CZ2002928A3

CZ2002928A3 - Taxanová proléčiva

Info

Publication number: CZ2002928A3
Application number: CZ2002928A
Authority: CZ
Inventors: Nnochiri N. Ekwuribe; Tatyana A. Dyakonov; Christopher H. Price
Original assignee: Nobex Corporation
Priority date: 1999-09-13
Filing date: 2000-09-07
Publication date: 2002-09-11
Also published as: NO20021213L; NZ517681A; MXPA02002712A; JP2003509385A; WO2001019406A2; BR0013948A; CA2384645A1; PL354261A1; NO20021213D0; CN1390143A; US6713454B1; HUP0204110A2; US7119074B2; HUP0204110A3; RU2002109595A; WO2001019406A3; IL148558A0; KR20020059398A; AU7575600A; US20040253206A1

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se obecně týká konjugátů taxan-oligomer a metod pro přípravu a použití těchto konjugátů. Konjugáty taxan-oligomer vynálezu jsou proléěivy, která jsou za normálních fyziologických podmínek hydrolyzována za vzniku terapeuticky aktivních taxanů, jako jsou například paciitaxei nebo docetaxel. Konjugáty taxan-oligomer mají zlepšené charakteristiky rozpustnosti, zleplšenou orální biodostupnost a zlepšený farmakologický profil. Předkládaný vynález se rovněž týká farmakologických prostředků zahrnujících konjugáty taxan-oligomer a metody přípravy a použití těchto konjugátů taxan-oligomer a farmakologických prostředků.

Dosavadní stav techniky

Paciitaxei (Taxol) je přírodní diterpenový produkt, který byl izolován z tichomořského tisu (Taxus brevifolia}. Wani et al. poprvé izolovali paciitaxei v roce 1971 pomocí rentgenových krystalografických metod. Paciitaxei je komplexní diterpen, nesoucí taxanový kruh s čtyřčlenným oxetanovým kruhem a postranním esterovým řetězcem na pozici C-13. Paciitaxei má strukturní vzorec I

(I) .4* • · • · ···· · · · · • · · · · · · • · · · · · · ·

Bylo zjištěno, že paclitaxel je vhodný pro klinické použití při léčbě refraktemího karcinomu ovaria v US. (Markman, 1991; McGuire et al, 1989). Bylo rovněž zjištěno, že paclitaxel je vhodný pro léčbu karcinomu prsu (Holmes et al., 1991). Dále, paclitaxel je kandidátem pro léčbu nádorů kůže (Einzig et al.), hlavy a krku (Forastire et al., 1990). Paclitaxel je rovněž užitečný v léčbě polycystických ledvin (Wo et al, 1994), v léčbě karcinomu plic a malárie.

Paclitaxel zprostředkovává svůj protinádorový efekt tím, že snižuje kritickou koncentraci tubulinu, který je nepostradatelný pro tvorbu mikrotubulů. Mikrotubuly jsou polymery tubulinu v dynamické rovnováze s tubulinovými heterodimery, které jsou složeny za a β proteinových podjednotek. Paclitaxel posouvá rovnováhu směrem ktvorbě mikrotubulů. Paclitaxelem indukované mikrotubuly jsou neobyčejně stabilní, tudíž zabraňují dynamické reorganizaci sítě mikrotubulů. Výsledkem jsou svazky mikrotubulů, které se tvoří ve všech fázích buněčného cyklu, jako i početné abnormální mitotické figury, které nejsou asociovány s centrioly.

Paclitaxel vstoupil do první fáze klinických pokusů v roce 1983, ale okamžitě se objevily problémy s lékovou formou, související s jeho nerozpustností ve vodě. Tato nesnáz byla částečně překonána lékovou formou Paclitaxelu jako emulze s Cremophor EL ®. Protože paclitaxel musí být podáván v relativně vysokých dávkách, je potřeba velkého množství Cremophor EL ®. Když je podáván intravenózně, tato léková forma způsobuje vazodilataci, dechové potíže, letargii, hypertenzi a smrt, a je rovněž zodpovědná za alergické reakce po podání paclitaxelu u bdí. Je tudíž potřeba prostředku pro dopravování pacbtaxelu, který má zlepšenou rozpustnost ve vodě a tudíž bude možné se vyhnout takové lékové formě pacbtaxelu, která by obsahovala potenciálně alergogenní emulze.

Snaha překonat alergické problémy související s lékovými formami pacbtaxelu byla zaměřena na prodlužování iníuzního času a premedikaci pacientů imunosupresivními látkami, jako například glukokortikoidy a antihistaminika. Tyto látky mají nežádoucí účinky, a navíc představují další zátěž již tak finančně náročné léčby nádorů. Dále, zatím co jsou tyto látky schopny snižovat incidenci a závažnost hypersenzitivní reakce, nejsou úplně protektivní (Rowinsky et al., 1992). Je tudíž potřeba prostředku pro dopravování pacbtaxelu, který nevyžaduje prodloužené infuzní podávání a brání alergickým reakcím spojeným s podáváním emulzních přípravků a tudíž bude možné se vyhnout podávání výše uvedené podpůrné léčby.

·· ·· • · · · • ·

Několik skupin vědců zkoumalo syntézu proléěiv paclitaxelu (Taylor, 1994; Kingston, D.G., 1991). Proléěiva jsou neaktivní nebo částečně aktivní chemické deriváty léčiv, která jsou metabolizována za vzniku farmakologicky aktivního léčiva. Studie byly zaměřeny na syntézu paclitaxelových analog, kde 2- a/nebo 7-pozice jsou derivatizovány skupinami, které zvyšují rozpustnost ve vodě. Na základě tohoto snažení byla vyvinuta proléěiva, která jsou rozpustná ve vodě lépe než rodičovská sloučenina, zatímco po aktivaci mají cytotoxické vlastnosti paclitaxelu. Například, zvýšené rozpustnosti ve vodě bylo dosaženo derivatizací paclitaxelu vysokomolekulámími polyethylenglykolovými (PEG) polymery (Viz Greenwald et al., 1996; Greenwald et al., 1995). Nicméně, zatímco tyto derivatizované sloučeniny paclitaxelu mají zlepšenou rozpustnost ve vodě, kvůli vysoké molekulové hmotnosti PEG, která je potřebná pro dosažení adekvátní rozpustnosti ve vodě, je nutné podávat proporcionálně menší dávku proléěiva. Je tudíž potřeba taxanového proléěiva, které zlepší rozpustnost paclitaxelu, aniž by drasticky zvyšovalo molekulovou hmotnost sloučeniny paclitaxelu.

Účinné využití proléěiva, hlavně taxanového proléěiva, vyžaduje, aby byly vlastnosti proléěiva vhodně vyrovnané, čímž se dosáhne vhodného farmakokonetického profilu. Je žádoucí, aby bylo proléěivo hydrofilní, aby bylo možné zlepšit lékovou úpravu proléěiva. Na druhou stranu, proléěivo musí být dostatečně hydrofobní, aby se zabránilo interakci proléěiva s biologickými membránami. Je tudíž potřeba připravit taxanová proléěiva, které se vyznačují všemi výše uvedenými požadavky pro terapeuticky účinnou látku.

Podstata vynálezu

Autoři předkládaného vynálezu překvapivě a neočekávaně objevili sloučeniny typu taxan-oligomer a sole těchto sloučenin (společně zde uvedené jako „taxanová proléěiva“), které významně zvyšují rozpustnost ve vodě taxanových léčiv, aniž by drasticky zvyšovaly jejich molekulovou hmotnost. Taxanová proléěiva popsaná zde eliminují potřebu mikroemulzních lékových forem za použití Cremophor EL ®.

Předkládaný vynález obecně představuje taxanová proléěiva, která obsahují alespoň jeden taxan, napojen pomocí hydrolyzovatelné vazby na jeden nebo více polyethylenglykolových (PEG) oligomerů. PEG oligomery se skládají z nevětveného nebo větveného polyethylenglykolového oligomerů, nesoucího od 1 do 25 polyethylenglykolových jednotek a případně obsahují sůl tvořící skupinu. S výhodou, PEG oligomer obsahuje sůl tvořící skupinu, jako například amoniový radikál nebo karboxylát.

• · · · • ·

S výhodou je v předkládaném vynálezu jako taxanová složka taxanového proléčiva použit paclitaxel nebo jeho analog, který má některé a nebo všechny terapeutické aktivity paciitaxelu. Jiný s výhodou použitý taxan je docetaxel.

Taxanové proléčivo může být derivatizováno tolika PEG oligomery, kolik je míst na taxanu pro nasednutí těchto oligomerů. Například, paclitaxel má 3 nasedací místa (hydroxylové skupiny) a může být tudíž derivatizován 1 až 3 oligomery. Podobně, docetaxel má 4 nasedací místa (hydroxylové skupiny) a může být tudíž derivatizován 1 až 4 oligomery. Jiným hlediskem je, že se taxanová proléčiva podávají orálně a poskytují terapeuticky efektivní dávku taxanu v krevním oběhu. Dále, orálně podávané deriváty umožňují dosáhnout terapeuticky efektivní dávky taxanu v cílovém orgánu nebo tkáni.

Předkládaný vynález rovněž představuje farmakologický prostředek obsahující taxanová proléčiva vynálezu ve spojem s farmakologický přijatelným nosičem. Takovéto farmakologické prostředky jsou ve formách vhodných pro orální podání, a jsou v dávkovačích formách vybraných ze skupiny: tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze a elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy. Dalším hlediskem je, že předkládaný vynález představuje taxanové proléčivo, které obsahuje taxan spojený hydrolyzovatelnou vazbou s jedním nebo více polyethylenglykolovými oligomery vybranými ze skupiny sloučenin obecného vzorce II

II I

C—(CHj)s—N— CHjCHjÍOCjH^OCHj σο kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce III

(III) · ······ · · « • · ·· · · · · ···· ···· ·· ·*· ·· ···· kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce IV

O O R

II II h I 'C— (CH^—C—N—- CHjCH^OC^X-N-C^CH^O^H^OCHj (iv>

kde n je od 1 do 6, m a r jsou oba na sobě nezávisle od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce V

OO R

II II h I •C—(CHj)j—C—N— (V) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce VI

II II h I .

—c—(CHj)j—c—N—(CHiJj—N-CHjCH/OCzH^^NHjOr ^,VI) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, X je negativní iont, s výhodou chloro-, bromo-, iodo-, fosfát, acetát, uhličitan, sulfát, tosylát a mesylát a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

• * ·· · · · · · · · » 4 »*·· ··· ··« • · fc···· 9 · • · · · · fc ·· ··· ·· ··« obecného vzorce VII o

II II •c-ích^—cŤ

Η I , •N—(CHjk—N-C^CHjíOCjIUlmNHR (vii) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R¹ a R² jsou nezávisle na sobě alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce VIII nižší

O Q O

II II h II

-C-fCHj)—c—N—•CH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCH₂-*“C—NH(CH2)pN(CH3)₂ (VIII) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25;

obecného vzorce IX o

II o

II —C-(CH₃)„(OC₂H4]_mO(CH₂)_ř-C-O-X?

kde nap jsou oba na sobě nezávisle od 1 do 6, m je od 2 do 25 a X⁺ je kladně nabitý iont, s výhodou vodík, sodík, kalium, vápník, lithium a amoniové sole;

(ix)

4 « · · • · obecného vzorce X

R¹

I (CHíVN-CHjCHjÍOCí^OCHj

R² (X) kde n je od 1 do 5, m je od 2 do 25 a R¹ a R² jsou nezávisle na sobě nižší alkyl, s výhodou nezávisle vybrány ze skupiny: vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl; a obecného vzorce XI

kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25, X' je negativní iont, s výhodou chloro, bromo, iodo, fosfát, acetát, uhličitan, sulfát, tosylát a mesylát.

Kterýkoliv z výše uvedených oligomerů obecného vzorce II až XI vhodně obsahuje sůl tvořící skupinu. S výhodou použité sůl tvořící skupiny jsou amoníový radikál, vodík, sodík, kalium, lithium, vápník, karboxylát, chlorid, bromid, jodid, fosfát, sultát a mesylát.

S výhodou použité taxanové složky taxanových proléčiv jsou paclitaxel a docetaxel. Taxanem může být i jiný analog paclitaxelu, který má některé a nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu, nebo má dokonce vyšší aktivitu ve srovnání s paclitaxelem. Taxan je derivatizován velkým počtem PEG oligomerů, který ale nepřesahuje počet nasedacích míst pro tyto oligomery. Tudíž, tam, kde taxanovou složkou taxanového proléčiva je paclitaxel a

• · 0 0 0 0 • 0 •0 00 • 0 0 0 · *

0 0 ··· • 0 0 0 0 0

nebo docetaxel, může být tento derívatizován 1 až 3 PEG oligomery obecného vzorce II až XI.

Předkládaný vynález rovněž představuje farmakologický prostředek obsahující taxanové proléčivo obecného vzorce II až XI a farmakologický přijatelný nosič. Farmakologický prostředek je ve formě vhodné pro orální podávání a může mít různé farmakologické lékové formy, jako například tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze a elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy.

Předkládaný vynález rovněž představuje metodu léčby savčího organizmu trpícího nemocí odpovídající na léčbu paclitaxelem, přičemž uvedená metoda zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství taxanového proléčiva, obsahujícího taxan, který je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen na jeden a nebo více polyethylenglykolových oligomerů nesoucích 2 až 25 polyethylenglykolových podjednotek a případně obsahujícího sůl tvořící skupinu; a/nebo jeho odpovídající sůl.

Předkládaný vynález rovněž představuje metodu léčby savčího organizmu trpícího nemocí odpovídající na léčbu taxanem, jako například odpovídajícího na léčbu paclitaxelem nebo docetaxelem, přičemž uvedená metoda zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství taxanu derivatizovaného kteroukoliv sloučeninou obecného vzorce I až XI. Savčím organizmem je s výhodou člověk.

V jedné z metod léčby je taxanové proléčivo podáváno orálně, čímž je dosaženo terapeuticky účinné dávky taxanu v krevním oběhu. V jiné modifikaci je taxanové proléčivo podáváno parenterálně, čímž je dosaženo terapeuticky účinné dávky taxanu v cílových orgánech a/nebo tkáních. V dalším případě je taxanové proléčivo podáváno orálně, čímž je dosaženo terapeuticky účinné dávky taxanu v cílových orgánech a/nebo tkáních. Dále, taxanové proléčivo může být podáváno ve spojem s farmakologický přijatelným nosičem.

Dále, nemoc odpovídající na léčbu taxanem, léčená podle léčebných metod předkládaného vynálezu, je ze skupiny zahrnující: benigní a maligní nádory, hepatocelulámí karcinom, urogenitální karcinomy, metastázy v játrech, gastrointestinální tumory, lymfomy, leukemie, melanom, Kaposiho sarkom a karcinomy pankreatu, ledviny, děložního čípku, prsu, ovaria, mozku a prostaty. V jednom případě zahrnuje nemoc karcinom ovaria. V tomto případě je taxanové proléčivo případně podáváno společně s cis-platinou, bud’ simultánně a nebo po sobě. V jiném případě zahrnuje nemoc karcinom prsu, a taxanové proléčivo je případně podáváno společně s doxorubicinem, buď simultánně a nebo po sobě.

Použité definice

Jak je používáno zde, termín „PEG“ je použit pro nevětvené nebo větvené oligomery polyethylenglykolu, a rovněž zahrnuje polyethylenglykolové oligomery, které jsou modifikovány tak, že obsahují skupiny, které neruší amfifilní vlastnosti takovýchto oligomerů, například a bez omezení, alkyl, nižší alkyl, aryl, aminoalkyl a aminoaryl. Název „PEG podjednotka“ představuje jednu polyethylenglykolovou jednotku, tj. -(GH2CH2O)-.

Jak je používáno zde, termín „nižší alkyl“ představuje nevětvený a nebo větvený CH řetězec, nesoucí 1 až 8 uhlíkových atomů.

Jak je používáno zde, názvy, jako například „nehydrolyzovatelný“, jsou použity pro vazby, které není možné hydrolyzovat za normálních fyziologických podmínek, jako i vazby, které nepodléhají rychlé hydrolýze za normálních fyziologických podmínek, jako například karbamátové a amidové vazby. Termín „hydrolyzovatelný“ je používán pro vazby, které jsou za běžných fyziologických podmínek hydrolyzovány. V nejvýhodnějším případě vynálezu je u normální populace hydrolyzováno 50 % taxanového proléčiva za 4 hodiny po intravenózním podání.

„Terapeuticky efektivní množství“ je takové množství, které zabraňuje, oddaluje nebo snižuje závažnost začátku onemocnění; a nebo množství nutné pro zastavení nebo zmenšení závažnosti probíhajícího onemocnění; a rovněž zahrnuje množství nutné k podpoře normálních fyziologických funkcí.

Jak je používáno zde, „farmaceuticky přijatelná“ složka (jako například sůl, nosič, excipient nebo rozpouštědlo) formy léku podle předkládaného vynálezu, je složka, která 1) je slučitelná s jinými složkami formy léčiva, ve kterém je kombinovaná s taxanovým proiéčivem předkládaného vynálezu, aniž by byla snížena biologická aktivita taxanového proléčiva;

2) je vhodná pro použití na zvířeti (tj. člověku) bez nežádoucích vedlejších účinků (jako například toxicita, podráždění a alergické reakce). Vedlejší účinky jsou „nežádoucí“, když jejich riziko převáží blahodárné účinky způsobené farmaceutickou sloučeninou. Příklady farmaceuticky přijatelných složek zahrnují, bez omezení, jakýkoliv standartní farmaceutický nosič, jako například fosfátový pufr (PBS), vodu, emulze jako například emulze oleje ve vodě, mikroemulze a různé typy zvlhčujících látek.

Jak je použito zde, termín „taxan“ je používán pro skupinu sloučenin nesoucích strukturu složenou ze tří základních kruhů, které zahrnují kruh A, B a C paclitaxelu » · · · · φ φ

Φφφφ

a zahrnují, bez omezení, paclitaxel a paclitaxelová analoga, která mají některé a nebo všechny protinádorové aktivity paclitaxelu.

Stručný popis obrázků

Obr. 1 představuje přeměnu acetátu (sloučenina 4) (viz příklady níže) na paclitaxel za dobu 26 dnů při pokojové teplotě, přičemž acetát (sloučenina 4) byl rozpuštěn ve vlhkém acetonitrilu. Obr. 1 ukazuje, že acetát (sloučenina 4) je hladce kvantitativně přeměněn na paclitaxel, bez vzniku významných vedlejších produktů, jak bylo zjištěno pomocí HPLC analýzy.

Obr. 2 znázorňuje in vitro hydrolýzu acetátu (sloučenina 4) v heparinizované krysí plazmě a ukazuje, že většina taxanového proléčiva v průběhu 2 hodin rychle hydrolyzuje, za vzniku volného paclitaxelu.

Detailní popis vynálezu

Pro jednoduchost je následující detailní popis vynálezu rozdělen do oddílů. Názvy jednotlivých oddílů neomezují oblast zájmu předkládaného vynálezu.

Proléčiva typu taxan-oligomer

Předkládaný vynález představuje proléčiva složená z taxanu a oligomerů (rovněž nazývaná „taxanová proléčiva“). Taxanová proléčiva předkládaného vynálezu obecně obsahují taxanovou složku a složku PEG oligomerů. Taxanová proléčiva jsou obecně užitečná pro umožnění přípravy hydrofilní formy taxanů, orální podávání taxanů a dopravování taxanů do cílových orgánů a tkání.

Taxany

S výhodou použité taxany jsou například paclitaxel a docetaxel, které, jak je známo, jsou nepostradatelné pro zvýšení tvorby mikrotubulů. Struktura paclitaxelu a docetaxelu je známá; nicméně pro jednoduchost je strukturní vzorec paclitaxelu uveden v odstavci dosavadní stav techniky a strukturní vzorec docetaxelu je uveden níže

Ve výhodném uspořádání je taxanem taxanového proléěiva analog paclitaxelu. Je známo mnoho analogů paclitaxelu, které se vyznačují více-méně protinádorovou aktivitou ve srovnání se samotným paclitaxelem. Předkládaný vynález uvažuje použití jakéhokoliv analoga paclitaxelu, který nemá zcela eliminovanou protinádorovou aktivitu.

V jedné skupině analog je postranní řetězec N-benzoylu nahrazen jinými acylovými skupinami. Jeden z těchto analog, docetaxel (Taxotere ®) má v místě N-benzoylu paclitaxelu N-t-butoxykarbonylovou skupinu a rovněž postrádá 10-acetátovou skupinu. Je známo, že docetaxel je přibližně 5-krát aktivnější než paclitaxel proti paclitaxel-rezistentním buňkám. Docetaxel je v současné době klinicky zkoušen ve Francii a USA.

Je rovněž známo, že redukce C-9 karbonylové skupiny na α-OH skupinu způsobuje mírný nárůst tubulin-polymeračm aktivity. Navíc, je rovněž známo, že produkt přestavby

♦ to ·« ♦ ♦ · · • · to · • · •tototo ··«· • to • ♦to vyznačující se tím, že jeho cyklopropanový kruh přemosťuje sedmou a osmou pozici, je stejně cytotoxický jako paclitaxel.

Další vhodné taxany pro použití vtaxanových proléčivách předkládaného vynálezu jsou deriváty paclitaxelu se strukturními variacemi kolem „severního obvodu“ paclitaxelové molekuly. „Severní obvod“ zahrnuje uhlíky 6 až 12, s kyslíkovými funkčními skupinami na C-7 , C-9 a C-10. Mnoho těchto derivátů je známo a rovněž se ví, že tyto deriváty mají biologickou aktivitu srovnatelnou s paclitaxelem. Tak například je známo, že acylace C-7 hydroxylové skupiny, nebo její nahrazení vodíkem, nesnižuje významně aktivitu paclitaxelu. Navíc, nahrazení 10- acetoxy skupiny vodíkem způsobuje jenom nepatrné snížení aktivity.

Bylo uvedeno, že m-substituované benzoyl deriváty jsou aktivnější než jejich p-substituovaná analoga, a jsou často aktivnější než paclitaxel samotný.

Jiným paclitaxelovým analogem vhodným pro použití jako taxanové proléčivo předkládaného vynálezu je A-nor-paclitaxel. Tento analog má tubulin-polymeračm aktivitu, která je jenom 3-krát menší než aktivita paclitaxelu. Molekuly a-nor-paclitaxelu a paclitaxelu jsou si velmi podobné, což může vysvětlovat jejich podobnou tubulin-polymeračm aktivitu.

Polymery/Oligomery

Amfifilní oligomery/polymery taxanových proléěiv předkládaného vynálezu jsou buď nevětvené nebo větvené. S výhodou použité oligomery jsou složeny z 2 až 25 PEG jednotek, ještě lépe z 2 do 20 PEG jednotek, nejlépe od 2 do 15 PEG jednotek. V ideálním případě má PEG polymer 2 až 10 PEG jednotek. PEG polymer má molekulovou hmotnost ne větší než 1 000.

S výhodou má PEG polymer/oligomer obecný vzorec I

-tCH₂CH₂O)x-CH₃ ® kde X= 2 až 25

Mnohem výhodnější je, když X je od 2 do 20, ještě výhodněji od 2 do 15, nejlépe od 2 do 10. V ideálním případě je X= 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10.

*« ·· * · · · • 4

4 • 8 998 9 9999

9· 94«4

4 8 • · 8 8 9

8 9 8

8 8

8 · · « • «4 4 • · ·

4 · 4 • · 4 •« 4444

S výhodou použité PEG oligomery jsou vybrány ze skupiny skládající se ze sloučenin obecného vzorce II i i —C-tCH^N-CH_JCH₂(OCjH₄)_raOCH₃ <ⁿ⁾ kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce III o o

II II •C-ÍCH^—cR

Η I

-N—N—CHjCHjÍOCj^OCHj (III) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce IV

O

II

-C-CCHj);0

II cH

-NCH₂CH₂(OC₂H₄)_r-N-CH^COCjH^OCHj (IV) kde n je od 1 do 6, m a r jsou oba na sobě nezávisle od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce V * · 4 4 · 4« 4

(V) o? R

II II η I ,

C-ÍCHjJj-C—Ν— (CHz)^—Ν-σΗ₂εΗ₂(θε,Η₄)„ΝΗ₂ kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce VI —C-CCH^—C—N—(CHj)—N-CHjCH/OCjřL.^jLX- W kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, X' je negativní iont, s výhodou chloro-, bromo-, iodo-, fosfát, acetát, uhličitan, sulfát, tosylát a mesylát a R je nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce VII

O o

II II h •C-(CH2)—C—NN-CH₂CH₂(OC₂H4)mNHR^x (VII) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R¹ a R² jsou nezávisle na sobě nižší alkyl, s výhodou ze skupiny vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl;

obecného vzorce VIII

(VIII) «4 «V·· · 0 • 0 000 •4 0 0 « 0 0

0 000

O

II •C-CCH^r

Q

II

-cO

II

-N—CHzCH^OCj^OCHz—C—NH(CH2)pN(CH3)₂ kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, mje od 2 do 25;

obecného vzorce IX —C-ÍCH^OCjH^CXCH^-C-O-X* ^(K) kde nap jsou oba na sobě nezávisle od 1 do 6, m je od 2 do 25 a X⁺ je kladně nabitý iont, s výhodou vodík, sodík, kalium, vápník, lithium a amoniové sole;

obecného vzorce X

O R¹

II I •C-ÍCHíJj-y-CHiCHíCOCi^OCHj

I (X) kde n je od 1 do 5, m je od 2 do 25 a R¹ a R² jsou nezávisle na sobě nižší alkyl, s výhodou nezávisle ze skupiny: vodík, methyl, ethyl, propyl, isopropyl a t-butyl; a obecného vzorce XI (xi)

> · e » · ··· kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25, X' je negativní iont, s výhodou chloro, bromo, iodo, fosfát, acetát, uhličitan, sulfát, tosylát a mesylát.

Ve všech výše uvedených obecných vzorcích I až XI je počet PEG jednotek s výhodou 2 až 25, lépe 2 až 20, ještě lépe 2 až 15 a nejlépe 2 až 10. V ideálním případě je celkový počet PEG jednotek 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10. V obecných vzorcích, jako například ve vzorci IV, který obsahuje dva PEG segmenty, s výhodou použitý počet PEG jednotek, jak je uvedeno v tomto odstavci, je obsažen v jakémkoliv ze dvou PEG segmentů, nebo je rozdělen mezi oba PEG segmenty.

PEG- oligomer/polymer rovněž může obsahovat jednu nebo více sůl tvořících skupin. S výhodou použité sůl tvořící skupiny jsou amino a karboxylát. Vhodné sole rovněž zahrnují jakékoliv farmakologický přijatelné acidifikující sole pro PEG-oligomery/polymery nesoucí bazickou amino skupinu; a farmakologický přijatelné sole odvozené od farmakologický přijatelných baží pro PEG-oligomery/polymery, nesoucí například volnou karboxy skupinu. Farmakologický přijatelné sole kyseliny se připraví reakcí volné kyseliny s vhodnou zásadou. Farmakologický přijatelné zásadité sole zahrnují, například, sole alkalických kovů jako například sodík nebo draslík, alkalické sole zemin, jako například sodík nebo draslík, vápník nebo hořčík nebo alkylamoniové sole.

Paciitaxei je komerčně dostupný a je možné jej za pomoci jedné ze známých metod získat izolací z kůry Taxus brevifolia. Paciitaxei se rovněž izoluje z listů (nebo jehličí) různých druhů Taxus v množství srovnatelném s množstvím vyizolovaným z kůry Taxus brevifolia. US Patent 5 019 504 popisuje metodu tkáňových kultur pro produkci paclitaxelu. Je rovněž známo, že paciitaxei je produkován houbou Taxomyxes andreanae.

Navíc, paciitaxei je možné připravit pomocí známých syntetických metod, jako například podle Holton et al., J. Am. Chem. Soc, 116:1 597-1 598, (1994); Holton et al., J. Am. Chem. Soc, 116:1 5999-1 600, (1994); aNicolaou et al., Nátuře, 367: 630-634 (1994).

·» ··

I »4 « »·* · ···0

999· • 9 9 • · 999

9 4

9 9

9· 999

99 • · 9 9 * · ·

9 9 • · 9

99 9 9

V následujících příkladech jsou symboly a, p, m, R a R¹ a R² používány tak, jak bylo uvedeno výše u obecných vzorců I až XI.

Sloučenina obecného vzorce I

Polymery obecného vzorce I jsou komerčně dostupné a/nebo snadno syntetizovatelné.

Sloučenina obecného vzorce II

Při syntéze oligomerů obecného vzorce II —c—(CH₂)—N— CHjCiyOCjH^OCHj <>

kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, je žádoucí začít s esterem mastné kyseliny, která nese koncový uhlík s primární aminoskupinou. Tyto sloučeniny jsou komerčně dostupné.K amínoesteru v inertním rozpouštědle je přidán roztok monomethoxypolyethylenglykolu vhodné molekulové hmotnosti, který nese koncový uhlík s aldehydovou skupinou. Poté je přidán roztok borohydrátu sodného. Produkt je purifikován po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografii.

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_nNH₂ + O=CHCH₂(OC₂H4)_mOCH3

Íl.THF

2. NaBBL,

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_nNHCH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCH₃ kde n a m jsou jak bylo uvedeno výše.

Někdy je výhodné alkylovat sekundární amino skupinu za tvorby kýženého oligomerů nesoucího terciární amin. K roztoku oligomerů v inertním rozpouštědle je přidán jeden • € • »·β • 9 • 9 •

·♦ • 9 •

• * ···· ···· • 9 • 9

9 • 9999 ekvivalent alkylhalogenidu. Po extrakci rozpouštědla je produkt je purifikován pomocí sloupcové chromatografie.

CH3CH₂O₂C(CH₂)_nNHCH₂CH₂(OC₂H4)_mOCH₃ j„.

CH₃CH₂O₂C(CH₂)„N(R)CH₂CH₂(OC₂H₄)_niOCU₃

Ester je přeměněn na kyselinu přidáním ředěného roztoku hydroxidu sodného v inertním rozpouštědle při pokojové teplotě. Uvolněná kyselina je purifikována po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografií. Kyselina je připojená na léčivo po aktivaci in šitu.

• » • · • · · · • · · · • · · · · ·

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_BN(R)CH₂CH₂(OC₂H4)_m0CH₃

N.OH

HOC(O)(CH₂)_nN(R)CH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCHj

1. Léčivo - OH

2. dicyklohcxylcarbonolamid (DCCE) a

- dimethylaminopyrídin (DMAP)

Léčivo - OC(O)(CH₂)„N(R)CH₂CH₂(OC₂H4)»OCH₃

Léčivo v těchto případech může být například paclitaxel a nebo docetaxel.

Někdy je žádoucí syntetizovat léčivo-oligomer tak, že se začíná s terapeutickou sloučeninou derivatizovanou jako ester mastné kyseliny nesoucí koncový uhlík s halogenidem; a vhodným monomethoxypolyethylenglykolem, nesoucím koncový uhlík s primární amino skupinou. Polyethylenglykolové reagens je rozpuštěno v inertním rozpouštědle při pokojové teplotě. Ekvivalentní množství léčivo-halogenidu je rozpuštěno v inertním rozpouštědle a je pomalu přidáváno k roztoku polyethylenglykolu. Produkt je purifikován po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografii.

Léčivo - O₂C(CH₂)„CH₂Br + NH₂CH₂CH₂(OC₂H4)_mOCH₃ • · • · • φ

THF

Léčivo - 0₂C(CH₂)_ttCH₂NHCH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCH₃

Ester je hydrolyzován pomocí ředěného hydroxidu sodného jako v předešlé proceduře a napojen na léčivo (t.j. paclitaxel a nebo docetaxel) po in šitu aktivaci jako v předchozím příkladu.

Sloučenina obecného vzorce III

Při syntéze oligomerů obecného vzorce III

—N—(CH2^—N-CH₂CH2(OC2H₄)_biOCH3 <™>

kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl, je žádoucí začít s poloesterem dikarboxylové kyseliny alifatické sloučeniny a polyethylenem, obsahujícím amino skupinu. Při syntéze amino skupinu obsahujícího polyethylenu je k monomethylpolyethylenglykolu vhodné molekulové hmotnosti, nesoucímu terminální aldehydovou skupinu, v inertním rozpouštědle přidána alifatická sloučenina nesoucí amino skupinu na dvou koncových uhlících. Jedna amino skupina je chráněná tercbutoxykarbonylem, zatímco volný amin reaguje s aldehydovou skupinou. Produkt je purifikován po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografií. Produkt je deprotekován přidáním kyseliny trifluoroctové v inertním rozpouštědle, poté je kyselina neutralizována a produkt je purifikován po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografií.

• 4 4 · · 44 4 4 ·· 4 4

4 4 4 4 · 4 4 4 4

4 4 · 444

444 4444 44 4 44 4444 (CH3)₃C-OC(O)NH(CHj)pNH₂ + O=CHCH₂(OC₂H₄)_mOCH₃

I {CH₃)₃C-OC(0)NH(Cn₂)_pN-CHCH₂(OC₂H₄)_nlOCK₃

NH₂(CH₂)_pN=CHCHi(OC₃a,)_mOCH3

Kpoloesteru v inertním rozpouštědle je přidán roztok amino derivatizovaného polyethylenglykolu při pokojové teplotě po in šitu aktivaci kyseliny. Produkt je purifíkován po extrakci rozpouštědlem sloupcovou chromatografií. Imino skupina je redukována přidáním roztoku borohydrátu sodného a produkt je purifíkován jak bylo popsáno v předchozí proceduře.

Někdy je žádoucí alkylovat sekundární amin. Pro provedení této reakce je potřeba rozpustit oligomer v inertním rozpouštědle a přidat roztok alkylhalogenidu, rovněž v inertním rozpouštědle.

Ester je hydrolyzován, aktivován in šitu, a připojen na terapeutickou sloučeninu (t. j. paclitaxel a nebo docetaxel).

···· ·· ·· « · · · · • · · · · ·

Nn₂(CH₂)_pN=CHCH₂(OC₂H₄)„OCII₂ + CH₃CU₂O₂C(CH₂).C(O)OH ^DCC/DMAT

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_BC(O)NH(CH₂)pN=CHCH₂(OC₂H4)_mOCH₃ ^NaBltyRBr

CH₃CH₂O₂C(CH₂).C(O)NH(CH₂)pNRCHCH₂(OC₂H4)_mOCH₃ j^NaOH

HOC(CH₂)_aC(O)NH(CH₂)_pNRCHCH₂(OC₂H₄)_IBOCH₃

Léčivo - OHZDCC/DMAP

DOC(CH₂)_BC(O)NH(CH₂)_pKRCHCH₂(OC₂H₄)n₁OCH₃ kde D představuje léčivou složku konjugátu léčivo-amfifihu látka. Amfifilní lékový konjugát je přeměněn na sůl pro zlepšení rozpustnosti ve vodě jak je potřeba pomocí farmakologicky přijatelné kyseliny.

···* ···· · <

Sloučenina obecného vzorce IV

Proces syntézy oligomerů obecného vzorce IV

O

II 'C (CHji)”

O

II H

C—N—CH₂CH₂(OC₂H4)r

R

I

N^CHzC^OCaH^OCHj (IV) kde n je od 1 do 6, m a r jsou na sobě nezávislé a jsou od 2 do 25 a R je nižší alkyl; je stejný jako proces syntézy oligomerů obecného vzorce 3 stou výjimkou, že alifatické diamino skupiny jsou nahrazeny polyethylenglykoldiaminem.

Sloučenina obecného vzorce V

Při syntéze proléčiva zahrnujícího oligomer obecného vzorce V

O •c· (CHlk o R

II h I

-c—N—(CHi);—N—CHjCHjCOCjH^NHj (V) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8 a m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl; je k léčivu nesoucímu hydroxylovou skupinu v inertním rozpouštědle přidán alifatický acidanhydrid za tvorby poloesteru. Poloester je rozpuštěn v inertním rozpouštědle, je aktivován a k roztoku je přidán jeden ekvivalent polyethylenglykolu vhodné molekulové hmotnosti, ve kterém jsou terminální hydroxylové skupiny nahrazeny amino skupinami.

• « · · • · • · · · • · · • ·

Léčivo-OH +

(CH₂). o

Léčivo - 0C(O)(CHi).C(O)OH

1. 1,1'- karbonylimidizol (CDI)

2. NH₂(CH₂)_pNRCH₂(OC₂H₄)_mNHC(O)OC(CH₃)₃

3. TFA/baze kolona

Léčivo - 0C(O)(CH₂)_BC(0)NH₂CH₂CH₂(OC₂H₄)_wNH₂ kde všechny substituující skupiny (např. n, m a p) jsou, jak bylo uvedeno výše.

Sloučenina obecného vzorce VI Oligomer obecného vzorce VI ·· ·· φ· ··· · « · · · · · ♦ • · φ φ * · · • · · ♦ · · • φ · · · «•••••ΦΦ ·· Φ·· φφ φφ ♦ ♦ · · φ · · ο Η

C-CCHjj—C·

(VI) kde η je od 1 do 6, ρ je od 2 do 8, m je od 2 do 25, X' je záporný iont; je připraven tak, že se ke sloučenině obecného vzorce 5 přidá farmakologicky přijatelná kyselina za vzniku vhodné sole. Sůl zvyšuje rozpustnost amfifilního konjugátu léčiva ve vodě.

Sloučenina obecného vzorce Vil

Syntéza oligomeru obecného vzorce VII

0 R¹ ii ii h T 7 —C-(CHi)r-C—N—(CHj^—N-CH₂CH2(OC2H4)_nlNHR² (VII) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25 a R¹ a R² jsou oba na sobě nezávislé nižší alkyly; je analogická syntéze oligomeru obecného vzorce 5, stím rozdílem, že koncová aminoskupina je alkylována pomocí halogenidu s krátkým řetězcem alkylu, jako například methyl, ethyl, propyl, isopropyl nebo t-butyl, předtím než dojde k reakci s poloesterem léčiva.

(CH&COCCOjNHzíCBOpBr + NHjCBttCH^OCjHOJNHj i

(CHahCOCCOJNfí^CH^NHCHjCTjtOCiJGyjNHj

1. RBr

2. TFA

3. Bazická kolona

4. D-O_SC(CH ACOjH/DCC

Léčivo - OCíOXCHO.CíOJNHÍCH^NRCHjCEUÍOQHJ.NHR kde n, m, a R jsou jak bylo uvedeno výše.

Sloučenina obecného vzorce VIII

Při syntéze oligomeru obecného vzorce VIII

O Q il il H •C-(CH2)r~C-“No ii •C^^OCjH^OCHí— C—NH(CH₂)pN(CH₃)₂ (8) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8 a m je od 2 do 25, reaguje poloester alifatické dikarboxylové kyseliny v inertním rozpouštědle s polyethylenglykolem, který byl derivatizován amino skupinami, po in šitu aktivaci.

♦ · · to • · • · · to • · to

CH₃CH₂OC(O)(CH2)_aC(O)OH

+

NH₂CH₂CH₂(OCH₂CH₂)_eOCH₂C(O)NH(CH₂)_pN(CH₃)₂

1. DCC;2.NaOH

HOC^CCH^aC^NHCHzCHXOCHzCH^OCHzCWNHíCH^NfCHah

Amínoderivatizovaný polyethylenglykol je připraven zN-chráněné polyethylenglykolové aminokyseliny.

terč- BOCNHCH₂CH₂(OCH₂CH₂)_mOCH₂C(O)-OH + NH₂(CH₂)_PN(CH₃)₂

DCC/DMAP tert-BOCNHCH₂CH₂(OCH₂CH₂)_mOCH₂C(O)~NH(CH₂)_PN(CH₃)₂

TFA/Bazická kolona

NH₂CH₂CH₂(OCH₂CH₂)„OCH₂C(O)-NH(CH₂)_pN(CH3)2 « · « · • ·

Primární aminoskupina je deprotekovaná pomocí kyseliny trifluoroctové a bazifíkovaná předtím, než dojde k reakci s poloesterem.

Sloučenina obecného vzorce IX

Při syntéze oligomeru obecného vzorce IX ) o ?-(CH₂)_B(0C₂H₄)_n,0(CH₂)_i)-C-O-X+ kde nap jsou oba nezávisle od 1 do 6, m je od 2 do 25 a X^4- je kladně nabitý iont; je kyselina, která je reaktantem, komerčně dostupná. Někdy je potřeba připravit dikyselinu. V tomto případě je k vhodně modifikovanému polyethylenglykolovému oligomeru přidán hydrid sodný v inertním rozpouštědle a ester mastné kyseliny nesoucí halogenidovou skupinu na koncovém uhlíku. Diester karboxyiové kyseliny je hydrolyzován ředěným roztokem hydroxidu sodného a připojen na léčivo po aktivaci in šitu. Získaný produkt je separován a purifikován pomocí sloupcové chromatografie.

• * • · · « ♦ · • · « • · · · · • · · ·· ·· • to · · • · * • · ♦ to · to ·· « ♦ · · to ·

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_nBr +

HOCH₂CH₂(OC2H4)n,O(CH2)pCO₂CH₂CH₃

2NaEDTHF

CH₃CH₂O₂C(CH₂)_B(OCH₂CH₂)_n,O(CH₂)_pCO₂CH₂CH₃

NaOH

HOC(0)(CH2)_B(OCH₂CH₂)_raO(CH₂)_pC(O)OH

Léčivo - OH/CH₂C1₂

DCCZDMAP

Léčivo - 0C(0XCH₂)_n(OCHiCH₂)_mO(CH₂)_pC(O)OH kde n, map jsou jak bylo uvedeno výše.

• · · ♦ » · * « · · *♦ ·<··

Sloučenina obecného vzorce X

Při syntéze oligomerů obecného vzorce X

R¹

II I •C-ÍCHJrN-CHiCHjfOCi^XnOCHj

R¹ (X) kde ne je od 1 do 5, m je od 2 do 25 a kde R^l a R² jsou oba na sobě nezávislé nižší alkyly; se postupuje analogicky jako při syntéze oligomerů obecného vzorce 2, s tím rozdílem, že amino skupina je kvartemizovaná pomocí krátkořetězcových alifatických skupin. Navíc, methoxy skupina může nést jinou alifatickou skupinu s krátkým řetězcem (1 až 6 atomů uhlíku).

Sloučenina obecného vzorce XI

Při syntéze oligomerů obecného vzorce XI

kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25 a X je záporně nabitý iont; je k 2-fluoro-neho 4-fluoropyridinu v inertním rozpouštědle přidán monomethoxypolyethylenglykol s koncovým uhlíkem nesoucím halogenidový, tosylátový nebo mesylátový iont. Tento derivát pyridinu je precipitován, saturován vhodným rozpouštědlem a vysušen. Ke soli v inertním rozpouštědle je přidáno léčivo, jako například taxan, za přítomnosti kvarterní sůl tvořící zásady, za vzniku derivátu polyethylenglykolpyridinu.

• 0 ί

0 0 ·

· ·« ♦ » · · ► Μ·· ♦ « * · 0 • 0

0 • ♦ 00 0 0

+ Br(CHj)»CHi(OCHjCHj)niOCHj

Léčivo

(CHjJ.COCHjCH^OCHj

Napojení PEG polymeru/oligomeru na taxanovou rodičovskou sloučeninu

Oligomery jsou vhodně napojeny na taxanovou rodičovskou sloučeninu na kterékoliv hydroxylové funkční skupině taxanové rodičovské sloučeniny. V případě, že taxanovou rodičovskou sloučeninou je paclitaxel, docetaxel nebo jejich analog, jsou oligomery napojeny na jedné nebo vícero z těchto pozic: C-2' hydroxylové skupině, C-7 hydroxylové skupině a C-l hydroxylové skupině. Ve výhodném případě se vyskytuje jenom jeden oligomer, který je napojen na C-2' hydroxylovou skupinu. Odborník jistě ocení, že roztok taxanových proléčiv podle předkládaného vynálezu, kde taxan je paclitaxel, docetaxel nebo jim podobné, může obsahovat mono-, di-, a/nebo tri-substituovaná taxanová proléčiva.

PEG-oHgomery/polymery předkládaného vynálezu se napojí na taxanovou sloučeninu za vzniku taxanového proléčiva podle následující obecné syntetické procedury.

Taxanová sloučenina je rozpuštěna v organickém rozpouštědle, jako například chloroform. Pyridin, nebo jiná kvarterní sloučeniny tvořící látka se přidá do výše uvedené směsi. Aktivovaný PEG-oligomer/polymer je po kapkách přidán do reakční směsi a směs je míchána po dobu 3 až 5 hodin. Poté se reakční směs propere 1 % H2SO4 a deionizovanou vodou, usuší se přes MgSCb a zakoncentruje. Zbytek se nanese na silikagelovou kolonu, za použití vyvíjejícího činidla, například směsi chloroform-methanol (90 % - 10 %). Frakce obsahující kýžený produkt se zbírá, zakoncentruje a vysuší. Produkt je charakterizován pomocí TLC, HPLC, NMR a/nebo MS.

Farmaceutické směsi a metody použití

Farmakologické prostředky obsahující nové proléčivo jako aktivní součást mohou mít jakoukoliv známou farmakologicky přijatelnou lékovou formu, která zcela nesnižuje aktivitu taxanového proléčiva. Příklady zahrnují orální, injekční nebo intravenózní lékové formy. Každá léková forma obsahuje dostatečné množství proléčiva a farmakologicky inertních složek, jako například běžné excipienty, vehikula, plnidla, pojidla, dezintegranty, rozpouštědla, látky zvyšující rozpustnost, sladidla, přibarvovadla a mnohé další inaktivní složky, které se pravidelně objevují ve farmakologických lékových formách. Vhodné lékové formy pro orální použití zahrnují tablety, kapsule, uzavřené tobolky, gelové tobolky, pilulky, tekuté roztoky, suspenze nebo elixíry, prášky, čípky, mikropartikule aosmotické systémy. Vhodné injekční a intravenózní lékové formy zahrnují isotonické roztoky solí nebo roztoky dextrózy, obsahující vhodné pufry a konzervační látky. Mnohé takovéto formy a vehikula, a dlouhé seznamy inaktivních součástí vhodných pro ně, jsou dobře známy a jsou uvedeny • to to·«· ··

• to v učebnicích (například The Pharmaceutical Codex: Principles and Practice of th

Pharmaceutics, 12 edition, 1994).

Taxanová proléěiva předkládaného vynálezu lze podávat orálně (zahrnuje podání bukální a sublinguální), vlčkové formě jako tablety, kapsule (tyto zahrnují kapsule s načasovaným uvolňováním léčiva nebo s nepřerušovaným uvolňováním léčiva), pilulky, prášky, granule, elixíry, tinktury, suspenze, sirupy a emulze. Proléěiva mohou být rovněž podávána ve formě nazální, oční, ušní, rektální, místní, intravenózní (buď bolus a nebo infuze), intraperitoneální, intraartikulámí, subkutánní nebo intramuskulámí, inhalace nebo insuflace a rovněž ve všech ostatních známých lékových formách.

Dávkovači režim podávání proléčiva předkládaného vynálezu je navržen podle mnohých faktorů, zahrnujících typ, druh, věk, hmotnost, pohlaví a zdravotní stav pacienta, tíhu onemocnění, způsob podávání léčiva, ledvinové a jaterní funkce pacienta, a konkrétní sloučeninu nebo její sůl, která se použije. Běžně zběhlý lékař nebo zvěrolékař je schopen velmi rychle určit a předepsat účinné množství léčiva, potřebné pro prevenci, zvládnutí nebo zastavení progrese onemocnění.

Orální podávání léčiva je v humánní medicíně preferováno. V některých případech postačuje poměrně nízká dávka, v některých případech je nutná dávka vyšší nebo opakované podávání. Místní podávání může být prováděno jednou nebo vícekrát denně, v závislosti na běžných medicínských zvyklostech. S výhodou, proléčiva předkládaného vynálezu se můžou podávat v jediné denní dávce, a nebo je možné denní dávku rozložit do několika menších dávek, například dvou, tří nebo čtyř.

V metodě předkládaného vynálezu tvoří taxanová proléčiva aktivní složky a tyto jsou obvykle podávány ve směsi s vhodným farmakologickým ředidlem, ecipientem nebo nosičem (zde pod společným názvem „nosič“), které jsou vhodně vybrány s ohledem na zamýšlenou lékovou formu podávání, tzn. orální tablety, kapsule, elixíry, sirupy a jim podobné, a jsou slučitelné s obvyklými lékárenskými postupy.

V případě orálního podávání ve formě tablet nebo kapsulí, je možné aktivní léčivo kombinovat s orálním, netoxickým, farmakologicky přijatelným inertním nosičem jako například etanolem, glycerolem, vodou a jim podobnými. Prášky se připravují drcením sloučeniny na jemné částečky a míšením s podobně nadrceným farmakologickým nosičem, jakým je například jedlý cukr, například škrob nebo manitol. Příchutě, konzervační látky, dispergující látky a barviva se rovněž vyskytují v uvedených lékových přípravcích.

Kapsule se připravují tak, že se prášková směs, jak bylo uvedeno výše, naplní do želatinových tobolek. Lubrikanty, jako například koloidní křemík, talk, magnesiumstearát, ·0 ♦ ♦♦·

0 ♦ ·

0000 0000

0 0 * 0 ·

0 0 0*

00» · kalciumstearát nebo pevný polyethylenglykol, se přidávají k prášku předtím, než se použije k plnění tobolek. Pro zlepšení dostupnosti léčiva, když je polknuto, je možné přidat dezintegrující a solubilizující látky, jakými jsou například agar-agar, uhličitan vápenatý, uhličitan sodný.

V nutných nebo vybraných případech je rovněž možné přidat vhodná pojidla, lubrikanty, desintegrující látky nebo barviva. Vhodná pojidla zahrnují škrob, želatinu, přírodní cukry jako například glukózu nebo β-laktózu, kukuřičná sladidla, přírodní nebo syntetické pryskyřice, jako například akácii, tragakant nebo alginát sodný, karboxymethylcelulózu, polyethylenglykol, vosky nebo jim podobné. Lubrikanty obsažené v těchto lékových formách zahrnují oleát sodný, stearát sodný, stearát hořečnatý, benzoát sodný, acetát sodný, chlorid sodný a podobně. Desintegrující látky zahrnují, bez omezení, škrob, methylcelulózu, agar, bentonit, xantanovou pryskyřici a jim podobné. Tablety se připravují například tím, že se připraví směs prášků, ve formě granulí nebo kaše, přidá se Iubrikant a desintegrant a směs se stlačí do formy tablet. Směs prášků se připraví smícháním taxanového proléčiva, které je s výhodou rozdrcené, s diluentem nebo jiným základem jako bylo uvedeno výše. Je rovněž možné přidat pojidlo, jako například karboxymethylcelulózu, alginát, želatinu, polyvinylpyrrolidon, tekutý retardant jako například parafin, resorpění akcelerátor jako například kvarterní sůl a/nebo absorbční látku, jako například bentonit, kaolin nebo dikalciumfosfát.

Možností je, že se nechá směs prášků vygranulovat pomocí vlhkého pojidla, jako například sirupu, škrobové pasty, acadia mucilage, nebo roztoků celulózových nebo polymerních materiálů a protlačí se přes formu. Alternativou granulování je, že se nechá směs prášků projet přes tabletovací stroj a výsledkem je nestejnoměrná směs kousků různé velikosti. Granule je možno lubrikovat, aby se zabránilo jejich adherenci na barviva přítomná v tabletách tak, že se přidá kyselina stearová, stearátové sole, talk nebo minerální olej. Lubrikovaná směs je poté vytlačena do formy tablet. Taxanová proléčiva předkládaného vynálezu mohou být rovněž kombinována s inertním nosičem a stlačena do tablet přímo, aniž by bylo proléčivo předtím granulováno nebo jinak rozmělňováno. Průhledný nebo opalescentní ochranný obal skládající se z šelakové hmoty, cukru nebo polymerního materiálu, lesklý obal z vosku, to jsou rovněž možnosti, jak upravit výslednou formu proléčiva. Pro rozlišení obsahu léčiva v jednotlivých tabletách je rovněž možné do ochranných vrstev léčiva přidat barviva.

Orálně podávané tekutiny, jako například roztoky, sirupy a elixíry se připravují tak, že dávková jednotka léčiva odpovídá určitému přesně stanovenému objemu tekutiny. Sirupy se tt ·· 44 4444 44 44

4 4 4 · ♦ · 4 4·4

3j 4 4·*·«·*·*

4 4 ♦ *·4* • 444 «444 4· 4·· · * 444» připravují rozpuštěním sloučeniny ve vhodně aromatizovaném vodném roztoku, zatímco elixíry se připravují použitím netoxického alkoholového vehikula. Suspenze se připravují disperzí sloučeniny v netoxickém vehikulu. Je možné přidat také solubilizátory a emulzifíkátory jako například ethoxylované isostearylalkoholy a polyoxyethylenové sorbitolové estery, konzervačně látky a aromatizující látky, jako například peprmintový olej nebo sacharín a jim podobné.

Ve vhodných případech je možné jednotlivé dávky léčiva pro orální podávání uzavřít do mikrokapsulí. Tento postup se použije, když je potřeba prodloužit uvolňování léčiva nebo zaručit jeho nepřerušované uvolňování. V těchto případech se léčivo obalí nebo zabuduje do polymerů, vosku a jim podobných.

Taxanová proléěiva předkládaného vynálezu se rovněž podávají ve formě liposomu, což jsou malé jednolamelámí měchýřky, velké jednolamelámí měchýřky nebo mnoholamelámí měchýřky. Liposomy se připravují z různých druhů fosfolipidů, jako například cholesterol, stearylamin nebo fosfatidylcholiny.

Taxanová proléěiva předkládaného vynálezu se můžou rovněž podávat ve formě monoklonálních protilátek, které představují nosič, na který je navázána sloučenina léčiva. Proléěiva předkládaného vynálezu se můžou vázat na rozpustné polymery. Tyto polymery zahrnují polyvinylpyrrolidon, pyranové kopolymery, polyhydroxypropylmethakrylamidfenol, polyhydroxyethyl-aspartamidfenol, a nebo polyethylenoxidpolylysin substituovaný palmitoylovými zbytky. Dále, proléčiva předkládaného vynálezu se můžou napojovat na třídu biodegradovatelných polymerů, které jsou užitečné v případech, kdy je podtřeba kontrolovat uvolňování léčiva. Příklady jsou kyselina polyoctová, polepsilon kaprolakton, kyselina polyhydroxymáselná, polyorthoestery, polyacetály, polydihydropyrany, polycyanoakryláty a spojené nebo amťifatické kopolymery hydrogelů, kyseliny polyaspartové a polyglutamové.

Předkládaný vynález zahrnuje farmaceutickou sloučeninu, obsahující od 0,01 do 99,5 %, konkrétněji od 0,5 do 90 % proléčiva složeného z léčiva a oligomerů, které jsou v kombinaci s farmakologicky přijatelným nosičem.

Pro parenterální podávání jsou léčiva rozpuštěna ve sterilních roztocích a suspenzích, které je možno rovněž použít pro subkutánní, intramuskulární nebo intravenózní injekce. Tyto jsou připraveny resuspendováním nebo rozpuštěním změřeného množství proléčiva léčivooligomer v netoxickém tekutém vehikulu, vhodném pro injekce, jako například vodné oleaginosní médium. Poté je suspenze nebo roztok vysterilizován.

Alternativou je, že je naměřené množství taxanového proléčiva vloženo do nádobky a nádobka i s obsahem jsou vysterilizovány a uzavřeny. Společně s nádobkou s léčivem je »4 · 4

4·· 4

4 4

4 4 4

4 4 • *4 4 • 4 4 • 4 4 4 4

4 4 4

4 4 4·· dodávána i nádobka s vehikulem, se kterým je léčivo před použitím smícháno. Pro zajištění isotonicity injekčního roztoku se přidává netoxická sůl a solné roztoky. Rovněž se přidávají stabilizátory, konzervační látky a emulzifikátory.

Pro rektální podávání se připravují čípky, které jsou složeny z taxanového proléčiva, smíchaným s nízko tajícími ve vodě rozpustnými nebo nerozpustnými pevnými látkami, jako například polyethylenglykol, kakaové máslo, vyšší estery, jako například aromatizované vodné roztoky, zatímco elixíry se připravují pomocí myristylpalmitátu nebo jeho směsí.

Lékové formy pro místní použití se připravují v podobě mazání, krémů nebo mlék, očních mazání a očních nebo ušních kapek, dresinků nebo earosolů, a mnohé obsahují další běžné přídavky, jako například konzervační látky, rozpouštědla napomáhající prostupu léčiva a změkčovadla v mazáních a krémech. Lékové formy rovněž obsahují slučitelné běžné nosiče, jako například základy pro krémy nebo mazání a ethanol nebo oleyl alkohol v případě mlék. Tyto nosiče jsou v lékových formách zastoupeny od 1 do 98 %. Obvyklejší je, když tyto nosič tvoří do 80 % lékové formy.

Pro inhalaění podávání taxanového proléčiva předkládaného vynálezu je léková forma upravena do podoby aerosolového spreje. Tento je ve formě tlakové nádobky neboli nebulizátoru, s vhodným hnacím plynem, například dichlorodifluoromethanem, trichlorofluoromethanem, ichlorotetrafluoroethanem, tetrafluoroethanem, heptafluoropropanem, oxidem uhličitým nebo jiným vhodným plynem. V případě tlakovaného aerosolu musí být dávková jenotka určena ventilem, který dopraví měřené množství. Kapsule a kartridže například ze želatiny, které se používají pro inhalátor nebo insuflátor, jsou připraveny tak, že obsahují práškovou směs sloučeniny předkládaného vynálezu a vhodný práškový základ, jako například laktózu nebo škrob.

S výhodou použité farmakologické směsi jsou ty, které jsou ve formě vhodné pro orální použití, jako například tablety a tekutiny a jim podobné; a směsi pro místní použití.

Předkládaný vynález rovněž zahrnuje metodu léčby zvířete trpícího nádorem, karcinomem nebo jinou nemocí odpovídající na taxan (tj. paclitaxel a nebo docetaxel). Metoda léčby zahrnuje podávání farmakologického prostředku výše uvedenému zvířeti, přičemž tento obsahuje farmakologicky účinné množství proléčiva složeného z taxanu a oligomeru, vzhledem k předkládanému vynálezu. Nemoci nebo stavy, které odpovídají na taxan, zahrnují bez omezení karcinomy, tumory a jiné malignity. Nemoci nebo stavy, které lze léčit pomocí předkládaného vynálezu zahrnují maligní nádory, tumory, malignity, nekontrolované sekundární proliferace tkání nebo buněk po zranění tkání, nemoc polycystických ledvin a malárii. Mezi maligní nádory, které lze léčit uvedeným způsobem

44

4 4 4 «

4 4 4

patří hepatocelulámí karcinom, metastázy v játrech, gastrointestinální tumory, lymfomy, leukemie, melanomy, Kaposiho sarkomy, karcinom pankreatu, ledviny, děložního čípku, prsu, ovaria, mozku, prostaty a karcinomy urogenitálního systému.

Taxanová proléčiva předkládaného vynálezu se podávají intravenózně, infozí, neintravenózní injekcí, intraperitoneálně a injekcí bolusu. Taxanová proléčiva předkládaného vynálezu se podávají rovněž orálně ve vhodné lékové formě buď samostatně a nebo v kombinaci s látkou, zvyšující orální biodostupnost léčiva. Těmito látkami jsou například látky ze skupiny cyklosporinu A až Z, (Me-Ile-4)-cyklosporin, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C, acetylcyklosporin A, genistein a příbuzné isoflavonoidy, quercetin, calphostin, ceramidy, morfin a jemu podobné. S výhodou použité látky zvyšující biodostupnost léčiva jsou cyklosporin A, cyklosporin C, cyklosporin D, cyklosporin F, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C, acetylcyklosporin A a B cyklodextrin.

Dále, taxanová proléčiva předkládaného vynálezu se mohou podávat samostatně a nebo v kombinaci s jiným chemoterapeutikem (tj. jinou protinádorovou látkou). V případě, že je proléčivo paclitaxel-PEG předkládaného vynálezu podáváno s jiným chemoterapeutikem, je proléčivo paclitaxel-PEG a jiné chemoterapeutikum podáváno současně nebo postupně. Navíc, proléčivo paclitaxel-PEG je možné podat před, po nebo současně s radiační terapií.

Z jednoho hlediska představuje předkládaný vynález metodu léčby maligních nádorů tím, že se nemocnému podává kombinace taxanového proléčiva předkládaného vynálezu a cís-platiny. Maligním nádorem je s výhodou karcinom ovaria a taxanovým proléčivem je s výhodou paclitaxel, který je podáván před podáním cis-platiny. Bylo rovněž prokázáno, že je možné účinně podávat paclitaxel společně s cis-platinou. Ukázalo se, že neutropenie je závislá na dávce společně podávaného paclitaxelu a cis-platiny. Klinické zkoušky ukázaly, že při podávání cis-platiny až po paclitaxelu je neutropenie nižší. Například, zatím co s výhodou použité dávky proléčiva paclitaxel-PEG jsou do 340 mg/m² , následovaných cis-platinou (75 mg/ m² ), lepším dávkovacím režimem je: proléčivo paclitaxel-PEG 25 mg/ml, které je náslodováno cis-platinou (75 mg/ ml) a podáním G-CSF v standardních dávkách (5pg/kg/d subkutánně).

0« ·0 · · 0 000 0 0 0 0

0 0 « *0« 0000

0 0 0 0 0 0 00 0

0000 0000 0

0 00 0000 00000000 0 0 000 00 0000

Příklady použití vynálezu '-sukcinylpaclitaxel

a) sukcinylanhydrid (10 ^^3 /?. ekv) pyridin, pokojová teplota, 5h

HO AcÓ^v' ”) rekrystalizovat

Následující protokol představuje zlepšenou verzi procedury v Deutsch et al.

110 ml bezvodého pyridinu bylo přidáno ke směsi 5,00 g (5,86 mmol) paclitaxelu a 5,86 g (58.6 mmol) sukcinylanhydridu. Po 5-ti hodinovém míchání výsledného roztoku při pokojové teplotě, tenkovrstvová chromatografie (TLC) prokázala kompletní spotřebování paclitaxelu. Rozpouštědlo bylo odstraněno v podtlaku pomocí rotačního odpařování a zbytek byl usušen ve vakuu po dobu 2 hodin. Vzniklá voskovitá polopevná látka byla úspěšně rozmíchána ve 200 ml vody za vzniku flokulující bílé pevné látky, která byla sbírána pomocí podtlakové filtrace na Buchnerově trychtýři. Pevná látka byla proprána vodou a poté byla odsávána do sucha po dobu 30 minut, načež byla při pokojové teplotě po dobu 15 minut vysušena in vacuo v desikátoru přes P2O5. Bílá pevná látka byla vložena do 30 ml acetonu a poté, za stálého míchání bylo pomalu přidáno 30 ml vody. Vzniklá hustá bílá pasta byla důkladně promíchána po dobu 15 minut, filtrována pomocí podtlakové filtrace na Buchnerově trychtýři, který byl proplachován nadbytkem vody, a usušena za 1 hodinu. Vzniklá vlhká bílá pevná látka byla důkladně usušena při pokojové teplotě in vacuo v desikátoru přes P2O5 po dobu 18 hodin. Protože v tomto období byla pevná látka sušší a méně koagulovaná, P2O5 byl nahrazován a pevná látka byla periodicky rozmělňována na menší kousky až na středně jemný prášek (5,29 g, 95 % výtěžek). Analytická HPLC analýza prokázala čistotu materiálu 97 %. MS (FAB+)m/z (rel. inten.) 954 (M+, 100), 570 (15), 509 (64).

• 4 4 •4 »··· • «

4 * ·

44

4 4 4

4 *

2'sukcinamidyl-PEG-aminopaclitaxeltrifluoroacetát

d) Preparativní HPLC purifikace

O

a) CDI (1.3 eq), CH3CN. Δ 1

b) (HaNCHsCHaOCHzMi aeq) ^Ph * ?

—---—* Ph^S^QAcO O OH

HO AcO*

HN

NH₃* O₂CCF₃

Směs 200 mg (0,210 mmol) 2'-sukcinylpaclitaxelu (sloučenina 2) a 47 mg (0,273 mmol, 98 % čistota) Ι,Γ-karbonylimidazolu pod dusíkem byla rozpuštěna v 2,9 ml bezvodého acetonitrilu. Do septa reakční nádoby byla zasunuta odvětrávací jehla, aby byl udržen mírný tok dusíku a přitom byl odvětráván CO2. Reakční nádoba byla ponořena do olejové lázně předehřáté na 48 °C, čímž došlo k vývoji plynu. Po důkladném míchání po dobu 15 minut byla reakční nádoba z olejové lázně vyňata a ponechána při pokojové teplotě k ochlazení. Acetonitril, který se odpařil, byl opět doplněn. Odvětrávací jehla byla odstraněna, takže bylo dosaženo statické dusíkové atmosféry. Po kapkách byl přidán roztok 37 μΐ (0,252 mmol) 2,2'-(ethylendioxy)bis(ethylamin) v 1,4 ml acetonitrilu. Po 45 minutách byl po kapkách přidán roztok 81 μΐ (1,05 mmol) kyseliny trifluoroctové v 0,7 ml acetonitrilu. Výsledný hrubý reakční roztok typicky obsahuje 70 až 74 % výtěžku, kýženého trifluoroacetátového produktu (sloučenina 3), jak bylo potvrzeno pomocí HPLC analýzy.

Preparativní HPLC purifikace trifiuoroacetátu (sloučenina 3)

Produkt byl purifikován preparativní HPLC a produkt obsahující frakce byly spojeny.

• 9 «9

9

9 «9 « · ·9»9 9 • 9 9 9 9 9 • 9 99 9999 • 99 999· 99 999 99 9999

Zlepšení rozlišení HPLC

Středně objemová reakce: Pro zlepšení rozlišení HPLC pro středně objemové reakce, hrubý reakční roztok byl naředěn vodou, aniž by došlo k precipitaci. Za stálého míchání bylo k alikvotu 3,30 ml výše uvedené reakční směsi pomalu přidáno 4,03 ml vody , za vzniku roztoku skládajícího se z 55 % z vody. Výsledná mírně zakalená směs byla filtrována přes 0,45 pm Gelman acrodisc 13 stříkačkový filtr, poté chromatografována na vodném 600E HPLC přístroji za použití Vydac kolony s reverzní fází (22 mm x 250 mm, Cl8, 300 A°, 10-15 p). Mobilní fází byl roztok acetonitrilu ve vodě obsahující 0,1 % obj. kyseliny trifluoroctové. Hlavní frakce obsahující kýžený produkt čistší než 97 % byly získány gradientovou elucí, od 40 : 60 do 45 : 55, acetonitril: voda s 0,1 % obj. TFA, v průběhu 30 minut, při průtoku 5 ml/min. Následná isokratická eluce pomocí 90 : 10, acetonitril : voda obsahující 0,1 % obj. TFA odstranila neidentifikované vedlejší produkty preparace pro další chromatografické analýzy.

Pro analytické účely byly purifikované frakce pocházející zvýše uvedené amidaění reakce (200 mg, (0,210 mmol) 2'-sukcinylpaclitaxelu (2)) zakoncentrovány ve vakuu pomocí rotační evaporace se zahříváním do 55 °C, poté ve vakuu vysušeny při pokojové teplotě za vzniku 170 mg (68 % výtěžek) trifluoroacetátu (sloučenina 3), ve formě amorfní bílé pevné látky.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.10 (2H, d, >7.2 Hz), 7.99-7.81 (2H, m), 7.66-720 (11H, xn), 6.92 (1H, brs), 6.28 (1H, s). 6.07 (1H, ζ >10.0 Hz), 5.86 (1H, dd, >3.9, 5.0 Hz), 5.65 (1H, d, >6.9 Hz), 5.42 (1H, d, >5.4 Hz), 4.94 (1H, d, >8.2 Hz), 4.36 (1H, m), 429 (1H, d, >8.5 Hz), 4.16 (1H, d, >8.5 Hz), 3.74 (1H, d, >6.9 Hz), 3.66-3.04 (16H, m), 2.80-2.60 (2H, m), 2.38 (3H, s), 220 (3H, s), 1.84 (3H, s), 1.66 (3H, s), 120 (3H, s), 1.13 (3H, s); MS (FAB+) m/z 1084 (M⁴).

Velkoobiemová reakce: Pomocí HPLC analýzy bylo zjištěno, že při velkoobjemové reakci se reakční roztok, skládající se z 1 000 mg (1,05 mmol) 2'-sukcinylpaclitaxelu (sloučenina 2), 27 ml celkového objemu obsahuje 44 % kýženého trifluoroacetátového produktu (sloučenina 3). 10,0 ml alikvot byl zakoncentrován podtlakem pomocí rotační evaporace přesně do okamžiku, kdy vznikla mírně viskózní žlutá olejovitá látka. Olejovitá látka byla rozpuštěna přidáním 1,0 ml acetonitrilu, filtrována přes 0,45 pm Gelman acrodisc 13 stříkačkový filtr, poté chromatografována na vodném 600E HPLC přístroji za použití Vydac kolony s reverzní fází (22 mm x 250 mm, Cl8, 300 A°, 10-15 p). Mobilní fází byl «· ·« ·· ··<·« ·* ·» ·««· · · · t ·» · • · » » ··« · · · • 4 · · t 4 · · · · * 4 4 * » · · ·

44·· ··*· ·· «·· ·· ·»·· roztok acetonitrilu ve vodě obsahující 0,1 % obj. kyseliny trifluoroctové. Hlavní frakce obsahující kýžený produkt čistší než 97 % byly získány gradientovou elucí, od 40 : 60 do 45 :

55, acetonitril: voda s 0,1 % obj. TFA, v průběhu 30 minut, při průtoku 26 ml/min. Následná isokratická eluce pomocí 90 : 10, acetonitril : voda obsahující 0,1 % obj. TFA odstranila neidentifikované vedlejší produkty preparace pro další chromatografické analýzy.

Frakce definované pomocí analytické HPLC analýzy jako vysoce čisté, byly kombinovány s analogickými preparativními HPLC frakcemi za vzniku kombinovaného roztoku o celkovém objemu 870 ml, který obsahuje trifluoroacetát (sloučenina 3) v čistotě větší než 97 %. Roztok byl přímo použit (bez zakoncentrování) v ionexové chromatografii.

Stabilita trifluoroacetátu (sloučenina 3)

HPLC analýzou bylo zjištěno, že několik frakcí trifluoroacetátových produktů, které byly získány preparativní HPLC mají původně čistotu 98,8 %, ale po 16 denním skladování při 8 °C jejich čistota klesá na 97,4 %.

Určení rozpustnosti trifluoroacetátu (sloučenina 3) ve vodě

Ke vzorku 2,5 mg trifluoroacetátu (sloučenina 3) v malé nádobce bylo přidáno 200 μΐ deionizované vody. Nádobka byla uzavřena a výsledná směs byla sonikována po dobu 15 minut. Výsledná neprůhledná směs byla filtrována přes 0,45 pm Gelman acrodisc 13 stříkačkový filtr. Filtrát byl zvážen (140 mg) a lyofilizován za vzniku 1,4 mg bílé načechrané pevné látky. Tudíž, když uvážíme, že vodní roztok má denzitu 1,00, je rozpustnost trifluoroacetátu ve vodě 7,4 mg/ml (tj. 1,4 mg/0,190 ml).

Ionexová chromatografie trifluoroacetátového aniontu za vzniku acetátový aniont : acetát-proléčivo (sloučenina 4) ·· ·· ··#· *· ·· « · · * · · · · · · · • · · · ··· · · <

• ···· ···· · • · ·· ···· ···<· ·*·· ·· ·«< ·· ··«·

Pro účely preparace byly podle HPLC purifikačního protokolu popsaného výše získány frakce trifluoroacetátu (sloučenina3) s čistotou větší než 97 %. Tyto frakce byly spojeny a přímo, bez zakoncentrování, použity pro iontovou chromatografií. Například, kombinované preparativní HPLC frakce v celkovém objemu 870 ml a teoreticky obsahující 0,462 mmol substrátu a 11,3 mmol TFA (0,1 % obj.) byly použity pro následující ionexový protokol:

g DOWEX ® lx 8-400 (silně zásaditý, chloridová forma) ionexové pryskyřice bylo 3-krát promyto 270 ml deionizované vody, a pokaždé byla odstraněna žlutá suspenzní hmota a část promývací vody. Aby bylo možno získat pryskyřici v její acetátové formě, byla vzniklá řídká hmota promíchávána s roztokem 1,882 g NaOAc. 3 H2O v 4,00 1 deionizované vody po dobu 1 hodiny. Pryskyřice byla dvakrát promyta 750 ml 0,013 M HOAc (aq) (tj. 0,1 % obj. HOAc, analogicky k 0,1 % obj. TFA použité v preparativních HPLC protokolech), filtrována pomocí podtlakové filtrace na Buchnerově trychtýři, a poté ponechána k vysušení po dobu 10 minut. Pryskyřice byla resuspendována v 0,013 M HOAC (aq), nalita do chromatografické kolony, eluována pod mírným přetlakem vzduchu pomocí 200 ml 0,013 M HOAc (aq), čímž vznikla 10 cm vysoká a 3,8 cm v průměru, pryskyřicová kolona. Kolona byla posléze uzavřena 4 cm písku. Kolona byla poté eluována 250 ml acetonitrilu, poté 250 ml 0, 013 M HOAc (aq). Z 870 ml objemu trifluoroacetátu (sloučenina 3) vznikl 0,013 M roztok v HOAc tím, že bylo přidáno 0,63 ml ledové kyseliny octové v 10 ml acetonitrilu za důkladného míchání. Roztok byl nanesen na kolonu a za mírného přetlaku byl eluován. Frakce byly okamžitě sbírány do 50 ml testovacích zkumavek. Jakmile celých 870 mí proteklo kolonou, byla kolona dále eluována 0,013 M HOAc (aq). Frakce, které obsahovaly produkt čistší než 97 % (určeno analytickou HPLC při 210 nm) byly spojeny a zakoncentrovány v podtlaku pomocí rotační evaporace se stoupající teplotou do 55 °C a při pokojové teplotě ve vakuu usušeny po dobu 16 hodin za vzniku čistě bílého amorfního zbytku. Zbytek byl pomocí škrabky odstraněn ze dna reakční nádoby ve formě jemného amorfního prášku. Zbytky, které se nepodařilo odstranit ze dna nádobky je možné použít dále tak, že se přidá minimální množství 0,013 M HOAc (aq) jako rozpouštědlo, zakoncentruje se jak bylo popsáno výše, poté se seškrábne pomocí škrabky za vzniku dalšího produktu, který se spojí a vysuší při pokojové teplotě in vacuo v desikátoru přes P2O5 po dobu 24 hodin za vzniku acetátového proléčiva (sloučenina 4) (293 mg, 24 % neoptimalizovaný výtěžek z celkového materiálu s čistotou větší než 97 %) v podobě žlutého prášku. Spojení frakcí s čistotou menší než 97 % podobným způsobem jak bylo popsáno výše dalo vzniknout 146 mg (12 % neoptimalizovaný výtěžek) dalšího acetátu (sloučenina 4). Analýza produktů pomocí ionexové chromatografie (Quantitative Technologies, lne., (QTI)) nedokázala přítomnost žádné trifluoroctové kyseliny (TFA analýza: spodní detekční limit 100 ppm).

mp 114-117°C; Ή NMR (300 MHz, CDClj) δ 8.11 (2H, d, >72 Hz), 7.85 (2H, d, >7.7 Hz), 7.62-7.36 (11H, m), 6.29 (ÍH, s), 6.11 (ÍH, ζ >10.0 Hz), 5.87 (ÍH, dd, >3.9,4.4 Hz), 5.65 (ÍH, d, >6.9 Hz), 5.44 (ÍH, d, >4.9 Hz), 4.95 (ÍH, d, >9.5 Hz), 4.38 (ÍH, m), 4.28 (ÍH, d, >8.5 Hz), 4.18 (ÍH, d, >82 Hz), 3.76 (ÍH, d, >6.4 Hz), 3.63-3.34 (16H, m), 3.04 (2H, brs), 2.75 (2H, m), 2.53 (2H, m), 2.40 (3H, s), 2.20 (3H, s), 2.01 (3H, s), 1.87 (3H, s), 1.67 (3H, s), 1.20 (3H, s), 1.13 (3H, s); MS (FAB+) m/z (rel. inten.) 1084 (M*).

Obecná rozpustnost acetátu (sloučenina 4)

Acetát (sloučenina 4) je vysoce rozpustný v CDC1₃ a slaběji rozpustný v diethylétheru a v hexanech. Tři oddělené vzorky po 3,0 mg acetátu (sloučenina 4) daly vzniknout homogennímu roztoku v 81 μΐ 100 % bezvodého ethanolu, v 81 μΐ acetonu a v 81 μΐ 0,5 M vodného roztoku kyseliny octové. Tudíž, rozpustnost v každém z těchto tří rozpouštědel musí být stejná nebo větší než 37 mg/ml (tj. 3,0 mg/0,081 ml).

• ·

Stanovení rozpustnosti acetátu(sloučenina 4) ve vodě pomocí množství

Ke vzorku 10,0 mg acetátu v malé reakční nádobce bylo přidáno 176 μΐ deionizované vody. Nádobka byla uzavřena a vzniklá směs byla sonikována po dobu 15 minut. Pomocí analytické HPLC při 210 nm bylo zjištěno, že vznikající tekutina obsahuje acetát (sloučenina 4) v čistotě 98,7 %. Tekutina byla filtrována přes 0,45 pm celulózový acetátový stříkačkový filtr. Množství (76 mg) známého objemu (75 μΐ) filtrátu bylo změřeno a bylo zjištěno, že hustota roztoku byla 1,01 g/ml. Pomocí analytické HPLC při 210 nm bylo zjištěno, že filtrát obsahuje acetát (sloučenina 4) v čistotě 98,8 %. 118 mg filtrátu bylo lyofilizováno za vzniku 6,4 mg čistě bílé načechrané pevné látky. Tudíž, pomocí této metody bylo zjištěno, že rozpustnost acetátu (sloučenina 4) ve vodě je 55 mg/ml (tj. 6,4 mg/0,117 ml).

Stanovení rozpustnosti acetátu(sloučenina 4) ve vodě pomocí analytické HPLC

Ke vzorku 10,0 mg acetátu (sloučenina 4) v malé reakční nádobce bylo přidáno 150 μΐ deionizované vody. Nádobka byla uzavřena, vortexována po dobu 3 minut a sonikována po dobu 15 min. Vzniklá viskózní, světle žlutě-oranžová směs byla pomalu a opatrně natažena do 1 ml stříkačky a poté pod tlakem přefiltrována přes 0,45 pm celulózový acetátový stříkačkový filtr za vzniku viskózního homogenního žlutě-oranžového roztoku. 75 μΐ filtrátu bylo naředěno 88-krát acetonitrilem a poté analyzováno pomocí HPLC při 270 nm. Plochy pod křivkou zjištěné při 229 nm a 270 nm byly srovnány stři bodovou kalibrační křivkou získanou při 229 nm (r² = 0,99999) a pěti bodovou křivkou při 270 nm (r² = 0,99996). Podle této metody je rozpustnost acetátu (sloučenina 4) ve vodě 40,1 mg/ml (při 229 nm) a 39,7 mg/ml (při 270 nm).

Chemická hydrolýza acetátu (sloučenina 4)

Vzorek pevného acetátu (sloučenina 4) byl rozpuštěn (cca. 1 mg/ml) ve vlhkém acetonitrilu (nikoliv bezvodý v důsledku expozice vzdušné vlhkosti). Pomocí analytické HPLC (viz Obr. 1) bylo zjištěno, že po dobu 26 dnů při pokojové teplotě byl acetát (sloučenina 4) hladce kvantitativně přeměněn na paciitaxei (1), bez vzniku významných vedlejších produktů.

Chemická hydrolýza acetátu (sloučenina 4) při různých hodnotách pH

Do velkého počtu 13 mm x 100 mm skleněných testovacích zkumavek bylo přidáno 5,15 μΐ 8,74 x 10 M vodného roztoku acetátového proléěiva (sloučenina 4). Do každé • · • · « · zkumavky bylo poté přidáno 295 μΐ PBS těchto hodnot pH: 8,00, 7,40, 7,00 a 5,80; a kyselinou octovou/mraveněí pufrovaný roztok spH 2,00. Zkumavky byly uzavřeny a inkubovány při 37 °C ve vířivé vodní lázni. Po různě dlouhé inkubaci byly testovací zkumavky vyňaty z vodní lázně, bylo do nich přidáno 900 μΐ acetonitrilu a poté byly vzorky intenzivně vortexovány po dobu 3 minut. Vzniklý roztok byl analyzován pomocí HPLC a byly vygenerována data hydrolyzaěních rychlostí (viz tabulka a grafy, níže).

In vitro hydrolýza acetátového proléčiva (sloučenina 4)

Do devíti 13 mm x 100 mm testovacích zkumavek bylo přidáno 5,15 μΐ 8,74 χ ΙΟ⁴ M vodného roztoku acetátového proléčiva (sloučenina 4). Do každé zkumavky bylo poté přidáno 295 μΐ čerstvě získané heparinizované krysí plasmy získané ze samečka kmene Sprague Dawley rat (CD) (zdroj Charles River, Raleigh, NC). Zkumavky byly uzavřeny a inkubovány při 37 °C ve vířivé vodní lázni. Po různě dlouhé inkubaci byly testovací zkumavky vyňaty z vodní lázně, bylo do nich přidáno 900 μΐ acetonitrilu, poté byly vzorky intenzivně vortexovány po dobu 3 minut a zamraženy na teplotu -12 °C na 30 až 90 minut. Vzorky byly centrifugo vány při 25 °C po dobu 10 minut při 1 600 x g a vzniklý čistý bezbarvý supernatant byl analyzován pomocí HPLC (viz obr. 2).

• to · to • to· ·

... w. r. w ·· · « · · to · · · to · · • · · to ·

Claims

Patentové nároky

1. Taxanové proléčivo, vyznačující se tím, že obsahuje

a) alespoň jeden taxan; a

b) jeden a nebo více PEG polymerů a/nebo oligomerů, z kterých každý je pomocí hydrolyzovatelné vazby připojen k vazebnému místu na terapeutické sloučenině, přičemž PEG polymery a/nebo oligomery každý:

• obsahuje nevětvený a nebo větvený PEG segment, skládající se z 2 až 25 po lyethylenglykolových jednotek; a • případně obsahuje sůl tvořící skupinu.
2. Taxanové proléčivo podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo více PEG polymerů/oligomerů, přičemž každý se nezbytně skládá ze 2 až 20 polyethylenglykolových jednotek.
3. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo více PEG polymerů/oligomerů, přičemž každý se nezbytně skládá ze 2 až 15 polyethylenglykolových jednotek.
4. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo více PEG polymerů/oligomerů, přičemž každý se nezbytně skládá ze 2 až 10 polyethylenglykolových jednotek.
5. Taxanové proléčivo podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje oligomer polyethylenglykolu, který se skládá z 1 až 9 polyethylenglykolových jednotek.
6. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo více PEG polymerů/oligomerů, které obsahují alespoň jednu sůl tvořící skupinu.
7. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje sůl tvořící skupinu vybranou ze skupiny: amoniový radikál, vodík, sodík, draslík, lithium, vápník, karboxylát, chlorid, bromid, jodid, fosfát, sulfát a mesylát.
8. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
9. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, která si zachová některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
10. Taxanové proléčivo podle nároku 1,vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.

·· · · • ··
11. Taxanové proléčivo podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 oligomery polyethylenglykolu.
12. Taxanové proléčivo podle nároku 1, vyznačující se tím, že se pomocí orálního podání dosáhne v krvi terapeuticky účinné dávky taxanu.
13. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje

a) taxanové proléčivo podle nároku 1; a

b) farmaceuticky přijatelný nosič.
14. Farmakologický prostředek podle nároku 13, vyznačující se tím, že je ve formě vhodné pro orální podání.
15. Farmakologický prostředek podle nároku 13,vyznačující setím, že je ve formě vybrané ze skupiny: tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze nebo elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy.
16. Taxanové proléčivo, vyznačující se tím, že obsahuje taxan spojený hydolyzovatelnou vazbou (vazbami) s jedním nebo vícero PEG oligomery, vybranými ze skupiny sloučenin obecného vzorce II

II c—(CH₂)—N— CH₂CH₂(OC₂H₄)_raOCH3 (Π) kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25 a R je nižší alkyl;

obecného vzorce III kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, mje od 2 do 25, a R je nižší alkyl;

• to • · obecného vzorce IV

0 0 R

II II h I —C-CCH^C—N— CHiCHzCOC^X-N-CHjCI^ÍOCj^Jn.OCHj (iv) kde n je od 1 do 6, m a p jsou každý nezávisle od 2 do 25, a R je nižší alkyl;

obecného vzorce V

O O R

II II h I —C—(CHj)j— c—N—(CHjjj—N— CH₂CH₂(OC₂H4)_mNH2 (V) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a Rje nižší alkyl;

obecného vzorce VI —C-(CHj)^C—β—(VI) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a X'je záporně nabitý iont;

obecného vzorce VII ·· * · 9 9 · 9 ·* • · φ 9 »«· · • 9 9 9 9 9 9 99 · φ · · · 9 · · 9 9 * • 9 9· 9 9 9 »

9999 9999 99 9·· 9» 999«

0 0 R'

II II η I ,

-C-tCH^C—Ν— (CHjjf—N-CH₂CH₂(OC₂H4W<HR² (VII) kde η je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a R¹ a R² jsou každý nezávisle nižší alkyl;

obecného vzorce VIII

O Q O il II H II —C—(CH2)r-^c“ ^N~ CH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCH₂— C—NHCCH^CH^ (Vin) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25;

obecného vzorce IX o

II

C-(CH_J)„(OC₂H₄)_mO(CH₂)_p-C-O-X* (ix) kde nap jsou každý nezávisle od 1 do 6, m je od 2 do 25 a X⁴ je kladně nabitý iont;

obecného vzorce X ·» · · ♦ ♦ · « • * · • · · · · · · · ··· ··«· «· ··» 89 8999

O R‘

R² (X) kde n je od 1 do 5, m je od 2 do 25, a R¹ a R² jsou každý nezávisle nižší alkyl; a obecného vzorce XI °Ύ (XI) (CH2)_nCH2(OCH₂CH2)mOCH₃ kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25, a X? je záporně nabitý iont
17. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že polyethylenglykolový oligomer obsahuje sůl tvořící skupinu.
18. Taxanové proléčivo podle nároku 17, vyznačující se tím, že obsahuje sůl tvořící skupinu vybranou ze skupiny: amoniový radikál, vodík, sodík, draslík, lithium, vápník, karboxylát, chlorid, bromid, jodid, fosfát, sulfát a mesylát.
19. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
20. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který nemá zcela eliminovanou terapeutickou aktivitu paclitaxelu.
21. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
22. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován pomocí 1 až 4 polyethylenglykolových oligomerů.

« · · ·· • ♦ · • · « · ·
23. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že se skládá z

a) taxanového pro léčiva podle nároku 16; a

b) farmaceuticky přijatelného nosiče.
24. Farmaceutický prostředek podle nároku 23,vyznačující se tím, že je ve formě vhodné pro orální podání.
25. Farmaceutický prostředek podle nároku 21, vyznačující se tím, že je ve formě vybrané ze skupiny: tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze nebo elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy.
26. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG-oligomerů obecného vzorce II

C—(CH2)—N— CHiCH/OCjH^OCHj (H) kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25, a Rje nižší alkyl.
27. Taxanové proléčivo podle nároku 26, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
28. Taxanové proléčivo podle nároku 26, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
29. Taxanové proléčivo podle nároku 26, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
30. Taxanové proléčivo podle nároku 26, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
31. Taxanové proléčivo podle nároku 16, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen na jeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce III

O

II H

C—N-CHjCKjíOCiI^JnOCHj <ni) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, mje od 2 do 25, a Rje nižší alkyl.

« 0 • · ♦

4 ♦

0 0 • «
32. Taxanové proléčivo podle nároku 31,vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
33. Taxanové proléčivo podle nároku 31,vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
34. Taxanové proléčivo podle nároku 31,vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
35. Taxanové proléčivo podle nároku 31,vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
36. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydro lyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce IV

O O R

II II h I —N—^CH^OC^-N-C^CH^OÍ^H^OCHj (IV) kde n je od 1 do 6, m a r jsou oba nezávisle od 2 do 25, a R je nižší alkyl.
37. Taxanové proléčivo podle nároku 36, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
38. Taxanové proléčivo podle nároku 36, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
39. Taxanové proléčivo podle nároku 36, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
40. Taxanové proléčivo podle nároku 36, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
41. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce V

O O R

II II h I —C-ÍCHa)—c—N—(CH₂)j—N— eHjCHaíOCjIQnNHi W kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, mje od 2 do 25, a Rje nižší alkyl.
42. Taxanové proléčivo podle nároku 41,vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
43. Taxanové proléčivo podle nároku 41,vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
44. Taxanové proléčivo podle nároku 41,vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
45. Taxanové proléčivo podle nároku 41,vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
46. T axanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce VI θ O f (VI) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a X je záporně nabitý iont.
47. Taxanové proléčivo podle nároku 46, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
48. Taxanové proléčivo podle nároku 46, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
49. Taxanové proléčivo podle nároku 46, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
50. Taxanové proléčivo podle nároku 46, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
51. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vy z n a č uj í c í se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce VII

O O R¹ —C-(CHj)r- c—N—(CH2^—N-CHjCHjCOCjH^bNHR² w kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a R¹ a R² jsou oba nezávisle nižší alkyl.
52. Taxanové proléčivo podle nároku 51,vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.

0« 00 • · 0

00 00

0 · 0 0

0 0 0

000«

00 ·

0 0 00 0000

000 ··*· »· 0·0 00 0000
53. Taxanové proléčivo podle nároku 51,vyznačuj ící se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
54. Taxanové proléčivo podle nároku 51,vyznačuj ící se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
55. Taxanové proléčivo podle nároku 51, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan je derívatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
56. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce VIII kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8 a m je od 2 do 25.
57. Taxanové proléčivo podle nároku 56, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
58. Taxanové proléčivo podle nároku 56, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
59. Taxanové proléčivo podle nároku 56, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
60. Taxanové proléčivo podle nároku 56, vyznačující se tím, že taxan je derívatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
61. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG oligomerů obecného vzorce IX o o —C-ťCH^OCjHíVXCHj);-C-OX* TO kde n a p jsou oba nezávisle od 1 do 6, mje od 2 do 25, a X⁺ je kladně nabitý iont.
62. Taxanové proléčivo podle nároku 61, v y z n a č uj í c í se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.

ΦΦ φ φ φ φ φφφφ
63. Taxanové proléčivo podle nároku 61,vyznačuj ící se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity pacbtaxelu.
64. Taxanové proléčivo podle nároku 61, v y z n a č uj í c i se tím, ž e taxan obsahuje docetaxel.
65. Taxanové proléčivo podle nároku 61,vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými obgomery.
66. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vy z n a č uj i c i se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG obgomerů obecného vzorce X kde n je od 1 do 5, m je od 2 do 25, a R¹ a R² jsou oba nezávisle nižší alkyl.
67. Taxanové proléčivo podle nároku 66, vyznačující se tím, že taxan obsahuje pacbtaxel.
68. Taxanové proléčivo podle nároku 66, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan obsahuje analog pacbtaxelu, kteiý má některé nebo všechny terapeutické aktivity pacbtaxelu.
69. Taxanové proléčivo podle nároku 66, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
70. Taxanové proléčivo podle nároku 66, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými obgomery.
71. Taxanové proléčivo podle nároku 16, vyznačující se tím, že taxan je pomocí hydrolyzovatelné vazby napojen najeden nebo více PEG obgomerů obecného vzorce XI (XI) (CH^CHjCOCHjCHjJmOCHj kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25, a X je záporně nabitý iont.

9·

44 ··

4 9 4 · • 4 4 • 9 4

0 0 4

94 9999
72,
73,
74,
75,
76,
77.
78.
79.
80.
81.
82.

Taxanové proléčivo podle nároku 71, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.

Taxanové proléčivo podle nároku 71,vyznačuj ící se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu. Taxanové proléčivo podle nároku 71,vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.

Taxanové proléčivo podle nároku 71, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.

Způsob léčby savčího organismu trpícího nemocí odpovídající na taxan, vyznačující se tím, ž e se organizmu podá terapeuticky účinné množství taxanového proléčiva obsahujícího:

a) alespoň jeden taxan; a

b) jeden a nebo více PEG polymerů a/nebo oligomerů, z kterých každý je pomocí hydrolyzovatelné vazby připojen k vazebnému místu na terapeutické sloučenině, přičemž PEG polymery a/nebo oligomery každý • obsahuje nevětvený a nebo větvený PEG segment, skládající se z 2 až 25 polyethylenglykolových jednotek; a • případně obsahuje sůl tvořící skupinu.

Způsob podle nároku 76, v y z n a č u j í c í se tím, ž e se použije jeden nebo více

PEG polymerů/oligomerů, z kterých každý se nezbytně skládá ze 2 až 20 polyethylenglykolových jednotek.

Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije jeden nebo více

PEG polymerů/oligomerů, z kterých každý se nezbytně skládá ze 2 až 15 polyethylenglykolových jednotek.

Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije jeden nebo více

PEG polymerů/oligomerů, z kterých každý se nezbytně skládá ze 2 až 10 polyethylenglykolových jednotek.

Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije oligomer polyethylenglykolu, který se skládá z 1 až 9 polyethylenglykolových jednotek.

Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije jeden nebo více PEG polymerů/oligomerů, které obsahují alespoň jednu sůl tvořící skupinu.

Způsob podle nároku 81,vyznačující se tím, že se použije sůl tvořící skupina vybraná ze skupiny: amoniový radikál, vodík, sodík, draslík, lithium, vápník, karboxylát, chlorid, bromid, jodid, fosfát, sulfát a mesylát.

to · • to to to to to to to to to • · ♦ · · · ♦ to to · • · ·· *··· «·· ··«· ·· ·*· ♦· totototo
83. Taxanové proléčivo podle nároku 76, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
84. Taxanové proléčivo podle nároku 76, v y z n a č u j í c í se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
85. Taxanové proléčivo podle nároku 76, vyznačující se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
86. Taxanové proléčivo podle nároku 76, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
87. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá orální cestou.
88. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá parenterální cestou.
89. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se proléčivo podá jednou z těchto cest: intradermální, intramuskulámí, intraperitoneální, intravenózní, subkutánní, intraoseální a intranazální.
90. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije k léčbě onemocnění ze skupiny karcinomů, tumorů, malignit, nekontrolovaných proliferaci tkání a nebo buněk, které jsou sekundární po poranění tkání, nemoci polycystických ledvin a malárie.
91. Způsob podle nároku 76, v y z n a č u j í c í se tím, že se použije k léčbě karcinomů.
92. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije k léčbě onemocnění vybraných ze skupiny: hepatocelulámí karcinom, metastázy v játrech, karcinomy gastrointestinálního traktu, pankreatu, ledviny, střeva, děíožního čípku, prostaty, plic, leukemie a Kaposiho sarkom, melanom.
93. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije k léčbě karcinomu ovaria a taxanové proléčivo je podáváno společně s cis-platinou a to buď simultánně a nebo po sobě.
94. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se použije k léčbě karcinomu prsu a taxanové proléčivo je podáváno společně s doxorubicinem a to buď simultánně a nebo po sobě.
95. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá intraperitoneální cestou a použije se k léčbě karcinomu ovaria.

4 4 4 4 4

4 4 · 4

4 4 4 4

4 4 4
96. Způsob podle nároku 76, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá jako složka farmaceutického prostředku, který obsahuje

c) taxanové proléčivo; a

d) farmaceuticky přijatelný nosič.
97. Způsob léčby podle nároku 96, vyznačující se tím, že farmaceutický prostředek je ve formě vhodné pro orální podání.
98. Způsob podle nároku 96, vyznačující se tím, že farmaceutický prostředek je ve formě vhodné pro parenterální podání.
99. Způsob podle nároku 96, vyznačující se tím, že farmaceutický prostředek je ve formě vybrané ze skupiny: tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze nebo elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy.
100. Způsob léčby léčby savčího organismu trpícího nemocí odpovídající na taxan, vyznačující se tím, že se organizmu podá terapeuticky účinné množství taxanového proléčiva, obsahujícího taxan, který je pomocí hydrolyzovatelné vazby připojen k vazebnému místu na jeden a nebo více PEG oligomerů ze skupiny sloučenin obecného vzorce II

C—(CHa^N—CHjCHjíOCjH^OCHa (Π) kde n je od 1 do 7, m je od 2 do 25, a R je nižší alkyl;

obecného vzorce III kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a Rje nižší alkyl;

*4 ·· 44 44*4 44 44

4444 444 4444

4 4 44444 «4 4

4 4 44 4444

444 4444 4· 444 *4 4444 obecného vzorce IV

Jí II Η i —C-(CH2)r-C—N— CHzCHzCOCjH^-N-CH^^OC^^OCHj (IV) kde n je od 1 do 6, m ar jsou oba nezávisle od 2 do 25, a R je nižší alkyl;

obecného vzorce V

O O R

II lí h I

C-ÍCH^—C—N— (CHaífr-N-CHiCH^OCj^VíHj (V) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a R je nižší alkyl;

obecného vzorce VI jí II h I —C-(CHit-C—N—N-CHjCajfOCjiyj^ljYr (VI) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a X'je záporně nabitý iont;

obecného vzorce VII

O O R

II II H I ,

-C-CCHsír-C—N—(CHj);—N-CHiCHjCOCjH^yQHR² (VII) kde n je od 1 do 6, p je od 2 do 8, m je od 2 do 25, a R¹ a R² jsou oba nezávisle je nižší alkyl;

obecného vzorce VIII

CH₂CH₂(OC₂H₄)_mOCH₂ »» ·« »» 444* ·< ·· • 444 444 4444

4 4 44444 4· ·

4 4444 444· * • 4 44 4444

4444 4444 ♦♦ 444 44 4444

O Q

II 11 —c—(ch^jt-cH

-NO

II

-c-NHCCHíJpNCCHah (VIII) kde nje od 1 do 6, p je od 2 do 8 a mje od 2 do 25;

obecného vzorce IX o o

II II

C-(CHJ„(OC₂H₄)„,O(CH2)_ř;-C-θΧ (ix) kde nap jsou oba nezávisle od 1 do 6, mje od 2 do 25 a X⁺ je kladně nabitý iont;

obecného vzorce X

O R¹

II I •C-CCH^-N-CHjCHaíOCi^OCHj

R² (X) kde n je od 1 do 5, mje od 2 do 25, a R¹ a R² jsou oba nezávisle nižší alkyl;

obecného vzorce XI • 4 •4 ·»»·

4 «

4 44 4 όα>

N (XI) (CH^CHiťOCHjCH^OCHj kde n je od 1 do 6, m je od 2 do 25, a X'je záporně nabitý iont.
101. Způsob podle nároku 100, v y z n a č u j í c í se tím, že se použije PEG oligomer, který se skládá z 2 až 9 PEG jednotek.
102. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se použije sůl tvořící skupina vybraná ze skupiny: amoniový radikál, vodík, sodík, draslík, lithium, vápník, karboxylát, chlorid, bromid, jodid, fosfát, sulfát a mesylát.
103. Taxanové proléčivo podle nároku 100, vyznačující se tím, že taxan obsahuje paclitaxel.
104. Taxanové proléčivo podle nároku 100, vyznačující se tím, že taxan obsahuje analog paclitaxelu, který má některé nebo všechny terapeutické aktivity paclitaxelu.
105. Taxanové proléčivo podle nároku 100, v y z n a č uj í c í se tím, že taxan obsahuje docetaxel.
106. Taxanové proléčivo podle nároku 100, vyznačující se tím, že taxan je derivatizován 1 až 4 polyethylenglykolovými oligomery.
107. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá orální cestou.
108. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá parenterální cestou.
109. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se proléčivo podá jednou z těchto cest: intradermální, intramuskulární, intraperitoneální, intravenózní, subkutánní, intraoseální a intranazální.
110. Způsob podle nároku 100, v y z n a č u j í c í se tím, že se použije k léčbě onemocnění ze skupiny karcinomů, tumorů, malignit, nekontrolovaných proliferací tkání ·· ·· « • · · · a nebo buněk, které jsou sekundární po poranění tkání, nemoci polycystických ledvin a malárie.
111. Způsob podle nároku 100, v y z n a č uj í c í se tím, že se použije k léčbě karcinomů.
112. Způsob podle nároku 100, v y z n a č u j í c í se tím, že se použije k léčbě onemocnění vybraných ze skupiny: hepatocelulámí karcinom, metastázy v játrech, karcinomy gastrointestinálního traktu, pankreatu, ledviny, střeva, děložního čípku, prostaty, plic, leukemie a Kaposiho sarkom, melanom.
113. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se použije k léčbě karcinomu ovaria a taxanové proléčivo je podáváno společně s cis-platinou a to buď simultánně a nebo po sobě.
114. Způsob podle nároku 100, v y z n a č uj í c i se tím, že se použije k léčbě karcinomu prsu a taxanové proléčivo je podáváno společně s doxorubicinem a to buď simultánně a nebo po sobě.
115. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá íntraperitoneální cestou a použije se k léčbě karcinomu ovaria.
116. Způsob podle nároku 100, vyznačující se tím, že se taxanové proléčivo podá jako složka farmaceutického prostředku, který obsahuje

e) taxanové proléčivo; a í) farmaceuticky přijatelný nosič.
117. Způsob léčby podle nároku 116, vyznačující se tím, že fermaceutický prostředek je ve formě vhodné pro orální podání.
118. Způsob podle nároku 116, vyznačující se tím, že farmaceutický prostředek je ve formě vhodné pro parenterální podání.
119. Způsob podle nároku 116, v y z n a č u j í c í se tím, že farmaceutický prostředek je ve formě vybrané ze skupiny: tablety, kapsule, tobolky, gelové kapsule, pilulky, tekuté roztoky, suspenze nebo elixíry, prášky, čípky, mikropartikule a osmotické dopravovací systémy.