CZ20004084A3

CZ20004084A3 - Sukcinamidové inhibitory konverzního enzymu interleukinu-lbeta

Info

Publication number: CZ20004084A3
Application number: CZ20004084A
Authority: CZ
Inventors: Catherine Rose Kostlan; Elizabeth Ann Lunney; Kimberley Suzanne Para; Paul Galatsis; Anthony Jerome Thomas; Bradley William Caprathe; John Lodge Gilmore; William Glen Harter; Sheryl Jeanne Hays; Kristen Michele Knapp
Original assignee: Warner Lambert Co; Basf Ag
Priority date: 1999-04-30
Filing date: 1999-04-30
Publication date: 2001-05-16

Abstract

Sloučeniny obecného vzorce (I), kde jednotlivé symboly mají specifický význam. Farmaceutické kompozice obsahující sloučeniny obecného vzorce (I) a použití těchto kompozic při léčbě mrtvice, zánětlivých chorob jako je revmatoidní artritida nebo zánětlivé onemocnění střev, septického šoku, reperfuzního poškození, Alzheimerovy choroby, shigellóz a roztroušené sklerózy.

Description

Sukcinamidové inhibitory konverzního enzymu interleukinu-ΐβ

Oblast techniky

Vynález se týká skupiny sukcinamidových sloučenin, které inhibují konverzní enzym interleukinu-ΐβ. Vynález se rovněž týká farmaceuticky přijatelných kompozic obsahujících sloučeninu, která je inhibitorem konverzního enzymu interleukinu-ΐβ a způsobu použití uvedené kompozice pro léčbu mrtvice, zánětlivých chorob, septického šoku, reperfúzního poškození, Alzheimerovy choroby a shigellózy.

Dosavadní stav techniky

Interleukin- 1β -proteasa (známá rovněž jako interleukin-ΐβ konvertující enzym, ICE nebo Caspase 1) působí na prointerleukin-ΐβ (pro-IL-Ιβ) který se převádí na interleukin-ΐβ (TL-Ιβ), což je zánětlivý cytokin (Kostura M.J. a sp.,

Proc.Nat.Acad.Sci. 1989;86:5227-5231 a Black R.A. a sp., FEBS Let. 1989;247:386-391. S aktivitou interleukinu-1 souvisí několik chorob. Příklady chorob ve kterých má interleukin 1 svoji úlohu zahrnují zánětlivé choroby jako je revmatoidní artritida a zánětlivé onemocnění střev a neurozánětlivých chorob jako je mrtvice, roztroušená skleróza a Alzheimerova choroba (Dinarello C.A., Eur.Cytokine Netw., 1994;5:517). Mezi další choroby patří septický šok, reperfúzní poškození a shigellózy.

Prospěšné účinky prostředků modulujících aktivitu IL-Ιβ byly potvrzeny in vivo. Například bylo prokázáno, že sloučeniny které jsou antagonisty receptorů interleukinu-1 inhibují ischemické a excitotoxické poškození mozku u krys (například Relton J.K. a sp., Brain Research Bulletin • » • · · · *

*ίχ

1992;29:243-246). Navíc bylo zjištěno, že ICE inhibitory redukují zánět a pyrexii u krys (Elford P.R. a sp., British Journal of Pharmacology 1995;115:601-606).

Inhibitory ICE mohou rovněž inhibovat další cysteinproteasy ze skupiny ICE. V současné době došlo k úpravě nomenklatury cystein-proteas skupiny ICE (rovněž označovaných jako Caspasy ICE, známých jako Caspase-1). Reprezentanty této třídy enzymů v rámci nomenklatury popsané autory Alnemri a sp v Cell 1996;87:171 jsou: Caspase-2 (také označované Ich-1); Caspase-3 (také označované CPP31, Yama a apopain); Caspase-4 (také označované TX, Ich-2 a ICE rel-II); Caspase-5 (také označované ICE rel-III); Caspase-6 (také označované Mch2); Caspase-7 (také označované Mch3); Caspase-8 (také označované FLICE a Mch5); Caspase-9 (také označované ICE-LAP6 a Mch6); Caspase-10 (také označované Mch4). Obecně se uznává, že zástupci této skupiny enzymů mají klíčovou úlohu v biologických procesech zahrnujících jak zánět tak apoptózu (programovou smrt buňky) (Thornberry N.A. a sp., Perspectives in Drug Discovery and Design 1994;2:389-399).

Kromě účinků ICE na tvorbu IL-Ιβ byla prokázáno, že má svoji úlohu při tvorbě zánětlivého mediátoru interferonu-γ (Ghayur a sp., Nátuře 1997;386(6625):619-623). ICE převádí inaktivní proformu interferon-γ indukujícího faktoru (IGIF; interleukin-18) na aktivní IGIF, protein indukující tvorbu interferonu-γ T-lymfocyty a přirozenými buněčnými zabíječi. Interferon-γ je zahrnut v patogenezích chorob zahrnujících zánětlivé choroby a septický šok. Proto se předpokládá, že inhibitory ICE by mohly mít prospěšné účinky na uvedené chorobné stavy svými účinky na interferon-γ.

« · • · • ·

Většina inhibitorů ICE známých v oboru jsou peptidové sloučeniny (např. Dolle R. a sp., J.Med.Chem. 1994;37:563). Nicméně v současné době byly zveřejněny práce uvádějící použití pyriconových nebo pyrimidinových peptidomimetických inhibitorů (Dolle R. a sp., WO 9526958,1995; Dolle R. a sp.,

J.Med.Chem. 1996;39:2438; a Semple G. a sp.,

Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997,-7:1337). Rentgenovou krystalografií a modelováním molekul bylo zjištěno, že inhibitory na bázi pyridonu vhodně nahrazují P2-P3 zjištěné v peptidových inhibitorech (Golec J. a sp., Bioorg.Med.Chem.Lett. 1997;7:2181-2186).

Ve WO 9526958 je uvedeno použití inhibitorů ACE na bázi pyrimidonu. Sloučeniny uvedené ve WO 9526958 prokázaly určitou aktivitu v modelech in vitro a rovněž v pokusech in vivo, kde byly zjištěné hodnoty IC₅₀ v rozmezí od 0,1 do 10 pmol při hodnocení procenta inhibice uvolnění IL-Ιβ. Přestože tyto hodnoty potvrzují určitou aktivitu, je žádoucí nalézt ještě lepší inhibitory ICE pro léčbu chorob jako je zánět,

Alzheimerova choroba, mrtvice a septický šok.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce (I) o f F ll

R'

R· kde

Y znamená

nebo

C^SN

-co₂r’ každý substituent R' nezávisle znamená vodík nebo Ci-C₆alkylovou skupinu;

R¹ a R² nezávisle znamenají skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

Ci-C6alkyl,

-OH, -(CH₂)_naryl,

-(CH₂)„-substituovaný aryl,

- (CH₂)_n-O-aryl,

-(CH₂)η-O-substituovaný aryl,

- (CH₂)_n-S-aryl,

- (CH₂)_r.-S-substituovaný aryl,

- (CH₂)_r.-S-heteroaryl,

- (CH₂) r.-S-substituovaný heteroaryl,

- (CH₂) _r.-NR'-aryl,

- (CH₂) _r.-NR'-substituovaný aryl,

- (CH₂) _r-NR'-heteroaryl,

- (CH₂) r-NR'-substituovaný heteroaryl,

- (CH₂) _r.-heteroaryl, nebo

- (CH₂) _r.-substituovaný heteroaryl;

každé n nezávisle znamená 0 až 6;

R³ znamená vodík nebo Ci-Cgalkylovou skupinu;

·· » · · · · > · · · · ► · ··· · · ► · · · • · ·· ···· < · e

R⁴ znamená Ci-C₆alkylovou skupinu nebo vodík; a

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík, í

-(CH₂)_n-N-S-(CH₂)_n-aryl,

n.

R'O i

-(CH₂)_n-N-S-(CH₂)_n-^:substituovaný aryl,

I 1

R'0

R’ O

-(CH₂)_n-N-S-(CH₂)_n

O

R’ 0 θ

-(C^-N—S-(CH2)_nO

R’ 0

-(CH₂)_n-N—S—(CH₂)_n0

f· θ ^H3° (CH₂)_N—S-(CH₂)_n

- (CH₂) r.-S- (CH₂) n-aryl,

- (CH₂) η-S- (CH₂) η-substituovaný aryl,

• · • · • ·

nebo

-(ray-Q

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ve výhodném provedení, ve sloučeninách obecného vzorce (I)

R' znamená vodík nebo methylovou skupinu.

V dalším výhodném provedení každý substituent R' znamená vodík.

V dalšírr. výhodném provedení

R³ znamená vodík a

R⁴ znamená skupinu ze skupiny zahrnující methyl, ethyl nebo isopropyl.

V dalším výhodném provedení

R¹ znamená vodík nebo methylovou skupinu; a

R² znamená skupinu ze skupiny zahrnující • ·

Ί « ·

- (CH₂) --fenyl, vodík,

- (CH₂) --O-fenyl,

-OH,

- (CH₂) --benzimidazolyl,

- (CH₂)--indolyl, nebo

- (CH₂) --fenol.

V dalším výhodném provedení Y znamená o

II c-x

V ještě dalším výhodném provedení

Y znamená

CO₂R’

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

O

-CH₂-NH-S-CH₂CH₂-fenyl

O

• · • ·

-CH₂-S-CH₂CH₂CH₂-f enyl, nebo

O

Podle ještě výhodnějšího provedení vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce (I)

kde

OC|-C₆ alkyl • 999 9 9 ·· 9»99 9 9 99· každý substituent R' nezávisle znamená methylovou skupinu;

každé n nezávisle znamená 2 až 3;

R¹ a R² nezávisle znamenají skupinu ze vodík nebo skupiny zahrnující vodík,

- (CH₂) „-fenyl,

- (CH₂) η-0-fenyl, -OH,

» • · • · ·· fefe ♦ fefefe · • fefefe · • · fefefe fe · ♦ · fefe fefe fefe fefe

R^a, R^b a R^c nezávisle znamenají halogen, -O (Οχ-Οβ) alkylovou skupinu nebo vodík;

R³ znamená vodík;

R⁴ znamená skupinu ze skupiny zahrnující methyl, ethyl nebo isopropyl; a

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

O

D

-CH₂-NH-S-CH₂CH₂-fenyl, J

O « ·

—ch₉nhsch₉—r 7 ² H ² Δ7 o

-CH₂-S-CH₂CH₂CH₂-f enyl,

nebo a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ve výhodném provedení ve sloučenině obecného vzorce (I

R¹ znamená vodík a

R² znamená skupinu ze skupiny zahrnující

- (CH₂) _r.-indolyl,

- (CH₂) r.-substituovaný indolyl, ·· ·· • · 9 9 • 9 9 9

99 9

9

- (CH₂) n-NH-fenyl,

- (CH₂) η-0-fenyl,

- (CH₂) n^_tetrazolyl,

- (CH₂) „-fenyl, ^_(CH₂) „-substituovaný fenyl,

-(CH₂) „-substituovaný benzimidazolyl,

- (CH₂) „-benztriazol,

- (CH₂) indazolyl,

- (CH₂)„-benzimidazolyl,

- (CH₂) „-pyridyl,

- (CH₂) „-naftyl,

- (CH₂) „-chinolinyl.

V nejvýhodnějším provedení vynález poskytuje následující sloučeniny:

3-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina;

3-(2-karbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2- (fenethylkarbamoyl-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

3-(2-karbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina;

3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

(S, S) -3-{ 3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]fe · •fe ♦♦ fefefefe ♦ · * · · ··♦· · ···· ·· · «Β ·* *·· »«< > * « · * · ··♦· ···

.......... ·· .i.

-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

3-{3-methyl-2-[ (3-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-5-(3-fenyl-propylsulfanyl)-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (methyl-fenethyl-karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxopentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3-{ 3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl] -butyrylamino}-4-oxo-5-(2-oxo-2H-chromen-6-yloxy)-pentanová kyselina;

5—[3— (lH-imidazol—2-yl) -naftalen-2-yloxy]-3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2-hydroxykarbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2 —{[2— (lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl)-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[[3- (4-hydroxyfenyl) -propyl karbamoyl]-methyl]-butyrylamino} -4-oxo-pentanová kyselina;

99 • · · Φ • Φ Φ 9 • ΦΦΦΦ • Φ Φ

ΦΦ ΦΦ • Φ ΦΦ • 9 9 9 • 9 9 • 9 9 9

9 9 ·· 9999

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-1-ylmethansulfonylamino) -3- (2-{[2- (lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3 - (3-methyl-2-{[2- (7-methyl-1H-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]] hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (2—{[2 — (6-fluor-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-karbamoyl}-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

3-{2-[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept -1-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (lH-tetrazol-5-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7 -dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept- 1-ylmethansulfonylamino) -4-oxo-3-{2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl) -butyrylamino}-pentanová kyselina;

·· ··

·· ·· • · · · • · · · • · ··· • · · ·· ··

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3 (2 —{[2— (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

3- (3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]methyl}-butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3- [3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl] -karbamoyl}-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina;

— {2—[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3 (2 —{[3— (4-hydroxy-fenyl) -propylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-pyridin-4-yl-ethylkarbamoyl) -methylj-butyry lamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-yl methansulf ony lamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-naf talen-2-yl-ethy 1 karbamoyl) -methyl j-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-4-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-chinolin-2-yl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(3-naftalen-2-yl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulf onylamino) - 3-{ 3-methyl-2-[ (3-pyridin-3-yl-propylkarbamoyl)

-methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

• φ φφ * φ · φ φ φ φ φ φφφ

Φ ·

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1)hept-1-ylmethansulfonylamino) 3-{3-methyl-2-[ (2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2—{[2 — ( 6-fluor-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methylbutyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

3- [3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl] -karbamoyl}-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

3- (3-methyl-2-{[methyl- (2-phenoxy-ethyl) -karbamoyl]-methylj-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

3- (2—{[2—(5,6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl)-ethylkarbamoyl]-me thy l}-3-methyl-butyry lamino) - 4-oxo-pentanová kyselina, trifluoracetatová sůl;

5-(7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5- (7,7-dimethyl-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (2 —{[2— (lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl·]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulf ony lamino) - 3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-4-yl-propyl karbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ ( 3-chinolin-2-y 1-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

φφ φ φ φ « φ φ

·· ·« • · * · • · ♦ φ • φφφφ « · φ

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-naf talen-l-yl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-3-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3-{2-[ (2-benzoimidazol- 1-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2-(l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-butyry lamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(2-pyridin-4-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3- (2-{[2- (5-acetyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-lylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)3-(3-methyl-2-{[2-(lH-tetrazol-5-yl)-ethylkarbamoyi]-methyl}-buty ryl amino) 4-oxo-pentanová kyselina;

N⁴-(2-benzoimidazol-l-yl-ethyl)-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -N⁴-[2- (lH-indol-3-yl)-ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-sukcinamid;

N⁴-[2- (5,6-dichlor-benzoimidazol-l-yl) -ethylj-N¹- (2-ethoxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

• 9 • Φ ·· • · · · • · φ « • · φφφ « • · · ·· Φ· • Φ 9Λ • · · φ

Φ Φ Φ • · · Φ • Φ · ** ΦΦΦΦ

Φ Φ • Φ

Φ ·

Φ Φ

4

Ν -(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N -(2-fenoxyethyl)-sukcinamid;

Ν¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2-(6-methoxy-lH-indol-3-yl)-ethyl]-sukcinamid;

N⁴-(2-benzotriazol-l-yl-ethyl)-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-(2-indazol-l -yl-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-(2-fenylamino-ethyl)-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(6-fluor-lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(7-methyl· -lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (2-methyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[3- (3,4,5-trimethoxy-fenyl) -propyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (fenyl) -ethyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4- (fenyl) -butyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -N⁴-(2-indol-l-yl-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4- (fenyl) -propyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(5-fluor1H-indol-3-yl) ethyl]-2 -isopropyl- sukcinamid ;

3-{2-[ (2-benzoimidazol-1-yl-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

·* ·» • · φ·*

Φ ·· « · « • · <

• φφφ « • e ··

3-(3-methyl-2-{[2-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3- (2-{[2-(5-fluor-l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina;

3-(2 —{[2 — (5, β-dichloro-benzoimidazol-l-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino) -4-oxó-butanová kyselina;

3- (2 —{[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethyl)-methyl-karbamoyl]-methyl}-3-měthyl-butyrylmino)-4-oxo-butanová kyselina;

3—{2—[ (2-benzotriazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

3—{2—[ (2-indazol-1-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;·

3—[2— ({[2- (5, 6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]-me thyl karbamoyl}-methyl) -3-methyl-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina;

3-[2- ({[2- (2-methyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]methylkarbamoyl}-methyl)-3-methyl-butyrylamino]4-oxo-butanová kyselina;

3-(3-methyl-2-{[3- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-propylkarbamoyl]-methyl}butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3-{3-methyl-2-[ (2-f enoxy-ethyl karbamoyl) -methy 1]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina, ethylester;

3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]butyrylamino}-propionová kyselina, ethylester; a

3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]butyrylamino}-propionová kyselina.

Vynález rovněž poskytuje farmaceutickou kompozici obsahující sloučeninu obecného vzorce (I).

• · • · · tt ♦ ·

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby nebo prevence mrtvice, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi po mrtvici nebo u kterého je riziko mrtvice.

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby zánětlivých chorob, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi trpícího zánětlivou chorobu.

Ve výhodném provedení způsob léčby zánětlivé choroby zahrnuje léčbu zánětlivé choroby kterou je revmatoidní artritida nebo zánětlivé onemocnění střev.

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby septického šoku, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi majícího septický šok.

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby reperfúzního poškození, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi trpícího reperfúzním poškozením.

Vynález, rovněž poskytuje způsob léčby Alzheimerovy choroby, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi trpícího Alzheimerovou chorobou.

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby shigellóz, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství • · · sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi trpícího shigellózou.

Vynález rovněž poskytuje způsob léčby roztroušené sklerózy, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi trpícího roztroušenou sklerózou.

Vynález rovněž zahrnuje způsob inhibice konverzního enzymu interleukinu-ΐβ, kde uvedený způsob zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) pacientovi u kterého je zapotřebí inhibovat konverzní enzym interleukinu- 1β.

Podrobný popis vynálezu

Výraz alkyl znamená uhlovodíkové řetězce s přímým nebo s rozvětveným řetězcem. Typické příklady alkylových skupin zahrnují methyl, ethyl, propyl, isopropyl, isobutyl, butyl, terc.butyl, sek.butyl, pentyl a hexyl. Výhodné- alkyly zahrnují Ci-Cgalkylové skupiny.

Výraz alkoxy znamená alkylovou skupinu připojenou k atomu kyslíku. Typické příklady alkoxyskupin zahrnují methoxy, ethoxy, terc.butoxy, propoxy a isobutoxy.

Výraz halogen zahrnuje chlor, fluor, brom a jod.

Výraz alkenyl znamená uhlovodíkový řetězec s přímým nebo s rozvětveným řetězcem obsahujícím jednu nebo více dvojných vazeb uhlík-uhlík.

• · ·· • · · · ···· ·· • ······ · · · · · • · · · · 4 · · ·* ** ** ***’ **

Výraz alkinyl znamená uhlovodíkový řetězec s přímým nebo s rozvětveným řetězcem obsahujícím jednu nebo více trojných vazeb uhlík-uhlík.

Výraz aryl znamená aromatický uhlovodík. Typické příklady arylových skupin zahrnují fenyl a naftyl.

Výraz heteroatom zahrnuje kyslík, dusík a síru.

Výraz heteroaryl znamená arylovou skupinu ve které jeden nebo více atomů aromatického uhlovodíku je nahrazeno heteroatorném. Příklady heteroarylových skupin zahrnují, ale nejsou omezené jen na ně, pyridyl, imidazolyl, pyrrolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, benzotriazolyl, indazolyl, thienyl, furyl, pyranyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, indolyl, chinolyl, naftyridinyl, a isoxazolyl.

Výraz cykloalkyl znamená cyklický uhlovodík. Příklady cykloalkylových skupin zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, a cyklohexyl.

Symbol znamená vazbu.

Výraz pacient se týká všech živočichů včetně člověka. Možnými příklady pacientů jsou lidé, skot, psi, kočky, kozy, ovce a prasata.

Výraz substituovaný znamená, že základní organická skupina obsahuje jednu nebo více substitučních skupin.

Například substituovaný cyklohexyl znamená cyklohexylovou skupinu obsahující jednu nebo více substitučních skupin. Tyto substituční skupiny zahrnují, ale bez omezení jen na ně, • ······ · * * · « I • · · · · φ ··· ·» ·· «· ···· «· ·· ο

II halogen, -CF₃, Ci-C₈alkyl, -CN, CF₃, -NO₂, -COCi~C₆alkyl,

O 0

II u

-NHCOCi-C₆alkyl, CCi-C₆alkyl, -NH₂, -O-fenyl, -NHCj-Cgalkyl,

-N (Ci-C₈alkyl) ₂, -SCi-C₆alkyl, -OCi-C₈alkyl a -OH. Zvláště výhodné substituční skupiny zahrnují, ale bez omezení jen na ně terč.butyl, methyl, -OH, -NH₂, -SCH₃, -CN, -OCH₃,

0

II |t

-COCi-C₆alkyl, -NHCOCi-Cgalkyl, brom, fluor a chlor.

Výraz cykloalkenyl znamená cykloalkylovou skupinu obsahující nejméně jednu dvojnou vazbu uhlík-uhlík. Příklady cykloalkenylových skupun zahrnují cyklopenten, cyklobuten a cyklohexen.

Výraz heterocyklyl nebo heterocykloalkyl znamená cykloalkylovou skupinu ve které jeden nebo více atomů uhlíku je nahrazeno heteroatomem. Příklady heterocyklických skupin zahrnují, ale nejsou omezené jen na ně, pyrrolidinyl, piperidinyl, a piperazinyl.

Sloučeniny vzorce (I) lze podávat pacientovi buď samotné nebo jako součást farmaceuticky přijatelné kompozice. Uvedené kompozice lze podávat pacientům jako jsou lidé nebo zvířata buď orálně, rektálně, parenterálně (intravenózně, intramuskulárně nebo subkutánně), intracisternálně, inttravaginálně, intraperitoneálně, intravezikálně, lokálně (prášky, masti, nebo kapky), nebo bukálně nebo ve formě nosního spreje.

• » • · • · · ·

Kompozice vhodné pro parenterální injekční podání mohou obsahovat fyziologicky přijatelné sterilní vodné nebo nevodné roztoky, disperze, suspenze nebo emulze, a sterilní prášky určené k rekonstituci na sterilní injekční roztoky nebo disperze. Příklady vhodných vodných nebo nevodných nosičů, ředidel, rozpouštědel nebo vehikul zahrnují vodu, ethanol, polyoly (propylenglykol, polyethylenglykol, glycerol a podobně), jejich vhodné směsi, rostlinné oleje (jako je olivový olej) a injektovatelné organické estery jako je ethyloleát. Vhodná fluidita se udržuje například použitím potahů, jako potahů s použitím lecitinu, použitím vhodné velikosti částic v případě disperzí a použitím povrchově aktivních prostředků.

Uvedené kompozice mohou rovněž obsahovat další pomocné prostředky jako jsou konzervační prostředky, smáčecí prostředky, emulgátory a dispergační prostředky. Prevence před účinky mikroorganizmů se zajišťuje různými antibakteriálními protiplísňovými prostředky jako jsou například parabeny, chlorbutanol, fenol, kyselina sorbová a podobně.Může také být potřebné včlenit isotonizující přísady jako jsou například cukry, chlorid sodný a podobně. Prodlouženou absorpci u injekčních lékových forem lze docílit požitím prostředků oddalujících absorpci, jako například pomocí monostearanu hlinitého a želatiny.

Pevné lékové formy pro orální podání zahrnují tobolky, tablety, pilulky, prášky a granule. V těchto lékových formách je účinná sloučenina obsažená ve směsi s nejméně jednou inertní obvykle používanou přísadou (nebo nosičem) jako je citrát sodný nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, nebo s ·· ·· 9 1 · · · · · tt ·» · · · · · · ··· ···« ·· · tttt · • ····«« « tt ·· tt · ·· tttttttt ·«· «· tttt ·· ···· tttt ···

a) plnivy nebo ředidly zahrnující například škroby, laktosu, sacharosu, mannitol a kyselinu křemičitou;

b) pojivý jako je například karboxymethylcelulosa, alginaty, želatina, polyvinylpyrrolidon, sacharosa a arabská guma;

c) humektanty jako je například gylcerol;

d) prostředky ovlivňujícími rozpadavost zahrnujícími například agar, uhličitan vápenatý, bramborový nebo tapiokový škrob, kyselinu alginovou, určité komplexní křemičitany, a uhličitan sodný;

e) retardéry rozpustnosti jako je například parafin;

f) akcelerátory absorpce jako jsou například kvarterní amoniové sloučeniny;

g) smáčecí prostředky jako je například cetylalkohol a glycerolmonosterat;

h) adsorbenty jako je například kaolin a bentonit; a

i) kluzné prostředky zahrnující například talek, stearan hořečnatý, pevné polyethylenglykoly, laurylsíran sodný, nebo jejich směsi. Lékové formy jako jsou tobolky, tablety, a pilulky, mohou také obsahovat tlumící přísady.

Pevné kompozice podobného typu je také možné použít jako náplně do měkkých a tvrdých želatinových tobolek s použitím přísad jako je laktosa nebo mléčný cukr a rovněž • · * · tt ·· ·· Φ • · · · 9 9 · · ··· » · · · 9 9 9 9 9 9

999999 9 9 4 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 4 9 999 9 4 9 49 9 polyethylenglykoly o vysoké molekulové hmotnosti a podobné prostředky.

Pevné lékové formy, jako jsou tablety, dražé, tobolky, pilulky a granule je možné připravit ve formě opatřené potahy nebo vrstvami, jako jsou enterosolventní formy a další formy známé v oboru. Tyto vrstvy mohou obsahovat také prostředky pro ochranu před světlem a uvedené kompozice mohou být ve formě, ze které se aktivní sloučenina nebo sloučeniny uvolňují v určité části intestinálního traktu v prodloužené době. Tyto kompozice mohou být ve formě s nosiči zahrnujícími polymerní složky a vosky. Aktivní sloučeniny mohou být také, je-li to žádoucí, v mikroenkapsulované formě s jednou nebo s .více výše uvedenými přísadami.

Tekuté lékové formy pro orální podání zahrnují farmaceuticky přijatelné emulze, roztoky, suspenze,· sirupy a tinktury. Kromě aktivních sloučenin tyto tekuté lékové formy mohou obsahovat inertní ředidla obvykle používaná v oboru, zahrnující vodu a další rozpouštědla, solubilizační prostředky a emulgátory, jako například ethylalkohol, isopropylalkohol, ethylkarbonat, ethylacetát, benzylalkohol, benzylbenzoat, propylenglykol, 1,3-butylenglykol, dimethylformamid, oleje, zejména olej z bavlníkových semen, podzemnicový olej, kličkový olej z obilí, ricinový olej a sezamový olej, glycerol, tetrahydrofurfurylalkohol, polyethylenglykoly a estery sorbitanu s mastnými kyselinami a směsi těchto prostředků a podobně.

Kromě inertních ředidel kompozice uvedeného typu obsahovat adjuvantní prostředky jako jsou smáčecí prostředky, emulgační a suspendační prostředky, sladidla, prostředky korigující chuť a vůní a aromatizační prostředky.

«··· · · · · · · • β····· * · · · · · • · ·«·· ·*« ·· ·· 99 ···· 999

Suspenze mohou obsahovat kromě aktivních sloučenin suspendační prostředky, jako jsou například ethoxylované isostearylalkoholy, polyoxyethylenované estery sorbitolu a sorbitanu, mikrokrystalickou celulosu, metahydroxid hlinitý, bentonit, agar a tragant, nebo směsi těchto substancí a podobně.

Kompozice pro rektální podání jsou výhodně ve formě čípků, které lze připravit smísením sloučenin podle vynálezu s vhodnými nedráždivými přísadami nebo nosiči jako je kakové máslo, polyethylenglykol nebo čípkový voskový základ, které jsou při teplotě místnosti v tuhém stavu, ale při tělesné teplotě jsou tekuté a proto v rektální nebo vaginální dutině tají za uvolnění účinné složky.

Lékové formy pro topické podání sloučeniny podle vynálezu zahrnují masti, prášky, spreje a inhalační přípravky. Aktivní složka se smísí za sterilních podmínek s fyziologicky přijatelným nosičem a dalšími případně potřebnými složkami kterými mohou být konzervační prostředky, pufry nebo hnací plyny. Vynález rovněž zahrnuje oftalmické.přípravky jako oční masti, prášky a roztoky.

Sloučeniny podle vynálezu je možné pacientovi podávat v dávkách v rozmezí od asi 0,1 do asi 1,000 mg denně. Pro průměrného dospělého člověka o tělesné hmotnosti asi 70 mg je výhodná dávka v rozmezí od asi 0,01 do asi 100 mg/kg tělesné hmotnosti denně. Specifická použitá dávka však může být různá. Tato dávka může například záviset více faktorech zahrnujících požadavky pacienta, závažnost stavu který má být léčen a účinnosti sloučeniny použité k terapii. Stanovení optimálních • tt · · · · tttt * · · · · · tt • ······ · · tt* 9 • tt ·*·· ·· ₂₈ .. .. .. .... ..

dávek pro konkrétního pacienta je pro pracovníky v oboru obvyklá záležitost.

Výrazy farmaceuticky přijatelné soli, estery, amidy a proléčiva použité v tomto textu zahrnuje ty karboxylatové sole, adični soli s aminokyselinami, estery, amidy a proléčiva sloučenin podle vynálezu které jsou v rámci lékařského posouzení podle správné klinické praxe vhodné k použití, při kterém dochází ke styku s tkáněmi pacienta aniž by došlo nežádoucím toxickým, dráždivým, alergickým a podobným odezvám při zvážení poměru prospěchu/ohrožení pro pacienta, a které jsou účinné pro zamyšlený účel, a zahrnují rovněž zwitteriontové formy sloučenin podle vynálezu tam kde jsou možné. Výraz soli se týká relativně netoxických adičních solí sloučenin podle vynálezu s anorganickými a s organickými kyselinami. Tyto soli lze připravovat in šitu během konečné izolace a přečištění sloučenin nebo samostatně reakcí přečištěné sloučeniny ve formě její volné baze s vhodnou organickou nebo s anorganickou kyselinou a s·následnou izolací takto vzniklé soli. Typické příklady solí zahrnují hydrobromid, hydrochlorid, síran, hydrogensíran, dusičnan, acetat, oxalat, valerat, oleát, palmitat, stearat, laurat, borát, benzoat, laktat, fosfát, tosylat, citrát, maleat, fumarat, sukcinat, vínan, naftylat, mesylat, glukoheptonat, laktobionat, laurylsulfonat a podobně. Obsažené kationty mohou být kationty alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin jako jsou kationty sodíku, lithia, draslíku, vápníku, hořčíku a podobně, a rovněž netoxické amoniové, kvarterní amoniové a aminové kationty zahrnující, ale bez omezení jen na ně, amonium, tetramethylamonium, tetraethylamonium, methylamin, dimethylamin, trimethylamin, triethylamin, ethylamin a podobně. (Viz například Berge S.M. a sp., Pharmaceutical ···· · · · ·* · • ··«··· · · · · 9 · • · «··· 9 9 9

9 9 4 4 9 999 9 94. 44 9

Salts J.Pharm.Sci. 1977;66:1-19, kde tato práce je do textu včleněna odkazem).

Příklady farmaceuticky přijatelných netoxických esterů sloučenin podle vynálezu zahrnují Ci-Cgalkylestery, kde alkylová skupina má přímý nebo rozvětvený řetězec. Mezi přijatelné estery patří rovněž C₅-C7cykloalkylestery a arylalkylestery jako je, ale bez omezení jen na něj, benzylester. Výhodné jsou Ci-C4alkylestery. Estery sloučenin podle vynálezu je možné připravit obvykle používanými způsoby.

' Příklady farmaceuticky přijatelných netoxických amidů sloučenin podle vynálezu zahrnují amidy odvozené od amoniaku, primárních Ci-Cgalkylaminů, a sekundárních Ci-C₆dialkylaminů kde alkylová skupina má přímý nebo rozvětvený řetězec. V případě sekundárních aminů může uvedený amin být ve formě 5- nebo 6členného heterocyklu obsahujícího jeden atom dusíku. Výhodné jsou amidy odvozené od amoniaku, primárních Ci-C3alkylaminů a sekundárních Ci~C2dialkylaminů. Amidy sloučenin podle vynálezu je možné připravit obvykle používanými způsoby.

Výraz proléčivo zahrnuje sloučeniny schopné se rychle transformovat in vivo na mateřskou sloučeninu výše uvedeného vzorce, například hydrolýzou. v krvi. Podrobnější rozbor je uveden v práci autorů Higuchi T. a Stella V., Pro-drugs as Novel Delivery Systems Vol.14 série A.C.S. Symposium, a v Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B.Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, kde obě práce jsou do tohoto textu včleněny odkazem.

Navíc mohou sloučeniny podle vynálezu existovat v nesolvatovaných formách stejně tak jako v solvatovaných formách s farmaceuticky přijatelnými rozpouštědly jako je

9 9 9 9 9 ·· • · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

999999 9 9

9 9 9 9 9 «9 99 99 «999 voda, ethanol a podobně. Pro účely podle vynálezu se solvatované formy pokládají za ekvivalentní s formami nesolvatovanými.

Sloučeniny podle vynálezu mohou existovat v různých stereoisomerních formách vlivem přítomnosti asymetrických center v těchto sloučeninách; tj. každý asymetrický atom uhlíku může mít buď R nebo S konfiguraci. Předpokládá se, že všechny tyto stereoisomerní formy sloučenin podle vynálezu rovněž jako směsi uvedených isomerů včetně racemických směsí jsou součástí vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu se podávají pacientovi u kterého je potřebné inhibovat ICE. Obecně mezi pacienty u kterých je potřebné inhibovat ICE patří pacienti trpící chorobou nebo stavem, ve kterých je ICE má svoji účast. Příklady těchto chorob zahrnují, ale nejsou omezené jen na ně, zánětlivé choroby jako jě revmatoidní artritida a zánětlivé onemocnění střev, neurozánětlivá onemocnění jako je mrtvice a septický šok, Mezi další choroby patří reperfúzní poškození, Alzheimerova choroba a shigellózy.

Výraz terapeuticky účinné množství znamená množství sloučeniny vzorce (I), které při podání pacientovi trpícímu chorobou kterou lze léčit sloučeninou vzorce (I) mírní symptom dané choroby. Pracovník zkušený v oboru snadno určí terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce (I) podáním sloučeniny vzorce (I) pacientovi a sledováním výsledků.

Přípravu sloučenin podle vynálezu znázorňují níže uvedená schémata I-VII.

• 9 ·· 99 « · · » » · · · «

Schéma I

R„

·* »·<

l.RNH, j? jT^{2 2}- 5%Pd/C,H₂ co₂h

3.kopulace s

Η-Asp(Ot-Bu)OMe hydrochloridem

->

R.

H-

³ 8^/^c02^Me*

X

O ČH₂CO₂t-Bu

7.CF₃CO₂H

O

Schéma II ·* ·· • · · · • · · • · · • · ·

9· 9 999

2. i. NaN(SiMe₃)₂ ii. BrCH₂CO₂t-Bu

4.kopulace s

-:->

Η-Asp(OBn)-O-allyl hydrochloridem t-BuO₂C

ΒχΑθ—^^CH2

CO₂CH₂Ph

5. CF₃CO₂H

6. kopulace s RNH₂

->

7.odstranění allylesteru pomocí Pd

8.tvorba brom-methylketonu

9.vytěsnění draselnou solí N-Bóc-sulfonamidu

->

10.odstranění N-Boc pomocí CF₃CO₂H

11.20% Pd/C, H₂ a/nebo RaNi

O • ·

9 ► 9999

Schéma III • · 9

999

Me_v Me t-BuO₂C

CO₂H

1.příprava benzylesteru 2 .CF₃CO₂H

->

3.kopulace s RNH₂

4.odstranění benzylesteru pomocí H₂, 20% Pd/C *N

H

Me Me

O

Rs

O

OH

5.kopulace s

CO₂t-Bu

6.oxidace (Dess-Martin činidlo)

->

cf₃co₂h

R.

O

Me s Me

O

CHO co₂h • · tttt · • tt

Schéma IV tttt • tttt tt • tttt · • · ·tttt · • · · tttt tt* • tt tttt • tttt tt ♦ · · tt · tt • tttt • tt tttttttt

Mc

O

Mc co₂h

1.kopulace s

->

HCI· H₂Nx_vxCO₂Me

CO₂Me 'CO₂t-Bu

CO₂t-Bu

2. hydrolýza methylesteru pomocí LiOH

->

3. tvorba brom-methylketonu

4. vytěsnění draselnou solí nukleofilu

->

5. CF₃CO₂H

Schéma V

99 99 99 ··

9 9 9 9 9·· *

9 9 9 ·· · 9 9 • 999999 · · 9 9 9 ·· 9 9 9 9 99 «9 99 99 »999 99 9

Mc Mc t-BuC^C

H

N ^CC^Allyl

CO₂Bn

1.odstranění allyesteru s Pd

->

2. tvorba brom-methylketonu

3. vytěsnění sodnou solí N-Boc kafrsulfonamidu t-BuO

O

**· ·· ·· ·· • * · · 0 · ·

9 9 9 9 • · · * · 9 9

9 9 9 9 9 9 9

99 99 9999 99 9

Schéma VI

	Me>.	Me
RjR₂NH	0 ^XR, II	ϊ H	OEt
--	SA	Sa
EDCIxHCl,	I	II T	p
HOBTxH₂O	1 ^R2	0 ^L	s
			0

Schéma VII

5% HCI, CH₃CN

-_> teplota místnosti

*· ·· ·« 94 44

9 9 9 4 9 4 9 4 4 4

9 4 4 4 4 · · · • »«'··« φ φ « φ » ·· ··»· « ·

Pracovníkům v oboru bude jistě zřejmé, že výchozí složky je možné měnit a v dalších stupních potom připravit sloučeniny podle vynálezu jak je znázorněno v následujících příkladech.

Podle schématu I se acylací vhodného aminu anhydridem kyseliny itakonové připraví požadovaná kyselina akrylová, ze které se zase hydrogenací získá příslušná propionová kyselina. Získaná kyselina se pak kopuluje s příslušnou aminokyselinou za standardních podmínek peptidové kopulace, například s HOBT a EDCI v přítomnosti baze jako je 4-methylmorfolin a připraví se tak potřebný sukcinester. Methylester se pak hydrolyzuje pomoci baze jako je hydroxid sodný. Získaný kyselý terč.butylester se pak převede na brommethylketon například přípravou směsného anhydridu z kyseliny, zpracováním tohoto směsného anhydridu s diazomethanem a potom bromací pomocí HBr v kyselině octové. Vytěsnění bromidu pomocí draselné soli NBoc sulfonamidu vede k požadované sulfonylové sloučenině. Terc.butyl ester se pak hydrolyzuje na kyselinu v přítomnosti kyseliny, například kyseliny trifluoroctové.

Podle schématu II se (4S)-(-)-4-isopropyl-2-oxazolidinon acyluje chloridem kyseliny v přítomnosti baze a připraví se tak požadovaný oxazolidinon, který se pak alkyluje v přítomnosti baze terc.butylbromacetatem. Připravený Nacyloxazolidinon se pak hydrolyzuje na terč,butylester kyseliny jantarové v zásadě způsobem popsaným v Tet.Lett. 1987;28:6141-6144. Tato kyselina se pak kopuluje s 1-allyl-,

4-benzylesterem (S)-2-amino-jantarové kyseliny, za standardních podmínek peptidové kopulace uvedených výše pro schéma 1. Terč.butylester z této kopulace se pak štěpí a kyselina se zpracuje s O-benzylhydroxylaminem za podmínek peptidové kopulace a získá se tak požadovaná

ΦΦ »· »· φφ ·· φφφφ «φφφ φφφ φφφφ · · φ φφ φ φ «φφ φφφ φφφφ φ · · · * φ φφ benzyloxykarbamoylová sloučenina. Allylester se pak štěpí v zásadě způsobem popsaným v Tett.Lett.1995;36:5741-5744 a vzniklá kyselina sec převede na brommethylketon způsobem popsaným pro schéma I. Bromid se pak vytěsní draselnou solí NBoc-sulfonamidu, Boc skupina se pak odštěpí kyselinou a benzylester se hydrogenuje například na Pd/C nebo Raney niklu za zisku požadované pentanové kyseliny.

Podle schématu III se benzylester kyseliny jantarové (produkt 3) podle schématu II připraví z benzylalkoholu v přítomnosti dehydratačního prostředku jako například EDCI, potom se terc-butylester hydrolyzuje kyselinou. Benzylester kyseliny jantarové se pak kopuluje s vhodným aminem za standardních podmínek peptidové kopulace popsaných pro schéma I, potom se benzylester štěpí hydrogenací způsobem popsaným ve schématu II za tvorby kyseliny butanové. Tato kyselina se pak kopuluje s aminoalkoholem znázorněným ve stupni 5, a získaný alkohol se pak oxiduje na aldehyd v zásadě způsobem popsaným v práci autorů Dess a Martin, J.Org.Chem 1993/58:2899 a v J.Org.Chem. 1983;48:4156-4158. Konečný produkt se připraví hydrolýzou terč.butylesteru kyselinou.

Podle schématu IV se kyselina jantarová podle schématu II (produkt 3) kopuluje s aminoesterem ve stupni 1 za podmínek podmínek peptidové syntézy obdobných jako pro schéma I. Ester se pak hydrolyzuje baží, například hydroxidem lithným, a připravená kyselina se pak převede na brommethylketon způsobem popsaným ve schématu II. Bromid se pak vytěsní draselnou solí příslušného nukleofilu a hydrolýzou terč.butylesteru kyselinou se připraví požadovaný produkt.

Na schématu VI je znázorněné odstranění benzyloxykarbonylové (Cbz) chránící skupiny diethylacetalu ·· ·· • · · · • · · · • 4 444 • 4 4 • 4 44 «444

Cbz-Asp(OtBu)-H hydrogenolýzou pomocí 20% Pd/C jako katalyzátoru. Získaný amin se kopuluje na mono-chráněnou kyselinu jantarovou podle schématu II (produkt 3) za standardních podmínek peptidové syntézy, například pomocí HOBT a EDCI v přítomnosti baze jako je 4-methylmorfolin. Odstranění terč.butylových skupin lze provést například pomocí kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu za tvorby cyklického 0ethylacetalu. Kopulací této kyseliny za standardních podmínek peptidové kopulace jak je uvedeno výše, například s různými aminy se připraví požadovaný produkt.

Je nutné poznamenat, že sloučeniny obsahující cyklickou strukturu

mohou existovat v rovnováze s formou s otevřenou strukturou

Obě formy, s cyklickým i otevřeným řetězcem jsou součástí předloženého vynálezu.

Podle schématu VII se kyselou hydrolýzou cyklického 0ethylacetalu podle schématu V (produkt 4) například ve zředěné kyselině chlorovodíkové v acetonitrilu připraví aldehydkyselina.

• · • · • · • · · fe fefe

Články a citace uvedené v této přihlášce včetně patentů jsou do textu přihlášky včleněné odkazem.

Výchozí složky a různé meziprodukty jsou dostupné obchodně, připraví se z obchodně dostupných organických sloučenin, nebo je možné je připravit dobře známými způsoby syntézy.

Příklady uvedené níže jsou určené ke znázornění jednotlivých provedení vynálezu a žádným způsobem neomezují rozsah popisu přihlášky vynálezu a připojených patentových nároků.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

3-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina

CO₂H

Stupeň A

Roztok anhydridu kyseliny itakonové (5,00 g, 44,6 mmol) a fenethylaminu (5,95 g, 49,1 mmol) ve 100 ml acetonitrilu se míchá 72 hodin v atmosféře dusíku při teplotě místnosti. Směs (pevné podíly) se zahustí a pak se rozdělí mezi EtOAc a 1 N HCI. Organický extrakt se pak promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄), zahustí se a krystalizací zbytku z diethyletheru se • · · · · • · · ·· ·· • · • φ φ « • · • φ získá 5,24 g (50 %) 2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-akrylové kyseliny ve formě bílého pevného produktu:

t.t.133-140 °C;

MS(APCI) m/z) 234,2(M+1, 67,4 %) a 216,2(M-17, 100 %); analýza: vypočteno pro Ci₃Hi₅NO₃ (233,269):

C, 66,94; H, 6,48; N, 6,00; nalezeno:

C, 66,74; H, 6,56; Ν, 6,00.

Stupeň B

Roztok 2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-akrylové kyseliny (2,76 g, 11,8 mmol, příklad 1, stupeň A) ve 100 ml THF se zpracuje s 5 % Pd/C (0,2 g) a hydrogenuje se při teplotě místnosti a tlaku vodíku 52 psig 2,5 hodiny. Směs se pak zfiltruje a zahuštěním se získá 2,39 g (86 %) 2-(fenethylkarbamoyl-methyl ) propionové kyseliny ve formě špinavě bílého pevného produktu.

MS(APCI) m/z) 236,0(M+l, 100 %); analýza: vypočteno pro Ci₃Hi₇NO₃ (235,285) :

C, 66,36; H, 7,28; N, 5,95; nalezeno:

C, 65,31; H, 7,05; N, 5,80.

Stupeň C

Směs 2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-propionové kyseliny (1,63 g, 6,93 mmol, příklad 1, stupeň Β), Η-Asp(OtBu)-OMe.HCI (1,83 g, 7,64 mmol, získaný od Bachem Bioscience lne.), 1hydroxybenzotriazol-hydrat (HOBT.H₂O, 1,17 g, 7,64 mmol), N-ethyl-N-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimid-hydrochlorid • · • ·

• · (EDC1.HC1, 1,46 g, 7,62 mmol) a 4-methylmorfolin (0,95 ml,

8,64 mmol) ve 100 ml dichlormethanu se míchá 24 hodin při teplotě místnosti. Tato směs se pak zahustí, potom se rozdělí mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO3. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄, solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se, zahustí se a chromatografií (silikagel, 25 % hexany/75 % EtOAc) se získá 2,54 g (87 %)

4-terc.butylesteru, 1-methylesteru 2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-jantarové kyseliny ve formě voskového bílého pevného produktu.

MS(APCI) m/z) 420,9(M, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₂H₃₂N₂O6 (420,510): C, 62,84; H, 7,67; N, 6,66; nalezeno:

C, 62,68; H, 7,69; N, 6,54.

Stupeň D

Roztok 4-terc.butylesteru, 1-methylesteru 2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-jantarové kyseliny (2,11 g, 5,01 mmol, příklad 1, stupeň C) a 0,1 N roztok hydroxidu sodného (60,1 ml, 6,01 mmol) v 60 ml ethanolu se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se roztok zahustí, okyselí se nasyceným KH₂PO₄ na pH ~5 a extrahuje se chloroformem (2 x 100 ml). Spojené chloroformové podíly se vysuší (MgSO₄) , zfiltrují se a zahuštěním se získá 2,23 g (~100 %) 4-terc.butylesteru

2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-jantarové kyseliny ve formě bezbarvého oleje, který se dále použije bez dalšího čištění.

Roztok 4-terč.butylesteru 2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-jantarové kyseliny (2,23 g, 5,49 • · mmol) a 4-methylmorfolinu (0,61 ml, 5,73 mmol) v 50 ml THF v 250 ml baňce s kulovým dnem se zábrusem bez těsnícího prostředku se ochladí na asi -45 °C (kaše suchý ledacetonitril) a zpracuje se s isobutylchlorformiatem (0,75 ml, 5,78 mmol). Ihned se tvoří pevné podíly a směs se míchá 15 minut a potom se zpracuje s 0,25 M až 0,5 M roztokem diazomethanu v etheru (55 ml, 27,5 mmol, připraveným z Diazaldu a čerstvě předestilovaným). Pak se chladící lázeň odstraní, světle žlutý roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, ochladí se na 0 °C a pak se zpracuje po kapkách s roztokem 48% kyseliny bromovodíkové (10 ml, 184 mmol) v 10 ml kyseliny octové. Bezbarvý roztok se pak míchá 30 minut při teplotě místnosti a pak se rozdělí mezi EtOAc a vodu (~200 ml každé složky). Organický extrakt se pak promyje vodou, nasyceným NaHCO3 a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 1,40 g (53 %) terč.butylesteru 5-brom-2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoylpropionylamino)-4-oxo-pentanové kyseliny ve formě světle žlutého pevného produktu.

Stupeň E

Roztok 1, l-dimethylethyl[ (2-fenethyl) sulfonyljkarbamatu (0,47 g, 1,66 mmol) v 3,0 ml DMF se zpracuje při 0 °C a v atmosféře dusíku s terč.butoxidem draselným . (0,21 g, 1,66 mmol) . Pak se vzorek míchá při teplotě místnosti 1 hodinu, ochladí se na 0 °C a potom se zpracuje s terč.butylesterem

5-brom-2-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4-oxopentanové kyseliny (0,67 g, 1,38 mmol, příklad 1, stupeň D). Pak se vzorek nechá přes noc ohřát na teplotu místnosti. Potom se rozdělí mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se pak promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Zbytek • ·

se zpracuje chromatografií (silikagel, 50 % hexany/50 % EtOAc) a získá se tak 0,43 g (52 %) 1,l-dimethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy) karbonyl][ (2-fenylethyl) sulf onyl]amino]-3-[[2-methyl-1,4-dioxo-4-[ (2-fenylethyl) amino]butyl]amino]-4-oxo-pentanoatu ve formě pěnovitého světle žlutého pevného produktu.

Stupeň F

Roztok 5-terc.butylesteru 3-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4—oxo-5-[(2-fenyl-ethansulfonyl)-N-Boc-amino)-pentanové kyseliny (0,40 g, 0,58 mmol, příklad 1, stupeň E) a kyseliny trifluoroctové (10 ml) v 20 ml dichlormethanu se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti.

Získaný roztok se zahustí na žlutý olej. Přidá se diethylether (~50 ml) a olej počne tuhnout. Vzorek se pak míchá přes noc při teplotě místnosti, zfiltruje se, promyje se čerstvým etherem a vysušením ve vakuu se získá 0,28 g (89 %) 3-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanové kyseliny ve formě bílého pevného produktu.

MS(APCI) m/z) 532,1(M+l, 100 %); analýza: vypočteno pro C26H33N3O7S (531, 633) :

C, 58,74; H, 6,26; N, 7,90; nalezeno:

C, 58,38; H, 6,23; N, 7,71.

Příklad 2

3-(2-karbamoyimethyl-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklc[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina • » *··* ···· « · ······ · · J • · «·· · · · · · · · • * · · · · · · • · · · ·· «··· ··

Stupeň A

Roztok (4S)- (-)-4-isopropyl-2-oxazolidinonu (19,85 g,

0,154 mol) ve 400 ml THF se zpracuje po kapkách při -78 °C s butyllithiem (64,5 ml, 0,161 mol, 2,5 M roztok v hexanech) za tvorby pevného podílu. Získaná směs se míchá 30 minut při 78 °C a pak se zpracuje po kapkách s iso-valerylchloridem (20,6 ml, 0,169 mol). Pak se reakční směs nechá pomalu přes noc ohřát na teplotu místnosti. Pak se reakční směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok KH2PO4. Organický extrakt se pak promyje vodou, vysuší se (MgSO₄) a získaný žlutý roztok se zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 10 % EtOAc v hexanech) a získá se 29,8 g (91 %) (S)-4-isopropyl-3-(3-methyl-butyryl)-oxazolidin-2-onu ve formě světle žlutého oleje.

Stupeň B

Roztok (S)-4-isopropyl-3-(3-methyl-butyryl)-oxazolidin-2-onu (20,8 g, 97,5 mmol, příklad 2, stupeň A) v 500 ml THF při -78 °C a v atmosféře N₂ se po kapkách zpracuje s bis(trimethylsilyl)amidem sodným (107 ml, 107 mmol, 1,0 M roztok v THF). Tento roztok se pak míchá 30 minut při -78 °C a pak se po kapkách zpracuje s roztokem terč.butylbromacetatu (18,0 ml, 121,9 mmol) ve 100 ml THF. Reakční směs se pak míchá hodinu při -78 °C a pak se reakce přeruší přídavkem • fe fe ·· fefe ♦ · · fe • · · · fe · fefefe • · · • fe ·· • fefe • fefe • fe fefefefe fe· « nasyceného roztoku KH₂PO₄ (—125 ml) po kapkách. Získaná směs se pak ohřeje na teplotu místnosti, zahustí se (k odstranění většiny THF) a pak se extrahuje etherem. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem NaHCO₃ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zahustí se a krystalizací ze směsi ether-petrolether se získá 21,1 g (66 %) terč.butylesteru [(S-(R*,R*)]-3-(4-isopropy1-2-oxo-oxazolidin-3-karbonyl)-4-methyl-pentanové kyseliny ve formě bílého pevného produktu.

Analýza: vypočteno pro C17H29NO5 (327,424) :

C, 62,36; H, 8,93; N, 4,28; nalezeno:

C, 62,30; H, 9,07; N, 4,09.

Stupeň C

Provede se hydrolýza N-acyloxazolidinonu pomocí hydrogenperoxidu lithného způsobem podle práce autorů Evans D.A. a sp. (Tet.Lett. 1987;28:6141-6144). K míchanému roztoku terč.butylesteru [ (S- (R*, R*) ]-3-(4-isopropyl-2-oxo-oxazolidin--karbonyl)-4-methyl-pentanové kyseliny (9,05 g, 27,64 mmol, příklad 2, stupeň B) v 250 ml THF se při °C po kapkách přidá peroxid vodíku (14,1 ml, 138 mmol, 30 % hmotn. roztok ve vodě) a potom 1,0 M roztok hysdroxidu lithného (55,3 ml, 55,3 mmol). Reakční směs se pak nechá pomalu, přes noc, ohřát na teplotu místnosti. Pak se reakčni směs zahustí k odstranění většiny THF a bazický roztok se promyje CH2CI2 (2 x 100 ml). Vodná fáze se pak ochladí, okyselí se nasyceným KH₂PO₄ na pH ~5 a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se pak promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) a zahuštěním se získá 5,66 g (95 %) terč.butylesteru (S)-2-isopropyljantarové kyseliny ve formě bezbarvého oleje který se použije bez dalšího čištění.

• ·

Stupeň D

Směs terč.butylesteru (S)-2-isopropyljantarové kyseliny (10,77 g, 49,80 mmol, příklad 2, stupeň C), 1-allylesteru, 4-benzylester-hydrochloridu (S)-2-aminojantarové kyseliny (14,93 g, 49,81 mmol), HOBT.H₂O (8, g, 54,8 mmol), EDCI.HCI (10,5 g, 54,8 mmol) a 4-methylmorfolinu (8,2 ml, 74,6 mmol) v 250 ml CH2CI2 se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se směs zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. EtOAc extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltrují se, zahustí se a chromatografií (MPLC, silikagel, 20 % EtOAc v hexanech) se získá 19,21 g (84 %) 1-allylesteru, 4-benzylesteru [S-(R*,R*)]~ -2-(2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-jantarové kyseliny ve formě světle žlutého oleje.

Stupeň E

Roztok 1-allylesteru, 4-benzylesteru [S-(R*,R*)]-2-(2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-jantarové kyseliny (9,3 g, 23,0 mmol, příklad 2, stupeň D) a kyseliny trif luoroctové (35 ml) v 35 ml CH₂C1₂ se se míchá 2 hodiny v atmosféře N₂. Pak se směs zahustí, znovu se rozpustí v CH₂C1₂ a pak se zpracuje s EDCI.HCI (8,8 g, 46 mmol), HOBT.H₂O (6,2 g, 46,0 mmol) a O-benzylhydroxylamin-hydrochloridem (7,3 g, 46,0 mmol). Pak se po kapkách přidá 4-methylmorfolin (11,6 g, 115 mmol) a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zředí CH₂C1₂ a promyje se postupně roztokem 5% HCI a nasyceným roztokem NaHCO₃. Organický extrakt se vysuší (Na₂SO₄) a zahuštěním se získá 10,25 g (88 %) 1-allylesteru, 4-terc.butylesteru 2-[2-(benzyloxykarbamoylmethyl) -3-methyl-butyrylamino]jantarové kyseliny ve formě • · » 9

99 bílého pevného produktu který se použije v dalším stupni bez dalšího přečištění.

Stupeň F

Štěpení allylesteru se provede způsobem popsaným autory Dessolin a sp. (Tet.Lett. 1995;36:5741-5744). Roztok 1allylesteru, 4-terc.butylesteru 2-[2-(benzyloxykarbamoylmethyl)-3-methyl-butyrylamino]jantarové kyseliny (10,25 g, 19,7 mmol, příklad 2, stupeň E) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia(0) (0,462 g, 0,40 mmol) v CH2CI2 se při 0 °C a v atmosféře N₂ po kapkách zpracuje s fenylsilanem (4,26 g, 39,4 mmol). Pak se reakční směs nechá během 1 hodiny ohřát na teplotu místnosti a potom se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄. Organická vrstva se pak extrahuje 0, N NaOH. Bazická vodná fáze se pak okyselí koncentrovanou HCI a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se vysuší (Na₂SO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 6,2 g (72 %) 4-benzylesteru substituované kyseliny jantarové ve formě pěnovitého bílého pevného produktu.

K roztoku výše uvedené kyseliny (6,0 g, 12,8 mmol) a 4methylmorfolinu (1,3 g, 12,8 mmol) v THF (50 ml) se při -42 °C přidá po kapkách isobutylchlorformiat (1,8 g, 12,8 mmol). Reakční směs se míchá 30 minut a pak se přidá při 0 °C k roztoku diazomethanu v diethyletheru (~0,5 M, 200 ml). Potom se reakční směs míchá 2 hodiny při teplotě místnosti a pak se ochladí na 0 °C. Po kapkách se přidá roztok 48% HBr (20 ml), a HOAc (20 ml) a reakční směs se míchá 30 minut při 0 °C. Pak se směs zředí diethyletherem a promyje se vodou (2x) a nasyceným roztokem NaHCO₃ (2x) . Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a zahustí se. Zbytek se rozpustí v CH₂C1₂ a produkt se vysráží hexany. Pevné podíly se odfiltrují a důkladně se promyjí hexany, a vysušením se získá 1,5 g (15 %) benzylesteru • · • Φ φ

3—[2—(benzyloxykarbamoyl-methyl)-3-methyl-butyrylamino]-5-brom-4-oxo-pentanové kyseliny.

Stupeň G

K roztoku (S)-1, l-dimethylethyl[[ (7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl)methyljsulfonyljkarbamatu (0,273 g, 0,82 mmol) v bezovdém DMF (3 ml) se přidá terc.butoxid draselný (0,092 g, 0,82 mmol). Reakční směs se míchá 1 hodinu v atmosféře dusíku. K tomuto roztoku se pak přidá po kapkách roztok benzylesteru 3-[2-(benzyloxykarbamoyl-methyl)-3-methyl-butyrylamino]-5-brom-4-oxo-pentanové kyseliny (0,400 g, 0,75 mmol, příklad 2, stupeň F) v bezvodém DMF (3 ml) a reakční směs se míchá přes noc. Pak se směs zředí EtOAc a promyje se solným roztokem (2x). EtOAc vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a zahustí se. Zbytek se zpracuje chromatografií (silikagel, 40 %

EtOAc/60 % hexany) a získá se tak 0,271 g fenylmethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy) karbonyl]-[[ (7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2.1]hept-l-yl) meťhyl]sulfonyl]amino]-3-[[2- (1-methylethyl) -1, 4-dioxo-4-[ (fenylmethoxy) amino]butyl]amino]-4-oxopentanoatu ve formě pěnovité bílé pevné hmoty.

Výše uvedený produkt se podrobí zpracování s 50% kyselinou trifluoroctovou v CH₂C1₂ (6 ml) po 1 hodinu. Pak se reakční směs zředí CH₂C1₂ a promyje se nasyceným roztokem NaHCO3. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a zahuštěním se získá 0,237 g bílé pevné hmoty která se použije v dalším stupni bez dalšího přečištění.

Stupeň H • · • . » • · * * • · · · • «·· . * ·· φ

Κ roztoku výše uvedené sloučeniny (0,237 g, příklad 2, stupeň G) v 75 ml THF se přidá 10% Pd/C (0,50 g) a směs se hydrogenuje 3 hodiny při teplotě místnosti a tlaku H₂ 50 psi. Pak se reakční ďměs zfiltruje a přidá se Raney nikl (0,10 g). Pak se reakční směs znovu hydrogenuje při tlaku 50 psi 15 hodin. Potom se směs zfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se rozdělí mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Vodná vrstva se oddělí, okyselí se HCI a extrahuje se EtOAc. Pak se organická vrstva vysuší (Na₂SO₄) a zahuštěním se získá 0,065 g 3—(2— -karbamoylmethyl-3-butyrylamino) -5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanové kyseliny (sloučenina 2) ve formě narůžovělé pevné hmoty.

Analýza: vypočteno pro C₂₂H₃₅N₃O8S . 0,27 C₄H₈O₂ (525,392) :

C, 52,76; H, 7,13; N, 8,00; nalezeno:

C, 52,36; H, 7,06; N, 7,65

Následující sloučeniny je možné připravit způsobem podle příkladu 2. '

Příklad 3

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2..2.1. ]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2- (fenethylkarbamoyl-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina

Světle hnědá, pěnovítá pevná hmota.

MS APCI) m/z 606,4(M+l, 25,0 %) 346, 3 (100 %) ;

♦ φ • φ φφ φφ φφ • · φ φ · · · ♦ φ φφφφ φφ · φ φ φφφφ*· φ φ φ φ φ • φ φ φ · φ φφ • Φ *· ΦΦ···· φφ φ analýza: vypočteno pro C₃oH43N₃0₈.0,50 H₂O (614,764):

C, 58,61; H, 7,21; N, 6,84; nalezeno:

C, 58,62; H, 7,18; N, 6,41.

Příklad 4

3- (2-karbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino) -4-oxo-5- (2-fenyl-ethansulfonyl-amino)-pentanová kyselina

MS (APCI) m/z 456,3(M+1, 74,7 %) 242,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C20H29N3O7S. 0,13 CF₃CO₂H (470, 357) :

C, 51,74; H, 6,24; N, 8,93; nalezeno:

C, 51,70; H, 5,97; N, 8,61.

Příklad 5

3-[3-methyl-2- (fenethylkarbamoyl-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino) -pentanová kyselina

Bílá pevná hmota.

MS (APCI m/z 560,4(M+l, 50,7 %) 346,3 (100 %); analýza: vypočneno pro C28H37N3O7S . 0,27 H₂O (564,551):

Z, 59,57; H, 6,70; N, 7,44;

nalezeno:

C, 59,56; H, 6,52; N, 7,41.

Příklad 6

5- (7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2- (fene thy 1 karbamoyl-methyl) -but yry lamino]-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá, pevná hmota.

Analýza: vypočteno pro C30H45N3O7S (591,773) :

C, 60,89; H, 7,66; N, 7,10;

nalezeno:

C, 60,61; H, 7,65; N, 7,03.

Výchozí N-Boc-sulfonamid se připraví Wolff-Kishnerovou redukcí (IS)-(+)-10-kafrsulfonamidu a následnou acylací pomocí di-(terč.butyl)-dikarbonatu způsobem podle příkladu 2, stupeň B. Neustadt R. (Tet.Lett. 1994;35:379-380).

Příklad 7 (S, S) -3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina

• 0 • 9

Stupeň A

Směs 4-terc.butylesteru (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny (14,5 g, 67,0 mmol, příklad 2, stupeň C), EDCI.HC1 (15,4 g, 80,3 mmol), benzylalkoholů(8,7 ml, 84,1 mmol) a 4dimethylaminopyridinu (1,5 g, 12,3 mmol) v 500 ml CH2CI2 se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO3. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH2PO4 a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Získaný žlutý olej se zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 10 % EtOAc v hexanech) za výtěžku 15,6 g (76 %) 1, benzylesteru

4-terc.butylesteru, (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny ve formě bezbarvého oleje.

MS (APCI) m/z 307,2 (M+l, 92,2 %), 252,2 (M-54, 90,9 %) a 251,1 (M-55, 100 %).

Terč.butylester se pak hydrolyzuje pomocí 20% kyseliny trifluoroctové CH₂C1₂ při teplotě místnosti se získá 1benzylester (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny ve formě světle žlutého oleje.

MS (APCI) m/z 251,1 (M+l, 100 %).

Stupeň B

Směs 1-benzylesteru (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny (3,45 g, 13,78 mmol, příklad 2, stupeň A), 3-fenyl-lpropylaminu (2,15 ml, 15,12 mmol), HOBT.H₂O (2,32 g, 15,15 mmol), EDCI.HC1 (2,91 g, 15,18 mmol) a 4-methylmorfolinu 2,3 ml (20,65 mmol) ve 100 ml CH2CI2 se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zahustí, rozdělí se mezi EtOAc

Μ ···· a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným rozookem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 5,0 g benzylesteru (S)-2(fenylpropylkarbamoyl-methyl)-3-methylbutanové kyseliny ve formě světle žlutého oleje.

MS (APCI m/z 369,2 (M+2, 100 %), 368,2 (M+l, 97,4 %).

Hydrogěnaci benzylesteru (S)-2-(fenylpropylkarbamoyl-methyl)-3-meohylbutanové kyseliny pomocí 20% Pd/C v ETOH pod tlakem z balónu se získá (S)-2-(fenylpropylkarbamoyl-methyl)-3-methylbutanová kyselina ve formě bezbarvého oleje.

MS (APCI) m/z 279, 1 (M+2, 83,1 %) , 278,1 (M+l, 83,1 %) a 260,1 (M-17, 100 %) .

Stupeň C

Směs (S)-2-(fenylpropylkarbamoyl-methyl)-3-methylbutanové kyseliny (2,04 g, 7,34 mmol, příklad 3, stupeň B), terc.butylesteru 3-amino-4-hydroxy-butanové kyseliny (1,71 g, 8,08 mmol), H0BT.H₂O (1,24 g, 8,10 mmol), EDCI.HCl (1,55 g,

8,08 mmol) a 4-methylmorfolinu v 50 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakčni směs zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Pak se směs zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany/75 % EtOAc) za výtěžku 1,64 c terc.butylesteru (S,S)-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-pr opyl karbamoyl) -methylj-butyrylamino} - 4-hydr oxy-butanové kyseliny ve formě bílé pěnovité pevné hmoty.

MS (APCI m/z 436,3 (M+2, 100 %), a 435,3 (M+l, 83,1%).

·♦ ···.

·· ·* > · · «

Stupeň D

Roztok terč.butylesteru (S,S)-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methylj-butyry lamino}-4-hydroxy-butanové kyseliny (1,54 g, 3,54 mmol, příklad 3, stupeň C) a DessMartinovo činidlo (2,26 g, 5,33 mmol, připravené způsobem popsaným autory Ireland R.E. a Liu L. (J.Org.Chem.

1993;58:2899)) ve 100 ml CH₂C1₂ se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Pak se reakční směs podrobí redukčnímu zpracování způsobem popsaným autory Dess D.B. a Martin J.C. (J.Org.Chem. 1983;48:4156-4158) za výtěžku 1,16 g terc-butylesteru (S,S)-3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny ve formě voskovité bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 434,3(M+2, 83,1 %) a 433,3 (M+l, 100 %); analýza: vypočteno pro C₂₄H36N₂O₅.0,50 H₂O (441, 573) :

C, 65,28; H, 8,45; N, 6,34; nalezeno:

C, 65,31; H, 8,13; N, 6,16.

Stupeň E

Roztok terc-butylesteru (S,S)-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny (1,10 g, 2,54 mmol, příklad 3, stupeň D) a 5, 0 ml kyseliny trifluoroctové v 20 ml CH₂C1₂ se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se roztok zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok KH₂PO₄. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄), zfiltruje se a zahuštěním se získá 0,83 g (86 %) (S,S)-3-{3-methyl-2-[ (3-f enyl-propyl karbamoyl) -methyl]-butyry lamino} -4 - oxo-butanové ··· »· ·#·♦ kyseliny ve formě špinavě bílé pěnovité pevné hmoty (sloučenina 7).

MS (APCI) m/z 377,2(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₀H₂gN₂O₅.0,25 H₂0 (380, 960) : C, 63,06; H, 7,54; N, 7,35; nalezeno:

C, 63,08; H, 7,25; N, 7,98.

Následující sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 7.

Příklad 8

3-{3-methyl-2-[ (3-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina

Bílá pěnovitá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 379,1(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro Ci₉H₂6N₂O6.0,50 H₂O (387,437) : C, 58,90; H, 7,02; N, 7,23; nalezeno:

C, 58,91; H, 6,78; N, 7,02.

Příklad 9

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-1-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina o II • 9

co₂h ch₃ ch₃

Stupeň A

Směs (S)-2-(3-fenoxy-ethylkarbamoyl-methyl)-3methylbutanové kyseliny (3,51 g, 12,56 mmol, připravené způsobem podle příkladu 3, stupně A a Β), Η-Asp(OtBu)OMe.HCI (3,31 g, 13,82 mmol), HOBT.H₂O (2,12 g, 13,82 mmol), EDCI.HC1 (12,65 g, 13,82 mmol), a 4-methylmorfolinu (2,9 ml, 26,38 mmol) ve 100 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO3. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Pak se zbytek zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany/75 % EtOAc) za výtěžku 4,70 g (81 %) 1-methylesteru, 4-terc.butylesteru (S,S),-2-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethyl-karbamoyl) -methylj-butyrylamino}-jantarové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 465,2(M+1, 100 %); analýza: vypočteno pro Ο₂₄Η₃6Ν₂Ο₇ (464,564):

C, 62,05; H, 7,81; N, 6,03; nalezeno:

C, 62,07; H, 7,85; N, 5,97.

Stupeň B »φ » φ φ φ φ φ • φ φφ φφφφ *« ·« • · · · • · · · • · *·* * · φ φ« φ· φφ φφφ φ φ φ #

Κ míchanému roztoku 1-methylesteru, 4-terc.butylesteru (S, S) -2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethyl-karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-jantarové kyseliny (4,18 g, 9,00 mmol, příklad , stupeň A) ve 100 ml THF se při teplotě místnosti po kapkách přidá 0,2 M roztok hydroxidu lithného (47,3 ml, 9,46 mmol). Reakční směs se míchá 30 minut, potom se okyselí nasyceným roztokem KH₂PO₄, zahustí se (k odstranění většiny THF) a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá světle žlutý olej. Krystalizaci oleje ze směsi CH₂Cl₂-hexany se získá 1,96 g (48 %) 4-terc.butylesteru (S,S)-2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethyl-karbamoyl) -methylj-butyrylamino}-j antarové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 451,2(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₃H3₄N₂O7 (450,537):

C, 61,32; H, 7,61; N, 6,22;

nalezeno:

C, 61,29; H, 7,71; N, 6,08.

Stupeň C

Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni D se 4-terc.butylester (S, S) -2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethyl-karbamoyl) -methylj-butyrylamino}-jantarové kyseliny (2,92 g, 6,47 mmol) převede na 3,25 g (95,2 %) terč.butylesteru (S,S)-5-brom-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethy 1 karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanové kyseliny ve formě špinavě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 529,1/527,1 (M+l, 100/98,7 %).

Stupeň D

ΦΦ β

Φ k

Φ Φ

Φ • · 9 • Φ · • ΦΦΦ * • · •Φ ΦΦ

Φ· • Φ Φ · • Φ Φ ·

ΦΦ

ΦΦ « ·

Φ

Φ Φ Φ

ΦΦΦΦ

Φ ·

ΦΦ Φ

Κ míchanému roztoku N-Boc-kafrsulfonamidu o teplotě místnosti (1,04 g, 3,14 mmol, připravenému z (1S)-(+)-10-kafrsulfonamidu acylačním způsobem B podle Neustadta R.,

Tet.Lett. 1994;35:379-380) v 5 ml DMF se přidá v jedné dávce terc.butoxid draselný (0,35 g, 3,13 mmol). Tato směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti, pak se ochladí na 0 °C a nato se zpracuje s terc.butylesterem (S,S)-5-brom-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanové kyseliny (1,50 g, 2,84 mmol, příklad 4, stupeň C) přidaným v jedné dávce. Pak se reakční směs nechá pomalu přes noc ohřát na teplotu místnosti. Potom se směs rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok KH₂PO₄. Organický extrakt se promyje solným roztokem, vysuší se. (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se a chromatografií (MPLC, silikagel, % hexany/50 % EtOAc) se získá 1,43 g (64 %) 1,1-dimethylethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy) karbonyl][[7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl) methyl]sulfonyl]amino-3-[[2- (1-methylethyl) -1,4-dioxo-4-[ (2-fenoxyethyl) amino]butyl]amino]-4-oxopentanoatu ve formě bílé pěnovité pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 778,3 (M+1, 100 %).

Stupeň E

Roztok 1,l-dimethylethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy)karbony 1][[7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl) methyl]sulfonyl]amino-3-[[2- (1-methylethyl) -1,4-dioxo-4-[ (2-fenoxyethyl) amino]butyl]amino]-4-oxo-pentanoatu (1,38 g, 1,77 mmol, příklad 4, stupeň D) a 10 ml kyseliny tfilfluoroctové v 20 ml CH₂C1₂ se se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se roztok zahustí na pevnou pěnu. Tento pevný produkt se rozpustí v 0,1 M roztoku hydroxidu sodného a promyje se EtOAc (25 ml).

• · • ······ · · · · φ • · · · · · · · ·· · · · · · · · · · · ·

Bazická vodná fáze (pH ~10-ll) se okyselí nasyceným roztokem

KH2PO₄ na pH ~5,0 a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 0,57 g (52 %) 5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-f enoxy-ethyl karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4 -oxo-pentanové kyseliny ve formě bílé pěnovité pevné hmoty (sloučenina 9).

MS (APCI) m/z 622, 1(M+1, 40,3 %) a 362,1 (100 %) ; analýza: vypočteno pro C30H43N3O9S (621,756):

C, 57,95; H, 6,97; N, 6,76; nalezeno:

C, 57,63; H, 7,15; N, 6,59.

Následující sloučeniny se připraví způsobem popsaným v příkladu 9.

Příklad 10

3-[3-methyl-2- (fenethylkarbamoyl-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-5-(3-fenyl-propylsulfanyl)-pentanová kyselina

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 527,2(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C29H38N2O5S (526, 701): C, 66,13; H, 7,27; N, 5,32; nalezeno:

C, 65,99; H, 7,24; N, 5,20.

• · ··· *

Příklad 11

5-(7,7-dimethvl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-m~thyl-2-[ (methyl-fenethyl-karbamoyl) -methyl]-but yry lamino;·-4-oxopent ano vá kyselina

Špinavě bílá pěnovitá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 620,2(M+l, 40,3 %), 360,2 (100 %);

analýza: vypočteno pro C31H45N3O8S (632, 394) : C, 58,88; H, 7,40; N, 6,64; nalezeno:

C, 58,89; H, 7,48; N, .6,39.

Příklad 12

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-but yry lamino}- 4-oxopent anová kyselina

Bílá pěnovitá pevná hmota.

MS (APCI m/z 620,2(M+l, 37,7 %), 360,2 (100 %); analýza: vypočteno pro Ο₃₁Η₄₅Ν3θ₉3 . 0,5 H₂O ( 628,7 91) :

C, 59,22; H, 7,37; N, 6,68; nalezeno:

φ · · ·

C, 59,22; Η, 7,37; Ν, 6,50 • · · · · · • · φφφφφ · φ φ φφφ φφφφ φφ

Příklad 13

3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-5-(2-oxo-2H-chromen-6-yloxy) -pentanová kyselina

Světle hnědá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 551,2(M+1, 62,3 %), 345,2 (100%); analýza: vypočteno pro C₃₀H₃₄N₂O₈ .0,50 H₂O(559,622):

C, 64,39; H, 6,30; N, 5,01; nalezeno:

C, 64,39; H, 6,18; N, 5,00.

Příklad 14

5—[3— (lH-imidazol-2-yl) -naftalen-2-yloxy]-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

MS (APCI) m/z 599(M+1, 13 %);

analýza: vypočteno pro C₃₄H₃₈N₄O₆ . CF₃CO₂H . H₂O (7 30,7 4 5) :

C, 59,17; H, 5,66; N, 7,67; nalezeno:

• · •» ·

C, 58,84; H, 5,61; N, 7,68.

Příklad 15

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3- (2-hydroxykarbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina

Stupeň A

Způsobem popsaným v příkladu 2, stupni F se 1-allylester,

4-benzylester [S- (R*,R*)]-2- (2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-jantarové kyseliny (10,68 g, 23,52 mmol, příklad 2, stupeň D) převede na 7,70 g (78 %) 4-benzylesteru [S— (R*, R*) ]-2- (2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-jantarové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 422,3(M+1, 12,1 %)a 366,2 (M-55, 100 %); analýza: vypočteno pro C22H31NO7 (421,495):

C, 62,69; H, 7,41; N, 3,32; nalezeno:

C, 62,42; H, 7,33; N, 3,17.

Stupeň B

Způsobem popsaným v příkladu 1, stupni D se 4-benzylester [S- (R*, R*) ]-2 - '2-terc. butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-jantarové kyseliny (6,08 g, 14,43 mmol, příklad 4, stupeň A) pře\^rede na 4,62 g (64 %) benzylesteru • · • · [S- (R*, R*) ]-5-brom-3-(2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-oxo-pentanové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 498,2/500,2(M+l, 76,5/74,7 %) a 442,2/444,2 (M-55, 100/97,1 %);

analýza: vypočteno pro C23H₃₂BrNO6 (498,424):

C, 55,43; H, 6,47; N, 2,81; nalezeno:

C, 55,28; H, 6,33; N, 2,77.

Stupeň C

K roztoku (S)-1, l-dimethylethyl[[ (7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl)methyl]sulfonyl]karbamatu (0,862 g, 2,60 mmol) v bezvodém DMF (4 ml) se přidá terč.butoxid draselný (0,307 g, 2,74 mmol). Reakční směs se míchá 30 minut v atmosféře dusíku. K tomuto roztoku se pak přidá po kapkách benzylester [S- (R* , R*) ]-5-brom-3-(2-terc.butoxykarbonylmethyl3-methyl-butyrylamino)-oxo-pentanové kyseliny (1,18 g, 2,37 mmol, příklad 5, stupeň B) v bezvodém DMF (4 ml) a reakční směs se míchá přes noc. Pak se směs’ zředí EtOAc a promyje se solným roztokem. Vrstva EtOAc se vysuší (Na₂SO₄) a zahustí se. Chromatografií zbytku (silikagel, 20% EtOAc v hexanech) se získá 0,850 g fenylmethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy) karbonyl]-[[ (7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl) methyljsulf onyl]amino]-3-[[4- (1,1-dimethylethoxy) -2- (1-methylethyl) -1,4-dioxobutyl]amino]-4-oxopentanoatu ve formě bílé pěnovité hmoty.

Stupeň D • · • φ

Fenylmethyl-5-[[ (1,1-dimethylethoxy) karbonyl]-[[ (7,7-dimethyl-2-oxobicyklo[2.2 . l]hept-l-yl) methyljsulf onyl]amino]-3-[[4- (1,1-dimethylethoxy) -2- (1-methylethyl) -1,4-dioxobutyl]amino]-4-oxopentanoat (0,850 g, 1,15 mmol, příklad 5, stupeň C) se podrobí po 1 hodinu zpracování se směsí kyselina trifluoroctová/CH₂Cl2 (1:1, 15 ml). Pak se reakční směs zahustí na olejový zbytek který se použije v dalším postupu bez čištění. Zbytek se rozpustí v 20 ml CH₂C1₂ a zpracuje se EDCI.HCI (0,441 g, 2,3 mmol), HOBT.H₂O (0,311 g,

2,3 mmol) a s O-benzylhydroxylaminem-hydrochloridem (0,276 g, 1,73 mmol). Pak se přidá po kapkách 4-methylmorfolin (0,506 g, 5,0 mmol) a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Pak se směs zředí EtOAc a postupně se promyje 5% roztokem HCI a nasyceným roztokem NaHCO₃. Organická vrstva se vysuší (Na₂SO₄) a zahustí se. Zbytek se zpracuje chromatografií (silikagel, 10% EtOAc v hexanech) a získá se tak 0,400 g benzylesteru 3-[2-(benzyloxykarbamoyl-methyl)-3-methyl-butyrylamino]-5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

Stupeň E

K roztoku benzylesteru 3—[2—(benzyloxykarbamoyl-methyl)-3-methyl-butyrylamino]-5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-1-ylmethan-sulfonylamino)-4-oxo-pentanové kyseliny (0,237 g, příklad 5, stupeň D) v 75 ml THF se přidá 10% Pd/C (0,50 g) a směs se hydrogenuje při tlaku vodíku 50 psi a teplotě místnosti 5 hodin. Pak se reakční směs zfiltruje a zahustí se.

Zbytek se rozdělí mezi EtOAc a 0,5 N roztok NaOH. Vodná vrstva se okyselí HCI a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se vysuší (Na₂SO₄) a zahustí se, a potom se zbytek trituruje směsí ·· ·· ► · ·

ether/hexany. Pevný podíl se odfiltruje a vysušením se získá

- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulf onylamino) -3- (2-hydroxykarbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina (sloučenina 15).

MS (APCI) m/z 518,1(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C22H35N3O9S . 0,45 C₄H₈C>2.0,59 H₂O (567,880);

C, 50,34; H, 7,06; N, 7,40; nalezeno:

C, 50,34; H, 6,80; N, 7,40.

Následující sloučeniny se připraví způsobem popsaným v příkladu 15.

Příklad 16

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (2—{[2— (lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina r — ·

Bílá, pěr.ovitá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 645,3(M+1, 79,2 %) a 285,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C3₂H44N₄0gS . 0,85 H₂O (660,107);

Z, 58,23; H, 6,98; N, 8,49; nalezeno:

Z, 58,23; H, 6,74; N, 8,26.

Příklad 17 • · ·

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[[3- (4-hydroxyfenyl) -propylkarbamoyl]-methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 636,2(M+1, 36,1 %) a 376,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C31H45N3O9S. 0, 40 Η₂Ο (642,989);

C, 57,91; H, 7,18; N, 6,54; nalezeno:

C, 58,10; H, 7,46; N, 6,14.

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 2 se s použitím vhodných výchozích složek připraví následující sloučeniny (příklady 18 až 20).

Příklad 18

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(2-naftalenyl-2-yl-ethylkarbamoyl]-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

• · * · · · · « · · · • · · · · · · · · • ······ · · 4 4 4 • · · 4 · · »· ·» ·· ·· ···· 44 ·

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 656,2(M+1, 31,2 %), 217,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₄H₄₅NO₈S . 0, 90 H₂O (672,031);

C, 60,77; H, 7,02; N, 6,25; nalezeno:

C, 60, 80; H, 6, 95; N,. 5, 93.

Příklad 19

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina

Růžová pevná hmota.

MS (APCI) m/z 659,3(M+1, 31,2 %) a 399,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₃H₄₆N₄O₈S . 0,20 H₂O (662,424);

C, 59,84; H, 7,06; N, 8,46; nalezeno:

C, 59,98; H, 7,35; N, 8,08.

Příklad 20

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-1-ylmethansu1fonylamino) - 3- (2 — {[2 — ( 6-f luor-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino -4-oxo-pentanová kyselina • ·· • ·

Špinavě bílá, pěnovitá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 663,3(M+1, 14,1 %), 403,2 (100 %) ; analýza: vypočteno pro C32H43FN4O8S. 0, 90 H₂O (678,998);

C, 56,61; H, 6,65; N, 8,25; nalezeno:

C, 56,92; H, 6,78; N, 7,86.

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 7 se s použitím vhodných výchozích složek připraví následující sloučeniny (příklady 21 až 23).

Příklad 21

3-[3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-karbamoyl}-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina

Špinavě bílá, pěnovitá pevná hmota. MS (APCI m/z 428,3(M-1, 100 %);

• 9 ·

9

9 9

9

9 9 analýza: vypočteno pro C₂₃H₃iN₃O₅.0,35 CF₃CO₂H ( 469, 429) ;

C, 60, 64; H, 6,73; N, 8,95; nalezeno:

C, 60,46; H, 6,93; N, 8,78.

Příklad 22

3- (3-methyl-2-{[methyl- (2-fenoxy-ethyl) -karbamoylj-methyl}butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina

Bílá, pěnovitá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 393,2(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₀H₂₈N₂O₆. 0, 85 H₂O (407,769) ; C, 58,91; H, 7,34; N, 6,87; nalezeno:

C, 58,87; H, 7,02; N, 6,59.

Příklad 23

3- (2—{[2 — (5, 6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina, trifluoracetarová sůl

O

9

99 9«

9 9 9 9

9 9 9 9 9

999999 9

9 9 9 9

Bílá pevná hmota.

MS (APCI m/z 431,1(M+1, 35,7 %), 190,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C22H30N4O5.1,30 CF₃CO₂H(578,740) ;

C, 51,06; H, 5,45; N, 9,68; nalezeno:

C, 51,03; H, 5,50; N, 9,38.

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 9 se s použitím vhodných výchozích složek připraví následující sloučeniny (příklady 24 až 25).

Příklad 24

5- (7,7-dimethyl-bicyklo[2.2. ljhept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI; m/z 606,1(M+1), 360,1 (100 %);

analýza: vypočteno pro C31H47N3O7S. 0,25 CF₃CO₂H (643, 306) ;

C, 59,65; H, 7,51; N, 6,62; nalezeno:

C, 59,73; H, 7,67; N, 6,27.

Příklad 25

5- (7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulf onylamino) -3- (2 —{[2 — (lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina * · • « » • ···

Světle hnědá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 645,2(M+1), 399,1 (100 %);

analýza: vypočteno pro C33H48N4O7S . 0,34 CF3CO2H (683, 605) ;

C, 59,18; H, 7,13; N, 8,20; nalezeno:

C, 59,34; H, 7,13; N, 7,81.

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 15 lze s použitím vhodných výchozích složek připraví následující sloučeniny (příklady 26 až 34).

Příklad 26

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-4-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 621,1(M+1, 5,1 %) , 261,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C3oH44N₄0₈S . 1, 2 6 CF3CO2H ( 7 64,4 42 ) ;

C, 51,10; H, 5,97; N, 7,33;

.

• · · ·« ·♦ • · ♦ · • · · * • · .·· • · · • · · · nalezeno:

C, 51,06; H, 6,06; N, 7,08.

Příklad 27

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-chinolin-2-y 1-propyl karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 671,3(M+1, 70,5 %), 158,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C34H46N4O8S. 0, 95 H₂O(687,946) ;

C, 59,36; H, 7,02; N, 8,14; nalezeno:

, C, 59,60; H, 6,71; N, 7,75.

Příklad 28

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[(3-naftalen-1-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

*. ·· ·« ♦.

• · · . · · · · • · · » ·· · * · • · ··· · * · » » » » ·· ···· · · ·· ·· · · ···· ·«

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 670, 3(M+l, 79,2 %), 410,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₅H₄7N₃O₈S. 0,90 EtOAc (749,141);

C, 61,89; H, 7,29; N, 5,61; nalezeno:

C, 61,90; H, 7,28; N, 5,57.

Příklad 29

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-3-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 621,1(M+1, 6,5 %), 261,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₀H₄₄N₄O₈S. 1, 20 CF₃CO₂H (757,600) ;

C, 51,37; H, 6,23; N, 7,34; nalezeno:

C, 51,37; H, 6,01; N, 7,40.

Příklad 30

3-{2-[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-lylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina • ·

Pěnovitá bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 646,2(M+1, 10,4 %), 286,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₁H4₃N5O₈S . 1,4 6 CF₃CO₂H (812,256) ;

C, 50,16; H, 5,52; N, 8,62; nalezeno:

C, 50,18; H, 5,73; N, 8,46.

Příklad 31

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-(3-methyl-2-{[l- (l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina

Bílá pevná hmota.

MS (APCI,' m/z 659,2(M+1, 41,6 %), 399,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₃₃H₄₆N4O₈S . 0, 17 CF₃CO₂H (678,205) ;

C, 59,05; H, 6,86; N, 8,26;

nalezeno:

fefe fefe « fefe « • fefe » • · ··· * • · · fe* fefe • » · fe • · · • fefefe fefefe fefe fefefefe ·· fefe

C, 59, 07; H, 6,95; N, 7,98.

Příklad 32

5- (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) - 3-{3-methyl-2-[ (2-pyridin-4-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 608,2(M+2, 64,9 %), 607,2 (M+l, 54,5 %), 347,2 ((100 %);

analýza: vypočteno pro C29H42N4O8S. 1, 66 CF₃CO₂H (796, 024) ; C, 48,77; H, 5,53; N, 7,04; nalezeno:

C, 49,12; H, 5,43; N, 6,60.

Příklad 33

3- (2-{[2- (5-acstyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljheptl-ylmethansulionylamino)-4-oxo-pentanová kyselina

O τι

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 687,3(M+1, 18,7 %), 327,2 (100 %);

analýza: vypočteno pro C34H46N4O9S. 0,75 H₂O (700,343);

C, 58,31; H, 6,84; N, 8,00; nalezeno:

C, 58,51; H, 6,88; N, 7,61.

Příklad 34

5-(7,7-dimethyl~2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-(3-methyl-2-{[2- (lH-tetrazol-5-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina

Šedá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 596,3(M-1, 24,7 %), 113,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C25H39N7O8S. CF₃CO₂H. 0,27 Et₂O (731,733)

C, 46,09; H, 5,88; N, 13,40; nalezeno:

C, 46,08; H, 5,78; N, 13,37.

Příklad 35

N⁴- (2-benzoimidazol-l-yl-ethyl) -N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid • ·

.Me

Me

H

O

OEt

Stupeň A

Roztok β-terc.butylester-diethylacetalu N-benzyloxykarbonyl-3-amino-4-oxo-butanové kyseliny (24,1 g, 63,2 mmol, připraveného z Cbz-Asp(OtBu)-OH způsobem podle práce Chapman.

K.T. (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 1992;2:613618)) ve 150 ml ethanolu se zpracuje s 1,0 g 20% Pd/C. Pak se reakční směs hydrogenuje 3,5 hodiny při teplotě místnosti a tlaku H2 51 psig. Pak se reakční směs zfiltruje a zahuštěním se získá 15,8 g (~100 %) β-terc.butylester-diethylacetalu 3-amino4-oxo-butanové kyseliny ve formě žluté tekutiny.

MS(APCI) m/z 248,1 (M+l, 100 %).

Stupeň B β-terc.butylester-diethylacetal 3-amino-4-oxo-butanové kyseliny (15,8 g, 63,9 mmol, příklad 35, stupeň A), 4terc.butylesteru (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny (15,2 g, 70,3 mmol, příklad 2, stupeň C), EDCI.HCI (13,5 g, 70,4 mmol), HOBT.H₂O (10,8 g, 70,5 mmol) a 4-methylmorfolinu (8,8 ml, 80,0 mmol) v 250 mi CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se roztok zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organioký extrakt se promyje nasyceným roztokem ΚΗ₂ΡΟ₄ ·· • · · · · · · · · • · ··· · « · 9 9 9 9 • * 9 9 9 9 9 9 • * · · · · · · · · » » a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Získaný tmavě hnědý olej se zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 100 % CH2CI2 až 2 % MeOH v CH2CI2) s výtěžkem 13,9 (49 g) β-terc.butylester-diethylacetalu 3-(2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanové kyseliny ve formě světle žlutého oleje.

MS (APCI) m/z 224,1 (100 %).

Stupeň C

Roztok β-terc.butylester-diethylacetalu 3-(2-terc.butoxykarbonylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanové kyseliny (8,3 g, 18,6 mmol, příklad 35, stupeň B) ve 100 ml CH2CI2 se zpracuje s 20 ml kyseliny trifluoroctové. Tento roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, pak se zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok KH₂PO₄. Organický extrakt se promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 3,8 g (71 %) N-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-jantarové kyseliny ve formě žlutého oleje.

MS(APCI) m/z 288,1 (M+l, 100 %).

Stupeň D

Směs N-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-jantarové kyseliny (3,8 g, 13,1 mmol, příklad 35, stupeň C), 1-(2-aminoethyl)benzimidazolu (3,2 g, 19,8 mmol, připraveného způsobem podle autorů Cuadro A.M. a sp.,

Synthetic Communications, 1991;21:535-544), HOBT.H₂O (2,4 g,

15,8 mmol), EDCI.HC1 (3,0 g, 15,8 mmol) a N-methylmorfolinu (2,2 ml, 20,0 mmol) ve 100 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při • · ·· ·« ·> «· • · · · ···· ·· ···· 9 9 * · · • ·····* · 0 « · · ·· 9 9 9 9 9 9

99 tt 9999 99 teplotě místností. Pak se roztok zahustí, rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se. promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Získaný světle hnědý olej se zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 5 % MeOH v CH₂C1₂) s výtěžkem 2,8 g (49 %) N⁴-(2-benzoimidazol-l-yl-ethyl)-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-terahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamidu ve formě bílé pěnovité pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 432,2(M+2, 100 %);

analýza: vypočteno pro C22H30N4O5 (430, 508) ;

C, 61,38; H, 7,02; N, 13,01; nalezeno.:

C, 61,18; H, 6,95; N, 13,05. ·

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 35 je možné s použitím vhodných výchozích.složek připravit· . následující sloučeniny (příklady 36 až 52). Výchozí 2-arylethylaminy, které nejsou obchodně dostupné, se připraví .způsobem podle autorů Cuadro A.M. á sp., Sýnthetič

Communications 1991;21:535-544. .·

Příklad 36 . ’

N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -Ň⁴-[2- (lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid

Špinavé bílá pevná hmota.

* * « · • · • · • · · · • · · ···· «· «

MS (APCI) m/z 430,3(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₃H₃₁N₃O₅.0,25 H₂O (434,024 ) ; C, 63, 65; H, 7,32; N, 9,68; nalezeno:

C, 63,68; H, 7,34; N, 9,36.

Příklad 37

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(1-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid

Špinavé bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 444,3(M+1, 53,5 %), 299,2 (100 %); analýza: vypočteno pro C₂4H₃₃N₃O5 (443, 548) ;

C, 64,99; H, 7,50; N, 9,47; nalezeno:

C, 65,16; H, 7,47; N, 9,40.

Příklad 38

N⁴-[2- (5, 6-dichlor-benzoimidazol-l-yl) -ethylJ-N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid

O

9

9* 99 99 * 99999· 9 9 99 9 9 • 9 9999 999 «9 9· 99 9999 99 999

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 354,1(100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₂H₂8C1₂N₄O₅ (499,398);

C, 52,91; H, 5,65; N, 11,22; nalezeno:

C, 52,91; H, 5,70; N, 11,07;

Příklad 39

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2fenoxy-ethyl)-sukcinamid

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 407,2(M+l, 66,2 %), 261,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₂iH₃oN₂0₆ (406, 483) ;

C, 62,05; H, 7,44; N, 6,89; nalezeno:

C, 62,29; H, 7,49; N, 6,74.

Příklad 40

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (6-methoxy-lH-indol-3-yl) -ethylj-sukcinamid

O ·· ·· ·· · · • · · · · tt • · · · tt · · · · · · · tt

Špinavé bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 460(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C24H33N3O6 (459, 547) ; C, 62,73; H, 7,24; N, 9,14; nalezeno:

C, 63,11; H, 7,02; N, 9,11.

Příklad 41

N⁴-(2-benzotriazol-l-yl)-ethylj-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid

Žlutá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 432,1(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₁H₂₉N₅O₅ (431,496); C, 58,46; H, 6,77; N, 16,23; nalezeno:

C, 56,96; H, 6,45; N, 15,64;

Příklad 42

N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -N⁴-[2-indazol-l-yl-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid

.Me

OEt

O

O o

• · • · • · ·

Žlutá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 431,2 (M+1, 100 %); analýza: vypočteno pro C₂₂H₃oN₄0₅ (430, 508) ;

C, 61,38; H, 7,02; N, 13,01; nalezeno:

C, 60,91; H, 7,16; N, 12,81.

Příklad 43

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-(2-fenylamino-ethyl)-sukcinamid

Špinavé bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 406,1(M+1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂iH₃₁N₃O₅.0,15 H₂O (408,201) ; C, 61,79; H, 7,73; N, 10,29; nalezeno:

C, 61,77; H, 7,56; N, 10,20.

Příklad 44

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(6-fluor-lH-

O • · · « φ »·· φ φ ·Φ«Φ

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 446, 1(M-1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C2₃H₃oFN₃0₅ (447,511) ; C, 61,73; H, 6,76; N, 9,39; nalezeno:

C, 62,22; H, 6,59; N, 10,45.

Příklad 45

N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -N⁴-[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 442,1(M-1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂4H₃₃N3O5 (443,548) ; C, 64,99; H, 7,50; N, 9,47; nalezeno:

C, 65,28; H, 7,65; N, 9,46.

Příklad 46

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2-(2-methyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl)-sukcinamid

o o

·· ···» 9 9 8 9 · • · 9 9 · · · · · • 999998 · « 99 · • · 9 9 9 8 9 8

88 98 9888 88 9

Pěnovitá, špinavé bílá pevná hmota.

MS (APCI m/z 446, 2(M+2, 55,9 %) , 445,2 (M+l, 51,5 %) ,

300,1 (100 %);

analýza: vypočteno pro C23H32N4O5.0,50 H₂0(453,543) ;

C, 60,91; H, 7,33; N, 12,35; nalezeno:

C, 60,94; H, 7,04; N, 12,05.

Příklad 47

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[3- (3,4,5-trimethoxy-fenyl) -propyl]-sukcinamid

Bílá pevná hmota.

MS (APCI; m/z 495,1(M+l, 100 %); analýza: vypočteno pro C25H38N2O8 (494,590) ;

C, 60,71; H, 7,74; N, 5,66; nalezeno:

C, 60,47; H, 7,85; N, 5,77.

Příklad 48

N¹-(2-ethoxy-í-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (fenyl) -etr.vlj-sukcinamid

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 389,1(M-1, 100 %); analýza: vypočteno pro C₂iH₃₀N₂O₅ (390,484 ) ;

C, 64,60; H, 7,74; N, 7,17; nalezeno:

C, 64,50; H, 7,90; N, 6,83.

Příklad 49

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4-(fenyl)-butyl)-sukcinamid

Vločkovitá bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 419,1(M+1, 10.0 %);

analýza: vypočteno pro C₂₃H₃₄N₂O₅ (418,538) ; C, 66,01; H, 8,19; N, 6,69; nalezeno:

C, 65,91; H, 8,21; N, 6,50.

Příklad 50 «« « 9 9 9 • 9 9 9

9 9 9 9 • 9 «

9 9 9

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-Ν⁴-(2-indol-l-yl-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid

Tmavá, červenohnědá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 430,1(M+1, 100 %); analýza: vypočteno pro C₂₃H₃₁N₃O₅ (429, 521) ;

C, 64,32; H, 7,28; N, 9,78; nalezeno:

C, 64,68; H, 7,02; N, 10,07.

Příklad 51

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4- (fenyl) -propylj-sukcinamid

Světle hnědá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 405,1(M+1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₂ H₃₂N₂O₅ (4 04,511) ; C, 65,32; H, 7,97; N, 6,93; nalezeno:

3, 66,27; H, 8,07; N, 7,21.

ΦΦ ♦ · · · · · • φ · · φ · » φ φφφφ φ φ φ φ φ φφφφφ φ φ

9 Φ«·φ

Φ· ΦΦ φ * ΦΦΦΦ

Φ Φ

Φ

Příklad 52

Ν¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -Ν⁴-[2- (5-fluor-lH-indol-3-yl)-ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid

Špinavé bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 446,1 (M-1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C23H30FN3O5 (447,511) ; C, 61,73; H, 6,76; N, 9,39; nalezeno:

C, 61,35; H, 6,78; N, 9,36.

Příklad 53

3—{2—[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina

Roztok N⁴-(2-benzoimidazol-l-yl-ethyl)-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamidu (1,25 g, 2,54 mmol, příkad 35, stupeň D) v 25 ml acetonitrilu se zpracuje s 25 ml 5 % roztoku HCI. Reakční směs se pak míchá 1 hodinu a pak se zahustí na špinavě bílou pevnou hmotu. Pak se zbytek promyje acetonem, zfiltruje se a vysušením ve vakuu se získá ·· ·· 99 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 · 9 · · 9 · ·

9 9 9 9 9 9 9

1,10 g 3-{2-[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny-hydrochloridu, ve formě bílé pevné hmoty o teplotě tání 134-141 °C (za rozkladu).

MS (APCI) m/z 403,3(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C20H26N4O5 . HCI. 1,18 H₂O (4 60, 173) ;

C, 52,20; H, 6,43; N, 12,18; nalezeno:

C, 52,21; H, 6,70; N, 11,52.

Způsobem obdobným způsobu popsanému v příkladu 53 je možné s použitím vhodných výchozích složek připravit následující sloučeniny (příklady 54 až 62) .

Příklad 54

3-(3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methylj-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina

Reakční směs se zalkalizuje, extrahuje se a potom zpracováním chromatografií (MPLC, silikagel, 1% CF₃CO₂H20 % aceton v CH₂C1₂) se získá titulní sloučenina ve formě šedé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 416,2(M+1, 32,5 %), 398,1 (M-17, 100 %); analýza: vypočteno pro C22H29N3O5.0,05 CF₃CO₂H (421, 195) ;

C, 63,02; H, 6,95; N, 9,98;

··

* · · • · · • · ♦ ·* · nalezeno:

C, 63,16; H, 6,84; N, 9,62.

Příklad 55

3-(2—{[2 — (5-fluor-l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina

Reakční směs se zalkalizuje, extrahuje se a potom zpracováním chromatografií (MPLC, silikagel, 1% HCO₂H20 % aceton v CH₂C1₂) se získá titulní sloučenina ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 434,2(M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₂H₂8FN₃O₅.0,96 HCO₂H (477, 669) ;

C, 57,73; H, 6,31; N, 8,80; nalezeno:

C, 57,73; H, 6,39; N, 8,65.

Příklad 56

3-(2—{[2 —(5,6-dichlor-benzoimidazol-l-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina

H

O • · φ · φφφφ · tt · φφφφ φ φ φ · φ • φ φφφ φ φ φ · φ φ · φ φ φ · φ · φφ ·· φφ φφ φφφφ φφ φ

Bílá, pevná hmota.

MS (APCI) m/z 354,1/356,1/358,1 (M+l, 100/48,6/14,3 %); analýza: vypočteno pro C₂oH₂₄Cl₂N₄0₅. HCI. 0,50 H₂O(516,813);

C, 46,48; H, 5,07; N, 10,84; nalezeno:

C, 46,56; H, 5,31; N, 10,17.

Příklad 57

3- (2-{[2-benzoimidazol-l-yl-ethyl) -methyl-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina

Krémově hnědá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 417,2 (M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro 0₂₁Η₂₈Ν₄0₅.2,57 HCI(510,186); C, 49,44; H, 6,04; N, 10,98; nalezeno:

C, 49, 46; H, 6,41; N, 10,63.

Příklad 58

3-{2-[ (2-benzotriazol-l-yl)-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina

H

O ·· ·« • · · · • · · · * · ··· • · · ··

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 404,0 (M+1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C19H25N5O5.1,54 HCI. 0,59

H₂O(470,221) ;

C, 48,53; H, 5,94; N, 14,89; nalezeno:

C, 48,54; H, 5,94; N, 14,51.

Příklad 59

3—{2—[(2-indazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylaminc)-4-oxo-butanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 403,1 (M+1, 100 %);

analýza: vypočteno pro Ο₂₀Η₂₆Ν₄θ5.1,34 HCl.1,22

H₂O(473,290) ;

C, 50,76; H, 6,34; N, 11,84; nalezeno:

C, 50,75; H, 6,34; N, 11,71.

Příklad 60

3—[2— ({[2- (5, 6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]-methylkarbamoyl}-mezhyl) -3-methyl-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina ·♦ φφ ·· *» φφ • · » · · « φ · φ » φ φφφφ φ φ φ · φ • φφφφφφ φ φ φφ φ • · φφφφ φφ φφ φφ φφ φφφφ φφ φ

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 443,1 (M-l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂₃H₃₂N₄C>5.2,0 HCI. 0,35 H₂0(523,763); C, 52,74; H, 6,68; N, 10,70; nalezeno:

C, 52,75; H, 6,88; N, 10,39.

Příklad 61

3-[2- ({[2- (2-methyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]-methylkarbamoyl}-methyl) -3-methyl-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina

Špinavě bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 415,1 (M-l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C₂iH₂₈N₄O₅ . 1, 1 HCI(456,588); C, 55,24; H, 6,42; N, 12,27; nalezeno:

C, 55,14; H, 6,64; N, 11,01.

Příklad 62 r

3-(3-methyl-2-{[3-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-propy 1 karbamoy 1]-methylj-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina *9 «9 • 9 9 9 • *9 9 • · 9999 •9 9

99 • 9

9 • 9 • 9

9 9 ·· 9999

Bílá pevná hmota.

MS (APCI) m/z 467,1 (M+l, 100 %);

analýza: vypočteno pro C23H34N2O8.0,70 H₂O(479,147); C, 57,66; H, 7,45; N, 5,85; nalezeno:

C, 57,44; H, 7,13; N, 5,72.

Příklad 63

Ethylester 3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny

Stupeň A

Směs 1-benzylesteru (S)-2-isopropyl-jantarové kyseliny (10,1 g, 40,2 mmol, příklad 3, stupeň A), 3-fenoxy-l-ethylaminu (6,1 g, 44,2 mmol), HOBT.H₂O (7,7 g, 50,2 mmol), EDCI.HCl (9,6 g, 50,2 rmol) a N-methylmorfolinu (6,6 ml, 60,0 mmol) ve 100 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakčni směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok • tt *· • · * tt • tttt · • · tt ·· tttt · tttt tttt

NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Pak se hnědá tekutina zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 80 % hexany/20 % EtOAc až 50 % hexany-50 % EtOAc) s výtěžkem 12,3 g (83 %) benzylesteru (S) -2-[(2-fenoxyethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butanové kyseliny ve formě světle žluté kapaliny. MS (APCI) m/z 370,0 (M+l, 100 %).

Hydrogenací benzylesteru (S)-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butanové kyseliny (12,3 g, 33,2 mmol) pomocí 20% Pd/C ve 100 ml ethanolu pod tlakem vodíku z balónu se získá 9,6 g (~100 %) (S)-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butanové kyseliny ve formě světle žlutého oleje. MS (APCI) m/z 280,0 (M+l, 100 %).

Stupeň B

Směs (S)-2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butanové kyseliny (4,8 g, 17,2 mmol, příklad 63, stupeň A) , ethylester-hydrochlorid 3-amino-4-pentenové kyseliny (3,8 g, 21,2 mmol, připravené způsobme podle práce Hauser F.M. a sp., J.Org.Chem. 1987;52:5041-5044), HOBT.H₂O (3,3 g, 21,5 mmol), EDCI.HC1 (4,1 g, 21,5 mmol) a Nmethylmorfolinu (4,7 ml, 42,7 mmol) ve 150 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Získaný žlutý olejovitý pevný podíl se pak zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany - 75 % EtOAc) s výtěžkem 4,2 g (60 %) ethylesteru 3-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]97 ···· φφφ· • · · · · · · • » φφφ φφφ · φ • · · β · · *· ·· φφφφ φφ φ

-butyrylamino}-4-pentenové kyseliny ve formě voskovité světle žluté pevné hmoty. MS (APCI) m/z 405,1 (M+1, 100 %).

Stupeň C

Roztokem ethylesteru 3-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-pentenové kyseliny ve 100 ml CH2CI2 se při -78 °C probublává plynný ozon až do vzniku modrého zbarvení. Pak se reakce přeruší přídavkem dimethylsulfidu (2,3 ml, 31,3 mmol) přidávaným po kapkách při -78 °C. Potom se reakční směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH2PO4 a solným roztokem, vysuší se (MgSO4) , zfiltruje se a zahustí se a chromatografií (MPLC, silikagel, % hexany - 75 % EtOAc) se získá ethylester 3-{3-methyl-2-[ (2 — f enoxy-ethyl karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 407,1 (M+1, 100 %);

analýza: vypočteno pro C21H30N2O7.0,17 H₂O (409, 546) ;

C, 61,59; H, 7,47; N, 6,84; nalezeno:

C, 61,57; H, 7,46; N, 6,69.

Příklad 64

Ethylester 3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-propionové kyseliny

H

O • ·

Stupeň A

Roztok 4-amino-3-[ (benzyloxykarbonyl) -amino]-4-oxo-butanové kyseliny (8,9 g, 33,6 mmol) a 10 kapek koncentrované kyseliny sírové v 250 ml ethanolu se zahřívá při teplotě zpětného toku 12 hodin. Pak se roztok ochladí, zahustí se a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH2PO4 a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá 4,7 g (48 %) ethylesteru 4-amino-3-[ (benzyloxykarbonyl)-amino]-4-oxo-butanové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 295,0 (M+l, 100 %); analýza: vypočteno pro C14H18N2O5 (294,310);

C, 57,14; H, 6,16; N, 9,52; nalezeno:

C, 57,28; H, 6,11; N, 9,45.

Hydrogenací ethylesteru 4-amino-3-[ (benzyloxykarbonyl) amino]-4-oxo-butanové kyseliny (2,1 g, 7,4 mmol) pomocí 20%

Pd/C ve 100 ml ethanolu vodíkem při tlaku z balónu se získá 1,2 g (-100 %) ethylesteru 3,4-diamino-4-oxo-butanové kyseliny ve formě bezbarvé olejovité pevné hmoty. MS (APCI) m/z 161,1 (M+l, 100 %) .

Stupeň B

Směs (S) -2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butanové kyseliny (2,5 g, 9,0 mmol, příklad 63, stupeň A), ethylesteru 3,4-diamino-4-oxo-butanové kyseliny (1,2 g, 7,4 mmol, příklad 64, stupeň A), HOBT.H₂O (1,4 g, 9,3 mmol),

EDCI.HCI (3,6 g, 18,6 mmol) a N-methylmorfolinu (2,1 ml, 19,1 mmol) ve 100 ml CH2CI2 se míchá 12 hodin při teplotě místnosti.

• · * · ·· ·« · · ···· ···· · · ·

Pak se reakční směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO₃. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH2PO4 a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Pak se získaná špinavě bílá olejovitá pevná hmota zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 5 % methanol v chloroformu) s výtěžkem 0,35 g (11 %) ethylesteru 4-amino-3-{3-methyl-2-[ (2-f enoxy-ethyl karbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 420,1 (M-l, 30,9 %), 374,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C2iH₃iN₃O6 (421,498);

C, 59,84; H, 7,41; N, 9,97; nalezeno:

C, 60,23; H, 7,38; N, 9,90.

Stupeň C

K míchanému roztoku ethylesteru 4-amino-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanové kyseliny (0,35 g, 0,83 mmol, příklad 64, stupeň B) a triethylaminu (0,29 ml, 2,08 mmol) v 50 ml THF o teplotě 0 °C a v atmosféře N₂ se po kapkách přidá anhydrid kyseliny tfilfluoroctové (0,14 ml, 0,99 mmol). Pak se reákčni směs míchá 1 hodinu při 0 °C načež se reakce přeruší přídavkem po kapkách nasyceného roztoku NaHCO₃ (~10 mi) . Pak se reakční směs zahustí a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany - 75 % EtOAc) se získá 0,21 g (63 %) ethylesteru 3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-propionové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 404,1 (M+l, 100 %);

·· tt ·· ···· ·· ·

100 analýza: vypočteno pro C₂iH₂₉N₃O₅.0,35 H₂O (409,788) ;

C, 61,55; H, 7,30; N, 10,25;

nalezeno:

C, 61,73; H, 7,23; N, 9,87.

Příklad 65

3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-propionová kyselina

Stupeň A

Směs (S) -2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butanové kyseliny (1,67 g,· 5,99 mmol, příklad 63, stupeň A), Η-Asp(OtBu)-Ome.HC1 (1,58 g, 6,59 mmol), HOBT.H₂O (1,00 g, 6,53 mmol), EDCI.HC1 (1,26 g, 6,57 mmol) a Nmethylmorfolinu (1,50 ml, 13,64 mmol) v 50 ml CH₂C1₂ se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok NaHCO3. Organický extrakt se promyje nasyceným roztokem KH₂PO₄ a solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahustí se. Získaný žlutý olej se pak zpracuje chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany/75 % EtOAc) 1,69 g (61 %) 4-terc.butylesteru, 1-methylesteru 2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-j antarové kyseliny ve formě voskovité pevné bílé hmoty. MA(APCI) m/z 465,2 (M+l, 100 %).

Stupeň B • ······ · · · · · • · · · · · ·· • · · · · · ···· · · ·

101

Roztok 4-terc.butylesteru, 1-methylesteru 2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}- jantarové kyseliny (1,69 g, 3,65 mmol, příklad 65, stupeň A) v 20 ml THF se při teplotě místnosti zpracuje s 1,0 M roztokem hydroxidu lithného (4,4 ml, 4,40 mmol). Zakalená reakčni směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, potom se okyselí nasyceným roztokem KH₂P0₄(~50 ml), zahustí se (aby se odstranila většina THF), a pak se extrahuje EtOAc. Organický extrakt se pak promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , a filtrací se získá 1,38 g (84 %) 4-terc.butylesteru 2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-jantarové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 451,2 (M+l, 76,5 %), 179,1 (100 %); analýza: vypočteno pro C₂3H3₄N₂O7.0,20 H₂O (454,140) ;

C, 60,83; H, 7,64; N, 6,17; nalezeno:

C, 60,84; H, 7,63; N, 5,98.

Stupeň C

Míchaný roztok 4-terc.butylesteru 2-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-jantarové kyseliny (1,00 g, 2,23 mmol, příklad 65, stupeň B) a Nmethylmorfolinu (0,31 ml, 2,82 mmol) v 25 ml CH₂C1₂ o teplotě asi -45 °C (kaše suchý led-CH₃CN) se po kapkách zpracuje s isobutylchlorformiatem (0,32 ml, 2,47 mmol). Reakčni směs se pak míchá 15 minut a pak se reakce přeruší přídavkem po kapkách koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného (5 ml). Pak se reakčni směs nechá ohřát na teplotu místnosti, zahustí se a extrahuje se EtOAc. Organický extrakt se pak promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) a filtrací se získá 1,12 g (>100 %) 4-terc.butylesteru 4-amino-3-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethyl• ·

102 karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-j antarové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty. MAS (APCI) m/z 448, 1 (M-l, 92,6 %) ,

374,0 (100 %).

Výše uvedený primární amid se pak dehydratuje za stejných podmínek jaké jsou popsané pro příklad 64, stupeň C, a potom se podrobí chromatografií (MPLC, silikagel, 25 % hexany/75 % EtOAC) kterou se získá 0,64 g (62 %) terč.butylesteru 3-kyan-3-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-propionové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 305, 1 (100 %).

Stupeň D

Roztok terč.butylesteru 3-kyan-3-{3-methyl-2-[(2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-propionové kyseliny (0,64 g, 1,48 mmol, příklad 65, stupeň C) a 5,0 ml kyseliny trifluoroctové v 25 ml CH2CI2 se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se roztok zahustí a rozdělí se mezi EtOAc a nasycený roztok KH₂PO₄. Organický extrakt se promyje solným roztokem, vysuší se (MgSO₄) , zfiltruje se a zahuštěním se získá světle žlutý olej. K oleji se pak přidá diethylether (~50 ml) a olej počne pomalu tuhnout. Pak se směs zfiltruje a vysušením ve vakuu se získá 0,28 g (49 %) 3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl)-me thy l]-butyrylamino}-propionové kyseliny ve formě bílé pevné hmoty.

MS (APCI) m/z 377,0 (M+2, 100 %);

analýza: vypočteno pro C19H25N3O5.1,20 H₂O(397,047);

C, 57,48; H, 6,96; N, 10,58; nalezeno:

C, 57,53; H, 6,68; N, 10,28.

103

Biologická stanovení

Inhibiční studie

Sloučeniny vzorce (I) jsou inhibitory ICE což prokazují stanovení hodnot Κι (μΜ) a IC₅o (μΜ) způsoby popsanými níže. Pro každou hodnocenou sloučeninu podle vynálezu se připraví postupná ředění s použitím počátečního 8-násobného ředění zásobního roztoku v DMSO do HGE (100 mM HEPES, 20 % glycerol obj./obj., 0,5 mM EDTA) a sedmi následnými 2-násobnými ředěními do HGE + 12,5 % DMSO. Deset mikrolitrů zředěných základních roztoků nebo vehikula (HGE a 12,5 % DMSO) se v trojnásobném souběžném stanovení nanesou na 96-jamkovou mikrotitrační destičku. Enzym se naředí do substrátového pufru pro stanovení (HGE, 5 mM DTT, 15 μΜ Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-AMC; konečná koncentrace enzymu je 0,5 nM, předehřátí na 30 °C) a tato reakční směs se přidá na destičku v množství 90 μΙ/jamku. Hydrolýza substrátu se sleduje 300 sekund při 30 °C pomocí excitačního a emisního filtru 385 nm a 460 nm. Ze tří získaných křivek se vyhodnotí průměrná křivka a její strmost· pomocí lineární regresní analýzy. K vyhodnocení Ki se grafy procenta inhibice vůči koncentraci inhibitoru hodnotí nelineární regresní analýzou pro reverzibilní kompetitivní model:

100.[I] % inhibice = [I] + Ki.fl + [S]/K_M} kde kompetitivní faktor je (1 + [S]/K_M) = 2

Kolorimetrické stanovení dávka-odezva (IC₅₀) pro ICE • · '4

Zředěné roztoky inhibitorů se připraví postupným dvojnásobným ředěním základních roztoků jejichž koncentrace je zvolena (na základě výsledků screeningu nebo na základě dřívějších stanovení hodnoty IC50) tak, aby v jamce s nejvyšší koncentrací byla dosažena asi 95% inhibice. Podíly takto zředěných roztoků se převedou na mikrotitrační destičku pro trojnásobné souběžné stanovení.

Enzym, ICE, se pak naředí na asi 24 nM v HGE pufru (100 mM Hepes pH 7,5, 0,5 mM EDTA, 20% glycerol, 0,1 % hovězího sérového albuminu (BSA)) a potom se aktivuje přídavkem dithiothreitolu (DTT) o konečné koncentraci 5 mM. Dávky aktivovaného enzymu se pak vnesou do jamek obsahujících inhibitor nebo vehikulum a destička se inkubuje 60 minut při teplotě místnosti. Pak se každé jamky vnese substrát (Ac-TyrVal-Ala-Asp-pNA) v konečné koncentraci 50 μΜ a destičky se umístí do zařízení pro vyhodnocování destiček přičemž teplota se udržuje na 25 °C. Po 5 minutách po přídavku substrátu se sleduje v průběhu 1 hodiny absorbance v jamkách (405 nm) a aktivita se vyhodnotí jako střední změna absorbance během uvedeného intervalu.

Stanovení IC₅₀ - stanovení na buňkách PBMC

Další důkaz že sloučeniny vzorce (I) jsou inhibitory ICE poskytuje jejich schopnost inhibovat IL-Ιβ tvorbu v lidských periferních mononukleárních buňkách (PBMC) jak je popsané níže. PBMC se izolují z heparinizované krve odstředěním přes ficoll vložku a pak se promyjí třikrát fosforečnanovým tlumivým solným roztokem. PBMC se pak suspendují v médiu obsahujícím RPMI 1640 a glutamin, penicilín, streptomycin, a 2% lidské sérum AB, a potom se vnesou na 96 jamkovou destičku s plochým dnem v dávce 10⁶ buněk na jamku. Pak se buňky přes • ······ φ * · · · • φ φφφφ φφ φφ φφ φφ φφφφ φφ φ

105 noc stimulují pomocí 10 ng/ml lipopolysacharidu (LPS, kmen

E.coli 0111:B4; Calbiochem) v přítomnosti nebo v nepřítomnosti sloučeniny vzorce (I). Pak se médium sklidí, a zjistí se koncentrace zralých IL-Ιβ soupravou ELISA firmy R & D Systems.

Pak se buňky kultivují další 4 hodiny v přítomnosti 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu (MTT) pro stanovení jejich životaschopnosti.

Kolorimetrické stanovení dávka-odezva (IC₅₀) pro Ich-2

Inhibice enzymu Ich-2 se provede způsobem popsaným pro ICE s tím rozdílem, že koncentrace.enzymu je 64 nM, a místo ICE substrátu, AC-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA se použije Ich-2 specifický substrát Ac-Leu-Glu-Val-Asp-pNA v dávce 60 μΜ.

Výsledky výše uvedených testů jsou uvedené níže v tabulce

2.

• ·

106

Tabulka 2

Příklad č.	ICEKj (μΜ)	ICEIC₅₀ (μΜ)	PBMCIC₅₀ (μΜ)	ICH2 IC₅₀(Caspase 4) (μΜ)
1	1.60	14.50	82.50	88.96
2	0.106	0.790	6.25	3.31
«·>	0.045	0.40	3.00	4.65
4	2.18	16.80	65.00	9.72
5	0.336	3.55	35.00	9.02
6	0.142	1.060	3.25	9.59
7	0.115	0.444	6.00	20.72
8	0.0150	0.54	3.75	—
9	0.0234	0.053	2.10	4.22
10	0.539	3.270	21.50	25.74
11	. 0.058	0.440	5.50	15.69
12	0.0128	0.061	1.20	1.71
13	0.0067	0.052	2.35	0.25
14	0.1066	0.0087	19.00	—
15	0.441	2.050	17.50	13.08
16	0.0025	0.0051	0.35	1.47
17	0.0329	0.0790	2.25	4.68
18	0.0236	0.0894	2.05	3.01
19	0.0009	0.0085	0.40	2.38
20 -	0.0015	0.0110	2.45	61.97
21	0.0280	0.130	7.50	209.07
22	0.1330	1.6700	19.00	—
23	0.0029	0.0145	3.60	4.43
24	0.0207	0.3600	1.60	8.66
25	0.0058	0.0483	1.10	3.54
26	0.0266	0.1360	2.00	9.91
27	0.0175	0.1470	1.00	9.93
28	0.0061	0.2540	0.55	5.58
- 29	0.0245	0.1130	1.90	4.79
30	0.0011	0.0052	0.41	3.14
31	0.0004	0.0059	0.24	1.24
32	0.0260	0.4580	3.30	14.12
33	0.0065	0.0230	1.60	3.09
34	0.0166	0.1150	2:60	1.10

♦ 9

99 ·«

9 9 9 9 9 9 · · · 9

9 9 9 9 9 9 9 9 • 9999999 9 99 9 • · · · · · fefe • · 9 9 « · 9 9 99 99 9

107

Příklad č.	ICEKj (μΜ)	ICEIC₅₀ (μΜ)	pbmcic₅₀ (μΜ)	ICH2 IC₅₀(Caspase 4) (μΜ)
35	0.0511	1.0600	5.50
36	0.6300	0.5990	1.30	101.17
37	0.0297	0.5810	2.00	127.60
38	0.0164	0.3770	3.40	18.73
39	0.4465	13.2000	5.00	—
40	0.0354	1.1500	2.90	—
41	0.4090	. 13.0000	17.50
42	0.1910	1.7300	7.50
43	0.0981	2.2800	7.50	—
44	0.0475	1.2200	2.50	—
45	0.0370	0.7500	2.60	173.83
46	0.0284	0.4380	6.50	366.57
47	1.9300	112.0000	11.00 .	—
48	1.0060	59.9000	13.50	--
49	2.1500	123.0000	--	—
50	0.0538	0.9240	2.00	—
51	0.259	15.00	16.25	—
52	0.0185	0.4855	0.75	--
53	0.0200	0.0737	8.30	32.51
54	0.0040	0.0370	2.85	11.13
55	0.0079	0.0370	5.30	11.48
56	0.0044	0.0286	3.25	4.02
57	0.0229	0.2270	3.75	38.03
58	0.0318	0.3360	7.75	10.63
59	0.0332	0.0566	3.75	10.40
60	0.0092	0.4680	5.00	12.71
61	0.0047	0.0233	2.90	--
62	0.274	2.560	23.00
63	6.92	197.00	14.50
' 64	>100	—	>100	--
65	107.00	—	>100	—

108 jsou použité následující

V předložené patentové přihlášce zkratky:

HEPES	4-(2-hydroxymethyl)-1-piperazin-ethansulfonová kyselina
DTT	dithiothreitol
EDTA	kyselina ethylendiamintetraoctová
Ac	acetyl
Glu	kyselina glutamová
LEU	leucin
Tyr	tyrosin
Val	valin
Ala	alanin
Asp	kyselina asparagová
AMC	7-amino-4-methylkumarin
pNA	p-nitroanilin
t.t.	teplota tání
EtOAc	ethylacetát
MS	hmotnostní spektrum
THF	tetrahydrofuran
t-Bu	terč.butyl
Me	methyl
DMF	dimethylformamid
MPLC	středotlaká kapalinová chromatografie
psig	počet liber na čtvereční palec (jednotka)
HOBt	1-hydroxybenzotriazol
EDCI	N-ethyl-N'-dimethylaminopropylkarbodiimid

109

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce (I) kde

Y znamená , nebo

OCpCg alkyl

C=N

-COoR' každý substituent R' nezávisle znamená vodík nebo Ci-Cgalkylovou skupinu;

R¹ a R² nezávisle znamenají skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

Ci-Cgalkyl,

-OH, -(CH₂)_naryl,

-(CH₂) η-substituovaný aryl

- (CH₂) n-O-aryl,

- (CH₂) n-O-substituovaný aryl,

- (CH₂) n-S-aryl,

-(CH₂) n~S-substituovaný aryl,

- (CH₂) r.-5-heteroaryl,

- (CH₂) r.-S-substituovaný heteroaryl, • · · · ··«· ·«·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 • · 999 999 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 ·♦ ·9 99 9999 99 9

I 10

- (CH₂) _r.-NR'-aryl, ^- (CH₂) _r.-NR'-substituovaný aryl,

- (CH₂)_r.-NR'-heteroaryl,

- (CH₂)_r.-NR'-substituovaný heteroaryl,

-(CH₂) _r-heteroaryl, nebo

-(CH₂) .-substituovaný heteroaryl;

každé n nezávisle znamená 0 až 6;

R³ znamená vodík nebo Ci-C₆alkylovou skupinu;

R⁴ znamená Ci-C₆alkylovou skupinu nebo vodík; a

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

O ί

•(CH₂)n-N-S-(CH₂)n-aryl,

R'O

-(CH₂)_n-N-S-(CH₂)_n-substituovaný aryl,

R'O ·· ·♦ ► · ♦ I » · 4 ··

- (CH₂) _n-S-(CH₂) _n-aryl,

- (CH₂) r.^-S- (CH₂) _n-substituovaný aryl, a její farmaceuticky přijatelné soli.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R' znamená vodík nebo methylovou skupinu.
3. Sloučenina podle nároku 1, vodík.
4. Sloučenina podle nároku 1, methylovou, ethylovou nebo is
5. Sloučenina podle nároku 1, kde kde každá skupina R' znamená kde R³ znamená vodík a R⁴ znamená ropylovou skupinu.

• ·

R¹ znamer.á vodík nebo methylovou skupinu; a • 0 ·· • « · · • 9 9 9 • 9 ·*«

9 9 9

99 99

112

9 9

9 ·

99 9

R² znamená skupinu ze skupiny zahrnující

- (CH₂) --fenyl, vodík,

- (CH₂)r.-O-fenyl,

-OH,

- (CH₂) --benzimidazolyl,

- (CH₂) r.-indolyl, nebo

- (CH₂) --fenol.
6. Sloučenina podle nároku 1, kde

Y znamená
7. Sloučenina podle nároku 1, kde

Y znamená

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

O

I

-CH2-NH-S-CH2CH2-;- fenyl.

/

I 13 • Φ φφ • φ · φ · φ φ φ · φφφ φ φ φ φ φ · φ φφ φ · · φ φ φφφ φφφ φφ φφφ φφ φφφ φ φ

-CH₂-S-CE;CH₂CH2-fenyl,
8. Sloučenina obecného vzorce (I):

kde

Y znamená skupinu ze skupiny zahrnující každý subsoituent R' nezávisle znamená vodík nebo methylovou skucinu;

každé n nezávisle znamená 1, 2 až 3;

Φ · «« φ»

Φ Φ Φ · « Φ φ • ♦ Φ • Φ Φ «· ·ΦΦ· • Φ »· φ

φ

ΦΦΦ φ

Φ • Φ * · • « • φ φφ

114

R¹ ’ ^η2 a R nezávisle znamenají skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

- (CH₂) „-fenyl,

- (CH₂) _n-O-fenyl, — CH₂CH₂—_N-/ 'v —ch₂ch₂—o—f V

-(¾¼ (CH₂)_n- •(^CH2)n-T

H

-N

-(ch₂)-n'N

N-

-(¾¼^

R’

7115 ·· ·« ·· ·« ·· ···· · · · · ··« • ·»···· · »·· · ·· ··*· ·« ·· ·· ·· ···· ·· · skupinu nebo vodík;

Fc znamená vodík;

R⁴ znamená skupinu ze skupiny zahrnující methyl, ethyl nebo isopropyl; a

X znamená skupinu ze skupiny zahrnující vodík,

I

-CH2-NH-S-CH2CH₂-f eny 1,

I o

-CH₂-S-CH₂CH₂CH₂-f enyl, ch₃ íf 07 ^CIÍ3

-CH₂NHSCH₂-^y ,

-ch₂o, nebo • · ·· · · · · · · • · · · ···· · • · · · ·· 4 · · • ······ · · · · · • · · 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 4 444 4 4 4 4 a její farmaceuticky přijatelné soli.
9. Sloučenina podle nároku 1, kde

R¹ znamená vodík a

R² znamená skupinu ze skupiny zahrnující

- (CH₂) „-indolyl,

-(CH₂)_n-NH-fenyl,

- (CH₂)_n-O-fenyl,

- (CH₂) „-substituovaný indolyl,

- (CH₂) „-tetrazolyl,

- (CH₂) „-fenyl,

- (CH₂) „-substituovaný fenyl,

- (CH₂) „-substituovaný benzimidazolyl,

- (CH₂) „-benztriazol,

- (CH₂) „-indazolyl,

- (CH₂) „-benzimidazolyl·,

- (CH₂) „-pyridyl,

- (CH₂) „-naftyl, nebo

- (CH₂) „-chinolinyl.
10. Sloučenina kterou je:

3-(2-methyl-3-fenethylkarbamoyl-propionylamino)-4-oxo-5- (2-fenyl-etha.nsulf onylamino) -pentanová kyselina;

• · • ·

117

3- (2-karbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino! -3-[3-methyl-2- (fenethylkarbamoyl-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

3-(2-karbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina;

3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-5-(2-fenyl-ethansulfonylamino)-pentanová kyselina;

5-(7 _r7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

(S, S) -3-{3-methyl-2-[ (3—fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

3-{3-methyl-2-[ (3-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3-[3-methyl-2-(fenethylkarbamoyl-methyl)-butyrylamino]-4-oxo-5-(3-fenyl-propylsulfanyl)-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[ (methyl-fenethyl-karbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino}-3-{3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3-{ 3-methyl-2-[(3-fenyl-propylkarbamoyl)-methyl)-butyrylamino}-4-OXO-5-(2-oxo-2H-chromen-6-yloxy)-pentanová kyselina;

118

5—[3— (lH-imidazol-2-yl) -naftalen-2-yloxy]-3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2-hydroxykarbamoylmethyl-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2 —{[2— (lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[[3- (4-hydroxyfenyl) -propyl karbamoyl]-methyl]-but yry lamino}- 4-oxo-penťanová kyselina.
11. Sloučenina kterou je:

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfónylamino)-3-(2—{[2—(lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2 —{[2— (lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl karbamoyl]-methyl}-but yry lamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (3-methyl-2-{[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl) -e t hy lkarbamoyl]-me thy 1}-but yry lamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

119 ·· ·· ·» ···· ·· ···

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3- (2-{[2- (6-fluor-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5 - (7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-[3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-karbamoyl}-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-pentanová kyselina;

3-{2-[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-1-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (lH-tetrazol-5-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -4-oxo-3-{2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methyl) -butyrylamino}-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3 (2—{[2 — (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

3- (3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]methyl}-butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3- [3-methyl-2- ({methyl-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-karbamoyl}-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina;

3—{2—[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3 (2 —{[3— (4-hydroxy-fenyl) -propylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

• 9 · · ·· Φ · ·· • 999 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 • 999999 · φ φ φ φ ·· Φφφφ «·

ΦΦ · · ΦΦ ΦΦΦΦ ΦΦ φ

120

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-1-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-pyridin-4-yl-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-yl methansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-4-yl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-1-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(3-chinolin-2-yl-propylkarbamoyl)-methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(3-naftalen-2-yl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-{3-methyl-2-[(3-pyridin-3-yl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;
12. Sloučenina kterou je:

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1)hept-l-ylmethansulfonylamino) 3-{3-methyl-2-[ (2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl karbamoyl·]-methyl}butyrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3- (2-{[2-(6-fluor-ΙΗ-indol-3-yl)-ethyl• »

121 karbamoyl]-methyl}-3-methylbutyrylamino) -4-oxo-pentanová kyselina;

3-[3-methyl-2-({methyl-[2-(1-methyl-lH-indol-3-yl)-ethyl]-karbamoylj-methyl) -butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina;

3-(3-methyl-2-{[methyl-(2-phenoxy-ethyl)-karbamoylj-methylj-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina;

3- (2 —{[2 —(5,6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl)-ethylkarbamoylj-methyl}-3-methyl-butyrylamino) - 4-oxo-butanová kyselina, trifluoracetatová sůl;

5-(7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-fenyl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(2 —{[2 — (lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoylj-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-4-yl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino} -4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulf ony lamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-chinolin-2-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . ljhept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-naftalen-l-yl-propylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (3-pyridin-3-yl-propylkarbamoyl) -methylj-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

122 • ·

3—{2—[ (2-ben zo imidazol-1-yl-ethyl karbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-l-ylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;
13. Sloučenina kterou je:

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino)-3-(3-methyl-2-{[2-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-me thyl}-but yrylamino) - 4-oxo-pentanová kyselina;

5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]]hept-l-ylmethansulfonylamino) -3-{3-methyl-2-[ (2-pyridin-4-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-pentanová kyselina;

3- (2-{[2- (5-acetyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1]hept-lylmethansulfonylamino)-4-oxo-pentanová kyselina;

5.-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyklo[2.2 . l]hept-l-ylmethansulfonylamino) 3- (3-methyl-2-{[2- (lH-tetrazol-5-yl) -e thyl karbamoy l]-me thyl}-but yrylamino) 4-oxo-pentanová kyselina;

N⁴- (2-benzoimidazol-l-yl-ethyl) -N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -N⁴-[2-(lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-sukcinamid;

N⁴-[2- (5, β-dichlor-benzoimidazol-l-yl) -ethylj-N¹- (2-ethoxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-(2-fenoxyethyl)-sukcinamid; nebo

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- ( 6-methoxy-lH-indol-3-yl) -ethyl]-sukcinamid;

123 ·· ·· ·· ·♦ ·· • · · · » · · * 9 · ···· · · · 9 9 • ······ · 9 99 9 • · · · · · ·· ·· ·· 99 9999 99
14. Sloučenina kterou je:

N⁴-(2-benzotriazol-l-yl-ethyl)-N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-(2-indazol-l -y1-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-(2-fenylamino-ethyl)-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2- (6-fluor-lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

N¹- (2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2- (7-methyl-lH-indol-3-yl) -ethyl]-2-isopr.opyl-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxotetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2-(2-methyl-benzoimidazol-l-yl)-ethyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[3-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-propyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[2- (fenyl) -ethyl]-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4- (fenyl) -butyl]-sukcinamid; nebo

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-(2-indol-l-y1-ethyl)-2-isopropyl-sukcinamid;
15. Sloučenina kterou je:

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-2-isopropyl-N⁴-[4- (fenyl) -propylj-sukcinamid;

N¹-(2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-N⁴-[2-(5-fluorlH-indol-3-yl) ethyl]-2-isopropyl-sukcinamid;

3 — {2—[ (2-benzoimidazol-1-yl-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

124 ·· ·· 00 0 0 0 · · • · · · • ♦ ♦ · · • · 0 0

00 ···· ·0

3- (3-methyl-2-{[2- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -ethylkarbamoyl]-methyl}-butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3-(2 —{[2— (5-fluor-l-methyl-lH-indol-3-yl)-ethylkarbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina;

3- (2 —{[2— (5, 6-dichlor-benzoimidazol-l-yl) -ethyl-karbamoyl]· methyl}-3-methyl-butyrylamino)-4-oxo-butanová kyselina;

3-(2-{[ (2-benzoimidazol-l-yl-ethyl)-methyl-karbamoyl]-methyl}-3-methyl-butyrylmino)-4-oxo-butanová kyselina;

3-{2-[ (2-benzotriazol-l-yl-ethylkarbamoyl)-methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

3 —{2—[ (2-indazol-l-yl-ethylkarbamoyl) -methyl]-3-methyl-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina;

3 —[2— ({[2- (5, 6-dimethyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]-methylkarbamoyl}-methyl) -3-methyl-butyrylamino]-4-oxo-butanová kyselina;

3-[2- ({[2- (2-methyl-benzoimidazol-l-yl) -ethyl]met hyl karbamoyl}-methyl) -3-methyl-butyrylamino]4-oxo-butanová kyselina;

3-(3-methyl-2-{[3- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-propylkarbamoyl]-methyl}butyrylamino) -4-oxo-butanová kyselina;

3-{3-methyl-2-[ (2-f enoxy-ethyl karbamoyl) -methyl]-butyrylamino}-4-oxo-butanová kyselina, ethylester;

3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]butyrylamino}-propionová kyselina, ethylester; nebo

3-kyan-3-{3-methyl-2-[ (2-fenoxy-ethylkarbamoyl) -methyl]butyrylamino}-propionová kyselina.
16. Farmaceutická kompozice vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1.

φφ φφ φφ φφ φφ • · φ · φφφφ φ φ φ ······ ·φφ <ς ^ν Φ Φ φφφ φ φ φ φφφφ • · ΦΦΦΦ φφ φφ φφ φφ φφφφ φφ

125
17. Farmaceutická kompozice vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 8.
18. Způsob léčby nebo prevence mrtvice vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi po mrtvici nebo u kterého je riziko mrtvice.
19. Způsob léčby nebo prevence mrtvice vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi po mrtvici nebo u kterého je riziko mrtvice.
20. Způsob léčby zánětlivých chorob vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi trpícího zánětlivou chorobou.
21. Způsob léčby zánětlivých chorob vyznačující setím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi trpícího zánětlivou chorobou.
22. Způsob podle nároku 20 vyznačuj ící se tím, že zánětlivou chorobou je revmatoidní artritida nebo zánětlivé onemocnění střev.
23. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že zánětlivou chorobou je revmatoidní artritida nebo zánětlivé onemocnění střev.

·' * ♦ • 9 9 9 • 9 9 9 9 ·

126 *..*
24. Způsob léčby septického šoku vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi majícího septický šok.
25. Způsob léčby septického šoku vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi majícího septický šok.
26. Způsob léčby reperfúzního poškození vyznačující se t í m , že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi trpícího reperfúzním poškozením.
27. Způsob léčby reperfúzního poškození vyznačující se t í m , že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi trpícího reperfúzním poškozením.
28. Způsob léčby Alzheimerovy choroby vyznačuj ící se t í m ., že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi trpícího Alzheimerovou chorobou.
29. Způsob léčby Alzheimerovy choroby vyznačuj ící se t í m , že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi trpícího Alzheimerovou chorobou.
30. Způsob léčby shigellózy vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi trpícího shigellózou.

127
31. Způsob léčby shigellózy vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi trpícího shigellózou.

• fe • fe fefefe
32. Způsob léčby roztroušené sklerózy vyznačuj ící se t í m , že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi trpícího roztroušenou sklerózou.
33. Způsob léčby roztroušené sklerózy vyznačuj ící se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi trpícího roztroušenou sklerózou.
34. Způsob inhibice konverzního enzymu interleukinu-ΐβ vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi u kterého je zapotřebí inhibovat konverzní enzym interleukinu-ΐβ.
35. Způsob inhibice konverzního enzymu interleukinu-ΐβ vyznačující setím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 8 pacientovi u kterého je zapotřebí inhibovat konverzní enzym interleukinu-ΐβ.