monomethylamine adjusted and a slight excess of 2-phenylethylamine to form the Schiff base admitted. Then it was filtered and the precipitate with 200 ccm "Amberlite IR-120" in the form the free acid and 800 ccm of water and mixed after adjusting the pH 8.0 stirred with sulfuric acid for 2 hours. The resin was filtered off and the filtrate mixed with another 50 cc of fresh resin and stirred again. This resin too was filtered off, the resins combined, washed with water and the wash waters added to the filtrate. The streptomycin sulfate was precipitated from the filtrate recovered with methanol, washed, dried and weighed.

Die Gesamtausbeute an Streptomycinsulfat aus dem Eluat von »Amberlite IRC-50«-Harz betrug 740/0. Das nach der zweiten Behandlung mit »Amberlite IR-120« verbleibende Amin betrug 0,006%" bezogen auf das Gewicht des Streptomycinsulfates.The total yield of streptomycin sulfate from the eluate of »Amberlite IRC-50 «resin was 740/0. After the second treatment with »Amberlite IR-120« remaining amine was 0.006% "based on the weight of the streptomycin sulfate.

Beispiel 2 Das Verfahren von Beispel 1 wurde wiederholt, wobei an Stelle von »Amberlite IR-120« das Ionenaustauscherharz »Amberlite IR-124« verwendet wurde. Die Gesamtausbeute aus dem Eluat von »Amberlite IRC-50«-Harz betrug 80 0/0.Example 2 The procedure of Example 1 was repeated, except that The ion exchange resin "Amberlite IR-124" is used instead of "Amberlite IR-120" became. The overall yield from the eluate of "Amberlite IRC-50" resin was 80%.

Das nach der zweiten Behandlung mit »Amberlite IR-124« verbleibende Amin betrug 0,016 0/0, bezogen auf das Gewicht des Streptomycinsulfates.The one remaining after the second treatment with »Amberlite IR-124« Amine was 0.016% based on the weight of the streptomycin sulfate.

Beispiel 3 Eine Streptomycinlösung mit einer Konzentration von 300 000 Einheiten je Kubikzentimeter wurde mit 1,3 Äquivalenten Benzylamin in wäßriger Lösung in Anwesenheit von Sulfationen bei einem p11-Wert von 8,5 gemischt und die Mischung über Nacht stehengelassen. Die ausgefallene Schiffsche Base wurde abfiltriert und getrocknet.Example 3 A streptomycin solution at a concentration of 300 000 units per cubic centimeter was aqueous with 1.3 equivalents of benzylamine Solution mixed in the presence of sulfate ions at a p11 value of 8.5 and the Let the mixture stand overnight. The precipitated Schiff base was filtered off and dried.

20 g der Schiffschen Base wurde mit 20 ccm »Amberlite IR-120« in Form der freien Säure in 100 ccm Wasser verrührt, nachdem der p11-Wert mit Schwefelsäure auf 8,0 eingestellt worden war.20 g of the Schiff's base were molded into shape with 20 cc “Amberlite IR-120” of the free acid in 100 ccm of water, after the p11 value with sulfuric acid was set to 8.0.

Die Schiffsche Base löste sich schnell. Nach 2stündigem Rühren wurde das Harz abfiltriert und durch 10 ccm frisches Harz ersetzt. Das Gemisch wurde weitergerührt. Das Harz wurde erneut abfiltriert und gewaschen und die Waschwässer zum Filtrat zugegeben.The Schiff base came off quickly. After stirring for 2 hours the resin filtered off and replaced with 10 cc fresh resin. The mixture was further stirred. The resin was filtered off and washed again, and the wash waters to the filtrate admitted.

Die nach Entfernung des Harzes in der Lösung zurückgelassene Menge an Amin war sehr gering. Die Streptomycinausbeute betrug etwa 80 0/0.The amount left in the solution after the resin has been removed in amine was very little. The streptomycin yield was about 80%.

Beispiel 4 450 ccm Streptomycinsulfatlösung mit einer Konzentration von 330 000 Einheiten je Kubikzentimeter wurde unter Verwendung von 25%iger (Gewicht/ Volumen) Natriumhydroxydlösung auf einen pH-Wert von 8,5 eingestellt und mit 150 ccm Isopropanol versetzt. Die Mischung wurde auf 40° C erwärmt, und unter fortgesetztem Rühren wurden 0,4 Äquivalente 2-Phenyläthylamin auf einmal zugegeben. Unter Rühren wurden zum Animpfen 0,25 % Kristalle der Schiffschen Base sowie weitere 0,9 Äquivalente 2-Phenyläthylamin langsam innerhalb einer Stunde zugefügt. Dann wurde die Mischung innerhalb einer Stunde auf eine Temperatur von 20 bis 25° C abgekühlt. Der pH-Wert wurde untersucht und unter Verwendung von 25%iger (GewichtiVolumen) Natriumhydroxydlösung auf 9,6 eingestellt. Nachdem das Gemisch eine weitere Stunde bei Zimmertemperatur gerührt worden war, wurde die Mischung über Nacht im Kühlschrank bei 5° C stehengelassen. Die ausgefallene Schiffsche Base wurde abfiltriert, mit 25%igem (Volumen/Volumen) wäßrigem Isopropanol gewaschen und im Vakuum getrocknet. Sie wog 202 g und besaß laut Untersuchung 677 Einheiten je Milligramm. Die Ausbeute an Schiffscher Base betrug somit 92 0/0.Example 4 450 cc streptomycin sulfate solution at one concentration of 330,000 units per cubic centimeter was calculated using 25% (weight / Volume) sodium hydroxide solution adjusted to a pH value of 8.5 and with 150 ccm isopropanol added. The mixture was warmed to 40 ° C and continued With stirring, 0.4 equivalents of 2-phenylethylamine were added all at once. While stirring 0.25% crystals of Schiff's base and a further 0.9 equivalents were used for inoculation 2-Phenylethylamine added slowly within an hour. Then the mixture became cooled to a temperature of 20 to 25 ° C within one hour. The pH was examined and using 25% (weight / volume) sodium hydroxide solution set to 9.6. After the mixture was another hour at room temperature After stirring, the mixture was left to stand in the refrigerator at 5 ° C overnight. The precipitated Schiff base was filtered off, with 25% (volume / volume) washed aqueous isopropanol and dried in vacuo. She weighed 202 g and possessed according to the investigation, 677 units per milligram. The yield of Schiff base was thus 92 0/0.

Anteile von je 60 g dieser Schiffschen Base wurden unter Verwendung dreier verschiedener Harze, nämlich »Amberlite IR-124«, »Zeo-Karb 225« mit 120/0 Divinylbenzol und »Zeo-Karb 225«, mit 16 % Divinylbenzol erneut in Streptomycinsulfatumgewandelt. In jedem Versuch wurde die Schiffsche Base mit 65 ccm Harz in freier Säureform, die in 240 ccm Wasser suspendiert waren, gerührt, und in jedem Fall wurde der pH-Wert unter Verwendung von Schwefelsäure auf 8,0 eingestellt. Nach 6stündigem Rühren wurde das Harz abfiltriert und durch 16 ccm frisches Harz ersetzt, wobei die Mischung weitere 6 Stunden gerührt wurde. Nach endgültigem Abfiltrieren und Waschen des Harzes wurden die erhaltenen Lösungen auf Streptomycin und verbliebenes 2-Phenyläthylamin untersucht. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle angegeben: Verbliebenes Streptomycin 2-Phenyläthyl- aus der arm, bezogen Verwendetes Harz auf das Gewicht Schiffschen Base von Strepto- mycinsulfat °/o °% »Amberlite IR-124« 93,5 - (keines) (12 % Divinylbenzol) »Zeo-Karb 225« 91,0 - (keines) (120/a Divinylbenzol) »Zeo-Karb 225« 99,0 0,002 (16 % Divinylbenzol) Beispiel 5 Das Verfahren von Beispiel 4 wurde wiederholt, wobei das Ionenaustauscherharz »Zeo-Karb225« verwendet wurde, das 4,5, 2 bzw. 1'% Divinylbenzol enthielt.60 g portions of this Schiff base were converted again into streptomycin sulfate using three different resins, namely "Amberlite IR-124", "Zeo-Karb 225" with 120/0 divinylbenzene and "Zeo-Karb 225" with 16% divinylbenzene. In each experiment the Schiff base was stirred with 65 cc resin in free acid form suspended in 240 cc water and in each case the pH was adjusted to 8.0 using sulfuric acid. After stirring for 6 hours, the resin was filtered off and replaced with 16 cc of fresh resin and the mixture was stirred for an additional 6 hours. After the resin had been finally filtered off and washed, the solutions obtained were examined for streptomycin and remaining 2-phenylethylamine. The results are given in the following table: Remaining Streptomycin 2-phenylethyl from the poor, related Resin used by weight Schiff's base from Strepto- mycine sulfate ° / o ° % »Amberlite IR-124« 93.5 - (none) (12% divinylbenzene) »Zeo-Karb 225« 91.0 - (none) (120 / a divinylbenzene) "Zeo-Karb 225" 99.0 0.002 (16% divinylbenzene) Example 5 The procedure of Example 4 was repeated using the ion exchange resin "Zeo-Karb225" which contained 4.5, 2 and 1% divinylbenzene, respectively.

Die erhaltenen Ergebnisse entsprechen etwa denen des Beispiels 4.The results obtained correspond approximately to those of Example 4.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Method for purifying streptomycin or its salts by the formation of a reaction product with amines, such as 2-phenylethylamine or benzylamine, at a pH above about 7, preferably above 9, in Presence of sulfate ions and hydrolysis of the same with acidic compounds, characterized in that the poorly soluble streptomycin compound formed in the presence of an acidic ion exchange resin, preferably in the free acid form, mixes with water and, if necessary, adds so much acid until the compound is dissolves, whereupon the resin is separated from the reaction mixture and from the remaining aqueous solution a purified Streptomycin salt in the usual way is won.

2. The method according to claim 1, characterized in that the ship marriage Base or the imidazolidine is mixed with an ion exchange resin, its Exchange capacity of sulfonic acid groups and a sulfonated copolymer of styrene and divinylbenzene, which is at most 25%, preferably 9 to 16%, divinylbenzene contains. Documents considered: German Auslegeschrift No. 1019 301; German Patent Nos. 916 904, 954 059, 882 545, 818 944; U.S. Patents No. 2,717,893, 2,767,168, 2,868,779; The Industrial Chemist, 1956, pp. 257-263; Chim. & lud., Vol. 75, 1956, pp. 292-298; J. Am. Chem. Soc., Vol. 76, 1954, Pp. 5161 and 5162.