CZ20003716A3

CZ20003716A3 - Forma VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-l-betaL-ribofuranosyl-lH-benzimidazolu

Info

Publication number: CZ20003716A3
Application number: CZ20003716A
Authority: CZ
Inventors: Barry Howard Carter; Anne Hodgson; Lian-Feng Huang
Original assignee: Glaxo Group Limited
Priority date: 1999-04-01
Filing date: 1999-04-01
Publication date: 2001-04-11

Abstract

Krystalická forma VI 5,6-dichlor-2-(ísopropylamino)-l-(β-Lribofuranosyl)-lH-benzimidazolu, farmaceutické prostředky a jejich použití v lékařství.

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká krystalické formy antivirové sloučeniny 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-1-(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu (také známého jako 1263W94; sloučenina vzorce I)), farmaceutických prostředků obsahujících tuto krystalickou formu antivirové sloučeniny a její použití k léčbě.

Dosavadní stav techniky

5,6-Dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(P-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazol je benzimidazolový derivát, který se používá k léčení v medicíně. WO96/01833 popisuje sloučeninu vzorce I a její použití pro léčbu nebo profylaxi virových infekcí, jako jsou infekce způsobené herpes viry. Sloučenina, jak je popsána ve WO96/01833 je ve formě amorfního, nekrystalického materiálu.

Struktura 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(p-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazolu, sloučeniny vzorce I je následující:

Podstata vynálezu

Zjistili jsme nyní, že sloučenina vzorce I může existovat v různých krystalických formách a solvátech. Dále jsme nalezli zvláštní krystalickou formu sloučeniny vzorce • ·

I, formu VI, která je bezvodá a krystalická a která překvapivě vykazuje dobré farmaceutické vlastnosti. Forma VI je termodynamicky nejstabilnější forma sloučeniny vzorce I. Snadno se připraví a může být vyráběna v komerčním měřítku. Je obzvlášť stabilní a v podstatě nehygroskopická. Dávky této krystalické formy se mohou konzistentně připravit ve vysoké krystalické formě čistoty, tj. kde jsou poměry ostatních a krystalických forem sloučeniny vzorce I omezeny. Kromě toho tato bezvodá krystalická forma má dobré vlastnosti při skladování a může být snadno formulována do farmaceutických prostředků, jako jsou tablety a kapsle, tyto krystalické formy a solváty sloučeniny vzorce I mohou být charakterizovány jejich rentgenovými práškovými difrakčními diagramy.

Obrázek 1. Rentgenový práškový difrakční diagram formy I sloučeniny vzorce I.

Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 2. Rentgenový práškový difrakční diagram formy II sloučeniny vzorce I. Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 3. Rentgenový práškový difrakční diagram ethanolsolvátu sloučeniny vzorce I (dále „ethanolát“). Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22. Obrázek 4. Rentgenový práškový difrakční diagram formy IV sloučeniny vzorce I. Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 5. Rentgenový práškový difrakční diagram formy V sloučeniny vzorce I. Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 6. Rentgenový práškový difrakční diagram formy VI sloučeniny vzorce I. Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 7. TGA termogram formy VI sloučeniny vzorce I. Tento TGA termogram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 8. Izoterma sorpce vlhkosti formy VI sloučeniny vzorce I.

Obrázek 9. DSC termogram formy VI sloučeniny vzorce I. Tento TGA termogram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Obrázek 10. Rentgenový práškový difrakční diagram monokrystalu formy VI sloučeniny vzorce I. Tento diagram se získá podle postupů popsaných v příkladu 22.

Podle prvního aspektu vynález poskytuje sloučeninu vzorce I v termodynamicky stabilní krystalické formě (zde uváděná jako forma VI). Forma VI je definována rentgenovým práškovým difrakčním diagramem ilustrovaným na obrázku VI, který se získá vhodně orientovaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka médi. Forma VI se může připravit při určitých relativních vlhkostech z ethanolsolvátu sloučeniny I. Forma VI se také může připravit z očkované kaše formy II nebo ethanolsolvátu ve vodě s formou

VI. Další rozpouštědlové systémy, které mohou vést k formě VI očkováním zahrnují ethylacetát/toluen, isopropanol/toluen, 2-butanon/toluen.

V dalším aspektu předkládaný vynález poskytuje sloučeninu vzorce I jako směs formy VI s kteroukoliv jednou nebo více formami I, II, IV, V nebo solváty, nebo jako směs formy VI a amorfního materiálu nebo jako směs formy VI, amorfního materiálu a jedné nebo více dalších krystalických forem nebo solvátů.

Výraz „solvát“, jak se zde používá, je komplex variabilních stechiometrií tvořených rozpuštěnou látkou (sloučenina vzorce I) a rozpouštědlem. Jako rozpouštědla se může používat voda, methanol, ethanol nebo kyselina octová. Dále uváděný odkaz na sloučeninu vzorce I, pokud není specifikována jiná forma nebo solvát, znamená amorfní formu této sloučeniny.

Dále uváděný výraz „bezvodá krystalická forma“ podle vynálezu znamená krystalickou formu, která má v podstatě stejný rentgenový práškový difrakční diagram jako je ukázáno na obrázku 6, který se získá vhodně orientovaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi.

Rentgenový práškový difrakční diagram bezvodé krystalické formy VI podle vynálezu se určí za použití konvenčních technik a zařízení, které jsou odborníkovi známé. Difrakční diagramy obrázků 1 až 6 se získaly za použití difraktometru Philips X-Pert MPD, vybaveným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi a automatickou divergentní štěrbinou. Jako detektor se použil xenonový proporcionální čítač. Vzorek prášku, použitý ke generování dat rentgenové práškové difrakce s připraví konvenčními technikami pro plnění vzorků za použití držáku o průměru16 mm a tloušťky 2,0 mm.

K získání rentgenových práškových difrakčních diagramů uvedených na obrázcích 1, 2, 4, 5, 6 a 3 se použil práškový vzorek každé formy I, II, IV, V a VI a ethanolát. Rentgenové difrakční diagramy jsou pro každou z různých forem a solvátů specifické. Každá krystalická bezvodá forma nebo solvát vykazuje difrakční diagram se specifickou sadou difrakčních vrcholů, které mohou být vyjádřeny v 2 theta úhlech (°), d-mezirovinných vzdálenostech (Angstrom) a/nebo relativních intenzitách vrcholů.

Difrakční úhly 2 theta a odpovídající hodnoty d-mezirovinné vzdálenosti vysvětlují polohy různých vrcholů v rentgenovém difrakčním diagramu. Hodnoty d-mezirovinné vzdálenosti se počítají z pozorovaných 2 theta úhlů a vlnové délky Ka 1 za použití Braggovy rovnice. Mírné odchylky v nalezených 2 theta úhlech a d-mezirovinných vzdálenostech jsou důsledkem různých použitých difraktometrů a technice přípravy vzorků pro analýzu.

Větší odchylky se očekávají v relativní intenzitě vrcholů. Identifikace přesné krystalické formy sloučeniny bude založena primárně na nalezených 2 theta úhlech nebo d-mezirovinných vzdálenostech, méně na relativní intenzitě vrcholů.

K identifikaci 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(P-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazolu formy VI je nejcharaktičtější vrchol úhlu 2 theta při 8,53 stupních nebo d-mezirovinné vzdálenosti 10,36 A.

Ačkoliv odborník může identifikovat formu VI z charakteristik vrcholů 2 theta úhlu 8,53 stupňů, v některých případech může být žádoucí spoléhat se na násobky 2 theta úhlu nebo násobky d-mezirovinné vzdálenosti pro identifikaci formy VI. 5,6dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazol formy VI může také být identifikován přítomností násobků charakteristik vrcholů úhlu 2 theta, zahrnující dva, tři, čtyři, pět, šest, sedm, osm, devět, deset nebo všech jedenáct 2 theta úhlů, které jsou spolehlivé charakteristiky této zvláštní krystalické formy. Tyto vrcholy se vyskytují v následujících polohách, vyjádřených v úhlech 2 theta: 8,53, 10,47, 13,51, 14,95, 15,98, 17,23, 21,41, 21,83, 22,35, 23,07 a 27,49 stupňů. V jednom provedení se použije alespoň pět shora uvedených 2 theta úhlů k identifikaci formy VI. Krystalická bezvodá forma VI typicky vykazuje vedle shora uvedených vrcholů ještě • · • · 9 9 « « další vrcholy úhlu 2 theta. Například forma VI může vykazovat vrcholy úhlu 2 theta v podstatě v následujících polohách: 8,5, 10,5, 12,8, 13,5, 14,2, 15,0, 16,0, 17,2, 17,8, 19,2, 21,4, 21,8, 22,4, 23,1, 25,0, 25,4, 27,5, 29,2, 30,1, 31,1 a 32,6 stupňů.

Při stanovení úhlu 2 theta a d-mezirovinného prostoru se připouští určitá tolerance chyb. Chyba ve stanovení vzdáleností d klesá se stoupajícím difrakčním skanovacím úhlem nebo klesající vzdáleností d. Chyba ve shora uvedeném úhlu 2 theta je přibližně ± 0,05 stupňů pro každý shora stanovený vrchol. Chyba v hodnotách vzdálenosti d je přibližně ±0,5 A.

Jelikož je povolena určitá tolerance při stanovení úhlů 2 theta a vzdálenosti d, výhodná metoda porovnání rentgenového práškového difrakčního diagramu za účelem identifikace zvláštní krystalické formy je překrytí rentgenového práškového difrakčního diagramu neznámé formy přes rentgenový práškový difrakční diagram známé formy. Například odborník může překrýt rentgenový práškový difrakční diagram nedefinované krystalické formy 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(β-Lribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu získané za použití metod zde popsaných přes obrázek 6 a snadno určí, zda rentgenový difrakční diagram nedefinované formy je v podstatě shodný s rentgenovým práškovým difrakčním diagramem formy 6. Jestliže je rentgenový práškový difrakční diagram v podstatě stejný jako obrázek 6, potom dříve uvedená neznámá krystalická forma může být snadno a přesně určena jako forma VI. Stejná technika se může použít ke stanovení nedefinovaných krystalických forem I, II, IV, V nebo ethanolátu, překrytím rentgenového práškového difrakčního diagramu přes obrázky 1, 2, 4, 5 nebo 3.

Ačkoliv jsou úhly 2 theta nebo vzdálenosti d primární metodou identifikace konkrétní krystalické formy, může být žádoucí také porovnat relativní intenzity vrcholů. Jak bylo uvedeno shora, relativní intenzita se může lišit v závislosti na konkrétním použitém difraktometru a technice přípravy vzorku. Intensity vrcholů se uvádějí jako intenzity vztažené k vrcholu s nejsilnější intenzitou. Jednotky intenzity na ose rentgenové difrakce jsou impulzy/s. Absolutní počet impulzů = impulzy/čas x doba čítání = impulzy/ s. x 10 s. Vzhledem k úhlům 2 theta, vzdálenosti d (A) a relativní intenzity vrcholů I, forma VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-^-L-ribofuranosyl)-1H6 • · · benzimidazolu, vykazuje následující charakteristiky rentgenového difrakčního diagramu:

Forma VI
úhel 2 theta (°)¹	A²	I
8,53	10,36	14,5
10,47	8,45	25,6
12,80	6,91	16,8
14,16	6,25	16,4
13,51	6,55	21,4
14,95	5,92	60,4
15,98	5,54	26,2
17,23	5,14	100,0
19,25	4,61	19,3
21,41	4,15	26,5
21,83	4,07	60,4
22,35	3,97	38,3
23,07	3,85	48,7
27,49	3,24	30,9
30,11	2,97	18,5

¹Tolerance chyb = přibližně±0,05 stupňů ²Tolerance chyb = přibližně+0,05 Angstrom S ohledem na shora uvedené charakteristické rysy rentgenového práškového difrakčního diagramu formy VI, může odborník snadno identifikovat formu VI 5,6dichlor-2-(isopropylamino)-1-(3-L-ribofuranosyl)-1H-benzimidazolu. Odborník si je vědom toho, že rentgenový práškový difrakční diagram vzorku formy VI, získaný podle metod popsaných v této přihlášce může vykazovat další vrcholy. Shora uvedená tabulka a následující tabulky poskytují patnáct nejintenzivnějších vrcholů, které jsou charakteristické pro konkrétní krystalickou formu nebo solvát. Tyto tabulky by neměly být chápány jako vyčerpávající seznam vrcholů vykazovaných konkrétní formou nebo solvátem.

Na rozdíl od shora uvedených charakteristik rentgenové práškové difrakce formy VI, formy I, II, IV, V a enolát vždy vykazují odlišné 2 theta úhly, vzdálenosti d a relativní intenzity, které mohou být použity k rozlišení každé z těchto forem od formy VI a navzájem. Formy I, II, IV, V a enolát jsou definovány rentgenovým práškovým difrakčním diagramem, který se získal vhodně orientovaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Kot mědi; diagramy jsou uvedeny na obrázkách 1,2, 4, 5 a 3.

• ·

Forma 1 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu je dále charakterizována následujícími 2 theta úhly, d-mezirovinnými vzdálenostmi a relativními intenzitami vrcholů, získaná podle postupu příkladu 22 dále.

Forma I
úhel 2 theta (°)¹	A¹	I
7,90	11,19	58,8
10,39	8,51	49,7
14,63	6,05	33,3
15,79	5,61	46,1
16,95	5,23	16,4
19,24	4,61	14,4
20,75	4,28	29,4
21,99	4,04	21,0
22,77	3,90	100,0
24,14	3,68	35,2
24,71	3,60	20,5
25,72	3,46	13,9
25,97	3,43	43,2
29,44	3,03	13,9
31,09	2,87	14,7

Tolerance chyb = přibližně±0,05

Forma II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu je dále charakterizována následujícími 2 theta úhly, d-mezirovinnými vzdálenostmi a relativními intenzitami vrcholů, získaná podle postupu příkladu 22 dále

Forma II
úhel 2 theta (°)¹	A¹	I
7,91	11,17	100,0
10,86	8,14	10,1
12,69	6,97	5,2
13,65	6,48	4,7
14,94	5,93	8,4
16,11	5,50	12,8
17,33	5,11	17,5
18,23	4,86	18,2
19,60	4,53	19,6
21,88	4,06	18,8
23,24	3,82	19,0
23,92	3,72	26,7
25,27	3,52	24,5
27,70	3,22	34,9
29,21	3,06	14,2

• · • 99 · · 9 9 9 9 • 9 9·« 9 9 99 99 9 • · ·· ·«««

999 99 999 «999 99 9« ¹Tolerance chyb = přibližně±0,09

Forma II může také vykazovat vrcholy v podstatě v následujících 2 theta úhlech: 7,9, 10,9, 16,1, 17,3, 18,2, 19,6, 21,9, 23,9 stupňů.

Ethanolát 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu je dále charakterizována následujícími 2 theta úhly, d-mezirovinnými vzdálenostmi a relativními intenzitami vrcholů, získaná podle postupu příkladu 22 dále.

Ethanolát
úhel 2 theta (°)¹	A¹	I
9,07	9,74	45,2
10,38	8,52	22,7
15,95	5,55	40,4
17,72	5,00	100,0
18,96	4,68	17,2
19,79	4,48	18,4
20,75	4,28	30,4
21,37	4,16	27,7
21,89	4,06	19,0
22,08	4,02	17,5
22,96	3,87	40,6
23,93	3,72	41,3
25,40	3,50	26,7
27,65	3,22	19,8
29,05	3,07	25,4

¹Tolerance chyb = přibližně±0,05

Ethanolát může také vykazovat vrcholy v podstatě v následujících 2 theta úhlech:

6,6, 9,1, 9,4, 10,4, 11,0, 14,7, 16,0, 17,2, 17,7, 18,3, 20,8, 21,4, 23,0, 23,9, 25,4,

29,1 stupňů.

Forma IV 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(3-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu je dále charakterizována následujícími 2 theta úhly, d-mezirovinnými vzdálenostmi a relativními intenzitami vrcholů, získaná podle postupu příkladu 22 dále.

• · • *« • · · · • · · • « · · · • · • · · « ·

Forma IV
úhel 2 theta (°)¹		I
9,29	9,51	15,6
11,78	7,51	12,5
16,04	5,52	20,1
18,67	4,75	25,1
19,54	4,54	11,5
22,06	4,03	100,0
22,39	3,97	11,6
22,68	3,92	17,9
23,34	3,81	15,5
23,68	3,75	10,0
24,40	3,65	28,7
28,72	3,11	11,1
29,64	3,01	13,0
30,92	2,89	26,5
31,62	2,83	13,9

¹Tolerance chyb = přibližně±0,05

Forma IV může také vykazovat vrcholy v podstatě v následujících 2 theta úhlech: 7,5,

9,3, 11,8, 16,0,18,7, 19,4, 19,5, 22,1, 22,7, 24,4, 29,6, 30,9 stupňů.

Forma V 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(p-L-ribofuranosyl)-1H-benzimidazolu je dále charakterizována následujícími 2 theta úhly, d-mezirovinnými vzdálenostmi a relativními intenzitami vrcholů, získaná podle postupu příkladu 22 dále.

Forma V
úhel 2 theta (°) ^!	A¹	I
9,07	9,75	19,1
9,35	9,46	14,3
10,74	8,23	14,0
13,30	6,65	26,1
17,04	5,20	18,5
18,13	4,89	39,2
18,78	4,72	57,0
20,41	4,35	39,5
21,75	4,08	100,0
22,71	3,91	15,8
23,02	3,86	20,3
26,87	3,32	23,4
28,34	3,15	24,7
28,55	3,12	51,1
30,22	2,95	39,0

¹Tolerance chyb = přibližně±0,05

9 99

9999

99

Forma V může také vykazovat vrcholy v podstatě v následujících 2 theta úhlech: 9,1,

9,3, 10,7, 13,3, 17,0, 18,1, 20,4, 21,8, 26,9, 28,6, 30,2 stupňů.

K identifikaci bezvodé krystalické formy VI podle vynálezu se mohou použít také další metody fyzikální charakterizace. Příklady vhodných technik, které jsou odborníkovi známé, které se použijí k fyzikální charakterizaci nebo identifikaci krystalické formy nebo solvátů zahrnují, nikoliv však s omezením, bod tání, diferenční skanovací kalorimetrii a infračervené absorpční spektrum. Tyto techniky mohou být použity samotné nebo v kombinaci k charakterizaci dané bezvodé krystalické formy nebo solvátů.

Vynález se týká bezvodé krystalické formy VI, jak v čisté formě, tak ve směsi s ostatními formami sloučeniny vzorce I. Například forma VI může být ve směsi s kteroukoliv nebo více formami I, II, IV, V nebo ethanolátem. Alternativně, forma VI může být ve směsi s amorfní sloučeninou vzorce I. V dalším provedení může být forma VI ve směsi jak s amorfní sloučeninou vzorce I, tak s jednou nebo více jinými krystalickými formami nebo solváty, zahrnující formy I, II, IV, V a ethanolát.

Předkládaný vynález specificky předpokládá shora uvedené směsi formy VI s jednou nebo více amorfními sloučeninami vzorce I a/nebo jinými krystalickými bezvodými formami a solváty. Mělo by být vzato v úvahu, že směsi formy VI s amorfní sloučeninou vzorce I a/nebo jinými krystalickými formami může vést k maskování nebo absenci jednoho nebo více shora uvedených rentgenových práškových difrakčních vrcholů popsaných shora pro formu VI. Metody pro analyzování takových směsí krystalických forem pro přesnou identifikaci přítomnosti nebo nepřítomnosti konkrétních krystalických forem jsou známé.

Dále, vedle shora uvedených forem může být forma VI také ve směsi s hydratovanými krystalickými formami. Například v kterékoliv dávce obsahující bezvodou krystalickou sloučeninu vzorce I formy VI, může také být hydratovaná krystalická forma VI. Jelikož bezvodá krystalická forma sloučeniny vzorce I formy VI je v podstatě bez hydratační vody, proporce hydratovaných forem sloučeniny vzorce I ··· · formy VI v kterékoliv dávce sloučeniny může být měřena stanovením obsahu celkové hydratační vody každé dávky.

Podle druhého aspektu předkládaný vynález poskytuje sloučeninu vzorce I formy VI, která nemá celkový obsah těkavých látek větší než 0,3 % hmotn. (hmotn./hmotn.), jak bylo stanoveno termogravimetrickým analyzátorem TA Instruments Hi-Res TGA 2950 (obrázek 7). Gravimetrické měření sorpce vodní páry ukázalo, že forma VI absorbovala při rovnováze do 95 % relativní vlhkosti při teplotě místnosti pouze 0,3 % vody (obrázek 8).

Podle dalšího aspektu předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy sloučeniny vzorce I v bezvodé krystalické formě VI, který zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce I solubilizačním činidlem, které slouží pro přeměnu množství sloučeniny vzorce I na bezvodou krystalickou formu VI.

Vynález také poskytuje způsob přípravy sloučeniny vzorce I formy VI. Postup zahrnuje následující kroky:

a) vytvoření nebo poskytnutí sloučeniny vzorce I v roztoku buď ve formě volné báze nebo ve formě soli;

b) izolaci sloučeniny vzorce I z roztoku a případně odstranění nenavázaného (vlhkého, nesolvatovaného) rozpouštědla , čímž se získá sloučenina vzorce I v podstatě suché formě;

c) zpracování sloučeniny vzorce I solubilizačním činidlem, které slouží pro přeměnu případně suché sloučeniny vzorce I ze stupně b) na bezvodou krystalickou formu VI; a

d) izolaci bezvodé krystalické formy VI.

V jednom provedení podle vynálezu se sloučenina I formy VI připraví rekrystalizací ze směsi ethylacetát/toluen. Podle tohoto postupu se sloučenina vzorce I zpracuje solubilizačním činidlem zahrnující ethylacetát a toluen k přeměně sloučeniny vzorce I na bezvodou krystalickou formu VI a bezvodá krystalická forma VI se izoluje «49 4

4444 • 4 4 4

4 4 4 4 • · 4 4

44 z roztoku odstraněním solubilizačního rozpouštědla, například odpařením nebo sušením. Sloučenina vzorce I může být buď ve formě volné báze nebo ve formě soli.

Sloučenina vzorce I se může připravit jakoukoliv metodou známou ve stavu techniky, ale výhodně metodami popsanými ve WO96/01833, uváděné zde jako odkaz.

Syntéza sloučeniny vzorce I obecně vede k vytvoření sloučeniny v roztoku v reakční směsi, ze které může být sloučenina oddělena a vyčištěna jako pevný produkt. Sloučenina vzorce VI může být případně sušena. Krystalickou formu pevného produktu ovlivňuje řada faktorů a podle předkládaného vynálezu jsou zvoleny podmínky separace a/nebo následného zpracování tak, aby vznikla sloučenina vzorce I jako bezvodá krystalická forma VI nebo jako směs formy VI s jedním nebo více ostatními bezvodými krystalickými formami nebo solváty a/nebo amorfním materiálem. Například hydrátovú forma sloučeniny vzorce I se může převést na bezvodou krystalickou formu za použití vhodného rozpouštědla a za vhodných podmínek.

Takové vhodné rozpouštědlo, kterým je s výhodou ve vodě rozpustné organické rozpouštědlo, by mělo mít dostatečnou rozpouštěcí schopnost a mělo by být použito v dostatečném množství, aby bylo dosaženo částečného rozpuštění pro dosažení přeměny a srážení, například z bezvodé krystalické formy na žádanou bezvodou krystalickou formu sloučeniny vzorce I. S výhodou může být rozpouštědlo eventuálně odstraněno sušením ve vakuu.

Vlhká sloučenina vzorce I se po první izolaci (jak je uvedeno ve výše uvedeném kroku b) s výhodou suší například při teplotě od okolo 30 °C do okolo 70 °C za poskytnutí v podstatě suché sloučeniny vzorce I.

Předkládaný vynález také poskytuje sloučeninu vzorce I formy VI pro použití v medicíně, například při léčení a profylaxi virového onemocnění živočichů, například savce, jako je člověk. Sloučenina je zvlášť použitelná pro léčení nebo profylaxi, včetně potlačení recidivy virových nemocí, jako jsou infekce způsobené herpes virem, například CMV infekce a rovněž nemoci způsobené virem hepatitidy B a hepatitidy C.

Dále, pro použití v humánní medicíně se může sloučenina vzorce I formy VI podávat ostatním živočichům, například jiným savcům pro léčbu nebo profylaxi virových nemocí.

Předkládaný vynález také poskytuje způsob léčení nebo profylaxe, včetně potlačení recidivy virových infekcí, zejména infekcí způsobené herpes virem, CMV infekce nebo nemoci způsobené virem hepatitidy B a hepatitidy C u živočichů, například savců, který zahrnuje podání živočichovi antivirového účinného množství sloučeniny vzorce I formy VI.

Předkládaný vynález také poskytuje použití sloučeniny vzorce I formy VI pro přípravu farmaceutického prostředku pro léčení nebo profylaxi virové infekce.

Sloučenina vzorce I formy VI může být podávána jakoukoliv cestou, která je vhodná pro léčení onemocnění, ale výhodným způsobem podání je podání orální. Je však zřejmé, že výhodný způsob podávání se může lišit například podle stavu pacienta.

Pro každé z výše uvedených využití a indikací budou požadovaná množství aktivní složky (jak je definováno výše) záviset na řadě faktorů, včetně vážnosti onemocnění a stavu pacienta a konečné rozhodnutí bude vždy záviset na ošetřujícím lékaři nebo veterinárním lékaři. Obecně však bude pro každé toto použití a indikaci vhodná účinná dávka v rozmezí 0,01 až 250 mg na kg tělesné hmotnosti pacienta za den, s výhodou v rozmezí 0,1 až 100 mg na kg tělesné hmotnosti za den, výhodněji v rozmezí 0,5 až 30 mg na kg tělesné hmotnosti za den, zejména 1,0 až 30 mg na kg tělesné hmotnosti za den (pokud není uvedeno jinak, všechny hmotnosti aktivní složky jsou vztaženy na volnou bázi sloučeniny vzorce I). Požadovaná dávka se s výhodou skládá z jedné, dvou, tří nebo čtyř více rozdělených dávek, podávaných ve vhodných intervalech během dne. Tyto rozdělené dávky mohou být podávány v jednotlivých dávkovačích formách, obsahující přibližně 10 až 1200 mg nebo 50 až 500 mg, výhodně 20 až 500 mg a nejvýhodněji 100 až 400 mg aktivní složky na dávkovači formu.

• 4

4·· 4 <44 44 4 • ····

4 ··

4 4 4 • 4 4 4

4 4 4 4

4 4 4

4 44

I když je možné, aby aktivní složka byla podávána samostatně, s výhodou se podává ve formě farmaceutického prostředku. Prostředek obsahuje aktivní složku jak je definována výše spolu s jednou nebo více farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami a případně jinými účinnými složkami. Pomocná látka (látky) musí být „přijatelné“ v tom smyslu, že je kompatibilní s jinými složkami v prostředku a není škodlivá pro příjemce.

Farmaceutické prostředky zahrnují formy vhodné pro orální podávání a mohou být s výhodou v jednotlivé dávkovači formě, připravené některým ze způsobů dobře známých v oboru farmacie, takové způsoby zahrnují krok smísení aktivní složky s nosičem, který obsahuje jednu nebo více dalších složek. Obecně se prostředky připravují stejnoměrným a důkladným smísením aktivní složky s kapalnými nosiči nebo jemně práškovými pevnými nosiči nebo oběma a potom v případě nutnosti tvarováním produktu.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu vhodné pro orální podávání mohou být ve formě oddělených jednotek, jako jsou kapsle, pastilky, sáčky s granulemi nebo tablety (k polykání, k dispergování nebo žvýkání), kde každá jednotka obsahuje stanovené množství aktivní složky; jako prášky nebo granule; jako roztok nebo suspenze ve vodné tekutině nebo nevodné tekutině; nebo jako tekutá emulze olej ve vodě nebo voda v oleji. Aktivní složka může být také ve formě sousta, lektvaru nebo pasty.

Tablety je možno vyrábět stlačováním nebo tvarováním, případně s jednou nebo více pomocných složek. Stlačované tablety je možno připravovat stlačováním ve vhodném stroji volně sypké aktivní složky, jako je prášek nebo granule, popřípadě smísené s pojivém, mazadlem, inertním ředidlem, ochrannou látkou, povrchově aktivní látkou nebo dispergujícím prostředkem. Tvarované tablety je možno tvarovat ve vhodném stroji s použitím práškové směsi navlhčené inertním kapalným ředidlem, tablety mohou být případně potahované nebo rýhované a mohou mít takové složení, aby došlo k pomalému nebo řízenému uvolňování přítomné aktivní složky.

• 99 • · • ·· ·· ·« ··» · · ·«> · • · · · · · • ······ • · · · · · • 99 9999 99 99

Vedle orálních dávkových forem popsaných shora může být krystalická forma VI podle vynálezu také formulována pro topické, parenterální a jiné cesty podání za použití nosičů a technik popsaných ve WO96/01833. Odborník si je vědom toho, že příprava dávkových forem, jako jsou roztoky bezvodé krystalické formy VI v podstatě úplně rozpuštěné v rozpouštědle pro parenterální podání bude znemožňovat identifikaci konkrétní krystalické formy použité k přípravě roztoku. Nicméně, bezvodá krystalická forma VI se může konvečně použít pro přípravu roztoků v podstatě úplným rozpuštěním krystalické formy nebo solvátů ve vhodném rozpouštědle.

Výhodné jednotlivé dávkovači formy jsou ty, které obsahují denní dávku nebo rozdělenou denní dávku (jak je uvedeno shora) nebo její část, aktivní složky.

Je samozřejmé, že navíc ke shora uvedeným složkám prostředků podle vynálezu mohou tyto prostředky obsahovat další, v oboru běžně známé látky podle typu uvažovaného prostředku, například prostředky pro orální podání mohou obsahovat aromatizační prostředky nebo látky maskující chuť.

Dále uvedené příklady jsou uvedeny pouze pro ilustraci a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Forma I 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (200 g) se umístí do monitoru tepelné aktivity (TAM) a přidá se několik kapek vody, aby se prášek stal vlhkým. Lékovka se utěsní a vloží se do komory TAM při 50 °C. Směs se ochladí na teplotu okolí a filtruje. Vlhký zbytek se suší ve vakuu při 60 °C přes noc a získá se forma I sloučeniny I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 1 je uveden na obrázku 1.

Příklad 2

Forma I 5,6~dichlor-2-(isopropylamino)-1-3-L-ribofuranosyl-1 H-benzimidazolu • * ♦ · 9 • · · · · • · 9 9 • · · 9 • 9 9 «

99

Sloučenina vzorce I (1,5 g) se suspenduje ve vodě (30 ml) a zahřívá se za míchání na 65 °C. Po přibližně 0,5 hodině se míchání stává obtížným, jelikož se tvoří guma. Po dalším zahřívání se guma převede na tuhou látku, která ze rozdrtí špachtlí. Směs se zahřívá na 65 až 70 °C po dobu 9 hodin. Směs se ochladí na 20 °C a pevná látka se sebere filtrací a suší se ve vakuu při 40 °C po dobu 24 hodin a získá se forma I sloučeniny vzorce I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 2 je uveden na obrázku 1.

Příklad 3

Forma I 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (5 g) a voda (1,5 ml) se míchá a zahřívá v olejové lázni na 80 °C. Prášek se změní na gumu a míchání se ukončí. Zahřívání pokračuje 8 hodin. Pevná látka se uvolní špachtlí a příležitostně se míchá. Po ochlazení na 20 °C se pevná látka sebere a suší se ve vakuu při 40 °C po dobu 4 hodiny.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 3 je uveden na obrázku 1.

Příklad 4

Forma I 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (2 g) v toluenu (15 ml) se zahřívá při zpětném toku 19 hodin. Při zahřívání se suspenze změní na gumu, která dalším zahříváním tuhne. Pevná látka se sebere filtrací a suší se ve vakuu při 40 °C a získá se sloučenina vzorce I. Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 4 je uveden na obrázku 1.

Příklad 5

Příprava formy I z formy II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimidazolu

Forma II sloučeniny I (2 g) v toluenu (10 ml, 5 obj.) se zahřívá na 60 °C, kdy se začne pevná látka stávat lepivou vůči stěnám nádoby. Pokračujícím zahříváním na 95 °C se vytvoří olej. Zahřívání pokračuje na 105 °C, potom se přidá toluen (2,5 obj.) • · · · · ·»·« » »·» · * ······ • · » · · · · · »·» ·· ·»··»·· ·· ·· a zahřívání pokračuje. Zahřívání při zpětném toku pokračuje 3 hodiny za rychlého míchání. Teplota olejové lázně se sníží na 80 °C (vnitřní teplota 73 °C) a zahřívání pokračuje 3 hodiny za rychlého míchání. Směs se zahřívá opět při zpětném toku 16 hodin a potom se nechá ochladit na teplotu místnosti. Volná pevná látka se sebere filtrací a promyje se toluenem (2x5 ml) a suší se ve vakuu při 20 °C a ve vakuu při 40 °C se získá bílá pevná látka. Zbylá pevná látka se odstraní z nádoby, sebere se filtrací a suší se ve vakuu při 20 °C. Filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a získá se pevná látka.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 5 je uveden na obrázku 1.

Příklad 6

Příprava formy I z formy II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-p-L-ribofuranosyl-1Hbenzimidazolu

Forma II sloučeniny I (5 g) se míchá s vodou (1,5 ml) v olejové lázni při 80 °C.

Jakmile teplota lázně dosáhne okolo 60 °C, směs se obtížně míchá. Zahřívání pokračuje 8 hodin za příležitostného míchání a potom se směs ochladí ne teplotu místnosti. Tento materiál se suší ve vakuu při 40 °C po dobu 4 hodin.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 6 je uveden na obrázku 1.

Příklad 7

Forma II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-3-L-ribofuranosyl-1 H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (100 g) se přidá k míchané směsi toluen/methanol (4:1,440 ml) a zahřívá se na 65 °C, přičemž se získá čirý roztok. Roztok se čiří promýváním na filtru (toluen/methanol [4:1, 110 ml, teplý roztok]). Roztok se zahřeje zpětně na 65 °C a pomalu se přidá toluen (4,5 objem.), přičemž se vnitřní teplota udržuje nad 65 °C.

Po skončení přidávání se roztok ochladí na 40 °C během 1 hodiny a nechá se stárnout při teplotě 40 °C. Po 0,5 hodině se směs očkuje formou II sloučeniny I a nechá se stárnout další 4,5 hodiny. Suspenze se ochladí v průběhu 1 hodiny na 20 °C a nechá se stárnout při 20 °C po dobu 12 hodin a potom se ochladí v průběhu 1 hodiny na 5 °C a nechá se stárnout 3 hodiny. Pevná látka se sebere filtrací, promyje * · • · • ·· · w

• ·· ·· ···· ·· ··

9 9 · « · · · • · · « • · · · ·« ·· se toluenem (2 x 100 ml). Vlhký koláč se přenese do sušárny a suší se ve vakuu při 20 °C.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 7 je uveden na obrázku 2.

Příklad 8

Forma li 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (1,0 hmotn.) se rozpustí v ethylacetátu (6 objem.) a podrobí se závěrečné filtraci. Filtráty se koncentrují na přibližně 3 objemy. Předpokládaje úplnou výměnu rozpouštědel, roztok se rozředí 3,5 objemy methanolu. Přidá se voda (0,5 objem.) a roztok se ochladí na 0 až 5 °C. Krystalizace se očkuje malým množstvím čisté sloučeniny vzorce I a roztok se uchová při 0 až 5 °C po dobu 2 hodin. Produkt se filtruje (bez promývání) a suší se ve vakuu po dobu 24 až 48 hodin při teplotě okolí. Druhá část se získá odpařením filtrátu na polovinu objemu a následným ochlazením, očkováním a krystalizací podobným způsobem jak je uvedeno shora.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 8 je uveden na obrázku 2.

Příklad 9

Forma II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (10 g) se rozpustí v methanolu (20 ml) za zahřívání na 50 °C. Přidá se voda (5 ml) a směs se ochladí pomalu na 5 °C a míchá se při 5 °C po dobu 1 hodiny. Pevná látka se sebere filtrací a suší ve vakuu při 20 °C po dobu 15 hodin a při 40 °C po dobu 4 hodiny a získá se sloučenina vzorce I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 9 je uveden na obrázku 2.

Příklad 10

Příprava směsí 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I se může rozpustit v 2N kyselině chlorovodíkové (60 ml) a míchá se 0,5 hodiny a filtruje se. Filtrát se zahřívá na 60 °C a pomalu se přidá 2N hydroxid sodný (55 ml), přičemž se během přidávání udržuje vnitřní teplota mezi 60 a 70 °C.

* 9 • 9

9·· 9 • 99 «99 ····

99

9 9 9

9 · ·

99

Směs se míchá při 65 až 70 °C po dobu 2 hodin a potom se ochladí v průběhu 2 hodin na 20 °C. Pevná látka se sebere filtrací, promyje se vodou (2 x 30 ml) a suší se ve vakuu při 40 °C po dobu 16 hodin a získá se sloučenina vzorce I (8,8 g, 88 %).

Příklad 11

Ethanolát 5,6-dichlor-2-(isopropylamíno)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (1,0 hmotn.) se suspenduje ve směsi ethanol/voda (10,0 objem.) při 70 °C po dobu 2 hodin. Poměry ethanol/voda (objem./objem) byly následující: 10/90, 15/85, 20/80, 25/75 a 30/70. Vzniklý prášek se filtruje a suší se na vzduchu. Ethanolsolvát se získá podobným způsobem z roztoků ethanol/toluen (poměry 5/95, 10/90, 15/85, 20/80, 25/75 a 30/70).

Rekrystalizací sloučeniny vzorce I ze směsi ethanol/voda se získá ethanolsolvát obsahující 0,5 molů ethanolu na mol sloučeniny vzorce I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 11 je uveden na obrázku

3.

Příklad 12

Ethanolát 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazoiu

Sloučenina vzorce I (20 g) se přidá k míchané směsi toluen/ethanol (7:1, 200 ml) a zahřívá se při zpětném toku (81 °C) dokud se nezíská čirý roztok. Roztok se ochladí na 20 °C a ke krystalizaci dochází při teplotě přibližně 50 °C. Suspenze se ochladí na 0 až 5 °C a nechá se stárnout 2 hodiny. Pevná látka se sebere filtrací a promyje se toluenem (2 x 20 ml). Mokrý koláč se suší ve vakuu při 40 °C.

Rekrystalizací sloučeniny vzorce I ze směsi ethanol/toluen se získá ethanolsolvát obsahující 0,5 molů ethanolu na mol sloučeniny vzorce I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 12 je uveden na obrázku

3.

Příklad 13

Forma IV 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu • ·

Voda (300 ml) se přidá k formě I (4 g), jak se připravila v příkladu 1 a směs se míchá 20 minut. Směs se potom zahřívá na 50 °C po dobu 6 dnů a potom se ochladí na teplotu místnosti. Pevný, zrnitý krystalický materiál se filtruje a suší se ve vakuu při 60 °C.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 13 je uveden na obrázku

4.

Příklad 14

Forma V 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Sloučenina vzorce I (2,0 g) se přidá postupně během 2 hodin k vodě (40 ml) při teplotě 70 °C za intenzivního míchání. Směs se zahřívá na 65 až 70 °C dalších 7 hodin a potom se míchání a zahřívání přeruší. Směs se nechá stát 2,5 dne při teplotě okolí a potom se filtruje. Zrnitý bílý pevný zbytek se nechá sušit na vzduchu přes noc a získá se forma V sloučeniny vzorce I.

Rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 14 je uveden na obrázku

5.

Příklad 15

Forma VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu

Ethanolát sloučeniny vzorce I (200 mg) se naváží do malých lékovek. Do lékovek se vloží hydrostaty s roztoky nasyceného NaCI a přebytkem pevného NaCI. Lékovky se potom velmi dobře utěsní a skladují se při 80 °C. Vzorky se odstraní z lékovek a zahřívají se na 170 °C v diferenčním skanovacím kalorimetru (DSC) a poté se ochladí na teplotu místnosti. Prášek se sebere z misek DSC a analyzuje rentgenovou difrakcí.

Charakterizace: rentgenový práškový difrakční diagram produktu příkladu 15 (forma VI) je ukázán na obrázku 6. DSC termogram pro formu VI je zobrazen na obrázku 9. TGA termogram pro sloučeninu VI je zobrazen na obrázku 7. Isoterma sorpce vlhkosti pro formu VI je ukázána na obrázku 8.

Příklad 16 • · ···· · · · · 9 9 9 9 9 9 9 9

Konverze formy II 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1Hbenzimidazolu na formu VI

Okolo 200 mg formy II očkované 5 mg formy VI se suspenduje v 1 ml destilované vody a směs se míchá ve vodní lázni při 45 °C. Po 28 hodinách míchání se pevná látka zkoumá rentgenovou difrakcí. Výsledky rentgenové difrakce ukazují, že forma II byla úplně převedena na formu VI.

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 17

Konverze ethanolsolvátu 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1 Hbenzimidazolu na formu VI

Okolo 200 mg ethanolátu očkovaného 5 mg formy VI se suspenduje v 1 ml destilované vody a směs se míchá ve vodní lázni při 45 °C. Po 28 hodinách míchání se pevná látka zkoumá rentgenovou difrakcí. Výsledky rentgenové difrakce ukazují, že ethanolsolvát vzorce I byl úplně převeden na formu VI:

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 18

Konverze ethanolsolvátu 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(beta-L-ribofuranosyl)-l Hbenzimidazolu na formu VI g ethanolátu očkovaného 100 mg formy VI připravené ve shora uvedené konverzi se suspenduje v 50 ml destilované vody při 45 °C. Po 5 hodinách se veškerý ethanolát konvertuje na formu VI, jak bylo stanoveno rentgenovou difrakcí. Pevná látka se sebere filtrací, promyje se vodou (3x5 ml) a suší se ve vakuové sušárně při 100 °C po dobu 3 hodin.

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 19

Konverze ethanolsolvátu 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1 Hbenzimidazolu na formu VI «·· ♦ • ·

Vzorky ethanolátu skladované při 80 °C/50% relativní vlhkosti (RH), 60 °C/75% RH, 60 °C/50% RH a 40 °C/75% RH při uzavřených podmínkách po dobu 2 měsíců se také částečně nebo úplně převedou na formu VI.

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 20

Příprava formy VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1 Hbenzimidazolu očkováním

Roztok 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -(beta-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazolu (10 g) v ethylacetátu (25 ml) a toluenu (30 ml) se očkuje formou VI 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu (100 mg). Směs se zahřívá na 50 °C po dobu 3 hodin za vzniku suspenze. Potom se přidá během 30 minut toluen (70 ml). Suspenze se ochladí na 25 °C a nechá se stárnout při 25 °C po dobu 2 hodin. Pevná látka se sebere filtrací, promyje se směsí ethylacetát/toluen (1:4, 20 ml). Pevná látka se suší ve vakuu při 40 °C a získá se forma VI 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-l -(beta-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazolu

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 21

Příprava formy VI 5,6-dichlor-2-(lsopropylamino)-1-(beta-L-ribofuranosyl)-1Hbenzimidazolu rekrystalizací ze směsi ethylacetát/toluen

Hydroxid sodný (2M, 1790 ml) se přidá ke kaši 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1(2,3,5-tri-O-acetyl-beta-L-ribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu (358 g) v TMBE (1790 ml) obsahující methanol (179 ml). Směs se míchá při 25 až 30 °C dokud není reakce kompletní. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se dále extrahuje s TBME (716 ml). Spojené organické roztoky se promyjí 10% solankou (2 x 1790 ml). Organický roztok se koncentruje za sníženého tlaku na okolo 2,5 objemu (895 ml). Přidá se ethylacetát (2864 ml) a roztok se opět koncentruje na 2,5 objemu. Roztok se ochladí na 40 až 50 °C a vzniklý roztok se čiří, promyje se ethylacetátem (716 ml). Čirý roztok se koncentruje za sníženého tlaku na 3,3 objemu (1180 ml).

• 9

9 · 9 9 9

9·«·99

9 9 9 9 9

9999999 99 99

Roztok se zahřívá na 60 °C. Toluen (3000 ml) se zahřeje na 60 °C a přidá se během 1 hodiny k ethylacetátovému roztoku. Vzniklá směs se nechá stárnout při 60 °C přes noc a potom se ochladí na 0 až 5 °C během 1 hodiny a nechá se stárnout při 0,5 °C po dobu 2 hodin. Kaše se filtruje, promyje se směsí ethylacetát:toluen 1:4 (2 x 716 ml) a suší se ve vakuu při 40 °C po dobu 18 hodin a získá se forma VI 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-l -(beta-L-ribofuranosyl)-l H-benzimidazolu.

Charakterizace: jako v příkladu 15.

Příklad 22

Experimentální metody pro charakterizaci formy VI

Diferenční skanovací kalorimetrie a termogravimetrický analyzátor

Diferenční skanovací kalorimetrie (DSC) se provede na diferenčním skanovaoím kalorimetru TA Instruments DSC 2920 opatřeném automatizovaným vzorkovačem. Vzorky 1 až 3 mg se vloží do standardních hliníkových misek s otvory a zahřívají se na 25 °C až 250 °C při rychlosti 10 °C/minutu za proplachování dusíkem. Procenta celkové ztráty hmotnosti léčivé látky se stanoví na termogravimetrickém analyzátoru (TGA) TA Instruments Hi-Res TGA 2950 při proplachování dusíkem.

Rentgenová prášková difrakce

Rentgenový práškový difrakční diagram se určí na difraktometru Philips X'Pert MPD opatřeném grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi a automatickou divergenční štěrbinou. Difraktometr pracuje při použití skanu 0,04 ⁰ na krok a dobou 1 sekundy na krok. Jako detektor se použije proporcionální čítač s grafitovým monochromátorem. Vzorky se plní do držáku o průměru 16 mm mající tloušťku okolo 2,0 mm. Rentgenové práškové difrakční diagramy forem I, II, IV, V, VI a ethanolátu jsou uvedeny na obrázcích 1,2, 4, 5, 6 a

3. Byla získány následující hodnoty úhlů 2 theta, d-mezirovinných vzdáleností, relativních intenzit a Millerových indexů:

• · «9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 99 99 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99

Tabulka 1: Rentgenová prášková difrakce formy VI 1263W94

2 theta (°)¹	A²	I	h^J	k³	l^J
8,53	10,36	14,5	0	0	4
10,47	8,45	25,6	1	0	2
12,80	6,91	16,8	0	0	6
14,16	6,25	16,4	1	1	2
13,51	6,55	21,4	1	1	0
14,95	5,92	60,4	1	1	3
15,98	5,54	26,2	1	1	4
17,23	5,14	100,0	1	1	5
19,25	4,61	19,3	2	0	1
21,41	4,15	26,5	2	1	0
21,83	4,07	60,4	2	1	2
22,35	3,97	38,3	2	1	3
23,07	3,85	48,7	2	1·	4
27,49	3,24	30,9	2	1	8
30,11	2,97	18,5	2	2	6
¹ Tolerance c	nyby je přibližně ±0,5 stupňů.

² Tolerance chyby je přibližně ±0,5 A.

³ Millerovy indexy h, k a I shora jsou použity k jednoznačné definici sad paralelních rovin v krystalu.

Sorpce vlhkosti

Studie sorpce/desorpce vlhkosti se provedly na VTI vakuových váhách při 25 °C po vysušení vzorku při 60 ⁰ ve vakuu. Absorpce vlhkosti se pozoruje ve vakuu od 0 do 95 % relativní vlhkosti a desorpce se pozoruje při relativní vlhkosti od 95 % do 5 %. Kritéria pro rovnováhu při dané relativní vlhkosti byla menší než 3 pg změny hmotnosti během 18 minut.

Monokrystalová rentgenová difrakce

Krystalická struktura monokrystalu formy 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-(beta-Lribofuranosyl)-1 H-benzimidazolu se stanoví za použití monokrystalové rentgenové difrakce. Data monokrystalové rentgenové difrakce se určí na difraktometru Brucker AXS SMART opatřeném grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití • · • ·* · rentgenového záření Κα molybdenu (lambda = 0,71071 A) při 160K. Stanovením jednotkových buněčných parametrů a prostorové skupiny bylo zjištěno, že jde o tetragonální krystalový systém, P4(3)2(1)2, s a = b = 9,1542, c = 41,687 (jednotky a, b, c v angstromech) a alfa = beta = gama = 90 stupňů. Parametry základní buňky za normálních podmínek, a = b = 9,2794, c = 41,593 (jednotky a, b, c v angstromech) a alfa = beta = gama = 90,000 stupňů se vypočtou zaznamenáním rentgenového záření práškového vzorku.

Za použití dat atomových koordinát monokrystalu a parametrů základní buňky ze zaznamenání experimentálního práškového vzorku se vypočte rentgenová prášková difrakce vzorku. Rentgenová difrakce vzorku pro monokrystal formy VI 1263W94 je uvedena na obrázku 10. 15 nejintenzivnějších vrcholů od 2 do 35 dvou theta jsou uvedeny dále v hodnotách úhlů 2 theta, d-mezirovinného prostoru, relativní intenzity a Millerových indexů.

Tabulka 2: Vypočtená prášková rentgenová difrakce vzorku založená na monokrystalové rentgenové difrakci formy VI 1263W94

2 theta (°)¹	A²	I	h^J	k^J	P
17,21	5,15	100,0	1	1	5
21,82	4,07	57,4	2	1	2
23,06	3,85	53,2	2	1	4
14,93	5,93	51,4	1	1	3
22,34	3,98	39,9	2	1	3
10,43	8,47	29,2	1	0	2
12,78	6,92	22,2	1	0	4
8,50	10,40	21,3	0	0	4
15,96	5,55	19,2	1	1	4
30,11	2,97	17,8	2	2	6
32,61	2,74	17,7	3	0	7
19,23	4,61	17,6	2	0	1
21,39	4,15	17,1	2	1	0
17,71	5,0	15,5	1	0	7
13,48	6,56	15,5	1	1	0
¹ Tolerance c	hyby je přibližně ±0,5 stupňů.

² Tolerance chyby je přibližně ±0,5 A.

• · ··· · · ···· « ···· · · · · · · ·

9A · · ·· · * · · é-kj ··· C· ······· ·· ·9 ³ Millerovy indexy h, k a I shora jsou použity k jednoznačné definici sad paralelních rovin v krystalu.

Hodnoty 2 theta odvozené od dat monokrystalu uvedené v grafu se liší od hodnot zjištěné experimentální práškové difrakce uvedené shora zejména v důsledku chyb při přípravě vzorku, jako je chyba při přemisťování vzorku, malé chyby při seřízení difraktometru a variace v metodě stanovení vrcholu počítačem. Relativní intenzita vrcholů ve vypočteném vzorku je způsobena nejen daty vstupního monokrystalu, ale také profilem vrcholu (tvar a rozšíření) používaných při výpočtu umělého práškového vzorku.

Příklad 23: Formulace tablet

Následující formulace se připravily za použití formy VI sloučeniny vzorce I

Formulace A

Tablety 1263W94 (forma VI)

Přímé stlačování

Účinnost	100 mo	400 mq
Složky jádra
1263W94 (aktivní)	100,0²	400,0³
Mikrokrystalická celulóza, NF	93,5	374,0
Crospovidon, NF	4,0	16,0
Koloidní oxid křemičitý, NF	-	0,4
Stearát hořečnatý, NF	2,5	10,0
Celkem (jádro)	200,0 mg	800,4 mg
Složky povlaku
Opadry White YS-1 -18034	6,0	24,0
Čištěná voda USP¹	QS	QS
Celkem (jádro)	206,0 mg	824,4 mg

Teoretická velikost vsázky (jádra) • ·

	27	• ·· · ·· · · · · «« v · ♦ · · · · · · · • · · · · · · · * ··· · · · « Ϊ · · · « · · · 1··· • · · · · ···*··· «· ··
kg	15,0	33,0
tablety	75000	41254

¹ Odstraněno během zpracování ² Ekvivalentní 100 mg 1263W94 na tabletu ³ Ekvivalentní 400 mg 1263W94 na tabletu

Výrobní postup pro přímé stlačování

Všechny složky se prosejí, kromě stearátu horečnatého za použití síta 20 až 30 mesh. Všechny složky se smísí, kromě síranu hořečnatého, dokud není směs stejnorodá. Stearát hořečnatý se proseje jak je uvedeno shora a přidá se k ostatním složkám a promísí. Tablety se lisují za použití rotačního lisu. Připraví se10% povlaková suspenze smísením Opadry s vodou. Tablety se povlečou tak, že obsah povlaku činí 3 % hmotnosti.

Formulace B

Tablety 1263W94 (forma VI)

Granulace za vlhka

Účinnost	100 mq	400 mq
Složky jádra
1263W94 (aktivní)	102,0²	408,0³
Bezvodá laktóza	60,0	240,0
Mikrokrystalická celulóza, NF	20,0	80,0
Crospovidon, NF	15,0	60,0
Povidon, USP, K30	7,5	30,0
Stearát hořečnatý, NF	0,6	2,4
Čištěná voda USP¹	QS	QS
Celkem (jádro)	205,1 mg	816,0 mg
Složky povlaku
Opadry White YS-1 -18034	6,0	24,0
Čištěná voda USP¹	QS	QS

444 4 « · · · 4 4 * « 4 4 4 · • <444 « 4 4 4 4 4 • 4 44 4444 «44 44 4444444 ·4 44

Celkem (jádro) 211,1 mg 840,0 mg

Teoretická velikost vsázky (jádra) kg 0,718 tablety 3500 ¹ Odstraněno během zpracování ² Ekvivalentní 100 mg 1263W94 na tabletu ³ Ekvivalentní 400 mg 1263W94 na tabletu

Formulace B-1

Tablety 1263W94 (forma VI)

Granulace za vlhka

Účinnost_400 mg

Složky jádra

1263W94 (aktivní)	400,0²
Mikrokrystalická celulóza	298,0
Laktóza, vodná	60,0
Crospovidon, NF	24,0
Povidon, USP	12,0
Stearát hořečnatý, NF	2,0
Čištěná voda USP¹	QS
Celkem (jádro)	816,0 mg
Složky povlaku
Opadry White YS-1-18034	24,0
Čištěná voda USP¹	QS
Celkem (jádro)	820,0 mg

¹ Odstraněno během zpracování ² Ekvivalentní 400 mg 1263W94 na tabletu *· « · • · ··· · · « · · · • · · · · • · · · · • · · · · · • » » · ·

Výrobní postup pro granulaci za vlhka

Složky pro granule se prosejí za použití síta 20 až 30 mesh. Všechny složky se smísí ve vysokostřihovém granulátoru a potom se granulují ve vysokostřihovém granulátoru za použití čištěné vody. Granule se suší na ztrátu sušením méně než 2 %. Granule se prosejí jako shora. Granule se smísí se zbývajícími složkami. Tablety se lisují za použití rotačního lisu. Připraví se 10% povlaková suspenze smísením Opadry s vodou. Tablety se povlečou tak, že obsah povlaku činí 3 % hmotnosti.

Příklad 24: Formulace kapslí

Následující formulace se může připravit za použití sloučeniny vzorce I formy VI.

Kapsle 1263W94 (forma VI)

Účinnost _100 mg

Pnící složky pro kapsli

1263W94 (aktivní) 101,0¹

Laktóza, bezvodá NF 232,0

Crospovidon, NF 17,0

Stearát hořečnatý, NF 1,0

Celková plnící hmotnost 351,0 mg

Pouzdro kapsle

Želatina, neprůhledný čepeček 81,1 a těleso

Celková hmotnost 432,5 mg ¹ Ekvivalentní 100 mg 1263W94 na tabletu

Výrobní postup pro kapsle

999 9

Plnící složky kapsle se smísí za použití třecí misky a tloučku geometrickým ředěním. Kombinované plnící složky pro kapsle se plní ručně do želatinových kapslí. Kapsle se uzavřou ručně.

Příklad 25: Formulace orálního roztoku

Orální roztok 1263W94 (připraven za použití sloučeniny VI)

Účinnost_30 mg/ml

Složky na 100 ml

1263W04 3,0 g

Kyselina citrónová, bezvodá 0,3 g

Kyselina chlorovodíková 1N 6,9 ml

Propylenglykol USP 20,0 ml

Čištěná voda USP 20,0 ml

Kyselina chlorovodíková 1N QS

Roztok sorbitolu (60% hmotn./objem.) 50,0 ml Čištěná voda USP QS

Celkový objem 100,0 ml

Výrobní postup orální roztok

Propylenglykol, voda a kyselina chlorovodíková (6,9 ml) se důkladně smísí. Přidá se kyselina citrónová a směs se míchá, dokud se kyselina citrónová nerozpustí. Přidá se aktivní složka a rozpustí se mícháním. Pokud je to nezbytné, upraví se pH přidáním 1N kyseliny chlorovodíkové nebo 1N hydroxidu sodného na hodnotu mezi 2,0 a 2,5. Přidá se sorbitol a důkladně se směs promísí. Přidáním vody se konečný objem upraví na 100 ml.

Příklad 26: Formulace orální suspenze

• 4 ··

Orální suspenze 1263W94 (forma VI)

Účinnost

Složky

1263W94 (aktivní)

Sacharóza Propylenglykol Chlorid sodný Kyselina citrónová Citrát sodný

Mikrokrystalická celulóza a Karboxymethylcelulóza sodná Karboxymethylcelulóza sodná Polysorbát 80

Benzoát sodný

Methylparaben

Aromát

Barvivo

Čištěná voda USP Celkový objem mg/ml na 100 ml 3,0 g 50,0 g 5,0 g 0,5 g QS QS 2,5 g

0,25 g 0,2 g 0,1 g 0,1 g 0,2 ml 0,005 g QS

100,0 ml

Výrobní postup pro orální roztok

Sacharóza se rozpustí v čištěné vodě na přibližně 70 % objemu celkové vsázky. Za kontinuálního míchání se přidá chlorid sodný, kyselina citrónová citrát sodný a benzoát sodný a složky se rozpustí. Je-li to nezbytné, upraví se pH přidáním dostatečného množství kyseliny citrónové nebo citrátu sodného na hodnotu mezi 5,0 a 6,0. Za míchání se přidá mikrokrystalická celulóza a karboxymethylcelulóza sodná (Avicel RC 591) a míchání pokračuje dokud není směs stejnorodá a vznikne jemná disperze. Za míchání se přidá polysorbát 80. V oddělené nádobě se rozpustí methylparaben v propylenglykolu a disperguje se karboxymethylcelulóza sodná (0,25 g) a tato kapalina se přidá za míchání k objemové suspenzi. Za kontinuálního míchání se postupně disperguje aktivní složka v objemové kapalině za získání stejnorodé disperze. Přidá se aromát a barvivo a objem se upraví přidáním vody na

100 ml. Suspenze se potom homogenizuje převedením přes čerpadlo a koloidní mlýn.

Shora uvedené příklady mají pouze ilustrativní charakter a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu. Vynález je definován následujícími nároky, včetně jejich ekvivalentů.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Forma VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu, vyznačující se rentgenovým práškovým difrakčním diagramem vyjádřeným v úhlech 2 theta a získaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi, kde uvedený rentgenový práškový difrakční diagram zahrnuje 2 theta úhel při 8,53 ±0,05 stupňů.
2. Forma VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu, vyznačující se v podstatě stejným rentgenovým práškovým difrakčním diagramem jak je uveden na obrázku 6, kde uvedený rentgenový práškový difrakční diagram se získá difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka.
3. Krystalická forma 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimidazolu, vyznačující se rentgenovým práškovým difrakčním diagramem vyjádřeným v úhlech 2 theta a získaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi, kde uvedený rentgenový práškový difrakční diagram zahrnuje 2 theta úhly v polohách vybraných ze skupiny zahrnující 8,53 ±0,05, 10,47 ±0,05, 13,51 ±0,05, 14,95 ±0,05, 15,98 ±0,05, 17,23 ±0,05,21,41 ±0,05, 21,83 ±0,05, 22,35 ±0,05, 23,07 ±0,05 a 27,49 ±0,05 stupňů.

4. Krystalická forma 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimidazolu, vyznačující se rentgenovým práškovým difrakčním diagramem vyjádřeným v úhlech 2 theta a relativních intenzitách vrcholů (I) a získaným difraktometrem opatřeným grafitovým monochromátorem s difrakcí paprsků za použití rentgenového záření Ka mědi:

9 9 «

J * • * »9 9 99 · ·· · *

9»

úhel 2 theta (°)¹ I 8,53±0,05 14,5 10,47±0,05 25,6 12,80±0,05 16,8 14,16±0,05 16,4 13,51+0,05 21,4 14,95±0,05 60,4 15,98±0,05 26,2 17,23±0,05 100,0 19,25±0,05 19,3 21,41 ±0,05 26,5 21,83±0,05 60,4 22,35±0,05 38,3 23,07±0,05 48,7 27,49±0,05 30,9 30,11±0,05 18,5

5. Prostředek, vyznačující se tím, že zahrnuje formu VI 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-l-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 a amorfní 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazol.
6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že zahrnuje krystalickou formu sloučeniny nárokované v kterémkoliv z nároků 1 až 4 a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič.
7. 5,6-Dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazol jak je nárokován v kterémkoliv z nároků 1 až 4 po použití v lékařství.
8. Použití 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu jak je nárokován v kterémkoliv z nároků 1 až 4 pro přípravu léčiva pro léčbu nebo profylaxi virové infekce.
9. Způsob léčby nebo profylaxe virové nemoci u lidí, vyznačující se tím, že se podá člověku účiné antivirové množství krystalického 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-l -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu jak je nárokován v kterémkoliv z nároků 1 až 4.

• ···» * · ♦ 9 · w · • · · · · * ♦ ♦ • · « »· ····««* ·· «4
10. Způsob přípravy 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimidazolu jak je nárokován v kterémkoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se t í m, že zahrnuje přidání formy VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-p-L-ribofuranosyl1 H-benzimidazolu k vodné suspenzi formy II nebo k vodné suspenzi ethanolsolvátu 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu.
11. Způsob přípravy 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimidazolu v bezvodé krystalické formě VI, v y z n a č u j í c í se t í m, že postup zahrnuje následující kroky:

a) poskytnutí 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu v roztoku buď ve formě volné báze nebo ve formě soli;

b) izolaci 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu z roztoku a případně odstranění nenavázaného rozpouštědla, za získání 5,6-dichlor2-(isopropylamino)-1-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu v podstatě suché formě;

c) zpracování 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu solubilizačním činidlem, které slouží pro přeměnu případně suchého 5,6-dichlor-2(isopropylamino)-l-β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu na bezvodou krystalickou formu VI 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l H-benzimidazolu ; a

d) izolaci uvedené bezvodé krystalické formy VI.
12. Způsob přípravy 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1 -β-L-ribofuranosyl-l Hbenzimídazolu jak je nárokován v kterémkoliv z nároku 1 až 4, vyznačující se t í m, že zahrnuje krystalizaci 5,6-dichlor-2-(isopropylamino)-1-p-L-ribofuranosyl1 H-benzimidazolu z roztoku ethalacetátu a toluenu.
13. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, v y z n a č u j í c í se t í m, že je v práškové formě.
14. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující formě tablety.

se t í m, že je ve
15. Farmaceutický prostředek podíe nároku 6, vyznačující se formě kapsle.