DD248605A1 - ENZYME ELECTRODE AND METHOD FOR DETERMINING L-GLUTAMATE AND TRANSAMINASE ACTIVITY - Google Patents
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Abstract
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Enzymelektrode und ein Verfahren zur Bestimmung kleinster Mengen an Glutamat und der Aktivitaet von Transaminasen zu entwickeln. Erfindungsgemaess wird eine Enzymschicht, die ein L-Glutamat zu a-Ketoglutarat umwandelndes Enzym und ein a-Ketoglutarat zu L-Glutamat umwandelndes Enzym enthaelt, vor einer Elektrode angeordnet. Der Messloesung wird erfindungsgemaess Alanin zugesetzt.The invention has for its object to develop an enzyme electrode and a method for the determination of minute amounts of glutamate and the activity of transaminases. In the present invention, an enzyme layer containing an enzyme converting L-glutamate to a-ketoglutarate and an α-ketoglutarate to L-glutamate-converting enzyme is placed in front of an electrode. The measuring solution is added according to the invention alanine.
Description
Die Erfindung betrifft eine Enzyrnelektrode und ein Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von L-Glutamat (im folgenden Glutamat) und der Aktivität von Transaminasen, wie Alaninaminotransferase und Aspartataminotransferase (im folgenden ALT und AST). Sie ist für den Einsatz in der klinischen Diagnostik, in der mikrobiologischen und Lebensmittelindustrie und in der Forschung geeignet.The invention relates to an enzyme electrode and a method for determining the concentration of L-glutamate (hereinafter glutamate) and the activity of transaminases such as alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase (hereinafter ALT and AST). It is suitable for use in clinical diagnostics, in the microbiological and food industry and in research.
Im allgemeinen wird die Konzentration von Glutamat unter Verwendung von gelöster Glutamatdehydrogenase (Gleichung 1) durch optische Messung des entstehenden NADH und NADPH (zusammengefaßt als NAD(P)H bezeichnet) bei 340 nm bestimmt.In general, the concentration of glutamate using dissolved glutamate dehydrogenase (Equation 1) is determined by optical measurement of the resulting NADH and NADPH (collectively referred to as NAD (P) H) at 340 nm.
Glutamat + H2O + NAD(P)+S? a-Ketoglutarat + NH3 + NAD(P)H (1)Glutamate + H 2 O + NAD (P) + S? α-ketoglutarate + NH 3 + NAD (P) H (1)
Dabei tritt je Meßprobe ein hoher Enzymverbrauch auf.In each case, a high enzyme consumption occurs per test sample.
Darüber hinaus wurden Enzymelektroden zur Glutamatbestimmung auf der Grundlage immobilisierter GlutamatdehydrogenaseIn addition, enzyme electrodes for glutamate determination based on immobilized glutamate dehydrogenase
(P. Davies und K. Mosbach, Biochim. Biophys. Acta 370 [1974] 329), Glutamatdecarboxylase (M. Hikuma, H. Obana, T. Yasuda,(Davies Davies and K. Mosbach, Biochim Biophys Acta 370 [1974] 329), glutamate decarboxylase (Hikuma M., Obana H., T. Yasuda,
I. Karube und S. Suzuki, Anal. Chim. Acta 131 [1981] 91) und Glutamatoxidase (H. Yamauchi, H. Kusakabe, Y. Midorikawa,I. Karube and S. Suzuki, Anal. Chim. Acta 131 [1981] 91) and glutamate oxidase (H. Yamauchi, H. Kusakabe, Y. Midorikawa,
T. Fujishima und A. Kuninaka, 3rd. Eur. Congr. Biotechnol. 1984, S. I—705) beschrieben. Durch die Wiederverwendbarkeit der Enzyme in diesen Dualsystemen wird eine wesentliche Verringerung des Enzymverbrauchs erreicht. Die Empfindlichkeit wird dabei, wie bei allen Enzymelektroden, einerseits durch das „Rauschen" der Anzeigeeinrichtung begrenzt. Andererseits kann maximal soviel elektrodenaktives Produkt erzeugt werden, wie Substrat (Glutamat) an das immobilisierte Enzym gelangt. Dementsprechend liegt die untere Nachweisgrenze bei den erwähnten Enzymelektroden zwischen 100 und maximal 10 pmol/l. Dadurch sind für die Messung von Glutamat in niedrig konzentrierten Lösungen große Probenvolumina erforderlich.T. Fujishima and A. Kuninaka, 3rd. Eur. Congr. Biotechnol. 1984, p. I-705). The reusability of the enzymes in these dual systems achieves a substantial reduction in enzyme consumption. As with all enzyme electrodes, the sensitivity is limited on the one hand by the "noise" of the display device, on the other hand, the maximum amount of electrode-active product can be produced as substrate (glutamate) reaches the immobilized enzyme 100 and a maximum of 10 pmol / l, which requires large sample volumes to measure glutamate in low-concentration solutions.
Sinngemäß gilt für die Bestimmung der ALT- und AST-Aktivität das Gleiche. Auch hier wurden über die materialintensiven Methoden mit gelösten Reagenzien, die auf der Messung des in der ALT-Reaktion:Analogously, the same applies to the determination of ALT and AST activity. Again, the material-intensive methods with dissolved reagents based on the measurement of the in the ALT reaction were:
a-Ketoglutarat + Alanin^ Glutamat + Pyruvat (2)α-ketoglutarate + alanine ^ glutamate + pyruvate (2)
gebildeten Pyruvats mit Lactatdehydrogenase bzw. der Messung des in der AST-Reaktion:pyruvate formed with lactate dehydrogenase or the measurement of the in the AST reaction:
a-Ketoglutarat + Aspartat^ Oxalacetat + Glutamat (3)α-ketoglutarate + aspartate ^ oxaloacetate + glutamate (3)
gebildeten Oxalacetats mit Malatdehydrogenase beruhen, hinaus Enzymelektroden beschrieben. Zur ALT-Bestimmung wird dabei entweder Pyruvat oder Glutamat mit der entsprechenden an der Elektrode fixierten Oxidase nachgewiesen (F. Mizutani, K. Tsuda,Formed oxalacetate based with malate dehydrogenase, also described enzyme electrodes. For the determination of ALT either pyruvate or glutamate is detected with the corresponding oxidase fixed to the electrode (F. Mizutani, K. Tsuda,
I. Karube, S. Suzuki und K. Matsumoto, Anal. Chim. Acta 118 [1980] 65; H. Yamauchi, H. Kusakabe, Y. Midorikawa, T. Fujishima undI. Karube, S. Suzuki and K. Matsumoto, Anal. Chim. Acta 118 [1980] 65; H. Yamauchi, H. Kusakabe, Y. Midorikawa, T. Fujishima and
H. Kuninaka, 3rd. Eur. Congr. Biotechnol. 1984, S. I—705). Zur AST-Bestimmung befindet sich vor der Pyruvatoxidase-Elektrode zusätzlich Oxalacetatdecarboxylase, die die Umsetzung von Oxalacetat zu Pyruvat katalysiert (K. Kihara, E. Yasukawa und S. Hirose, Anal. Chem. 56 [1984] 1876). Die niedrigen Normalwerte für ALT und AST im Serum zusammen mit der geringen Empfindlichkeit der Enzymelektroden machen große Probenvolumina und lange Inkubations- und damit Meßzeiten notwendig.H. Kuninaka, 3rd. Eur. Congr. Biotechnol. 1984, p. I-705). For AST determination, oxalacetate decarboxylase, which catalyzes the reaction of oxaloacetate to pyruvate, is additionally present in front of the pyruvate oxidase electrode (K. Kihara, E. Yasukawa and S. Hirose, Anal. Chem. 56 [1984] 1876). The low levels of serum ALT and AST combined with the low sensitivity of the enzyme electrodes require large sample volumes and long incubation and thus measurement times.
Ziel der ErfindungObject of the invention
Ziel der Erfindung ist es, mit einer Enzymelektrode und einem Verfahren eine wesentlich höhere Empfindlichkeit der Glutamat- sowie der Transaminasen-Bestimmung zu erreichen und damit das notwendige Probenvolumen bzw. die Meßzeit zu reduzieren oder die Messung von Spurenmengen von Glutamat und sehr geringen Transaminase-Aktivitäten zu ermöglichen.The aim of the invention is to achieve an appreciably higher sensitivity of the glutamate and transaminase determination with an enzyme electrode and a method and thus to reduce the necessary sample volume or measurement time or the measurement of trace amounts of glutamate and very low transaminase activities to enable.
Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention
Aufgabe der Erfindung ist es, eine Enzymelektrode und ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung kleinster Mengen an Glutamat und der Aktivität von Transaminasen unter Einsatz immobilisierter Enzyme zu entwickeln, wobei die Anzeige des Substratumsatzes elektrochemisch erfolgen soll. Erfindungsgemäß wird eine Enzymschicht, die ein L-Glutamat zu a-Ketoglutarat umwandelndes Enzym nach Gleichung (1) bzw. (4)The object of the invention is to develop an enzyme electrode and a method for the quantitative determination of the smallest amounts of glutamate and the activity of transaminases using immobilized enzymes, wherein the display of the substrate conversion is to be carried out electrochemically. According to the invention, an enzyme layer which converts an L-glutamate into α-ketoglutarate-converting enzyme according to equation (1) or (4)
Glutamat + O2 + H2O -» a-Ketoglutarat + H2O2 + HN3 (4)Glutamate + O 2 + H 2 O - »a-ketoglutarate + H 2 O 2 + HN 3 (4)
und ein a-Ketoglutarat zu Glutamat umwandelndes Enzym nach Gleichung (2) bzw. der Riickreaktion von Gleichung (1) enthält, vor der Elektrode angeordnet.and an α-ketoglutarate to glutamate-converting enzyme according to equation (2) or the back reaction of equation (1), arranged in front of the electrode.
Als L-Glutamat zu a-Ketoglutarat umwandelndes Enzym wird entweder Glutamatdehydrogenase mit NAD(P)+ als Cosubstrat oder Glutamatoxidase verwendet. Als a-Ketoglutarat zu L-Glutamat umwandelndes Enzym wird zur Glutamatbestimmung ALT, zur Transaminasenaktivitätsbestimmung Glutamatdehydrogenase [mit NAD(P)H als Cosubstrat], die dann die Rückreaktion von Gleichung (1) katalysiert, verwendet.Glutamate dehydrogenase with NAD (P) + as cosubstrate or glutamate oxidase is used as the enzyme converting L-glutamate into α-ketoglutarate. Enzyme converting α-ketoglutarate to L-glutamate is used for glutamate determination ALT, for transaminase activity determination glutamate dehydrogenase [with NAD (P) H as cosubstrate], which then catalyzes the reverse reaction of equation (1).
Die bei diesen Reaktionen beteiligten Substanzen NAD(P)H, O2 oder H2O2 werden zur Umsatzanzeige elektrochemisch nachgewiesen.The substances involved in these reactions NAD (P) H, O 2 or H 2 O 2 are detected electrochemically to the sales display.
Erfindungsgemäß werden folgende Kombinationen von glutamat- und a-ketoglutaratumsetzenden Enzymen mit der Anzeigeelektrode realisiert:According to the invention, the following combinations of glutamate- and a-ketoglutarate-converting enzymes are realized with the display electrode:
1. Die Enzymschicht aus Glutamatdehydrogenase und ALT befindet sich vor einer mit Meldolablau chemisch modifizierten Elektrode, an der NAD(P.)H angezeigt wird. Das in dieser Enzymschicht gebildete NAD(P)H kann aber auch in Anwesenheit von Phenazinmethosulfat mit einer üblichen Sauerstoffelektrode nachgewiesen werden.1. The enzyme layer of glutamate dehydrogenase and ALT is in front of a chemically modified with Meldolablau electrode at the NAD (P.) H is displayed. However, the NAD (P) H formed in this enzyme layer can also be detected in the presence of phenazine methosulfate with a conventional oxygen electrode.
2. Die Enzymschicht aus Glutamatoxidase und Glutamatdehydrogenase befindet sich entweder vor einer mit Meldolablau modifizierten Elektrode oder vor einer Sauerstoffelektrode.2. The enzyme layer of glutamate oxidase and glutamate dehydrogenase is located either in front of a meldola blue-modified electrode or in front of an oxygen electrode.
3. Bei Verwendung von Glutamatoxidase und ALT wird H2O2 mittels einer auf +600 mV polarisierten Metallelektrode durch anodische Oxidation oder O2 an einer Sauerstoffelektrode nachgewiesen.3. When using glutamate oxidase and ALT, H 2 O 2 is detected by means of a metal electrode polarized at +600 mV by anodic oxidation or O 2 at an oxygen electrode.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß der Meßlösung Alanin zugesetzt wird.The inventive method is characterized in that the measurement solution alanine is added.
Zur Glutamatbestimmung erfolgt in der Enzymschicht entweder die Rückführung des durch Glutamatdehydrogenase mit NAD(P) + als Cosubstrat bzw. Glutamatoxidase gebildeten a-Ketoglutarats zu Glutamat in der ALT-Reaktion [Gleichung (2)] oder die Rückführung des durch die Glutamatoxidase gebildeten a-Ketoglutarats zu Glutamat in der Rückreaktion von Glutamatdehydrogenase mit NAD(P)H als Cosubstrat [Gleichung (1)]. Letzteres findet auch zur Bestimmung der Transaminasen-Aktivität (ALT und AST) Anwendung. Hierbei wird die zu bestimmende Enzymprobe in die a-Ketoglutarat und Alanin bzw. Aspartat enthaltende Meßlösung gegeben und das entstehende Glutamat mit der Enzymelektrode, deren Enzymschicht Glutamatoxidase und Glutamatdehydrogenase enthält, bestimmt.For glutamate determination, either the recirculation of the a-ketoglutarate formed by glutamate dehydrogenase with NAD (P) + as cosubstrate or glutamate oxidase to glutamate in the ALT reaction [equation (2)] or the recycling of the a-glutamate oxidase formed by the glutamate oxidase takes place. Ketoglutarate to glutamate in the reverse reaction of glutamate dehydrogenase with NAD (P) H as cosubstrate [Equation (1)]. The latter is also used to determine transaminase activity (ALT and AST). In this case, the enzyme sample to be determined is added to the measurement solution containing a-ketoglutarate and alanine or aspartate, and the resulting glutamate with the enzyme electrode, the enzyme layer of which contains glutamate oxidase and glutamate dehydrogenase, is determined.
Die beschriebene Rezyklisierung des gebildeten a-Ketoglutarats zu Glutamat in der Enzymschicht ermöglicht den weiteren Umsatz von Glutamat zu a-Ketoglutarat in Reaktion (1) (Hinreaktion) oder (4). Dadurch wird jedes Glutamatmolekül mehrfach umgesetzt, und es entsteht wesentlich mehr NAD(P)H bzw. H2O2, bzw. es wird wesentlich mehr O2 bzw. (wenn die Glutamatdehydrogenase und Glutamatoxidase enthaltende Enzymschicht verwendet wird) NAD(P)H verbraucht, als Glutamat aus der Probe in die Enzymschicht diffundiert. Durch die Beschleunigung der Reaktion wird eine beträchtliche Erhöhung der Empfindlichkeit erreicht.The described recycling of the formed a-ketoglutarate to glutamate in the enzyme layer allows the further conversion of glutamate to a-ketoglutarate in reaction (1) (forward reaction) or (4). As a result, each glutamate molecule is reacted several times, and significantly more NAD (P) H or H 2 O 2 is formed , or substantially more O 2 or (when the glutamate dehydrogenase-containing enzyme layer is used) NAD (P) H consumed as glutamate diffuses from the sample into the enzyme layer. By accelerating the reaction, a considerable increase in sensitivity is achieved.
Die erfindungsgemäße Enzymelektrode hat den Vorteil, daß Spurenmengen von Glutamat und sehr geringe Aktivitäten von Transaminasen, wie ALT und AST, gemessen werden können bzw. eine wesentliche Verringerung des Probenvolumens .und der Meßzeit erreicht wird.The enzyme electrode according to the invention has the advantage that trace amounts of glutamate and very low activities of transaminases, such as ALT and AST, can be measured or a substantial reduction in the sample volume and the measurement time is achieved.
Anschließend wird die Erfindung an Beispielen näher erläutert.Subsequently, the invention will be explained in more detail by way of examples.
Ausführungsbeispieleembodiments
Glutamatdehydrogenase und ALT werden nach dem Verfahren von F. Scheller et al. DD-PS 150 508 in einer Gelatinemembran immobilisiert. Dabei werden je cm2 56 U Glutamatdehydrogenase und 59 U ALT eingesetzt. Eine Graphitelektrode (d = 3 mm) wird mit Meldolablau chemisch modifiziert (L. Gorton, A. Torstensson, H. Jaegfieldt und G. Johansson, J. Electroanal. Chem. 161 [1984] 103). Ein 4 mm x 4 mm großes Stück der Enzymmembran wird auf der Oberfläche der Elektrode mittels einer Dialysemembran (Dicke 20 μηι) und eines O-Ringes fixiert. Diese Enzymelektrode wird in eine temperierte Meßzelle mit Magnetrührer eingesetzt, an einen Polarographen angeschlossen und auf 0,0 V gegen eine Ag/AgCI-Elektrode (0,1 M KCI) polarisiert. In der Meßzelle befinden sich 2 ml 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,4, mit 2 mM ADP, 1 mM NAD + und 0,1 M Alanin. Nach Einstellen des Stromgrundwertes werden jeweils 20 μΙ Glutamatlösungen verschiedener Konzentrationen zur Aufnahme einer Eichkurve gegeben. Die Größe des daraufhin erfolgenden Stromanstieges wird in der Eichkurve gegen die Glutamatkonzentration aufgetragen. Zur Glutamatbestimmung in einer Lebensmittelprobe wird analog zur Messung der Eichlösungen eine Probe von 20 μΙ in die Meßzelle gegeben und mit dem Stromanstieg aus der Eichkurve die gesuchte Glutamatkonzentration ermittelt.Glutamate dehydrogenase and ALT are prepared by the method of F. Scheller et al. DD-PS 150 508 immobilized in a gelatin membrane. For each cm 2, 56 U glutamate dehydrogenase and 59 U ALT are used. A graphite electrode (d = 3 mm) is chemically modified with Meldola blue (L. Gorton, A. Torstensson, H. Jaegfieldt and G. Johansson, J. Electroanal. Chem. 161 [1984] 103). A 4 mm x 4 mm piece of the enzyme membrane is fixed on the surface of the electrode by means of a dialysis membrane (thickness 20 μηι) and an O-ring. This enzyme electrode is placed in a temperature-controlled magnetic-cell measuring cell, connected to a polarograph and polarized to 0.0 V against an Ag / AgCl electrode (0.1 M KCl). The measuring cell contains 2 ml of 0.1 M phosphate buffer, pH 7.4, containing 2 mM ADP, 1 mM NAD + and 0.1 M alanine. After setting the basic current value, 20 μΙ glutamate solutions of different concentrations are each added to record a calibration curve. The magnitude of the subsequent increase in current is plotted against the glutamate concentration in the calibration curve. For glutamate determination in a food sample, a sample of 20 μΙ is added to the measuring cell analogously to the measurement of the calibration solutions, and the desired glutamate concentration is determined with the increase in current from the calibration curve.
Beispie! 2Step Example! 2
Eine Enzymmembran wie in Beispiel 1 wird auf der Polyethylenmembran über der Pt-Indikatorelektrode (d = 3,5 mm) einer Sauerstoffelektrode fixiert und die Elektrode am Polarographen oder pO2-Meter auf -0,6 V polarisiert. Die Meßlösung (2 ml) besteht aus 0,1 M Veronal-Natriumcarbonatpuffer, pH 8,6, mit 2 mM ADP, 1 mM NADP + , 0,5 mM Phenazinmethosulfat und 0,1 M Alanin. Durch Zugabe von jeweils 10 μΙ von Glutamatstandardlösungen wird aus dem Stromabfall der Elektrode eine Kalibrierungskurve aufgenommen. Zur Glutamatmessung in einer mikrobiologischen Probe werden 10 μΙ der Probe zugegeben, und aus dem auftretenden Absinken des Stromes und der Eichkurve wird die gesuchte Konzentration erhalten.An enzyme membrane as in Example 1 is fixed on the polyethylene membrane over the Pt indicator electrode (d = 3.5 mm) of an oxygen electrode and the electrode is polarized to -0.6 V on the polarograph or pO 2 meter. The measuring solution (2 ml) consists of 0.1 M Veronal sodium carbonate buffer, pH 8.6, with 2 mM ADP, 1 mM NADP + , 0.5 mM phenazine methosulfate and 0.1 M alanine. By adding 10 μΙ each of glutamate standard solutions, a calibration curve is taken from the current drop of the electrode. For glutamate measurement in a microbiological sample 10 μΙ of the sample are added, and from the occurring decrease of the current and the calibration curve, the sought concentration is obtained.
Es wird eine Enzymmembran aus Polyacrylamid mit 59 U/cm2 ALT und 40 U/cm2 Glutamatoxidase hergestellt. Ein 5 mm x 5 mm großes Membranstück wird zwischen zwei Celluloseacetatmembranen (Dicke 20 μιτι) vor der auf +0,6 V polarisierten Pt-Indikatorelektrode (d = 0,5 mm) einer modifizierten Sauerstoffelektrode befestigt. Diese Enzymelektrode wird in eine Meßzelle wie in Beispiel 1 eingesetzt und an einen Polarographen angeschlossen, der zur Messung der ersten Ableitung des Stromes nach der Zeit auf Stellung „derivativ" geschaltet ist. In die Meßzelle werden 1,5 ml 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,0, mit 0,1 M Alanin gegeben. Hat sich ein stationärer Grundstrom eingestellt, werden jeweils 10 μΙ von Glutamatlösungen unterschiedlicher Konzentrationen zugegeben, und aus den kinetischen Signalen wird eine Eichkurve erstellt. Die Messung von Glutamat in Proben unbekannter Konzentration erfolgt analog wie in Beispiel 1 und 2.An enzyme membrane of polyacrylamide with 59 U / cm 2 ALT and 40 U / cm 2 glutamate oxidase is produced. A 5 mm × 5 mm membrane piece is attached between two cellulose acetate membranes (20 μm thick) in front of the +0.6 V polarized Pt indicator electrode (d = 0.5 mm) of a modified oxygen electrode. This enzyme electrode is inserted into a measuring cell as in Example 1 and connected to a polarograph which is switched to the "derivative" position in order to measure the first derivative of the current over time, into which 1.5 ml of 0.1 M phosphate buffer, pH 7.0, with 0.1 M alanine If a steady-state basic current has been established, 10 μΙ each of glutamate solutions of different concentrations are added, and a calibration curve is generated from the kinetic signals.The measurement of glutamate in samples of unknown concentration takes place analogously as in example 1 and 2.
Eine Enzymmembran aus Gelatine mit 40 U/cm2 Glutamatoxidase und 56 U/cm2 Glutamatdehydrogenase wird hergestellt und vor der Oberfläche einer modifizierten Graphitelektrode wie in Beispiel 1 fixiert.An enzyme membrane of gelatin with 40 U / cm 2 glutamate oxidase and 56 U / cm 2 glutamate dehydrogenase is prepared and fixed in front of the surface of a modified graphite electrode as in Example 1.
Die Elektrode wird an einen Polarographen angeschlossen und auf 0,0 V gegen Ag/AgCI polarisiert. Die Meßlösung (2 ml) enthält 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,6,2 mM ADP, 0,2 M Alanin, 28 mM a-Ketoglutarat und 5 mM NADH. Wenn sich ein konstanter Grundstrom eingestellt hat, werden 50 μΙ-Proben von Standardlösungen mit 5,10, 20, 80 und 200 U/l Alaninaminotransferase zugegeben. Aus der Geschwindigkeit des Abfalls der Strom-Zeit-Kurve und den Enzymaktivitäten wird eine Eichkurve gebildet. Nun wird eine Serumprobe unbekannter ALT-Aktivität zugegeben, und aus der gemessenen Geschwindigkeit des Stromabfalls und der Eichkurve kann die gesuchte Aktivität ermittelt werden.The electrode is connected to a polarograph and polarized to 0.0 V vs. Ag / AgCl. The measuring solution (2 ml) contains 0.1 M phosphate buffer, pH 7.6.2 mM ADP, 0.2 M alanine, 28 mM α-ketoglutarate and 5 mM NADH. If a constant background current has been established, 50 μΙ samples of standard solutions of 5.10, 20, 80 and 200 U / l alanine aminotransferase are added. From the rate of decrease of the current-time curve and the enzyme activities, a calibration curve is formed. Now, a serum sample of unknown ALT activity is added, and from the measured velocity of the current drop and the calibration curve, the sought-after activity can be determined.
Eine Enzymmembran wie in Beispiel 4 wird hergestellt und an einer Clark-Sauerstoffelektrode wie in Beispiel 2 fixiert. Die Meßlösung besteht aus 0,1 M Phosphatpuffer, pH 8,0, mit 2 mM ADP, 50 mM Aspartat, 20 mM a-Ketoglutarat und 10 mM NADPH. Die Eichung mit Aspartataminotransferase enthaltenden Standardlösungen und die Messung einer Probe mit unbekannter Aspartataminotransferaseaktivität wird wie in Beispiel 4 durchgeführt. Meßsignal ist die Geschwindigkeit des dem OyVerbrauch entsprechenden Stromabfalls.An enzyme membrane as in Example 4 is prepared and fixed to a Clark oxygen electrode as in Example 2. The measuring solution consists of 0.1 M phosphate buffer, pH 8.0, with 2 mM ADP, 50 mM aspartate, 20 mM α-ketoglutarate and 10 mM NADPH. Calibration with aspartate aminotransferase-containing standard solutions and measurement of a sample with unknown aspartate aminotransferase activity is carried out as in Example 4. Measuring signal is the speed of the current consumption corresponding to the Oy consumption.
Claims (9)
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| DD27477685A DD248605A1 (en) | 1985-04-03 | 1985-04-03 | ENZYME ELECTRODE AND METHOD FOR DETERMINING L-GLUTAMATE AND TRANSAMINASE ACTIVITY |
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| DD (1) | DD248605A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4780191A (en) * | 1987-06-26 | 1988-10-25 | Massachusetts Institute Of Technology | L-glutamine sensor |
-
1985
- 1985-04-03 DD DD27477685A patent/DD248605A1/en not_active IP Right Cessation
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| WO1988010424A1 (en) * | 1987-06-26 | 1988-12-29 | Massachusetts Institute Of Technology | L-glutamine sensor |
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