DE10240452A1 - Urokinase Inhibitoren - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue selektive Inhibitoren des Urokinase-Plasminogenaktivators (uPA, EC 3.4.21.31) sowie deren Verwendungg als therapeutische Wirkstoffe zur Behandlung von Urokinase assoziierten Erkrankungen, wie z. B. maligne Tumore und Metastasierung.

Description

• Die vorliegende Erfindung betrifft neue selektive Inhibitoren des Urokinase-Plasminogenaktivators (uPA, EC 3.4.21.31) sowie deren Verwendung als therapeutische Wirkstoffe zur Behandlung von Urokinase assoziierten Erkrankungen, wie z.B. maligne Tumore und Metastasierung.
• Der Plasminogenaktivator von Urokinase-Typ (uPA) spielt eine Schlüsselrolle bei der Tumorinvasion und Metastasenbildung (Schmitt et al., J. Obst. Gyn. 21 (1995), 151-165). uPA wird in verschiedenen Arten von Tumorzellen überexprimiert (Kwaan, Cancer Metastasis Rev. 11 (1992), 291-311) und bindet an den Tumor-assoziierten uPA-Rezeptor (uPA-R), wo die Aktivierung von Plasminogen zu Plasmin stattfindet. Plasmin ist in der Lage, verschiedene Komponenten der extrazellulären Matrix (ECM) wie Fibronectin, Laminin und Kollagen Typ IV abzubauen. Es aktiviert auch einige andere ECM-abbauende Enzyme, insbesondere Matrix-Metalloproteinasen. Hohe Mengen an Tumor-assoziiertem uPA korrelieren mit einem höheren Metastasierungsrisiko für Krebspatienten (Stephens et al., Breast Cancer Res. & Treat. 52 (1998), 99-111). Eine Hemmung der proteolytischen Aktivität von uPA ist daher ein guter Ansatzpunkt für eine anti-metastatische Therapie.
• Ein gemeinsames Merkmal vieler bekannter synthetischer uPA-Inhibitoren ist ein basischer Rest, der Amidino- oder Guanidino-Gruppen enthält, und an Asp¹⁸⁹ in der S1-Spezifitätstasche von uPA binden kann und dort als Arginin-Mimetikum wirkt (Spraggon et al., Structure 3 (1995), 681-691). Die meisten der bekannten Inhibitoren sind jedoch nicht selektiv für uPA, sondern hemmen auch andere Serinproteasen wie Trypsin, Thrombin, Plasmin oder Gewebs-Plasminogenaktivator (tPA).
• p-Aminobenzamidin ist ein moderat selektiver uPA-Inhibitor mit einer Hemmkonstante von 82 μM. Billstroem et al. (Int. J. Cancer 61 (1995), 542-547) konnten eine deutliche Abnahme der Wachstumsrate von DU 145 Tumoren (eine Prostata-Adenokarzinom-Zellinie) in SCID Mäusen bei oraler Verabreichung in einer Tagesdosis von 125 bis 250 mg p-Aminobenzamidin/kg/Tag zeigen. Die Nebenwirkungen waren vernachlässigbar gering.
• Einige monosubstituierte Phenylguanidine haben sich als wirksame und selektive uPA Inhibitoren in vitro erwiesen. Diese kleinen Moleküle zeigen Inhibierungskonstanten im Mikromolarbereich, sie binden jedoch nur in der S1 Tasche von uPA (Yang et al., J. Med. Chem. 33 (1990), 2956-2961). Biologische Untersuchungen mit diesen Verbindungen wurden nicht durchgeführt.
• Das Diuretikum Amilorid ist ein selektiver uPA-Inhibitor (Ki, uPA = 7 μM), der die Bildung von Lungenmetastasen nach i.v. Inokulation von Ratten-Brustadenokarzinomzellen verhindert (Kellen et al., Anticancer Res. 8 (1988), 1373-1376). Einige Derivate von 3-Amidino-phenylalanin haben sich ebenfalls als wirksame Inhibitoren von Serinproteasen erwiesen, diese Verbindungen weisen jedoch im allgemeinen nur eine geringe Selektivität für uPA auf (Stürzebecher et al., J. Med. Chem. 40 (1997), 3091–3099; Stürzebecher et al., J. Enzyme Inhib. 9 (1995), 87-99).
• Bekannte uPA-Inhibitoren sind Derivate von Benzo[b]thiophen-2-carboxamidin (B428 und B623: K_i, uPA = 0,32 bzw. 0,07 μM; US-Patent 5,340,833). Rabbani et al. (Int. J. Cancer 63 (1995), 840-845) sowie Xing et al. (Cancer Res. 57 (1997), 3585-3593) konnten nach Verabreichung von 4-Iod-benzo[b]-thiophen-2-carboxamidin (B428) eine Abnahme des Tumorwachstums und der Metastasenbildung in einem syngenen Modell für Ratten-Prostatakarzinom bzw. Maus-Mammakarzinom zeigen. Letztere Untersuchungen zeigten eine weitere Abnahme des Primärtumorwachstums bei gemeinsamer Verabreichung von B428 mit dem Antiöstrogen Tamoxifen.
• Die deutsche Patentanmeldung 199 40 389.9 schlägt die Verwendung von Arylguanidin- und insbesondere Phenylguanidin-Derivaten als selektive uPA-Inhibitoren vor. Diese Verbindungen enthalten einen weiteren Substituenten am aromatischen Ringsystem, vorzugsweise in Para-Position zur Guanidingruppe, der eine gegebenenfalls substituierte Methylengruppe gefolgt von Wasserstoffdonor/Akzeptorfunktionalitäten enthält. Aufgrund dieses Substitutionsmusters weisen die Verbindungen eine besonders hohe Wirksamkeit und Selektivität für uPA auf. Von diesen Verbindungen wird angenommen, dass sie als Arginin-Mimetikum mit dem Aminosäurerest Asp¹⁸⁹ in der S1-Tasche von uPA wechselwirken und eine Wechselwirkung mit der S2- und/oder S3-Tasche von uPA eingehen können.
• Die deutsche Patentanmeldung 100 13 715.6 beschreibt weitere Aryl-Guanidin-Derivate, die eine noch spezifischere Wechselwirkung mit uPA, insbesondere mit den Aminosäureresten Gln¹⁹² und/oder Ser ²¹⁴ eingehen können. Diese Verbindungen enthalten neben der Guanidin-Gruppe einen weiteren Substituenten am aromatischen Ringsystem, der eine gegebenenfalls substituierte Methylengruppe gefolgt von einer Wasserstoffdonor-, einer Wasserstoffakzeptor- und wiederum einer Wasserstoffdonorfunktionalität enthält.
• Die internationale Patentanmeldung WO 00/04954 beschreibt Arylamidin-Derivate, insbesondere Amidinophenylalanin-Derivate als Urokinaseinhibitoren.
• Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer hochselektiver und hochaktiver Inhibitoren des Urokinase-Plasminogenaktivators.
• Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch die Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel I

  

  worin
  Ar ein aromatisches oder heteroaromatisches Ringsystem bedeutet,
  E

  

  bedeutet oder Ar und E zusammen einen Rest

  

  bilden, worin Z O, NH oder C=O und X⁴ C=O, HN oder CH₂ sein kann und W N, CR³ oder CR⁶ und X⁵ CH, CR³, CR⁶ oder N sein kann,
  B -SO₂-, -CR³ ₂-, -NR³- oder -NH- bedeutet,
  X¹ NR¹³R⁴, OR³, SR³, COOR³, CONR³R⁴ oder COR⁵ bedeutet,
  R¹ H, einen gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heteroarylrest oder COOR³, CONR³R⁴ oder COR⁵ bedeutet,
  R² Halogen, C(R⁶)₃, C₂(R⁶)₅, OC(R⁶)₃ oder OC₂(R⁶)₅ bedeutet, R³ H oder einen beliebigen organischen Rest bedeutet,
  R¹³ eine Gruppe der allgemeinen Formel (IIa) oder (IIb) bedeutet,

  

  X² NH, NR⁴, O oder S bedeutet,
  X³ NH, NR⁴, O, S, CO, COO, CONH oder CONR⁴ bedeutet,
  Y C(R⁸)₂, NH oder NR³ bedeutet,
  R⁴ H oder einen verzweigt oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinylrest bedeutet,
  R⁵ H, einen Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Carboxy-alkyl-, Carboxy-akenyl-, Carboxyl-alkinyl-, Carboxy-aryl-, Carboxy-heteroaryl-, -(CO)NR³R⁴ oder -COO-R³ bedeutet, wobei die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylreste gegebenenfalls substituiert sein können,
  R⁶ jeweils unabhängig H oder Halogen, insbesondere F, ist,
  R⁷ H oder einen gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder -COR⁹ bedeutet,
  R⁸ jeweils unabhängig H, oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heteroaryl-, Aralkyl-, Alkylaryl-, Heteroaralkyl-Rest oder/und einen substituierten oder unsubstituierten bi- oder polycyclischen Rest bedeutet,
  R⁹ H oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder/und Heteroarylrest bedeutet,
  R¹⁰ ein Rest (C(R¹)₂)_o-X³R⁵ bedeutet,
  R¹¹ H, einen Carbonylrest-CO-R¹², einen Carbonamidrest-CONR¹² ₂, einen Oxycarbonylrest -COO-R¹² oder besonders bevorzugt einen Sulfonylrest -SO₂R¹² bedeutet,
  R¹² H, einen verzweigten oder unverzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten cyclischen Alkylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-, Alkylaryl- oder Heteroaralkylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten bi- oder polycyclischen Rest bedeutet,
  R¹⁵ C = X², NR³ oder CR³ ₂ darstellt,
  n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist,
  m eine ganze Zahl von 0 bis 5 ist,
  o eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist,
  p eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, oder Salzen dieser Verbindungen zur Herstellung eines Mittels zur Hemmung des Urokinase-Plasminogenaktivators.
• Die Verbindungen können als Salze, vorzugsweise als physiologisch verträgliche Säuresalze, z.B. als Salze von Mineralsäuren, besonders bevorzugt als Hydrochloride oder als Salze von geeigneten organischen Säuren vorliegen. Die Guanidiniumgruppe kann gegebenenfalls Schutzfunktionen tragen, die vorzugsweise unter physiologischen Bedingungen abspaltbar sind. Die Verbindungen können als optisch reine Verbindungen oder als Gemische von Enantiomeren oder/und Diastereoisomeren vorliegen.
• In den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) ist Ar vorzugsweise ein aromatisches oder heteroaromatisches Ringsystem mit einem Ring.
• Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen, in denen Ar und E zusammen ein bicyclisches System bilden. Heteroaromatische Systeme enthalten bevorzugt ein oder mehrere O-, S- oder/und N-Atome. Ein bevorzugtes aromatisches Ringsystem ist ein Benzolring, bevorzugte heteroaromatische Ringsysteme sind Pyridinyl, Pyrimidinyl oder Pyrazinyl, insbesondere mit Stickstoff an Position z. Bevorzugte bicyclische Ringsysteme sind solche mit Stickstoff oder Sauerstoff an den Positionen Z oder W. Am meisten bevorzugt ist Ar ein Benzolring.
• Besonders bevorzugt sind Verbindungen mit den Strukturelementen

  
• In den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind in dem Ringsystem Ar die Substituenten B und E, z.B. NHC(NH)NH₂ (Guanidino) oder NH₂CNH (Amidino) vorzugsweise in Meta- oder Para-Position und besonders bevorzugt in Para-Position zueinander angeordnet. Darüber hinaus kann Ar noch ein oder mehrere weitere von Wasserstoff verschiedene Substituenten R² enthalten. Vorzugsweise ist die Anzahl der Substituenten R² 0, 1, 2 oder 3, besonders bevorzugt 0 oder 1 und am meisten bevorzugt 0, R² kann Halogen, C(R⁶)₃, C₂(R⁶)₅, OC(R⁶)₃ oder OC₂(R⁶)₅ bedeuten, wobei R⁶ jeweils unabhängig H oder Halogen, insbesondere F ist. Bevorzugte Beispiele für R² sind Halogenatome (F, Cl, Br oder I), CH₃, CF₃, OH, OCH₃ oder OCF₃.
• Die erfindungsgemäßen Verbindungen, enthaltend eine Guanidinogruppe, sind durch eine hohe Selektivität ausgezeichnet.
• Für die Inhibitoraktivität ist der Substituent B von Bedeutung. Vorzugsweise wird B aus -SO₂-, -NR³-, -NH- oder/und -CR³ ₂, insbesondere – CR¹ ₂- ausgewählt.
• R¹ kann H oder ein gegebenenfalls substituierter Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder/und Heteroarylrest oder COOR³, CONR³R⁴ oder COR⁵ sein. Soweit nicht anders angegeben, ist ein Alkylrest wie hierin verwendet, bevorzugt eine geradkettige oder verzweigte C₁-C₃₀-Alkylgruppe, bevorzugt eine C₁-C₁₀-Alkylgruppe, insbesondere eine C₁-C₄-Alkylgruppe, oder eine C₃-C₃₀ Cycloalkylgruppe, insbesondere eine C₃-C₈-Cycloalkylgruppe, die beispielsweise mit C₁-C₃-Alkoxy, Hydroxyl, Carboxyl, Amino, Sulfonyl, Nitro, Cyano, Oxo oder/und Halogen, aber auch mit Aryl- oder Heteroarylresten substituiert sein kann. Alkenyl- und Alkinylreste sind hierin, soweit nicht anders angegeben, vorzugsweise C₂-C₁₀-Gruppen, insbesondere C₂-C₄-Gruppen, die gegebenenfalls wie zuvor angegeben substituiert sein können. Aryl- und Heteroarylreste können beispielsweise mit C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₃-Alkoxy-Hydroxyl, Carboxyl, Sulfonyl, Nitro, Cyano oder/und Oxo substituiert sein. Am meisten bevorzugt ist R¹ H.
• X¹ steht bevorzugt für NR¹³R⁴.
• R³ kann H oder einen beliebigen organischen Rest bedeuten. Bei dem organischen Rest handelt es sich insbesondere um einen Rest mit 1 bis 30 Kohlenstoffatomen. Dieser Rest kann gesättigt oder ungesättigt, linear, verzweigt oder cyclisch sein und gegebenenfalls Substituenten enthalten.
• In einer besonders bevorzugten Ausführungsform stellt B die Gruppierung -SO₂- dar, sodass es sich um Sulfoverbindungen handelt. Die SO₂-Gruppe ist dabei isoster zur CH₂-Gruppe. Durch den Austausch der CH₂-Gruppe durch die isostere SO₂-Gruppe werden zusätzliche H-Brücken zu NH-Gruppen von Gly 193, Asp 194 und Ser 195 von Urokinase möglich, was zu einer weiteren Verbesserung der inhibitorischen Aktivität führt (vgl. 1).
• R¹³ stellt eine Gruppe der Formel (IIa) oder (IIb)

  

  dar. In Formel (IIa) bedeutet R¹⁵ C = X² oder CR³, wobei X² NH, NR⁴, O oder S ist und X³ NH, NR⁴, O, S, CO, COO, CONH oder CONR⁴. Y stellt C(R⁸)₂, NH oder NR³ dar. R⁴ wiederum bedeutet H oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinylrest. R⁷ bedeutet H oder einen gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder -COR⁹, wobei R⁹ wiederum H oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder/und Heteroarylrest darstellt.
• Bevorzugt stellt R¹³ eine Gruppe der Formel (IIb) dar.
• R⁸ ist bevorzugt Wasserstoff oder (CH₂)_m-OH, besonders bevorzugt H. R¹⁰ stellt einen Rest (CRR¹)₂)_o-X³R⁵ dar. In diesem Fall ist R¹ besonders bevorzugt Wasserstoff, X³ besonders bevorzugt Sauerstoff, R⁵ besonders bevorzugt Wasserstoff und o besonders bevorzugt 1.
• R¹¹ stellt besonders bevorzugt einen Sulfonylrest -SO₂-R¹² dar, wobei R¹² bevorzugt ein Aralkylrest, insbesondere ein Benzylrest ist. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist der Benzylrest an meta- und/oder para-Position und Halogen substituiert, am meisten bevorzugt mit Cl^–. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist R¹² ein Adamantyl- oder Kampferrest.
• R¹⁵ stellt besonders bevorzugt einen Carbonylrest-CO, Aminrest-NR³- oder/und Alkylrest-CR³ ₂, bevorzugt -CR¹ ₂- und am meisten bevorzugt -CH₂-dar. Verbindungen, in denen R¹⁵ CH₂ darstellt, zeichnen sich insbesondere durch eine einfache Synthese aus. Da diese Position nicht in die Bildung von H-Brücken mit der Urokinase involviert ist, kann anstelle eines Carbonyls ohne weiteres eine CH₂-Gruppe vorhanden sein, ohne dass damit ein Verlust an inhibitorischer Aktivität verbunden wäre.
• Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen, welche als Baustein eine nicht natürliche Aminosäure enthalten, welche insbesondere den Rest R¹⁰ ausmacht. Weiterhin bevorzugt sind Azaverbindungen mit der Gruppierung NH-NH, in denen z. B. Y = NH und n = 1 (Verbindungen der Formel IIb).
• Weiterhin bevorzugt sind Verbindungen, in denen X' die Bedeutung

  

  hat.
• Am meisten bevorzugt sind die Verbindungen N-[2-(4-Guanidinobenzolsulfonylamino)-ethyl]-3-hydroxy-2-phenylmethansulfonylaminopropionamid Hydrochlorid, Bz-SO₂-(D)-Ser-(Aza-Gly)-4-Guanidinobenzylamid Hydrochlorid oder N-(4-Guanidino-benzyl)-2-(3-hydroxy-2-phenylmethan-sulfonylamino-propionylamino)-4-phenyl-butyramid Hydrochlorid.
• Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können beispielsweise wie in den Syntheseschemata in 2a, b und c am Beispiel der besonders bevorzugten Verbindungen gezeigt, hergestellt werden.
• Die erfindungsgemäßen Urokinaseinhibitoren können gegebenenfalls zusammen mit geeigneten pharmazeutischen Hilfs- oder Trägerstoffen zur Herstellung von Arzneimitteln oder in der Diagnostik verwendet werden. Dabei ist eine Verabreichung in Kombination mit anderen Wirkstoffen, z.B. anderen Urokinaseinhibitoren, wie etwa Antikörpern oder/und Peptiden, aber auch mit Chemotherapeutika und Zytostatika oder/und zytostatischen Wirkstoffen möglich.
• Die Arzneimittel können bei Menschen und Tieren topisch, oral, rektal oder parenteral, z.B. intravenös, subkutan, intramuskulär, intraperitoneal, sublingual, nasal oder/und inhalativ, z.B. in Form von Tabletten, Dragees, Kapseln, Pellets, Suppositorien, Lösungen, Emulsionen, Suspensionen, Liposomen, Inhalationssprays oder transdermalen Systemen, wie Pflastern, verabreicht werden.
• Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind zur Bekämpfung von Krankheiten geeignet, die mit einer pathologischen Überexpression von uPA oder/und Urokinase-Plasminogenaktivatorrezeptor (uPAR) assoziiert sind. Sie sind beispielsweise in der Lage, hocheffizient das Wachstum oder/und die Ausbreitung der malignen Tumoren sowie die Metastasierung von Tumoren zu hemmen. Dabei können die uPA-Inhibitoren gegebenenfalls zusammen mit anderen Tumormitteln oder mit anderen Behandlungsarten, z.B. Bestrahlung oder chirurgischen Eingriffen, eingesetzt werden. Weiterhin sind die erfindungsgemäßen Inhibitoren auch für andere uPA-assoziierte oder/und uPAR-assoziierte Erkrankungen wirksam.
• Erfindungsgemäße uPA-Inhibitoren sind vorzugsweise dadurch gekennzeichnet, daß sie mindestens einen zweifach, vorzugsweise mindestens einen fünffach und besonders bevorzugt einen mindestens 10-und bis zu 1.000-fach geringeren K_i-Wert für uPA gegenüber tPA, Plasmin oder/und Thrombin aufweisen. Weiterhin ist bemerkenswert, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen die Blutgerinnung nur geringfügig beeinflussen, da sie für eine effektive Hemmung von Thrombin, Plasmin und Faktor Xa zu hohe K_i-Werte haben.
• Die erfindungsgemäßen Substanzen der Formel (I) können in Kombination mit physiologisch wirksamen Substanzen eingesetzt werden, z.B. mit Radiomarkierungen oder mit zytotoxischen Mitteln, z. B. Chemotherapeutika wie cis-Platin oder 5-Fluor-uracil, oder Peptiden. Weiterhin können die Substanzen auch in die Membran von Trägervesikeln, z.B. Liposomen, eingebaut werden oder/und zusammen mit in den Trägervesikeln eingeschlossenen Wirksubstanzen, z.B. zytotoxischen Mitteln, wie etwa Doxorubicin, verabreicht werden.
• Durch die Erfindung wird ein Verfahren zur Urokinasehemmung bei Lebewesen, insbesondere bei Menschen, durch Verabreichung einer wirksamen Menge mindestens einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) bereitgestellt. Die Dosierung der Verbindung liegt üblicherweise im Bereich von 0,01 bis 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Die Dauer der Behandlung hängt von der Schwere der Erkrankung ab und kann von einer einmaligen Gabe bis zu einer mehrwöchigen oder sogar mehrmonatigen Behandlung, die gegebenenfalls in Intervallen wiederholt werden kann, reichen.
• Schließlich betrifft die Erfindung neue basische Phenylalaninderivate der allgemeinen Formel (I).
• Die Erfindung soll durch die folgenden Beispiele und die beigefügten Figuren näher erläutert werden.
• 1 zeigt die Wechselwirkungen zwischen erfindungsgemäßen Inhibitoren, in denen B eine SO₂-Gruppe darstellt mit Urokinase. Zu sehen sind die ausbildeten Wasserstoffbrücken zwischen der SO₂-Gruppe und den NH-Gruppen im Grundgerüst der Urokinase von Gly 193, Asp 194 und Ser 195.
• 2a zeigt ein Syntheseschema zur Herstellung der besonders bevorzugten Verbindung ST-550, 2b ST-544 und 2c ST-568. Die Verbindungen der Formel (I) können gemäß diesem allgemeinen Reaktionsschema, ausgehend von p-Amino-benzylamin, hergestellt werden. In 2 bedeutet Z die Schutzgruppe Benzyloxycarbonyl und Boc die Schutzgruppe tert-Butyloxycarbonyl.
• Beispiel 1:
• Synthesebeschreibung N-[2-(4-Guanidino-benzenesulfonylamino)-ethyl]-3-hydroxy-2-phenylmethansulfonylamino-propionamide Hydrochloride [ST-568]
• 4-Nitrophenylsulfonylchlorid (1) wird in einem inerten organischen Lösungsmittel (z. B. Dichlormethan) unter Zugabe einer organischen Base mit N-Z-Diaminoethan Hydrochlorid (2) zur Verbindung 3 umgesetzt. Katalytische Hydrierung von 3 an einem Pd-Aktivkohle-Katalysator wandelt die Nitrogruppe zum korrespondierenden Amin um und spaltet zugleich die Z-Schutzgruppe ab (4). Die Aminoethylgruppe von Verbindung 4 lässt sich mit in der Peptidchemie üblichen Kupplungsreagenzien (z.B. PyBOP, HBTU oder DCC und HOBt) zusammen mit Z-(D)-Ser(tBu)-OH zum entsprechenden Amid 5 umsetzen. Die Umsetzung zum vollgeschützten Intermediat 6 erfolgt mit einem geeigneten Guanidinylierungsreagens wie z.B. N,N'-Bis(tert-butoxycarbonyl)-1H-pyrazol-1-carboxamidin. Anschließende Abspaltung der Z-Schutzgruppe durch katalytische Hydrierung am Pd-Aktivkohle-Katalysator (7) und Umsetzung mit Benzylsulfonylchlorid in einem inerten organischen Lösungsmittel (z.B. Dichlormethan) unter Zugabe einer organischen Base liefert das vollgeschützte Produkt B. Die Abspaltung der Schutzgruppen (BOC und t-Butylether) erfolgt durch Lösen der Verbindung 8 in Säure (z.B. Trifluoressigsäure oder 4M HCl_g) in Dioxan), wodurch das korrespondierende Salz der Zielverbindung N-(2-(4-Guanidino-benzenesulfonylamino)-ethyl]-3-hydroxy-2-phenylmethanesulfonylamino-propionamide (9) erhalten wird.
• Beispiel 2:
• Synthesebeschreibung Bz-SO₂-(D)-Ser-(Aza-Gly)-4-Guanidinobenzylamid Hydrochlorid [ST-544]
• Die Aminomethylgruppe des Edukts 4-Aminobenzylamin (10) wird zunächst mit einer geeigneten Schutzgruppe versehen, etwa durch Umsetzen von 10 mit Chlorameisensäurebenzylester oder Z-OSu zu Verbindung 11. Die Umsetzung mit einem geeignet geschützten Guanidinylierungsreagens wie z.B. N,N'-Bis(tert-butoxy-carbonyl)-1 H-pyrazol-1-carboxamidin liefert Verbindung 12, deren Z-Schutzgruppe durch katalytische Hydrierung an einem Pd-Aktivkohle-Katalysator abgespalten werden kann (13). Die somit freigesetzte Aminofunktion wird unter Kühlung und Zugabe von einem Äquivalent organischer Base mit Triphosgen (einem festen und somit weniger giftigen Phosgenersatz) und anschließend in situ mit Benzylcarbazat zu Verbindung 14 (Z-AzaGly-4-(N,N'-Bis-BOC-Guanidinobenzyl)amid] umgesetzt. Die Z-Schutzgruppe wird wie für Verbindung 13 beschrieben durch Hydrieren abgespalten (15) und mit Z-(D)-Ser(tBu)-OH und in der Peptidchemie üblichen Kupplungsreagenzien (z.B. PyBOP, HBTU oder DCC und HOBt) zum Amid 16 umgesetzt. Die Z-Schutzgruppe wird erneut katalytisch abgespalten (17) und das resultierende freie Amin mit Benzylsulfonylchlorid in einem inerten organischen Lösungsmittel (z.B. Dichlormethan) unter Zugabe einer organischen Base zum korrespondierenden Sulfonamid 18 umgesetzt. Die Abspaltung der verbliebenen Schutzgruppen erfolgt durch Reaktion in saurer Lösung (z.B. in Trifluoressigsäure oder in 4M HCl_g/Dioxan) zum entsprechenden Salz der Zielverbindung Bz-SO₂-(D)-Ser-(Aza-Gly)-4-Guanidinobenzylamid (19).
• Beispiel 3:
• Synthesebeschreibung N-(4-Guanidino-benzyl)-2-(3-hydroxy-2-phenylmethane-sulfonylamino-propionylamino)-4-phenyl-butyramide Hydrochlorid [ST-550]
• 4-Aminobenzylamin (20) wird mit Z-(L)_-Homophenylalanin und in der Peptidchemice üblichen Kupplungsreagenzien (z.B. PyBOP, HBTU oder DCC und HOBt) zum Amid 21 umgesetzt. Durch katalytische Hydrierung an einem Pd-Aktivkohle-Katalysator wird die Z-Schutzgruppe abgespalten (22) und die freie Aminogruppe wie für 21 beschrieben mit Z-(D)-Ser(tBu) OH zum Amid 23 umgesetzt. Die Umsetzung mit einem geeignet geschützten Guanidinylierungsreagens wie z.B. N,N'-Bis(tert-butoxycarbonyl)-1H-pyrazol-1-carboxamidin liefert Verbindung 24. Die N-terminale Z-Schutzgruppe wird wie für 22 beschrieben abgespalten und die resultierende Verbindung 25 mit Benzylsulfonylchlorid zum Sulfonamid 26 umgesetzt. Im letzten Schritt werden die verbliebenen Schutzgruppen in saurem Medium (z.B. in Trifluoressigsäure oder in 4M HCl_g/Dioxan) zum entsprechenden Salz der Zielverbindung 27 abgespalten.
• Beispiel 4:
• In vitro Hemmung von Urokinase und Plasmin
• Zur Bestimmung der Inhibitoraktivität wurden 200 μl Tris-Puffer (0,05 mol/l, den Inhibitor enthaltend, 0,154 mol/l NaCl, pH 8,0), 25 μl Substrat (Pefachrome uPA, Pefachrome PL oder Pefabloc TH in H₂O; Pentapharm LTD, Basel, Schweiz) und 50 μl Urokinase (Calbiochem-Novabiochem GmbH, Bad Soden, Deutschland) bzw. eine entsprechende andere Protease, z.B. Plasmin oder Thrombin, 10 Minuten bei 30 °C inkubiert. Nach ca. 30 Minuten und 30 Zyklen wird die Absorption bei 405 nm mittels eines Mikroplate Reader (Mediators PHL, Aureon Biosystems, Wien, Österreich) bestimmt. Die K_i-Werte wurden nach Dixon durch lineare Regression mittels eines Computerprogramms ermittelt. Die K_i-Werte sind das Mittel aus mindestens drei Bestimmungen, die Standardabweichung lag unter 25 %.
• 

Claims (16)

1. Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel 1

   

   worin Ar ein aromatisches oder heteroaromatisches Ringsystem bedeutet,

   

   bedeutet oder Ar und E zusammen einen Rest

   

   bilden, worin Z O, NH oder C=O und X⁴ C=O, NH oder CH₂ sein kann und W N, CR³ oder CR⁶ und X⁵ = CH, CR³, CR⁶ oder N sein kann, B -SO₂-, -CR³ ₂-, -NR³- oder -NH- bedeutet, X¹ NR¹³R⁴, OR³, SR³, COOR³, CONR³R⁴ oder COR⁵ bedeutet, R¹ H, einen gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heteroarylrest oder COOR³, CONR³R⁴ oder COR⁵ bedeutet, R² Halogen, C(R⁶)₃, C₂(R⁶)₅, OC(R⁶)₃ oder OC₂(R⁶)₅ bedeutet, R³ H oder einen beliebigen organischen Rest bedeutet, R¹³ eine Gruppe der allgemeinen Formel (IIa) oder (IIb) bedeutet,

   

   X² NH, NR⁴, O oder S bedeutet, X³ NH, NR⁴, O, S, CO, COO, CONH oder CONR⁴ bedeutet, Y C(R⁸)₂, NH oder NR³ bedeutet, R⁴ H oder einen verzweigt oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinylrest bedeutet, R⁵ H, einen Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Carboxy-alkyl-, Carboxy-alkenyl-, Carboxyl-alkinyl-,Carboxy-aryl-,Carboxy-heteroaryl-, -(CO)NR³R⁴ oder -COO-R³ bedeutet, wobei die Alkyl-, Aryl- und Heteroarylreste gegebenenfalls substituiert sein können, R⁶ jeweils unabhängig H oder Halogen, insbesondere F, ist, R⁷ H oder einen gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder -COR⁹ bedeutet, R⁸ jeweils unabhängig H, oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Heteroaryl-, Aralkyl-, Alkylaryl-, Heteroaralkyl- Rest oder/und einen substituierten oder unsubstituierten bi- oder polycyclischen Rest bedeutet, R⁹ H oder einen verzweigten oder unverzweigten, gegebenenfalls substituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder/und Heteroarylrest bedeutet, R¹⁰ ein Rest IC(R¹)₂)_o-X³R⁵ bedeutet, R¹¹ H, einen Carbonylrest -CO-R¹², einen Carboanmidrest – CONR¹² ₂, einen Oxycarbonylrest -COO-R¹² oder besonders bevorzugt einen Sulfonylrest -SO₂R bedeutet, R¹² H, einen verzweigten oder unverzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl- oder Heteroarylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten cyclischen Alkylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten Aralkyl-, Alkylaryl- oder Heteroaralkylrest oder einen substituierten oder unsubstituierten bi- oder polycyclischen Rest bedeutet, R¹⁵ C = X², NR³ oder CR³ ₂ darstellt, n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist, m eine ganze Zahl von 0 bis 5 ist, o eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, p eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, oder Salzen dieser Verbindungen zur Herstellung eines Mittels zur Hemmung des Urokinase-Plasminogenaktivators.
2. Verwendung nach Anspruch 1, worin Ar eine Benzolring bedeutet.
3. Verwendung nach Anspruch 2, worin R¹² einen Benzylrest bedeutet.
4. Verwendung nach Anspruch 2, worin R¹² ein Adamantyl- oder Campherrest bedeutet.
5. Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, worin die Substituenten B und E in para-Position zueinander angeordnet sind.
6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, worin die Verbindung N-[2-(4-Guanidino-benzolsulfonylamino)-ethyl]-3-hydroxy-2-phenylmethansulfonylamino-propionamid Hydrochlorid, Bz-SO₂-(D)-Ser-(Aza-Gly)-4-Guanidino-benzylamid Hydrochlorid oder N-(4-Guanidino-benzyl)-2-(3-hydroxy-2-phenylmethan-sulfonylamino-propionylamino)-4-phenyl-butyramid Hydrochlorid.
7. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Bekämpfung von Krankheiten, die mit einer pathologischen Überexpression von Urokinase oder/und Urokinaserezeptor assoziiert sind.
8. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Tumorbekämpfung.
9. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Bekämpfung der Metastasenbildung.
10. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin ein oral, topisch, rektal, parenteral, subkutan, intramuskulär, intraperitoneal, sublingual, nasal oder inhalativ verabreichbares Arzneimittel hergestellt wird.
11. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das Mittel in Form von Tabletten, Dragees, Kapseln, Pellets, Suppositoren, Lösungen, Emulsionen, Suspensionen, Liposomen, Inhalationssprays oder transdermalen Systemen, wie Pflastern, hergestellt wird.
12. Verbindungen der Formel I

    

    worin Ar, X¹, R², B, E und m wie in Anspruch 1 definiert sind.
13. N-[2-(4-Guanidino-benzolsulfonylamino)-ethyl]-3-hydroxy-2-phenylmethansulfonylamino-propionamid Hydrochlorid, Bz-SO₂-(D)-Ser-(Aza-Gly)-4-Guanidino-benzylamid Hydrochlorid oder N-(4-Guanidino-benzyl)-2-(3-hydroxy-2-phenylmethan-sulfonylamino-propionylamino)-4-phenyl-butyramid Hydrochlorid.
14. Verfahren zur Urokinasehemmung bei Lebewesen durch Verabreichung einer wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem Ansprüche 12 oder 13.
15. Verfahren zur Urokinasehemmung beim Menschen durch Verabreichung einer wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem Ansprüche 12 oder 13.
16. Arzneimittel enthaltend eine therapeutisch aktive Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 12 oder 13.