CZ147098A3

CZ147098A3 - Hemoregulačně účinná sloučenina

Info

Publication number: CZ147098A3
Application number: CZ981470A
Authority: CZ
Inventors: Pradip Kumar Bhatnagar; Dirk Andries Heerding; James Francis Callahan; Michael Hartmann; Johann Hiebl; Peter Kremminger; Franz Rovenszky
Original assignee: Smithkline Beecham Corporation; Nycomed Austria Gmbh
Priority date: 1995-11-13
Filing date: 1996-11-12
Publication date: 1999-02-17
Also published as: WO1997017964A1; TR199800850T2; AU711239B2; NO982151L; NO982151D0; JP2000500751A; CN1209061A; NZ323207A; PL326631A1; IL124354A0; BR9611520A; EP0861077A1; DE69619123D1; EP0861077A4; AU7728296A; ATE212839T1; NO310656B1; KR19990067506A; EP0861077B1

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových sloučenin, které mají hemoregulační účinky a mohou být použity pro stimulaci krvetvorby a pro léčbu virových, plísňových a bakteriálních infekčních onemocnění.

Dosavadní stav techniky

Krvetvorný systém zajištuje celoživotní průběh obnovy buněk, při kterém definovaná populace kmenových buněk poskytuje větší populaci různých zralých krevních buněk [Dexter T.

M., Stem cells in normál growth and disease, Br. Med. J., 195, 1192-1194 (1987)] nejméně devíti různých buněčných linií (erytrocyty, destičky, eosinofily, basofily, neutrofily, monocyty/makrofágy, osteoklasty a lymfocyty) [Metcalf D., The Molecular Control of Blood Cells, 1988, Harvard University Press, Cambridge, MA]. Kmenové buňky jsou též rozhodujícím způsobem odpovědné za regeneraci kostní dřeně po léčbě cytotoxickými prostředky nebo po transplantaci kostní dřeně.

Značné toxicity omezující dávku většiny standardních antineoplastických léků se týkají útlumu kostní dřeně, který, pokud je závažný a dlouho trvající, může způsobit infekční a krvácivé komplikace ohrožující život. Útlum kostní dřeně lze předvídat a uvádí se, že omezuje použitou dávku u více než 50 % jednosložkových látek, které jsou cytotoxické ve fázi zkoušek I [(Merrouche Y., Catimel G., Glavel M., Hematopoietic growth factors and chemoprotectants, should we move toward a two-step process for phase I clinical trials in oncology?, Ann. Oncol., 4, 471-474 (1993)]. Riziko infekce se přímo týká stupně útlumu dřeně hodnoceného podle závažnosti a trvání neutropenie [Brody G. P., Buckley M., Sathe Y. S., Freireich E. J., Quantitative relationship between circulating leukocytes and infections with acute leukemia, Ann. In. Med., 64, 328-334 (1965)].

Řízení krvetvorby zahrnuje vzájemnou souhru řady cytokinů a růstových faktorů během různých stádií kaskády krvetvorby včetně časných pluripotentních kmenových buněk a zralých cirkulujících efektorových buněk. Tyto regulační molekuly zahrnují faktor stimulující kolonie granulocytů (G-CSF), faktor stimulující granulocyty-makrofágy (GM-CSF), faktor stimulující kolonie makrofágů (M-CSF) a řadu interleukinů, které mají překrývající se aditivní a synergní účinky hrající hlavní role při obraně hostitele. Mechanisticky se toto umožňuje zvýšením tvorby granulocytů a makrofágů stejně tak jako aktivací funkcí efektorových buněk [Moore M. A. S., Hemopoietic growth factor interactions: in vitro and in vivo preclinical evaluation, Cancer Surveys, 9., 7-80 (1990)]. Tyto koordinované účinky podporují obranu hostitele při boji s bakteriálními, virovými a plísňovými infekcemi.

Strategie pro zabránění či snížení závažnosti neutropenie a myelotoxicity zahrnují použití krvetvorných růstových faktorů a/nebo jiných krvetvorných cytokinů. Tyto způsoby léčby se stávají běžnou praxí v tom smyslu, že nabízejí možnost použití zvýšených dávek cytotoxických prostředků, které mohou zlepšovat terapeutickou účinnost antineoplastických látek a snižovat morbiditu spojenou s jejich použitím [Steward W. P., Granulocyte and granulocyte-macrophage colo ny stimulating factors, Lancet, 342, 153-157 (1993)]. Klinické studie ukázaly, že G-, GM- a/nebo M-CSF mohou zkracovat trvání neutropenie, zrychlovat obnovu kostní dřeně a snižovat infekce spojené s neutropenií a ostatní infekční komplikace u nemocných se zhoubnými onemocněními, kteří dostávají cytotoxickou chemoterapii nebo u nemocných s vysokým rizikem infekce po transplantaci kostní dřeně [Steward W. P. , Granulocyte and granulocyte-macrophage colony stimulating factors, Lancet, 342, 153-157 (1993) a Munn D. H., Cheung N. K. V. , Preclinical and clinical studies of macrophage colony-stimulating factor, Semin. Oncol., 19, 395-407 (1992) ] .

Uvádí se, že syntetické peptidy indukují syntézu a uvolňování krvetvorných mediátorů včetně M-CSF z elementů stromatu kostní dřeně, viz US patentová přihláška č. 08/001 905.

Nyní jsme nalezli určité nepeptidové sloučeniny, které mají stimulační účinky na myelopoetické buňky. Jsou použitelné při stimulaci myelopoezy u nemocných trpících sníženou myelopoetickou aktivitou včetně poškození kostní dřeně, agranulocytózy a aplastické anémie včetně pacientů s útlumem funkce kostní dřeně následkem imunosupresivní léčby pro potlačení tkáňových reakcí, to jest při chirurgické transplantaci kostní dřeně. Mohou se též použít pro podporu rychlejší regenerace kostní dřeně po chemoterapii cytostatiky a po radiační terapii při neoplastických a virových onemocněních. Mohou být zvláště cenné v případě závažných infekcí pacientů následkem nedostatečné imunitní odpovědi po selhání funkce kostní dřeně. Jsou též použitelné při léčbě a prevenci virových, plísňových a bakteriálních onemocnění.

- 4 ·· ·

Podstata vynálezu

Tento vynález zahrnuje sloučeniny, které jsou dále vyjádřeny obecným vzorcem I, které mají hemoregulační účinky, a které mohou být použity pro stimulaci krvetvorby a při prevenci a léčbě bakteriálních, virových a plísňových onemocnění.

Tyto sloučeniny jsou použitelné při obnově leukocytů u nemocných se sníženým počtem krvinek následkem různých klinických situací, jako je chirurgicky indukovaný útlum kostní dřeně, AIDS, ARDS, kongenitální myelodysplasie, transplantace kostní dřeně a orgánů, při ochraně nemocných s leukopénií před infekcí, při léčbě závažně popálených nemocných a při zlepšování útlumu kostní dřeně pozorovaného při použití určitých antivirových prostředků specifických pro buněčný cyklus a při léčbě infekcí u pacientů po transplantacích kostní dřeně, zejména u takových, kteří trpí chorobou na základě reakce štěpu proti příjemci, při léčbě tuberkulózy a při léčbě horeček neznámého původu u lidí a zvířat. Tyto sloučeniny jsou též použitelné při léčbě a prevenci virových, plísňových a bakteriálních infekčních onemocnění, zejména kandidózy a herpetitického onemocnění u jedinců s imunosupresí i u normálních subjektů. Jsou použitelné v léčbě sepse způsobené gramnegativními a grampozitivními organismy.

Tyto sloučeniny se mohou též použít v kombinaci s myelosupresivními prostředky současně podávané US patentové přihlášky č. 07/799 465 a US patentu č. 4 499 081, které se zde uvádějí formou odkazu, pro zajištění střídání vrcholů vysoké a nízké aktivity v buňkách kostní dřeně, čímž se zesiluje přirozený denní rytmus krvetvorby. Tímto způsobem

- 5 může být cytostatická terapie podávána v obdobích nízké aktivity kostní dřeně, čímž se snižuje riziko poškození kostní dřeně, přičemž regenerace se podporuje v následném vrcholu aktivity. Předmětem tohoto vynálezu je též farmaceutický prostředek, který zahrnuje sloučeninu obecného vzorce II a farmaceuticky přijatelnou nosnou látku.

Tento vynález dále poskytuje způsob stimulace myelopoetického systému živočicha včetně člověka, při kterém se živočichovi, který tuto léčbu potřebuje, podává účinné množství sloučeniny obecného vzorce I.

Tento vynález též tvoří způsob prevence a léčby virových, plísňových a bakteriálních infekcí u živočichů včetně lidí s potlačenou imunitou i u normálních jedinců, která zahrnuje podávání živočichovi, který tuto léčbu potřebuje, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Tento vynález dále tvoří způsob prevence a léčby sepse způsobené grampozitivními a gramnegativními organismy u živočichů včetně člověka, který zahrnuje podávání živočichovi, který potřebuje tuto prevenci či léčbu, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Vynález se podrobně popisuje níže.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu představuje strukturní obecný vzorec I

(I) ve kterém

Rj_ je nezávisle na sobě 4- až 10-členný mono- či bicyklický heterocyklický kruhový systém obsahující až čtyři heteroatomy dusíku, kyslíku, síry v kruhu, ve kterém nejméně jedním heteroatomem je atom dusíku a tento kruh je substituován nebo nesubstituován jednou nebo dvěma C_1-4 alkylovými skupinami, atomy fluoru, chloru, bromu, jodu, Cj__₄ alkoxyskupinami, skupinami -(CH₂)_mR₆, oxoskupinami, skupinami oximu, -0-C₁_₄ alkyloximu, hydroxyskupinami, skupinami -N(R₅)2/ acylaminoskupinami nebo aminoacylovými skupinami, s vyloučením 8-, 9- a 10-členných monocyklických kruhových systémů,

R₂ je nezávisle atom vodíku, skupina (C_1-4 alkyl)-C(O)R₆, C_1-4 alkylová skupina nebo je R₂ benzylová skupina, která může být popřípadě substituovaná jednou či dvěma C_1-4 alkylovými skupinami, C_1-4alkoxyskupinami, atomy fluoru, chloru, jodu, bromu, hydroxyskupinami nebo skupinami -N(R₅)₂,

Y je -(CH₂)_n-, ve kterém je nejméně jeden atom uhlíku geminálně substituován substituenty R₃ a R₄,

R₃ a R₄ jsou nezávisle na sobě C-j__₄ alkylová skupina, C₂_₄alkenylová skupina, C₂_₄ alkinylová skupina, které

- 7 mohou být všechny substituovány jednou či dvěma C_x_₄alkylovými skupinami, hydroxyskupinami, atomy fluoru, chloru, bromu, jodu, skupinami -N(R₅)₂, (R₅)₂NC(O)-, -(CH₂)_mR₆, -(CH₂)_mR₅, - (CH) ₂ ) jjjCORg nebo - (CH₂ )_mC(0 )R₅ , nebo r₃ a R₄ jsou atomy fluoru, chrómu či bromu, nebo

R₃ a R₄ mohou společně tvořit cyklický či heterocyklický kruh obecného vzorce Ia

X / \ (ch,)_b (cty, \ / (Ia) ve kterém p a q jsou nezávisle celá čísla od nuly do 3,

X je atom kyslíku, síry, -CH₂~ nebo -N(R₅)~,

R₅ je nezávisle atom vodíku, C_1-4 alkylová skupina nebo benzylová skupina,

R₆ je nezávisle skupina -0R₅, -N(R₅)₂ nebo -SR₅ a n je celé číslo od 3 do 8, m je celé číslo od 0 do 4,

- 8 nebo farmaceuticky přijatelná sůl této sloučeniny, s podmínkou, že p a q nejsou současně 0 a jestliže R₃ a R₄ jsou atomy fluoru, chloru či bromu, nejsou připojeny na uhlík přilehlý k dusíku.

^cl-4 alkylové skupiny mohou být přímé nebo rozvětvené.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více asymetrických atomů uhlíku a mohou existovat v racemické i opticky aktivní formě. Všechny tyto sloučeniny a diastereomery jsou uvažovány v rámci tohoto vynálezu.

R-L v obecném vzorci I výše označuje případně substituovanou pyrrolylovou skupinu, isopyrrolylovou skupinu, pyrazolylovou skupinu, isoimidazolylovou skupinu, triazolylovou skupinu, isoxazolylovou skupinu, oxazolylovou skupinu, thiazolylovou skupinu, isothiazolylovou skupinu, oxadiazolylovou skupinu, pyridylovou skupinu, pyridazinylovou skupinu, pyrimidinylovou skupinu, pyrazinylovou skupinu, pyrrolidinylovou skupinu, piperazinylovou skupinu, triazinylovou skupinu, morfolinylovou skupinu, indolylovou skupinu, indoleninylovou skupinu, isobenzazolylovou skupinu, isoindazolylovou skupinu, indoxazinylovou skupinu, benzoxazolylovou skupinu, chinolylovou skupinu, isochinolylovou skupinu, cinnolinylovou skupinu, chinazolinylovou skupinu, naftyridinylovou skupinu, pyridopyridylovou skupinu, tetrahydrochinolylovou skupinu, tetrahydroisochinolylovou skupinu, chinoxalinylovou skupinu, indolinylovou skupinu, 2-pyrrolidonylovou sku-

pinu, imidazolylovou skupinu, imidazolidinylovou skupinu, imidazolinylovou skupinu, piperidylovou skupinu, tetrazolylovou skupinu, chinuklidinylovou skupinu, azetidinylovou skupinu nebo purinylovou skupinu.

Preferovanými sloučeninami jsou ty, ve kterých je R₁pyridylová skupina, pyrimidinylová skupina, pyrazinylová skupina, pyridazinylová skupina, chinolylová skupina, tetrahydrochinolylová skupina, azetidinylová skupina nebo pyrrolidinylová skupina, n je 3 až 5, R₃ a R₄ jsou C-|__₄alkylové skupiny, substituované C_1-4 alkylovou skupinou, hydroxyskupinou, skupinou -N(R₅)^2· ^-^^CH2^m^R6 ^nebo-(CH₂)_mC(O)R₅, nebo mohou R₃ a R₄ vytvářet společně cyklický či heterocyklický kruh obecného vzorce Ia, ve kterém X je atom kyslíku, síry nebo skupina -CH₂-, a p a q jsou 1 až 3, R₅ je atom vodíku nebo C-|__₄ alkylová skupina a Rg je skupina —ORg nebo N(Rg) ·

Ještě výhodnějšími skupinami jsou ty, ve kterých R-j_ je 2-pyridylová skupina, 2-pyrimidinylová skupina,

2-pyrazinylová skupina, 2-pyrrolidon-5-ylová skupina nebo

2-pyrrolidinylová skupina, n je 3 nebo 5, R₃ a R₄ jsou 0_1-2alkylová skupina, substituovaná 0_1-2 alkylovou skupinou, hydroxyskupinou, skupinou -N(Rg)₂ nebo nebo mohou

R₃ a R₄ společně vytvářet heterocyklický kruh obecného vzorce Ia, ve kterém X je atom kyslíku, p a q jsou 1 či 2, R₅ je atom vodíku nebo C_1-4 alkylová skupina a Rg je -ORg nebo -N(R₅)γ_2·

Výhodnějšími sloučeninami jsou:

3.3- bis(pikolinamidomethyl)oxetan,

4.4- bis(pikolinamidomethyl)tetrahydro-4H-pyran,

·· ·· ·· • · · · • · ·· • ·· ··· · · • · · ·· ··

2,2-bis(pikolinoylamidomethyl)-1,3-propandiol,

N,N'-bis(pikolinoyl)-1,5-diamino-2,2-dimethylpropan,

N,N'-bis(pikolinoyl)-1,5-diamino-3,3-dimethylpentan a

1,1-bis(pikolinamidomethyl)cyklopropan.

Předmětem tohoto vynálezu je též farmaceutický prostředek obsahující jako účinnou složku jednu nebo více sloučenin obecného vzorce I spolu s farmaceutickou nosnou či pomocnou látkou.

Vynálezem je též způsob stimulace myelopoezy u živočicha včetně člověka, který tuto stimulaci potřebuje, podáváním účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Tímto vynálezem je dále způsob prevence nebo léčby virových, plísňových či bakteriálních infekcí na základě podávání zvířeti či člověku, který tuto léčbu či prevenci potřebuje, účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Způsoby přípravy

Sloučenina obecného vzorce I

O

N-Y-N

O

R.

ve kterém

Rj, R₂ a Y mají význam jako je uveden pro obecný vzorec I, (I)

-lise připraví podle schématu I.

Schéma I

R_rCOOH ⁺

-Y-x r₂nh nhr₂ (Π)

Aktivační činidlo

-Katalyzátor

R-j-COOH ~gPg^clo> R1.COCI

-Y^ R₂NH NHR_g

Tato sloučenina se připraví reakcí vhodné aktivované kyseliny (R^-COOH) vhodným diaminem (R₂-NH-Y-NH-R₂) nebo jeho solí ve vhodném rozpouštědle, jako je methylenchlorid (CH₂-C1₂) nebo Ν,Ν-dimethylformamid (DMF) s poskytnutím konečného produktu. Karboxylová kyselina se aktivuje vhodným aktivačním činidlem, jako je 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (DCC), benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfát (činidlo BOP) nebo 2-(l,H-benzotriazol-l-y1)-1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluorborát (činidlo TBTU). Tato reakce se katalýzuje vhodným katalyzátorem, jako je 1-hydroxybenzotriazolhydrát (HOBt) nebo 4-dimethylaminopyridin (DMAP). Jestliže je amin ve formě své soli, musí se neutralizovat vhodnou bází, jako je triethylamin, Hunigova báze nebo N-methylmorfolin.

Alternativně se kyselina převede na halogenid kyseliny, který reaguje s aminem v přítomnosti vhodné báze,

- 12 ·· ···· jako je triethylamin, Hunigova báze nebo N-methylmorfolin, ve vhodném rozpouštědle, jako je methylenchlorid, benzen nebo dimethylformamid, s poskytnutím sloučeniny obecného vzorce I.

Aminy obecného vzorce II (R₂-NH-Y-NH-R₂) se mohou obdržet podle schématu II.

Schéma II

		R, R, 1 1
	NaH, Rn-CI,	1 1 __ H⁺ nebo	nh-y-nh
PG-NH-Y—NH—PG	-- ΠΜΡ	—s* PG-N Y N PG ..... -
		Hydrogenace

PG = chránící skupina t-BOC nebo Z

Tato sloučenina se obdrží reakcí příslušně chráněného diaminu (NH₂-Y-NH₂) s některým alkylhalogenidem v přítomnosti báze, jako je natriumhydrid. Reakce se může provést v dioxanu nebo dimethylformamidu. Nejběžněji užívanými chránícími skupinami jsou terc.butyloxykarbonylová skupina (t-Boc-) nebo karbobenzyloxyskupina (Z-). Metody odstranění těchto chránících skupin jsou v oboru dobře známy.

Aminy obecného vzorce II, ve kterém R₂ je C₂_₄ alkylová skupina nebo skupina (C₂_₄ alkyl)-C(0)R_g, se mohou připravit podle schématu III.

• · • ·	• •	··	····	··	♦ ·
•	• ♦	• ·	•	• ·	• ·
• • ····	···· • •	• · · • · • ·	• • •	• · • ··· • ··	·· ♦ · • · • *

Schéma III

H Ή O	+	NHjY—NH₂	NaBH^CN MeOH, pH6	r₂ nh-y-nh r₂
		III		II

Sloučenina se připraví reakcí aminů obecného vzorce III nebo IV s aldehydem (R₂-CHO) a vhodným redukčním činidlem, jako je natriumkyanborhydrid, ve vhodném rozpouštědle, jako je methanol.

Aminy obecného vzorce III (NH₂-Y-NH₂) lze obdržet komerčně nebo se připraví reakcí vhodného bisalkylhalogenidu s amoniakem.

Aminy obecného vzorce III nebo IV lze též připravit redukcí bisalkylnitrilů nebo bisalkylazidů podle schématu IV.

Schéma IV

X-Y-X

X = I nebo Br nebo Cl kapalný NH₃

---------->

nh₂-y-nh₂ (III)

X-Y-X X = -n₃	Raneyův nikl	nh₂-y-nh₂(III)
nebo aluminiový nikl
X-Y-X X = -CN	Raneyův nikl	nh₂-y-nh₂ (IV)
nebo aluminiový nikl

·· 9

- 14 Sloučeniny obecného vzorce VI se připraví podle

0.1 N HCI, p^<3

5% NaHCO₃,pH8

(V) (VI)

Sloučenina se dostane postupnou obecného vzorce V s vodnou kyselinou a s poskytnutím žádaných sloučenin.

reakcí vodnou sloučenin bází

Pro použití sloučeniny obecného vzorce

I nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro léčbu lidí a dalších savců se běžným způsobem zhotovuje farmaceutický prostředek v souladu se standardní farmaceutickou praxí.

Prostředky podle tohoto vynálezu mohou být například poskytnuty ve formě vhodné pro perorální, nasální, parenterální či rektální podávání.

Termín farmaceutický” tak, jak se používá, zahrnuje veterinární použití tohoto vynálezu. Tyto sloučeniny mohou být enkapsulovány, tabletovány nebo připraveny v emulzi či sirupu pro perorální podávání. Je možno přidat farmaceuticky přijatelné pevné či kapalné nosné látky pro zlepšení vlastností či stabilizace prostředku nebo pro usnadnění jeho

- 15 přípravy. Kapalné nosné látky zahrnují sirup, podzemnicový olej, olivový olej, glycerol, fyziologický roztok a vodu. Pevné nosné látky zahrnují škrob, laktózu, dihydrát síranu vápenatého, bílou hlinku, stearát horečnatý nebo kyselinu stearovou, mastek, pektin, akáciovou klovatinu, agar nebo želatinu. Tato nosná látka může též zahrnovat materiál pro retardované uvolňování, jako je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát, samotný nebo spolu s voskem. Množství nosné pevné látky je proměnlivé, avšak přednostně je mezi 20 mg a zhruba 1 g na dávkovou jednotku. Farmaceutické prostředky se zhotovují podle konvenčních farmaceutických způsobů včetně mletí, míšení, granulování a lisování v případě potřeby do formy tablet nebo mletí, míšení a plnění pro přípravu tvrdých želatinových tobolek. Je možno připravovat tobolky obsahující jednu nebo více účinných složek, například smísením aktivních složek s inertními nosiči, jako je laktóza či sorbitol a plněním směsi do želatinových tobolek. Při použití kapalné nosné látky bude prostředek ve formě sirupu, elixíru, emulze nebo vodné či nevodné suspenze. Takový kapalný prostředek se může podávat přímo perorálně nebo může být plněn do měkké želatinové tobolky. Lze též použít nosné systémy specifické pro určité orgány.

Alternativně lze farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny podle tohoto vynálezu nebo jejich deriváty připravovat jako roztoky z lyofilizovaného prášku pro parenterální podávání. Prášky se mohou rekostituovat přídavkem vhodného zřeďovacího činidla nebo jiné farmaceuticky přijatelné nosné látky před použitím. Kapalný přípravek je obecně pufrovaný, isotonický, vodný roztok. Příklady vhodných zředovacích činidel jsou normální fyziologický roztok, standardní 5% vodný roztok dextrózy nebo pufrovaný roztok • ·

- 16 octanu sodného či amonného. Takový prostředek je zvláště vhodný pro parenterální podávání, avšak může být též použit pro perorální podávání nebo může být obsažen v odměřené dávce pro inhalátor či rozprašovací zařízení pro insuflaci. Může být žádoucí přídavek pomocných látek, jako je polyvinylpyrrolidon, želatina, hydroxycelulóza, akáciová klovatina, polyethylenglykol, manitol, chlorid sodný nebo citrát sodný.

Pro rektální podávání lze kombinovat rozmělněný prášek sloučenin podle tohoto vynálezu s pomocnými látkami, jako je kakaové máslo, glycerol, želatina nebo polyethylenglykoly, který se tvaruje do formy čípků. Rozmělněné prášky se mohou též smísit s olejovým přípravkem, gelem, krémem nebo emulzí, pufrovanými nebo nepufrovanými a podávat pomocí transdermální náplasti.

Nasální spreje mohou být podobně připraveny ve vodném roztoku a baleny do nádobek rozprašovače, buď s hnacím plynem aerosolu nebo pomocí zařízení pro ruční stlačování.

Dávkové jednotky obsahující sloučeniny podle tohoto vynálezu přednostně obsahují 0,05 až 50 mg, například 0,05 až 5 mg sloučeniny obecného vzorce I a II nebo jejich soli.

Ještě další znak tohoto vynálezu poskytuje způsob stimulace myelopoezy zahrnující podávání účinného množství farmaceutického prostředku s obsahem sloučeniny obecného vzorce II uvedeného výše určenému subjektu.

Při podávání sloučenin podle tohoto vynálezu v souladu s tímto vynálezem se neočekávají žádné nepřijatelné toxikologické účinky.

···»

- 17 Biologická účinnost sloučeniny obecného vzorce I se prokazuje následujícími zkouškami.

Indukce krvetvorné synergní účinnosti v buňkách stromatu

Linie buněk stromatu C6.4 odvozená od myši kostní dřeně se pěstuje na 12-jamkových deskách v RPMI 1640 s 10 % fetálního bovinního sére (FBS). Při dosažení splynutí se buňky C6.4 promyjí a média se obmění čerstvým RPMI 1640 bez fetálního bovinního séra. Spojené buněčné vrstvy myších buněk C6.4 se zpracují se sloučeninou. Supernatanty prosté buněk se odebírají po 18 hodinách. Supernatanty se frakcionují pomocí membrány Centricon-30 pro oddělení na základě molekulové hmotnosti. Aktivita hematopoetického synergního faktoru buněk C6.4 (HSF) se měří pomocí testu pro myší materiál CFU-C.

Zkouška CFU-C

Buňky kostní dřeně se obdrží od myších samic C57B1/6 a suspendují v RPMI 1640 s 10 % FBS. Buňky kostní dřeně (7,5xl0⁴ buněk/ml) se pěstují se suboptimálními hladinami CFU plus zředění zkušebních supernatantů 30K-E buněk C6.4 popsaných výše ve standardní testovací soupravě CFU-C na měkkém agaru pro myší materiál. Agregáty buněk >50 buněk se počítají jako kolonie. Počet nalezených agarových kolonií je přímo úměrný množství přítomného HSF v supernatantu stromální linie kostní dřeně C6.4.

Zkouška funkce efektorových buněk

Myším samicím C57B1 se podává zkušební látka intraperitoneálně nebo perorálně denně po dobu 8 dnů. Buňky peritoneálního exsudátu (PEC) použité ex vivo z ošetřovaných nebo • ·

- 18 neošetřovaných myší se sbírají do chladného DPBS bez vápníku a hořčíku s přídavkem heparinu a antibiotik po dobu 2 až 4 hodin po poslední injekci. Adherentní populace PEM se připraví inkubací standardizovaných suspenzí PEC v mikrotitračních miskách po dobu 2 hodin při 37 °C (5 % oxidu uhličitého) a neadherující buňky se odstraní promytím jamek teplým pufrem.

Superoxid inhibitovatelný superoxidovou dismutázou (SOD) uvolňovaný efektorovými buňkami v odpověd' na stimulaci in vitro forbolmyristátem-acetátem (PMA) (100 až 200 nM) nebo pre-opsonizovaná (autologní séra) živá C. albicans (E:T = 1:10) se stanoví kvantitativně pomocí mikrotitrační redukční soupravy s fericytochromem c. Zkouška se provede v přítomnosti 1 % želatiny/HBSS a 80 μΜ fericytochromu c v celkovém objemu 200 μΐ/jamka. Množství redukovaného cytochromu v nmol/jamka se vypočítají z spektrofotometrických čtení (550 nm) po 1 hodině inkubace při 37 °C (5 % oxidu uhličitého). Množství redukovaného cytochromu c inhibitovatelného SOD se určí s použitím jamek obsahujících SOD (200 jednotek/jamka). Počáteční uvolňování superoxidu se určí v nepřítomnosti stimulů. Experimentální údaje se vyjádří jako procento z hodnot kontrolní skupiny.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady jsou ilustrativní a neomezují sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Veškeré teploty se udávají ve stupních celsia.

Příklad 1

3,3-Bis(pikolinamidomethyl)oxetan

K roztoku 3,3-bisaminomethyloxetandihydrobromidu (0,05 g, 0,18 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) se přidá kyselina pikolinová (0,07 g, 0,56 mmol), činidlo BOP (benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfát, 0,24 g, 0,54 mmol), hydrát HOBt (1-hydroxybenzotřiazolhydrát, 0,07 g, 0,52 mmol) a diisopropylethylamnin (0,16 ml, 0,92 mmol). Po 24 hodinách se reakce přeruší nalitím do 50% roztoku chloridu sodného (10 ml) a provede se extrakce ethylacetátem (3x15 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem sodným a odpaří s poskytnutím žlutého oleje (0,82 g). Mžiková chromátografie (gradient 50 % ethylacetátu v hexanu až 100 % ethylacetátu, silikagel) poskytuje 0,02 g (34 %) svrchu jmenované sloučeniny ve formě bílé pevné látky.

^XH NMR (CDC1₃, 250 MHz) δ: 8,82 (t, 2H, J = 7 Hz), 8,61 (m, 2H), 8,23 (dd, 2H, J = 7,7, 1 Hz), 7,87 (dt, 2H, J = 7,7, 1,6 HZ), 7,45 (m, 2H), 4,59 (s, 4H), 3,87 (d, 4H, J = 7 HZ).

MS (ES+) m/e 327,4 [M+H]⁺.

Příklad 2

2,2-Bis(pikolinoylamidomethyl)-1,3-propandiol

3,3-Bis(pikolinamidomethyl)oxetan (příklad 1) (25,6 mg, 0,078 mmol) se rozpustí v 8 ml O,1N vodné kyseliny chlorovodíkové a míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Reakční směs se zalkalizuje (pH 8) 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a odpaří do sucha. Odparek se rozpustí v 10% směsi methylalkoholu s chloroformem, zfiltruje a odpaří a výsledný materiál se čistí mžikovou chromátografií (silikagel, 3x20 cm, 2% methanolu v chloroformu) s poskytnutím dvou frakcí. První frakce obsahuje 5 mg (0,015 mmol, 19 %) zpětně získaného výchozího materiálu.

MS (ES+) m/e 327 [M+H]⁺.

Druhá frakce obsahuje 19,3 mg (0,056 mmol, 72 %) výše jmenované sloučeniny.

¹H NMR (CĎC1₃, 250 MHz) δ: 8,77 (t, 2H, J = 7 Hz), 8,61 (m, 2H), 8,21 (dd, 2H, J = 7,8, 1 Hz), 7,88 (t, d, 2H, J = 7,8, 1,7 Hz), 7,47 (m, 2H), 4,44 (t, 1H, J = 7 Hz), 3,48 (d, 4H, J = 7 Hz), 3,37 (d, 4H, J = 7 Hz).

MS (ES+) m/e 345 [M+H]⁺.

Příklad 3

4,4-Bis(pikolinamidomethyl)tetrahydro-4H-pyran

K míchané směsi tetrahydro-4H-pyran-4,4-dikarbonitrilu (0,33 g, 0,002 mol) v methanolu (10 ml) a 2N roztoku hydroxidu sodného (9 ml) se při 0 °C přidává po dílech aluminioniklový katalyzátor (0,59 g, 0,01 mol). Reakční směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. pH ochlazené směsi se upraví na 2 přikapáváním koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Směs se potom odpaří za sníženého tlaku při 40 °C a poskytuje bělavou pevnou látku.

K roztoku kyseliny pikolinové (0,59 g, 0,0048 mol) v benzenu (25 ml) s jednou kapkou dimethylformamidu se přidá pod argonovou atmosférou oxalylchlorid (0,64 g, 0,0048 mol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin a potom se ochladí na 0 °C. K reakční směsi se přidá jeden díl suspenze diaminotetrahydropyrandihydrochloridu (0,35 g, 0,0016 mol) v chloroformu (5 ml) obsahující diisopropylethylamin (2,06 g, 0,016 mol). Reakční směs se míchá pod atmosférou argonu při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Směs se vylije do 50 ml roztoku chloridu sodného a extrahuje dvakrát ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se suší s použitím síranu sodného, filtrují a odpaří při 40 °C na hnědý olej. Olej se podrobí mžikové chromatografii na silikagelu s elucí ethylacetátem a poskytne 22,5 mg výše jmenované sloučeniny ve formě bezbarvé olejovité kapaliny.

NMR (CDC1₃) δ: 8,9 (široký t, 2H), 8,6 (m, 2H) ,

8,3 (m, 2H), 7,8 (m, 2H), 7,5 (m, 2H), 3,9 (t, 4H), 3,5 (d,

4H), 1,6 (t, 4H).

MS (ES+) m/e 355 [M+H]⁺, 377 [M+H+Na]⁺.

Příklad 4

1,1-Bis(pikolinamidomethyl)cyklopropan

Způsobem analogickým příkladu 3 poskytují

1,1-diaminomethylcyklopropan (0,53 g, 3,09 mmol), kyselina pikolinová (1,14 g, 9,26 mmol), činidlo BOP (4,10 g, 9,26 mmol), 1-hydroxybenzotriazolhydrát (1,25 g, 9,25 mmol) a triethylamin (2,60 ml, 18,6 mmol) 0,83 g (87 %) výše jmenované sloučeniny ve formě bílé pěny.

MS (ES+) m/e 311,4 [M+H]⁺.

Příklad 5

N,N'-Bis(pikolinoyl)-1,5-diamino-3,3-dimethylpentan • · • · · ·

Způsobem analogickým příkladu 1 poskytují

3,3-dimethyl-l,5-diaminopentan (0,22 g, 1,70 mmol), kyselina pikolinová (0,46 g, 3,74 mmol), činidlo BOP (1,65 g, 3,74 mmol), 1-hydroxybenzotriazolhydrát (0,50 g, 3,74 mmol) a Ν,Ν-diisopropylethylamin (2,96 ml, 17,0 mmol) žlutou olejovitou kapalinu. Po trituraci horkým ethylacetátem se získá 0,24 g (42 %) výše jmenované sloučeniny ve formě bílých krystalů.

MS (ES+) m/e 341,0 [M+H]⁺.

Příklad 6

N, N' -Bis(pikolinoyl)-1,3-diamino-2,2-dimethylpropan

Roztok 2,2-dimethyl-l,3-propandiaminu (5,00 g, 48,9 mmol) v dimethylformamidu (500 ml) se zpracuje s kyselinou ikolinovou (12,6 g, 0,10 mol), 1-hydroxybenzotriazolhydrátem (13,9, 0,10 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridem (19,7 g, 0,10 mol) a iPr₂NEt (17,9 ml, ·« ····

0,10 mol) při teplotě místnosti. Po 18 hodinách se reakčni směs odpaří ve vakuu a odparek se čistí mžikovou chromatografií (75% ethylacetátu v hexanech, silikagel) s poskytnutím 13,95 g (91 %) výše jmenované sloučeniny jako čiré tuhé látky. Frakce tohoto produktu (5,63 g) se rekrystalizuje z ethylacetátu a hexanu pomalým odpařením s poskytnutím 3,92 g čistého produktu ve formě bílých jehliček.

MS (ES+) m/e 313 [M+H]⁺.

Příklad 7

Prostředky pro farmaceutické použití zahrnující sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou připravit v různých formách a s četnými pomocnými látkami. Příklady takových prostředků se uvádějí níže.

Tablety/složky Na tabletu

1.	Aktivní složka (sloučenina obecného vzorce I)	0,5 mg
2.	Kukuřičný škrob	20 mg
3 .	Kyselina alginová	20 mg
4.	Alginát sodný	20 mg
5.	Stearát hořečnatý	1,3 mg

Způsob přípravy tablet:

Krok 1 Smíchají se složky 1, 2, 3 a 4 ve vhodném mísícím zařízení.

·· ···· • ·

- 25 Krok 2 Přidá se po dílech dostatečné množství vody ke směsi z kroku 1 s pečlivým promísením po každém přídavku.

Voda se takto přidává a mísí tak dlouho, až se obdrží konzistence hmoty umožňující převedení na vlhké granule.

Krok 3 Vlhká hmota se převede na granule tak, že se ponechá projít oscilačním granulátorem s použitím síta s rozměrem částice 2,38 mm (8 mesh).

Krok 4 Vlhké granule se potom suší v sušárně při 60 °C (140 °F ) do sucha.

Krok 5 Suché granule se opatří složkou 5 jako mazivem.

Krok 6 Granule s mazivem se lisují na vhodném tabletovacím lisu.

Parenterální přípravek

Farmaceutický prostředek pro parenterální podávání se připraví rozpuštěním příslušného množství sloučeniny vzorce I v polyethylenglykolu při zahřívání. Získaný roztok se potom zředí vodou pro injekce podle Evropského lékopisu na 100 ml. Roztok se potom sterilizuje filtrací membránovým filtrem 0,22 μιη a uzavře se zatavením ve sterilních nádobkách .

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I

O (i) ve kterém

R^ představuje nezávisle na sobě 4-členný až 10-členný monocyklický nebo bicyklický heterocyklický kruhový systém obsahující až čtyři heteroatomy dusíku, kyslíku nebo síry v kruhu, ve kterém nejméně jedním heteroatomem je atom dusíku a tento kruh je substituován nebo nesubstituován jednou či dvěma ^cl-4 alkylovými skupinami, atomy fluoru, chloru, bromu, jodu, C1-4 alkoxyskupinami, skupinami “(^CH2^m^R6^/oxoskupinami, skupinami oximu, ~0-C1_₄ alkyloximu, hydroxyskupinami, skupinami -N(R₅)₂, acylaminoskupinami nebo aminoacylovými skupinami, s vyloučením 8-, 9- nebo 10-členných monocyklických kruhových systémů,

R₂ je nezávisle na sobě atom vodíku, skupina (C₁_₄ alkyl)-C(O)R₆, C_1-4 alkylová skupina nebo je R₂ benzylová skupina, která může být popřípadě substituovaná jednou či dvěma 0_1-4 alkylovými skupinami, c_1-4alkoxyskupinami, atomy fluoru, chloru, jodu, bromu, hydroxyskupinami nebo skupinami -N(R₅)₂, • · · · * · · · ·· · je -(CH₂)_n-, ve kterém je nejméně jeden atom uhlíku geminálně substituován substituenty R₃ a R₄,

R₃ a R₄ jsou nezávisle na sobě C_x_₄ alkylová skupina, C₂_₄ alkenylová skupina, C₂_₄ alkinylová skupina, které mohou být všechny substituovány jednou či dvěma C_x_₄alkylovými skupinami, hydroxyskupinami, atomy fluoru, chloru, bromu, jodu, skupinami -N(R₅)₂, (R₅)₂NC(O)-, -(CH₂)_mR₆, -(CH₂)_mR₅, -(CH)₂)_mCOR₆ nebo -(CH₂)_mC(O)R₅, nebo

R₃ a R₄ jsou atomy fluoru, chrómu či bromu, nebo

R₃ a R₄ mohou společně tvořit cyklický či heterocyklický kruh obecného vzorce Ia

X ^{CH2>P R)<

(Ia) ve kterém jsou nezávisle celá čísla od nuly do 3 je atom kyslíku, síry, -CH₂- nebo -N(R₅)-, je nezávisle atom vodíku, C_x_₄ alkylová skupina nebo benzylová skupina, ·· ···· • · · · • · ·· je nezávisle skupina -0R₅, -N(R₅)₂ nebo -SR₅ a je celé číslo od 3 do 8 je celé číslo od 0 do 4 nebo farmaceuticky přijatelná sůl této sloučeniny, s podmínkou, že p a q nejsou současně 0 a jestliže R₃ a R₄ jsou atomy fluoru, chloru či bromu, nejsou připojeny na uhlík přilehlý k dusíku.
2. Sloučenina podle nároku 1, ve které ^R1 l^e pyridylová skupina, pyrimidinylová skupina, pyrazinylová skupina, pyridazinylová skupina, chinolylová skupina, tetrahydrochinolylová skupina nebo pyrrolidonylová skupina , n je 3 až 5,

R₃ a R₄ jsou C]__₄ alkylová skupina, substituovaná C_1-4alkylovou skupinou, hydroxyskupinou, skupinou -N(R₅)]__₂, -(CH^^Rg nebo -(CH₂)_mC(O)R₅, nebo mohou R₃ a R₄ vytvářet společně cyklický či heterocyklický kruh obecného vzorce Ia, ve kterém X je atom kyslíku, síry nebo skupina -CH₂- a p a q jsou 1 až 3,

R₅ je atom vodíku nebo C_1-4 alkylová skupina a ····

- 29 R₆ je skupina -0R₅ nebo -N(R₅ )^.-2'
3. Sloučenina podle nároku 2, ve které

R_x je 2-pyridylová skupina, 2-pyrimidinylová skupina,

2-pyrazinylová skupina, 2-pyrrolidon-5-ylová skupina nebo

2-pyrrolidinylová skupina, n je 3 nebo 5,

R₃ a R₄ jsou C]__2 alkylové skupiny, substituované C₁_₂alkylovou skupinou, hydroxyskupinou, skupinou -N(R₅)₂ nebo -(CH₂)_mRg, nebo R₃ a R₄ mohou společné vytvářet heterocyklický kruh obecného vzorce Ia, ve kterém X je atom kyslíku a p a q jsou 1 nebo 2,

R₅ je atom vodíku nebo C_1-4 alkylová skupina a

R₆ je -0R₅ nebo -N(R₅)₁_₂-
4. Sloučenina podle nároku 1, která je zvolena ze skupiny obsahuj ící:

3.3- bis(pikolinamidomethyl)oxetan,

4.4- bis(pikolinamidomethyl)tetrahydro-4H-pyran,

2,2-bis(pikolinoylamidomethyl)-1,3-propandiol,

N,N'-bis(pikolinoyl)-1,5-diamino-2,2-dimethylprppan,

N,N'-bis(pikolinoyl)-1,5-diamino-3,3-dimethylpentan a

1,1-bis(pikolinamidomethyl)cyklopropan.

·· · • ·· ·
5. Sloučenina podle nároku 1, kterou je N,N'-bis- (pikolinoyl)-1,3-diamino-2,2-hydroxymethylpropan.
6. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 a farmaceutickou nosnou látku nebo pomocnou látku.
7. Způsob prevence či léčby virových, plísňových či bakteriálních onemocnění, vyznačující se tím, že se živočichovi, který potřebuje tuto léčbu či prevenci, podává účinné množství látky obecného vzorce

I podle nároku 1.
8. Způsob stimulace myelopoezy u živočicha, který potřebuje tuto stimulaci, vyznačující se tím, že se podává sloučenina podle nároku 1.
9. Způsob léčby nebo prevence sepse u živočicha, který potřebuje tuto léčbu či prevenci, vyznačuj ící se t í m, že se podává sloučenina podle nároku 1.
10. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, vyznačující se tím, že zahrnuje buď (a) bisacylaci diaminu obecného vzorce II hn(r₂)-y-(r₂)nh (II) ve kterém

R₂ a Y mají význam jako je vymezen u obecného vzorce I a

- 31 ·· ·

Y může být navíc chráněno vhodnou chránící skupinou, sloučeninou obecného vzorce IV

R₁-CO₂H (IV) ve kterém

R_x má význam jako je vymezen u obecného vzorce I, s použitím vhodného aktivačního činidla ve vhodném polárním aprotickém rozpouštědle s následujícím odstraněním všech chránících skupin a, v případě požadavku, vytvoření soli, nebo alternativně (b) přeměnu kyseliny obecného vzorce IV na halogenid kyseliny obecného vzorce

R_XCOX' ve kterém

R_x má význam jako je vymezen u obecného vzorce I a

X' je atom halogenu, který se nechá reagovat s diaminem obecného vzorce II

HN(R₂)-Y-(R₂)NH (II) ve kterém

R₂ a Y mají význam jako je definován u obecného vzorce I nebo

- 32 Y může být navíc chráněn vhodnou chránící skupinou, v přítomnosti vhodné báze ve vhodném rozpouštědle s následujícím odstraněním všech chránících skupin a, v případě potřeby, vytvoření soli.