CZ337198A3

CZ337198A3 - Peptidové farmaceutické produkty pro orální použití

Info

Publication number: CZ337198A3
Application number: CZ983371A
Authority: CZ
Inventors: William Stern; James P. Gilligan
Original assignee: Unigene Laboratories, Inc.
Priority date: 1996-03-15
Filing date: 1997-03-14
Publication date: 1999-04-14
Also published as: PT929270E; AU2211197A; KR100498646B1; HUP9902751A3; NZ331576A; DE69731957D1; RU2198677C2; NO322443B1; NO984243L; JP3549542B2; CN1197616C; CN1213282A; EP0929270A1; US5912014A; EP0929270B1; CA2249744C; KR19990087798A; BR9708078A; ATE284657T1; CA2249744A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká orálních peptidových léčiv ve kterých aktivní sloučeniny obsahují ve svých strukturách více aminokyselin a nejméně jednu peptidovou vazbu, a způsobů zvýšení biologické dostupnosti těchto peptidových aktivních sloučenin při orálním podání.

Dosavadní stav v oboru

Mnoho lidských hormonů, neuřotransmiterů a dalších významných biologických sloučenin obsahuje peptid.y jako základní část jejich molekulových struktur. Zvýšení hladin těchto peptidových sloučenin vyvolává u pacientů v případě mnoha chorob pozitivní odezvu. Terapeuticky účinné množství těchto biologicky významných peptidů lze pacientům podávat více způsoby. Nicméně, jak je diskutováno dále níže, výhodné orální podávání tohoto typu aktivních sloučenin je velmi obt í žně.

Například lososí kalcitonin je peptidový hormon který snižuje vychytávání vápníku z kostí. Při jeho použití k léčbě chorob majících vztah ke kostem a poruchami hladin vápníku (jako je osteoporesa, Pagetova choroba, hyperkalcinemie při 'zhoubném procesu á'poďobhě) přispívá k udržení kostní hustoty. Bylo i zo 1 ováno’mnoho typů kalcitoninu (lidský kalcitonin, lososí kalcitonin, úhoří kalcitonin, elkatonin, prasečí kalcitonin a kuřecí kalcitonin). Různé typy kalcitoninu jsou výrazně nehomologní. Například mezi skladbou aminokyselin lidského kalcitoninu a skladbou lososího kalcitoninu je pouze 50% shoda. Přes rozdíly ve struktuře • ·· :..

···· * * . . ..· ·· · • · · · · · . .

molekuly lze lososí kalcitonin použít v humánní léčbě výše uvedených chorob reagujících na kalcitonin.

Peptidová léčiva dosud používaná v oboru se podávají injekčním nebo nasálním způsobem podání. Jedním příkladem peptidového léčiva často podávaného injekčně je insulin. Výhodnější orální podání je problematické, protože aktivní peptidové sloučeniny jsou velmi náchylné k degradaci v žaludku a ve střevech. Například podle dosavadních znalostí v oboru se nepředpokládala možnost dosažení reprodukovatelných hladin lososího kalcitoninu v krvi při orálním podání. Tento předpoklad byl založen na tom, že lososí kalcitonin nemá dostatečnou stabilitu v prostředí gastroi ntes.t inálního traktu a je obtížně transportován přes střevní, stěny do krve. Nicméně injekční a nasální podání je výrazně méně vhodné než orální podání z hlediska menšího komfortu pacienta. Často toto nepohodlí a nekomfort v podstatě vede k nesouhlasu pacienta s léčebným režimem. V oboru tedy existuje potřeba účinnějšího a reprodukovate1 nějŠího způsobu orálního podávání peptidových léčiv jako je insulin, lososí kalcitonin a další podrobněji diskutované v tomto popise.

Proteolytické enzymy jak žaludeční tak střevní mohou peptidy degradovat a převést je tak na inaktivní formu dříve, než mohou být absorbovány do krevního oběhu. Každé množství peptidu, které odolá proteolytické degradaci., žaludečními ___ proteasami (obvykle majícími optimální hodnotu pH v kyselé oblasti) se následně dostane do styku s proteasami tenkého střeva a enzymy vylučovanými pankreatem (obvykle maj-ícími optimální hodnotu pH v neutrální a kyselé oblasti). Specifické potíže vznikající při orálním podání peptidu jako je lososí kalcitonin mají příčinu v relativně velké velikosti molekuly a distribuci jejího náboje. Ty mohou přispívat k obtížnějšímu r>·« ·««« ♦ · · * ··♦ • · · • · · • · · • · · · «

pronikání lososího kalci.toninu ke střevním stěnám a překonání kartáčkového lemu střevní sliznice a proniknutí do krevního toku. Tyto další problémy mohou dále přispívat k omezené biologické dostupnosti.

Podstata vynálezu.

Cílem vynálezu je tedy poskytnout terapeuticky účinný farmaceutický přípravek pro spolehlivý transport léčivých peptidů, například fyziologicky aktivních peptidových léčiv jeko je insulin, lososí kalcitonin, vasopresin a další diskutované v tomto popisu.

Dalším cílem vynálezu je poskytnout terapeutické způsoby pro zvýšení biologické dostupnosti těchto peptidů.

Dalším cílem vynálezu je .poskytnout způsoby léčení chorob souvisejících s kostmi a poruchami hladin vápníku orálním podáním lososího kale i tóninu.

*

Podle jednoho aspektu, vynález poskytuje farmaceutický přípravek pro orální podání fyziologicky aktivního peptidového prostředku který obsahuje:

(A) terapeuticky účinné množství uvedeného aktivního peptidového prostředku;

(B) nejméně jeden farmaceuticky přijatelný prostředek snižující pH;

(C) nejméně jeden prostředek zvyšující absorpci schopný podpořit biologickou dostupnost uvedené aktivního prostředku;

«4 *»♦· ·

« « 4 · • « ·

·«

CD) acidorezistentní chránící prostředek působící při transportu uvedeného farmaceutického prostředku Žaludkem pacientu tak, že zabraňuje kontaktu mezi uvedeným aktivním peptidovým prostředkem a žaludečními proteasami.;

kde uvedený prostředek snižující pH je obsažen v uvedeném farmaceutickém prostředku v takovém množství, které když se uvedený prostředek přidá k deseti mililitrům 0,1 M roztoku { hydrogenuhli či tanu sodného je dostatečné pro snížení pH uvedeného roztoku na hodnotu která není vyšší než 5,5,

Výhodné aktivní peptidové prostředky zahrnují, ale nejsou omezeny pouze na ně, insulin, vasopresin, lososí kalcitonin a další uvedené dále níže, zejména však lososí kalcitonin.

Podle dalšího aspektu, vynález poskytuje způsob zvýšení biologické dostupnosti terapeuticky aktivního peptidového prostředku podávaného orálně, kde uvedený způsob zahrnuje selektivní uvolňování uvedeného aktivního peptidového prostředku společně s nejméně jedním prostředkem snižujícím pH a nejméně jedním prostředkem zvyšujícím absorpci v pacientově střevě po průchodu uvedeného aktivního peptidového prostředku, prostředku snižujícího pH a prostředku zvyšujícího absorpci ústy a žaludkem pacienta za ochrany acidorezistentním chránícím prostředkem, který v podstatě úplně zabraňuje styku mezi uvedeným peptidovým prostředkem a žaludečními proteasami;

' přičemž uvedený prostředek snižující pH a další sloučeniny které se s ním uvolňují, jsou ve střevě uvolněny v takovém množství, které .jestliže se přidá k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného je dostatečné ke snížení pH na hodnotu nepřevyšující 5,5.

V* • Φ Φ

Φ Φ·*

ΦΦΦΦ···

Podle dalšího aspektu, vynález poskytuje způsob zvýšení biologické dostupnosti terapeuticky aktivního peptidového prostředku podávaného orálně, kde uvedený způsob zahrnuje selektivní uvolňování uvedeného aktivního peptidového prostředku společně s nejméně jedním prostředkem snižujícím pH a nejméně jedním prostředkem zvyšujícím absorpci v pacientově střevě po průchodu uvedeného aktivního peptidového prostředku, prostředku snižujícího pH a prostředku zvyšujícího absorpci ústy a žaludkem pacienta za ochrany enteroso1ventním potahem, který v podstatě úplně zabraňuje styku mezi uvedeným peptidovým prostředkem a žaludečními proteasami;

přičemž uvedená sloučenina snižující pH se uvolní uvedeným prostředkem ve střevě v takovém množství, které jestliže se přidá k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného je dostatečné ke snížení pH na hodnotu nepřevyšující 5,5.

Předpokládá se, že způsob podle vynálezu snižuje pravděpodobnost proteolytické degradace aktivní peptidové sloučeniny tak, že současně chrání peptid před proteo1ytickým působením (1) žaludečních proteas, (které mají obvykle nejvyšší aktivitu v kyselé oblasti pH) a (2) střevních a pankreatických proteas (které jsou obvykle nejakt ivnější v alkalické až neutrální oblasti pH).

Také se předpokládá, že způsob podle vynálezu podporuje proces kterým peptid proniká střevní, kartáčkovým lemem střevní sliznice do krve, přičemž je peptid stále chráněn před proteolytickou degradací.

Acidorezistentní chránící prostředek chrání aktivní peptidový prostředek před účinky acidoaktivních proteas v žaludku. Významný podíl kyseliny (se kterým se aktivní peptidový prostředek smísí) potom sníží aktivitu bazicky aktivních proteas ve střevě (například luminální nebo digestivní proteasy a proteas kartáčkového lemu sliznice) snížením hodnoty pH pod optimální aktivitní rozmezí těchto proteas. Prostředky podporující absorpci podle vynálezu lze použít k podpoření transportu peptidového prostředku přes slizniční vrstvy střeva, kartáčkový lem střevní sliznice a do krve.

Současné použití prostředků podporujících absorpci společně se sloučeninou snižující pH podle vynálezu má překvapivě synergistický účinek na biologickou dostupnost ve srovnání s použitím samotného prostředku podporujícího absorpci nebo samotné sloučeniny snižující pH. Srovnání umožňují údaje v tabulce 4 uvedené níže, složení I (samotný lososí kalcitonin), tabulce 3, složení I (lososí kalcitonin a sloučenina snižující pH) a tabulce 4, složení II (lososí kalcitonin a prostředek podporující absorpci) s tabulkou 4, složení III (lososí kalcitonin, sloučenina snižující pH, a prostředek podporující absorpci).

Další rysy a výhody vynálezu budou zřejmější z následujícího podrobného popisu vynálezu.

Podrobný popis vynálezu

Tento vynález poskytuje pacientům, které je nutné’ léčit aktivními peptidovými sloučeninami, orální farmaceutické přípravky které je obsahují (ve vhodných dávkách), výhodně ale nikoliv nezbytně, ve formě tablet nebo tobolek velikosti obvyklé ve farmaceutickém průmyslu. Velikost dávky a četnost podávání jsou podrobněji diskutovány níže. Pacienti • '4 * * «« ···♦ • ♦ · • · ·· • ♦ · • · «««·»·« * · · · • · · · « ·«» ·· « * »· ·· pro které je vynález prospěšný zahrnují všechny pacienty trpící chorobami, které mají příznivou odezvu na zvýšené hladiny sloučeniny obsahující peptid. Například orální lososí kalcito.nin podle vynálezu lze použít k léčení pacientů trpících poruchami hladin vápníku nebo chorobami kosti.

Vynález lze využít například k léčení osteoporesy, Pagetovy choroby, hyperkalcinemie při. maligním procesu a podobně orálním kal citoninem výhodně lososím kalcitoninem.

Výhodnou aktivní složkou pro použití podle vynálezu je z více důvodů lososí kalcitonin. Například má výhody vůči 1 idskému kalcitóninu a to i tehdy, je-li použit jako léčivý prostředek k léčení lidí. Mezí výhody, které má použití lososího kalcitoninu místo lidského kalcitonínu při léčení osteoporesy lidí patří zvýšená účinnost, analgesie a vyšší poločas. Lososí kalcitonin je při léčení účinnější než přirozený lidský kalcitonin, protože se používá menších dávek než jsou potřebné při léčení lidským kalcitoninem. Lidský a lososí kalcitonin jsou .výrazné nehomologní, v aminokyselinových sekvencích těchto dvou kalcítoninů je jen 50% shoda.

Autoři vynálezu zjistili, že lososí kalcitonin má neočekávaně vyssokou biologickou dostupnost při orálním podání podle vynálezu než by se pří jeho molekulové hmotnosti předpokládalo. Autoři vynálezu ve vlastních srovnávacích studiích zjistili, že v orálním přípravku podle vynálezu_ biologická dostupnost lososího kalcitoninu výrazně převyšuje dostupnost parathyroidního hormonu, peptidu o srovnatelné molekulové hmotnosti (34 aminokyselin v PTH ve srovnání s 32 v sCT) .

Bez ohledu na teoretickou návaznost se předpokládá, že farmaceutický přípravek podle vynálezu překonává sérii různých • ••Φ φ

*φ·* ··· • φ φ » » φ « · • * φ • φ

a nesouvisejících přirozených bariér biologické dostupnosti. Různé složky těchto farmaceutických přípravků působí na překonání těchto různých bariér mechanismy vhodnými pro každou z nich za výsledných sinergistických účinků na biologickou dostupnost aktivní peptidové složky. Jak je uvedeno níže, fyzikální a chemické vlastnosti přirozené pro lososí kalcitonín a a další peptidy činí určité prostředky podporující absorpci účinnějšími pro zvýšení biologické dostupnosti než prostředky jiné.

Aktivní, peptidovou sloučeninu je možné podávat orálně. Podle vynálezu je proteolytická degradace peptidu žaludečními proteasami (většina z nich je aktivní v kyselé oblasti pH) a střevními, nebo pankreatickými proteasami (většina z nich je aktivních v neutrální až alkalické oblasti pH) snížená.

Průchod aktivní peptidové složky střevní epitheliální barierou je usnadněn solubi1 izačními podpůrnými prostředky.

Opět bez vazby na teoretický výklad, ukazuje se, že při použití způsobu podle vynálezu je peptid transportován žaludkem za ochrany vhodným acidorezistentním chránícím prostředkem v podstatě zabraňujícím kontaktu mezi lososím kalci toni není nebo jiným aktivním peptidem a každou proteasou schopnou peptid degradovat. Jakmile farmaceutický přípravek podle vynálezu projde žaludkem a dostane se do oblasti střeva, _kde_.převl.ádá alkalická-až neut-rá-lní oblast hodnot pil', a 'kde.....

proteasy mají optimální hodnoty pH v alkalické až neutrální oblasti, enterosolventní potah nebo jiný prostředek umožní uvolnění peptidu a kyseliny (ve vzájemné těsné souvislosti).

Předpokládá se, že kyselina sníží lokální pH ve střevě (v místě uvolnění aktivní složky) na hladiny pod optimálním rozmezí pro mnoho střevních proteas. Toto snížení. pH sníží • *

A A • A

A A A Α·Α • A A

A A Α·

A A ♦ A

AA ··

A A A A A A

AAA AAA proteo1ytickou aktivitu střevních proteas a tak umožní ochranu peptidu před možnou degradací. Aktivita těchto proteas je snížena účinkem přechodně kyselého prostředí podle vynálezu. Výhodné je, aby bylo k dispozici dostatečné množství kyseliny, tak aby lokální střevní hodnota pH se přechodně snížila na 5,5 nebo níže, výhodně na 4,7 a nejvýhodněji na 3,5 nebo níže. Potřebné množství kyseliny se indikuje zkouškou s hydrogenuhliěi taném sodným uvedeným níže ( v kapitole označené prostředek pro snížení pH). Výhodně stavy snížené hodnoty střevního pH přetrvávají časové období které je dostatečné k ochráně peptidového prostředku před pro t eo 1 y t i ckou degradací, dokud alespoň podíl peptidového prostředku nemá možnost proniknout střevní stěnou do krevního oběhu. Pro lososí kalcitonin byly experimentálně stanoveny hodnoty 'í'_may. 5-15 minut krevních hladin lososího kalcitoninu při injekční aplikaci aktivních složek přímo do duodena, kyčelníku nebo tlustého střeva. Prostředky podporující absorpci podle vynálezu synerg i s t i ck.y podporují absorpci peptidu do krve za trvání snížené proteolytické aktivity.

Mechanismus, o kterém se předpokládá že jím lze dovršit zvýšenou biologickou dostupnost jako cíl vynálezu, lze podpořit tak, že aktivní složky farmaceutického přípravku se uvolňují pokud možno současně. Z tohoto důvodu je výhodné udržovat objem.enterosolventního potahu tak nízký, jak je možné Tpři··· současném zaj i-štění- och-ra-ny- před -ž-a-l-udečn-í-mi < - -· proteasami. Tak se dosáhne menší pravděpodobnosti interference enterosolventního potahu s uvolňováním peptidu nebo s uvolňováním ostatních složek v čase těsně souvisejícím s uvolňováním peptidu. Ěnterosolventní potah má obvykle činit méně než 30 % hmotnosti zbytku farmaceutického přípravku (t.j. ostatních složek přípravku mimo enteroso1ventní potah).

Výhodně je to méně než 20 % a ještě výhodněji tvoří « * · ·* · • · · ·» ·♦« enterosolventní potah 10 % až 20 % hmotnosti nepotažených složek.

Prostředek podporující absorpci, který může být solubi1 izační podporující prostředek a/nebo transportní podporující prostředek (jak bude podrobněji uvedeno níže) podporuje transport peptidového prostředku ze střeva do krve, a může podpořit tento proces tak, aby lépe probíhal během časového období se sníženým pH ve střevě a sníženou proteolytickou aktivitou ve střevě. Mnoho povrchově aktivních prostředků může působit jak. jako solubi1 izační podporující prostředky tak jako transportní (vychytávací) podporující prostředky. Opět bez vazby na teorii, předpokládá se, že zvýšení rozpustnosti poskytuje (!) současnější uvolnění aktivních složek podle vynálezu do vodné fáze ve střevě, (2) lepší rozpustnost peptidu v této fázi a jeho transport, pres slizníční vrstvu podél střevních stěn. Jakmile se peptidová aktivní složka dostane k střevním stěnám, vychytávací podporující prostředek umožní lepší transport kartáčkovým lemem střevní sliznice do krve bud transoe I li 1 árním nebo paracelulárním transportem. Jak je uvedeno podrobněji níže, mnoho výhodných sloučenin umožňuje obě uvedené funkce. V těchto případech, výhodná provedení, která využívají obou těchto funkcí, lze realizovat přídavkem pouze jedné další sloučeniny do farmaceutického přípravku. V ostatních provedeních, mohou tyto dvě funkce zajistit dva samostatné prostředky podporující absorpci.

Každý z výhodných přídavných složek farmaceutického přípravku podle vynálezu je samostatně diskutován níže.

Lze použít kombinace více prostředků snižujících pH, nebo více podporujících prostředků rovněž jako je možné použití jen jednoho prostředku snižujícího pH a/nebo jednoho :4 sou • · « ·· · · · • · « · · · • · · · · · * · · * · • · · · «·««··· ·· * podporujícího prostředku. Některé výhodné kombinace rovněž uvedeny níže.

Aktivní peptidové složky

Aktivní peptidové složky, které lze úspěšně podávat způsobem podle vynálezu- zahrnují každý terapeutický prostředek který je fyziologicky aktivní, obsahuje více aminokyselin a ve své molekulové struktuře obsahuje nejméně jednu peptidovou vazbu. Způsob podle vynálezu několika mechanismy potlačuje degradaci aktivních složek proteasou, která jinak má sklon štěpit jednu nebo více peptidových vazeb účinné složky. Tato molekulová struktura může dále zahrnovat další substituenty nebo modifikace. Například lososí kalcitonin, výhodný aktivní peptidový prostředek pro použití podle vynálezu, je amidován na C-terminalu. Jak syntetické tak přirozené peptidy lze podávat orálním způsobem podle vynálezu.

Aktivní peptidové sloučeniny podle vynálezu zahrnují, ale nejsou omezeny pouze na ně, insulin, vasopresin, a kalcitonin (včetně, ale neomezeného pouze na něj, výhodného lososího kalcitoninu a rovněž dalších kalcitoninů). Další příklady zahrnuj í kalci tóninu druhově příbuzný peptid, parathyroidní hormon, faktor uvolňující luteinisační hormon, erythropoietin, aktivátory tkáňového plasminogenu, lidský růstový hormon, _adre.no.kor.t.i.k.o.tro.pi.n-,.._rúzné-Í-n-ter 1-euk- i ny-,......enkef-a-1-in—a—podobně-·.—

V oboru je známo ještě mnoho dalších. Předpokládá se, že každou léčivou sloučeninu obsahující peptidové vazby, které by se mohly v prostředí gástrointest iná1 ní ho traktu štěpit, bude prospěšné podávat orálně podle vynálezu, protože způsob podle vynálezu takové štěpení redukuje.

Při použití lososího kalcitoninu výhodně tvoří tato

t 4 4 4 4

4

4 4 4 ·

•444 444 složka 0,02 až 0,2 procent hmotnostních vzhledem k celkové hmotnosti farmaceutického přípravku (bez enterosolventního potahu). Lososí kalcitonin je obchodně dostupný (například od BACHEM, Torrence, Kalifornie). Alternativně je možné ho syntetizovat známými způsoby, z nichž některé jsou stručně uvedeny níže. Další aktivní peptidové prostředky mohou být obsaženy ve vyšších nebo v nižších koncentracích v závislosti na požadovaných cílených koncentracích v krvi a jejich biologické dostupnosti v orálním systému podávání podle vynálezu (několik z nich je uvedeno v tabulce 8).

Prekurzory lososího kalcitoninu lze připravit bud chemickými nebo rekombinantními syntetickými způsoby, které jsou v oboru známé. O rekombinantním způsobu se uvádí že je z hlediska vynaložených nákladů výhodnější. Prekurzory dalších ámidovaných aktivních peptidových prostředků lze připravit podobným způsobem. Prekurzory se převádějí na aktivní lososí kalcitonin amidačními reakcemi v oboru rovněž známými. Enzymatická amidace je uvedena například v U.S.Patentu 4,708,934 a v European Patent Publications 0 308 067 a 0 382 403. Rekonibinantní způsob přípravy je výhodný jak pro přípravu prekurzoru tak pro enzymatickou katalýzu konverze prekurzoru na lososí kalcitonin. Tato rekombinantní příprava je popsána v Biotechnology, Vol.11 ( 1993) 64-70, a v této práci je rovněž popsána konverze prekurzoru na amidovaný produkt... Uvedený . rekombi n.an.tní produkt.je .totožný, s přirozeným .... lososím kalcitoninem a s lososím kalcitoninem připraveným chemickými způsoby syntézy v roztoku a v pevné fázi.

Přípravu výhodného rekombinantního lososího kalcitoninu (rsCT) lze. provést například přes glycinem-prodloužený prekurzor lososího kalcitoninu v E.coli jako rozpustného fúzního proteinu s g1utathíon-S-transferasou. Tento glycin• φ φ φφ φ ► · · * » · · · • Φ · · · · φ Φ ·« *· totožnou s • φ · ♦ · ·♦ φ · φ φ φ φ φ φ φ · · prodloužený prekurzor má molekulovou strukturu aktivním lososím kalcitoninem s výjimkou C-terminalu (kde lososí kalcitonin je zakončen -pro-NH2, zatímco prekurzor je ukončen -pro-gly). Konverzi prekurzorů na lososí kalcitonin katalýzu je α-amidační. enzym uváděný ve výše uvedených publikacích. Amidační enzym je výhodně enzym připravený rekombinantnim způsobem, například v ovariálních buňkách čínského křečka (CHQ) jak je popsáno v práci zveřejněné v Bi otechno1ogy citované výše. Jiné prekurzory jiných amidovaných peptidú lze připravit podobným způsobem. Peptidy, u kterých není amidace nebo zavádění dalších funkčních skupin zapotřebí, lze také připravit podobným způsobem. Další aktivní peptidové prostředky jsou obchodně dostupné nebo je lze připravit způsobu v oboru známými.

Prostředek snižující pH

Celkové množství sloučeniny snižující pil, které je třeba podat současně s každou dávkou podávaného lososího kalcitóninu je výhodně množství, které při uvolnění ve střevě postačuje k ke snížení lokálního pH ve střevě významně pod optimální pH pro proteasy vyskytující se ve střevě. Potřebné množství se mění v závislosti na několika faktorech, které zahrnují použitý prostředek snižující pH (viz níže) a ekvivalentní množství protonů poskytnutých daným prostředkem Sni žu j í cím ,pH. V praktickém provedení se množství potřebné .k .za j.i š.tění. dobré biologické dostupnosti stanoví jako množství., které když se přidá k 10 ml roztoku 0,1 rn hydrogenuhl i č i tanu sodného sníží pH tohoto roztoku na hodnotu nepřevyšující 5,5, a výhodně nepřevyšující 4,7, nejvýhodněji nepřevyšující 3,5. V některých provedeních lze použít tolik kyseliny, kolik je třeba pro snížení pH ve výše uvedené zkoušce na 2,8. Výhodně se ve farmaceutickém přípravku podle vynálezu použije nejméně 300 mg φφ φφφφ φ· • Φφφ τ’ ·.

φφφφ φφφ φφφ φ φ • φ φφ φφ prostředku snižujícího pil a ještě výhodněji sc použije nejméně 400 mg prostředku snižujícího pil. údaje ve výše uvedených výhodných provedeních jsou vztaženy na celkovou hmotnost všech prostředků snižujících pH, protože je možné použít kombinaci dvou nebo více takových prostředků. Orální přípravek by neměl obsahovat podíl nějaké baze, která by při současném uvolnění s prostředkem snižujícím pH zabraňovala poklesu pH na 5,5 nebo níže podle výše uvedené zkoušky s hydrogenuhli či taném sodným.

Prostředkem snižujícím pH podle vynálezu může být každá farmaceuticky přijatelná sloučenina která nemá toxické účinky v gastrointestinálním traktu a která je schopná bud předávat vodíkové ionty (klasická kyselina) nebo indukovat vyšší obsah vodíkových iontů z okolního prostředí. Může se také jednat o kombinaci obou takovýchto sloučenin. Výhodné je, aby nejméně jeden prostředek snižující pH neměl hodnotu pKa vyšší než 4,2 a výhodně nejvýše 3,0. Také je výhodné, aby prostředek snižující pH měl rozpustnost ve vodě nejméně 30 gramů ve 1.00 ml vody při teplotě místnosti.

Příklady sloučenin které indukují vyšší obsah vodíkových iontů zahrnují chlorid hlinitý a chlorid zinečnatý. Farmaceuticky přijatelné klasické kyseliny zahrnují ale nejsou omezeny jen na ně, soli. aminokyselin s kyselinami (například hydrochloridy aminokyselin) nebo jejich deriváty. Příklady těchto· solí s kyseT-inami- -za-hrnuj í^_~kyse'l'inu' ace'ty'l'gl'útáfhovoú', alanin, arginin, asparigin, kyselinu asparagovou, betain, karnitin, karnosin, citrulin, kreatin, kyselinu glutamovou , glycin, histidin, hydroxylysi η, hydroxypro1 i η, hypotaurin, isoleucin, leuein, lysin, methylhistidin, norleucin, ornithin, fenylalanin, methylhistidin, norleucin, ornithin, fenylalanin, prolin, sarkosin, serin, taurin, threonin, tryptofen, tyrosin a valin.

*« ··

Φ · · · • · φ Φ • φφφ φφφ φ · φφ ·· φφ ···φ ·· * φ φ φ · φ · · φφφφ φ · * • φ · · ♦ · φ φφφ· φφφφ φφφ ·» ·« ·

Další příklady sloučenin snižujících ρΉ zahrnují karboxylové kyseliny jako jsou kyselina acety 1salicy1ová, octová, askorbová, citrónová, fumarová, glukuronová, glutarová, glycerová, gl.ykokolová , glyoxylová, isocitronová , isovalerová, mléčná, maleinová, oxaloctová, oxaljantarová, propionová, pyrohroznová, jantarová, vinná, valerová, a podobné,

Další vhodné prostředky snižující pH, které se v oboru obvykle neoznačují jako kyseliny, ale které však mohou být vhodné ve způsobu podle vynálezu jsou fosforečnanové estery (například 1,6-difosforečnan fruktosy, 1,6-difosforečnan glukosy, kyselina glycerofosforečná a kyselina

g] yceropyrofosfórečná) . Ke snižování pil lze také použí t CARBOPOL^R (chráněný název f. BF Goodrich) a polymery jako je polykarbof i 1.

Lze použít i jakoukoliv kombinaci prostředků snižujících pH, kterou se ve výše uvedené zkoušce s hydrogenuhliči taném sodným docílí požadované hodnoty pH nejvýše 5,5. Podle jednoho výhodného provedení, se jako nejméně jedné ze složek snižujících pH ve farmaceutickém přípravku používá kyseliny vybrané ze skupiny zahrnující, kyselinu citrónovou, kyselinu vinnou a sůl kyseliny s aminokyselinou.

______ Jes 11 i že_ akt i _v n í m_p.ept.ido.y.ým..p.r.o.s.tř.ed.k.em._j.e.1.osos.í__________ kalcítonin, bylo ověřeno, že zvláště účinné jsou určité poměry prostředku snižujícího pH k lososímu kalcitoninu. Výhodné je, když hmotnostní poměr prostředku snižujícího pH k lososímu kalcitoninu převyšuje 200 : 1, výhodně 800 : 1 a nejvýhodněji 2000 ; 1.

Prostředek podporující absorpci it »«<· • Φ φ Φ * ·

Φ Φ · φφ· φφ· • · »··

Φ · ·*Φ Φ ΦΦΦ ·· < φ « · φ φ φ ··· Φ·Φ • φ · Φ·

Prostředky podporující absorpci jsou výhodně obsaženy v množství tvořícím 0,1 až 20 % hmotnostních vzhledem k celkové hmotnosti farmaceutického přípravku (mimo enterosolventní potah). Výhodné prostředky podporující absorpci jsou povrchově aktivní prostředky které mají účinky jak jako solubi1 izační podporující prostředky tak jako vychytávací podporující prostředky. Obecně vyjádřeno, solubi1 i začni podporující prostředky zlepšují schopnost složek podle vynálezu rozpustit se bud ve vodném prostředí, do kterého se nejprve uvolňují, ’ nebo do lipofilního prostředí slizniční vrstvy podél střevních stěn, nebo v obojím prostředí. Transportní (vychytávací.) podporující prostředky (které jsou často ty stejné povrchově aktivní prostředky které se používají jako solubi1izační podporující prostředky) jsou ty prostředky, které usnadňují průchod peptidových prostředků střevní stěnou.

V rozsahu vynálezu rovněž je, že jeden nebo více prostředků podporujích absorpci může mít pouze jednu z uvedených funkcí (například solubi1izační), nebo jeden nebo více prostředků muže mít pouze funkci jinou (například vychytávací). Také je možné použít směs několika sloučenin z nichž některé poskytují zlepšenou rozpustnost, a některé z nich poskytují zlepšené vychytávání a/nebo působí obojím způsobem. Bez ohledu na teoretické zdůvodnění se předpokládá ______ ______ž.e. vychytávací podporuj-ΐεί -p-ros-tředky-mohou·· působit· formou.......

(!) zvýšeného narušení hydrofobní oblasti okolo vnějšího povrchu membrán střevních buněk, které umožní zvýšený intracelulární transport; nebo (2) formou výluhu membránových proteinů s následným zvýšeným transcelulárním transportem; nebo (3) rozšířením poloměru pórů mezi buňkami s následným zvýšeným paracelulárním transportem.

• · φφ φ φ« φ φ* φ φ » «φφφ · φ φφφ φ · · ···«« φφ

Ο povrchově aktivních prostředcích se předpokládá, že jsou vhodné jak jako solubilizační prostředky tak jako vychytávaní podporující prostředky. Například detergenty jsou vhodné (I) pro rychlé rozpuštění uvedených složek do vodného prostředí kam jsou nejprve uvolněny, (2) pro zvýšení 1 ipofilnosti složek podle vynálezu, zejména aktivní peptidové složky a tak usnadnění přechodu této složky střevní sliznicí, (3) pro zvýšení schopnosti obvykle polárního „ aktivního peptidového prostředku, pro proniknutí epitheliální bariérou kartáčkového lemu střevní sliznice; a (4) pro zvýšení íi transcelulárního a paracelulárního transportu jak je uvedeno výše .

Při použití povrchově aktivních prostředků jako prostředků podporujících absorpci je výhodné, aby tyto prostředky byly ve formě sypkých prášků pro usnadnění míšení a rozplnéní do tobolek, při výrobním postupu. Díky charakteristickým vlastnostem lososího kalcitoninu a dalších peptidů (například jejích isoelektrickému bodu, molekulové hmotnosti, skladbě aminokyselin atd.) pouze některé povrchově aktivní prostředky mají nejlepší interakci s některými peptidy. Ve skutečnosti, některé z nich mohou interagovat nežádoucím způsobem s obsaženými podíly lososího kalcitoninu, bránit jeho absorpci a nežádoucím způsobem ovlivňovat jeho biologickou dostupnost, Při zkouškách zvýšit biologickou dostupnost lososího kalcitoninu nebo dalších peptidů je výhodné, aby použitý povrchově aktivní prostředek, jako prostředek podporujícicí absorpci, byl vybrán ze skupiny zahrnující (i.) aniontové aktivní povrchově aktivní prostředky na bázi derivátů cholesterolu (například žlučové kyseliny), (ii) kationtové aktivní, povrchově aktivní prostředky (například acylkarnitiny, fosfolipidy a podobně), (i i i) neiontogenní povrchově aktivní prostředky a (iv) směsi φ

φ φ φφ Φφφ· • φ φφφ φφ φφ φφ φ φ φ φ φ φ •φφ φφφ φ * φ· φφ aniontové aktivních povrchově aktivních prostředků (zejména těch, které mají lineární uhlovodíkové řetězce) společně s prostředky neutralizujícími negativní náboj. Tyto neutrálizátory negativního náboje zahrnují, ale nejsou omezeny pouze na ně, aeylkarnitiny, cetylpyridiniumchlorid a podobné. Také je výhodné, aby prostředek podporující absorpci byl rozpustný v kyselé oblasti pH, zejména v rozmezí 3,0 až 5,0.

V jedné zvláště výhodné kombinaci s lososím kalcitoninem která še osvědčila, se používá směs kationtové aktivních povrchově aktivních prostředků s aniontové aktivními povrchové aktivními prostředky, které jsou deriváty cholesterolu, přičemž oba prostředky jsou rozpustné při hodnotách pH v kyše 1é oblast i .

Zvláště výhodná kombinace je kombinace žlučové kyseliny rozpustné v kyselém prostředí s kationtové aktivním povrchově aktivním prostředkem. Vhodnou kombinaci tvoří acylkarnitin a ester sacharosy. Jestliže se použije jeden prostředek podporující absorpci, je výhodné použití kationtové aktivního povrchově aktivního prostředku. Zvláště dobrými prostředky podporujícími absorpci jsou acylkarnitiny (například lauroy lkarni. t in) , fosfolipidy a žlučové kyseliny, zejména však acylkarnitin. V některých provedeních se také používají aniontové aktivní povrchově aktivní prostředky na bázi der i vátu cho_l es_t ero l_u_Cí 1 em._toho.t.o_. výb.ě.r_u_. výhodných.. ........

prostředků je zabránit interakcím s peptidovým prostředkem, které by vedly k interferenci s absorpcí peptidu do krve.

Pro snížení pravděpodobnosti vedlejších účinků je výhodné, aby při použití prostředků podporujících absorpci podle vynálezu byly tyto prostředky bud biologicky degradovatelné nebo reabsorbovate1 né (například biologicky *4 4 • 4 · ·*4 444

4* 4*44 *· · * * * *·· * · ♦ 4 4 4 · _A • · * · · · _β · ·*·· ·4* ·· ··· ·* * recyklovatelné sloučeniny jako jsou žlučové kyseliny, fosfolipidy, a/nebo acy 1 karni. t i ny) , výhodně jsou to sloučeniny biologicky degradovatelné. Předpokládá se, že acy1karnitiny jsou zvláště vhodné pro zvýšení paracelulárního transportu.

Při použití žlučové kyseliny (nebo jiného aniontové aktivního detergenčního prostředku bez lineárního uhlovodíkového řetězce) v kombinaci s kationtové aktivním detergenčním prostředkem se zlepšuje transport jak ke střevní stěně tak přes ní.

Výhodné prostředky podporující absorpci zahrnují: (a) salicylaty jako je salicylan sodný, 3-methoxysalicylat, 5-methoxysalicyTat, a homovanilat; (b) žlučové kyselina jako je kyselina taurocho 1 o.vá, taurodeoxycho 1 ová, deoxycho1ová, cholová, g 1 ykocho1ová, 1 ithocholová, chenodeoxycho1ová, ursodeoxycholová, ursocholová, dehydrocho1ová, fusidová a další; (c) heiontogenní povrchově aktivní prostředky jako jsou ethery polyoxyethylénu (například Brij 36T, Brij 52, Brij 56, Brij 76, Brij 96, Texaphor A6, Texaphor A14, Texaphor A60 a další), p-tere.okty1feny1 po 1yoxyěthy1eny (Triton X-45, Triton X-100, Triton X-114, Triton X-305 a další), nonylfenoxypolyoxyethyleny (například řada Igepal CO), estery polyoxyethy1ensorbitanu (například Tween-20, Tween-40 a další); aniontové aktivní povrchově aktivní prostředky' jako je dioktylsulfosukcinat sodný; (e) lyso-fosfolipidy jako je lysoleci thi_n 'a lysof osjfat_idy_l e thanol amin;._..(f.)...acy.l.ka.rni.t iny_,„._ acylcholiny a acylaminokyseliny jako je 1auřoy1karnitin, my r i š t ó.y 1 karni t i n, pa 1 mitoy1karnitin, 1 auroy 1 cho 1 i n, myristoylcholin, pa 1 mitoy1cho1 in, hexadecyllysin,

N-acýlfenylalanin, N-acylglycin a další; g) ve vodě rozpustné fosfolipidy jako je diheptanoyífosfatidylcholin, dioktyl.fosfatidyl.chol i n a další; (h) glyceridy se středním řetězcem které jsou směsí mono-, di- a triglyceridú mastných

·« 99 «9 ·99* » 9 · t « · · kyselin se střední délkou řetězce (kyselina kaprylová, kyselina kaprinová a kyselina laurová); (i) kyselinu ethylendiamintetraoctovou; (j) kationtové aktivní povrchově aktivní, prostředky jako je cetylpyr id iniurnchl orid; (k) deriváty polyethylenglýkolu s mastnými kyselinami jako je Labrasol, Labrafac a další; a alky 1 sacharidy jako je laurylmaltosid, 1auroy1sacbarosa, myristoy1sacharosa , pa líni toyl sacharosa a další.

V dalších výhodných provedeních, bez vazby na teoretického objasnění, se docílí zvýšení rozpustnosti pomocí kationtových iontoměničú dalším možným mechanismem. Zejména tak lze zabránit navázání lososího kalcitóninu nebo jiných peptidových aktivních prostředků na síiznici. Výhodné kationtové iontoměničové prostředky zahrnují pro tam inch1orid nebo nějaký jiný polykat iont

Další případné přísady

Výhodné je oddělit prostředek snižující pH od acidorezistentního chránícího prostředku ve vodě rozpustnou bariérou. V některých příkladech, které jsou uvedeny níže, tuto bariéru tvoří obvyklá tobolka používaná ve farmacii. V oboru je známo více těchto ve vodě rozpustných bariér, které zahrnují, ale nejsou omezeny jen na ně, hydroxypropylmethylce lu losu. a. obvykl é želat.i.ny. používané., .ve... farmac.i i. ...... ... .

» » b

V některých výhodných provedeních se ke snížení nespecifické absorpce (například vazby peptidu na střevní slizniční bariéru) používá další peptid (jako je albumin, kasein, protein ze sojových bohů, jiný protein živočišného nebo rostlinného původu a další) čímž se sníží potřebná koncentrace, drahého aktivního peptidového.prostředku. Přídavek • 4

4 4

4»

10,0 % celkové •4 ·»#·

4 4 · 44 ·

• 4 4 tohoto peptidu je výhodně v množství od 1,0 do hmotnosti farmaceutického přípravku (mimo chránící prostředek). Výhodné je, aby tento druhý peptid nebyl fyziologicky aktivní a nejvýhodnějí to je peptid obsažený v potravinách jako je peptid ze sojových bobú nebo podobný.

Aniž se autoři váží teorií, tento druhý peptid může také zvyšovat biologickou dostupnost tak, že omezuje účinky proteasy kompeticí s aktivním peptidovým prostředkem v interakci s proteasou. Tento druhý peptid může také napomáhat průchodu aktivní sloučeniny játry.

Všechny farmaceutické přípravky podle vynálezu mohou případně obsahovat obvyklá farmaceutická ředidla, klouzadla, mazadla, želatinové tobolky, konzervační prostředky, harviva a podobně v obvyklých velikostech a množstvích.

Chránící prostředek

Vhodný je každý nosič nebo vehikulum které chrání lososí kalcitonin před účinky Žaludečních proteas a potom se rozpouští tak, že ostatní složky podle vynálezu se mohou uvolnit ve střevě. V oboru je známo mnoho takovýchto potahů, které je možné použít ve způsobu podle vynálezu. Jejich příklady zahrnují acetat-ftalat celulosy, sukcinat hydroxypropy1-me thy1ethy1celulosy, ftalat hydroxypropyl-methylcelulosy, karboxymethylethylcelulosu a kopolymer kyseliny methakrylové a 'methylmethakry1atu. V některých provedeních jsou aktivní peptid, prostředky podporující absorpci, ve formě solubi1 i začnich a/nebo vychytávacích podporujících prostedků, a sloučenina (sloučeniny) snižující pH, obsaženy v dostatečně viskozním chránícím sirupu umožňujícím chráněný průchod těchto složek žaludkem.

99*9 β · 9 • 9 ·

9 • * · · • · · · ·

9 9 «9 99 ·

9 9 9 « 9 9 9 •99 999 • 9 »9 ·9

Vhodné enterosolventní potahy pro ochranu peptidu před žaludečními proteasami lze aplikovat například na tobolky, které již byly naplněny ostatními složkami podle vynálezu.

V dalších provedeních se enterosolventní potah nanáší zevně na tabletu nebo na vnější povrch částic aktivních složek které se pak lisují do tabletové formy, nebo se rozplňují do tobolek, které jsou výhodně samy potaženy enterosolventním potahem.

Velmi žádoucí je, aby všechny složky podle vynálezu se z nosiče nebo z vehikula uvolnily současně a rozpustily se v prostředí střevní tekutiny současně, tak jak je to jen možné. Výhodné je, aby vehikulum nebo nosič uvolnily aktivní složky v tenkém střevě, kde je menší pravděpodobnost že vychytávaní podporující prostředky, které zvyšují transcelulární nebo paracelulární transport vyvolají nežádoucí vedlejší účinky než které by mohly vyvolat při uvolnění těchto stejných vychytávacích podporujících prostředků v tlustém střevě. Je však třeba zdůraznit že se předpokládá, že způsob podle vynálezu je stejně účinný v tlustém střevě tak jako v tenkém střevě. V oboru je známo více vehikul nebo nosičů, než které jsou uváděny výše. Žádoucí je (zejména z hlediska optimalizace současného uvolnění složek podle vynálezu) zachovat nízké množství enterosolventního potahu. Výhodně není přídavek tvořící enterosolventní potah větší než 30 % vzhledem k hmotnos.t.i. z.by.tku_f.a.r.maceut.i.ckého přípravku . (tento ...zby tek zahrnuje farmaceutický přípravek bez samotného enterosol ventn íbo potahu). Výhodněji tvoří, tento přídavek méně než 20 %, a zejména je v rozmezí od 12 % do 20 % hmotnostních vztažených na nepotažený přípravek. Enterosolventní potah má být dostatečný k tomu, aby zabránil rozrušení farmaceutického přípravku podle vynálezu v 0,1. N HC1 po dobu nejméně dvou hodin, a potom aby umožnil, úplné uvolnění všech · ·

Φ · ·*

složek farmaceutického přípravku během 1 zvýšení hodnoty pH na 6,3 v disolučním n za minutu.

Další výhodné podmínky

Výhodné je, když hmotnostní poměr prostředku (prostředku) snižujícího pH k prostředku (prostředkům) podporujícím absorpci je mezi 3 : 1 až 20 : l , výhodně 4 : 1 až 12 : ). a nejvýhodněji 5 : 1 až 10 : 1. Celková hmotnost všech prostředků snižujících pil a celková hmotnost všech prostředků podporujících absorpci v daném farmaceutickém přípravku se zahrnuje do výše uvedených výhodných poměrů. Například, jestliže farmaceutický přípravek obsahuje dva prostředky snižující pH a tři prostředky podporující absorpci, výše uvedené poměry se vypočtou z celkové spojené hmotnosti obou prostředků snižujících pH a z celkové spojené hmotnosti všech tří prostředků podporujících absorpci.

Výhodné je, když prostředek snižující pH, aktivní peptidová složka a prostředek podporující absorpci (jedna sloučenina nebo více sloučenin od každé skupiny), je stejnoměrně rozptýlena ve farmaceutickém přípravku. Podle jednoho provedemí, farmaceutický přípravek obsahuje granulát který obsahuje farmaceutické pojivo s aktivním peptidovým prostředkem, prostředkem' sni ž'trjí'C'ím 'pH' a prostředkem ......

podporujícím absorpci, které jsou stejnoměrně· rozptýleny v uvedeném pojivu. Výhodný granulát může také obsahovat kyselé jádro, obklopené stejnoměrnou vrstvou, organické kyseliny, vrstvu podporujícího prostředku a vrstvu peptidu, který je obklopen vnější vrstvou organické kyseliny. Granulát může být připraven z vodné směsi obsahující farmaceuticky vhodná pojivá jako je polyvinylpyrrolidon nebo hydroxypropyl tne thy 1* * · · v · ► » · *

Μ* · · celulosa, společně s prostředky snižujícími pH, prostředky podporujícími absorpci a aktivními peptidovými prostředky podle vynálezu.

Způsob výroby

Výhodný farmaceutický přípravek podle vynálezu je ve formě žel.atinové tobolky velikosti 00 naplněné 0,25 mg lososího kalcitoninu, 400 mg granulované kyseliny citrónové (dostupné například u Archer Daniels Midland Corp.), 50 mg kyseliny taurodeoxychol ové (dostupné u firmy SIGMA), 50 mg lauroylkarniti nu (SIGMA),

Všechny tyto složky jsou výhodně určeny pro případné plnění, do želatinové tobolky a výhodně jsou ve formě prášků, které lze vnést do mísícího zařízení v 1ibovovolném pořadí. Potom se mísící zařízení uveden v činnost na asi pět minut, dokud prášky se intenzivně nepromíchají. Potom se promísená směs prášku plní do větších dílů želatinových tobolek. Pak se připojí druhý díl a tobolka se spojí. Potom se 500 nebo více tobolek může vnést do potahovacího zařízení (například Vector LDCS 20/30 Laboratory Development Coating System, dostupném u Vector Corp., Marion, Iowa).

Enterosolventní potahovací roztok se připraví .následujícím způsobem. Naváží se 500 gramů EUDRAGITU L30 D~55 (kopolymer kyseliny methakrylové s methylesterem kyseliny“' methakrylové, enterosol ventní potah dostuný u’RĎHM Tech lne., Maidan, Mass.). Přidá se 411 gramů destilované vody, 15 gramů triethy1citratu a 38 g talku. Tato dávka potahu postačuje k potažení asi 500 tobolek velikosti 00.

Tobolky se zváží a umístí se do bubnu potahovacího • v · · · · · « » ·· ♦

* · zařízení. Zařízení se nastaví tak, aby otáčky (obsahujícího tobolky) byly 24-28 otáček/min. Teplota ve výstupu rozprašovače je výhodně asi 45 °C. Odsávací teploty jsou výhodně okolo 30 °C. Teplota nepotažené tobolky je výhodně asi 25 °C. Průtok vzduchu je asi 38 krychlových stop za minutu.

Do potahovacího roztoku připraveného jak je uvedeno výše se pák zavede trubice vedoucí ze zařízení. Uvede se v činnost čerpadlo zavádějící roztok do potahovacího zařízení.

Potahování pak. probíhá automaticky. Průběh lze v kterémkoli okamžiku zastavit aby se mohly tobolky zvážit, a tak stanovit zda je již naneseno dostačené množství potahu. Potahování obvykle probíhá 60 minut. Pak se čerpadlo vypne, zatímco ostatní funkce zařízení pracují asi pět minut, tak aby se tobolky lépe vysušily. Potom se vypne celé zařízení.

Potahování tobolek je tím skončeno, i když še doporučuje tobolky ještě asi dva dny sušit na vzduchu.

Protože způsobem podle vynálezu se dosáhne zvýšené biologické dostupnosti, je možné používat ve farmaceutických přípravcích podle vynálezu poměrně nízké koncentrace drahého lososího kal citoninu. Příklady specifického složení jsou uvedeny dále níže.

Použití při léčbě pacientů

Při volbě kalcitoninu jako aktivní složky pro 1éčeňT’.......

osteoporesy se doporučuje periodické podávání. Lososí kalcitonin se rychle metabolizuje s poločasem pouze 20-40 minut po subkutánním podání člověku. Nicméně jeho prospěšný účinek na osteoklasty je mnohem delší, a může trvat více než 24 hodin bez ohledu na rychlý pokles v krevní hladině. Po více než. dvou hodinách po injekčním podání -obvyklých dávek

• * · ·

4 · • 4 4 · · · • · • · «4 lososího kalcitoninu již v krvi nejsou zjištovány jeho detekovatelné hladiny. Proto je výhodné podávat jednu dávku asi po dobu 5 dní v týdnu. Subkutánní podávání lososího kalcitoninu (100 mezinárodních jednotek) často vede k píkové koncentraci séru asi 250 pikogramu na mililitr, Nasální podávání lososího kalcitoniu (200 mezinárodních jednotek) se ukázalo jako úspěšné při léčbě osteoporesy v píkových hladinách již tak nízkých jako je 10 pikogramu na mililitr. Někteří pacienti uvádějí určité gastrointestinální potíže při vysokých píkových hodnotách (například při hodnotách 200 pikogramu na mililitr nebo výše). Proto je výhodné, aby píková hodnota lososího kalcitoninu v séru byla mezi 10 a 150 pikograiny na mililitr, výhodněji v rozmezí 10 až 50 pikogratny na mililitr. Hladiny v séru lze stanovit, rad i o imunologickými způsoby stanovení známými v oboru. Ošetřující lékař může sledovat odezvu pacienta, hladiny lososího kalcitoninu v krvi, nebo průvodní markéry kostních chorob (jako je urinární. pyridinolin nebo deoxypyridinolin), zejména během počáteční fáze léčení (1-6 měsíců). Potom může lékař pozměnit dávkování tak, aby odpovídalo metabolismu daného pacienta a jeho odezvě.

Biologická dostupnost, kterou lze dosáhnout způsobem podle vynálezu, umožňuje orální transport lososího kalcitoninu do krve ve výše uvedených výhodných koncentračních hladinách za použití pouze 100-1000 mikrogramů lososího kalcitoninu v tobolce, výhodně 100-400 mrkrrigramů',' zejména-v--- rozmezí 100 až 200 mikrogramů.

Výhodné je při každé aplikaci použít jednu tobolku, protože z jedné tobolky se nejlépe současně uvolni polypeptid, prostředek snižující pil a prostředky podporující absorpci. To je vysoce žádoucí z toho důvodu, že schopnost

* · · · · · • * • · »· * · · φ* »·» kyseliny nejlépe snížit účinky nežádoucího proteolytického působení na polypeptid je, když se uvolní v době velmi blízké době uvolnění polypeptidu. Téměř současné uvolnění se docílí podáním všech složek podle vynálezu ve formě jedné pilulky nebo tobolky. Nicméně vynález také například zahrnuje rozdělení potřebného množství kyseliny .a prostředků podporujících absorpci do dvou nebo více tobolek, které je možné podávat společně tak, aby poskytly nezbytné množství uvedených přísad. Výraz farmaceutický přípravek použitý v tomto textu zahrnuje úplnou dávku vhodnou pro dané podávání člověku bez ohledu na to, jak je dělena pří v zásadě současném podávání.

Níže jsou uvedeny tabulky s výsledky znázorňujícími vliv určitých parametrů na biologickou dostupnost. S výjimkou studii na lidech, uvedených v tomto popise, množství přísad bylo měněno vzhledem k údajům uvedených v patentových nárocích pro srovnání účinků na lidi a na zvířata použitá v pokusech.

Příklady provedení vynálezu

Tabulka 1

Vliv pH pufru na absorpci lososího kácí tóninu, z duodena krys :

-slož-en.L·.,___. pH* píková hodnota absolutní kalcitóninu biologická v plasmě dostupnost ng/ml v procentech

1. ci. trat/kysel ina 5 0,4 citrónová (77 mg) kalci tónin (0., 1 mg)

0,02 ♦ ·¹

Tabulka 1 (pokračování) Vliv pH pufru na absorpci lososího kacitoninu krys :

složení	_PH*	píková hodnota kale i tóninu v plasmě ng/ml	a b s o 1 u t n í biologi cká dostupnost v procentech
Il.citrat/kyselina citrónová· (77 mg) kalcítonín (0,1 mg)	4	1,9	0, 10
III. ci trat/kyseli na citrónová (77 mg) kalcítonín (0,1 mg)	3	4,1	0,64
IV.ci trat/kyseli na citrónová (77 mg) kalci tónin (0,1 mg)	2	4,8	0,69

* pH pufru

Postup.

z clu od ona

•-r-l

- - Sam-i ce krys- W-i-s tar --(-250-275. .g..).....(n.=3 pro. ka.ždé „s.ložení) __s_e před zavedením kanyly do krční tepny anestezují ketamiriem a xylazinem. Kanyla- se opatří třícestným ventilem kterým se odebírají vzorky krve a nahrazují se solným roztokem. Provede se řez středem přes břišní dutinu a do odhaleného duodena se injekcí aplikuje 0,5 ml přípravku. Hodnota pH přípravku se upraví přídavkem měnících se množství stejných molárních koncentrací kyseliny citrónové a citranu sodného. Krev (0,5 ml) j

se odebírá před pokusem a 5, 15, 30, 60 a 120 minut po podání přípravku. Vzorky krve se odstřetfují 10 minut při 2600 g a získaný plasmový supernatant se uchovává při -20 °C. Koncentrace kalcitoninu v plasmě se stanoví kompetitivnim radioimunologickým stanovením. Absolutní biologická dostupnost (t.j. vzhledem intravenosní dávce kalcitoninu) se vypočte z ploch pod křivkou znázorňující koncentraci kalcitoninu v plasmě v závislosti na času.

Výsledky a diskuze

Při snížení hodnoty pH z 5 (složení I) na 4 (složení II) se absolutní biologická dostupnost zvýší 5 krát, z 0,02 % na 0,1 %. Při snížení na 3 (složení III) se absolutní biologická dostupnost dalších 6,4 krát; Při snížení na 2 je již zvýšení biologické dostupnosti kalcitoninu velmi nízké. Celkové zvýšení biologické dostupnosti kalcitoninu při snížení pH pufru z 5 na 3 je 32 násobné.

Tabulka 2

Vliv koncentrace kyseliny citrónové na biologickou dostupnost lososího kalcitoninu z duodena krys:

složení píková hodnota kalci tóninu v plasmě ng/ml absolutní bi ologická dostupnost v procentech'

I.kyselina citrónová 9,6 mg), 3,65 0,25 kyselina taurodeoxycbolová (5 mg), mannitol (22 mg), kalcitonin (0,1 mg) • «4 *

4 4 ·

999 ·»·

4

4 4 4

44......- ,.

♦ 4 · * ί ί • 444 · · · • · « 4 * · • . · ♦ » • » 4 4 1 · 4 4 4 ·*·

Tabulka 2 (pokračování)

složení	píková hodnota kalcitoninu v plasmě ng/ml	absolutní biologická dostupnost v procentech
Il.kyselina citrónová (48 mg), kyše 1. i na Taurodeoxycho1 ová (5 mg), mannitol (22 mg), kale i tónin (0,1 mg)	17,44	2,43

Postup.

Přípravky obsahující konstantní množství kyseliny taurodeoxy1ové a 2 různá množství kyseliny citrónové v celkovém objemu 0,5 ml se podávají do duodena anestezovaných krys způsobem popsaným pod tabulkou 1. Tyto přípravky obsahují manitol jako markér pro stanovení paracelulárního transportu. Vzorky krve se odebírají v různých časech a analyzují se na obsah kalcitoninu způsobem výše popsaným.

------Výsl-ed-ky-a-d-i-S-kuze--------------------- . _____________________

Biologická dostupnost lososího kalcitoninu podávaného v přítomnosti 9,6 mg kyseliny citrónové (I) je 0,25 %, zatímco v přítomnosti 48 mg kyseliny citrónové (II) je biologická dostupnost 2,43 %. V přítomnosti stejného množství kyseliny taurodeoxycholové se biologická dostupnost lososího kalcitoninu zvýší téměř 10 krát, přičemž množství kyseliny

A A ·

At ··· A A

AAAA

A A A * ♦ * * • AAAAA AA ··· «* ·· citrónové se zvýší pouze 5 krát.

Tabulka 3

Vliv podporujících prostředků v přítomnosti kyseliny
ci tronové	na absorpci lososího kalcitoninu z duodena krys:
složení	pí ková hodnota	abso.l utni
	kalcitoninu	b i o 1og i cká
	v plasmě	dos tupnost
	ng/ml	v procentech

I. kyselina citrónová (77 mg), 4,8 kalcitonin (0,1 mg)

II. kyselina citrónová (48 mg), 26,59 kyselina taurodeo.xychól ová (5 mg), kalcitonin (0,1 mg)

III. kyselina citrónová'(48 mg) 36,48 kyselina taurodeoxycholová (5 mg), cetylpyridíniumchlorid (5 mg), kalcitonin (0,1 mg)

IV. kyselina citrónová (48 mg), 15,50

Tween-20 (5 mg), 'k'al'C'rtOn-i-n-‘(-O;T-mg-)- - -· .....

* k

V. kyselina citrónová (48 mg), 38,93

15-ester-sacharosy (5 mg), manni to 1 (22 mg.) , kalcitonin (0,1 mg)

0,69

3,03

4,54

3, 10

5,83

	···· ·» • · · · ♦ 1 ·Μ · · * · l> · · « * · ·	·· « · * * » · · · · • · »«» ·** • · * A · » · · * ·
Tabulka 3 (pokračování) Vliv podporujících prostředků v přítomnosti, kyseliny citrónové na.absorpci lososího kalcitoninu z duodena krys:
složení	píková hodnota kalc i ton i nu v plasmě ng/ml	absolutní bi ologi cká dos tupnost v procentech
VI.kyselina citrónová (48 mg), chlorid 1auroy1karniti nu (5 mg), kalcitonin (0,1 mg)	38,89	4,53
VIT.kyselina citrónová (48 mg), diheptanoy 1, ř'osf at idy 1 chol i n (5 mg), kalcitonin (0,1 mg)	20,93	2,97

Pos tup.

Přípravky obsahující kyselinu citrónovou, kalcitonin a různé typy podporujících prostředků v celkovém objemu 0,5 mí se podávají do duodena anestezovaných krys způsobem popsaným pod tabulkou 1. Přípravek V obsahuje manitol jako markér pro stanovení paracelulárního transportu. Vzorky krve se odebírají v různých' ca š ech a a na 1 yzir-jí -se -na— o-bs.ah· -. ... kalcitoninu způsobem výše popsaným.

j| Výsledky a diskuze.

< V nepřítomnosti podporujícího prostředku je biologická dostupnost kalcitoninu 0,69 %. Včlenění ve vodě rozpustného fosfolipidu (složení Vil) zvýší biologickou dostupnost 4,3

Φ· * • φ φφ · φ φ φ φ · ♦ φ φ • « · » φ«φ • φ φ φ φφ «φφ φ» φφ násobně na 2,97 %. Nejúčinnějším podporujícím prostředkem je typ esteru cukru (složení V) se kterým je biologická dostupnost kalcitoninu 5,83 %. Použití směsi žlučové kyseliny a kationtové aktivního detergentů (složení III), neiontogenního detergentů (složení IV) a¹ acytkarnitinu (složení VI) vede ke středním hodnotám biologické dostupnosti kalcitoninu v rozmezí, od 3,03 % do 4,53 %. Rozdíly v biologických dostupnostech kalcitoninu v přítomnosti různých typů podporujících prostředků jsou menší ve srovnání s přípravkem obsahujícím pouze kyselinu citrónovou a žádný podporující prostředek.

Tabulka 4

VI i v l auroylkarnit inu v přítomnosti různých přísad na absorpci lososího kalcitoninu z duodena krys:

složení píková hodnota absolutní kalcitoninu biologická v plasmě dostupnost ng/ml v procentech

I.kalci tónin (l mg)

9,44

0,096

11.1auroy1karnitinchlorid 2,27 (5 mg), kalcitonin (0,1 mg)

0,17

III.1auroylkarni t i nchlořid 38,89 (5 mg), kyselina citrónová (48 mg), kalcitonin (0,1 mg)

IV. 1 auroy lkarn i t inchlor i d 27,72 (1 mg), kyselina citrónová (48 mg), kalcitonin (0,1 mg)

4,53

4,81

	...... • · · · : • · · * .... ··· ··	·» · · · « « · · · • · · · · ·· ·
Tabulka 4 (pokračování) Vliv 1auroy1 karniti nu v přítomnosti různých na absorpci lososího kalcitoninu z duodena krys:	přísad
složení	píková hodnota kale i t on i nu v plasmě ng/ml	absolutn í bi o 1og i cká dostupnost v procentech
V. 1auroy1 kární ti nch 1 orid (5 mg), diheptanoyl- fosfatidylcholin (5 mg), kyselina citrónová (48 mg), ka1ci tónin (0,1 mg)	44,89	6,45
VI.1auroylkarnitinchlorid hovězí sérový albumin (25 mg), kalcitonin (0,1 mg)	4,58	0,42

Pos tup.

Přípravky obsahující lauroylkarnitin, kalcitonin a různé další sloučeniny v celkovém objemu 0,5 ml se podávají do duodena anestezovaných krys způsobem popsaným pod tabulkou 1. Vzorky -krve- se--odebír-a jí-.-v. různých čase.ch a ..an.a.lyzu j í se _na obsah kalcitoninu způsobem popsaným výše.

Výsledky a diskuze.

U přípravků ve kterých není zahrnuta kyselina citrónová nebo nějaký podporující prostředek je absolutní biologická dostupnost 0,096 %. V přítomnosti 1auroy1karniti nebioridu • φ • ·*·

Φ·Φ··Μ « w - » » · * * • φ· Φ·· φ φ • φ ·· (přípravek II) se biologická dostupnost zvýší 1,8 krát na 0,17 %. Při zahrnutí kyseliny citrónové společně s

1auroylkarnitinem (složení III) se biologická dostupnost zvýší navíc 27 krát na 4,53 %. Při 5 násobném snížení množství 1auroy1 kárníti nu a kyseliny citrónové nikoliv (složení TV) se biologická distupnost lososího kalcitoninu významně nesnižuje. Zahrnutí 5 mg diheptanoy1 fosfát itdy1cboli nu do přípravku III poskytne přípravek V za mírně zvýšené biologické dostupnosti (1,4 krát). Výměna kyseliny citrónové za 25 mg hovězího sérového albuminu (složení III) snižuje biologickou dostupnost z 4,53 % (přípravek III) na 0-,42 %. Souhrn těchto údajů znázorňuje synergistický účinek mezi prostředkem snižujícím pil jako je kyselina citrónová a podporujícím prostředkem jako je lauroylkarnitin.

Tabulka 5

Vliv složení na absorpci lososího kalcitoninu z duodena

Ρ s ů;

složení	píková hodnota kal ci tóninu v plasmě ng/ml	absolutní biologická dostupnost v procentech
I.kalcítonin (25 mg)	1,15	0,015
II.kyselina citrónová (192 mg),	10,65	0,37

kalcítonin (10 mg)

III.kyselina citrónová (192 mg), 14,99 0,81 kyselina taurodeoxycho1ová (20 mg), kalcítonin (5 mg)

• · » * « · ·

Pos tup

Samcům psú beagle se chirurgicky implantují modifikované vaskulární podávači porty do duodena, i lea a tlustého střeva. Tělíska sept/zásobníkú těchto portů, se implantují pod kůží a použijí se jako míst pro podávání kalcitóninových přípravků. Před a po podání kalcitóninových přípravků psům při vědomí se porty promyjí. 2 ml přípravku bez kalcitoninu. Krev se odebírá pomocí angiokatetrů zavedených do končetinové žíly v čase t=30, 15 a 0 před podáním kalcitoninu a potom každých 15 minut po dobu 2 hodin. Vzorky krve se odstřecfují 10 minut při 2600 g a získaný plasmový supernantant se uchovává při -20 °C. Koncentrace kalcitoninu v plasmě se stanoví kompetitivním rádio imunologickým stanovením. Absolutní biologická dostupnost (t.j. vztažená na intraveriosní dávku kalcitoninu) se vypočte z ploch pod křivkou získané jako závislost koncentrace v plasmě na čase.

Výsledky a diskuze.

Absolutní biologická dostupnost kalcitoninu podávaného ve vodě (I) je 0,015 %. Přítomností 192 mg kyseliny citrónové (II) se zvýší biologická dostupnost kalcitoninu 25 krát. Zařazení 20 mg kyseliny taurodeoxycholové v přípravku (III) ..poskytne .další. 2 ,.2. ná.s.o.bn.é . zvýšení absolutní biologické dostupnosti na 0,81 %. Kombinace sloučeniny snižující pH, kyseliny citrónové a podporujícího prostředku, kyseliny . taurodeoxycholové, vede k celkovému 54 násobnému zvýšení absolutní biologické dostupnosti.

φφ ··*· » · · • *·* ·· *· • · φ • φ φ • φ · · φ ·· • φ ·· ··

Tabulka 6

Vliv dávkové formy a složení na absolutní biologickou dostupnost lososího kalcitoninu podávaného orálně psúm:

tobolka disoluce složení v HCl (min)	pí ková hodnota kalei tóninu v p1 asmě (ng/ml)	pí ková hodnota kalcitoninu v p1 asmě (min)	absolutní biologická dostupnos t (procenta)
T.škrob 10 kyselina c i tronová (100 mg), kyselina taurodeoxy- cholová (100	0,98	10-30	0,07

mg), kalcí tónin (10 mg)

II.želatina 30 kyselina 5,79 10-30 0,26 (100 mg) , kyselina taurodeoxy..... . ..c.hol.ová....(. 100. ... , . ......................

mg), kalei tónin (10 mg) • a a * « * *· ···» • * a ··· a · «Μ» ··· • ♦ · · » · · ·

Ml ·♦· « a aa ··

Tabulka 6 (pokračování)

tobolka disoluce složení	pí ková	pí ková	abso1 utni
v HCI		hodnota	hodnota	bi o 1og i cká
(min)		ka1ci to-	ka1c i to-	dos tupnost
		ni nu v	ni nu v	(procenta)
		plasmě	plasmě
		(ng/ml)	(min)
111.že 1at i - 30	kyselina	6,92	10-30	0,62
na	c i tronová (600 mg), kyselina taurod eoxy- cholová (80 mg) , kal c.i ton (5 mg)	i n
IV.želat i- >60	kyselina	7,79	90	1,48
na	(600 mg) , kyselina taurodeoxy-
	cholová (80
	mg) , kalcitonin
	(5 mg)

Po s tupý.

Škrobové a želatinové tobolky se naplní uvedenými

999« 99

9 9 »99

9 99 9 9 • 9 9 9 9

9 · * «9 9« 9 99 99 9 »» *

9 9 9 • 9 9 9 ·« 9 9 9·

9 • 9 9 9 přípravky a potahují se 60 minut v kotli pro potahování bud ftalatem hydroxypropylmethylcelulosy 50 (I, II, III) (s 1% přírůstkem hmotnosti) nebo Eudragitem L 30 D-55 (IV) ( s 10% přírůstkem hmotnosti). Stabilita tobolek v 0,1 N HC1 se stanoví v disolučni lázni s použitím způsobu s košíčky.

Každý typ uvedených tobolek se podá ústy nejméně dvěma psúm, odebírají se vzorky krve a analyzují se na obsah kalcitoninu jak je popsáno výše.

Výs1edky.

Biologická dostupnost 10 mg kalcitoninu smíšeného.se 100 mg kyseliny citrónové a 100 mg kyseliny taurodeoxycho1ové a podávané ve škrobové tobolce (I) je 0,07 %. Pokud se stejný přípravek podává psúm v želatinové tobolce (II), zvýší se biologická dostupnost lososího kalcitoninu na 0,26 %. Sestinásobné zvýšení množství kyseliny citrónové a 50% snížení množství kalcitoninu (III) vede k téměř 3 násobnému zvýšení biologické dostupnosti kalcitoninu.

Při výměně enterosol ventn.ího potahu tvořeného ftalatem hydroxypropylmethylcelulosy 50 za potah tvořený Eudragitem L 30 D-55, methakrylatovým polymerem, a při zachování složení (IV) se biologická dostupnost lososího kalcitoninu zvýší z 0,62 % na 1,48 %. Výměna enterosolventního potahu z potahu tvořeného ftalatem hydroxypropylmethylcelulosy za Eudragit 1 30 D-55 vede ke zvýšené stabilitě v 0,1 N HC1. Tato zvýšená stabilita má za následek, že píkové hladiny kalcitoninu še objevují v krvi psů později. 7 nestability tobolek I, II a III v HC1 vyplývá domněnka, že tyto tobolky se mohou potenciálně rozpadat v psích žaludcích, zatímco ze zlepšené stability tobolek IV vyplývá, že je v žaludcích psů zcela stabilní,· a rozpadá se až ve střevech psů. Z toho vyplývá, že je výhodné <« « ·» ·’ • · ·· · * · « · · · · · ·

A·· · · · ·«· ··· » « · · · · « · · ·· ·· zachovat určitý enterosolventní potah. Současně však příliš silný potah může brzdit uvolnění kalcitoninu po uvolnění dalších důležitých složek (například kyseliny a detergentů). Výhodně tento enterosolventní potah tvoří 5 až 1.5% přídavek k hmotnosti nepotaženého léčiva.

Tabulka 7

Farmakokinetika orálně podávaného kalcitoninu (10,5 mg) u idí.

čas (min)	subjekt 1 subjekt 2 subjekt kalcitonin v pl	3 subjekt 4 lasmě (pg/ml)	subj ékt	5 průměr
0	0	0	0	0	0	0
15	34	0	0	0	1	7
30	497	91	206	0	70	173
40	327	86	99	26	35	11. 4
50	173	114	78	1 17	26	102
60	87	106	40	1 80	20	87
70	72	108	64	63	35	68
80	27	85	54	30	25	44
90	43	102	46	19	14	45
100	40	89	28	17	28	41
.110 .	.... o. .,	.91.....	-.......1-6	.... 13	0 -	-. . 2-4-
120	⁴⁹	¹¹⁷	34	0	6	4.1
180	34	1.07	0	0	16	31
b i o 1 o	- 0,06	0,04	0,03	0,02	0,02	0,03

gická dostupnost (%)

Φ* φφφφ φ φ φ φ «φφ • · φ ·

ΙΗΐ φ«Φ «9 9 • Φ«Φ Φ·· ΦΦΦ ΦΦΦ «Φ Φ··

ΦΦ ΦΦ • Φ Φ · • Φ Φ ·

Φ«Φ ··

Φ Φ

ΦΦ ΦΦ

Postupy .

Škrobové tobolky se naplní 138 mg kyseliny citrónové, 105 mg kyseliny taurodeoxycho1ové a 10,5 mg lososího kalcitoninu. Tobolky se potahují v potahovacím kotli 20 minut s ftalatem hydroxypropylmethylcelnlosy a uchovávají se při 4 °C.

Subjektům se ráno na počátku studie na laěno podá 1 tobolka, kterou zapijí sklenicí, pomerančové šťávy. Vzorky krve se odeberou 15 minut před zahájením studie a potom ve vyznačených časech po podání tobolky s kalcitoninem. Koncentrace kalcitoninu v krvi se stanoví kompetitivním rad i o imuno1ogickým stanovením. Absolutní biologická dostupnost (t.j. relativní dostupnost vzhledem k intravenosně podané dávce kalcitoninu) se vypočte z ploch pod křivkou získanou jako závislost koncentrace kalcitoninu v plasmě na čase.

Výs1edky.

Při podání 10 miligramů samotného losoího kalcitoninu lidem, nejsou v séru zjišťovány žádné detekovatelné hladiny lososího kalcitoninu. Nicméně pokud se jednotlivým subjektům podá přípravek podle vynálezu, jak je uvedeno v tabulce 7, detekují se mezi 30 a 60 minutou po podání tobolky subjektům maximální hladiny kalcitoninu v krvi. Maximální koncentrace v krvi je mezi 70 až 497 pg/ml. Střední nejvyšší'koncentrace kalcitoninu-pě-ti· -jednot-t-iv-cú je--p-ři t=30 -mi -nu-t 173 pg/ml......

Absolutní biologická dostupnost se pohybuje od 0,02 do 0,06 % ¹ * * s průměrem souboru 0,03 %.

φφ φ 4 « 1 » · ♦ · 4 • * 4 '· ΦΦΦ ·· φ· φ·»· • φ • φφφ • Φ Φ» • · Φ Φ

Φ Φ Φ · • ΦΦΦ ΦΦ·

ΦΦ

Tabulka 8

Vliv koncentrace kyseliny citrónové a 1auroy1karniti nu na biologickou dostupnost vasopresinu, kalcitoninu a insulinu u krys:

pept i d složen í píková hodnota kalci tóninu v plasmě (ng/ml) absolutni bi olog i cká dostupnos t (procenta)

[Arg⁸]- vasopres i n	vasopresin (1 mg)	0,62	0,38
	vasopresin (0,1 mg), kyselina citrónová (48 mg), 1auroyl- karnitin (5 mg)	24,3	8,10
losos í kalcitonin	kalci tónin- (1 mg),	9,44	0,096
	kalcitonin (0,1 mg), kyselina citrónová (48 mg), lauroyl- karnitin (5 mg)	27,72	4,81
lidský	insu1in (1 mg),	0,56	0,07
insulin	kyselina citrónová (48 mg)
	insulin (1 mg) kyselina citrónová (48 mg), 1auroy1karni	18,3 tin (5 mg)	0,76

• » · · · ♦ • » * • · ···· ··· * · · · • · * · • · * · · · ·♦ *· rekombinantní

Postup.

Přípravky obsahující, bud [arg⁸ ]-vasopres i η , lososí kalcitonin nebo lidský insulin a uvedená množství adiditiv v celkovém objemu 0,5 ml se podávají do duodena anestezovaných krys způsobem popsaným pod tabulkou 1. Vzorky krve se odebírají v různých časech a analyzují se na obsah kalcitoninu způsobem výše popsaným.

Výsledky a diskuze.

Při absenci jakýchkoli aditiv je absolutní biologická dostupnost intraduodenálně podaného [arg⁸]-vasopresi nu 0,38 %. Po přídavku kyseliny citrónové a lauroylkarnitinu do přípravku se biologická dostupnost vasopresinu zvýší na 8,1

Biologická dostupnost kalcitoninu v nepřítomnosti kyseliny a podporujícího prostředku je 0,096 %, což je nižší než u vasopresinu bez přísad. Nicméně, jestliže se do přípravku včlení kyselina citrónová a 1 auroy 1 karu i. t in absolutní biologická se zvýší 50 krát ria 4,53 %. V nepřítomnosti kyseliny citrónové se lidský insulin dokonce nerozpouští ve vodě. V přítomnosti kyseliny Citrónové se veškerý peptid snadno rozpustí, a absolutní biologická dostupnost intraduodenálně podaného lidského insulinu je 0,07 %. V 'pf 1' ρád e“, ‘ ž' e ‘ d ů' př í' p'r ávku“ s’e'' zah ř ne' “la u'r o yT ka r n i t Ť n, ab soT u't ni biologická dostupnost insulinu se zvýší 10 krát. Z těchto výsledků vyplývá, že biologická dostupnost peptidů nezpracovaných s přísadami je nejvýše 0,38 %, a že včlenění organické kyseliny jako je kyselina citrónová a podporujícího prostředku jako je 1auroy1karnitin zvýší biologickou dostupnost až na 8,1 %, « Φ Μ«· ·♦·· «φ*

Tabulka 9

Farmakokínetika orálně podávaného kalcitoninu (0,82 mg) u idí.

čas	subjekt 1 s	subjekt 2	subjekt 3 subjekt 4 subjekt 5 průměr
(min)
		kalcitonin v plasmě (pg/ml)
0	0	0	0	0	0	0
15	21	0	0	0	0	4
30	0	0	0	0	0	0
40	0	0	0	0	0	0
50	0	0	0	28	0	6
60	0	0	'0	21 1	0	42
70	17	0	0	92	0	22
80	0	29	0	59	0	18
90	0	472	0		623	274
100	48	199	151	27	210	127
1 10	17	75	71	23	108	59
120	598	33	69	20	53	155
180	25	0	0	0	0	5
biol o	- 0,52	0,14	. 0,16	0,41	0,68	0,38
gi cká
dostupnost
<%)	........
	Postupy.
	Ze 1 a t i nové	tobo1ky	se naplní	473 mg kyseliny ci	t ronové,

mg kyseliny taurodeoxycholové,-75 mg lauroylkarnitinu a 0,82 mg lososího kalcitoninu. Tobolky se potahují v potahovacím kotli 60 minut s Eudragitem L30-D55 a uchovávají se ·· při 4 °C. Subjektům se ráno na počátku studie na lačno podá 1 tobolka, kterou zapijí, sklenicí pomerančové šťávy. Vzorky krve se odeberou 15 minut před zahájením studie a potom ve vyznačených časech po podání, tobolky s kalcitoninem.

Koncentrace kalcitonínu v krvi se stanoví kompeti tivním radioimunologickým stanovením. Absolutní biologická dostupnost (t.j. relativní dostupnost vzhledem k intravenosně podané dávce kalcitonínu) se vypočte z ploch pod křivkou získanou jako závislost koncentrace kalcitonínu v plasmě na čase.

Výs1edky.

Maximální hladiny kalcitoňinu se v krvi detekují mezi 50 až 180 minutou po podání tobolek subjektům. Maximální koncentrace v krví jsou mezi. 211 až 623 pg/ml . Střední maximální koncentrace (C_Oa_X) kalcitonínu pro 5 jednotlivých subjektů je 411 pg/ml., což je asi 5—10 krát více než je cílená terapeutická hladina v plasmě. Absolutní biologická dostupnost se pohybuje od 0,14 do 0,68 % s průměrem souboru 0,38 %. Z těchto výsledků vyplývá, že i když se obsah peptidu sníží asi 10 krát, biologická dostupnost sCT se ve srovnání s výsledky uvedenými v tabulce 7 zvýší 10 krát díky výměně škrobových tobolek za želatinové, použití Eudragitu L30-D55 místo ftalatu hydroxymethylce1ulosy jako enterosolventního potahu, zvýšení množství kyseliny citrónové v přípravku a -Zahrnutím lauroy-lkarni t inu-do skoženípřípravku.

Vynález je popsán pomocí jeho výhodných provedení, jak však ale bude pracovníků v oboru zřejmé, jsou možné mnohé variace a modifikace a další použití. Vynález není uvedeným specifickým popisem nijak omezen, je vymezen pouze přiloženými patentovými nároky.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický přípravek pro orální podání fyziologicky aktivního peptidového prostředku vyznačující se t í m , 2e zahrnuje:

(A) terapeuticky účinné množství uvedeného aktivního peptidu;

(B) nejméně jeden farmaceuticky přijatelný prostředek snižující pH;

(C) nejméně jeden prostředek podporující absorpci účinný podpořit biologickou dostupnost uvedeného aktivního pros tředku;

(D) acidorezistentηí chránící prostředek působící při transportu uvedeného farmaceutického přípravku žaludkem tak, že zabraňuje kontaktu mezí uvedeným aktivním peptidovým prostředkem a Žaludečními proteasami;

kde uvedený prostředek snižující pH je přítomen v uvedeném farmaceutickém přípravku v množství, které jestliže se uvedený přípravek přidá k deseti mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, je dostatečné ke snížení hodnoty' pH uvedeného roztoku ňa hodnotu která není vyšší než

5,5.
2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že uvedená sloučenina snižující pil je přítomna v takovém množství, které jestliže se uvedený přípravek přidá k deseti mililitrům 0,1 M vodného roztoku hyxdrogenuhliči tanu sodného, je dostatečné ke snížení « · • · · »· • · · v

··»· ··· hodnoty pil uvedeného roztoku na hodnotu která není vyšší než
3,5.

3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í ni , že uvedený chránící prostředek má hmotnost která netvoří více než 30 % hmotnosti zbytku uvedeného farmaceutického přípravku.
4. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že uvedený enterosolventní potah má hmotnost která netvoří, více než 20 % hmotnosti zbytku uvedeného farmaceutického přípravku.
5. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený enterosolventní potah má hmotnost která netvoří více než 10 % až

20 % hmotnosti zbytku uvedeného farmaceutického přípravku.
6. Farmaceutický přípravek podlé nároku 1, vyznačující se t í in , že uvedený chránící prostředek dostatečně zabraňuje porušení uvedeného farmaceutického přípravku v 0,1 N HCI po dobu nejméně dvou hodin, avšak umožňuje úplné uvolnění veškerého obsahu uvedeného farmaceutického přípravku během třiceti minut po zvýšení pH na 6,3, v disoluční lázni ve které se přípravek „________..nechá...ro-t.o.vat -rychlos-t-í-·· 100 -ot-á-ček -za mi-nu-tu-.- ----------------
7. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, uvedený prostředek podporující absorpci je povrchově aktivní prostředek.
8. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se t í m , že uvedený povrchově • I 4 · 4 4

4 4« «

4 ·

4 4 •

444 aktivní prostředek je absorbovatelný nebo biodegradovate1ný.
9. Farmaceutický přípravek, podle nároku 8, vyznačující se t í m , že uvedený povrchově aktivní prostředek je vybrán ze skupiny zahrnující acy1karnitiny, fosfolipidy a žlučové kyseliny.
10. Farmaceutický přípravek podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedený podporující prostředek je acy 1 kam i t i n .
11. Farmaceutický přípravek podle nároku 10, vyznačuj ící s e t ím , že dále obsahuje ester sacharosy.
12. Farmaceuticky přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že uvedený prostředek podporující absorpci je vybrán ze skupiny zahrnující (i) aniontové aktivní prostředek kterým je derivát cholesterolu, (ii) směs neutrál izátoru negativního náboje a aniontové aktivního povrchově aktivního prostředku, (iii) neiontogenní povrchově aktivní prostředky, a (iv) kationtové aktivní povrchově aktivní prostředky.
13. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, v y z n a č u j^_í c í se t í m , že uvedený prostředek podporující absorpci je vybrán ze skupiny zahrnující kationtové aktivní povrchově aktivní prostředek a aniontové aktivní aktivní povrchově aktivní prostředek kterým je derivát cholesterolu.
14. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í, m , že uvedený prostředek ·* »*♦* • · * • · * ««0 0 0 0 ·

......

* • · podporující absorpci zahrnuje nejméně dva prostředky podporující absorbci z nichž jeden kationtové aktivní povrchově aktivní prostředek a druhý z nich je aniontové aktivní aktivní, povrchově aktivní prostředek kterým je derivát cholesterolu.
15. Farmaceutický přípravek podle nároku 14, vyznačující se t í m , že uvedený aniontové aktivní povrchově aktivní prostředek je v kyselém prostředí rozpustná žlučová kyselina.
16. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že dále obsahuje podíl druhého peptidu, který účinně zvyšuje biologickou dostupnost uvedeného prvního aktivního peptidového prostředku.
17. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále zahrnuje ve vodě rozpustnou bariéru, která odděluje uvedený prostředek snižující pH od uvedeného chránícího prostředku.
18. Farmaceutický přípravek podle, nároku 1, vyznačující se t í m , že uvedený přípravek obsahuje nejméně jeden prostředek snižující pH který má hodnotu pKa, která není vyšší než 4,2.
19. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í rn , že nejméně jeden prostředek snižující pH má rozpustnost ve vodě při teplotě místnosti nejméně 30 g ve 100 mililitrech vody.
20. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že všechny složky jiné ·> · *· ·· • ·*· · · · · * · . · · · · , * * · ······ • · » · · · <*·· ··· ·· ··· ·· · než tvoří enterosolventní potah jsou stejnoměrně dispergovány.
21. Farmaceutický přípravek podle nároku 20, vyznačující se tím, že uvedený farmaceutický přípravek obsahuje granulát obsahující farmaceuticky vhodné pojivo ve kterém jsou stejnoměrně dipergovány uvedený prostředek pro snížení pH, uvedený prostředek podporující absorpci a uvedený aktivní peptidový prostředek.
22. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í ra , že uvedený přípravek je pevná dávková forma ve které hmotnostní poměr uvedeného prostředku pro snížení pil k uvedenému prostředku podporujícímu absorpci je v rozmezí 3 : 1 až 20 : 1.
23. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený přípravek, je pevná dávková forma ve které hmotnostní poměr uvedeného prostředku pro snížení pH k uvedenému prostředku podporujícímu absorpci je v rozmezí 5 : 1 až 10 : 1.
24. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený prostředek snižující pH je vybrán ze skupiny zahrnující kyselinu citrónovou, kyselinu vinnou a sul aminokyseliny s kyselinou.
25. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že uvedený prostředek snižující pH je obsažen v množství které není menší než 300 mi 1 i gramů.
26. Farmaceutický přípravek podle nároku 25, vyznačující, se t í m , že uvedený prostředek • A A A · Λ

A A

A A A · • A

AAA

A *· • AA Á A

A A · »

A A · ·** _a fe A A A * «··» <·· ·· »·· ’· snižující pH je obsažen v množství které není menší než 400 mi l i gramů.
27. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í in , že uvedeným peptidovým prostředkem je vasopresin.
28. Farmaceutický přípravek podle nároku I, vyznačující se t í m , že uvedeným peptidovým prostředkem je lososí kalcitonin.
29. Farmaceutický přípravek podle nároku l, vyznačující se t í m , že uvedeným peptidovým prostředkem je insulin.
30. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedeným chránícím prostředkem je viskozní chránící sirup.
31. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í in , že uvedený přípravek je přípravek pro orální podání lososího kalcitoninu a obsahuje:

(A) terapeuticky účinné^ množství uvedeného lososího ka 1 c i tóninu;

(B) nejméně jeden farmaceuticky přijatelný prostředek pro snížen í pH;

(C) nejméně jeden prostředek podporující absorpci který účinně podporuje biologickou dostupnost lososího kalcitoninu;

I · · * • · I ·«· ··« • « «· t· (D) enterosolventní potah;

kde uvedený prostředek snižující pH je obsažen v uvedeném farmaceutickém přípravku v takovém množství, se přidá k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného je dostatečné k tomu, aby pH uvedeného roztoku se snížilo na hodnotu která není vyšší než 5,5.
32. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pH k uvedenému lososímu kalcitoninu je nejméně 200 : 1.
33. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pil k uvedenému lososímu, kalcitoninu je nejméně 800 : 1,
34. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, vyznačující se t í m , že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pH k uvedenému lososímu kalcitoninu je nejméně 2000 ; 1.
35. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, v-y--z n a· č-u* j í-c-í- s~e --t í -m-·,- ·-ře-ne jméně jedenZ prostředků snižujících pil má hodnotu pKa která není vyšší než 4,2 a má rozpustnost ve vodě nejméně 30 gramů ve 100 ml vody při teplotě místnosti.
36. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, vyznačující se tím, uvedený prostředek snižující pH a enterosIoventní potah jsou odděleny ve vodě že když

Λ · φφ φφφφ

ΦΦΦΦ • · « * ΦΦΦΦ ···

ΦΦ ·’

Φ Φ · * • Φ Φ *

ΦΦΦ Φ« * « Φ • Φ ·· rozpustnou bariérou.
37. Farmaceutický přípravek podle nároku 31, vyznačující se t í ni , ?,e uvedený lososí kalcitonin, uvedený prostředek snižující pH a uvedený prostředek podporující absorpci jsou stejnoměrně dispergovány.
38. Farmaceutický přípravek podle nároku 28, vyznačující se tím,že hmotnost enterosolventního potahu není větší, než 30 % hmotnostních zbytku uvedeného farmaceutického přípravku bez uvedeného enterosolventního potahu.
39. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 pro orální podání lososího kalcitoninu v y z n a č u j í c í se t i m , že obsahu j e:

(A) terapeuticky účinné množství uvedeného lososího kalcitoninu;

(B) nejméně jeden farmaceuticky přijatelný prostředek snižující pil, jehož hodnota pKa není vyšší než 4,2 a jehož rozpustnost ve vodě není nižší než 30 gramu ve 100 ml vody při t e,p 1 ot ě místnosti.;

(C-) ne jméně j-eden.-pro s tředek podporuj í cí absorpci.,, k-terý účinně podporuje biologickou dostupnost lososího kalcitoninu;

(D) entero^pventní potah, jehož hmotnost je v rozmezí 10 % až 20 % hmotnosti zbytku uvedeného farmaceutického přípravku;

(E) ve vodě rozpustnou bariéru, která odděluje uvedený «φφφφ* φ» · • · φ φφφ* φ · * φ φ · · φ φφφφ · • φφφ* φφφφ φφφ · φ φ · ♦ » Φ · · ► φ φ · φφφ φφφ φφ φ* když prostředek snižující ρΗ od uvedeného enterosolventního potahu;

kde uvedený prostředek podporující pH je obsažen v uvedeném farmaceutickém přípravku v takovém množství, že se přípravek přidá k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného je dostatečné k tomu, aby se pH uvedeného roztoku snížilo na hodnotu která není vyšší než 5,5; a kde uvedený přípravek obsahuje granule obsahující farmaceuticky přijatelný nosič, ve kterém jsou uvedený lososí kalcítonin, uvedený prostředek snižující pH a uvedený prostředek podporující absorpci stejnoměrně rozptýleny.
40. Způsob zvýšení biologické dostupnosti terapeuticky aktivního peptidového prostředku podávaného orálně, vyznačující se tím, že uvedený způsob zahrnuje selektivní uvolňování uvedeného aktivního peptidového prostředku společně s nejméně jedním prostředkem snižujícím pH a nejméně jedním prostředkem podporujícím absorpci v pacientově střevě po předcházejícím průchodu peptidového aktivního prostředku, prostředku snižujícího pH a prostředku podporujícího absorpci pacientovými ústy a žaludkem za ochrany acidorezistentním chránícím prostředkem , který v podstatě zabraňuje~kontaktu'mezi -žaludečními.....proteasami a uvedeným peptidovým prostředkem;

kde uvedený prostředek snižující pil a další sloučeniny které se s ním uvolní ve střevě, je obsažen v takovém množství které po přídavku k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného je dostatečné k tomu, aby se pH uvedeného roztoku snížilo na hodnotu která není vyšší než

99 *··· β ·

Α· · ♦ * ·· « A · A · * ·

A A » · · *

A A A A ·

MM Ml ·* ··

A · »» ♦ 9 9 9

A · 9 ·

99· 999

9 »

A· ··

5,5.
41. Způsob podle nároku 40 vyznačující se tím, že uvedený prostředek: snižující pH je obsažen v takovém množství, Že přidají~li se všechny složky k 10 mililitrům 0,1 M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného tak je dostatečné k tornu, aby se pH uvedeného roztoku snížilo na hodnotu která není výš-ší než 3,5.
42. Způsob podle nároku 40 vyznačuj í c í se t í ra , ŽC uvedený chránící prostředek dostatečně zabraňuje uvolnění ostatních složek v 0,1 M HC1 po dobu nejméně dvou hodin, zatímco umožňuje úplné uvolnění všech složek během 30 minut po zvýšení hodnoty pH na 6,3 v dísolučním médiu ve kterém uvedený chránící prostředek společně s ostatními složkami rotuje rychlostí 100 otáček za minutu.
43. Způsob podle nároku 40 v y z- n a č u j í c í. se t í ni , že uvedený prostředek podporující absorpci je vybrán ze skupiny zahrnující kationtové aktivní povrchově aktivní prostředek a aniontové aktivní povrchově aktivní prostředek, kterým je derivát cholesterolu.
44. Způsob podle nároku 40 vyznačující se t í m , že uvedený prostředek snižující píí nemá hodnotu pKa v-y š-š- í—než 4-, 2 - a . j e-ho rozpus tno.s U.v.e. ..vodě . j e.. nej mé.ně._3_Q_g. _ve____

100 ml vody při teplotě místnosti.
45. Způsob podle nároku 40 vyznačující, se t í m , že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pH a uvedeného prostředku podporujícího absorpci je v rozmezí 3 : 1. až 20 : 1 .

v » ·

I · ♦ · ► » · · ··* ··· t í m

300 mg.

«* * ♦·* ·· * · · ♦ · • ·«· » · • · · · ·
46. Způsob podle nároku (vyznačující se že množství prostředku snižujícího pH není menší než
47. Způsob podle nároku 40 vyznačující s tím, uvedený aktivní peptidový prostředek je lososí kal.ci tónin.
48. Způsob podle nároku 47 vyznačující se t í m , že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pil k uvedenému lososímu kalcitoninu je nejméně 800 : 1.
49. Způsob podle nároku 47 v y z n a č u j íc í se t í m , že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pH k uvedenému lososímu kalcitoninu je nejméně 200 : 1.
50. Způsob podle nároku 47 vyznačující se tím, že hmotnostní poměr uvedeného prostředku snižujícího pH k uvedenému lososímu kalcitoninu je nejméně 2000 : 1.