CZ2002195A3 - Farmaceutický prostředek pro inhibici produkce IL-18 - Google Patents
Farmaceutický prostředek pro inhibici produkce IL-18 Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2002195A3 CZ2002195A3 CZ2002195A CZ2002195A CZ2002195A3 CZ 2002195 A3 CZ2002195 A3 CZ 2002195A3 CZ 2002195 A CZ2002195 A CZ 2002195A CZ 2002195 A CZ2002195 A CZ 2002195A CZ 2002195 A3 CZ2002195 A3 CZ 2002195A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cells
- hse
- production
- adhesion
- receptor
- Prior art date
Links
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 title claims description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims abstract description 82
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 claims abstract description 80
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 31
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 108010070145 interleukin-18 binding protein Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000044166 interleukin-18 binding protein Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 claims description 16
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 claims description 16
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 10
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 claims description 7
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 6
- -1 and their mutein Proteins 0.000 claims description 5
- 102100035017 Interleukin-18-binding protein Human genes 0.000 claims description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 claims description 3
- 101001019591 Homo sapiens Interleukin-18-binding protein Proteins 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 3
- 101710205006 Interleukin-18-binding protein Proteins 0.000 claims 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 143
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 32
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 27
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 26
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 25
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 21
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 21
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 21
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 21
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 11
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 6
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 4
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 4
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 4
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 3
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 3
- 101000960949 Mus musculus Interleukin-18 Proteins 0.000 description 3
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 3
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 3
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001134 F-test Methods 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 2
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 230000004712 cancer cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001480 pro-metastatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000828805 Cowpox virus (strain Brighton Red) Serine proteinase inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000622304 Homo sapiens Vascular cell adhesion protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000039996 IL-1 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069196 IL-1 family Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100026017 Interleukin-1 receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710149731 Interleukin-1 receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039898 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(C(=O)OCOC(C)=O)=CC=C2C21C1=CC(CCC(=O)OCOC(C)=O)=C(OCOC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CCC(=O)OCOC(=O)C)C(OCOC(C)=O)=C1 NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 108010027836 endotoxin receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Farmaceutický prostředek pro inhibici produkce IL-18
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká tvorby metastáz tumorů a způsobů jejich inhibice. Vynález se zvláště týká prevence tvorby tumorových metastáz inhibici produkce a/nebo působení interleukinu-18 (IL-18).
Dosavadní stav techniky
Adheze cirkulujících rakovinných buněk k endotheliu kapilár je kritický krok při tvorbě metastáz (Kohn, E. C., a Liotta, L. A. (1995) Cancer Res., 55 (9), 1856 - 62; Nicolson, G. L., a Winkelhake, J. L. (1975) Nátuře, 255, 230 - 232). Adhezi hematopoetických buněk a aktivovaných leukocytů k prozánětlivým endotheliálním buňkám aktivovaným cytokiny zprostředkuje molekula 1 adheze k cévním buňkám (vascular cell adhesíon molecule-1, VCAM-1) (Freedman, A., Munro, M., Rice, G. E., Bevilacqua, Μ. P., Morimoto, C., Mclntyre, B. W., Rhynhart, K., Pober, J. S., a Nadler, L. M. (1990) Science, 249, 1030 - 1033; Miyake, M., Fuchimoto, S., Iwagaki, H., Matsubara, N., Edamatsu, R., Hiramatsu, M., a Orita, K. (1991) Res. Comm. Chem. Pathol. Pharmacol., 71, 293 - 307; Simmons, P. J., Masinovsky, B., Longenecker, B. M., Berenson, R., Torok-Storb, B., a Gallatin, W. M. (1992) Blood, 80 (2), 388 - 95). Živočišné a lidské rakovinné buňky však musí použít adhezní funkce VCAM-1, aby došlo k zesílení experimentálního šíření metastáz (Rice, G. E., a Bevilacqua, Μ. P. (1989) Science, 246, 1303 - 1306).
Například je známo, že IL-1 β a TNF-α zesilují tvorbu metastáz melanomových buněk exprimujících VLA-4 v plicní tkáni mechanismem, který zahrnuje řízení ve smyslu zesílení exprese VCAM-1 endotheliálními buňkami (Okahara, H., Yagita, H., Miyake, K., a Okumura, K, (1994) Cancer Res., 54, 3233 - 3236; Garofalo, A., Chirivi, R. G. S,, Foglieni, C., Pigot, R., Mortarini, R., Martin-Padura,
I. , Anichini, A., Gearing, A. J., Sanchez-Madrid, F., Dejana, E., a Giavazzi, R. (1995) Cancer Res., 55, 414 - 419; Martin-Padura, I., Mortarini, R., Lauri, D., Bernasconi, S., Sanchez-Madrid, F., Parmiani, G., Mantovani, A., Anichini, A., a Dejana, E. (1991), Cancer Res., 51, 2239 - 2241). Bylo také ukázáno, že IL-1 a TNF-β podstatným způsobem přispívají ke kolonizaci jater buňkami B16M jak u normálních myší, tak i u myší, kterým byly podány lipopolysacharidy (Okahara, H., Yagita, H., Miyake, K., a Okumura, K. (1994) Cancer Res., 54, 3233 - 3236; Garofalo, A., Chirivi, R. G. S., Foglieni, C., Pigot, R., Mortarini, R., Martin-Padura, I., Anichini, A., Gearing, A. J., Sanchez-Madrid, F., Dejana, E., a Giavazzi, R. (1995) Cancer Res., 55, 414 - 419; Lauri, D., Bertomeu, M.-C., a Orr, F. W. (1990) Clin. Exp. Metastasis, 8, 27 - 32; Anasagasti, M. J., Alvarez, A., Martin, J.
J. , Mendoza, L., a Vidal-Vanaclocha, F. (1997) Hepatology, 25, 840 846; Bani, M. R., Garofalo, A., Scanziani, E., a Giavazzi, R. (1991) J. Nati. Cancer Inst., 83, 119 - 123; Bertomeu, M. C., Gallo, S., Lauri, D., Haas, T. A., Orr, F. W., Bastida, E., a Buchanan, M. R. (1993) Clin. Exp. Metastasis, 11, 243 - 250; Burrows, F. J., Haskard, D. O., Hart, I. R., Marshall, J. F., Selkirk, S., Pool, S., a Thorpe, P. E. (1991) Cancer Res., 51, 4768 - 4775; Chirivi, R. G. S., Garofalo, A., Padura, I. M., Mantovani, A., a Giavazzi, R. (1993) Cancer Res., 53, 5051 - 5054; Vidal-Vanaclocha, F., Amezaga, C., Asumendi, A., Kaplanski, G., a Dinarello, C. A. (1994) Cancer Res., 54, 2667 - 2672; VidalVanaclocha, F., Alvarez, A., Asumendi, A., Urcelay, B., Tonino, P., a Dinarello, C. A. (1996) J. Nati. Cancer Inst., 88, 198 - 205; Malik, S. T., Naylor, M. S., East, N., Oliff, A., a Balkwill, F. R. (1990) Eur. J. Cancer, 26, 1031 - 1034; Orosz, P., Echtenacher, B., Falk, W., Ruschoff, J., Weber, D., a Mannel, D. N. (1993) J. Exp. Med. 177, 1391 - 1398; Orosz, P., Krůger, A., Hubbe, M., Ruschoff, J., Von Hoegen, P., a Mannel, D. N. (1995) Int. J. Cancer, 60, 867 - 871).
- 3 «««·
Navíc zahrnuje aktivace buněk endothelia jaterních sinusoidu (hepatic sinusoidal epithelium, HSE) zprostředkovaná mannosovým receptorem autokrinní, IL-1 β-zprostředkovanou expresi VCAM-1 buňkami HSE, která vede ke zvýšení adheze buněk B16M a tvorbě metastáz (Mendoza, L., Olaso, E., Anasagasti, M. J., Fuentes, A., a VidalVanaclocha, F. (1998) J. Cell Physiol., 174, 322 - 330). Bylo také ukázáno, že buňky HSE aktivované IL-Ιβ uvolňují faktory stimulující VLA-4, které zesilují adhezi buněk B16M k buňkám HSE (Anasagasti, M. J., Alvarez, A., Martin, J. J., Mendoza, L., a Vidal-Vanaclocha, F. (1997) Hepatology, 25, 840 - 846). IL-1 β tedy indukuje expresi VCAM1 a uvolňování faktoru stimulujícího VLA-4 z buněk HSE, což jim může propůjčit schopnost vytvořit prometastatické mikroprostředí pro některé rakovinné buňky exprimující VLA-4, zadržené v jaterních sinusoidech.
Blokování IL-Ιβ a TNF-α však vedlo pouze k částečnému odstranění tvorby metastáz, což naznačuje, že procesu se účastní také další faktory, které buď kompenzují nepřítomnost výše uvedených faktorů, nebo působí alternativními biochemickými cestami. Navíc je známo, že většina rakovinných buněk tvořících metastázy a cílových buněk není schopna tvořit tyto prozánětlivé cytokiny. Koncentrace ligandu receptoru pro endotoxin nebo mannózu navíc obvykle nevede k dostatečnému zvýšení pro indukci uvolňování prozánětlivých cytokinů. Je tedy zřejmé, že nejsou dobře charakterizovány četné další mediátory, které vyvolávají zvýšení exprese (upregulation) VCAM-1, ani jejich účast v průběhu kapilárního přenosu rakovinných buněk.
IL-18 (faktor indukující IFN-γ) je nový cytokin, který sdílí strukturní vlastnosti se skupinou proteinů IL-1 (Bazan, J. F., Timans,
J. C., a Kastelein, R. A. (1996) Nátuře, 379 (6566) 591) a funkční vlastnosti s IL-12 (Okamura, H., Tsutsui, H., Komatsu, T., Yutsudo, M., Hakura, A., Tanimoto, T., Torigoe, K., Okura, T., Nukada, Y., Hattori,
K. , Akita, K., Namba, M., Tanabe, F., Konishi, K., Fukuda, S., a
- 4 Kurimoto, M. (1995) Nátuře, 378, 88 - 91). Uvádí se, že produkce IL18 Kupfferovými buňkami aktivuje hepatotoxické biochemické cesty podmíněné jak ligandem TNF-a, tak i FAS, při poškození jater indukovaném endotoxiny (Tsutsui, H., Matsui, K., Kawada, N., Hyodo, Y., Hayashi, N., Okamura, H., Higashino, K., a Nakanishi, K. (1997) J. Immunol., 159 (8), 3961 - 7). Nedávno bylo odhaleno, že IL-18 má také prozánětlivé vlastnosti způsobené přímou stimulací exprese genu a syntézy TNF-cc buňkami CD3+/CD4+ a buňkami - přirozenými zabíječi, s následnou produkcí ΙΙ_-1β a IL-8 populací buněk CD14+, čímž byla ukázána neočekávaná klíčová úloha IL-18 v hierarchii cytokinů (Puren, A. J., Fantuzzi, G., Gu, Y., Su, M. S.-S., a Dinarello, C. A. (1998) J. Clin. Invest., 101, 711 - 724 ). Jeho možná úloha při tvorbě rakovinných metastáz však dosud nebyla objasněna.
Protein vázající se na interleukin-18 (interleukin-18 binding protein, IL-18BP) byl vyčištěn z moči chromatografií na kuličkách s navázaným IL-18, sekvenován, klonován a exprimován v buňkách COS7. IL-18BP zrušil indukci interferonu-γ (IFN-γ), IL-8 a aktivaci NFkB in vitro prostřednictvím IL-18. Podávání IL-18BP myším odstranilo cirkulující IFN-γ po podání LPS. IL-18BP tedy funguje jako inhibitor časné cytokinové odpovědi Th1. IL-18BP je konstitutivně exprimován ve slezině, patří do širší skupiny imunoglobulinů a má omezenou homologii s IL-1 receptorem typu II. Jeho gen byl lokalizován na lidském chromosomu 11q13 a v genomové sekvenci 8,3 kb nebyl nalezen žádný exon kódující transmembránovou doménu. Několik poxvirů kóduje domnělé proteiny s vysokou homologii k IL-18BP, což ukazuje, že virové produkty mohou oslabit IL-18 a interferovat s cytotoxickou odpovědí T-buněk (Novick, D., Kim, S.-H., Fantuzzi, G., Reznikov, L. L., Charles A., Dinarello, C. A., a Rubinstein, M. (1999) Immunity, 10, 127 - 136; a WO 99/09063). Jak se popisuje zvláště ve WO 99/09063, IL-18BP a muteiny, fúzované proteiny, funkční deriváty, aktivní frakce nebo cirkulárně permutované deriváty a jejich směsi jsou
| 4 »·· t • · · | • · | • k 4 | c | ·· • | • 4 • « |
| « · | • · | « | « | *· | |
| • | |||||
| « · | * · | • | * | ||
| ·** · | • fy | 4 t · | » · | • *. * · |
schopny vázat se na IL-18 a/nebo jsou schopny modulovat aktivitu IL18 a/nebo jsou schopny blokovat aktivitu IL-18.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje použití inhibitorů produkce a/nebo působení IL-18 při výrobě farmaceutických prostředků pro inhibici metastáz tumorů.
Inhibitory produkce IL-18 jsou například inhibitory kaspázy-1.
Inhibitory působení IL-18 se volí z protilátek proti IL-18, protilátek proti jakékoli z podjednotek receptoru IL-18, inhibitorů signální cesty receptoru IL-18, antagonistů IL-18, kteří soutěží s IL-18 a blokují receptor IL-18 a proteinů IL-18BP, muteinů, fúzovaných proteinů, funkčních derivátů, aktivních frakcí nebo cirkulárně permutovaných derivátů těchto látek, které se vážou na IL-18.
Používají se s výhodou inhibitory jako proteiny IL-18BP, nebo jejich mutein, fúzovaný protein, funkční derivát, aktivní frakce nebo cirkulárně permutovaný derivát, které mají stejnou aktivitu jako IL18BP.
Farmaceutické prostředky pro inhibici produkce a/nebo působení IL-18 pro inhibici tumorových metastáz jsou předkládaným vynálezem poskytovány také.
Další způsob inhibice produkce a/nebo působení IL-18, s cílem inhibovat tvorbu tumorových metastáz, je zavedení expresního vektoru obsahujícího kódující sekvenci pro inhibitor produkce a/nebo působení IL-18, jako je IL-18BP, do těla.
- 6 ·· ·· • · * * «··
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1. Experimentální kolonizace jater po intrasplenické injekci buněk B16M myším standardního typu, Ι1_-1β-/' a ICE'7'. Játra byla odstraněna desátý den po injekci buněk B16M a fixována ve fyziologickém roztoku s fosfátovým pufrem s 10% formaldehydem. Téměř všechny experimentální metastáty (černé melanotické uzliny) byly z jater myší IL-1 β'/_ a ICE'7' odstraněny.
Obr. 2. Vliv ireverzibilního inhibitoru ICE a protilátky proti myšímu IL-18 na adhezi buněk B16M k buňkám HSE, a produkci IL-1 β a TNF -a neošetřenými buňkami a buňkami HSE ošetřenými B16M-CM. Kultivované buňky HSE byly inkubovány v přítomnosti B16M-CM 10 hod. V některých experimentech dostaly jak ošetřené buňky HSE, tak i neošetřené buňky 10 μΜ ICEi nebo 10 pg/ml protilátky proti myšímu IL-18 před B16M-CM. Procento buněk B16M, které přilnuly k substrátu HSE, bylo vypočteno jako relativní hodnota vzhledem k počátečnímu počtu přidaných buněk. Navíc byly odebrány před adhezi supernatanty z kultur pro stanovení koncentrace IL-1 β a TNF-a metodou ELISA. Údaje znamenají střední hodnotu ±SD ze čtyř oddělených experimentů, přičemž každý se provádí při šestinásobném opakování (n = 24). Zvětšení adheze buněk B16M k buňkám HSE ošetřeným B16M-CM a produkce IL-1b nebo TNF-α vzhledem k neošetřeným buňkám HSE (*P<0,01) bylo statisticky významné podle Studentova nepárového t-testu (Studenťs two-tailed, unpaired ttest). Nedocházelo k žádným statisticky významným změnám v produkci IL-Ιβ nebo TNF-α a v adhezi buněk B16M k buňkám HSE, jestliže byly tyto buňky ošetřeny ICEi nebo protilátkou anti-IL-18 v nepřítomnosti B16M-CM (údaje nejsou ukázány).
Obr. 3. Vliv ICEi na adhezi buněk B16M k buňkám HSE ošetřeným B16M-CM in vitro. Buňky HSE byly inkubovány s bazálním médiem nebo B16M-CM 8 hod. Některé buňky HSE dostávaly 10 μΜ ICEi 18 hod před B16M-CM. Navíc byl k některým buňkám HSE • · · · přidáván v koncentraci 1 ng/ml rekombinantní myší IL-Ίβ spolu s B16M-CM po dobu 8 hod. V dalších experimentech bylo k buňkám HSE přidáváno 1 ng/ml myšího IL-Ιβ nebo 100 pg/ml TNF-a 6 hod, a bylo nebo nebylo přidáváno 10 pg/ml králičí polyklonální protilátky proti myšímu IL-18 1 hod před působením cytokinů. K neošetřeným buňkám HSE a buňkám ošetřeným cytokiny byla také přidávána nespecifická IgG polyklonální protilátka. Potom byly buňky HSE promyty a byly přidány buňky B16M značené BCEFCF-AM a buňky byly o 8 min později opět promyty. Procento buněk B16M, které přilnuly k substrátu HSE, bylo vypočteno jako relativní hodnota vzhledem k počátečnímu počtu přidaných buněk. Výsledky vyjadřují střední hodnotu ±SD tří oddělených experimentů, přičemž každý byl prováděn v šestinásobném opakování (n = 18). Rozdíly ve stupni adheze vzhledem k neošetřeným buňkám HSE (*) a buňkám HSE (**) ošetřeným IL-Ιβ nebo TNF-a-byly statisticky významné (P<0,01), podle Studentova nepárového t-testu. Nedocházelo ke statisticky významným změnám k adhezi buněk B16M na jiné kontrolní buňky HSE ošetřené ICEi, které navíc dostávaly nebo nedostávaly 1 ng/ml myšího IL-Ιβ po dobu 8 hod (data nejsou ukázána).
Obr. 4. In vitro adheze buněk B16M k buňkám HSE ošetřeným IL-18. Buňky HSE byly inkubovány s 1 ng/ml rekombinantního myšího IL-18 6 hod. V některých experimentech bylo přidáno 10 pg/ml TNFsRp55 nebo 100 ng/ml IL-1Ra 10 min před přidáním IL-18. V dalších experimentech bylo přidáváno k buňkám HSE 10 pg/ml protilátky antiVCAM-1 nebo podobná koncentrace nespecifické protilátky proti myšímu IgG 30 min před přidáním buněk B16M. Potom bylo určeno procento adheze buněk B16M, tak jak se popisuje dále v příkladech. Výsledky reprezentují střední hodnotu ±SD u tří oddělených experimentů, kdy každý se provádí v šestinásobném opakování (n = 18). Rozdíly ve stupni adheze vzhledem k buňkám HSE s bazálním médiem (*) a buňkám HSE ošetřeným IL-18 (**) byly podle Studentova nepárového t-testu statisticky významné (P < 0,01),.
- 8 Podrobný popis vynálezu
Adhezi rakovinných buněk na endotheliální buňky, která vede k metastatickému šíření tumorů, podporuje několik prozánětlivých cytokinů, včetně interleukinu (IL-1 β) a tumorového nekrózního faktorualfa (TNF-α). Tyto prozánětlivé cytokiny podporují adhezi a tvorbu metastáz pravděpodobně indukcí molekuly 1 adheze k cévním buňkám (VCAM-1). Předkládaný vynález ukazuje, že působení kondicionovaného média (CM) z kultur B16 melanomových buněk (B16M), tedy kultur (B16M-CM), podporuje adhezi mezi buňkami B16M a HSE in vitro. B16M-CM také indukuje produkci IL-Ιβ a TNF-a buňkami HSE in vitro. Nebylo však dosud jasně ukázáno, že tvorba tumorových metastáz je skutečně zprostředkována IL-1 β a TNF-a.
Předkládaný vynález ukazuje, že B16M-CM indukuje produkci IL-18 buňkami HSE, a že IL-18 je cytokin přispívající ke zvýšené adhezi buněk B16M k buňkám HSE. IL-18 zvyšuje adhezi aktivací exprese VCAM-1 v buňkách HSE bez účasti TNF-α nebo IL-Ιβ. Inkubace buněk HSE se specifickým inhibitorem kaspázy-1 (10 μΜ, 18 hod) úplně zastaví adhezivitu indukovanou B16M-CM bez snížení produkce TNF-α, a tento účinek není odvrácen přidáním myšího IL-Ιβ. Přidávání protilátky proti myšímu IL-18 do buněk HSE zabrání adhezivitě indukované B16M-CM, aniž by došlo k interferenci s indukcí IL-Ιβ a TNF-α prostřednictvím B16M-CM. Podobně také zabraňuje nedávno klonovaný vazebný protein IL-18 (IL-18BP) B16M-CMindukovanou adhezivitu buněk B16M na buňky HSE in vitro. Inhibitory TNF -a a IL-Ιβ jako je antagonista p55 rozpustného receptoru TNF nebo receptoru IL-1, nebyly schopny odvrátit tuto adhezi indukovanou IL-18. Předkládaný vynález tedy poskytuje inhibitory produkce a působení IL-18 jako nástroje pro inhibici tvorby tumorových metastáz. Inhibitory tvorby IL-18 zahrnují inhibitory kaspázy-1. Inhibitory působení IL-18 se volí ze skupiny protilátek proti IL-18, protilátek
- 9 zaměřených proti kterékoli ze dvou známých podjednotek receptoru IL18, inhibitorů signální biochemické cesty receptoru IL-18, antagonistů IL-18, kteří soutěží s IL-18 a blokují IL-18 a vazebných proteinů IL-18, které se vážou na IL-18 a blokují jeho biologickou aktivitu.
Předkládaný vynález se týká možné úlohy IL-18 v prozánětlivé regulaci směrem ke zvýšení exprese VCAM-1 podmíněné cytokiny, její možné interakce s dalšími cytokiny a prostředků pro prevenci této indukce VCAM-1. Podle předkládaného vynálezu bylo zjištěno, že IL18 funguje při iniciaci prozánětlivých událostí vedoucích k zesílení exprese VCAM-1 ve stěně jaterních sinusoidů, čímž je umožněna adheze rakovinných buněk a tvorba metastáz. Jako model aktivace endotheliálních buněk závislé na rakovinných buňkách byly použity primárně kultivované myší buňky HSE ošetřené B16M-CM s cílem vyšetřit úlohu IL-18 indukovaného buňkami B16M na mechanismus adheze buněk B16M na buňky HSE mechanismem závisejícím na VCAM-1. Specifická úloha IL-18 byla vyšetřována za podmínek specifické blokády receptoru IL-1 použitím IL-1Ra, zralého IL-Ιβ a inhibice sekrece IL-18 použitím ireverzibilního enzymového inhibitoru konvertujícího IL-1 (irreversible IL-1 converting enzyme inhibitor, ICEi), blokování TNF použitím rozpustného receptoru p55 TNF (TNF-sR p55) a blokování funkce IL-18 použitím protilátek proti IL-18 a vazebného proteinu IL-18. Navíc byly buňky B16M vstříknuty do sleziny myší ICE^' a IL-1 β'Λ. Nižší hustota metastáz pozorovaná u deficientních myší ve srovnání s normálními kontrolami ukazuje na účast IL-Ιβ a pravděpodobně IL-18 v prometastatické úloze zánětu (tabulka 1).
Prováděné experimenty in vitro ukazují, že produkce IL-18 je odpovědná za účinky stimulující adhezi na buňky HSE indukované supernatanty odvozenými z buněk B16M. Protože regulace ve smyslu zesílení exprese VCAM-1 je odpovědná za veškerou aktivitu stimulující adhezi buněk HSE ošetřených B16M-CM, tyto údaje ukazují, že IL-18 zprostředkuje expresi VCAM-1 buňkami HSE indukovanými cytokiny.
• · · · • ·
- 10 Navíc protilátky proti IL-18 snižovaly adhezi buněk inhibovanou B16MCM bez ovlivnění produkce TNF-α a IL-Ιβ buňkami HSE. Proto byla produkce IL-Ίβ a TNF-α v buňkách HSE IL-18-independentní a nepřispívala k adhezi. Naopak ani TNF-sR p55, ani IL-1Ra nebyly schopny inhibovat zvýšení adheze v buňkách HSE ošetřených IL-18, což potvrzuje, že ani autokrinní TNF-α, ani IL-Ιβ, neodpovídají za adhezivitu HSE indukovanou IL-18.
Výsledky u buněk HSE jsou v kontrastu s výsledky získanými v jiných buněčných systémech, jako jsou například non CD14+ mononukleární buňky lidské krve (Puren, A. J., Fantuzzi, G., Gu, Y., Su, M. S.-S., a Dinarello, C. A. (1998) J. din. Invest., 101, 711 - 724), kde IL-18 indukoval IL-Ιβ prostřednictvím produkce TNF-α. Je pravděpodobné, že existuje hierarchie HSE-specifických prozánětlivých cytokinů, ve které TNF-α a IL-Ιβ jsou nezávislé na řízení IL-18, ale používají IL-18 jako downstream mediátor regulace VCAM-1 ve smyslu zvýšení exprese.
Na rozdíl od myších buněk HSE neexprimovaly buňky B16M gen IL-18, jak bylo zjištěno RT-PCR, a inkubace s ICEi po dobu 18 hod nezastavila aktivity B16M-CM ve smyslu stimulace cytokinů a adheze na buňky HSE. Místní produkce IL-18 však může ovlivnit chování buněk B16M v průběhu jejich přechodu, nebo zachycení v mikrocévách jater. Dále bylo zjištěno, že inkubace buněk B16M s 1 ng/ml myšího IL-18 po dobu 6 hod dvojnásobně zvýšila jejich adhezi k neošetřeným buňkám HSE, a navíc snížil přídavek protilátky anti-VCAM-1 k buňkám HSE o 80 % adhezi zprostředkovanou IL-18, což ukazuje, že procesu se účastnila interakce VCAM-1/VLA-4. Podobně buňky B16M, ke kterým byl přidán supernatant z buněk HSE ošetřených B16M-CM na 6 hod rovněž statisticky významně (P < 0,01) dvojnásobně zvýšily svou adhezi k buňkám HSE VCAM-1dependentním mechanismem a protilátka anti-IL-18 zrušila tento stimulační účinek na adhezi.
* · · ·
- 11 Zjištění podle předkládaného vynálezu ukazují, že IL-18 představuje novou vazbu mezi uvolňováním prozánětlivých cytokinů v játrech a rozvojem metastáz. Jeho produkce buňkami HSE aktivovanými tumorem určuje dva komplementární mechanismy, které se účastní při regulaci adheze melanomových buněk k buňkám HSE: autokrinní mechanismus v buňkách HSE, který řídí TNF-a/IL-Ιβzprostředkovanou regulaci ve smyslu zvýšení exprese VCAM-1, a parakrinní mechanismus v buňkách B16M, kde dochází k regulaci směrem ke zvýšení exprese VLA-4 melanomových buněk, což umocňuje jejich adhezní kapacitu závislou na VCAM-1. Tato současná molekulární vzestupná regulace obou součástí buněčné adheze způsobuje vysokou účinnost biochemické cesty interakce rakovinných buněk s endotheliálními buňkami kapilár.
IL-18-indukovaná adheze buněk B16M je zastavena inhibitory produkce a/nebo působení IL-18. Inhibitory produkce IL-18 zahrnují inhibitory kaspázy-1. Inhibitory působení IL-18 jsou zvoleny ze skupiny protilátek zaměřených proti IL-18, protilátek zaměřených proti jakékoli ze dvou známých podjednotek receptoru IL-18, inhibitorů signální biochemické cesty receptoru IL-18, antagonistů IL-18, kteří soutěží s IL-18 a blokují receptor pro IL-18, a vazebných proteinů IL-18, které se vážou na IL-18 a blokují jeho biologickou aktivitu.
Navíc k přímému použití inhibitorů produkce a/nebo působení IL18 předpokládá předkládaný vynález také zavedení do buněk, kde je požadován inhibiční účinek na produkci a/nebo působení IL-18. K tomuto účelu je nezbytný systém pro specifické zavádění například DNA kódující IL-18BP do buněk. V oboru je známo několik možností, jak toho může být dosaženo. Do buněk například může být zaveden vhodný vektor nesoucí výše uvedenou DNA, kde tento vektor je schopný ovlivnit vložení DNA do buněk takovým způsobem, že DNA je v buňkách exprimována. Metody dodávání do buněk se popisují mj. například v US patentu 5,910,487, WO 99/29349 a dalších.
• · · ·
Farmaceutické prostředky podle vynálezu pro inhibici produkce a/nebo působení IL-18 jsou prostředky, které obsahují jako účinnou složku inhibitor zvolený z inhibitoru kaspázy-1, protilátky proti IL-18, protilátky proti kterékoli z podjednotek receptoru IL-18, inhibitoru signální biochemické cesty receptoru IL-18, antagonisty, který soutěží s IL-18 a blokuje receptor IL-18 a IL-18BP, nebo jejich mutein, fúzovaný protein, funkční derivát, účinná frakce nebo cirkulárně permutovaný derivát, které mají stejnou účinnost.
Termíny mutein, fúzovaný protein, funkční derivát, účinná frakce a cirkulárně permutovaný derivát mají stejný význam jako ve WO 99/09063.
Výhodnými účinnými složkami farmaceutických prostředků jsou protilátky proti IL-18 a IL-18BP.
Farmaceutické prostředky mohou také obsahovat běžné nosiče, pomocné látky a další složky známé v oboru, v závislosti na způsobu podávání, tj. injekcí, orálně nebo jakýmkoli jiným v oboru známým způsobem.
Konkrétní dávkování bude záviset na způsobu podávání, tělesné hmotnosti pacienta a dalších faktorech a bude je v každém případě určovat ošetřující lékař.
Po popisu vynálezu nyní budou následovat příklady, na kterých může být vynález snadněji pochopen, a které se poskytují pro ilustraci a nemají předkládaný vynález omezovat.
Příklady provedení vynálezu
Reagencie
Krysí protilátka proti myšímu IgG a krysí monoklonální protilátka proti myšímu VCAM-1 byly získány od firmy Serotec Ltd. (Oxford, Anglie). Rekombinantní myší IL-Ιβ byl získán od firmy R & D System lne. (Minneapolis, MN). Rekombinantní antagonista lidského receptoru IL-1 (IL-1Ra) byl laskavý dar firmy The Upjohn Co., Kalamazoo, Ml a lidský rozpustný receptor p55 TNF (TNFsR p55) byl laskavý dar firmy Serono lne., Norwell, MA. Inhibitor enzymu konvertujícího IL-Ιβ (ICEi) byl získán od firmy Alexis Co. (San Diego, CA). Rekombinantní myší IL-18 a králičí polyklonální protilátka IgG proti myšímu IL-18 byly zakoupeny od firmy PeproTech EC Ltd. (London, UK). Vazebný protein IL-18 (IL-18BP) byl vyroben jak bylo popsáno v Novick, D., Kim, S.-H., Fantuzzi, G., Reznikov, L. L., Charles A., Dinarello, C. A., a Rubinstein, M. (1999) Immunity, 10, 127 - 136.
Kultivace buněk B16M
Buňky B16M byly kultivovány, udržovány a pasážovány jak bylo popsáno v Anasagasti, M. J., Alvarez, A., Martin, J. J., Mendoza, L., a Vidal-Vanaclocha, F. (1997) Hepatology, 25, 840 - 846. Médium kondiciované buňkami B16M (B16M-CM) bylo připraveno následujícím způsobem: 5 x 105 buněk bylo vyseto v 25 cm2 T-baňce a kultivováno 24 hod. Potom byly buňky kultivovány další 24 hod v 5 ml bez sérového média (konečná hustota buněk 6 x 104 buněk/cm2). Supernatanty byly odděleny, zředěny 3 : 1 v čerstvém bezsérovém médiu a protlačeny filtrem 0,22 pm.
Analýza cytokinů
Uvolňování cytokinů z primárně kultivovaných buněk HSE a buněk B16M bylo měřeno použitím specifických kitů ELISA založených na monoklonálních protilátkách proti myšímu IL-Ιβ a TNF-α podle doporučení výrobce (R & D Systems, Minneapolis, MN).
« 9
Příklad 1
Kvantitativní adheze buněk B16M k primárním kulturám HSE
Buňky HSE byly separovány ze syngenních myší, identifikovány a kultivovány jak bylo popsáno dříve (Vidal-Vanaclocha, F., Rocha, M., Asumendi, A., a Barbera-Guillem, E. (1993) Hepatology, 18, 328 339). Buňky B16M byly značeny roztokem 2’,7’-bis-(2-karboxyethyl)-5,6-karboxyfluoresceinacetoxymethylesteru (BCECF-AM, Molecular Probes, Eugen, OR) jak bylo popsáno v Vidal-Vanaclocha, F., Amezaga, C., Asumendi, A., Kaplanski, G., a Dinarello, C. A. (1994) Cancer Res., 54, 2667 - 2672. Potom bylo 2 x 105 buněk/jamku přidáno do buněk HSE kultivovaných v 24-jamkové destičce a o 8 min později byly jamky třikrát promyty čerstvým médiem. Počet přichycených buněk byl zjišťován kvantitativní metodou založenou na dříve popsaném fluorescenčním měřicím systému (Vidal-Vanaclocha, F., Amezaga, C., Asumendi, A., Kaplanski, G., a Dinarello, C. A. (1994) Cancer Res., 54, 2667 - 2672). V některých experimentech byly buňky HSE předinkubovány s médiem B16M-CM několik hodin před přidáním buněk B16M.
Příklad 2
Test metastáz do jater
Samci myší C57BL/6J standardního typu, IL-Ιβ'7' ΙΟΕ'Λ byli získáni jak bylo popsáno výše (Fantuzzi, G., Puren, A. J., Harding, M. W., Livingston, D. J., a Dinarello, C. A. (1998) Blood, 91, 2118 2125). Byly použity myši stáří 6 až 8 týdnů umístěné v klecích po pěti. Metastázy do jater byly získány intraslezinnou injekcí anestetizovaným myším (Nembutal, 50 mg/kg intraperitoneálně) 3 x 105 živých melanomových buněk B16 suspendovaných v 0,1 ml Hanksova vyváženého solného roztoku. Desátý den po injekci rakovinných buněk byly myši v anestézii usmrceny. Jaterní tkáně byly zpracovány pro v ·
- 15 histologické vyšetření. Pro rozlišení metastatických buněk B16M od normální jaterní tkáně a určení hustoty jaterních metastáz byla použita densitometrická analýza digitalizovaných mikroskopických obrazů. Hustota jaterních metastáz je počet metastáz na 100 mm3 jater (založený na středním počtu ohnisek detekovaných v 15 řezech 10 x 10 mm2 na játra). Hodnota byla vypočtena pomocí dříve popsaných stereologických postupů (Vidal-Vanaclocha, F., Alvarez, A., Asumendi, A., Urcelay, B,, Tonino, P., a Dinarello, C. A. (1996) J. Nati. Cancer Inst., 88, 198 - 205).
Příklad 3
Snížený počet metastáz a růst buněk B16M iníikovaných do 1Ι_-1β- a
ICE-deficientních myší
V odstupu jednoho roku byly provedeny dva nezávislé experimenty s použitím dvou různých šarží stejných buněk B16M vstříknutých do sleziny dospělých myší C57BL/6J standardního typu, ICE'/_ a Ιί_-1β/_. Vyšetření získaných tkání prokázalo viditelné melanotické tumory ve slezině všech hodnocených myší bez významných rozdílů ve velikosti vyhodnocované na základě hmotnosti sleziny (tabulka 1). Naopak v játrech myší IL-Ιβ7', a zvláště ICE'Z' došlo k podstatnému snížení metastáz ve srovnání s játry myší standardního typu (obr. 1). Pro zjištění hustoty metastáz byla prováděna kvantitativní histologická analýza počtu a velikosti metastatických ohnisek (jako počet ohnisek/100 mm3) a objemu (procenta obsazení orgánu) u studovaných myších jater. Ve srovnání s myšmi standardního typu (tabulka 1) statisticky významně poklesla hustota jaterních metastáz (P<0,01) u jater myší IL-Ιβ'7' a ICE'/_ o 84 % až 90 %, což ukazuje, že většina vstříknutých buněk B16M nebyla schopná vrůst do jaterní tkáně těchto myší. Navíc také statisticky významně (P < 0,01) poklesl u myší IL-1 βΛ a ICE'Z' šest až sedmkrát ve srovnání s hodnotami u jater myší standardního typu, což
- 16 ukazuje, že buňky B16M schopné kolonizovat játra měly také sníženou růstovou rychlost. Autoři vynálezu také pozorovali rozdíl v těchto parametrech metastáz mezi játry myší 1L-1P_/' a ICE'7' vedoucí k odstranění metastáz u téměř všech jater myší ICE'Z' z experimentu 1 (obr. 1).
Tabulka 1
Kvantitativní histologická analýza experimentálního osídlení jater buňkami B16M vstříknutými do sleziny u myší IL-1, ~z~ a ICE~Z~
Skupina myší
Hustota metastáz (počet ohnisek/100 mm3)
Objem metastáz (jako % objemu jater)
Experiment I
Myši standardního typu 66,18 %
Myši IL-1'7'
10,05 %
Myši ICE'7' Experiment II
Myši standardního typu
59,62 %
Myši IL-1 β'7'
9,70 %
Myši ICE’7’
8,08 %
234,16 ± 58,36
25,18 ± 21,02*
13,56 ± 16,20*
198,40 ± 100,54
33,79 ± 19,89*
27,73 ± 15,68*
2,1 %
Údaje reprezentují průměrné hodnoty ± SD ze dvou nezávislých experimentů (7 až 15 myší v experimentální skupině).
* Jsou uvedeny rozdíly, které byly statisticky významné (dvoustranné, p < 0,01) vzhledem k myším standardního typu při použití analýzy variance (ANOVA) a Scheffeova F-testu.
- 18 • ·
Příklad 4
Autokrinní IL-18 zprostředkuje adhezivitu indukovanou TNF-α a IL-1g u buněk HSE aktivovaných B16M-CM
B16M-CM statisticky významně (P<0,01) zvyšovalo produkci TNF-α a IL-1 β buňkami HSE a jejich adhezivitu k jiným buňkám B16M ín vitro (obr. 2). Inkubace buněk HSE s 10 μΜ ICEi po dobu 18 hod úplně zastavila adhezivitu indukovanou B16M-CM bez poklesu produkce TNF-α buňkami HSE. Exogenně přidaný myší IL-Ιβ nevykompenzoval blokující účinek ICEi na HSE, což je v rozporu s podstatným zvýšením adheze buněk B16M v kontrolních buňkách HSE ošetřených IL-Ιβ (obr. 3). Skutečnost, že zvýšení adheze indukované B16M-CM bylo potlačeno v přítomnosti zvýšených koncentrací endogenně produkovaného TNF-α a exogenně přidaného IL-Ιβ ukazuje, že žádný z těchto cytokinů přímo vzestupně nereguloval adhezivitu HSE. Je důležité, že přítomnost protilátky proti myšímu IL18 přidané k buňkám HSE před stimulací médiem B16M-CM zabránila B16M-CM-indukované adhezivitě bez ovlivnění produkce indukovaného IL-Ιβ a TNF-α buňkami HSE (obr. 2). Navíc také protilátka proti IL-18 zabránila účinkům myšího IL-Ιβ a TNF-a stimulujícím adhezi na HSE (obr. 3), což ukazuje, že proadhezivní působení těchto cytokinů na HSE byla obě zprostředkovaná IL-18. RTPCR potvrdila, že buňky HSE exprimovaly gen IL-18 (údaje nejsou ukázány). Naopak myší IL-18 statisticky významně (P<0,01) zvýšil adhezi buněk B16M k buňkám HSE (obr. 4) a ani TNF-sR p55, ani IL1Ra nebyly schopny tuto adhezi inhibovat, což potvrzuje, že ani autokrinní TNF-α, ani IL-Ιβ neodpovídaly za IL-18-índukovanou adhezivitu k buňkám HSE. Jak je však ukázáno na obr. 4, protilátka proti VCAM-1 úplně inhibovala adhezi buněk B16-M k buňkám HSE ošetřeným IL-18. Kontrolní nespecifický IgG neovlivňoval vzestupnou regulaci adheze buněk B16M na buňky HSE ošetřené IL-18.
• · · ·
- 19 Příklad 5
1L-18BP zabraňuje adhezi melanomových buněk B16 indukované médiem kondicionovanym buňkami B16
Jak je ukázáno v tabulce 2, přídavek IL-18BP k buňkám HSE stimulovaným B16-CM snížil procento přichycených buněk z 35 % na 8,70 % (p < 0,01). To představuje stoprocentní inhibici, protože míra adheze byla nižší než míra přichycených buněk při použití bazálního média. Tento výsledek naznačuje, že endogenní IL-18 z buněk HSE může být endogenním zdrojem IL-18 navíc k IL-18 přítomnému v B16M-CM.
Tabulka 2
Inhibiční účinek IL-IBP na adhezi vlivem média kondicionovaného buňkami B16 melanomovych buněk B16 na endotheliální buňky jaterních sinusoidů % adheze melanomových buněk Bazální médium 10,15 ±1,5
B16-CM 35,10 ±4,4
B16-CM/IL-18BP (1 ng/ml) 15,00 ± 2,5**
B16-CM/IL-18BP (10 ng/ml) 8,70 ± 1,1**
Údaje reprezentují průměrné hodnoty ± SD ze dvou nezávislých experimentů prováděných v šestinásobném opakování (N = 12).
** Jsou uvedeny rozdíly, které byly statisticky významné (dvoustranně, p < 0,01) vzhledem k B16-CM s použitím analýzy variance (ANOVA) a Scheffeova F-testu.
Zastupuje:
Claims (9)
1. Použití inhibitorů produkce a/nebo působení IL-18 při výrobě farmaceutických prostředků pro inhibici tvorby tumorových metastáz.
2. Použití podle nároku 1, kde inhibitorem produkce IL-18 je inhibitor kaspázy-1.
3. Použití podle nároku 1, kde inhibitor působení IL-18 je zvolen z protilátek proti IL-18, protilátek proti kterékoli z podjednotek receptoru IL-18, inhibitorů signální biochemické cesty receptoru IL-18, antagonistů IL-18, které soutěží s IL-18 a blokují receptor IL-18, a vazebných proteinů IL-18, a jejich muteinu, fúzovaného proteinu, funkčního derivátu, aktivní frakce nebo cirkulárně permutovaného derivátu, se stejnou aktivitou.
4. Použití podle nároku 3, kde inhibitorem působení IL-18 je protilátka proti IL-18.
5. Použití podle nároku 3, kde inhibitorem působení IL-18 je IL18BP, nebo jeho mutein, derivát nebo fragment, který má stejnou aktivitu jako IL-18BP.
6. Farmaceutická prostředek pro inhibice produkce a/nebo působení IL-18 pro inhibici tvorby tumorových metastáz, • · * ·
- 21 ϊ ...........
vyznačující se tím, že obsahuje protilátky proti IL-18, protilátky proti kterékoli z podjednotek receptoru IL18, inhibitory signální biochemické cesty receptoru IL-18, antagonisty IL-18, které soutěží s IL-18 a blokují receptor IL18, a vazebné proteiny IL-18, a jejich mutein, derivát nebo fragment, který má stejnou účinnost, která váže IL-18 a blokuje jeho biologickou aktivitu.
9. Použití expresního vektoru kódujího inhibitor produkce a/nebo působení IL-18 pro výrobu farmaceutických prostředků pro inhibici tvorby tumorových metastáz.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL13104799A IL131047A0 (en) | 1999-07-22 | 1999-07-22 | Use of il-18 inhibitors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2002195A3 true CZ2002195A3 (cs) | 2002-06-12 |
| CZ302114B6 CZ302114B6 (cs) | 2010-10-20 |
Family
ID=11073044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20020195A CZ302114B6 (cs) | 1999-07-22 | 2000-07-17 | Farmaceutický prostredek pro inhibici produkce IL-18 |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7741276B2 (cs) |
| EP (1) | EP1206274B1 (cs) |
| JP (1) | JP4827352B2 (cs) |
| KR (1) | KR100682219B1 (cs) |
| CN (1) | CN1173736C (cs) |
| AR (1) | AR024907A1 (cs) |
| AT (1) | ATE363288T1 (cs) |
| AU (1) | AU782478B2 (cs) |
| BG (1) | BG65800B1 (cs) |
| BR (1) | BR0012675A (cs) |
| CA (1) | CA2380216C (cs) |
| CY (1) | CY1107932T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ302114B6 (cs) |
| DE (2) | DE60035049T2 (cs) |
| DK (1) | DK1206274T3 (cs) |
| EA (1) | EA005419B1 (cs) |
| EE (1) | EE04838B1 (cs) |
| ES (1) | ES2186596T3 (cs) |
| HK (1) | HK1048248B (cs) |
| HU (1) | HU228780B1 (cs) |
| IL (2) | IL131047A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02000838A (cs) |
| NO (1) | NO329827B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ516535A (cs) |
| PL (1) | PL202477B1 (cs) |
| PT (1) | PT1206274E (cs) |
| SK (1) | SK287522B6 (cs) |
| TR (1) | TR200200169T2 (cs) |
| UA (1) | UA73745C2 (cs) |
| WO (1) | WO2001007480A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200200390B (cs) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SK12942002A3 (sk) * | 2000-02-10 | 2003-05-02 | Abbott Laboratories | Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia |
| AU2002211744B8 (en) | 2000-10-11 | 2008-03-20 | Viron Therapeutics, Inc. | Nucleic acid molecules and polypeptides for immune modulation |
| US7718368B2 (en) | 2000-12-04 | 2010-05-18 | Viron Therapeutics Inc. | Immunomodulatory protein and useful embodiments thereof |
| AU2003299919B2 (en) * | 2002-10-08 | 2009-08-06 | Ares Trading S.A. | The use of cytokine able to bind IL-18BP and of inhibiting the activity of a second cytokine |
| US7968684B2 (en) * | 2003-11-12 | 2011-06-28 | Abbott Laboratories | IL-18 binding proteins |
| ES2370417T3 (es) | 2005-06-03 | 2011-12-15 | Ares Trading S.A. | Producción de una proteína de unión a il-18 recombinante. |
| PL1891088T3 (pl) | 2005-06-10 | 2012-03-30 | Ares Trading Sa | Sposób oczyszczania białka wiążącego IL-18 |
| CL2008002153A1 (es) | 2007-07-24 | 2009-06-05 | Amgen Inc | Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r. |
| US9812033B2 (en) * | 2013-03-06 | 2017-11-07 | Venkatesh R. Chari | Tactile graphic display |
| AU2023236289A1 (en) | 2022-03-15 | 2024-08-15 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
| WO2025003753A1 (en) | 2023-06-26 | 2025-01-02 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ256171A (en) * | 1992-09-02 | 1996-12-20 | Isis Pharmaceuticals Inc | Treating diseases amenable to treatment through modulating intercellular adhesion molecule metabolism or synthesis using oligonucleotides |
| US7141393B2 (en) * | 1996-12-26 | 2006-11-28 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Interleukin-18-receptor proteins |
| CN1269722A (zh) * | 1997-03-18 | 2000-10-11 | Basf公司 | 调节对皮质类固醇反应的方法及组合物 |
| IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
-
1999
- 1999-07-22 IL IL13104799A patent/IL131047A0/xx unknown
-
2000
- 2000-07-17 MX MXPA02000838A patent/MXPA02000838A/es active IP Right Grant
- 2000-07-17 UA UA2002021472A patent/UA73745C2/uk unknown
- 2000-07-17 AU AU58432/00A patent/AU782478B2/en not_active Expired
- 2000-07-17 CA CA2380216A patent/CA2380216C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 CZ CZ20020195A patent/CZ302114B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 HU HU0202107A patent/HU228780B1/hu unknown
- 2000-07-17 TR TR2002/00169T patent/TR200200169T2/ unknown
- 2000-07-17 AT AT00944201T patent/ATE363288T1/de active
- 2000-07-17 CN CNB008106894A patent/CN1173736C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 DE DE60035049T patent/DE60035049T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 SK SK88-2002A patent/SK287522B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 ES ES00944201T patent/ES2186596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 NZ NZ516535A patent/NZ516535A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 DE DE1206274T patent/DE1206274T1/de active Pending
- 2000-07-17 WO PCT/IL2000/000419 patent/WO2001007480A2/en active IP Right Grant
- 2000-07-17 EA EA200200189A patent/EA005419B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 PL PL353732A patent/PL202477B1/pl unknown
- 2000-07-17 EP EP00944201A patent/EP1206274B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 JP JP2001512563A patent/JP4827352B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-17 BR BR0012675-6A patent/BR0012675A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-07-17 EE EEP200200032A patent/EE04838B1/xx unknown
- 2000-07-17 PT PT00944201T patent/PT1206274E/pt unknown
- 2000-07-17 KR KR1020027000682A patent/KR100682219B1/ko active IP Right Grant
- 2000-07-17 DK DK00944201T patent/DK1206274T3/da active
- 2000-07-21 AR ARP000103786A patent/AR024907A1/es unknown
-
2002
- 2002-01-11 NO NO20020153A patent/NO329827B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-01-16 BG BG106311A patent/BG65800B1/bg unknown
- 2002-01-16 ZA ZA200200390A patent/ZA200200390B/xx unknown
- 2002-01-17 IL IL147675A patent/IL147675A/en unknown
- 2002-11-11 HK HK02108154.3A patent/HK1048248B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-07-06 US US11/825,548 patent/US7741276B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-13 CY CY20071100938T patent/CY1107932T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7741276B2 (en) | Use of interleukin-18 inhibitors to inhibit tumor metastasis | |
| KR970005050B1 (ko) | 포유류 사이토킨, il-ⅱ | |
| DE69024291T2 (de) | Rezeptoren für Tumornekrosisfaktor-alpha und -beta | |
| US20100305048A1 (en) | Novel use of cytokine inhibitors | |
| HU223602B1 (hu) | Krónikus reumatoid artritisz kezelésére szolgáló, IL-6 receptor elleni antitestet tartalmazó gyógyszerkészítmény | |
| CZ290843B6 (cs) | Léčivo proti sepsi | |
| JPH09510444A (ja) | 自己免疫疾患の治療におけるｉｌ−１２およびｉｌ−１２アンタゴニストの使用 | |
| JPH08507201A (ja) | リンホトキシン‐β、リンホトキシン‐β複合体、それらの薬学的な調製物および治療への使用 | |
| CA2237915A1 (en) | Osteoporosis treatment | |
| Rochester et al. | Cytokines and cytokine networking in the pathogenesis of interstitial and fibrotic lung disorders | |
| Jayaraman et al. | Enhancement of in vivo cell-mediated immune responses by three distinct cytokines. | |
| AU660493B2 (en) | Method for treatment of chronic lymphocytic leukemia using interleukin -6 | |
| Senpuku et al. | Effects of human interleukin‐18 and interleukin‐12 treatment on human lymphocyte engraftment in NOD‐scid mouse | |
| Howard | Cloning, sequence, and prokaryotic expression of the cDNAs for equine interleukin-1 | |
| VON ASMUTH et al. | TUMOR NECROSIS FACTOR-cc (TNF) AND INTERLEUKIN 6 IN A ZYMOSAN INDUCED SHOCK MODEL |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20200717 |