CZ280540B6 - Tissue adhesive and process for preparing thereof - Google Patents
Tissue adhesive and process for preparing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CZ280540B6 CZ280540B6 CS922942A CS294292A CZ280540B6 CZ 280540 B6 CZ280540 B6 CZ 280540B6 CS 922942 A CS922942 A CS 922942A CS 294292 A CS294292 A CS 294292A CZ 280540 B6 CZ280540 B6 CZ 280540B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- component
- cryoprecipitate
- thrombin
- fibrinogen
- tissue adhesive
- Prior art date
Links
- 239000003106 tissue adhesive Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 12
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 11
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 35
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 claims description 6
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 claims description 5
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 abstract description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 108010027612 Batroxobin Proteins 0.000 description 21
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 20
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 12
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 12
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 12
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 8
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 7
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 5
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 4
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 3
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 108010000196 Factor XIIIa Proteins 0.000 description 2
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960002210 batroxobin Drugs 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 2
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 2
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- 229940075469 tissue adhesives Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 1
- JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(2s)-1-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-4-carboxy-1-[[2-[[2-[[2-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N 0.000 description 1
- ISAVYTVYFVQUDY-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(O)C=C1 ISAVYTVYFVQUDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 108010027490 Antagosan Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035049 Blood-Borne Infections Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 1
- 102400000525 Fibrinopeptide A Human genes 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 206010020524 Hydronephrosis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000000913 Kidney Calculi Diseases 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 1
- 229940122791 Plasmin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100038124 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 206010051077 Post procedural haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 101710181748 Venom protease Proteins 0.000 description 1
- 241000271897 Viperidae Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000504 antifibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical class NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000244 kidney pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 239000002806 plasmin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000007460 surgical drainage Methods 0.000 description 1
- 239000012209 synthetic fiber Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 229940108519 trasylol Drugs 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydroxy-[[phosphonatomethyl(phosphonomethyl)amino]methyl]phosphinate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)(=O)CN(CP(O)([O-])=O)CP([O-])([O-])=O SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/0005—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
- A61L2/0088—Liquid substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
- A61L24/106—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Thermotherapy And Cooling Therapy Devices (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Packages (AREA)
- Adhesives Or Adhesive Processes (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Vehicle Body Suspensions (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Předmětem řešení je tkáňové lepidlo, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje složku A obsahující kryoprecipitát úplné krve a vysoké množství inhibitoru proteasy, které odpovídá 3 000 až 5 000 jednotek KIU/ml aprotininu a složku B obsahující proteolytický enzym, který je schopen specificky štěpit fibrinogen přítomný ve složce A, za vzniku fibrinového polymeru. V dalším provedení je předmětem vynálezu tkáňové lepidlo, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje složku A obsahující kryoprecipitát úplné krve a složku B obsahující proteolytický enzym, který lze získat z hadího jedu, kterýžto enzym je schopen specificky štěpit fibrinogen přítomný ve složce A, za vzniku fibrinového polymeru.ŕThe object of the present invention is to provide a tissue adhesive comprising component A comprising whole blood cryoprecipitate and a high amount of protease inhibitor corresponding to 3,000 to 5,000 units of KIU / ml aprotinin and component B comprising a proteolytic enzyme capable of specifically cleaving fibrinogen present in component A to form a fibrin polymer. In another embodiment, the present invention provides a tissue adhesive comprising component A comprising whole blood cryoprecipitate and component B comprising a proteolytic enzyme obtainable from snake venom, which enzyme is capable of specifically cleaving fibrinogen present in component A under fibrin polymer formation
Description
Tkáňové lepidlo a způsob jeho výrobyTissue adhesive and process for its manufacture
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká dvousložkového tkáňového lepidla a způsobu jeho výroby.BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to a two-component tissue adhesive and to a process for its manufacture.
Dosavadní stav tachnikyBackground of the tachnice
Zlepšení lokální hemostázy na místě chirurgické rány pomocí plazmových proteinů je dobře známá myšlenka. Tak například pro hemostázu při operacích mozku se používá kousků fibrinu. Krevní plazmy a thrombinu se používalo pro výrobu fibrinového filmu pro zakrytí chriurgických ran. V posledních 20 letech se vyskytlo velké množství publikací, popisujících použití tkáňového lepidla, fibrinového adheziva nebo fibrinového těsnicího prostředku při většině chirurgických disciplin. V posledních 10 letech se v Evropě v širokém rozsahu používá jako těchto lepidel obchodné dostupných přípravků. Taková lepidla se skládají ze dvou složek, při jejichž smísení dojde ke vzniku kousku sraženiny, tzv. thrombu. První složkou je koncentrát fibrinogenu. Tento koncentrát také obsahuje fibronektin a faktor XIII, které jsou důležité pro stabilizaci a pevnost thrombu. Druhou složkou je thrombin, účinný enzym, konvertující fibrinogen, t.j. poslední složku normálního koagulačniho systému na fibrinový thromb. Tento postup obchází většinu stupňů normální koagulace a napodobuje její poslední fázi. Někteří výrobci přidávají plasminogen, což je enzym, který způsobuje lysi thrombu po určité době, zatímco jiní výrobci přidávají aprotinin, což je inhibitor proteas, za účelem zabránění lyse thrombu.The improvement of local hemostasis at the site of a surgical wound by plasma proteins is a well-known idea. For example, fragments of fibrin are used for hemostasis in brain surgery. Blood plasma and thrombin were used to produce fibrin film to cover chriurgical wounds. In the last 20 years, there have been a number of publications describing the use of tissue glue, fibrin adhesive or fibrin sealant in most surgical disciplines. Over the last 10 years, commercially available formulations have been widely used in Europe as these adhesives. Such adhesives consist of two components which, when mixed together, form a piece of precipitate, the so-called thrombus. The first component is fibrinogen concentrate. This concentrate also contains fibronectin and factor XIII, which are important for thrombus stabilization and strength. The second component is thrombin, an active fibrinogen converting enzyme, i.e., the last component of the normal coagulation system to fibrin thromb. This procedure bypasses most stages of normal coagulation and mimics its last phase. Some manufacturers add plasminogen, an enzyme that causes lysis of thrombus after some time, while other manufacturers add aprotinin, a protease inhibitor, to prevent lysis of the thrombus.
Tyto produkty sice poskytují uspokojivé výsledky u pacientů se slabou chorobnou krvácivostí, nicméně u pacientů s těžkými poruchami tohoto typu, jako jsou pacienti s hemofilií A nebo B, stále ještě existuje vysoké riziko pooperačního krvácení. Někdy u nich dochází k odloženým komplikacím s krvácením až po několika dnech po chirurgickém zákroku. Také pacientům, kteří jsou léčeni pomocí antikoagulačních faktorů, nelze podávat tkáňové lepidlo podle dosavadního stavu techniky. Další významnou nevýhodou obchodně dostupných koncentrátů je jejich vysoká výrobní cena.While these products provide satisfactory results in patients with mild bleeding, patients with severe disorders of this type, such as patients with haemophilia A or B, still have a high risk of postoperative bleeding. Sometimes they experience delayed complications of bleeding only a few days after surgery. Also, patients who are treated with anticoagulant factors cannot receive the prior art tissue glue. Another significant disadvantage of commercially available concentrates is their high production cost.
V přihlášce PCT WO 86/01814 je popsán způsob výroby kryoprecipitované suspenze, obsahující fibrinogen a faktor VIII, která je užitečným prekurzorem při výrobě fibrinového lepidla. Při této výrobě se postupuje tak, že se a) čerstvé zmrazená plazma od jediného dárce, kterým může být člověk nebo jiný živočich, který byl podroben kontrole, zda netrpí chorobami, které se mohou přenášet krví, alespoň asi 6 hodin mrazí na přibližné -80 °C; b) teplota zmrazené plazmy se zvýší, například na hodnotu v rozmezí od asi O °C do teploty místnosti, aby vznikl supernatant a kryopr recipitovaná suspenze, obsahující fibrinogen a faktor VIII; a c) izoluje se kryoprecipitovaná suspenze. Také je zveřejněn způsob výroby fibrinového lepidla, které je užitečné při chirurgických zákrocích, kterýžto způsob se provádí tak, že se a) vyrobí kryoprecipitovaná suspenze, popsaná výše; b) definovaný objem této suspenze se nanese na požadované místo; a c) na toto místo se aplikuje přípravek, obsahující dostatečné množství thrombinu, abyPCT application WO 86/01814 discloses a process for producing a cryoprecipitated suspension comprising fibrinogen and factor VIII, which is a useful precursor in the manufacture of fibrin adhesive. In this process, a) fresh frozen plasma from a single donor, which may be a human or other animal that has been inspected for blood-borne diseases, must be frozen for at least about 6 hours at -80 ° C. ° C; b) raising the temperature of the frozen plasma, for example to a value in the range of about 0 ° C to room temperature, to form a supernatant and a cryoprotected suspension containing fibrinogen and factor VIII; and c) isolating the cryoprecipitated suspension. Also disclosed is a method of making a fibrin adhesive useful in surgical procedures, which method is performed by: a) making the cryoprecipitated suspension described above; b) applying a defined volume of said suspension to the desired site; and (c) a preparation containing a sufficient amount of thrombin is applied to the site
-1CZ 280540 B6 došlo ke konverzi fibrinogenu v suspenzi na fibrinové lepidlo, které ztuhne.The fibrinogen in suspension was converted to a fibrin glue which solidified.
V EP-A-0 341 007 je popsáno chirurgické lepidlo, které ve vodném přípravku obsahuje pacientovu vlastní plazmu, kolagen, thrombin a popřípadě antifibrinolytické činidlo. Toto lepidlo se tvoří z vlastní plazmy pacienta, bez použití jakýchkoliv přídavných reakčních činidel pro koncentraci nebo izolaci fibrinogenu. Toto lepidlo se obvykle zpracovává na dvousložkovou směs, která se mísí teprve bezprostředně před použitím.EP-A-0 341 007 discloses a surgical adhesive which in an aqueous preparation comprises a patient's own plasma, collagen, thrombin and optionally an antifibrinolytic agent. This adhesive is formed from the patient's own plasma, without the use of any additional reagents to concentrate or isolate fibrinogen. This adhesive is usually formulated into a two-component mixture which is only mixed immediately before use.
V EP-A-0 253 198 je popsáno jednosložkové tkáňové lepidlo 1 tvořené vodným roztokem fibrinogenu, faktoru VIII, inhibitoru thrombinu, faktorů prothrombinu, vápenatých iontů a popřípadě inhibitoru plazminu. Tkáňové lepidlo lze rekonstituovat z lyofilizovaného vzorku přídavkem vody. Tkáňové lepidlo může obsahovat všechny účinné látky v pasterované formě, aby se zabránilo přenosu hepatitis a HTLV III.EP-A-0 253 198 discloses a one-component tissue glue 1 comprising an aqueous solution of fibrinogen, factor VIII, a thrombin inhibitor, prothrombin factors, calcium ions and optionally a plasmin inhibitor. The tissue glue can be reconstituted from the lyophilized sample by the addition of water. The tissue glue may contain all the active ingredients in pasteurized form to prevent the transmission of hepatitis and HTLV III.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Úkolem tohoto vynálezu je vyvinout tkáňové lepidlo, které by také bylo vhodné pro pacienty s těžkými poruchami koagulace krve, jako jsou pacienti, kteří trpí hemofilií A nebo B. Dalším úkolem tohoto vynálezu je vyvinout tkáňové lepidlo, jehož lze také použít u pacientů, kteří si již vyvinuli protilátky proti hovězímu thrombinu, který je aktivním faktorem složky B. Dalším úkolem vynálezu je vyvinout tkáňové lepidlo pro pacienty, kteří jsou léčeni antikoagulačními faktory, jako je heparin. Vzhledem k riziku přenosu virových chorob složkami tkáňového lepidla se musí zaručit, že v těchto složkách budou viry inaktivovány.It is an object of the present invention to provide a tissue glue that is also suitable for patients with severe blood coagulation disorders, such as patients suffering from haemophilia A or B. It is another object of the present invention to provide a tissue glue that can also be used in patients It is another object of the present invention to provide tissue glue for patients who are treated with anticoagulant factors such as heparin. Given the risk of transmission of viral diseases by tissue glue components, it must be guaranteed that viruses will be inactivated in these components.
Předmětem vynálezu je tkáňové lepidlo, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje složku A, obsahující dvojnásobné až pětinásobně koncentrovaný kryoprecipitát úplné krve a množství inhibitoru proteasy, které odpovídá 3 000 až 5 000 jednotkám KlU/ml aprotininu, a složku B,obsahující proteolytický enzym, který je schopen specificky štěpit fibrinogen, přítomný ve složce A, za vzniku fibrinového polymeru.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a tissue glue comprising component A comprising two to five times the concentrated whole blood cryoprecipitate and an amount of protease inhibitor corresponding to 3000 to 5000 KU / ml aprotinin and component B containing a proteolytic enzyme which is capable of specifically cleaving the fibrinogen present in component A to form a fibrin polymer.
Pro výrobu tkáňového lepidla podle vynálezu je možno použít obchodně dostupného kryoprecipitátu. Může však být výhodné kryoprecipitát zkoncentrovat, 2 až 5 x, přednostně 3x.A commercially available cryoprecipitate may be used to make the tissue glue of the present invention. However, it may be advantageous to concentrate the cryoprecipitate 2 to 5 times, preferably 3 times.
Přídavek inhibitoru proteasy v takové koncentraci, která odpovídá 3 000 až 5 000 jednotkám KlU/ml aprotininu, ke kryoprecipitátu činí tkáňové lepidlo podle vynálezu vhodným pro použiti u pacientů, kteří trpí silnou krvácivostí. Přednostním inhibitorem proteasy je aprotinin, což je produkt, který je na trhu dosín\ ) tupný pod obchodním označením Trasylol' ' nebo Antagosan'The addition of a protease inhibitor at a concentration corresponding to 3,000 to 5,000 KUU / ml aprotinin to the cryoprecipitate makes the tissue glue of the invention suitable for use in patients suffering from severe bleeding. A preferred protease inhibitor is aprotinin, a product which is commercially available under the trade names Trasylol or Antagosan.
Kryoprecipitát může pocházet od samotného pacienta, který si před operací daruje vlastní krev. Při tomto přístupu se zabraňuje riziku přenosu virových onemocnění krevními deriváty. Pro výrobu vhodného obchodního produktu musí však být v kryoprecipitátu viry inaktivovány. Způsob inaktivace virů je popsán v přihlášce PCT/EP 91/00503. Podstatou tohoto postupu je zpracování kryopreThe cryoprecipitate may be from a patient who donates blood before surgery. This approach avoids the risk of transmitting viral diseases by blood derivatives. However, viruses must be inactivated in the cryoprecipitate to produce a suitable commercial product. A method for inactivating viruses is described in PCT / EP 91/00503. The essence of this process is the processing of cryopre
-2CZ 280540 B6 cipitátu speciálními detergenty a odstraněni detergentového lateronu z kryoprecipitátu.Specialized detergents and removal of the detergent lateron from the cryoprecipitate.
Druhá složka, složka B, tkáňového lepidla podle tohoto vynálezu se připravuje rozpuštěním proteolytického enzymu, který je schopen specificky štěpit fibrinogen. Obvykle se používá thrombinu, který byl izolován z plazmy člověka nebo savců, jako je hovězí dobytek. Tento thrombin může být dodáván v lyofilizované formě. K rekonstituci thrombinu dochází pomocí roztoku chloridu vápenatého (40 mM). Přednostní koncentrace thrombinu činí 50 až 200 U/ml.The second component, component B, of the tissue glue of the present invention is prepared by dissolving a proteolytic enzyme that is capable of specifically cleaving fibrinogen. Typically, thrombin is used which has been isolated from human or mammalian plasma, such as cattle. The thrombin may be supplied in lyophilized form. Thrombin is reconstituted with calcium chloride solution (40 mM). The preferred thrombin concentration is 50 to 200 U / ml.
Pro výrobu rychlých tkáňových lepidel je vhodné vyrábět roztok thrombinu o koncentraci přibližné 100 U/ml v roztoku chloridu vápenatého. Pro výrobu pomalého lepidla, které může například sloužit pro vyplňování dutin při extrakci zubu nebo pro utěsnění dutiny po vyjmutí podvěsku mozkového, se může thrombin dále ředit vhodným roztokem chloridu vápenatého na koncentraci 25 U/ml.For the production of quick tissue adhesives, it is suitable to produce a thrombin solution of about 100 U / ml in a calcium chloride solution. For the production of a slow adhesive, which may for example be used to fill cavities during tooth extraction or to seal the cavity after removal of the pituitary gland, the thrombin may be further diluted with a suitable calcium chloride solution to a concentration of 25 U / ml.
V dalším provedení obsahuje zlepšené tkáňové lepidlo podle vynálezu jako složku B proteolytický enzym, který je izolován z hadího jedu. Toto provedení je výhodné v tom případě, mají-li být léčeni pacienti, kteří si vyvinuli protilátky proti thrombinu. Pomocí takového tkáňového lepidla podle vynálezu mohou být kromě toho léčeni i pacienti, kteří byly předběžně léčeni heparinem, poněvadž heparin neovlivňuje reakci enzymu z hadího jedu. V obzvláště výhodném provedení tohoto vynálezu se používá jako enzymu z hadího jedu batroxobinu, který lze izolovat z jihoamerického hada Bothrpos moujeni. Složka B přednostně obsahuje 0,5 až 10 U/ml takového proteolytického enzymu z hadího jedu.In another embodiment, the improved tissue adhesive of the invention comprises as component B a proteolytic enzyme that is isolated from snake venom. This embodiment is advantageous if patients who have developed anti-thrombin antibodies are to be treated. In addition, patients pretreated with heparin can be treated with such tissue glue according to the invention since heparin does not affect the snake venom enzyme response. In a particularly preferred embodiment of the present invention, batroxobin is used as a snake venom enzyme that can be isolated from the South American snake Bothrpos moujeni. Component B preferably contains 0.5 to 10 U / ml of such a snake venom proteolytic enzyme.
Po chemické stránce je batroxobin tvořen jednořetězcovým glykopeptidem o molekulární hmotnosti přibližné 36 000. Produkt Defibrase(R) způsobuje odštěpení alfa 16 Arg/17 Gly, což má za následek uvolnění fibrinopeptidu A a tvorbu monomerního fibrinu I.Chemically, batroxobin is a single chain glycopeptide of about 36,000 molecular weight. Defibrase ( R ) causes alpha 16 Arg / 17 Gly cleavage, resulting in the release of fibrinopeptide A and the formation of monomeric fibrin I.
Když se podle vynálezu používá velkých množství aprotininu, může se jako složky A tkáňového lepidla podle vynálezu používat také přečištěného fibrinogenu, fibronektinu a faktoru XIII. Riziko dodatečného krvácení se v tomto případě dramaticky sníží.When large amounts of aprotinin are used according to the invention, purified fibrinogen, fibronectin and factor XIII can also be used as component A of the tissue adhesive of the invention. The risk of additional bleeding is dramatically reduced in this case.
Za použití proteolytických proteas z hadího jedu při výrobě složky B je také možno používat konvenčních složek A, obsahujících fibrinogen, fibronektin a faktor XIII. Použití velkých množství aprotininu se podle vynálezu dává přednost. Obzvláštní přednost se dává takovému provedení vynálezu, při němž se kombinuje složka A podle vynálezu, odvozená od kryoprecipitátu, s nebo bez použití vysokého množství aprotininu, se složkou B podle vynálezu, obsahující proteolytický enzym, izolovaný z hadího jedu.Conventional A components containing fibrinogen, fibronectin and factor XIII can also be used using proteolytic proteases from snake venom in the production of component B. The use of large amounts of aprotinin is preferred according to the invention. Particularly preferred is an embodiment of the invention which combines the cryoprecipitate-derived component A of the invention, with or without the use of a high amount of aprotinin, with a component B of the invention comprising a proteolytic enzyme isolated from snake venom.
Předmětem vynálezu je také způsob výroby tkáňového lepidla, jehož podstata spočívá v tom, že seThe invention also relates to a process for the production of tissue glue, the principle of which is to:
- vyrobí složka A postupem, při němž se kryoprecipitát převádí na kryoroztok, provede se inaktivace virů,- produce component A by a process whereby cryoprecipitate is converted into a cryoprotectant, inactivated by viruses,
-3CZ 280540 B6 odstraní se virucidní činidla, přidá se inhibitor proteasy a doplní se složka B, obsahující proteolytický enzym, schopný specificky štěpit fibrinogen.The virucidal agents are removed, a protease inhibitor is added, and component B containing a proteolytic enzyme capable of specifically cleaving fibrinogen is added.
Přednostně se postupuje tak, že se kryopasta nechá předem roztát přes noc při teplotě 4 až 10 C a potom se rozpustí v pufru, obsahujícím chlorid sodný, citran trisodný a glycin o pH 7,0 až 7,2, načež se roztok zahřeje na 30 až 35 °C. Kryopasta by se měla snadno rozpustit, jinak není vhodná pro tuto přípravu. Rozpuštěni lze urychlit nařezáním kryopasty na malé kousky před jejím roztavením. Potom se roztok ochladí téměř na teplotu místnosti, hodnota pH se nastaví na 7,0 až 7,2 a za míchání se přidá hydroxid hlinitý. Sraženina se odstředí a zahodí. Popřípadě se zařadí filtrační stupeň. Potom se přidá chlorid vápenatý v množství, odpovídajícímu jeho požadované konečné koncentraci.Preferably, the cryopaste is thawed overnight at 4-10 ° C and then dissolved in a buffer containing sodium chloride, trisodium citrate and glycine at pH 7.0-7.2, then the solution is heated to 30 ° C. to 35 ° C. The cryopaste should dissolve readily, otherwise it is not suitable for this preparation. Dissolution can be accelerated by cutting the cryopaste into small pieces before melting. The solution is then cooled to near room temperature, the pH is adjusted to 7.0-7.2 and aluminum hydroxide is added with stirring. The precipitate is centrifuged and discarded. If necessary, a filtration step is included. Calcium chloride is then added in an amount corresponding to its desired final concentration.
Inaktivace virů se provádí následujícím způsobem: Roztok se zahřeje na 30 °C, přidají se detergenty, směs se určitou dobu míchá a potom se roztok převede do zásobníku, prostého virů, kde se ponechá bez míchání několik hodin při zvýšené teplotě.Virus inactivation is carried out as follows: The solution is heated to 30 ° C, detergents are added, the mixture is stirred for some time, and then the solution is transferred to a virus-free container where it is left without stirring for several hours at elevated temperature.
Virucidní činidla se odstraní přídavkem ricinového oleje a několikaminutovým jemným promícháním, po němž se nechá olejová fáze oddělit od vodné fáze. Oddělený vodný roztok se ochladí na teplotu místnosti a převede do virologicky bezpečného zásobníku. Olejová fáze se zahodí. Vodná fáze se vyčeří filtrací, přičemž hodnota pH musí být udržována v rozmezí od 7,0 do 7,2. Potom se proteinový roztok přečerpá při teplotě místnosti přes sloupec s reverzní fází. Změří se obsah proteinu (bývá v rozmezí od 10 do 60 mg/ml) a eluát se diafiltrací zkoncentruje na obsah proteinu 60 až 100 mg/ml a potom dialýzuje proti pufru, který je stejný jako pufr zmíněný výše, ale navíc obsahuje poměrně vysokou koncentraci chloridu vápenatého. Potom se přidá inhibitor proteasy a směs se za sterilních podmínek přefiltruje. Vzorky se umístí ve vhodných nádobách a hluboko zmrazí.The virucidal agents are removed by the addition of castor oil and gentle mixing for several minutes, after which the oil phase is allowed to separate from the aqueous phase. The separated aqueous solution is cooled to room temperature and transferred to a virologically safe container. The oil phase is discarded. The aqueous phase is clarified by filtration, maintaining the pH between 7.0 and 7.2. The protein solution is then pumped through the reverse phase column at room temperature. The protein content is measured (ranging from 10 to 60 mg / ml) and the eluate is concentrated by diafiltration to a protein content of 60 to 100 mg / ml and then dialyzed against a buffer which is the same as the buffer mentioned above but contains a relatively high concentration calcium chloride. The protease inhibitor is then added and the mixture is filtered under sterile conditions. The samples are placed in suitable containers and deep-frozen.
Složkou B je přednostně lyofilizovaná proteasa. Obzvláštní přednost se dává lyofilizovanému thrombinu nebo lyofilizované frakci hadího jedu, který pochází z jihoamerického druhu hada Bothrpos moujeni. Tento proteolytický enzym je znám pod obchodním označením Reptilase a jedná se o enzym batroxobin.Component B is preferably a lyophilized protease. Especially preferred is the lyophilized thrombin or the lyophilized snake venom fraction which originates from the South American species of the snake Bothrpos moujeni. This proteolytic enzyme is known as Reptilase and is a batroxobin enzyme.
Proteolytické enzymy se rozpustí v pufru s chloridem vápenatým.Proteolytic enzymes are dissolved in a calcium chloride buffer.
Aplikace složek A a B se provádí za použití techniky se dvěma injekčními stříkačkami, které jsou například spojeny v konektoru z plastu. Po smíchání obou složek dochází ke vzniku kousku sraženiny - thrombu. Aplikace se může provádět prostřednictvím kanyly nebo nástřikem pomocí katétru se třemi žílami. Do dvou žil se vstříknou separátní dvě složky lepidla a ke třetí žíle se připojí zdroj tlakového vzduchu (tlak v rozmezí několika desetin MPa), který slouží k rozprášení směsi.Application of components A and B is carried out using a technique with two syringes, which are, for example, connected in a plastic connector. When both components are mixed, a thrombus clot is formed. Administration can be by cannula or by injection with a three-vein catheter. Two separate adhesive components are injected into the two cores and a compressed air source (pressure in the range of several tenths of MPa) is used to spray the mixture.
Tkáňové lepidlo podle vynálezu má výhodu v tom, že ho lze používat u pacientů s těžkými poruchami koagulace krve, přičemžThe tissue glue of the invention has the advantage that it can be used in patients with severe blood coagulation disorders, wherein:
-4CZ 280540 B6 je lacinější než známá tkáňová lepidla. Za jeho použití je možno pacienty s těžkou hemofilií podrobit chirurgickým zákrokům, jako je například extrakce zubu, bez preventivní infuze koncentrátu faktoru VIII, přičemž se dosahuje úspěšnosti nad 80 %. To znamená, že pouze jen asi jedna pětina pacientů vyžaduje infuzi v důsledku krvácení po extrakci. Pomocí tkáňového lepidla podle vynálezu je kromě toho možno ošetřovat pacienty, kteří byli před tím léčeni heparinem. Další výhoda spočívá v tom, že pomocí tkáňového lepidla podle vynálezu, v němž byl thrombin nahrazen proteasou z hadího jedu, zejména výrobkem Defibrase^R\ což je serin proteasový batroxobin, izolovaný z jedu jihoamerického hada Bothrpos moujeni, je možno léčit pacienty, kteří si vyvinuli protilátky proti thrombinu, jakožto druhé složce tkáňového lepidla.-48080540 B6 is cheaper than known tissue adhesives. Using it, patients with severe haemophilia can be subjected to surgical procedures such as tooth extraction without a preventive infusion of factor VIII concentrate, with a success rate above 80%. This means that only about one fifth of patients require infusion due to bleeding after extraction. In addition, patients previously treated with heparin can be treated with the tissue glue of the invention. Another advantage is that by using tissue glue according to the invention wherein thrombin is substituted by a protease from snake venom especially Defibrase ^ R \ which is a serine protease batroxobin isolated from the venom of the South American pit viper Bothrpos moujeni, it is possible to treat patients who have developed antibodies against thrombin as a second component of tissue glue.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a v žádném ohledu neomezují rozsah vynálezu.The invention is illustrated by the following examples. These examples are illustrative only and are not to be construed as limiting the scope of the invention in any way.
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Humánní fibrinogen (kvality L) pochází od firmy Kabi (Stockholm, Švédsko), hovězí thrombin od firmy Merz-Dade. Chromogenní substrát, N-a-benzoyl-DL-arginin-p-nitroanilid (ΒΑΡΝΑ) a reakční činidla analytické čistoty pocházejí od firmy Sigma (St. Louis, Missouri, USA). Reakční činidla a soli se ředí 0,015M Tris pufrem, 0,15M NaCl, o pH 7,4. Fibrinogen se dialýzuje v Tris pufru, přičemž jeho koncentrace se stanovuje z Abs280, za použití konverzního faktoru E1-á280 = 15.Human fibrinogen (L-grade) comes from Kabi (Stockholm, Sweden), bovine thrombin from Merz-Dade. The chromogenic substrate, Na-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (ΒΑΡΝΑ) and analytical grade reagents are from Sigma (St. Louis, Missouri, USA). Reagents and salts were diluted with 0.015M Tris buffer, 0.15M NaCl, pH 7.4. The fibrinogen is dialyzed in Tris buffer, the concentration of which is determined from Abs 280 , using a conversion factor E 1-α 280 = 15.
Hovězí thrombin pochází z obchodních zdrojů (Merz-Dade nebo Parke Davis) a má stupeň aktivity daný výrobcem. Výrobek Reptilase^ , hadí jed, který uvolňuje pouze FPA, pochází od firmy Pentapharm (Basilej, Švýcarsko). Proteolytická aktivita přípravku Reptilase(R) se normalizuje na aktivitu thrombinu na základě porovnání rychlostí proteolýzy nespecifických chromogenních substrátů ΒΑΡΝΑ (0,25 mM) při 37 C ve směsi Tris pufru a roztoku chloridu sodného o pH 8,0, přičemž sledování se provádí 15 minut při 405 nm.Beef thrombin comes from commercial sources (Merz-Dade or Parke Davis) and has a degree of activity given by the manufacturer. Reptilase®, a snake venom that releases only FPA, is from Pentapharm (Basel, Switzerland). The proteolytic activity of Reptilase ( R ) is normalized to thrombin activity by comparing proteolysis rates of non-specific chromogenic substrates ΒΑΡΝΑ (0.25 mM) at 37 ° C in a mixture of Tris buffer and sodium chloride solution at pH 8.0 for 15 minutes. at 405 nm.
Na základě esterolytické aktivity se jednotková aktivita Reptilase normalizuje na aktivitu thrombinu.Based on esterolytic activity, the unit activity of Reptilase is normalized to thrombin activity.
Tkáňové lepidlo se v podstatě vyrobí za použití metody se dvěma injekčními stříkačkami. V jedné stříkačce je obsažen čistý nebo kryoprecipitátový fibrinogenový substrát, a ve druhé je obsažen přípravek Reptilase (20 U/ml), nebo thrombin s obsahem chloridu vápenatého (20 mM).The tissue glue is essentially made using a two syringe method. One syringe contains pure or cryoprecipitate fibrinogen substrate, and the other contains Reptilase (20 U / ml) or thrombin with calcium chloride (20 mM).
Doba vzniku thrombu (Clotting Time - zkratka CT) se stanovuje pomocí analyzátoru Research Model 300-R ACL Coagulation Analyzer (IL, Milán, Itálie). Viskoelasticita (TEG) se stanovuje pomocí tříkanálového zařízení Heiliger Thromboelastograph při 37 ’C. Pevnost v tahu (BS) lepidla, udávaná v gramech,se stanoví tak, že se složky lepidla umístí mezi dva kousky nahrubo propletené sítě ze syntetických vláken (0,5 x 1 cm), přičemž se nechá vzniknout gel, který úplně prostupuje oba kousky síťky. Po dvou hodináchThe Clotting Time (CT) is determined using a Research Model 300-R ACL Coagulation Analyzer (IL, Milan, Italy). Viscoelasticity (TEG) is determined using a Heiliger Thromboelastograph three-channel device at 37 C. C. The tensile strength (BS) of the adhesive, expressed in grams, is determined by placing the adhesive components between two pieces of roughly interwoven synthetic fiber mesh (0.5 x 1 cm), leaving a gel that completely permeates the two pieces nets. After two hours
-5CZ 280540 B6 při teplotě 24 °C se měří síla potřebná k roztrhnutí tohoto útvaru síť - lepidlo - síť, za použití zařízení Accuforce Cadet Tensionometer (AMATEK, Mansfield & Greene, USA).The force required to rupture this mesh-adhesive-mesh structure was measured using an Accuforce Cadet Tensionometer (AMATEK, Mansfield & Greene, USA) at 24 ° C.
Sterilní kryoprecipitát (kryo) se připraví ze zmrazené (-30 °C) humánní plazmy, která se nechá roztát při 4 C, načež se oddělí plazma, tvořící supernatant. Čtyři jednotková množství se spojí za účelem stanovení koncentrace proteinu a fibrinogenu pomocí Buiretovy metody před a po srážení kryoprecipitátu (zředěného 1 : 5) pomocí 2 U/ml thrombinu. Faktor XIII se stanoví na základě měření inkorporace [3H]-putrescinu do dimethylovaného kaseinu, po 10 minutové aktivaci vzorku s 4 U/ml hovězího thrombinu při teplotě 22 °C.Sterile cryoprecipitate (cryo) is prepared from frozen (-30 ° C) human plasma, which is thawed at 4 ° C, then the plasma forming the supernatant is separated. Four unit amounts were pooled to determine protein and fibrinogen concentrations using the Buiret method before and after precipitation of the cryoprecipitate (diluted 1: 5) with 2 U / ml thrombin. Factor XIII is determined by measuring the incorporation of [ 3 H] -putrescine into dimethylated casein, after 10 minutes of sample activation with 4 U / ml bovine thrombin at 22 ° C.
Pozoruhodným rysem křivky závislosti rychlosti koagulace na koncentraci fibrinogenu (CT-fibrinogen) je, že je dvoufázová při stanovené hladině thrombinu nebo Reptilase (t.j. 1 U/ml), viz obr. 1A), a dosahuje minima při koncentraci 1 až 8 mM fibrinogenu. Tato hodnota se poněkud liší od hodnoty, při níž dochází k maximální turbiditě (po 10 minutách), která činí 20 až 40 mM fibrinogenu. Konverzní experiment ukazuje závislost CT na úrovni thrombinu nebo Reptilase. Tato křivka ukazuje, že existuje téměř lineární nepřímá úměrnost rychlosti gelace při nízkých úrovních enzymu (nižší než 2 U/ml), přičemž při vyšších úrovních se rychlost gelace ustálí (vzniká plato).A notable feature of the coagulation rate vs. fibrinogen concentration (CT-fibrinogen) curve is that it is biphasic at a predetermined level of thrombin or Reptilase (i.e., 1 U / ml), see Fig. 1A), reaching a minimum at 1-8 mM fibrinogen. This value is somewhat different from the maximum turbidity (after 10 minutes) of 20 to 40 mM fibrinogen. The conversion experiment shows the dependence of CT on the level of thrombin or Reptilase. This curve shows that there is an almost linear inverse of the gelation rate at low enzyme levels (less than 2 U / ml), while at higher levels the gelation rate stabilizes (plateau formation).
Vývoj viskoelasticity čistého fibrinu je poněkud pomalejší než vývoj jeho turbidity. Dvojmocný vápník je hlavním kofaktorem při vyztužení gelu prostřednictvím kovalentního propletení proteinových řetězců působením faktoru XlIIa. Takové zesíťování gelu je hlavním zdrojem jeho mechanické pevnosti a ustálí se po 20 minutách.The development of viscoelasticity of pure fibrin is somewhat slower than that of its turbidity. Divalent calcium is a major cofactor in gel reinforcement by covalent interlacing of protein chains by Factor XIIa. Such gel cross-linking is a major source of its mechanical strength and stabilizes after 20 minutes.
Zjištění, že Reptilase má schopnost indukovat faktor XlIIa, se zdá být opodstatněné.The finding that Reptilase has the ability to induce factor XIIIa appears to be justified.
Spojený kryoprecipitát, připravený z pěti jednotkových částí, poskytuje následující střední hodnoty koncentrace proteinu:The pooled cryoprecipitate, prepared from five unit parts, provides the following mean protein concentration values:
protein fibrinogen faktor XIII mg/ml mg/mlprotein fibrinogen factor XIII mg / ml mg / ml
4,10 U/ml4.10 U / ml
Rychlosti koagulaceCoagulation rates
Rychlost vzniku thrombu, t.j. rychlost koagulace (CT) kryoprecipitátu, je přímo úměrná koncentraci thrombinu nebo Reptilase. Při hodnotách nad 3 U/ml má však již zvyšující se koncentrace enzymu jen malý vliv na rychlost koagulace. Při stanovené koncentraci enzymu poskytuje sériové ředění kryoprecipitátu dvoufázovou křivku CT; závislost je zde tedy stejná jako v případě fibrinogenu v čistém fibrinovém systému.The rate of thrombus formation, i.e. the coagulation rate (CT) of the cryoprecipitate, is directly proportional to the concentration of thrombin or Reptilase. However, at values above 3 U / ml, increasing enzyme concentration has little effect on the coagulation rate. At the determined enzyme concentration, serial dilution of cryoprecipitate provides a two-phase CT curve; thus, the dependence is the same as in the case of fibrinogen in a pure fibrin system.
-6CZ 280540 B6-6GB 280540 B6
Viskoelasticita (TEG) a pevnost v tahu (BS) kryoprecipitátových lepidelViscoelasticity (TEG) and tensile strength (BS) of cryoprecipitate adhesives
Vývoj viskoelasticity v kryoprecipitátových lepidlech se zkoumá buď za použití thrombinu nebo Reptilase. Pro vývoj tohoto parametru je třeba podstatně delšího času, než pro vývoj turbidity (zákalu). Kryoprecipitátová lepidla, vyrobená za použití nadbytku chloridu vápenatého a bud’ thrombinu nebo Reptilase, však dosahují stejných hodnot TEG za přibližné stejnou dobu. Zdá se, že po začátku gelace zesíťování, vyvolané faktorem XlIIa, vyztužuje strukturu gelových vláken, takže hodnoty TEG u obou lepidel konvergují v průběhu 1 hodiny. Podobné je tomu s konečnou hodnotou BS obou kryoprecipitátových lepidel, vytvořených za přítomnosti přebytku chloridu vápenatého. K roztržení obou kryoprecipitátových lepidel dochází při hodnotě 50 až 60 g. Tyto experimety ukazují, že gelová vlákna v lepidle jsou vyztužena kovalentním zesilováním, které je vyvoláno faktorem XlIIa.The development of viscoelasticity in cryoprecipitate adhesives was investigated using either thrombin or Reptilase. It takes considerably longer time to develop this parameter than to develop turbidity. However, cryoprecipitate adhesives, manufactured using excess calcium chloride and either thrombin or Reptilase, achieve the same TEG values for about the same time. After the onset of crosslinking gelation induced by factor XIIIa, it appears that it reinforces the gel fiber structure, so that the TEG values of both adhesives converge within 1 hour. This is similar to the final BS of both cryoprecipitate adhesives formed in the presence of excess calcium chloride. The tear of both cryoprecipitate adhesives occurs at 50 to 60 g. These experiments show that the gel fibers in the adhesive are reinforced by covalent cross-linking, which is induced by factor XIIa.
Výroba kryoroztokuProduction of cryosolution
Obchodně dostupná kryopasta se předem roztaví 4 až 10 °C. Kryoprecipitát v množství 1 kg se pufru A (120 mmol/1 NaCl, 10 mmol/1 citranu 120 mmol/1 glycinu, pH 7,0 až 7,2) a předehřeje na Kryopasta by se měla snadno rozpustit, jinak není vhodná. Pro urychlení rozpouštění se může kryopasta rozdělit na malé kousky. Potom se roztok ochladí a změří se pH. Hodnotu pH je popřípadě třeba přizpůsobit ležela v rozmezí od 7,0 do 7,2 , sodného nebo kyseliny octové. Ke hlinitého a v míchání se pokračuje po dobu přes noc při rozpustí ve 2 1 trojsodného, až 35 pro před na 20 ’C. přípravu roztátím až 22 °C tak, aby přídavkem zředěného hydroxidu směsi se přidá 100 ml hydroxidu 30 minut. Precipitát se odstředí a zahodí. Supernatant se přefiltruje za použití filtru s póry 1 μιη. Přidá se chlorid vápenatý, aby se centrace vápenatých iontů udržela na hodnotě 1 mmol/1. Opět třeba překontrolovat hodnotu pH.A commercially available cryopaste is pre-melted at 4-10 ° C. Cryoprecipitate in an amount of 1 kg with buffer A (120 mmol / l NaCl, 10 mmol / l citrate 120 mmol / l glycine, pH 7.0 to 7.2) and preheated to Cryopasta should easily dissolve, otherwise it is not suitable. To accelerate dissolution, the cryopaste can be divided into small pieces. The solution was then cooled and the pH was measured. If necessary, the pH should be in the range of 7.0 to 7.2, sodium or acetic acid. The aluminum and stirring is continued overnight while dissolved in 2 L trisodium, up to 35 for prior to 20 C. thaw up to 22 ° C so that 100 ml of hydroxide is added by addition of dilute hydroxide mixture for 30 minutes. The precipitate is centrifuged and discarded. Filter the supernatant using a 1 μιη filter. Calcium chloride is added to maintain the calcium ion centration at 1 mmol / l. The pH value should be checked again.
konečná konjekonná konje
Inaktivace virůVirus inactivation
Roztok se zahřeje na 30 °C a přidá se k němu TNBP v množství 10 g/1 a Triton X 100 [ethoxylát 4-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)fenolu] v množství 10 g/1. Směs se jemně míchá po dobu 0,5 hodiny a vzniklý roztok se převede do zásobníku, prostého virů, kde se ponechá po dobu 3,5 hodiny bez míchání při 30 °C.The solution was warmed to 30 ° C and 10 g / L of TNBP and 10 g / L of Triton X 100 [4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenol] ethoxylate] were added. The mixture is gently stirred for 0.5 hour and the resulting solution is transferred to a virus-free container, where it is left without stirring at 30 ° C for 3.5 hours.
Odstranění virucidních činidelRemoval of virucidal agents
Ke směsi, připravené výše uvedeným způsobem, se přidá 150 ml ricinového oleje a vzniklá směs se jemné míchá po dobu 30 minut. Roztok se ochladí na 20 °C a vyčká se oddělení olejové fáze od vodné fáze (30 až 45 minut). Vodná vrstva se přenese do virologicky bezpečného zásobníku a olejová vrstva se zahodí. Vodná vrstva se vyčeří filtrací na filtrační kaskádě s póry 1 a 0,45 μιη. Roztok proteinu se potom přečerpá přes sloupec s reverzní fází (sloupec C-18) průtokovou rychlostí 3 1/h, při teplotě místnosti. Eluát se monitoruje UV zářením a zachycuje se tak dlouho, dokud se absorbance nevrátí na 50 %. Naměřená koncentrace proteinu je asi 40 mg/ml.150 ml of castor oil are added to the mixture prepared as above and the mixture is gently stirred for 30 minutes. The solution is cooled to 20 ° C and the oil phase is separated from the aqueous phase (30 to 45 minutes). The aqueous layer was transferred to a virologically safe container and the oil layer discarded. The aqueous layer is clarified by filtration on a 1 and 0.45 μιη filter cascade. The protein solution is then pumped through a reverse phase column (column C-18) at a flow rate of 3 L / h, at room temperature. The eluate is monitored by UV radiation and collected until the absorbance returns to 50%. The measured protein concentration is about 40 mg / ml.
-7CZ 280540 B6-7EN 280540 B6
Eluát se zkoncentruje diafiltrací na obsah proteinu 70 až 80 mg/ml a dialýzuje proti dostatečnému množství pufru B (stejné přísady, jako v případě pufru A, ale navíc 1 mmol/1 chloridu vápenatého). Potom se přidá 4 mio. KIU aprotininu na 1 1 roztoku a roztok se za sterilních podmínek přefiltruje s použitím filtrační kaskády s filtry, jejichž póry mají rozměr 0,45 a 0,2 μιη. Roztokem se potom naplní plastové pytlíky, které se hluboce zmrazí (a popřípadě lyofilizují).The eluate was concentrated by diafiltration to a protein content of 70-80 mg / ml and dialyzed against a sufficient amount of buffer B (the same ingredients as for buffer A, but additionally 1 mmol / l calcium chloride). 4 Mio is then added. KIU of aprotinin per liter of solution and the solution is filtered under sterile conditions using a filter cascade with filters having a pore size of 0.45 and 0.2 μιη. The solution is then filled with plastic bags, which are deep-frozen (and optionally lyophilized).
Příprava roztoku thrombinuPreparation of thrombin solution
Lyofilizovaný thrombin se rozpustí v roztoku chloridu vápenatého o koncentraci 40 mM. Množství thrombinu v lepidle činí 100 U/ml. Pro rychle působící lepidlo, které se nanáší například nástřikem na oblast rány, bude postačovat koncentrace thrombinu 100 U/ml v roztoku chloridu vápenatého. Pro pomalé lepidlo, které má například sloužit pro vyplnění dutiny po extrakci zubu nebo utěsnění dutiny po vyjmutém podvěsku mozkovém se roztok thrombinu dále zředí na konečnou koncentraci 25 U/ml přídavkem většího množství roztoku chloridu vápenatého.The lyophilized thrombin was dissolved in a 40 mM calcium chloride solution. The amount of thrombin in the adhesive is 100 U / ml. For a fast-acting adhesive, which is applied, for example, by spraying on the wound area, a thrombin concentration of 100 U / ml in the calcium chloride solution will suffice. For a slow adhesive to be used, for example, to fill the cavity after tooth extraction or to seal the cavity after the pituitary gland is removed, the thrombin solution is further diluted to a final concentration of 25 U / ml by adding more calcium chloride solution.
Příprava roztoku Reptilase je obdobná, jako příprava roztoku thrombinu. Množství Reptilase však činí přibližně 2 U/ml.The preparation of the Reptilase solution is similar to the preparation of the thrombin solution. However, the amount of Reptilase is approximately 2 U / ml.
Klinická zprávaClinical report
Pacient, věk 21 let, muž trpící silným sklonem ke krvácení způsobeným získaným inhibitorem proti thrombinu. Tento problém nelze vysvětlit žádnou přidruženou chorobou (t.j. nádorovým onemocněním nebo autoimunní chorobou). Laboratorní test, potvrzený dvěma externími laboratořemi ukazuje, že pacient má vysokou hladinu antithrombinových protilátek IgG. V posledním roce měl opakované záchvaty ledvinové koliky, způsobené velkým kamenem v levé ledvinové pánvičce. Byla plánována elektivní lithotripsie ultrazvukem. Na základě techniky, že IgG se váže k afinitnímu sloupci s proteinem A, byl pacient podroben imunosupresivnimu léčení, spojenému s extrakorporální imunoadsorpcí. Po osmi léčebných cyklech, při nichž bylo 60 1 pacientovy plazmy zpracováno průchodem přes sloupec s proteinem A, klesl titr inhibitoru o 98 %, což bylo stanoveno změřením thrombinové doby (TT) normální spojené plazmy s plazmou pacienta před a po čištění na afinitním sloupci. Nicméně, hodnoty TT, jakož i PT a APTT se prodloužily. V této době se ledvinový kámen přemístil k trubici močové a způsobil úplné zablokování ledviny doprovázené hydronefrózou. Pacient byl podroben 10 dalším cyklům imunoadsorpce (přibližně 80 1 plazmy), po níž následovala intenzivní plazmafereze (přibližně 50 1) a infuze s vysokou dávkou imunoglobulinu (2 g/kg). V tomto okamžiku poklesla hladina inhibitoru thrombinu na 0,5 %. Hodnota PTT poklesla na 47 s (proti 85 až 90 s před léčbou) a hodnota TT byla 35 s (ve srovnání s 90 s před léčbou a 27 s u normální kontroly). Bylo rozhodnuto odstranit kámen chirurgicky za použití biologického lepidla (kryoprecipitátového lepidla), vyrobeného z kryoprecipitátu a velkého množství (200 U/ml) thrombinu. Za použití této směsi dochází po nástřiku k okamžité gelaci. U pacienta však ke gelaci nedošlo a lokální hemostázy bylo dosaženo sešitím. Po skončení chirurgického zákroku vypadala rána jako suchá. Nicméně, po 6 hodinách začal pacient krvácet z chirurgické drenáže.Patient, 21 years old, man suffering from a strong bleeding tendency caused by an acquired thrombin inhibitor. This problem cannot be explained by any associated disease (i.e., cancer or autoimmune disease). A laboratory test, confirmed by two external laboratories, shows that the patient has a high level of anti-thrombin IgG antibodies. Over the past year he has had repeated attacks of kidney colic, caused by a large stone in the left kidney pelvis. Elective lithotripsy by ultrasound was planned. Based on the technique that IgG binds to the protein A affinity column, the patient was subjected to immunosuppressive treatment associated with extracorporeal immunoadsorption. After eight treatment cycles in which 60 L of patient plasma was processed by passing through the protein A column, the inhibitor titer decreased by 98% as determined by measuring the thrombin time (TT) of the patient's normal pooled plasma before and after purification on the affinity column. However, TT values as well as PT and APTT were prolonged. At this time, the kidney stone moved to the urethra and caused complete blockage of the kidney accompanied by hydronephrosis. The patient was subjected to 10 additional cycles of immunoadsorption (approximately 80 L plasma), followed by intensive plasmapheresis (approximately 50 L) and a high dose immunoglobulin (2 g / kg) infusion. At this point, the level of thrombin inhibitor decreased to 0.5%. PTT decreased to 47 seconds (versus 85 to 90 seconds before treatment) and TT was 35 seconds (compared to 90 seconds before treatment and 27 seconds for normal control). It was decided to remove the stone surgically using a biological adhesive (cryoprecipitate adhesive) made of cryoprecipitate and a large amount (200 U / ml) of thrombin. Using this mixture, immediate gelation occurs after injection. However, there was no gelation in the patient and local hemostasis was achieved by suturing. The wound looked dry after the surgery. However, after 6 hours the patient started bleeding from surgical drainage.
-8CZ 280540 B6-8EN 280540 B6
Byla provedena imunoadsorpce 10 1 plazmy, ale bez jakéhokoliv účinku na krvácení, které se ještě zvětšilo.Immunoadsorption of 10 L of plasma was performed, but without any effect on the bleeding, which increased.
Pacient byl reoperován, aby se zjistil zdroj krvácení. Nebylo zjištěno žádné operační krvácení, nýbrž difuzní krvácení z celého povrchu rány. Nyní byla na ránu nastříknuta směs kryoprecipitátu a Reptilase (2 U/ml; Defibrase). Nastříknutá směs ihned vytvořila sraženinu, povrch rány se zakalil a krvácení ustalo. Pacient byl dalších 5 dnu podroben imunoadsorpčnímu léčení, při němž nedocházelo k žádnému krvácení. Tato zkouška jasně demonstruje výhody použití proteasy z hadího jedu jako složky B tkáňového lepidla podle vynálezu.The patient was reoperated to determine the source of bleeding. No surgical bleeding was found, but diffuse bleeding from the entire wound surface. A mixture of cryoprecipitate and Reptilase (2 U / ml; Defibrase) was now injected onto the wound. The injected mixture immediately formed a clot, the wound surface became cloudy and the bleeding stopped. The patient was subjected to immunoadsorption treatment for a further 5 days with no bleeding. This assay clearly demonstrates the advantages of using a snake venom protease as component B of the tissue adhesive of the invention.
Claims (7)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/EP1991/001850 WO1993005822A1 (en) | 1991-09-27 | 1991-09-27 | Tissue glue prepared by using cryoprecipitate |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ294292A3 CZ294292A3 (en) | 1994-02-16 |
| CZ280540B6 true CZ280540B6 (en) | 1996-02-14 |
Family
ID=8165612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS922942A CZ280540B6 (en) | 1991-09-27 | 1991-09-27 | Tissue adhesive and process for preparing thereof |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2668762B2 (en) |
| AT (1) | ATE200631T1 (en) |
| AU (1) | AU648198B2 (en) |
| BR (1) | BR9203763A (en) |
| CA (1) | CA2079077C (en) |
| CZ (1) | CZ280540B6 (en) |
| DE (1) | DE69231791T2 (en) |
| ES (1) | ES2155437T3 (en) |
| FI (1) | FI924306A (en) |
| HU (2) | HUT67051A (en) |
| IL (1) | IL103118A (en) |
| NO (1) | NO316155B1 (en) |
| SK (1) | SK294292A3 (en) |
| WO (1) | WO1993005822A1 (en) |
| ZA (1) | ZA927360B (en) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2117058A1 (en) * | 1991-09-05 | 1993-03-18 | Daphne C. Tse | Topical fibrinogen complex |
| ITMI20021917A1 (en) * | 2002-09-10 | 2004-03-11 | New Dawn Consultores E Servicos L Da | ACTIVATOR FOR THE FORMATION OF PLASTIC GEL, PLASMA GEL POOR OF PLATES OR PLASMA GEL RICH IN PLATES. |
| EP2011524A1 (en) | 2007-07-02 | 2009-01-07 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Fibrin glue with a visualization agent |
| EP2034010A1 (en) | 2007-08-30 | 2009-03-11 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Compositions suitable for repair and/or treatment of injured spinal tissue |
| ES2438491T3 (en) | 2008-09-22 | 2014-01-17 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Implantable device comprising a substrate pre-coated with stabilized fibrin |
| CA2787883C (en) | 2010-01-28 | 2019-02-19 | Erez Ilan | Method for improved fibrin sealing |
| IL213864A0 (en) | 2011-06-30 | 2011-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Method for removing a lytic enzyme from a heterogeneous mixture |
| US10130346B2 (en) | 2012-07-24 | 2018-11-20 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Device and method for the application of a curable fluid composition to a bodily organ |
| CN105007829B (en) | 2012-12-30 | 2018-06-01 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | For curable fluids composition to be administered to the apparatus and method of a part for organ |
| USD754325S1 (en) | 2013-06-06 | 2016-04-19 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Device of a curable fluid composition to a bodily organ |
| IL230150A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One component fibrin glue comprising zymogens |
| IL230151A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One component fibrin glue comprising a polymerization inhibitor |
| IL231230A0 (en) | 2014-02-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Fibrinogen formulation |
| IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Device and method for preparing and administering one-component fibrin sealant |
| IL234246A0 (en) | 2014-08-21 | 2014-11-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Stabilized thrombin |
| EP3258945B1 (en) | 2015-02-16 | 2020-10-07 | Nayacure Therapeutics Ltd. | Modified blood clots |
| IL247821A0 (en) | 2016-09-14 | 2017-01-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Sealant formulations and uses thereof |
| IL249725A0 (en) | 2016-12-22 | 2017-03-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Hemostatic composition comprising an anion exchanger and a calcium salt |
| IL263679A (en) * | 2018-12-12 | 2019-03-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Kits, methods, and ingredients for preventing tissue adhesion |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT359652B (en) * | 1979-02-15 | 1980-11-25 | Immuno Ag | METHOD FOR PRODUCING A TISSUE ADHESIVE |
| ATE20824T1 (en) * | 1981-06-25 | 1986-08-15 | Serapharm Gmbh & Co Kg | ENRICHED PLASMA DERIVES TO SUPPORT WOUND CLOSURE AND HEALING. |
| US4627879A (en) * | 1984-09-07 | 1986-12-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Fibrin adhesive prepared as a concentrate from single donor fresh frozen plasma |
| DE3622642A1 (en) * | 1986-07-05 | 1988-01-14 | Behringwerke Ag | ONE-COMPONENT TISSUE ADHESIVE AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
| EP0341007B1 (en) * | 1988-05-02 | 1994-09-14 | Project Hear | Surgical adhesive material |
| FR2650508A1 (en) * | 1989-08-01 | 1991-02-08 | Fondation Nale Transfusion San | PASTEURIZED ADHESIVE FOR JOINING HUMAN OR ANIMAL TISSUES |
-
1991
- 1991-09-27 CZ CS922942A patent/CZ280540B6/en unknown
- 1991-09-27 SK SK2942-92A patent/SK294292A3/en unknown
- 1991-09-27 WO PCT/EP1991/001850 patent/WO1993005822A1/en active Application Filing
-
1992
- 1992-09-02 ES ES92114942T patent/ES2155437T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-02 AT AT92114942T patent/ATE200631T1/en active
- 1992-09-02 DE DE69231791T patent/DE69231791T2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-09 IL IL10311892A patent/IL103118A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-09-22 AU AU25288/92A patent/AU648198B2/en not_active Expired
- 1992-09-24 CA CA002079077A patent/CA2079077C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-09-25 FI FI924306A patent/FI924306A/en unknown
- 1992-09-25 NO NO19923737A patent/NO316155B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-09-25 ZA ZA927360A patent/ZA927360B/en unknown
- 1992-09-25 BR BR929203763A patent/BR9203763A/en not_active Application Discontinuation
- 1992-09-25 HU HU9203070A patent/HUT67051A/en unknown
- 1992-09-28 JP JP28112592A patent/JP2668762B2/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-30 HU HU95P/P00739P patent/HU211631A9/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2079077A1 (en) | 1993-03-28 |
| AU2528892A (en) | 1993-04-01 |
| DE69231791T2 (en) | 2001-11-22 |
| CZ294292A3 (en) | 1994-02-16 |
| HUT67051A (en) | 1995-01-30 |
| NO923737D0 (en) | 1992-09-25 |
| ATE200631T1 (en) | 2001-05-15 |
| DE69231791D1 (en) | 2001-05-23 |
| ES2155437T3 (en) | 2001-05-16 |
| JPH05194263A (en) | 1993-08-03 |
| FI924306A0 (en) | 1992-09-25 |
| SK294292A3 (en) | 1994-06-08 |
| NO316155B1 (en) | 2003-12-22 |
| JP2668762B2 (en) | 1997-10-27 |
| IL103118A (en) | 1996-11-14 |
| FI924306A (en) | 1993-03-28 |
| WO1993005822A1 (en) | 1993-04-01 |
| IL103118A0 (en) | 1993-02-21 |
| CA2079077C (en) | 1999-11-30 |
| HU9203070D0 (en) | 1992-12-28 |
| ZA927360B (en) | 1993-05-03 |
| NO923737L (en) | 1993-03-29 |
| AU648198B2 (en) | 1994-04-14 |
| BR9203763A (en) | 1993-04-20 |
| HU211631A9 (en) | 1995-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0534178B1 (en) | Improved tissue glue prepared by using cryoprecipitate | |
| CZ280540B6 (en) | Tissue adhesive and process for preparing thereof | |
| US5883078A (en) | Hemostyptic and tissue adhesive | |
| RU2130946C1 (en) | Method of preparing biological adhesive made of concentrated coagulating factors by salting out | |
| RU2143924C1 (en) | Method for utilization of fibrin sealing material, method of preparing composition, compositions, and kits | |
| JP2511462B2 (en) | One-component tissue adhesive and method for producing the same | |
| US5260420A (en) | Concentrate of thrombin coagulable proteins, the method of obtaining same and therapeutical use thereof | |
| US5290918A (en) | Process for the obtention of a biological adhesive made of concentrated coagulation factors by acidic precipitation | |
| CA2159469C (en) | Two component fibrin glue | |
| JPH07508275A (en) | Thrombin blood fraction used in medical procedures | |
| US8741846B2 (en) | Storage-stable, functionally intact fibrinogen | |
| WO1992013495A1 (en) | Fibrinogen based adhesive | |
| JP4468577B2 (en) | Completely recombinant tissue sealant composition | |
| US20120156284A1 (en) | Enhanced biological autologous tissue adhesive composition and methods of preparation and use | |
| JPH02129224A (en) | Preparation of fibrin | |
| Aronson | Factor IX concentrates |